本发明属于生物技术领域，具体涉及一含乌梢蛇肽的中药组合物及其制备方法和用途。
背景技术：
乌梢蛇俗称乌蛇、乌风蛇，为游蛇科乌梢蛇属体形较大的无毒蛇。乌梢蛇的功效与作用：祛风湿，通经络。治风湿顽痹，肌肤不仁，骨、关节结核，风疹疥癣，麻风，破伤风，小儿麻痹症。研究表明乌梢蛇提取物中醇溶性和水溶性部位能提高小鼠痛阈值，抑制醋酸刺激腹腔粘膜引起的痛反应，减少扭体次数，而且对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀及醋酸所致腹腔毛细血管通透性增高也具有明显抑制作用，并呈一定的量效关系；然而，相比之下，乌梢蛇水溶性部位又明显较醇溶性部位具有更好的上述药效活性，表明，乌梢蛇药效活性为极性较大的物质。在临床应用中，乌梢蛇常用于类风湿性关节炎的治疗，能很好的减轻关节疼痛，缓解关节炎症。乌梢蛇在临床上常采用水煎和酒浸方法入药。我们通过现代药理学的方法研究表明乌梢蛇提取物醇溶性和水溶性部位都具有很好的抗炎镇痛效果，这与临床效果一致，为乌梢蛇的临床应用提供了科学的依据。
近年来多项研究表明，乌梢蛇肽具有抗菌、抗氧化、免疫调节、降血压等多种功能活性。但是如何在制备乌梢蛇活性肽的过程中降低其致敏性和苦味，同时最大程度地保留活性肽的生理活性、提高乌梢蛇活性肽的产率及其蛋白和肽的含量是亟待解决的问题。
技术实现要素：
本发明第一目的在于提供一种具有祛风通络作用的中药组合物，其具有显著的祛风通络作用。
本发明的另一目的在于提供上述中药组合物的制备方法。
本发明的再一目的在于提供一种具有祛风通络作用的中药制剂。
本发明的又一目的在于提供所述中药组合物的用途。
本发明的具有祛风通络作用的中药组合物，由如下原料药制成：
乌梢蛇60-90重量份，
白芷5-30重量份，和
紫苏子5-30重量份。
根据本发明的制备方法，优选地，所述中药组合物由如下原料药制成：
乌梢蛇70-80重量份，
白芷10-20重量份，和
紫苏子10-20重量份。
根据上述的任一项所述的中药组合物的制备方法，其特征在于，将所述乌梢蛇、白芷和紫苏子粉用水作为溶剂提取，所得提取液浓缩，干燥，得到所述中药组合物。
根据上述的任一项所述的中药组合物的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：
a、将干乌梢蛇粉碎，得到乌梢蛇粉；将所述乌梢蛇粉加入水，调节ph至8～9，浸泡12～15小时，固液分离，取上清液；
b、将所述上清液调节ph至4～6进行沉淀，固液分离，取固体部分；
c、将所述固体部分加入水，于85～100℃下加热20～40min，然后进行均质，得到混悬液；
d、将所述混悬液调节ph至5～9，加入酶制剂进行酶解；所述酶制剂由风味蛋白酶、胰蛋白酶和胃蛋白酶组成，且所述风味蛋白酶、胰蛋白酶与胃蛋白酶的重量比为1～3∶1～2∶2～3；酶解温度为45～65℃，酶解时间为2～5h，得到酶解液；
e、酶解结束之后，加入白芷和紫苏子，浸提灭酶。将所述白芷和紫苏子加入所述酶解液中，加热回流提取，过滤，得到混合液；
f、将所述混合液离心、浓缩、喷雾干燥，得到所述中药组合物。
根据所述的中药组合物的制备方法，其特征在于，步骤b中，采用弱酸将所述上清液调节ph至4～6；所述弱酸选自醋酸、乳酸、柠檬酸中的至少一种。
根据所述的中药组合物的制备方法，其特征在于，步骤e中，所述提灭酶的条件为：灭酶温度为95～125℃，灭酶时间为0.5-3h。
根据所述的中药组合物的制备方法，其特征在于，步骤f中，将所述灭酶处理后的酶解液进行离心，离心液首先经板框压滤机过滤，再经陶瓷膜过滤，得到含活性肽的透过液；将所述含活性肽的透过液浓缩，喷雾干燥，从而得到所述中药组合物；所述喷雾干燥在80～105℃下进行；
根据所述的中药组合物的制备方法，其特征在于，步骤f中，所述板框压滤机内含有组合过滤助剂，所述组合过滤助剂由活性炭、珍珠岩和硅藻土按照重量比5～6∶1～2∶1～2组成。
本发明还提供一种具有祛风通络作用的中药制剂，其特征在于，所述中药制剂采用上述方法制备中药组合物。
本发明制得的中药组合物用于制备具有祛风通络作用的药物或保健食品的用途。
本发明的制备方法工艺简单，成本低廉，并且对乌梢蛇的全组分进行利用，所得乌梢蛇活性肽多肽含量高，整个口感较好，苦味值较低，且加入白芷和紫苏子，进一步增强了此中药组合物的功效，具有祛风通络、健运脾胃的功效。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但本发明的保护范围并不限于此。
<中药组合物>
本发明提供一种具有祛风通络作用的含乌梢蛇肽的中药组合物，其特征在于，所述组合物由如下原料药制成：
乌梢蛇60-90重量份，
白芷5-30重量份，和
紫苏子5-30重量份。
优选的，根据上述的中药组合物，其特征在于，所述组合物由如下原料药制成：
乌梢蛇70-80重量份，
白芷10-20重量份，和
紫苏子10-20重量份。
进一步来讲，根据所述的中药组合物，其特征在于，所述组合物由如下原料药制成：
乌梢蛇80重量份，白芷10重量份，和紫苏子10重量份；或者
乌梢蛇75重量份，白芷13重量份，和紫苏子12重量份；或者
乌梢蛇77重量份，白芷11重量份，和紫苏子12重量份。
本发明中，乌梢蛇肽、白芷和紫苏子均具有十分良好的祛风通络、的功效。乌梢蛇肽相比于乌梢蛇更加利于消化吸收，且功效更加明显，可与紫苏子，白芷等同用。在此组合物中，我们将乌梢蛇酶解为乌梢蛇肽，将大蛋白酶解为小分子物质和多肽，利于我们人体的肠道吸收，且发挥了肽的功效。
根据本发明的组合物配比，乌梢蛇肽作为主材，充分发挥其功效，白芷和紫苏子作为辅助添加，进一步发挥其功效，且能够改变组合物的口感和苦味。
白芷：性温，味辛，气芳香，微苦。白芷具有多种功效，小量白芷毒素对动物延髓血管运动中枢、呼吸中枢、迷走神经及脊髓均有兴奋作用，能使血压上升，脉搏变慢，呼吸加深，并能引起流涎呕吐；大量应用能引起强直间歇性痉挛，继而全身麻痹。川白芷水煎剂对各种均有一定抑制作用，对l型结核有显著的抑制作用。白芷在试管内对絮状表皮癣菌、石膏样子芽孢癣菌等真菌有抑制作用，水浸剂(1∶3)对奥杜盎氏子芽孢癣菌也有一定的抑制作用。白芷有降血压作用，其所含异欧前胡素和印度榅桲对猫有降血压作用，作用时间维持1.5小时。白芷有光敏作用，其所含的香柑内酯、花椒毒素、异欧前胡素等呋喃香豆素类化合物为“光活性物质”，可用于治疗白癜风。白芷有活化交感系统激素、抑制脂肪合成的作用。白芷有止血作用。白芷对皮肤有一定作用。白芷酊外用加小剂量长波紫外线照射，对豚鼠二硝基氯苯变应性接触性皮炎有明显抑制作用。白芷可抑制肝药物代谢酶系统，滇白芷有平喘作用。紫苏子：中药紫苏子为为唇形科一年生草本植物紧苏的干燥成熟果实。性辛，温。归肺、大肠经。功能降气化痰，止咳平喘，润肠通便。主治胸闷、咳嗽、便秘等症。紫苏的提取物——迷迭香酸，具有非常好的祛除自由基抗炎效果。性能：已获得美国fda认可为公众安全食品原料。活性高，种类多，可用于营养科学食品及特殊食用产品。功能：抗氧化性、抗病毒活性、抗炎作用、抗血栓、抗血小板聚集、抗菌。
除了上面所描述的目的、特征和优点之外，本发明还有其它的目的、特征和优点。下面将对本发明作进一步详细的说明。
<制备方法>
根据本发明的第一种实施方式，所述中药组合物的制备方法包括：将所述乌梢蛇、白芷和紫苏子粉用水作为溶剂提取，所得提取液浓缩，干燥，得到所述中药组合物。
根据本发明的第一种实施方式，所述中药组合物的制备方法包括如下步骤：
a、将干乌梢蛇粉碎，得到乌梢蛇粉；将所述乌梢蛇粉加入水，调节ph至8～9，浸泡12～15小时，固液分离，取上清液；
b、将所述上清液调节ph至4～6进行沉淀，固液分离，取固体部分；
c、将所述固体部分加入水，于85～100℃下加热20～40min，然后进行均质，得到混悬液；
d、将所述混悬液调节ph至5～9，加入酶制剂进行酶解；所述酶制剂由风味蛋白酶、胰蛋白酶和胃蛋白酶组成，且所述风味蛋白酶、胰蛋白酶与胃蛋白酶的重量比为1～3∶1～2∶2～3；酶解温度为45～65℃，酶解时间为2～5h，得到酶解液；
e、酶解结束之后，加入白芷和紫苏子，浸提灭酶。将所述白芷和紫苏子加入所述酶解液中，加热回流提取，过滤，得到混合液；
f、将所述混合液离心、浓缩、喷雾干燥，得到所述中药组合物。
根据所述的中药组合物的制备方法，其特征在于，步骤d中，所述提灭酶的条件为：灭酶温度为95～125℃，灭酶时间为0.5～3h。
根据本发明的制备方法，步骤a中，所述乌梢蛇粉的粒径为2～75μm。所述乌梢蛇粉可以通过将干乌梢蛇进行超微粉碎，然后过筛得到，例如过200～600目筛。采用本发明的粒径的乌梢蛇粉，能够在后期的酶解步骤中有效提高酶解率，充分利用乌梢蛇中的蛋白成分。所述浸泡优选为在搅拌下进行浸泡，从而使乌梢蛇粉中的成分充分溶出。步骤a中，加水量为乌梢蛇粉重量的3～20倍，优选为5～9倍。优选地，在浸泡工序完成后，进行机械搅拌，从而使液体均匀，便于离心。
步骤a中，所述固液分离方法可以为过滤、离心等，并优选为离心分离。步骤a中，浸泡过程可以加热或在常温下进行，并优选在常温下进行。通常，碱液浸泡过程中需进行加热处理；而发明人发现，在常温下浸泡即可将乌梢蛇粉中的成分充分溶出，从而避免进行加热产生的额外能耗，且操作更方便。
根据本发明的制备方法，步骤b中，采用加热方法使蛋白质变性。在所述的加热条件下即能够实现乌梢蛇中的蛋白质成分完全变性，且有利于后续步骤中进行充分酶解，同时且避免了化学试剂对产品的污染。在加热变形后进行均质，进一步提高了酶解效率。
根据本发明的制备方法，步骤c中，将所述混悬液调节至ph5～9，优选为ph7～9，更优选为ph7～8。本发明中，将ph调节至上述弱碱性，更有利于本发明的酶制剂进行酶解。本发明中，酶制剂由风味蛋白酶、胰蛋白酶和胃蛋白酶按照重量比为1～3∶1～2∶2～3组成。根据本发明优选的实施方式，风味蛋白酶、胰蛋白酶和胃蛋白酶的重量比为2.3～2.8∶1.3～1.8∶2.2～2.7。根据本发明一个优选的实施方式，风味蛋白酶、胰蛋白酶和胃蛋白酶的重量比为2.5∶1.5∶2.4。本发明的酶解过程一次性加入上述酶制剂，并在上述ph条件下进行酶解，能够得到更佳酶解效果。本发明的酶制剂对于乌梢蛇中的蛋白质成分的酶解效率高，明显高于每种酶单用，且高于现有的乌梢蛇活性肽用酶。当风味蛋白酶、胰蛋白酶和胃蛋白酶的重量比为2.5∶1.5∶2.4时，酶解效率最高。根据本发明的制备方法，所述酶制剂的加入量可以为所述混悬液中固形物重量的0.1～2wt％，优选为0.3～1.5wt％，更优选为0.4～1.2wt％。本发明中，酶解温度为45～65℃，酶解时间为2～5h；优选地，酶解温度为45～60℃，酶解时间为2～4h。在上述酶制剂的加入量、酶解时间和温度下，乌梢蛇蛋白可实现有效酶解。
根据本发明的制备方法，步骤d中，所述白芷和紫苏子可以以粉末形式加入所述酶解液中，从而提高提取率。加热回流提取时间为0.5～3小时，优选为1～2小时。所述过滤可采用常规过滤方法，从而滤去药渣，得到混合液。
根据本发明的制备方法，步骤e中，将所述混合液进行离心，离心液首先经板框压滤机过滤，再经陶瓷膜过滤，滤液浓缩，喷雾干燥，从而得到精制的含乌梢蛇活性肽的组合物。优选地，所述喷雾干燥操作在80～105℃进行，从而有效保持乌梢蛇活性肽的活性。
本发明中，所述板框压滤机内含有组合过滤助剂，所述组合过滤助剂由活性炭、珍珠岩和硅藻土组成，且活性炭、珍珠岩和硅藻土的重量比5～6∶1～2∶1～2。根据本发明的一个优选的实施方式，所述组合过滤助剂中活性炭、珍珠岩和硅藻土的重量比5.5∶1.5∶1.5。根据本发明的另一个优选的实施方式，所述组合过滤助剂中活性炭、珍珠岩和硅藻土的重量比5.7∶1.8∶1.3。发明人发现，现有方法制备的乌梢蛇活性肽带有异味，并具有苦味，口感差；多种过滤助剂单用均难以同时将二者脱除。本发明的过滤助剂能够有效除去乌梢蛇本身带有的异味和苦味，且经过本发明的过滤助剂处理后，酶解液中油脂类成分被脱除，因而前期无需进行繁琐的脱脂操作，简化了工艺流程。本发明中，所述陶瓷膜的孔径可以为20～500nm，更优选为20～300mm。采用这样的陶瓷膜孔径，能够实现酶解液的进一步精制。优选地，所述喷雾干燥操作在80～105℃进行，从而有效保持乌梢蛇活性肽的活性。
需要指出的是，通常，肽的喷雾干燥操作在120～140℃进行，一般认为这样的干燥温度对于肽的活性影响不大。然而，发明人发现，现有的喷雾干燥的温度明显影响肽的活性。而本发明中，优选地，所述喷雾干燥操作在80～105℃进行，从而有效保持乌梢蛇活性肽的活性。
<中药制剂>
本发明的中药制剂包含上述的中药组合物，还可以包含药学上可接受的辅料。所述中药制剂的给药方式可以选用口服。所述中药剂型可以选自粉剂、片剂、丸剂中的任一种。该中药制剂具有显著的祛风通络作用，且服用方便。
<用途>
本发明的中药组合物可用于制备具有祛风通络作用的药物、保健食品或普通食品。
以下对本发明的实施例进行详细说明，但是本发明的保护范围不受此限制。
实施例1
将乌梢蛇80重量份、白芷10重量份和紫苏子10重量份混合，加水作为溶剂加热回流提取，提取次数为3次，每次加水量为乌梢蛇、白芷和紫苏子总重量的5倍，每次提取时间为2小时，提取液过滤，合并，浓缩，干燥，得到中药组合物a。
实施例2
a、将干乌梢蛇进行超微粉碎，过400目筛，得到乌梢蛇粉77重量份；将乌梢蛇粉加入乌梢蛇粉重量5倍量的水，混合，用氢氧化钠溶液调节至ph8，浸泡13h；机械搅拌，离心，取上清液；
b、将上清液，于95℃下加热25min，然后进行均质，得到混悬液；
c、将所述混悬液调节ph至8，加入酶制剂进行酶解，得到酶解液；该酶制剂由风味蛋白酶、胰蛋白酶和胃蛋白酶按照2.5∶1.5∶2.4组成；酶制剂的用量为混悬液中固形物重量的0.5wt％；酶解温度为50℃，酶解时间为3h；
d、酶解结束之后，将白芷11重量份和紫苏子12重量份加入所述酶解液中，加热回流提取，提取时间为2h，过滤，得到混合液；
e、将所述混合液离心，离心液经板框压滤机过滤，板框压滤机内含有过滤助剂，过滤助剂由活性炭、珍珠岩和硅藻土按照重量比5.7∶1.8∶1.3组成；再经孔径为400nm的陶瓷膜过滤，滤液浓缩，在中低温喷雾干燥塔内于85℃喷雾干燥，得到含乌梢蛇活性肽的中药组合物。
实施例3
将实施例1制得的中药组合物82重量份、乳糖16重量份、微晶纤维素1重量份、硬脂酸镁1重量份，过筛、称量、混合、制粒、压片。
实施例4
将实施例1制得的中药组合物82重量份、乳清蛋白粉8重量份、魔芋粉5重量份、抗性糊精2重量份、结晶果糖2重量份、菊粉1重量份，经过过筛、称量、混合、包装得到粉剂。
对比例1
除了将实施例1中步骤b的醋酸溶液替换为盐酸溶液，其他步骤与对比文件1相同。
对比例2
除了将实施例1中步骤e的喷雾干燥温度设置为135℃，其他步骤与实施例1相同。
对比例3
除了将实施例2中步骤e的过滤助剂替换为同等重量的活性炭，其他步骤与实施例2相同。
对比例4
除了将实施例2中步骤e的过滤助剂替换为同等重量的珍珠岩，其他步骤与实施例2相同。
对比例5
除了将实施例2中步骤e的过滤助剂替换为同等重量的硅藻土，其他步骤与实施例2相同。
测定实施例2和对比例1～5中苦味和腥味，结果见表1。
苦味评价方法为：取1g乌梢蛇活性肽加入10ml温水中搅拌均匀，将稀释倍数计为苦味值，计算20人的平均苦味值。
腥味评价方法为：评价方法为：0-无腥味；1-略有腥味；2-腥味较弱；3-有腥味；4-腥味一般；5-腥味偏重；6-腥味较重；7-腥味很重计算20人的平均腥味值。
表1
本发明并不限于上述实施方式，在不背离本发明的实质内容的情况下，本领域技术人员可以想到的任何变形、改进、替换均落入本发明的范围。