一种啤酒花美白提取液的制备方法与流程

本发明涉及化妆品制造领域，尤其涉及一种啤酒花美白提取液的制备方法。

背景技术：

随着人民生活水平和审美标准的提高，白皙与洁润的肌肤越来越被大多数女士推崇。而紫外线照射强度的增强、工作压力的增大和睡眠的不足都会使皮肤暗黄和生斑。近些年皮肤美白类化妆品的开发日趋活跃，美白化妆品中有关皮肤黑色素成因、美白机理、美白效果的评价、美白剂的选择等方面的研究不断深入。随着人们对黑色素生成生物学机制的不断认识，加之化学美白剂存在的安全性问题，从天然产物中寻找安全高效的美白活性物质已成为化妆品研究的热点。

皮肤的颜色取决于黑色素的含量及分布。黑色素形成的生理过程基本概括为黑色素细胞产生黑色素；黑色素颗粒通过黑色素细胞树枝状突起向角朊细胞转移，转移至角朊细胞的黑色素颗粒随表皮细胞上行至角质层，并随角质层脱落而排泄。可以通过rt-pcr及elisa技术，检测酪氨酸酶、trp-1、trp-1活性以及α-msh、nia含量等，其中在黑色素形成过程中酪氨酸酶是主要限速酶，该酶活性大小决定着黑色素形成的数量。除了酪氨酸酶以外，多巴色素异构酶（trp-2）和5,6-二羟基吲哚-2-羧酸氧化酶（dhicaoxidase，trp-1）也起作用，这就是三酶理论；α-msh可刺激黑色素细胞，释放更多的黑色素颗粒，并转运至角质细胞内，nia可抑制黑色素颗粒向角质细胞的转运。

啤酒花作为中药以及酿酒原料，在国内外市场享有盛誉。学名(humuluslupulus)，又名忽布、蛇麻花、酵母花、酒花。是桑科、葎草属一种多年生草本蔓性植物。酒花始用于德国，学名为蛇麻，雌雄异株，酿造所用均为雌花。中国人工栽培酒花的历史已有半个世纪，始于东北，在中国新疆﹑甘肃﹑内蒙﹑黑龙江﹑辽宁等地都建立了较大的酒花原料基地。其有效成分为酒花树脂和酒花油。

啤酒花的化学成分已知有200多种，包括蛋白质、脂肪、蜡、纤维和无机物质等一般的植物成分，特有的化学成分包括酒花精油、苦味物质和多酚。有关啤酒花成分应用化妆品的研究，国内外文献均集中在啤酒花抗氧化和抑菌方面的研究。迄今为止，尚未有关于啤酒花提取物关于美白化妆品原料的开发。本发明的目的在于提供一种应用于化妆品的啤酒花美白提取液的制备方法，并且对其有效成分进行美白活性的研究，人体斑贴实验验证，明确其在化妆品中的应用。

中国专利申请cn200610104746.2《从啤酒花中萃取分离啤酒花浸膏和啤酒花精油的方法》涉及了啤酒花浸膏和精油的提取方法，未涉及啤酒花美白功效成分的提取。

中国专利申请cn200480037757.2《具有雌激素和抗增殖活性的啤酒花提取物的生产方法》，涉及啤酒花6-异戊烯基柚皮素和8-异戊烯基柚皮素，未涉及其啤酒花美白功效成分的提取。

中国专利申请cn200810073983.6《含黄腐酚的啤酒花提取物及其制备方法》，涉及啤酒花黄腐酚提取物的制备，未涉及啤酒花黄腐酚提取物美白功效成分和功效验证。

本发明的目的之一是，提供一种啤酒花提取物的美白有效部位及其制备方法。

本发明的目的之二是，提供所述有效部位在制备美白化妆品中的应用。

本发明的目的之三是，提供一种安全可靠的化妆品原料添加剂。

技术实现要素：

本发明实施例提供了一种啤酒花美白提取液的制备方法，采用简单快速的方法提取啤酒花中具有肌肤美白活性的提取物，并经实验证明该有效组分能够显著降低黑色素含量，以及可抑制黑色素颗粒向角质细胞的转运。

为达到上述目的，本发明实施例采用如下技术方案：

一种啤酒花美白提取液的制备方法，将啤酒花干燥后粉碎，加入95%的酒精进行提取，提取所得浸膏加入石油醚脱脂，再加入乙酸乙酯对有效成分进行萃取，经大孔吸附树脂脱色，冷冻干燥后得到啤酒花美白有效组分提取物；加入1,3-丁二醇以及去离子水，经0.22μm滤膜过滤除菌得到啤酒花美白提取液。

进一步地，所述方法具体包括：

（1）以干燥粉碎后的啤酒花为原料，加入酒精浸提3次，合并滤液，48-55℃减压浓缩得粗提取浸膏备用；

（2）粗提取浸膏加水适量成悬浮液，加入2-4倍体积的石油醚，去除啤酒花油脂类成分，重复三次；

（3）上述（2）所得下层水相，浓缩去除残留石油醚，再加入2-4倍体积的乙酸乙酯萃取，重复三次，合并乙酸乙酯层，减压浓缩得啤酒花美白有效组分粗提取物；

（4）上述（3）所得啤酒花美白有效组分粗提取物，加入适量水溶解，进行ab-8大孔吸附树脂脱色处理，将啤酒花美白有效组分粗提取物于树脂材料静态吸附1-2h，加入90%的酒精进行洗脱，去除色素；

（5）上述（4）所得啤酒花美白提取物冷冻干燥后加50%1,3-丁二醇水进行溶解，溶液于万级操作间过滤除菌，滤膜直径0.22μm，得啤酒花美白有效组分提取液；

（6）上述（5）所得啤酒花美白有效组分提取液，经急性口毒性实验、多次皮肤刺激实验、急性眼部刺激实验、人体斑贴实验验证为无毒安全化妆品原料。

进一步地，所述步骤（1）中的提取温度为55-65℃，提取次数3-4次，每次2-3h；所述酒精浓度为95%，提取中所述的料液比为1:10-1:20。

进一步地，所述步骤（4）中的上样量与大孔吸附树脂质量比1:10-1:15；所得洗脱体积为3-4倍柱体积，流速为3-5bv/h。

本发明使用的ab-8大孔吸附树脂的预处理：用95%乙醇浸泡24小时以上，用乙醇湿法装柱。继续用乙醇洗脱至洗脱液与水混合为澄清为止。接着用5%的稀盐酸洗脱柱子至7~8个柱体积，再用水洗脱至洗脱液的ph值为中性为止。并将液面放至与树脂齐平，以便上样。

所得啤酒花提取物加入1,3-丁二醇：去离子水=1：1，进行溶解，可应用于化妆水、乳液、精华、眼霜等的添加剂。

本发明的有益效果

（1）本发明的优点和效果在于采用溶剂提取、萃取以及大孔吸附树脂脱色法，从啤酒花中提取到了具有美白作用的有效组分，该组分在蛋白水平上可显著降低黑色素含量，同时可抑制黑色素颗粒向角质细胞的转运。

（2）本发明进一步拓展了啤酒花提取物在护肤品以及化妆品中的应用。

附图说明

附图1为啤酒花美白提取液的制备工艺流程图；

附图2为啤酒花美白提取液作用后黑色素含量的测定。与对照组和阳性组对比，啤酒花美白提取液可显著降低黑色素含量；

附图3为啤酒花美白提取液作用后黑色素的转运检测。啤酒花美白提取物可抑制黑色素颗粒向角质细胞的转运。α-msh：可刺激黑色素细胞，释放更多的黑色素颗粒，并转运至角质细胞内；nia：可抑制黑色素颗粒向角质细胞的转运；

附图4为啤酒花美白提取液急性毒性实验结果。啤酒花美白提取液为无毒产品。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行详细地描述。

实施例1：

取啤酒花原料5kg，除杂后进行破碎，过100目筛，加入95%的酒精50l，加热至60℃浸提，过滤，回收滤液，重复三次，滤液于48℃减压浓缩，得啤酒花总提浸膏浓缩液1.92kg，留样181g，备用。浓缩液加入适量水形成混悬液后加入5l石油醚萃取，充分搅拌，放置于室温静置6h以上，吸出上层液，得石油醚萃取液，石油醚萃取三次，去除脂溶性成分；下层水相再加入5l乙酸乙酯连续萃取三次，合并萃取液，于-0.09mpa、48℃下减压浓缩回收溶剂，得到啤酒花有效组分粗提取浸膏，浸膏于-80℃冷冻干燥得啤酒花粗提物；称取200g粗提物，进行ab-8大孔吸附树脂脱色，静态吸附6h，用90%的乙醇进行洗脱，洗脱体积8l，流速50ml/min，收集洗脱液，减压浓缩，冷冻干燥，得啤酒花美白提取物；啤酒花美白提取物加入1,3-丁二醇：去离子水=1:1进行溶解，溶解后于万级超级工作台进行过滤，滤纸孔径0.22μm。

实施例2：

取啤酒花原料1kg，除杂后进行破碎，过筛，加入95%的酒精10l，加热至55℃浸提，过滤，回收滤液，重复三次，滤液于50℃减压浓缩得粗提取浸膏备用；粗提取浸膏加入适量水形成混悬液后加入2l石油醚萃取三次，去除脂溶性成分；下层水相再加入2l的乙酸乙酯连续萃取三次，合并萃取液，于-0.09mpa、48℃下减压浓缩回收溶剂，得到啤酒花美白粗提取浸膏，浸膏于-80℃冷冻干燥得啤酒花美白提取物，共320g；称取40g粗提物，进行大孔吸附树脂分离，收集90%乙醇洗脱液，流速为20ml/min，洗脱液为3l，洗脱液减压浓缩，冷冻干燥，得啤酒花美白提取物；啤酒花美白提取物加入1,3-丁二醇：去离子水=1:1进行溶解，溶解后于万级超级工作台进行过滤，滤纸孔径0.22μm。

表1

其中，表1为啤酒花提取液眼部刺激实验结果。结果显示啤酒花提取液眼部刺激合格

表2

其中，表2为啤酒花提取液多次皮肤刺激实验结果。结果显示啤酒花提取液多次皮肤刺激实验合格。

表3

其中，表3为啤酒花美白提取液人体斑贴实验结果。结果显示啤酒花美白提取液人体斑贴实验合格。

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。