本发明涉及一种屏边三七抗炎有效部位的制备方法及应用，属于生物医药技术领域。
背景技术：
屏边三七为五加科人参属植物屏边三七（panaxstipuleanatush.t.tsaietk.m.feng）的根及根茎，主产于云南东南部屏边、马关、麻栗坡等地区。民间称之为野三七、竹节七、白三七、香刺、土三七。传统以根及根茎入药，民间认为其具有清除瘀血、镇痛、促进伤口愈合、止血、滋补之功效。目前，国内外学者对屏边三七的研究甚少，仅在初步化学成分（杨崇仁,等.云南植物研究,1985,(01):103-108.）、种植方法（发明专利cn201610036240.6、cn201610700439.4）、快速鉴定方法（发明专利cn201611218427.4）、保育方法（发明专利cn201610702302.2）、干燥方法（发明专利cn201510563209.3）以及降血脂降血糖活性（发明专利cn201610352339.7）等方面有少量的研究。但是对于屏边三七的抗炎作用尚未有报道。本发明从屏边三七的主根中提取分离出抗炎有效部位，并将其应用于治疗炎症相关的疾病。
技术实现要素：
针对上述现有技术存在的问题及不足，本发明提供一种屏边三七抗炎有效部位的制备方法及应用。本发明可有效大量制备屏边三七有效部位，实现屏边三七在制备抗炎药物中的应用。本发明通过以下技术方案实现。
一种屏边三七抗炎有效部位的制备方法，其具体步骤如下：
步骤1、粉碎、浸提：将屏边三七经粉碎后，根据液料比为1：5～10kg/l甲醇浸提，浸提液减压浓缩得到甲醇浸膏；
步骤2、石油醚脱脂：将步骤1得到的甲醇浸膏用水分散，根据相比为1：1～1.5采用石油醚萃取得到去除脂溶性杂质的萃余水溶液；
步骤3、正丁醇萃取：将步骤2得到的萃余水溶液根据相比为1：1～2用饱和正丁醇萃取，萃取有机溶液经减压浓缩得正丁醇浸膏；
步骤4、分离和纯化：将步骤3得到的正丁醇浸膏通过硅胶柱色谱分离，用二氯甲烷/甲醇溶剂体系洗脱，洗脱液浓缩干燥后得到屏边三七有效部位。
上述制备得到的屏边三七有效部位主要成分包括屏边三七皂苷r1和r2，所述2种成分的重量之和在该有效部位中的含量不低于50%，其结构式如下：
屏边三七皂苷r1
屏边三七皂苷r2。
一种屏边三七抗炎有效部位位在制备治疗炎症的药物中的应用。上述炎症主要包括关节炎、肺炎、肝炎、肾炎等。
本发明的屏边三七抗炎有效部位在制备治疗炎症的药物制剂时，可以加入药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
本发明药物制剂可以为固体制剂或液体制剂，主要包括片剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、滴丸剂、注射剂、栓剂、气雾剂等。
本发明的有益效果是：
1、本发明的制备方法操作简单，易于获得大量的屏边三七有效部位，适合工业化生产；
2、本发明制备的屏边三七有效部位化学成分清楚，已知成分含量高；该有效部位具有显著的治疗急性、慢性炎症的效果。
具体实施方式
下面结合具体实施方式，对本发明作进一步说明。
实施例1
该屏边三七抗炎有效部位的制备方法，其具体步骤如下：
步骤1、粉碎、浸提：将屏边三七经粉碎后，根据液料比为1：10kg/l甲醇浸提3次，合并后的浸提液减压浓缩得到250.6g甲醇浸膏；
步骤2、石油醚脱脂：将步骤1得到的甲醇浸膏用1l水分散，根据相比为1：1.5采用石油醚萃取得到去除脂溶性杂质的萃余水溶液；
步骤3、正丁醇萃取：将步骤2得到的萃余水溶液根据相比为1：2用饱和正丁醇萃取，萃取有机溶液经减压浓缩得正丁醇浸膏；
步骤4、分离和纯化：将步骤3得到的正丁醇浸膏通过硅胶柱色谱分离，用二氯甲烷/甲醇溶剂体系（体积比例为95：5，90：10，80：20，60：40，50：50）进行梯度洗脱，收集洗脱液（体积比为二氯甲烷:甲醇=80：20，60：40），浓缩干燥后得到11.7g屏边三七有效部位。
上述制备得到的屏边三七有效部位经ods柱色谱分离（溶剂系统按体积比为甲醇:水=55：45，75：25，80：20，90：10，100：0）为流动相洗脱，得到屏边三七皂苷r1（1.5g），屏边三七皂苷r1（5.6g）。屏边三七皂苷r1和r2重量之和在屏边三七有效部位中的含量为60.7%。
r1和r2化特征及化学结构的定性鉴定如下：
屏边三七皂苷r1
屏边三七皂苷r1（stipuleanosider1）：淡黄色粉末。1h-nmr(cd3od,500mhz)δ：0.80(3h,s),0.83(3h,s),0.90(3h,s),0.93(3h,s),0.94(3h,s),1.04(3h,s),1.15(3h,s);13c-nmr(cd3od,125mhz):δ：181.82(c-28),172.7(c-6'),145.2(c-13),123.67(c-12),108.2(c-1'''),106.5(c-1'),104.4(c-1''),91.2(c-3),87.0(c-4'''),82.3(c-2'''),81.2(c-3'),79.4(c-4'),78.2(c-3''),78.2(c-5''),77.9(c-5'),76.3(c-2'),75.5(c-2''),74.5(c-3'''),71.0(c-4''),63.0(c-6''),62.2(c-5'''),57.0(c-5),49.1(c-9),47.6(c-17),47.2(c-19),42.9(c-14),42.7(c-18),40.6(c-8),40.2(c-4),39.7(c-1),37.9(c-10),34.9(c-21),34.0(c-7),33.8(c-29),33.7(c-22),31.6(c-20),28.8(c-15),28.4(c-23),26.9(c-2),26.4(c-27),24.5(c-11),24.0(c-16),24.0(c-30),19.3(c-6),17.7(c-26),17.0(c-24),16.0(c-25).
屏边三七皂苷r2
屏边三七皂苷r2（stipuleanosider2）：淡黄色粉末。1h-nmr(cd3od,500mhz)δ：0.77(3h,s),0.78(3h,s),0.90(3h,s),0.92(3h,s),0.93(3h,s),1.03(3h,s),1.14(3h,s);13c-nmr(cd3od,125mhz):δ：178.0(c-28),176.5(c-6'),144.6(c-13),123.8(c-12),107.9(c-1'''),106.4(c-1'),104.4(c-1''),95.7(c-1''''),91.0(c-3),87.1(c-4'''),82.0(c-2'''),79.5(c-3'),79.5(c-4'),78.7(c-5''''),78.3(c-5''),78.2(c-3''),78.1(c-5'),78.0(c-3''''),76.4(c-2'),75.6(c-2''),74.8(c-3'''),73.9(c-2''''),71.0(c-4''),71.0(c-4''''),63.2(c-6''),62.4(c-5'''),62.2(c-6''''),57.0(c-5),49.1(c-9),48.0(c-17),47.2(c-19),42.9(c-14),42.6(c-18),40.7(c-8),40.2(c-4),39.8(c-1),37.9(c-10),34.9(c-21),33.9(c-7),33.5(c-29),33.1(c-22),31.5(c-20),28.9(c-15),28.5(c-23),26.9(c-2),26.3(c-27),24.5(c-11),24.0(c-16),24.0(c-30),19.3(c-6),17.7(c-26),17.0(c-24),16.0(c-25).
该屏边三七抗炎有效部位在制备治疗炎症的药物中的应用。
（一）将本实施例制备得到的屏边三七抗炎有效部位的抗急性炎症活性
研究了屏边三七有效部位对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响。
实验方法：
取60只昆明种小鼠（体重18~22g，雌雄各半）适应性喂养2天，随机分成5组，每组12只，模型组、地塞米松组（10mg/kg）及屏边三七有效部位低（25mg/kg）、中（50mg/kg）、高剂量组（100mg/kg）。各组小鼠每天灌胃给药1次，给予模型组相同体积的蒸馏水，连续7d。各组在于末次给药后在每只小鼠右耳内、外两侧各涂抹20ul二甲苯溶液。6h后将小鼠断颈处死,剪下左右耳，用直径6mm打孔器取双侧耳部同一部位的耳片，称重计算两耳片的重量差。小鼠耳肿胀度按以下公式计算：耳肿胀度=右耳重量-左耳重量。
实验结果：
由表1可知，屏边三七有效部位高、中剂量组及地塞米松组的耳肿胀度显著低于模型组（p<0.01）。屏边三七有效部位可显著抑制小鼠二甲苯致耳肿胀，使小鼠耳肿胀度显著降低。说明屏边三七有效部位具有抗急性炎症活性。
表1屏边三七有效部位对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响
与模型组比较，*p<0.05，**p<0.01
（二）将本实施例制备得到的屏边三七抗炎有效部位的抗慢性炎症活性
研究屏边三七有效部位对小鼠棉球肉芽肿的影响。
实验方法：
取60只昆明种小鼠（体重18~22g，雌雄各半）随机分成5组，每组12只，即模型组、地塞米松组（10mg/kg）及屏边三七有效部位低（25mg/kg）、中（50mg/kg）、高剂量组（100mg/kg）。各组均于腋下皮下植入同等大小无菌棉球（10 mg）。造模成功后于次日，各组小鼠每天灌胃给药1次，给予模型组相同体积的蒸馏水，连续7d。末次给药12 h后将小鼠颈椎脱臼处死，取出棉球及周围的结缔组织，去除脂肪组织，在60℃下烘干，称重，按以下公式计算肉芽肿胀度：肉芽肿胀度=棉球肉芽肿干重－棉球原始质量
实验结果：
由表2可见，与模型组比较，屏边三七有效部位低、中、高剂量组及地塞米松组均能显著性降低小鼠棉球肉芽肿胀度（p<0.05，p<0.01），且呈剂量依赖关系。屏边三七有效部位对棉球导致的小鼠肉芽肿有一定的抑制作用，对慢性炎症具有一定的治疗作用。
表2屏边三七有效部位对小鼠棉球肉芽肿的影响(`x±s，n=12)
与模型组比较，*p<0.05，**p<0.01。
实施例2
该屏边三七抗炎有效部位的制备方法，其具体步骤如下：
步骤1、粉碎、浸提：将屏边三七经粉碎后，根据液料比为1：5kg/l甲醇浸提3次，合并后的浸提液减压浓缩得到250.6g甲醇浸膏；
步骤2、石油醚脱脂：将步骤1得到的甲醇浸膏用1l水分散，根据相比为1：1采用石油醚萃取得到去除脂溶性杂质的萃余水溶液；
步骤3、正丁醇萃取：将步骤2得到的萃余水溶液根据相比为1：1用饱和正丁醇萃取，萃取有机溶液经减压浓缩得正丁醇浸膏；
步骤4、分离和纯化：将步骤3得到的正丁醇浸膏通过硅胶柱色谱分离，用二氯甲烷/甲醇溶剂体系（体积比例为95：5，90：10，80：20，60：40，50：50）进行梯度洗脱，收集洗脱液（体积比为二氯甲烷:甲醇=80：20，60：40），浓缩干燥后得到10.3g屏边三七有效部位。
实施例3
该屏边三七抗炎有效部位的制备方法，其具体步骤如下：
步骤1、粉碎、浸提：将屏边三七经粉碎后，根据液料比为1：8kg/l甲醇浸提3次，合并后的浸提液减压浓缩得到245.4g甲醇浸膏；
步骤2、石油醚脱脂：将步骤1得到的甲醇浸膏用1l水分散，根据相比为1：1.2采用石油醚萃取得到去除脂溶性杂质的萃余水溶液；
步骤3、正丁醇萃取：将步骤2得到的萃余水溶液根据相比为1：1.2用饱和正丁醇萃取，萃取有机溶液经减压浓缩得正丁醇浸膏；
步骤4、分离和纯化：将步骤3得到的正丁醇浸膏通过硅胶柱色谱分离，用二氯甲烷/甲醇溶剂体系（体积比例为95：5，90：10，80：20，60：40，50：50）进行梯度洗脱，收集洗脱液（体积比为二氯甲烷:甲醇=80：20，60：40），浓缩干燥后得到10.8g屏边三七有效部位。
以上对本发明的具体实施方式作了详细说明，但是本发明并不限于上述实施方式，在本领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。