二氢槲皮素在制备保护药源性急性肝损伤药物中的用途的制作方法

本发明属制药领域，涉及二氢槲皮素在制备保护药源性急性肝损伤药物中的用途，尤其是二氢槲皮素在制备保护对乙酰氨基酚诱导的药源性肝损伤药物中的用途。

背景技术：

现有技术公开了药源性肝损伤（drug-inducedliverdamage,dild）是药物开发以及临床用药中不可避免的问题，其中以对乙酰氨基酚（acetaminophen,apap）诱导的肝损伤最为常见，可致严重的肝坏死、肝衰竭甚至死亡。目前临床实践中常用的治疗方法是采用静脉滴注去氧化剂n-乙酰半胱氨酸（nac）的方法，研究显示，nac作为谷胱甘肽的前体可以减轻肝内的氧化压力，其缺点是半衰期短，仅早期有效，且存在一系列不良反应。

二氢槲皮素（dihydroquecertin,dhq）又名花旗松素（taxifolin,tax），是由松科植物落叶松（larixgmeliniirupr.）中分离提取的二氢黄酮类化合物，具有多种药理活性，如抗炎、抗氧化、抗病毒等，近年来研究发现其对于心血管疾病具有的保护作用。迄今尚未见有其用于保护对乙酰氨基酚诱导的肝损伤的研究报道。

基于现有技术的研究现状，

本技术：
的发明人拟提供二氢槲皮素在制备保护药源性急性肝损伤药物中的新的用途，尤其是二氢槲皮素在制备保护对乙酰氨基酚诱导的药源性肝损伤药物中的用途。

技术实现要素：

本发明的目的是针对现有技术存在的缺陷，提供二氢槲皮素在制备保护药源性急性肝损伤药物中的新的用途，尤其是二氢槲皮素在制备保护对乙酰氨基酚诱导的药源性肝损伤药物中的用途。

本发明通过动物实验，研究检测了天然抗氧化产物二氢槲皮素在对乙酰氨基酚诱导的肝损伤中在肝保护中的作用及分子机制；其中，

本发明采用原代培养的小鼠肝细胞，检测了二氢槲皮素在体外保护对乙酰氨基酚诱导的肝细胞损伤的效应及机制，实验结果表明，二氢槲皮素可显著削弱对乙酰氨基酚诱导的原代小鼠肝细胞的生长抑制以及乳酸脱氢酶释放(如图1,图2所示)，且具有剂量依赖性；

本发明采用c57bl/6小鼠腹腔注射对乙酰氨基酚诱导急性肝损伤模型，其发病过程与临床相似，实验结果表明，二氢槲皮素可显著削弱对乙酰氨基酚诱导的肝功能相关生化指标谷丙转氨酶（alt）、谷草转氨酶（ast）的异常升高(如图3所示)，病理结果显著改善（如图4所示）。

本发明提供了二氢槲皮素在制备保护药源性急性肝损伤药物中的新的用途，尤其是二氢槲皮素在制备保护对乙酰氨基酚诱导的药源性肝损伤药物中的用途；所述的二氢槲皮素可用于制备治疗乙酰氨基酚诱导的药源性急性肝损伤的药物，进一步用于保肝类药物的研制。

附图说明

图1显示了二氢槲皮素削弱对乙酰氨基酚诱导的原代小鼠肝细胞生长抑制，其中，原代小鼠肝细胞来源于c57bl/6小鼠，采用iv胶原酶原位灌注的方法提取，不同浓度的二氢槲皮素（0~200μm）预处理细胞1小时后，用对乙酰氨基酚(10mm)诱导急性药物肝损伤的体外模型，24小时后，mtt法检测细胞活力，与模型对照组相比，*:p<0.05;**:p<0.01;##:p<0.01。

图2显示了二氢槲皮素削弱对乙酰氨基酚诱导的原代肝细胞乳酸脱氢酶释放，其中，采用ldh检测试剂盒检测原代肝细胞损伤，与模型对照组相比，*:p<0.05;**:p<0.01;##:p<0.01。

图3显示了二氢槲皮素保护对乙酰氨基酚诱导的c57bl/6小鼠肝功能相关生化指标异常，其中，c57bl/6小鼠实验前禁食12小时，25mg/kg、50mg/kg和100mg/kg二氢槲皮素（溶于25%β-环糊精）腹腔注射给药，以nac600mg/kg为阳性对照，1小时后腹腔注射对乙酰氨基酚500mg/kg，24小时后处死，取全血及肝组织。alt,ast评价肝功能，与模型对照组相比，*:p<0.05;**:p<0.01;##:p<0.01。

图4是二氢槲皮素削弱对乙酰氨基酚诱导的肝组织损伤，其中，显示了h&e染色。

具体实施方式

实施例1.二氢槲皮素保护对乙酰氨基酚诱导的原代肝细胞损伤

原代小鼠肝细胞取自c57bl/6小鼠，采用iv胶原酶原位灌注法提取，将原代肝细胞接种于96孔板中，分为空白对照组、模型对照组（apap10mm）、二氢槲皮素处理组（12.5、25、50、100、200μm）以及阳性药（nac2.5mm）处理组，37℃培养24小时后进行mtt检测，计算细胞增值率，结果显示，随着剂量增加，二氢槲皮素显著减轻对乙酰氨基酚诱导的原代肝细胞生长抑制（如图1所示）。

实施例2.二氢槲皮素削弱对乙酰氨基酚诱导的原代肝细胞乳酸脱氢酶释放

原代肝细胞接种于96孔板中培养过夜，二氢槲皮素（12.5、25、50、100、200μm）以及阳性药（nac2.5mm）提前预处理，1小时后加入对乙酰氨基酚（10mm）处理，37℃培养24小时后进行乳酸脱氢酶（ldh）检测，计算ldh释放率，结果显示，随着剂量增加，二氢槲皮素显著降低对乙酰氨基酚诱导的原代肝细胞ldh的释放（如图2所示）。

实施例3.二氢槲皮素调节对乙酰氨基酚诱导的小鼠肝功能生化指标的异常

c57bl/6小鼠实验前禁食12小时，25mg/kg、50mg/kg和100mg/kg二氢槲皮素（溶于25%β-环糊精）腹腔注射给药，以nac600mg/kg为阳性对照，1小时后腹腔注射对乙酰氨基酚500mg/kg，24小时后处死，取全血及肝组织，alt、ast检测结果显示，二氢槲皮素可以显著降低对乙酰氨基酚诱导的小鼠血清中alt、ast的异常升高（如图3所示）。

实施例4.二氢槲皮素改善对乙酰氨基酚诱导的肝组织损伤

取小鼠的肝组织于4%多聚甲醛中固定过夜，采用石蜡包埋后切片并进行h&e染色，采用显微镜于观察病理结构并拍照，实验结果显示，二氢槲皮素可显著改善对乙酰氨基酚诱导的肝组织病变（如图4所示）。

技术特征：

技术总结
本发明属制药领域，涉及二氢槲皮素在制备保护药源性急性肝损伤药物中的用途，尤其是二氢槲皮素在制备保护对乙酰氨基酚诱导的药源性肝损伤药物中的用途。本发明通过细胞及动物实验，证实二氢槲皮素能削弱对乙酰氨基酚诱导的原代肝细胞生长抑制以及死亡，并且改善对乙酰氨基酚诱导的C57BL/6小鼠肝功能相关生化指标的异常升高以及病理结构的改变。所述的二氢槲皮素可用于制备用于治疗药物性肝损伤的药物，尤其是对乙酰氨基酚诱导的急性肝损伤的治疗药物。

技术研发人员：刘洪瑞;鞠佃文;宰文静
受保护的技术使用者：复旦大学
技术研发日：2017.03.30
技术公布日：2018.10.16