本申请是国际申请号pct/ep2012/065507，国际申请日是2012年8月8日，进入中国国家阶段日期为2014年2月8日，中国申请号为201280038831.7，发明名称为“用于受控的卵巢刺激的组合物”的分案申请。本发明涉及用于治疗不孕的组合物和药物产品。辅助生殖技术(art)技术如体外授精(ivf)是公知的。这些art技术通常需要受控的卵巢刺激(cos)的步骤，其中一组卵泡被刺激至完全成熟。标准cos方案包括单独施用促性腺激素类如促卵泡激素(fsh)或结合黄体生成激素(lh)活性以刺激卵泡发育，通常在刺激之前和/或期间施用gnrh类似物以防止未成熟的lh涌出。常用于cos的药物组合物包括重组促卵泡激素(rfsh)，来源于尿的fsh，重组fsh+lh制剂，来源于尿的促卵泡激素(menotrophin)[人绝经期促性腺激素(hmg)]和高度纯化的人绝经期促性腺激素(hp-hmg)。ivf可以与严重时可能危及生命的卵巢过度刺激综合征(ohss)的风险相关。预测女性对受控的卵巢刺激(cos)的响应潜能的能力可以允许开发出个体化的cos方案。这可以例如降低在被预测为对刺激具有过度响应的女性中ohss的风险，和/或改善被归类为不良响应者的女性的妊娠结果。目前，抗米勒管激素(anti-müllerianhormone)(amh)的血清浓度被确定为卵巢储备的可靠标记物。降低的amh水平与cos期间降低的卵巢对促性腺激素的响应相关。此外，高的amh水平是过度卵巢响应的良好预测物，并且是ohss风险的指示物。在进行art的35岁以下女性的初步研究中，使用consort用药算法(结合基础fsh、bmi、年龄和afc)来预测在处于发展ohss的风险的女性中cos的最佳fsh起始剂量(olivennes等，2009)。个性化剂量确实导致足够的卵母细胞产量和良好的妊娠率。然而，由于不充分的响应，在低剂量组(75iufsh)中存在高的取消比率，并且ohss的确在显著比例的患者中发生。因此需要用于个体化cos方案的组合物，所述组合物提供对刺激的充分响应，和/或降低的ohss风险。如上所述，标准cos方案可以包括施用fsh。fsh是由脑垂腺前叶天然分泌的并且具有支持卵泡发育和排卵的功能。fsh包含对于其他糖蛋白激素lh和cg也是共有的92个氨基酸的α亚基，以及给予所述激素生物学特异性的仅fsh具有的111个氨基酸的β亚基(pierce和parsons，1981)。各亚基通过添加复合碳水化合物残基被翻译后修饰。这两个亚基都带有用于n-连接聚糖结合的2个位点，α亚基位于氨基酸52和78处和β亚基位于氨基酸残基7和24处(rathnam和saxena，1975，saxena和rathnam，1976)。fsh因此被糖基化为约30质量％(dias和vanroey.2001.fox等2001)。多年来，纯化自绝经期后人尿的fsh已被用于不孕治疗；以促进自然生育中的排卵并且为辅助生殖技术提供卵母细胞。目前批准的用于卵巢刺激的重组fsh(rfsh)产品如促卵泡激素α(follitropinalfa)(gonal-f，merckserono/emdserono)和促卵泡激素β(follitropinbeta)(puregon/follistim，msd/schering-plough)来源于中国仓鼠卵巢(cho)细胞系。目前，没有市售的来源于人细胞系的rfsh产品。存在与fsh制剂相关的相当的异质性，其与存在的多种同工型的量的差异有关。单独的fsh同工型展示相同的氨基酸序列，但是区别在于其翻译后修饰的程度；特别的同工型表征为碳水化合物分支结构的异质性和唾液酸(末端糖)结合的不同的量，两者都表现为影响具体同工型生物活性。天然fsh的糖基化是高度复杂的。天然来源的垂体fsh中的聚糖可以包含各种各样的结构，所述结构可以包括一-，二-，三-和四-触角聚糖的组合(pierce和parsons，1981.ryan等，1987.baenziger和green，1988)。聚糖可以具有其他修饰：核岩藻糖基化，截开型(bisecting)葡糖胺，利用乙酰乳糖胺延伸的链，部分或完全唾液酸化，具有α2，3和α2，6连接的唾液酸化，以及代替半乳糖的硫酸化的半乳糖胺(dalpathado等，2006)。此外，聚糖结构在各糖基化位点处的分布之间存在差异。在来源于个体血清和来源于绝经期后女性的尿液的fsh中发现相当水平的聚糖复杂性(wide等，2007)。重组fsh产品的糖基化反映了存在于宿主细胞系中的糖基转移酶的范围。市售rfsh产品来源于改造的中国仓鼠卵巢细胞(cho细胞)。来源于cho细胞的rfsh中的聚糖修饰的范围比在天然产品中发现的更有限。在来源于cho细胞的rfsh中发现的降低的聚糖异质性的实例包括缺少截开型葡糖胺和减少的核岩藻糖基化和乙酰乳糖胺延伸的含量(hard等，1990)。此外，cho细胞仅能够使用α2，3连接添加唾液酸(kagawa等，1988，takeuchi等，1988，svensson等，1990)；来源于cho细胞的rfsh仅包括α2，3-连接的唾液酸而不包括α2，6-连接的唾液酸。因此来源于cho细胞的fsh不同于天然产生的fsh(例如人垂体/血清/尿fsh)，天然产生的fsh包含具有α2，3和α2，6-连接的唾液酸的混合物的聚糖，其中前者占多数。此外，也已经证明，市售重组fsh制剂的fsh的量不同，并且当与垂体、血清或绝经期后尿fsh相比时，等电点(pi)在4以下(被认为是酸性同工型)(ulloa-aguirre等1995)。与来源于cho细胞的重组产品gonal-f(merckserono)和puregon(scheringplough)相比，尿制剂中酸性同工型的量高得多(andersen等2004)。这必然反映了唾液酸在重组fsh中较低的摩尔含量，因为在重组fsh中用硫酸盐修饰的带负电的聚糖的含量低。与天然fsh相比较低的唾液酸含量是两种市售重组fsh产品的特征并且可以反映制备过程中的限制。已经记录了来自多种来源的材料的fsh的循环寿命。这些材料中的一些已经基于总体分子电荷被分级，如由其pi所表征的，其中更高的酸性等于更高的负电荷。如前所述，总分子电荷的主要贡献物是每个fsh分子的总唾液酸含量。例如，rfsh(organon)的唾液酸含量为约8mol/mol，而来源于尿的fsh具有更高的唾液酸含量(deleeuw等1996)。大鼠中相应的血浆清除率为0.34和0.14ml/min(ulloa-aguirre等2003)。在另一个实例中，其中重组fsh的样品被分成高和低pi级分，高pi(较低唾液酸含量)级分的体内效能降低并且其具有较短的血浆半衰期(d’antonio等1999)。也已经报道，在排卵周期的后期期间循环的较碱性的fsh是由于由增加的雌二醇水平所致的垂体前叶中α2，3唾液酸转移酶的减量调节(damian-matsumara等1999.ulloa-aguirre等2001)。未报到α2，6唾液酸转移酶的结果。因此，如上所述，使用cho系统表达的重组蛋白在其末端唾液酸连接的类型方面将不同于其天然对应物。在药用生物制品的制备中这是重要的考虑事项，因为碳水化合物部分可以有助于分子的药理学属性。本申请人开发了人来源的重组fsh，其是作为wo2009/127826a公布的国际专利申请号pct/gb2009/000978的主题。具有α2，3和α2，6-连接的唾液酸两者的混合物的重组fsh通过改造人细胞系以表达rfsh和α2，3唾液酸转移酶来制备。表达产物是高度酸性的并且具有α2，3-和α2，6-连接的唾液酸两者的混合物；后者由内源唾液酸转移酶活性提供。发现，唾液酸连接的类型，α2，3-或α2，6-，可以显著影响fsh的生物清除率。具有α2，3和α2，6-连接的唾液酸两者的混合物的重组fsh相比于在常规cho细胞中表达的rfsh具有两个优点：首先，由于两种唾液酸转移酶的组合的活性，材料被更加高度地唾液酸化；并且第二，材料更相似于天然fsh。与仅生产α2，3连接的唾液酸的来源于cho细胞的重组产品相比，在生物学上这可能是更适当的(kagawa等，1988，takeuchi等，1988，svensson等，1990)并且具有降低的唾液酸含量(ulloa-aguirre等1995，andersen等2004)。在国际专利申请号pct/gb2009/000978中公开的rfsh产品包含分支的聚糖部分。fsh包含聚糖(与fsh糖蛋白结合的)并且这些聚糖可以包含多种结构。如在本领域中公知的，可能发生(聚糖的)分支，其结果是聚糖可以具有1、2、3、4个以上的末端糖残基或“触角”；具有1、2、3或4个末端糖残基或“触角”的聚糖分别被称为一-触角，二-触角，三-触角或四-触角结构。聚糖可以具有存在于一-触角和/或二-触角和/或三-触角和/或四-触角结构上的唾液酸化。在国际专利申请号pct/gb2009/000978中公开的实例rfsh包括单-唾液酸化的，二-唾液酸化的，三-唾液酸化的和四-唾液酸化的聚糖结构，其相对量如下：9-15％单-唾液酸化的；27-30％二--唾液酸化的；30-36％三--唾液酸化的和25-29％四--唾液酸化的。如公知的，单-唾液酸化的聚糖结构具有一个唾液酸残基；二-唾液酸化的聚糖结构具有两个唾液酸残基；三-唾液酸化的聚糖结构具有三个唾液酸残基；并且四-唾液酸化的聚糖结构具有四个唾液酸残基。本文中，术语如“x％单-唾液酸化的”，“x％二-唾液酸化的”，“x％三-唾液酸化的”或“x％四-唾液酸化的”是指表示为fsh上以任何方式被唾液酸化(具有唾液酸)的聚糖结构的总数的百分比(x％)的fsh上的(分别)一-、二、三或四唾液酸化的聚糖结构的数量。因此，短语“30-36％三-唾液酸化的聚糖结构”是指，在fsh上具有唾液酸残基(即，被唾液酸化的)的聚糖结构的总数中，这些聚糖结构中的30至36％是三唾液酸化的(具有三个唾液酸残基)。申请人惊人地发现，与目前市场上的重组fsh产品相比，具有特定量的四-唾液酸化的聚糖结构的fsh(其不同于上述pct/gb2009/000978中公开的示例rfsh产品)显著更有效。申请人的产品的氨基酸序列是天然序列并且与天然人fsh和现有的来源于cho的rfsh产品相同。然而，本申请人发现，当用于(例如个体化的)cos方案时，具有α2，3和α2，6-连接的唾液酸两者的混合物和/或特定量的四-唾液酸化的聚糖结构的人来源的重组fsh产品(即在人细胞系中生产或表达的、例如通过改造人细胞系制备的重组fsh)可以特别有效。根据本发明，在第一方面中，提供这样的产品(例如药物组合物)，其包含促卵泡激素(fsh)并且用于治疗患者(例如血清amh水平为0.05pmol/l以上、例如0.5pmol/l以上的患者)的不孕，其中所述产品包含1-24μg、例如2-24μg、例如2至15μg人来源的重组fsh的剂量或等效剂量。优选地，所述产品包含4.5至12.5μg、例如5至12.5μg、例如6至12.5μg、例如6.3至10.5μg人来源的重组fsh的剂量或等效剂量。根据本发明，提供这样的产品(例如药物组合物)，其包含促卵泡激素(fsh)并且用于治疗血清amh水平＜15pmol/l(例如0.05pmol/l至14.9pmol/l)的患者的不孕，其中所述产品包含9至14μg、例如11至13μg、例如12μg人来源的重组fsh的(例如每日)剂量或等效剂量。优选地，fsh是重组fsh(“rfsh”或“recfsh”)。优选地，fsh是人细胞系来源的重组fsh。所述剂量提供有效响应同时最小化ohss的风险。优选地，不孕的治疗包括确定(例如测量)患者的血清amh水平的步骤，和向血清amh水平＜15pmol/l(例如0.05pmol/l至14.9pmol/l)的患者施用所述剂量。根据本发明，在另一个方面中，提供这样的产品(例如药物组合物)，其包含促卵泡激素(fsh)并且用于治疗血清amh水平≥15pmol/l的患者的不孕，其中所述产品包含5至12.5μg、例如6至10.5μg人来源的重组fsh的(例如每日)剂量或等效剂量。优选地，fsh是重组fsh(“rfsh”或“recfsh”)。优选地，fsh是人细胞系来源的重组fsh。所述剂量提供有效响应同时最小化ohss的风险。优选地，不孕的治疗包括确定(例如测量)患者的血清amh水平的步骤，和向血清amh水平≥15pmol/l的患者施用所述剂量。在一个实施方案中，所述产品用于治疗血清amh水平为15至24.9pmol/l的患者的不孕，并且所述产品以5至12μg、例如7至12μg、例如8.7至10μg人来源的重组fsh(优选地，9至10μg人来源的重组fsh)的(例如每日)剂量或等效剂量施用。在该实施方案中，不孕的治疗可以包括确定(例如测量)患者的血清amh水平的步骤，和向血清amh水平为15至24.9pmol/l的患者施用所述剂量。在另一个实施方案中，所述产品用于治疗血清amh水平为25至34.9pmol/l的患者的不孕，并且所述产品以5至12μg、例如6至9μg、例如7至8μg人来源的重组fsh(优选地7.3至8μg人来源的重组fsh)的(例如每日)剂量或等效剂量施用。在该实施方案中，不孕的治疗可以包括确定(例如测量)患者的血清amh水平的步骤，和向血清amh水平为25至34.9pmol/l的患者施用所述剂量。在另一个实施方案中，所述产品用于治疗血清amh水平≥35pmol/l的患者的不孕，并且所述产品以5至11μg、例如6.3至7μg人来源的重组fsh(优选地6至7μg人来源的重组fsh)的(例如每日)剂量或等效剂量施用。在该实施方案中，不孕的治疗可以包括确定(例如测量)患者的血清amh水平的步骤，和向血清amh水平≥35pmol/l的患者施用所述剂量。在患者的(受试者的)第一刺激方案中，以上剂量可以用于治疗不孕。要理解，对于进一步的刺激周期，可以根据第一周期中的实际卵巢响应来调整剂量。申请人发现，为了能够选择两个高品质卵母细胞用于转移，通常需要在九个卵母细胞的区域中提取。申请人发现，对于具有低amh(amh＜15pmol/l每升)的受试者，需要相当高剂量的重组fsh(例如12μg)以实现此。以此剂量，从60％的具有低amh的受试者将提取8至14个卵母细胞。相对于用150iugonal-f治疗的具有低amh的受试者的治疗(其中仅从33％的受试者提取了8至14个卵母细胞)，这是出乎意料的和显著的进步。申请人发现，不需要根据患者体重来调整该剂量。然而，60％的人口(并且因不孕而接收治疗的30岁以下女性中的80％)具有高amh(即，amh≥15pmol/l)。对于这些受试者，通常十分容易提取平均9至11个卵母细胞；刺激方案的问题在于ohss的风险。申请人发现，在以低剂量的人重组fsh用药的患者中，在提取的卵母细胞和受试者体重之间存在关系。这表明，可能存在与以固定剂量的fsh进行治疗相关的风险(这在现有技术中是常见的)。本申请人在fsh剂量和amh水平以及受试者体重之间建立了关系，与已知的治疗方案相比，这提供了改善的安全性特征(降低的ohss的风险)以及可接受的或提高的卵母细胞提取(见实施例10)。根据本发明，在另一个方面中，提供这样的产品(例如药物组合物)，其包含促卵泡激素(fsh)并且用于治疗血清amh水平≥15pmol/l的患者的不孕，其中所述产品以0.09至0.19μg(例如0.09至0.17μg)人来源的重组fsh/kg患者体重的(例如每日)剂量或等效剂量施用。优选地，不孕的治疗包括确定(例如测量)患者的血清amh水平的步骤，和向血清amh水平≥15pmol/l的患者施用所述剂量。在一个实施方案中，所述产品用于治疗血清amh水平为15至24.9pmol/l的患者的不孕，并且所述产品以0.14至0.19μg人来源的重组fsh(优选地0.15至0.16μg人来源的重组fsh)/kg患者体重的(例如每日)剂量或等效剂量施用。在该实施方案中，不孕的治疗可以包括确定(例如测量)患者的血清amh水平的步骤，和向血清amh水平为15至24.9pmol/l的患者施用所述剂量。在另一个实施方案中，所述产品用于治疗血清amh水平为25至34.9pmol/l的患者的不孕，并且所述产品以0.11至0.14μg人来源的重组fsh(优选地，0.12至0.13μg人来源的重组fsh)/kg患者体重的(例如每日)剂量或等效剂量施用。在该实施方案中，不孕的治疗可以包括确定(例如测量)患者的血清amh水平的步骤，和向血清amh水平为25至34.9pmol/l的患者施用所述剂量。在另一个实施方案中，所述产品用于治疗血清amh水平≥35pmol/l的患者的不孕，并且所述产品以0.10至0.11μg人来源的重组fsh/kg患者体重的(例如每日)剂量或等效剂量施用。在该实施方案中，不孕的治疗可以包括确定(例如测量)患者的血清amh水平的步骤，和向血清amh水平≥35pmol/l的患者施用所述剂量。优选地，fsh是重组fsh(“rfsh”或“recfsh”)。优选地，fsh是人细胞系来源的重组fsh。所述剂量提供有效响应同时最小化ohss的风险。在患者的(受试者的)第一刺激方案中，以上剂量可以用于治疗不孕。要理解，对于进一步的刺激周期，可以根据第一周期中的实际卵巢响应来调整剂量。根据本发明，在另一方面中，提供这样的产品(例如药物组合物)，其包含促卵泡激素(fsh)并且用于治疗血清amh水平＜15pmol/l的患者的不孕，其中所述产品以0.15至0.21μg(例如0.19至0.21μg)人来源的重组fsh/kg患者体重的(例如每日)剂量或等效剂量施用。优选地，不孕的治疗包括确定(例如测量)患者的血清amh水平的步骤，和向血清amh水平＜15pmol/l的患者施用所述剂量。然而，不需要依体重给血清amh水平＜15pmol/l的患者用药。要理解，使用本领域中公知的转换，这些剂量可以被容易地转换从而在根据其bmi用药的情况下治疗患者。所述产品(例如药物组合物)可以用于治疗血清amh为5.0-14.9pmol/l的患者的不孕，其中所述产品包含6至18μg，例如8至11μg，例如8.5至10.2μg人来源的重组fsh的剂量或等效剂量。所述产品可以用于治疗血清amh为15.0-29.9pmol/l的患者的不孕，其中所述产品包含4.8至15μg，例如6至9μg，例如6.8至8.5μg人来源的重组fsh的剂量或等效剂量。所述产品可以用于治疗血清amh为30-44.9pmol/l的患者的不孕，其中所述产品包含3.6至12μg，例如4至7μg，例如5.1至6.8μg人来源的重组fsh的剂量或等效剂量。所述产品可以用于治疗血清amh为45pmol/l以上的患者的不孕，其中所述产品包含2至9μg，例如2.4至9μg(例如3.4至5.1μg)或2至5μg人来源的重组fsh的剂量或等效剂量。所述产品可以包括促卵泡激素(fsh)并用于治疗血清amh为5pmol/l以下的患者的不孕，其中所述产品包含7.2至24μg，例如10至15μg例如10.2至13.6μg人来源的重组fsh的剂量或等效剂量。所述产品可以用于治疗患者的不孕，其中所述产品包含4.8至18μg、例如6至11μg、例如6.8至10.2μg人来源的重组fsh的剂量或等效剂量。优选地，fsh是重组fsh(“rfsh”或“recfsh”)。优选地，fsh是人细胞系来源的重组fsh。优选地，rfsh(例如人细胞系来源的重组fsh)包括α2，3-和α2，6-唾液酸化。根据本发明使用的fsh(rfsh)具有的总唾液酸化中的1％至99％可以是α2，3-唾液酸化。根据本发明的fsh(rfsh)具有的总唾液酸化中的1％至99％可以是α2，6-唾液酸化。优选地，总唾液酸化中的50至70％，例如60至69％，例如约65％，是α2，3-唾液酸化。优选地，总唾液酸化中的25至50％，例如30至50％，例如31至38％，例如约35％，是α2，6-唾液酸化。优选地，rfsh(例如人细胞系来源的重组fsh)包括一-，二-，三-和四-唾液酸化的聚糖结构，其中唾液酸化的聚糖结构中的15-24％，例如17-23％是四唾液酸化的聚糖结构(例如如对带电荷的聚糖的wax分析所示，如在以下实施例中所述)。fsh包含聚糖(与fsh糖蛋白结合的)。公知的是，fsh中的聚糖可以包括各种结构。这些可以包括一、二、三和四-触角聚糖的组合。本文中，术语如“x％的唾液酸化的聚糖结构是四唾液酸化的聚糖结构”是指fsh上被四唾液酸化的，即具有四个唾液酸残基的聚糖结构的数目，其被表示为fsh上以任意方式被唾液酸化(具有唾液酸)的聚糖结构的总数的百分比(x％)。因此，短语“15-24％的唾液酸化的聚糖结构是四唾液酸化的聚糖结构”表示，在fsh上具有唾液酸残基(即，被唾液酸化)的聚糖结构的总数中，这些聚糖结构中的15至24％被四唾液酸化(具有四个唾液酸残基)。rfsh可以作为单一同工型或同工型的混合物存在。申请人设计了“个体化”cos方案，其中使用具有特定性质的特定剂量的重组fsh基于患者的特定amh水平来治疗所述患者，由此增加对刺激的适当响应的可能性(例如在具有低响应潜力的患者中)，和/或降低ohss的风险(例如在被归类为高或过度响应者的患者中)。血清amh水平可以通过本领域中已知的任何方法确定(例如测量)。优选地，血清amh水平使用amhgen-ii酶联免疫吸附测定试剂盒(beckmancoulter，inc.，webster，texas)来测量。该测定可以检测大于0.57pmol/l的amh浓度，定量的最低限为1.1pmol/l。可以使用其他测定。本文中，血清amh值通常以pmol/l为单位列举。使用换算公式1ng/mlamh＝7.1pmol/lamh可以将此换算为ng/ml。本文中，术语“患者”和“受试者”可互换地使用。产品(例如药物组合物)优选地包含上文中以及在权利要求中限定的量的人来源的rfsh的日剂量或等效日剂量。(日)剂量可以是初始剂量(即在治疗期间，其可以被减小、增大或保持)。产品(例如药物组合物)可以用于在治疗第一天开始并且持续七至十三天、例如九至十三天、例如10至13天、例如10至11天的fsh(每日)施用。产品(例如药物组合物)可以用于在gnrh激动剂(例如synarel，lupron，decapeptyl)施用后(例如施用开始后，例如每日施用开始后)后施用12至16、例如13至15、例如14天。产品(例如药物组合物)可以用于与gnrh激动剂一起施用。产品(例如药物组合物)可以用于在gnrh拮抗剂(例如加尼瑞克(ganirelix)、西曲瑞利克斯(cetrorelix))施用前施用，例如在施用gnrh拮抗剂前五或六天施用。产品(例如药物组合物)可以用于与gnrh拮抗剂一起施用。优选地，产品(例如药物组合物)用于在施用高(排卵的)剂量的hcg(例如4,000至11,000iuhcg，例如5,000iuhcg，10,000iuhcg等；或150至350微克重组hcg，例如250微克重组hcg)前施用以诱发最终的卵泡成熟。要理解，所述产品可以以超过(或不到)每日的频率给药，在所述情况中，相应剂量将相当于本文中规定的(日)剂量。本文中，术语“不孕的治疗”包括通过受控的卵巢刺激(cos)治疗不孕或包括受控的卵巢刺激(cos)的步骤或阶段的方法，例如子宫内授精(iui)，体外授精(ivf)，或胞质内精子注射(icsi)。术语“不孕的治疗”包括通过排卵诱导(oi)或通过包括排卵诱导(oi)的步骤或阶段的方法治疗不孕。术语“治疗不孕”包括治疗患有输卵管不孕或无法解释的不孕的受试者的不孕，包括治疗具有子宫内膜异位(endometriosis)、例如i期或ii期子宫内膜异位的受试者的不孕，和/或具有无卵性不孕、例如whoii型无卵性不孕的受试者的不孕，和/或具有患有男性因素不孕的伴侣的受试者的不孕。所述产品(或组合物)可以用于(使用于)具有子宫内膜异位的受试者中的、例如具有i期或ii期子宫内膜异位的受试者中的不孕的治疗(和/或用于受控的卵巢刺激)，所述i期或ii期子宫内膜异位如美国生殖医学学会(asrm)用于子宫内膜异位的不同阶段的分类系统所定义(iv期：最严重；i期：最不严重)[美国生殖医学学会.修订的美国生殖医学学会子宫内膜异位分类：1996.fertilsteril1997；67,817821.]。所述产品(组合物)可以用于(使用于)处于早期卵泡期中的、具有1至161u/l、例如1至12iu/l的正常血清fsh水平的受试者中的不孕的治疗(和/或受控的卵巢刺激)。所述产品(组合物)可以用于(使用于)年龄为18至42岁、例如25至37岁的受试者中的不孕的治疗(和/或受控的卵巢刺激)。所述产品可以用于(使用于)bmi＞1且bmi＜35kg/m2的受试者、例如bmi＞18且bmi＜25kg/m2的受试者、例如bmi＞20且bmi＜25kg/m2的受试者中的不孕的治疗(和/或受控的卵巢刺激)。rfsh可以优选地包含27-33％、例如30-32％三-唾液酸化的聚糖结构。rfsh可以优选地包含24-33％、例如26-30％二-唾液酸化的聚糖结构。rfsh可以优选地包含12-21％、例如15-17％单-唾液酸化的聚糖结构。rfsh优选地包含具有如下的相对量的单-唾液酸化的，二-唾液酸化的，三-唾液酸化的和四-唾液酸化的聚糖结构：15至17％单-唾液酸化的；26-30％二--唾液酸化的；27-33％(例如29至32％，例如30-32％，例如30至31％)三--唾液酸化的和17-23％四--唾液酸化的(例如如对带电荷的聚糖的wax分析所示的，如实施例中所述的)。rfsh可以包含0至7％、例如0.1至7％、例如3至6％、例如5至6％中性唾液酸化的结构。fsh包含聚糖(与fsh糖蛋白结合的)。本文中，术语如“x％单-唾液酸化的”，“x％二-唾液酸化的”，“x％三-唾液酸化的”或“x％四-唾液酸化的”是指fsh上(分别)被一-、二、三或四唾液酸化的聚糖结构的数目，其被表示为fsh上以任意方式被唾液酸化(具有唾液酸)的聚糖结构的总数的百分比(x％)。因此，短语“27-33％三-唾液酸化的聚糖结构”是指在fsh上具有唾液酸残基(即，唾液酸化)的聚糖结构的总数中，这些聚糖结构中的27至33％是三唾液酸化的(具有三个唾液酸残基)。rfsh具有的唾液酸含量[以唾液酸的摩尔量与蛋白的摩尔量的比表示]可以为6mol/mol以上，例如6mol/mol至15mol/mol，例如8mol/mol至14mol/mol，例如10mol/mol至14mol/mol，例如11mol/mol至14mol/mol，例如12mol/mol至14mol/mol，例如12mol/mol至13mol/mol。rfsh可以产生或表达在人细胞系中。根据本发明使用的fsh(rfsh)具有的总唾液酸化中的1％至99％可以为α2，3-唾液酸化。rfsh具有的总唾液酸化中的10％以上可以为α2，3-唾液酸化。例如，总唾液酸化中的20、30、40、50、60、70、80或90％以上可以为α2，3-唾液酸化。优选地，rfsh包含的α2，3-唾液酸化的量可以为总唾液酸化的50至70％，例如总唾液酸化的60至69％，例如总唾液酸化的63至67％，例如约65％。根据本发明使用的fsh(rfsh)具有的总唾液酸化中的1％至99％可以为α2，6-唾液酸化。本发明的rfsh(或rfsh制剂)具有的总唾液酸化中的5％以上、例如5％至99％可以为α2，6-唾液酸化。rfsh具有的总唾液酸化中的50％以下可以为α2，6-唾液酸化。优选地，rfsh包含的α2，6-唾液酸化的量可以为总唾液酸化的25至50％，例如总唾液酸化的30至50％，例如总唾液酸化的31至38％、例如约35％。唾液酸化是指存在于fsh碳水化合物结构上的唾液酸残基的量。α2，3-唾液酸化是指2，3位处的唾液酸化(如本领域中公知的)并且α2，6唾液酸化位于2，6位处(也是本领域中公知的)。因此，“总唾液酸化中的％可以为α2，3唾液酸化”是指存在于fsh中的在2，3位被唾液酸化的唾液酸残基的总数的％。术语“总唾液酸化中的％为α2，6-唾液酸化”是指存在于fsh中的在2，6位被唾液酸化的唾液酸残基的总数的％。按质量计，rfsh可具有的唾液酸含量(唾液酸化的量/fsh分子)可以为(基于蛋白质量而不是蛋白加碳水化合物的质量)6％以上(例如6％至15％，例如7％至13％，例如8％至12％，例如11％至15％，例如12％至14％)。rfsh可以为rfsh或rfsh制剂，其中16％以下(例如0.1至16％)的聚糖包含(例如具有)截开型n-乙酰葡糖胺(截开型glcnac或bisglcnac)。优选地，rfsh(或rfsh制剂)是rfsh或rfsh制剂，其中8至14.5％的聚糖包含(例如具有)截开型n-乙酰葡糖胺(截开型glcnac或bisglcnac)。要理解，fsh包含与fsh糖蛋白结合的聚糖。也要理解，100％的聚糖是指或表示与fsh糖蛋白结合的所有聚糖。因此，本文中，术语“8至14.5％的聚糖包含(具有)截开型n-乙酰葡糖胺”是指与fsh糖蛋白结合的聚糖的总数中的8至14.5％包含/具有截开型n-乙酰葡糖胺；“16％以下的聚糖包含(具有)截开型n-乙酰葡糖胺”是指与fsh糖蛋白结合的聚糖的总数中的16％以下包含/具有截开型n-乙酰葡糖胺，等等。申请人发现，其中16％以下(例如8至14.5％)的包含在fsh糖蛋白中的聚糖具有截开型glcnac的重组fsh(rfsh制剂；rfsh组合物)可以具有有利的药代动力学性质。据信，产生有利性质的原因是具有截开型glcnac的聚糖的量与在来源于人尿的产品bravelle中的类似，其远少于其他重组fsh制剂如在wo2012/017058中公开的那些的。rfsh(或rfsh制剂)可以是这样的rfsh或rfsh制剂，其中20％以上的聚糖包含(例如具有)n-乙酰半乳糖胺(galnac)，例如其中20％以上的聚糖包含(例如具有)末端galnac。优选地rfsh(或rfsh制剂)是这样的fsh或fsh制剂，其中40至55％、例如42％至52％的聚糖包含(例如具有)galnac。优选地，rfsh(或rfsh制剂)是这样的fsh或fsh制剂，其中40至55％、例如42％至52％的聚糖包含(例如具有)末端galnac。要理解，fsh包含与fsh糖蛋白结合的聚糖。也要理解，100％的聚糖是指或表示所有与fsh糖蛋白结合的聚糖。因此，本文中，术语“其中20％以上的聚糖包含(例如具有)galnac”是指与fsh糖蛋白结合的聚糖的总数的20％以上包含/具有n-乙酰半乳糖胺(galnac)；“40至55％，例如42％至52％的聚糖包含(例如具有)末端galnac”是指与fsh糖蛋白结合的聚糖总数的40至55％、例如42％至52％包含/具有末端galnac，等等。看起来，与仅具有可用的α2，3-连接的来源于cho细胞的产品相比，α2，6-连接的可用性增加了四唾液酸化的结构的数目。申请人还发现，由于糖组成，它们的rfsh区别于其他批准的产品：其包含或可以包含特定量的galnac。这可以与四唾液酸化和效力联系，因为2，6-唾液酸化与galnac相关。换言之，本申请人开发了这样的rfsh产品，其具有特殊性质(2，6-接头位点，galnac)，所述特殊性质给rfsh提供高度的唾液酸化，这表现为在体内导致提高的效力。rfsh(或rfsh制剂)可以具有16至24％的包含(例如末端)1岩藻糖-lewis的聚糖，例如16.5至18％的包含(例如末端)1岩藻糖-lewis的聚糖。rfsh(或rfsh制剂)可以具有1.5至4.5％，例如2至4％，例如3.7％的包含(例如末端)2岩藻糖-lewis的聚糖。岩藻糖-lewis的含量可能对效力有影响。可以在人细胞系，例如per.c6细胞系，hek293细胞系，ht1080细胞系等中生产或表达rfsh。这可以简化制备方法(并且使其更有效)，因为与已知方法相比，操纵和控制例如细胞生长培养基以保持唾液酸化可以不是那么关键。所述方法还可以更有效，因为与已知rfsh产品的生产相比，几乎不产生碱性的rfsh；产生更为酸性的rfsh并且碱性fsh的分离/去除较少有问题。可以在细胞系、来源于的细胞系或修饰的细胞系中产生或表达rfsh。在人细胞系(例如细胞系、hek293细胞系、ht1080细胞系等)中生产或表达的rfsh将包含一些由[所述细胞系的]内源唾液酸转移酶活性提供的α2，6-连接的唾液酸(α2，6唾液酸化)并且将包含一些由内源唾液酸转移酶活性提供的α2，3-连接的唾液酸(α2，3唾液酸化)。可以使用α2，3-唾液酸转移酶修饰所述细胞系。可以使用α2，6-唾液酸转移酶修饰所述细胞系。备选地或另外地，rfsh可以包含由[所述细胞系的]内源唾液酸转移酶活性提供的α2，6-连接的唾液酸(α2，6唾液酸化)。本文中，术语“人来源的重组fsh”是指在人细胞系中生产或表达的重组fsh(例如通过改造人细胞系制备的重组fsh)。可以使用α2，3-和/或α2，6-唾液酸转移酶生产rfsh。在实例中，使用α2，3-唾液酸转移酶生产rfsh。rfsh可以包含由内源唾液酸转移酶活性提供的α2，6-连接的唾液酸(α2，6唾液酸化)。所述产品可以是药物组合物。所述药物组合物用于治疗不孕。不孕的治疗可以包括辅助生殖技术(art)，排卵诱导或子宫内授精(iui)。例如，在使用已知fsh制剂的医学适应证中可以使用药物组合物。可以将所述产品或组合物配制为用于任何药物施用途径的众所周知的组合物，所述药物施用途径例如口服、直肠、肠胃外、透皮(例如，贴片技术)、静脉内、肌内、皮下、intrasustemal、阴道内、腹膜内、局部(粉末、药膏或滴剂)或作为颊含或鼻喷雾剂。典型的组合物包含药用载体，如水溶液、非毒性赋形剂，包括盐和防腐剂，缓冲剂等，如特别在雷明顿药物科学(matt出版公司，1975)第15版，在1405-1412和1461-87页中，以及在国家药典(nationalformulary)xiv第十四版(美国药物协会(americanpharmaceuticalassociation)，1975)中所述。适合的水性和非水性药物载体、稀释剂、溶剂或赋形剂的实例包括水、乙醇、多元醇(如甘油，丙二醇，聚乙二醇，等)，羧甲基纤维素及其适合的混合物，植物油(如橄榄油)，和可注射的有机酯如油酸乙酯。本发明的组合物还可以包含添加剂如，但不限于防腐剂、湿润剂、乳化剂、表面活性剂和分散剂。可以包含抗细菌剂和抗真菌剂以防止微生物的生长，并且包括，例如间甲酚、苄醇、对羟基苯甲酸酯类、氯丁醇、苯酚、山梨酸等。如果包含防腐剂，则苄醇、苯酚和/或间甲酚是优选的；然而，防腐剂决不限于这些实例。此外，包含等张剂如糖、氯化钠等可能是需要的。所述产品或组合物还可以包含盐，所述盐包含选自由na+-或k+-盐或其组合组成的组的药用碱金属阳离子。优选地，盐是na+-盐，例如nacl或na2so4。优选地，所述产品或组合物包含：重组fsh；和聚山梨醇酯20，l-甲硫氨酸，苯酚，硫酸二钠和磷酸钠缓冲液中的一种或多种。在一些情形中，为了实现延长的作用，需要延缓自皮下或肌内注射的fsh(和其它活性成分，如果存在的话)的吸收。这可以通过使用具有较差水溶性的结晶或无定形物质的液体混悬液来实现。fsh吸收的速率于是取决于其溶出速率，其又可以取决于晶体大小和晶型。备选地，肠胃外施用的fsh组合形式的延缓吸收通过将所述fsh组合溶解或悬浮在油赋形剂中实现。可注射长效制剂形式可以通过在可生物降解的聚合物如聚交酯-聚乙交酯中形成fsh(和其它药剂，如果存在的话)的微胶囊基质来进行制备。取决于fsh与聚合物的比率以及所用的特定聚合物的性质，可以控制fsh释放的速率。其它可生物降解的聚合物的实例包括聚乙烯吡咯烷酮，聚(原酸酯)，聚(酐)等。可注射的长效制剂也通过将fsh包埋在脂质体或微乳中进行制备，所述脂质体或微乳可与体组织相容。可注射制剂可以例如通过经过留住细菌(bacterial-retaining)的滤器进行过滤，或通过掺入无菌固体组合物形式的灭菌剂来进行灭菌，所述无菌固体组合物可以溶解或分散在无菌水或其它无菌可注射介质中，之后立即使用。可以将可注射制剂在任何适合的容器中提供，所述容器例如瓶子、预先填充的注射器、注射药筒等。产品或组合物可以被配制成用于单次使用或多次使用(多剂量)。如果产品或组合物被制备成用于多次使用，则优选的是包含防腐剂。如果包含防腐剂，则苄醇、苯酚和/或间甲酚是优选的；然而，防腐剂绝不限于这些实例。单次使用或多次使用配制的产品或组合物还可以包含盐，所述盐包含选自由na+-或k+-盐或其组合组成的组的药用碱金属阳离子。优选地，盐是na+-盐，例如nacl或na2so4。所述产品或组合物可以被包含在容器如小瓶、预先填充的药筒(例如用于单次施用或多次使用的)或注射设备如用于例如施用多剂量的“笔”。所述产品或组合物可以是这样的制剂(例如可注射制剂)，其包含fsh(任选具有hcg、lh、lh活性等)。lh活性，如果存在，可以源自lh或人绒毛膜促性腺素hcg。如果存在超过一种活性成分(即fsh和例如hcg或lh)，则这些可以适合于单独施用或一起施用。如果单独施用，施用可以是连续的。所述产品可以在任何合适的包装中被供应。例如，产品可以包含多个容器(例如预填充的注射器或小瓶)，所述容器含有fsh或hcg或fsh和hcg两者的组合。hcg可以是重组hcg或尿hcg。如果产品包括含有fsh、例如重组fsh的多个容器(例如预填充的注射器或小瓶)，则每个容器可以包含相同量的fsh。一个以上的容器可以包含不同量的fsh。注射器或小瓶可以被包装在泡罩包装或其他装置中以保持无菌。任何产品可以任选地包含使用fsh(和例如hcg(如果存在的话))制剂的使用说明。根据本领域中的常规实践调整药物组合物中各种成分的ph和确切浓度。见goodman和gilman’sthepharmacologicalbasisfortherapeutices(治疗剂的药学基础)，第7版。在优选的实施方案中，本发明的组合物作为用于肠胃外施用的组合物供应。制备肠胃外制剂的一般方法是本领域中已知的并且在remington；thescienceandpracticeofpharmacy(雷明顿：药物科学和实践)，上文，第780-820页中描述。肠胃外组合物可以以液体制剂或作为固体供应，所述固体与无菌可注射介质混合，之后立即施用。在尤其优选的实施方案中，肠胃外组合物以易于施用和剂量均一的剂量单位形式供应。根据本发明，在另一个方面中，提供治疗不孕的方法，所述方法包括：(a)测量受试者的血清amh水平；和(b)向所述受试者施用1-24μg、例如2-24μg、例如2至15μg人来源的重组fsh的剂量或等效剂量。优选地，所述剂量为或等效于4.5至12.5μg，例如5至12.5μg，例如6至12.5μg，例如6.3至12μg人来源的重组fsh。根据本发明，在另一个方面中，提供治疗不孕的方法，所述方法包括：(a)确定(例如测量)受试者的血清amh水平；和(b)向血清amh水平＜15pmol/l(例如0.05pmol/l至14.9pmol/l)的受试者施用9至14μg，例如11至13μg，例如12μg人来源的重组促卵泡激素(fsh)的(例如每日)剂量或等效剂量。优选地，fsh是重组fsh(“rfsh”或“recfsh”)。优选地，fsh是人细胞系来源的重组fsh。所述剂量提供有效响应同时最小化ohss的风险。根据本发明，在另一个方面中，提供治疗不孕的方法，所述方法包括：(a)确定(例如测量)受试者的血清amh水平；和(b)向血清amh水平≥15pmol/l的受试者施用5至12.5μg人来源的重组促卵泡激素(fsh)的(例如每日)剂量或等效剂量。(例如每日)剂量可以为或等效于6至10μg人来源的重组促卵泡激素(fsh)。优选地，fsh是重组fsh(“rfsh”或“recfsh”)。优选地，fsh是人细胞系来源的重组fsh。所述剂量提供有效响应同时最小化ohss的风险。在一个实施方案中，所述方法包括向血清amh水平为15至24.9pmol/l的受试者施用5至12μg，例如7至12μg，例如8.7至10μg人来源的重组fsh(优选地9至10μg人来源的重组fsh)的(例如每日)剂量或等效剂量的步骤。在另一个实施方案中，所述方法包括向血清amh水平为25至34.9pmol/l的受试者施用5至12μg人来源的重组fsh(例如7至12μg，例如6至9μg，例如7至8μg，例如7.3至8μg人来源的重组fsh)的(例如每日)剂量或等效剂量的步骤。在另一个实施方案中，所述方法包括向血清amh水平≥35pmol/l的受试者施用5至11μg人来源的重组fsh(例如6至7μg，例如6.3至7μg人来源的重组fsh)的(例如每日)剂量或等效剂量的步骤。根据本发明，在另一个方面中，提供治疗不孕的方法，所述方法包括：(a)确定(例如测量)受试者的血清amh水平；和(b)施用0.09至0.19μg(例如0.09至0.17μg)人来源的重组fsh/kg受试者体重的(例如每日)剂量或等效剂量，其中所述受试者的血清amh水平≥15pmol/l。优选地，fsh是重组fsh(“rfsh”或“recfsh”)。优选地，fsh是人细胞系来源的重组fsh。所述剂量提供有效响应同时最小化ohss的风险。在一个实施方案中，所述方法包括施用0.14至0.19μg人来源的重组fsh(优选地，0.15至0.16μg人来源的重组fsh)/kg受试者体重的(例如每日)剂量或等效剂量的步骤，所述受试者的血清amh水平为15至24.9pmol/l。在另一个实施方案中，所述方法包括施用0.11至0.14μg人来源的重组fsh(优选地，0.12至0.13μg人来源的重组fsh)/kg受试者体重的(例如每日)剂量或等效剂量的步骤，所述受试者的血清amh水平为25至34.9pmol/l。在另一个实施方案中，所述方法包括施用0.10至0.11μg人来源的重组fsh/kg受试者体重的(例如每日)剂量或等效剂量的步骤，所述受试者的血清amh水平≥35pmol/l。优选地，fsh是重组fsh(“rfsh”或“recfsh”)。优选地，fsh是人细胞系来源的重组fsh。这些剂量提供有效响应同时最小化ohss的风险。根据本发明，在另一个方面中，提供治疗不孕的方法，所述方法包括：(a)确定(例如测量)受试者的血清amh水平；和(b)施用0.15至0.21μg(例如0.19至0.21μg)人来源的重组fsh/kg受试者体重的(例如每日)剂量或等效剂量，其中所述受试者的血清amh水平＜15pmol/l。所述施用优选地包含以上及权利要求中限定的fsh的量的日剂量或等效日剂量。(日)剂量可以是初始剂量(其在治疗期间可以被降低、升高或保持)。所述方法可以是在患者的(受试者的)第一刺激方案中的治疗不孕的方法。要理解，对于进一步的刺激周期，可以根据第一周期中的实际卵巢响应调整所述剂量。根据本发明，在另一个方面中，提供治疗不孕的方法，所述方法包括：(a)确定(例如测量)受试者的血清amh水平；和(b)如果受试者的血清amh水平＜15pmol/l(例如0.05pmol/l至14.9pmol/l)，则向所述受试者施用10至14μg、例如11至13μg、例如12μg人来源的重组促卵泡激素(fsh)的剂量或等效剂量；或者如果受试者的血清amh水平为15至24.9pmol/l，则向所述受试者施用0.14至0.19μg人来源的重组fsh(优选地，0.15至0.16μg人来源的重组fsh)/kg受试者体重的剂量或等效剂量；或者如果受试者的血清amh水平为25至34.9pmol/lpmol/l，则向所述受试者施用0.11至0.14μg人来源的重组fsh(优选地，0.12至0.13μg人来源的重组fsh)/kg受试者体重的剂量或等效剂量；或者如果受试者的血清amh水平≥35pmol/lpmol/l，则向所述受试者施用0.10至0.11μg人来源的重组fsh/kg受试者体重的剂量或等效剂量。对于血清amh为5.0-14.9pmol/l的患者(受试者)，可以施用6至18μg、例如8至11μg、例如8.5至10.2μg人来源的重组fsh的剂量或等效剂量。对于血清amh为15.0-29.9pmol/l的患者(受试者)，可以施用4.8至15μg、例如6至9μg、例如6.8至8.5μg人来源的重组fsh的剂量或等效剂量。对于血清amh为30-44.9pmol/l的患者(受试者)，可以施用3.6至12μg、例如4至7μg、例如5.1至6.8μg人来源的重组fsh的剂量或等效剂量。对于血清amh为45pmol/l以上的患者(受试者)，可以施用2至9μg、例如2.4至9μg(例如3.4至5.1μg)或2至5μg人来源的重组fsh的剂量或等效剂量。对于血清amh为5pmol/l以下的患者(受试者)，可以施用7.2至24μg、例如10至15μg、例如10.2至13.6μg人来源的重组fsh的剂量或等效剂量。在一些实例中，施用4.8至18μg、例如6至11μg、例如6.8至10.2μg人来源的重组fsh的剂量或等效剂量。优选地，fsh是重组fsh(“rfsh”或“recfsh”)。优选地，fsh是人细胞系来源的重组fsh。所述施用优选地包含以上及权利要求中限定的fsh的量的日剂量或等效日剂量。所述(日)剂量可以是初始剂量(其在治疗期间可以被降低、升高或保持)。发明详述现在将根据附图更详细地描述本发明，其中：图1显示pfshα/β表达载体的质粒图谱；图2显示α2，3-唾液酸转移酶(st3gal4)表达载体；图3显示α2，6-唾液酸转移酶(st6gal1)表达载体；图4显示在用α2，3-唾液酸转移酶改造后稳定表达fsh的细胞制备的重组fsh的实例的唾液酸分布的％丰度；图5显示在用α2，3-唾液酸转移酶改造后稳定表达fsh的细胞制备的重组fsh的实例的聚糖电荷分布的％丰度；图6显示在施用225iugonalf(底部线，虚线)和225iu本发明的实施例(顶部线，实线)后抑制素-b的浓度的比较；图7显示体重对低amh治疗组中提取的卵母细胞的影响(实施例10，10a)；和图8显示体重对高amh治疗组中提取的卵母细胞的影响。序列选择人fsh根据fiddes和goodman.(1981)使用fshα多肽的基因编码区。序列登记为ah007338，并且在构建时，不存在该蛋白序列的其它变体。该序列在本文中称为seqidno：1。根据keene等(1989)使用fshβ多肽的基因编码区。将所述序列登记为nm_000510，并且在构建时，不存在该蛋白序列的其它变体。该序列在本文登记为seqidno：2。唾液酸转移酶α2，3-唾液酸转移酶-根据kitagawa和paulson(1994)使用β-半乳糖苷α-2，3-唾液酸转移酶4(α2，3-唾液酸转移酶，st3gal4)的基因的编码区。将序列登记为l23767，并且在本文称为seqidno：3。α2，6-唾液酸转移酶-根据grundmann等(1990)使用β-半乳糖酰胺(galactosamide)α-2，6-唾液酸转移酶1(α2，6-唾液酸转移酶，st6gal1)的基因编码区。将序列登记为nm_003032并且在本文称为seqidno：4。实施例实施例1fsh表达载体的构建分别使用引物组合fsha-fw和fsha-rev和fshb-fw和fshb-rec，通过pcr扩增fshα多肽(ah007338，seqidno：1)和fshβ多肽(nm_003032，seqidno：2)的编码序列。fsha-fw5′-ccaggatccgccaccatggattactacagaaaaatatgc-3’(seqidno：9)fsha-rev5′-ggatggctagcttaagatttgtgataataac-3’(seqidno：10)fshb-fw5′-ccaggcgcgccaccatgaagacactccagtttttc-3′(seqidno：11)fshb-rev5’-ccgggttaacttattattctttcatttcaccaaagg-3’(seqidno：12)将得到的扩增的fshβdna用限制性酶asci和hpai消化，并将其插入在携带新霉素选择标记的cmv驱动的哺乳动物表达载体上的asci和hpai位点中。类似地，将fshαdna用bamhi和nhei消化，并将其插入到在已经包含fshb多肽dna的表达载体上的位点bamhi和nhei中。将载体dna用于转化大肠杆菌(e.coli)的dh5α菌株。挑选克隆用于扩增。选择包含含有fshα和β两者的载体的克隆用于测序并且全部都包含正确的根据seqidno：1和seqidno：2的序列。选择质粒pfsha+b#17用于转染(图1)。实施例2st3表达载体的构建使用引物组合2，3stfw和2，3strev，通过pcr扩增β-半乳糖苷α-2，3-唾液酸转移酶4(st3，l23767，seqidno：3)的编码序列。2，3stfw5′-ccaggatccgccaccatgtgtcctgcaggctggaagc-3’(seqidno：13)2，3strev5’-tttttttcttaagtcagaaggacgtgaggttcttg-3’(seqidno：14)将得到的扩增的st3dna用限制性酶bamhi和aflii进行消化，并将其插入在携带潮霉素抗性标记的cmv驱动的哺乳动物表达载体上的bamhi和aflii位点中。将所述载体如前述扩增，并且测序。克隆pst3#1(图2)包含正确的根据seqidno：3的序列，并将其选择用于转染。实施例3st6表达载体的构建使用引物组合2，6stfw和2，6strev，将β-半乳糖酰胺α-2，6-唾液酸转移酶1的编码序列(st6，nm_003032，seqidno：4)通过pcr进行扩增。2，6stfw5′-ccaggatccgccaccatgattcacaccaacctgaag-3’(seqidno：15)2，6strev5’-tttttttcttaagttagcagtgaatggtccgg-3’(seqidno：16)将得到的扩增的st6dna用限制性酶bamhi和aflii进行消化，并将其插入携带潮霉素抗性标记的cmv驱动的哺乳动物表达载体上的bamhi和aflii位点中。将所述载体如前述扩增并且测序。克隆pst6#11(图3)包含正确的根据seqidno：4的序列并将其选择用于转染。实施例4pfshα+β在per.细胞中的稳定表达。转染分离和克隆的筛选。通过在单一质粒中表达fsh的两条多肽链产生生产fsh的per.克隆(见实施例1)。为了获得稳定的克隆，使用关于pfshα+β构建体的基于脂质体的转染试剂。在补充了10％fcs并包含g418的vpro中选择稳定的克隆。在转染后三周，g418抗性克隆生长。选择克隆用于分离。在选择性培养基中培养分离的克隆直到70-80％汇合。使用fsh选择性elisa测定上清液的fsh蛋白含量，并且使用camp积累测定法(campaccumulationassay)，在克隆的细胞系中测定关于fsh受体的药理学活性。表达功能蛋白的克隆进一步培养扩增到24孔、6孔和t80烧瓶。在t80烧瓶中开始关于确定来自7个克隆的物质的生产率和质量的研究以产生足量的物质。在如前述的补充培养基中培养细胞7天，并且收集上清液。使用fsh选择性elisa测定生产率。通过等电聚焦(ief)、通过本领域中的已知方法确定所述物质的等电图谱。关于唾液酸转移酶改造，选择具有足够生产率和质量的克隆。实施例5唾液酸化水平在过量表达α2，3-唾液酸转移酶的细胞中增加。pst3在表达fsh的per.细胞中稳定表达；转染分离和克隆筛选。通过从在per.细胞中的各个质粒(实施例2)表达α2，3唾液酸转移酶来产生生产高度唾液酸化fsh的per.克隆，所述per.细胞已经表达了fsh的两条多肽链(来自实施例4)。关于它们的性质，选择在实施例4中提及的由per.细胞产生的克隆，所述性质包括生产率，良好生长曲线，功能蛋白的产生，和包含一些唾液酸化的产生的fsh。产生稳定克隆，如之前在实施例4中所述。将克隆分离、扩增并测定。α2，3-唾液酸转移酶克隆适合于无血清培养基和悬浮条件。如前，使用fsh选择性elisa，在fsh受体细胞系中的功能反应，ief，代谢清除率和steelmanpohley分析，测定克隆。将结果与商购重组fsh(gonal-f，serono)和亲代fshper.细胞系进行比较。相比于在没有α2，3-唾液酸转移酶的情况下表达的fsh，由大多数克隆产生的fsh具有显著提高的唾液酸化(即，平均而言更多的fsh同工型，更多数量的唾液酸)。结论是，在per.细胞中fsh与唾液酸转移酶一起的表达导致与仅表达fsh的细胞比较，增加水平的唾液酸化的fsh。实施例6生产和纯化综述开发了一种在per.细胞中生产fsh的方法，其在无血清培养基中混悬培养。在下面描述所述方法并且将其应用于一些生产fsh的per.细胞系。使用由lowry等(1976)所述的方法的改进方法来制备来自α2，3-克隆(实施例5)的fsh。对于per.-fsh的生产，使所述细胞系适应于无血清培养基，即excell525(jrhbiosciences(jrh生物科学))。首先将所述细胞在t80培养瓶中培养到形成70％-90％汇合单层。传代后，将细胞重新悬浮在无血清培养基，excell525+4mml-谷氨酰胺中到0.3x106细胞/ml的细胞密度。将25ml的细胞混悬液置于250ml摇瓶中，并在5％co2下，在37℃，在100rpm摇动。在达到＞1x106细胞/ml的细胞密度后，将细胞继代培养到0.2或0.3x106细胞/ml的细胞密度，并且在摇瓶中，在37℃，5％co2和100rpm进一步培养。对于fsh的生产，将细胞转移到无血清生产培养基，即vpro(jrhbiosciences(jrh生物科学))中，其支持per.细胞的生长到非常高的细胞密度(在批次培养物中通常为＞107细胞/ml)。首先，将所述细胞在excell525中培养到＞1x106细胞/ml，接着在1000rpm离心5分钟，并随后悬浮在vpro培养基+6mml-谷氨酰胺中到1x106细胞/ml的密度。接着，将细胞在37℃，5％co2和100rpm，在摇瓶中培养7-10天。在该阶段过程中，将所述细胞培养到＞107细胞/ml的密度。在细胞生命力开始下降后收获培养基。将所述细胞在1000rpm离心5分钟，并将所述上清液用于fsh的量化和纯化。使用elisa(drgeia1288)确定fsh的浓度。随后，使用由lowry等(1976)所述方法的改进方法进行fsh的纯化。通过本领域中公知的方法进行使用电荷选择性色谱的纯化以富集高度唾液酸化的形式。在所有色谱过程期间，如本文所要求保护的fsh的唾液酸化形式的富集通过ria(drgeia1288)和/或ief确认。实施例7α2，3和α2，6唾液酸的相对量的量化使用已知技术测量纯化的rfsh(实施例6)上的α2，3和α2，6唾液酸的相对百分比的量。使用pngasef在变性条件下使n-聚糖从样品释放，然后用2-氨基苯甲酰胺标记。然后通过弱阴离子交换(wax)柱分离和分析释放的聚糖形式以确定电荷分布。使用用于确定总唾液酸的2，3，6，8唾液酸酶和用于确定2，3唾液酸的2，3唾液酸酶处理的标记的聚糖通过弱阴离子交换柱进一步分析。带电荷的聚糖的相对百分数计算自存在于未经消化的和消化的聚糖库(pool)中的结构，并且显示在图4中(8个样品)。发现α2，3唾液酸化的相对百分数为50％-70％(例如约60％或65％)，并且α2，6唾液酸化的相对百分数为28至50％，通常为30至35％(例如约31％或35％)。实施例8一、二、三和四唾液酸化的聚糖结构的相对量的量化使用已知技术测量在提取自纯化的rfsh(实施例6)的聚糖上一、二、三和四唾液酸化的结构的相对百分比的量。使用pngasef在变性条件下使n-聚糖从样品释放，然后用2-氨基苯甲酰胺标记。使用pngasef在变性条件下使聚糖从样品释放，然后用2-氨基苯甲酰胺标记。然后通过弱阴离子交换(wax)柱分离和分析释放的聚糖形式以确定唾液酸化分布。中性、单-唾液酸化的、二-唾液酸化的、三-唾液酸化的和四-唾液酸化的结构的相对量显示在图5中(关于图4中显示的8个样品)。rfsh包括中性、单-唾液酸化的、二-唾液酸化的、三-唾液酸化的和四-唾液酸化的聚糖结构，其相对量如下：中性5-6％；15-17％单-唾液酸化的；26-30％二--唾液酸化的；30-32％三--唾液酸化的以及17-23％四-唾液酸化的。实施例8a使用已知技术测量在提取自纯化的rfsh的九个样品(通过实施例6的方法制备)的纯化的rfsh上α2，6唾液酸的相对百分比的量。使用pngasef在变性条件下使n-聚糖从样品释放，然后用2-氨基苯甲酰胺标记。然后通过弱阴离子交换(wax)柱分离和分析释放的聚糖形式以确定电荷分布。使用用于确定总唾液酸的2，3，6，8唾液酸酶和用于确定2，3唾液酸的2，3唾液酸酶处理的标记的聚糖通过弱阴离子交换柱进一步分析(见实施例8)。所述分析允许α2，6唾液酸的计算。带电荷的聚糖的相对百分数计算自存在于未经消化的和消化的聚糖库中的结构，并且显示在以下的表中。发现α2，6唾液酸化的相对百分数为25至50％，通常为30至35％。使用已知技术测量在提取自纯化的rfsh的九个样品(通过实施例6的方法制备)的聚糖上截开型glcnac、galnac和1-岩藻糖lewis的相对百分比的量。使用pngasef使n-聚糖从糖蛋白释放并用2-氨基苯甲酰胺(2ab)标记。通过二维(2d)hplc分析结合聚糖的酶降解来进行分析。为了验证，通过maldi-ms分析聚糖。α2，6-唾液酸和末端残基的相对量显示在下表中，一起显示的还有gonalf(来源于cho细胞的重组fsh)和bravelle(人尿fsh)的相对量。13.1的值是全部1/2岩藻糖lewis。2未确定.可以观察到，在本发明的fsh中galnac的量在约44.9至51％间变化，平均为约47.1％。可以观察到，在本发明的fsh中截开型glcnac的量在8.7至13.9％间变化，平均约为10.9％。可以观察到，在本发明的fsh中1岩藻糖lewis的量在16.1至23.3％间变化，平均约为19％。可以观察到，在本发明的fsh中2岩藻糖lewis的量在1.9至4.4％间变化，平均约为3.7％。实施例9-研究fe999049与gonal-f相比的安全性、耐受性、药代动力学、药效学和免疫原性的多剂量研究。研究群体总计48名(每种药物24名)健康女性接收日剂量为14.6μg的fe999049(根据本发明的组合物，根据实施例6制备)或16.5μg的gonal-f达七天。安全性结果fe999049和gonal-f的多剂量施用是安全的并且通常被良好的耐受，如由不良事件(ae)、生命特征、ecg、临床实验测量和体检所评估的。在研究期间没有发生严重的不良事件或死亡。药代动力学结果在施用fe999049和gonal-f达7天后，在下一次注射前即刻评估的fsh浓度值增加并且表现为在6-7天后达到稳态水平。然而，与gonal-f相比，fe999049的暴露(auc和cmax)高60％。药效学结果在施用fe999049和gonal-f后，抑制素-b(见图6)、雌甾二醇和孕酮的浓度全部增加，然而与gonal-f相比，在施用fe999049后达到更大的程度。与gonal-f相比，卵泡的数目和尺寸分布对fe999049都显示更大的响应。实施例9证明，与目前市场上的重组fsh产品相比，具有特定量(17-23％)的四-唾液酸化的聚糖结构和例如特定量的α2，3唾液酸化和α2，6唾液酸化的fsh明显更有效。实施例10-研究与gonal-f相比的fe999049的多剂量研究。以下描述评估fe999049在进行用于体外授精(ivf)/胞质内精子注射(icsi)的受控的卵巢刺激的患者中的剂量-响应关系的随机化、受控的、评估者不知情的、平行组、多国、多中心试验。患者群体为265名ivf患者，其年龄为18至37岁，bmi为18.5至32.0kg/m2。所述试验被设计成剂量-响应试验，以提取的卵母细胞的数目作为初级终点。第二终点将研究fe999049的不同剂量关于内分泌曲线、卵泡发育、卵母细胞授精、胚胎质量和治疗效率(即总促性腺激素消耗和刺激的持续时间)的定性和定量影响。所述试验被设计成评估当fe999049在用于ivf/icsi周期的受控的卵巢刺激中被使用时导致怀孕的效力。在随机化前3个月内关于与纳入标准和排除标准的一致性对受试者进行评估，包括抗米勒管激素(anti-müllerianhormone)(amh)评估，以增大与卵巢响应相关的试验群体的同质性和使对于试验中使用的fe999049剂量和gonal-f剂量来说的潜在的不良响应者和过度响应者的数目最小化。使用amhgen-ii酶联免疫吸附测定试剂盒(beckmancoulter，inc.，webster，texas)测量amh评估。该测定可以检测大于0.57pmol/l的amh浓度，其量化的最小限度为1.1pmol/l。在其月经周期的第2-3天，以1∶1∶1∶1∶1∶1方式将受试者随机化以用90iu、120iu、150iu、180iu或210iufe999049或150iugonal-f进行治疗，并且开始卵巢刺激。根据筛选时的amh水平对随机化进行分层[5.0-14.9pmol/l(低amh)和15.0至44.9pmol/l(高amh))。应fda要求gonal-f按质量标称(fbm)；即μg剂量因此是适当的。gonal-f标称600iu/44μg，这指示150iu是11μg。然而，存在一些变化，并且用于该试验的批次证书指示11.3μggonal-f等于150iu。fe999049剂量表示为蛋白含量(μg)而不是生物学活性。因此，fe999049的剂量为5.2μg(90iu)、6.9μg(120iu)、8.6μg(150iu)、10.3μg(180iu)或12.1μg(210iu)。受试者和剂量分布描述如下(数据是受试者的数目)：表1在整个刺激周期中，fe999049或gonal-f的日剂量水平是固定的。在刺激期间，在刺激第1、4和6天以及之后至少每隔一天监测受试者。当观察到≥15mm的3个卵泡时，每日进行随访。用fe999049或gonal-f治疗受试者最多达16天。为了防止未成熟的lh涌出，可以在刺激第6天以0.25mg的日剂量开始gnrh拮抗剂(乙酸加尼瑞克(ganirelixacetate)、orgalutran、msd/schering-plough)并且在整个刺激周期持续。在当观察到直径≥17mm的≥3个卵泡的那天进行最终卵泡成熟的触发。如果有＜25个卵泡具有≥12mm的直径，则施用250μg重组hcg(绒毛膜促性腺激素α(choriogonadotropinalfa)、ovitrelle、merckserono/emdserono)。如果有25-35个卵泡具有≥12mm的直径，则施用0.2mggnrh激动剂(乙酸曲普瑞林(triptorelinacetate)，decapeptyl/gonapeptyl，ferringpharmaceuticals)。在被定义为＞35个卵泡具有≥12mm的直径的过度卵巢响应的情况中，取消治疗。在被定义为在刺激第10天观察到＜3个卵泡具有≥10mm的直径的不良卵巢响应的情况中，可以取消所述周期。在触发最终卵泡成熟和通过ivf和/或icsi授精的卵母细胞后36h(±2h)进行卵母细胞提取。从卵母细胞提取到转移之日，评估授精和胚胎发育。对于经历了利用hcg的最终卵泡成熟的触发的受试者，在卵母细胞提取后第5天转移可获得的最优品质的一个胚泡，同时保持胚泡冷冻。对于经历了利用gnrh激动剂的最终卵泡成熟的触发的受试者，在新的周期中不发生胚胎转移并且代替地胚泡在第5天被冷冻。从卵母细胞提取后那天直至临床怀孕随访那天，提供阴道孕酮片(lutinus，ferringpharmaceuticals)，100mg每日3次，以用于黄体期支持。在胚胎转移后13-15天进行βhcg测试，并且在胚胎转移后5-6周通过经阴道超声(tvu)确认临床怀孕。结果提取的(初级终点)卵母细胞的数目显示在下表中。表2数据为平均值(sd)满足初级目标：对于fe999049，关于提取的卵母细胞的数目，建立了明显的剂量-响应关系。观察到的该发现不仅是针对整体试验群体，而且还针对随机化时使用的两个amh层中的每个。对于所有关键客观药效学参数，例如雌二醇、抑制素b和抑制素a，fe999049的显著的剂量-响应都被证明。以相似的微克剂量水平，利用fe999049的药效学响应大于利用gonal-f的药效学响应(这些结果未显示)。暴露于fe999049之后的血清fsh浓度显著高于暴露于gonal-f之后的血清fsh浓度。结果证实，fe999049的pk曲线不同于gonal-f的pk曲线。在用fe999049治疗的ivf/icsi患者中，受精率、胚泡发育和妊娠率在预期之中。没有使用fe999049的安全性问题。良好的局部耐受性得到证明。进一步的分析申请人进一步分析数据从而相对于提取的卵母细胞的数目鉴别符合以下标准的fe999049剂量：·提取的卵母细胞为8-14个·是具有＜8个卵母细胞的患者的比例最小化·使具有≥20个卵母细胞的患者的比例最小化申请人还研究了体重的影响。如果相关，关于平均受试者，将剂量转化为μg/kg。该μg/kg值和±0.01μg/kg在关于提取的卵母细胞的分布以及安全性曲线的模型中被评估，并且确定最佳剂量。低amh层如在表2中所示，符合第一标准(提取的卵母细胞为8-14个)的fe999049的剂量为12.1μg(平均9.4个提取的卵母细胞)。卵母细胞的分布显示在以下表3中。表3数据为受试者的％如由框和箭头所示的，在低amh组中的60％的受试者中，12.1μgfe999049的剂量提供最合适数目的卵母细胞的提取。这是相对于gonal-f(仅在33％的受试者中卵母细胞的数目是最合适的)的明显改善。以下表4显示低amh层中过度响应的标志的分析(数据为受试者的数目)。可以观察到，不存在中度或严重性质的早期ohss的迹象，并且不需要进行预防性措施；在具有低amh的患者中，不存在与12.1μgfe999049的剂量相关的问题。表4图7显示，对于不同剂量，体重对(低amh层的)提取的卵母细胞的作用。箭头指示来自以12.1μg剂量治疗的体重为45kg至90kg的受试者的提取的卵母细胞的数目。如可以见到的(文本框)，体重为45kg的患者和体重为90kg的患者之间的差异小于约0.5个卵母细胞；换言之，当fe999049的剂量至少为12μg时，在具有低amh的患者中，不需要按体重给药，因为以此剂量，在提取的卵母细胞方面不存在与体重相关的显著差异。因此，申请人发现，剂量或等效剂量为6至18μg、例如9至14μg、例如12μg的人来源的重组fsh适用于治疗血清amh＜15pmol/l、例如0.05-14.9pmol/l、例如5.0-14.9pmol/l的患者的不孕。所述剂量提供有效响应同时最小化ohss的风险。高amh层如在表2中可见，三个剂量的fe999049满足第一标准(提取的卵母细胞为8-14个)：6.9μg(平均9.1个提取的卵母细胞)，8.6μg(平均10.6个提取的卵母细胞)，和10.3μg(平均13.6个提取的卵母细胞)。图8显示，对于不同剂量，体重对(高amh层的)提取的卵母细胞的作用。箭头指示来自以6.9μg、8.6μg和10.3μg剂量治疗的体重为45kg至90kg的受试者的提取的卵母细胞的数目。如可以见到的(文本框)，差异是显著的：对于6.9μg剂量，与90kg患者相比，从45kg患者多提取了6个卵母细胞；对于8.6μg剂量，与90kg患者相比，从45kg患者多提取了4个卵母细胞；并且对于10.1μg剂量，与90kg患者相比，从45kg患者多提取了2.5个卵母细胞。换言之，当fe999049的剂量小于12μg时，在具有高amh的患者中，按体重给药有影响，因为以这些剂量，在提取的卵母细胞方面存在与体重相关的显著差异。以下表5a进一步显示根据amh的提取的卵母细胞的分类(从表2)。这显示针对amh的每个亚层(框)的满足第一标准(提取的卵母细胞为8-14个)的剂量。表5a以下表5b显示，对于这些亚组，由于过度响应或激动剂触发而取消治疗的患者的分析。例如，25-34pmol/lamh层中的一名患者由于在10.3μg的剂量之后的过度响应而取消，并且25-34pmol/lamh层中的一名患者由于在12.1μg的剂量之后的过度响应而取消；35-45pmol/lamh层中的一名患者由于在10.3μg的剂量之后的激动剂触发而取消；并且35-45pmol/lamh层中的一名患者由于在6.9μg的剂量之后的激动剂触发而取消。表5b因此可见，根据体重(图8)和amh水平进行的剂量调整可用于高amh层，以使取消最小化并最大化卵母细胞提取。申请人发现，以下剂量提供有效响应同时最小化ohss的风险(kg是患者的kg体重)。如果不需要根据体重给药，则以下是适当的。血清amh剂量(最大剂量)＜15pmol/l12μg12μg15-24pmol/l9.3-10μg(12μg)25-34pmol/l7.3-8μg(12μg)≥35pmol/l6.3-7μg(12μg)如果较少的amh的类型是需要的，则以下是适当的。如果不需要根据体重给药，则以下是适当的。因此，申请人发现，剂量或等效剂量为9至14μg、例如12μg的人来源的重组fsh适用于治疗血清amh＜15pmol/l、例如0.05-14.9pmol/l、例如5.0-14.9pmol/l的患者的不孕。所述剂量提供有效响应同时最小化ohss的风险。申请人发现，剂量或等效剂量为5至12.5μg、例如6至10.5μg的人来源的重组fsh适用于治疗血清amh≥15pmol/l的患者的不孕。所述剂量提供有效响应同时最小化ohss的风险。申请人发现，(例如每日)剂量或等效剂量为0.09至0.19μg的人来源的重组fsh/kg患者体重适用于治疗血清amh水平≥15pmol/l的患者的不孕。申请人发现，(例如每日)剂量或等效剂量为0.14至0.19μg的人来源的重组fsh(优选地0.15至0.16μg人来源的重组fsh)/kg患者体重适用于治疗血清amh水平为15至24.9pmol/l的患者的不孕。申请人发现，(例如每日)剂量或等效剂量为0.11至0.14μg的人来源的重组fsh(优选地0.12至0.13μg人来源的重组fsh)/kg患者体重适用于治疗血清amh水平为25至34.9pmol/l的患者的不孕。申请人发现，(例如每日)剂量或等效剂量为0.10至0.11μg的人来源的重组fsh/kg患者体重适用于治疗血清amh水平≥35pmol/l的患者的不孕。这些剂量提供有效响应同时最小化ohss的风险。申请人发现，(例如每日)剂量或等效剂量为0.15至0.21μg(例如0.16μg)的人来源的重组fsh/kg患者体重适用于治疗血清amh水平＜15pmol/l的患者的不孕，例如适用于使用人来源的重组fsh的第一刺激周期。然而，在该amh水平，不需要根据体重给患者用药。实施例10a-个体化cos方案(低amh)选择的患者将通过本领域已知方法进行用于体外授精(ivf)/胞质内精子注射(icsi)的cos。预治疗方案包括使用amhgen-ii酶联免疫吸附测定试剂盒(beckmancoulter，inc.，webster，texas)评估/筛选患者的血清amh。该测定可以检测大于0.57pmol/l的amh浓度，并且定量的最小限度为1.1pmol/l。可以使用其他测定试剂盒(例如可获得自roche的试剂盒)测量amh。以普通方式进行cos方案，不同之处在于施用根据筛选时的amh水平的初始剂量的fe999049。amh水平＜14.9pmol/l的患者将被施用以约12μgfe999049(根据实施例6的方法制备的人来源的重组fsh产品)的初始日剂量。amh水平为15至24.9pmol/l的患者将接受0.15至0.19μg人来源的重组fsh/kg患者体重的初始日剂量。amh水平为25至34.9pmol/l的患者将接受0.11至0.13μg人来源的重组fsh/kg患者体重的初始日剂量。amh水平≥35pmol/l的患者将接受0.10至0.11μg人来源的重组fsh/kg患者体重的初始日剂量。实施例11-个体化cos方案.此方案中的剂量与实施例10a相比不是优选的。选择的患者将通过本领域已知方法进行用于体外授精(ivf)/胞质内精子注射(icsi)的cos。预治疗方案包括使用amhgen-ii酶联免疫吸附测定试剂盒(beckmancoulter，inc.，webster，texas)评估/筛选患者的血清amh。该测定可以检测大于0.57pmol/l的amh浓度，并且定量的最小限度为1.1pmol/l。以普通方式进行cos方案，不同之处在于施用根据筛选时的amh水平的、符合下表的初始剂量的fe999049。因此，amh水平为5-14.8pmol/l的患者将被以约8-11μgfe999049(根据实施例6的方法制备的人来源的重组fsh产品)的形式施用180iufsh。amh水平为30-44.9pmol/l的患者将被以约4-7μgfe999049(根据实施例6的方法制备的人来源的重组fsh产品)的形式施用120iufsh。如果无法获得amh水平，则患者重组将被以约6-11μgfe999049(根据实施例6的方法制备的人来源的重组fsh产品)的形式施用120-180iufsh。参考文献andersency，westergaardlg，和vanwelym.(2004).fshisoformcompositionofcommercialgonadotrophinpreparations：aneglectedaspect？(商购促性腺激素的fsh，被忽视的方面？)reprodbiomedonline(生殖医学在线).9(2)，231-236.areybj，stevispe，deecherdc，shenes，frailde，negro-vilara，和lopezfj.(1997)inductionofpromiscuousgproteincouplingofthefollicle-stimulatinghormone(fsh)receptor：anovelmechanismfortransducingpleiotropicactionsoffshisoforms(促卵泡激素(fsh)受体的非种系选择性的g蛋白偶联：一种fsh同工型的转导多向性作用的新机制).molendocrinol.(分子内分泌学)11(5)，517-526.baenzigerju和greened.(1988).pituitaryglycoproteinhormoneoligosaccharides：structure，synthesisandfunctionoftheasparagine-linkedoligosaccharidesonlutropin，follitropinandthyrotropin(垂体糖蛋白激素寡糖：在促黄体激素、促滤泡素和促甲状腺素上的天冬酰胺-连接的寡糖的结构、台成和功能).biochimbiophysacta.(生物化学生物物理学报)947(2)，287-306.bassettrm，和driebergenr.(2005).continuedimprovementsinthequalityandconsistencyoffollitropinalfa，recombinanthumanfsh(在促卵泡激素α重组人fsh的质量和一致性上的持续改善).reprodbiomedonline(生殖生物医学在线).10(2)，169-177.damián-matsumurap，zagav，maldonadoa，sánchez-hernándezc，timossic，和ulloa-aguirrea.(1999).oestrogensregulatepituitaryalpha2，3-sialyltransferasemessengerribonucleicacidlevelsinthefemalerat(在雌性大鼠中雌激素调节垂体α2，3-唾液酸转移酶信使核糖核酸水平).jmolendocrinol.(内分泌学杂志)23(2)，153-165.d’antoniom.，borrellif.，datolaa.，buccir.，masciam.，pollettap.，piscitellid.，和papoianr.(1999)biologicalcharacterizationofrecombinanthumanfolliclestimulatinghormoneisoforms(重组人促卵泡激素同工型的生物学表征).humanreproduction(人类生殖)14，1160-1167dalpathadods，irunguj，goep，butnevvy，nortonk，bousfieldgr，和desaireh.(2006).comparativeglycomicsoftheglycoproteinfolliclestimulatinghormone：glycopeptideanalysisofisolatesfromtwomammalianspecies(糖蛋白促卵泡激素的比较糖组学：来自2个哺乳动物物种的分离株的糖肽分析).biochemistry(生物化学).45(28)，8665-8673.无拷贝diasja，vanroeyp.(2001).structuralbiologyofhumanfollitropinanditsreceptor(人促滤泡素及其受体的结构生物学).archmedres.(医学研究进展)32(6)，510-519fiddes，j.c.和goodman，h.m.(1979)isolation，cloningandsequenceanalysisofthecdnaforthealpha-subunitofhumanchorionicgonadotropin(人绒毛膜促性腺激素的α亚基的cdna的分离、克隆和序列分析).nature(自然)，281，351-356.flack，m.r.，bennet，a.p.，froehlich，j.anasti，jn和nisula，b.(1994).increasedbiologicalactivityduetobasicisoformsinrecombinanthumanfollicle-stimulatinghormoneproducedinahumancellline(由于在人细胞系中产生的重组人促卵泡激素的碱性同工型的增加的生物学活性).j.clin.endocrinol.metab(临床内分泌学代谢杂志).，79，756-760foxkm，diasja，和vanroeyp.(2001).three-dimensionalstructureofhumanfollicle-stimulatinghormone(人促卵泡激素的三维结构).molendocrinol.(分子内分泌学)15(3)，378-89grabenhorste，hoffmanna，nimtzm，zettlmeisslg，和conradths.(1995).constructionofstablebhk-21cellscoexpressinghumansecretoryglycoproteinsandhumangal(beta1-4)glcnac-ralpha2，6-sialyltransferasealpha2，6-linkedneuacispreferentiallyattachedtothegal(beta1-4)glcnac(beta1-2)man(alpha1-3)-branchofdiantennaryoligosaccharidesfromsecretedrecombinantbeta-traceprotein(共表达人分泌糖蛋白和人gal(β1-4)glcnac-rα2，6-唾液酸转移酶α2，6-连接的neuac的稳定的bhk-21细胞的构建优先地连接于来自分泌的重组β痕量蛋白的二触角寡糖的gal(β1-4)glcnac(β1-2)man(α1-3)-分支).eurjbiochem.(欧洲生物化学杂志)232(3)，718-25.greened和baenzigerju.(1988).asparagine-linkedoligosaccharidesonlutropin，follitropin，andthyrotropin.ii.distributionsofsulfatedandsialylatedoligosaccharidesonbovine，ovine，andhumanpituitaryglycoproteinhormones(在促黄体激素、促卵泡激素和促甲状腺激素上的天冬酰胺连接的寡糖ii.在牛、绵羊和人垂体糖蛋白激素上的硫酸化和唾液酸化寡糖的分布).jbiolchem(生物化学杂志).263(1)，36-44.grundmann，u.，nerlich，c.，rein，t.和zettlmeissl，g.(1990).completecdnasequenceencodinghumanbeta-galactosidealpha-2，6-sialyltransferase(编码人β-半乳糖苷α-2，6-唾液酸转移酶的完整的cdna序列).gnucleicacidsres.(g核酸研究).18(3)，667howles，c.m.(1996).geneticengineeringofhumanfsh(gonal-f)(人fsh(gonal-f)的基因改造).humreprod.update(人生殖更新)，2，172-191.kagaway，takasakis，utsumij，hosoik，shimizuh，kochiben，和kobataa.(1988).comparativestudyoftheasparagine-linkedsugarchainsofnaturalhumaninterferon-beta1andrecombinanthumaninterferon-beta1producedbythreedifferentmammaliancells(由三种不同的哺乳动物细胞产生的天然人干扰素-β1和重组人干扰素-β1的天冬酰胺-连接的糖链的比较研究).jbiolchem(生物化学杂志).263(33)，17508-17515.keene，j.l.，matzuk，m.m.，otani，t.，fauser，b，c，j，m.，galway，a.b.，hsueh，a.j.w.和boime，i.(1989).expressionofbiologicallyactivehumanfollitropininchinesehamsterovarycells(在中国仓鼠卵巢细胞中的生物学活性的人促卵泡激素的表达).thejoumalofbiologicalchemistry(生物化学杂志)，264(9)，4769-4775.kitagawa，h.和paulson，j.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00ccttgggagctatgggacattcttcaagaaatctccccagaagagattcagccaaacccc960ccatcctctgggatgcttggtatcatcatcatgatgacgctgtgtgaccaggtggatatt1020tatgagttcctcccatccaagcgcaagactgacgtgtgctactactaccagaagttcttc1080gatagtgcctgcacgatgggtgcctaccacccgctgctctatgagaagaatttggtgaag1140catctcaaccagggcacagatgaggacatctacctgcttggaaaagccacactgcctggc1200ttccggaccattcactgctaa1221<210>5<211>116<212>prt<213>人<400>5metasptyrtyrarglystyralaalailepheleuvalthrleuser151015valpheleuhisvalleuhisseralaproaspvalglnaspcyspro202530glucysthrleuglngluasnprophepheserglnproglyalapro354045ileleuglncysmetglycyscyspheserargalatyrprothrpro505560leuargserlyslysthrmetleuvalglnlysasnvalthrserglu65707580serthrcyscysvalalalyssertyrasnargvalthrvalmetgly859095glyphelysvalgluasnhisthralacyshiscysserthrcystyr100105110tyrhislysser115<210>6<211>129<212>prt<213>人<400>6metlysthrleuglnphephepheleuphecyscystrplysalaile151015cyscysasnsercysgluleuthrasnilethrilealaileglulys202530gluglucysargphecysileserileasnthrthrtrpcysalagly354045tyrcystyrthrargaspleuvaltyrlysaspproalaargprolys505560ileglnlysthrcysthrphelysgluleuvaltyrgluthrvalarg65707580valproglycysalahishisalaaspserleutyrthrtyrproval859095alathrglncyshiscysglylyscysaspseraspserthraspcys100105110thrvalargglyleuglyprosertyrcysserpheglyglumetlys115120125glu<210>7<211>332<212>prt<213>人<400>7metcysproalaglytrplysleuleualametleualaleuvalleu151015valvalmetvaltrptyrserileserarggluaspargtyrileglu202530leuphetyrpheproileproglulyslysgluprocysleuglngly354045glualagluserlysalaserlysleupheglyasntyrserargasp505560glnproilepheleuargleugluasptyrphetrpvallysthrpro65707580seralatyrgluleuprotyrglythrlysglysergluaspleuleu859095leuargvalleualailethrserserserileprolysasnilegln100105110serleuargcysargargcysvalvalvalglyasnglyhisargleu115120125argasnserserleuglyaspalaileasnlystyraspvalvalile130135140argleuasnasnalaprovalalaglytyrgluglyaspvalglyser145150155160lysthrthrmetargleuphetyrprogluseralahispheasppro165170175lysvalgluasnasnproaspthrleuleuvalleuvalalaphelys180185190alametaspphehistrpilegluthrileleuserasplyslysarg195200205valarglysglyphetrplysglnproproleuiletrpaspvalasn210215220prolysglnileargileleuasnprophephemetgluilealaala225230235240asplysleuleuserleuprometglnglnproarglysilelysgln245250255lysprothrthrglyleuleualailethrleualaleuhisleucys260265270aspleuvalhisilealaglypheglytyrproaspalatyrasnlys275280285lysglnthrilehistyrtyrgluglnilethrleulyssermetala290295300glyserglyhisasnvalserglnglualaleualailelysargmet305310315320leuglumetglyalailelysasnleuthrserphe325330<210>8<211>406<212>prt<213>人<400>8metilehisthrasnleulyslyslysphesercyscysvalleuval151015pheleuleuphealavalilecysvaltrplysglulyslyslysgly202530sertyrtyraspserphelysleuglnthrlysglupheglnvalleu354045lysserleuglylysleualametglyseraspserglnservalser505560serserserthrglnaspprohisargglyargglnthrleuglyser65707580leuargglyleualalysalalysproglualaserpheglnvaltrp859095asnlysaspserserserlysasnleuileproargleuglnlysile100105110trplysasntyrleusermetasnlystyrlysvalsertyrlysgly115120125proglyproglyilelyspheseralaglualaleuargcyshisleu130135140argasphisvalasnvalsermetvalgluvalthrasppheprophe145150155160asnthrserglutrpgluglytyrleuprolysgluserileargthr165170175lysalaglyprotrpglyargcysalavalvalserseralaglyser180185190leulysserserglnleuglyarggluileaspasphisaspalaval195200205leuargpheasnglyalaprothralaasnpheglnglnaspvalgly210215220thrlysthrthrileargleumetasnserglnleuvalthrthrglu225230235240lysargpheleulysaspserleutyrasngluglyileleuileval245250255trpaspproservaltyrhisseraspileprolystrptyrglnasn260265270proasptyrasnphepheasnasntyrlysthrtyrarglysleuhis275280285proasnglnprophetyrileleulysproglnmetprotrpgluleu290295300trpaspileleuglngluileserproglugluileglnproasnpro305310315320proserserglymetleuglyileileilemetmetthrleucysasp325330335glnvalaspiletyrglupheleuproserlysarglysthraspval340345350cystyrtyrtyrglnlysphepheaspseralacysthrmetglyala355360365tyrhisproleuleutyrglulysasnleuvallyshisleuasngln370375380glythraspgluaspiletyrleuleuglylysalathrleuprogly385390395400pheargthrilehiscys405<210>9<211>39<212>dna<213>人工序列<220><223>pcr引物fsha-fw<400>9ccaggatccgccaccatggattactacagaaaaatatgc39<210>10<211>31<212>dna<213>人工序列<220><223>pcr引物fsha-rev<400>10ggatggctagcttaagatttgtgataataac31<210>11<211>35<212>dna<213>人工序列<220><223>pcr引物fshb-fw<400>11ccaggcgcgccaccatgaagacactccagtttttc35<210>12<211>36<212>dna<213>人工序列<220><223>pcr引物fshb-rev<400>12ccgggttaacttattattctttcatttcaccaaagg36<210>13<211>37<212>dna<213>人工序列<220><223>pcr引物2,3stfw<400>13ccaggatccgccaccatgtgtcctgcaggctggaagc37<210>14<211>35<212>dna<213>人工序列<220><223>pcr引物2,3strev<400>14tttttttcttaagtcagaaggacgtgaggttcttg35<210>15<211>36<212>dna<213>人工序列<220><223>pcr引物2,6stfw<400>15ccaggatccgccaccatgattcacaccaacctgaag36<210>16<211>32<212>dna<213>人工序列<220><223>pcr引物2,6strev<400>16tttttttcttaagttagcagtgaatggtccgg32当前第1页12当前第1页12