一种杜仲炮制方法与流程

本发明属于制药工程技术领域，具体地说，涉及一种杜仲炮制方法。

背景技术：

药用杜仲(eucommiaulmoidesoliver)为杜仲科植物的的干燥树皮，是我国名贵滋补药材，其味甘，性温，具有补益肝肾、强筋壮骨、调理冲任、固经安胎的功效，可治疗肾阳虚引起的腰腿痛或酸软无力，肝气虚引起的胞胎不固，阴囊湿痒等症，在《神农本草经》中被列为上品。现代药理学研究表明，杜仲具有抗炎抗病毒，提高人体细胞活性，加快体内有害物质代谢，减慢骨骼和肌肉组织退化速度，降血压降血脂等作用。

目前，现有技术已报道了杜仲的多种炮制方法，主要包括：砂烫、烘制、盐炙、炒炭、煅炭、盐麸炒等。均以“炒断丝”或“去丝”为其炮制目的。然而，不同炮制方法会对杜仲对有效成分中的松脂醇二葡萄糖苷、绿原酸的含量有一定影响。

技术实现要素：

为了克服现有技术中存在的缺陷，本发明提出了一种杜仲炮制方法，采用盐炙炮制杜仲，为优化盐炙法炮制杜仲，以炮制温度、炮制时间及食盐浓度作为考察因素，以松脂醇二葡萄糖苷和绿原酸含量作为评价指标，采用box-behnken响应面法考察各个因素对盐炙法炮制杜仲中松脂醇二葡萄糖苷和绿原酸的影响，为盐炙法炮制杜仲提供理论依据。

其技术方案如下：

一种杜仲炮制方法，包括以下步骤：取约250g杜仲饮片，加盐水，闷润30min后取出，加入到炒制容器中炒制，结束后取出晾干，粉碎过80目筛，食盐浓度为1.0％～2.1％，炮制温度为250℃～400℃，炮制时间为10min～25min。

优选地，食盐浓度为2.1％，炮制温度为295℃，炮制时间为15min。

本发明的有益效果为：

本发明得出炮制杜仲的最佳工艺为：食盐浓度为2.1％，炮制温度为295℃，炮制时间为15.0min。采用最佳炮制工艺参数炮制3批杜仲，松脂醇二葡萄糖苷、绿原酸含量平均值分别为0.229％和0.069％。本发明应用box-behnken响应面法优化杜仲炮制工艺参数，预测结果良好，为盐炙法炮制杜仲提供理论依据。

附图说明

图1食盐浓度对杜仲盐炙炮制过程中松脂醇二葡萄糖苷和绿原酸含量的影响；

图2炮制温度对杜仲盐炙炮制过程中松脂醇二葡萄糖苷和绿原酸含量的影响；

图3炮制时间对杜仲盐炙炮制过程中松脂醇二葡萄糖苷和绿原酸含量的影响；

图4食盐浓度(x1，％)，炮制温度(x2，℃)和炮制时间(x3，min)对杜仲盐炙炮制过程中松脂醇二葡萄糖苷(y1)含量的响应面图，其中，图4a为食盐浓度(x1，％)和炮制温度(x2，℃)，图4b为食盐浓度(x1，％)和炮制时间(x3，min)，图4c为炮制温度(x2，℃)和炮制时间(x3，min)；

图5食盐浓度(x1，％)，炮制温度(x2，℃)和炮制时间(x3，min)对杜仲盐炙炮制过程中绿原酸(y2)含量的响应面图，其中，图5a为食盐浓度(x1，％)和炮制温度(x2，℃)，图5b为食盐浓度(x1，％)和炮制时间(x3，min)，图5c为炮制温度(x2，℃)和炮制时间(x3，min)。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施方式对本发明的技术方案作进一步详细地说明。

1材料

1.1仪器

agilent-1200高效液相色谱系统(安捷伦科技有限公司)；bp211d电子天平(德国赛多利斯集团公司)；电炒锅(浙江苏泊尔股份有限公司)

1.2试药

对照品松脂醇二葡萄糖苷(中国食品药品检定研究院，批号：111537-201605，含量：94.6％)；绿原酸(中国食品药品检定研究院，批号：110753-201415，含量：96.2％)；杜仲(江西轩豪中药饮片有限公司提供)；其他试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1色谱条件

2.1.1松脂醇二葡萄糖苷的含量测定方法

色谱柱：c18硅烷键合硅胶色谱柱(250mm×4.6mm)；流动相：甲醇-水(25∶75，v/v)；检测波长：277nm；柱温：30℃，流速：1.0ml/min，进样量：20μl。

2.1.2绿原酸的含量测定方法

色谱柱：c18硅烷键合硅胶色谱柱(250mm×4.6mm)；流动相：乙腈-0.4％磷酸溶液(13∶87，v/v)；检测波长：327nm；柱温：30℃。流速：1.0ml/min，进样量：20μl。

2.2对照品溶液的制备

取松脂醇二葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加甲醇稀释成含松脂醇二葡萄糖苷浓度为50μg/ml，即得。

取绿原酸对照品适量，精密称定，加入乙腈稀释成含绿原酸浓度为100μg/ml，即得。

2.3供试品溶液制备

参照《中国药典2015年版》方法，称取杜仲(或杜仲炮制品)约3.0g，剪成细片状并揉成絮状，精密称取2.0g并加入到索氏提取器中，加入氯仿适量，加热回流6h，弃去氯仿、挥干，重新加入到索氏提取器中，加入适量甲醇，加热回流6h，浓缩回收甲醇提取液至适量，转移至10ml容量瓶中，加入甲醇至刻度，摇匀，过滤，取续滤液按照“2.1”项下色谱条件分别进样测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷和绿原酸的含量。

2.4线性关系

精密移取松脂醇二葡萄糖苷对照品溶液0.5，1.0，2.0，5.0，10.0ml至25ml容量瓶中，用流动相稀释成1.0，2.0，4.0，10.0，20.0μg/ml的松脂醇二葡萄糖苷对照品系列标准溶液，摇匀，滤过，按“2.1”色谱条件精密吸取20μl进样测定松脂醇二葡萄糖苷，以浓度(c)为横坐标，峰面积(a)为纵坐标，经回归拟合得方程为：a＝251.6c-15.5(r＝0.9999)。结果表明在1.0～20.0μg/ml浓度范围内松脂醇二葡萄糖苷浓度与峰面积线性关系良好。

精密移取绿原酸对照品溶液0.25，0.5，1.0，2.0，5.0ml至50ml容量瓶中，用流动相稀释成0.5，1.0，2.0，4.0，10.0μg/ml的绿原酸对照品系列标准溶液，摇匀，滤过，按“2.1”色谱条件精密吸取20μl进样测定绿原酸，以浓度(c)为横坐标，峰面积(a)为纵坐标，经回归拟合得方程为：a＝43.7c-6.2(r＝0.9999)。结果表明在0.5～10.0μg/ml浓度范围内绿原酸浓度与峰面积线性关系良好。

2.3盐炙炮制杜仲

杜仲盐炙炮制方法参照《中国药典》2015年版(通则0213)方法：取约250g杜仲饮片，加不同浓度的盐水，闷润30min后取出，加入到炒制容器中炒制，根据实验要求设定不同的炒制温度和炒制时间进行盐炙炮制，结束后取出晾干，粉碎过80目筛，备用。

2.4盐炙炮制杜仲工艺的单因素试验考察

通过现有技术报道以及前期预实验结果，影响盐炙炮制杜仲工艺的主要因素为：食盐浓度、炮制温度和炮制时间。分别选取食盐浓度5个水平(1.0％，2.0％，3.0％，4.0％，5.0％)；炮制温度4个水平(250℃，300℃，350℃，400℃)，炮制时间4个水平(10min，15min，20min，25min)，通过单因素考察得到较为适宜的盐炙炮制杜仲工艺参数范围。

2.4.1食盐浓度筛选

炮制温度固定为350℃，炮制时间固定为15min，食盐浓度分别选择1.0％，2.0％，3.0％，4.0％，5.0％五个水平盐炙炮制杜仲，按照“2.3”项下方法处理样品并按照“2.1”项下色谱条件分别进样测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷和绿原酸的含量。

由实验结果可知，在炮制温度和炮制时间相同的条件下，食盐浓度对杜仲盐炙炮制过程中松脂醇二葡萄糖苷和绿原酸的含量具有显著影响，随着食盐浓度的增加，炮制过程中松脂醇二葡萄糖苷含量呈先增加后降低趋势，而绿原酸量呈现降低趋势，因此需要对食盐浓度进一步优化。

2.4.2炮制温度筛选

食盐浓度固定为3.0％，炮制时间固定为15min，炮制温度分别选择250℃，300℃，350℃，400℃四个水平盐炙炮制杜仲，按照“2.3”项下方法处理样品并按照“2.1”项下色谱条件分别进样测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷和绿原酸的含量。

由实验结果可知，在食盐浓度和炮制时间相同的条件下，炮制温度对杆仲盐炙炮制过程中松脂醇二葡萄糖苷和绿原酸的含量具有显著影响，随着炮制温度的提高，炮制过程中松脂醇二葡萄糖苷含量呈先增加后降低趋势，而绿原酸量呈现降低趋势，因此需要对炮制温度进一步优化。

2.4.3炮制时间筛选

食盐浓度固定为3.0％，炮制温度固定为350℃，炮制时间分别选择10min，15min，20min，25min四个水平盐炙炮制杜仲，按照“2.3”项下方法处理样品并按照“2.1”项下色谱条件分别进样测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷和绿原酸的含量。

由实验结果可知，在食盐浓度和炮制温度相同的条件下，炮制时间对炮制温度对杜仲盐炙炮制过程中松脂醇二葡萄糖苷的含量影响不显著，而对绿原酸的含量影响较为显著，随着炮制时间的延长，炮制过程中松脂醇二葡萄糖苷含量和绿原酸量均呈递减趋势，因此需要对炮制温度进一步优化。

2.5box-behnken响应面法优化盐炙炮制杜仲工艺参数

2.5.1实验设计

以食盐浓度(x1，％)，炮制温度(x2，℃)和炮制时间(x3，min)为考察对象，以松脂醇二葡萄糖苷含量(％)和绿原酸含量(％)作为评价指标，采用box-behnken响应面法优化盐炙炮制杜仲工艺参数。因素水平见表1，实验设计及结果见表2。

表1box-behnken实验设计

表2实验设计表与响应值

2.5.2数据处理及方差分析

采用“design-expert8.0.6”实验设计软件中的“box-behnken实验设计”对表2中的实验数据进行处理，结果见表3。

表3二次多元方程的方差分析

2.5.3二次回归模型的建立

利用实验软件“design-expert8.0.6”对表2实验数据进行回归分析，由2个拟合方程的相关系数可知模型拟合程度良好，此模型可以对盐炙炮制杜仲工艺参数进行分析和预测。各因素与各指标的响应面图见图4、5。

从表3结果可知，食盐浓度和炮制温度对杜仲盐炙炮制过程中松脂醇二葡萄糖苷含量影响较为显著，而炮制时间对松脂醇二葡萄糖苷含量影响不显著。由图4结果可知，随着食盐浓度的提高，松脂醇二葡萄糖苷含量呈先增加后达到稳定趋势；随着炮制温度的提高，松脂醇二葡萄糖苷含量呈先增加后降低趋势。

从表3结果可知，食盐浓度、炮制温度和炮制时间对杜仲盐炙炮制过程中绿原酸含量影响较为显著。由图5结果可知，随着食盐浓度和炮制温度的提高，绿原酸含量呈降低趋势；随着炮制时间的延长，绿原酸含量呈降低趋势。

2.5.4盐炙炮制杜仲工艺参数验证

根据“design-expert8.0.6”实验设计软件得到最佳盐炙炮制杜仲工艺参数为：食盐浓度为2.1％，炮制温度为295℃，炮制时间为15.0min，按照“2.3”项下以最优盐炙炮制杜仲工艺参数制备三批样品，并按照“2.1”色谱条件方法测定松脂醇二葡萄糖苷和绿原酸含量。

表4验证实验结果

注：偏差(％)＝(观测值-预测值)/预测值×100

由实验结果可知，3批杜仲炮制品中松脂醇二葡萄糖苷平均含量为0.229％(n＝3)，绿原酸平均含量为0.069％(n＝3)。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，本发明的保护范围不限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，可显而易见地得到的技术方案的简单变化或等效替换均落入本发明的保护范围内。