用于减少过表达C-MYC的癌症中的C-MYC的化合物的制作方法

本申请根据美国法典第35篇第119条(e)款要求2016年5月13日提交的临时申请62/336,224的权益，所述申请的完整内容特此以引用的方式并入，如同在本文完全阐明一样。

背景技术：

血液癌症如骨髓瘤、淋巴瘤和白血病的治疗非常复杂。在血液癌症受试者中观察到缓解期间的巨大临床可变性，甚至是在一个疗程后发生的那些。无论何时发生耐药性，对治疗有抗性的受试者都具有非常短的存活时间。需要用于治疗血液癌症并提高当前化学疗法在对用此类化学疗法治疗具有抗性、难治性或否则无反应的那些受试者中的功效的有效方式。

c-myc是一种主转录因子并且是在大量人癌症之中最常改变的基因之一[1]。在达30％的弥漫性大b细胞淋巴瘤(dlbcl)(最常见类型的侵袭性淋巴瘤)病例中观察到c-myc的过表达[2]。淋巴瘤中的c-myc过表达是dlbcl中相对常见且非常不利的致病因素。靶向此途径的策略可显著改善患有过表达c-myc的淋巴瘤和其他血液癌症的患者的结果。迄今为止，没有任何直接靶向c-myc的药物被批准用于治疗任何癌症。事实上，因为c-myc参与正常细胞中的许多基本功能，因此直接c-myc抑制剂在理论上可能与显著毒性相关。或者，抑制会聚在c-myc上的上游癌症特异性信号作为治疗策略以减轻与淋巴瘤中c-myc失调相关的不良风险可能是有利的。

附图说明

在所附附图中通过通过举例而非限制的方式说明了本发明。

图1.cux-03166降低ly10细胞的活力。将淋巴瘤细胞系ly10用cux-03166处理24小时、48小时和72小时。图1a示出与媒介物处理的阴性对照样品相比，作为单一剂的cux-03166在25um浓度下在处理48小时后将活力降低至0％。在50um的浓度下，细胞的活力在仅24小时处理时降至0％。图1b示出用cal-101和tgr-1202处理的细胞的结果，并且在24小时测定活力。对于5μm和15μm的较低浓度，对于两种处理活力降至约80％。然而，随着浓度增加至50μm，对于cal-101的活力保持在约80％，并且对于tgr-1202活力适度降至约65％。

图2.cux-03166降低ly7细胞的活力。将淋巴瘤细胞系ly7用cux-03166处理24小时(菱形)、48小时(正方形)和72小时(三角形)。活力被确定类似于图1的活力。在15um浓度下，细胞的活力在24小时降至40％，在48小时降低至10％，并且在72小时降低至约0％。在25um浓度下，活力在24小时降低至0％。

图3.cux-03166在抑制淋巴瘤中的c-myc方面比tgr-1202或cal-101活性更高。将淋巴瘤细胞系ly10和ly7用作为单一剂的pf4800567(pf)、cal-101(cal)、tgr-1202(tg)和cux-03166处理6小时，所有浓度均为25um。对蛋白质提取物进行加工以用于使用针对c-myc、b-连环蛋白、磷酸化4ebp1、总4ebp1和β肌动蛋白的抗体进行蛋白质印迹。使用ly-10细胞系的结果证明，与媒介物处理的阴性对照样品相比，cal-101、pf4800和tgr-1202处理产生c-myc水平和4ebp1磷酸化的中度抑制。cux-03166显示c-myc水平的显著更大降低。使用ly-7细胞系，cal-101处理显示c-myc几乎没有减少，并且pf4800处理显示适度减少。与cal-101或pf4800相比，tgr-1202显示c-myc的显著更大降低。然而，cux-03166显示c-myc水平降低至不可检测的水平。与tgr-1202相比，cux-03166在抑制c-myc方面显示出近50倍的效力增加。

图4.cux-0404a降低oci-ly7细胞(生发中心弥漫性大b细胞淋巴瘤，gcb-dlbcl)的活力。将淋巴瘤细胞系ly7用cux-0404a处理24小时(深色圆圈)、48小时(浅色圆圈)或cux0404b处理24小时(深色正方形)或48小时(浅色正方形)。活力被确定类似于图1的活力。在15um浓度下，细胞的活力在24小时降至60％，在48小时降低至约42％，在25um浓度下，活力在24小时降低至0％。

图5.cux-0404a比tg-1202更有效地降低z-138(套细胞淋巴瘤，mcl)细胞的活力。将mcl细胞用cux-0404a(正方形)、tgr-1202(菱形)或cux0404b(三角形)处理24小时。活力被确定类似于图1的活力。在25um浓度下，与对于tgr-1202为60％相比，对于cux-0404a处理细胞的活力降低至20％

图6.cux-0404a在抑制淋巴瘤中的c-myc方面比tgr-1202或cux-0404b活性更高。将gcb-dlbcl淋巴瘤细胞系用作为单一剂的cux0404a(cux4a)、cux-0404b(cux4b)和tgr-1202(tg)在15和20um浓度下处理12小时。对蛋白质提取物进行加工以用于使用针对c-myc、b-连环蛋白、磷酸化4ebp1、总4ebp1、p-p70s6k、p70s6k、parp和β肌动蛋白的抗体进行蛋白质印迹。结果表明，与媒介物处理的阴性对照样品相比，tgr-1202处理产生c-myc水平和4ebp1磷酸化的中度抑制。cux-0404a显示c-myc水平的显著更大降低，并且在20um浓度下c-myc不可检测。

图7a和7b示出cux-0404a抑制ck1ε，但效力低于tgr-1202。使用放射性同位素过滤结合测定测试ck1ε的抑制。以100μm开始用3倍连续稀释以10剂量ic50模式测试化合物(图7a)。以20μm开始用3倍连续稀释以10剂量ic50模式测试对照化合物d4476(图7b)。反应在10μmatp下进行。cux-0404a具有3.21μm的ic50。tgr-1202具有0.62μm的ic50。

具体实施方式

1.引言

本发明是基于显著减少过表达c-myc的癌细胞中的c-myc的化合物的开发。因此，本发明的实施方案代表用于治疗过表达c-myc的癌症，特别是血液癌症如侵袭性b细胞和t细胞淋巴瘤的新疗法。在试图开发具有较高抑制潜力的pi3k抑制剂时发现了所述化合物。本文教导的许多列举的化合物具有弱pi3k抑制，但出人意料地，与已知的pi3k抑制剂相比，能够以较低的浓度减少淋巴瘤细胞中的c-myc。

在某些实施方案中，所述c-myc减少化合物由下面的式i和ii定义：

其中

r是h或基团a-g中的任一者：

并且其中

表示单键或双键；

r1是ch、取代的c或n；

r2

在所述式i化合物中是ch、取代的c或n；

在所述式ii化合物中是o、ch2、取代的c、nh或取代的n；

r3

在所述式i化合物中是ch、取代的c或n；

在所述式ii化合物中

当表示单键时，是ch、取代的c或n；或者

当表示双键时，是c；

每个r4独立地是取代的烷基、未取代的烷基、取代的烯基、未取代的烯基、取代的炔基、未取代的炔基或卤素；

每个r5独立地是取代的烷基、未取代的烷基、取代的烯基、未取代的烯基、取代的炔基、未取代的炔基或卤素；

如果r1、r2和r3是n或者如果r4是氨基烷基或氨基二烷基，则r6是取代的c2-10烷基或未取代的c2-10烷基、或c1-10烷基或未取代的c1-10烷基；

r7是h或选自基团j、k和h中的任一者的基团

；

并且

每个r8独立地是取代的烷基、未取代的烷基、取代的o-烷基、未取代的o-烷基或卤素；

n

对于r4并且当r1不是n时，是0、1、2、3或4；

对于r4并且当r1是n时，是0、1、2或3；

对于r5，是0、1、2、3、4或5；

对于r8，是0、1、2、3、4或5；

其限制条件是

-当r是基团g并且r3不是n或者r4不是氨基烷基或氨基二烷基时，r7不是h；并且

-排除以下化合物：

在更具体的实施方案中，所列举的化合物被指定为cux-03166，其具有以下结构：

在另一个更具体的实施方案中，所列举的化合物被指定为cux-0404a，其具有以下结构：

其他实施方案涉及通过施用c-myc减少量的c-myc减少剂来治疗受试者的过表达c-myc的癌症。在替代实施方案中，所述c-myc减少剂与一种或多种辅助c-myc抑制剂或一种或多种辅助癌症治疗剂共同施用。在具体实施方案中，所述辅助c-myc抑制剂是pi3k抑制剂、双重pi3k/ck-1抑制剂、蛋白酶体抑制剂和/或ck-1抑制剂。所述c-myc减少剂可作为导入治疗提供，以在施用辅助癌症治疗剂之前减少c-myc或引发c-myc的减少。用c-myc减少剂治疗调节过表达c-myc的癌症的疾病状态，从而使所述癌症恶性程度降低并且对辅助癌症疗法更敏感。

2.定义

除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语意图具有与本发明所属领域和在其提交时通常所理解的含义相同的含义。尽管可在本发明的实践或测试中使用与本文所述的那些方法和材料类似或等效的各种方法和材料，但以下描述了合适的方法和材料。然而，技术人员应理解，所使用和描述的方法和材料是实例，并且可能不是唯一适用于本发明的方法和材料。此外，还应理解，因为测量受固有可变性影响，除非有相反的明确说明，否则本文给出的任何温度、重量、体积、时间间隔、ph、盐度、摩尔浓度或摩尔浓度、范围、浓度和任何其他测量值、数量或数值表述均意图是近似值而非精确或关键数字。因此，在适合于本发明的情况下并且如本领域技术人员所理解的，使用专利申请中通常采用的近似或相对术语和程度术语来描述本发明的各个方面是恰当的，如：如此确定尺寸的、约、大约、实质上、基本上、基本上由……组成、包含和有效量。

一般来说，结合本文中描述的细胞和组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学、蛋白质以及核酸化学和杂交使用的命名法以及其技术是本领域熟知并且常用的那些。除非另外指出，否则本发明的方法和技术通常是根据本领域熟知的常规方法并且如各种一般和更具体的参考文献所述而进行。参见例如，sambrook等人,molecularcloning:alaboratorymanual,第2版,coldspringharborlaboratorypress,coldspringharbor,n.y.(1989)；ausubel等人,currentprotocolsinmolecularbiology,greenepublishingassociates(1992,以及2002的增刊)；harlow和lan,antibodies:alaboratorymanual,coldspringharborlaboratorypress,coldspringharbor,n.y.(1990)；kandel,schwartz,和jessell,编,principlesofneuralscience,第4版,mcgraw-hill/appleton&lange:newyork,n.y.(2000)。除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本领域普通技术人员通常所理解的含义相同的含义。

如本文和所附权利要求书中所用，除非内容另外明确指明，否则单数形式“一个/种(a/an)”和“所述”包括复数指代物。

如本文所用的术语“约”是指近似、大致、约或在……左右。当术语“约”与数值范围结合使用时，它通过扩展列举的数值的上限和下限将所述范围加以修饰。一般来说，术语“约”在本文中用于以高于和低于所述值20％(上下)的变化来修饰数值。

术语“受试者”、“个体”、“宿主”和“患者”在本文中可互换使用来指用如本文教导的一种或多种列举的剂治疗的动物，包括但不限于猿猴、人、鸟类、猫科动物、犬科动物、马科动物、啮齿类动物、牛科动物、猪科动物、绵羊科动物、山羊科动物、哺乳动物农场动物、哺乳动物运动动物和哺乳动物宠物。本发明的合适受试者可以是疑似患有、已经被诊断为患有可通过施用一种或多种列举的剂改善、治疗或预防的疾病或处于发展所述疾病的风险中的任何动物，优选人。

如本文所用的术语“施用”剂是指使用本领域技术人员已知的用于施用剂或药物组合物的各种方法或递送系统中的任一种将所述剂提供给受试者。

如本文所用的术语“共同施用(co-administration)”或“共同施用(co-administering)”是指在施用另一种活性剂之前、同时或之后施用活性剂，以使得任一种剂的生物学作用重叠。如本文所教导的剂的组合可协同作用以治疗或预防本文所述的各种疾病、病症或病状。使用这种方法，可能能够用较低剂量的每种剂实现治疗功效，从而降低不良副作用的可能性。

如本文所用的术语“癌症”或“肿瘤”意图包括患者的任何肿瘤生长，包括初始肿瘤和任何转移。癌症可具有液体或实体肿瘤类型。液体肿瘤包括血液起源的肿瘤(血液癌症)，包括例如骨髓瘤(例如，多发性骨髓瘤)、白血病(例如，瓦尔登斯特伦综合征(waldenstrom’ssyndrome)、慢性淋巴细胞性白血病、其他白血病)和淋巴瘤(例如，b细胞淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤)。实体肿瘤可起源于器官，并且包括癌症，如肺癌、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、结肠癌、肾癌和肝癌。在具体实施方案中，癌症涉及过表达c-myc的癌症。

如本文所用的术语“癌性细胞(cancerouscell)”或“癌细胞(cancercell)”是指显示异常细胞生长(如增加的细胞生长)的细胞。癌性细胞可以是增生性细胞、显示缺乏体外生长的接触抑制的细胞、不能在体内转移的肿瘤细胞或者能够在体内转移的转移性细胞。癌细胞包括但不限于癌，如骨髓瘤、白血病(例如，急性固髓性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、粒细胞性白血病、单核细胞性白血病、淋巴细胞性白血病)和淋巴瘤(例如，滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫性大b细胞淋巴瘤、恶性淋巴瘤、浆细胞瘤、网状细胞肉瘤或霍奇金病)。

术语“癌性b细胞”和“b细胞癌的细胞”在本文中可互换使用来指癌性的b细胞。

术语“血液癌症”或“血液恶性肿瘤”可互换使用并且涉及源自两种主要血细胞谱系中的任一种的恶性肿瘤：骨髓和淋巴细胞系。骨髓细胞系通常产生粒细胞、红细胞、血小板、巨噬细胞以及肥大细胞；淋巴细胞系产生b细胞、t细胞、nk细胞以及浆细胞。淋巴瘤、淋巴细胞性白血病和骨髓瘤是来自淋巴系，而急性和慢性骨髓性白血病、骨髓增生异常综合征和骨髓增生性疾病是骨髓来源的。

如本文所用，术语“列举的疾病”是指本文中描述为可使用本发明的实施方案治疗的任何癌症或其他疾病；更具体地，它包括骨髓瘤(例如多发性骨髓瘤)、白血病(例如，急性骨髓性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、粒细胞性白血病、单核细胞性白血病、淋巴细胞性白血病)和淋巴瘤(例如，滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫性大b细胞淋巴瘤、恶性淋巴瘤、浆细胞瘤、网状细胞肉瘤或霍奇金病)。

如本文所用，术语“治疗(treating)”或“治疗(treatmentof)”是指向受试者提供任何类型的医学管理。治疗包括但不限于出于如治愈、逆转、减轻疾病、病症或病状或者疾病、病症或病状的一种或多种症状或表现，减轻疾病、病症或病状或者疾病、病症或病状的一种或多种症状或表现的严重程度，抑制疾病、病症或病状或者疾病、病症或病状的一种或多种症状或表现的进展，或者降低疾病、病症或病状或者疾病、病症或病状的一种或多种症状或表现的可能性的目的，使用任何已知方法向受试者施用包含一种或多种活性剂的组合物。

“治疗有效量”是指当以适当的给药方案施用时足以减轻或改善所治疗病症(例如，癌症)的严重性、持续时间或进展、预防所治疗病症的进展、引起所治疗病症的消退或者增强或提高另一种疗法的一种或多种预防性或治疗性作用的量。完全的治疗性作用并不一定通过施用一次剂量而出现，而可能仅在施用一系列剂量之后才出现。因此，可每天一次或多次施用连续数天来施用治疗有效量。

如本文所用的术语“磷酸肌醇3-激酶(pi3k)抑制剂”包括阻断或降低pi3k的表达或活性的剂。pi3k抑制剂的实例提供在表1中。用于在本发明的实施方案中使用的pi3k抑制剂还在美国专利号8,642,607；8,912,331；和9,018,375中进行了描述。在具体实施方案中，pi3k抑制剂抑制pi3kδ。

如本文所用的术语“蛋白酶体”是指真核生物内的蛋白质复合物，所述蛋白质复合物位于细胞核和细胞质中并且其功能是通过蛋白水解降解不需要的或受损的蛋白质。蛋白酶体是丰富的多酶复合物，其为细胞内蛋白质的降解提供主要途径并且有助于维持蛋白质稳态以及错误折叠的蛋白质和/或未折叠的蛋白质和细胞毒性蛋白质的清除。泛素-蛋白酶体途径(ubp)调节细胞内蛋白质降解。具体地，26s蛋白酶体是降解错误折叠的蛋白质或冗余蛋白质的多酶蛋白酶；相反，阻断蛋白酶体降解途径导致不想要的蛋白质累积和细胞死亡。因为癌细胞比正常细胞增殖性更高，所以它们的蛋白质翻译和降解速率也更高。因此，癌细胞比正常细胞更依赖于蛋白酶体来清除异常蛋白质或突变蛋白质。

如本文所用的术语“蛋白酶体抑制剂”涉及阻断或降低蛋白酶体的作用的剂。蛋白酶体抑制剂的实例在下文提供的治疗剂部分中提供。

如本文所用的术语“c-myc”是指由控制细胞增殖的原癌基因c-myc编码的转录因子。c-myc还在调控细胞周期、细胞生长、血管生成、细胞凋亡和肿瘤发生中起作用。c-myc转录因子具有螺旋-环-螺旋亮氨酸拉链类别，并且在转录的调节和起始中起作用。c-myc与靶基因附近的e盒(cacgtg)结合，所述e盒然后被活化。dna结合活性需要与另一种称为max的螺旋-环-螺旋亮氨酸拉链蛋白二聚化。max还可与转录抑制子如mad和mxil相互作用，所述转录抑制子可能下调c-myc靶基因的表达。c-myc在活化时可在多种组织(最显著的是造血组织)中诱导恶性肿瘤(leder等人,222science765,1983)。由于突变、染色体重排、表达增加或基因扩增，myc的活性可在肿瘤中增加。c-myc的表达升高或失调已经在广泛人癌症中检测到并且通常与侵袭性、低分化肿瘤相关。此类癌症包括结肠癌、乳腺癌、宫颈癌、小细胞肺癌、骨肉瘤、成胶质细胞瘤、黑色素瘤和骨髓性白血病。

如本文所用的术语“n-myc”是指为由mycn基因编码的蛋白质的n-myc原癌基因蛋白质。术语n-myc、mycn或nmyc可在本文中互换使用。所述基因是myc转录因子家族的成员。所表达的蛋白质含有碱性螺旋-环-螺旋结构域，并且必须与另一个碱性螺旋-环-螺旋结构域二聚化以结合dna。与c-myc一样，mycn蛋白与max相互作用。mycn基因的扩增主要与各种肿瘤(最显著的是成神经细胞瘤)相关。

如本文所用的术语“ck-1抑制剂”是指阻断或降低ck-1的表达或活性的剂。ck-1抑制剂的实例提供在表3中。除非另有说明，否则双重pi3k/ck-1抑制剂是ck-1抑制剂的亚类，并且因此涵盖于术语ck-1抑制剂中。

如本文所用的术语“ck-1减少有效量”是指施用于受试者的ck-1抑制剂的使受试者中ck-1的活性降低其正常活性的至少30％、40％、50％或60％的量。

如本文所用的术语“过表达c-myc的癌症”涉及与正常健康细胞相比，癌细胞过表达c-myc的任何癌症。c-myc的过表达包括与健康正常细胞相比，c-myc的rna转录物或蛋白质水平升高。过表达c-myc的癌症包括血液癌症，如骨髓瘤(例如多发性骨髓瘤)、白血病(例如，急性骨髓性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、粒细胞性白血病、单核细胞性白血病、淋巴细胞性白血病)、淋巴瘤(例如，滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫性大b细胞淋巴瘤、恶性淋巴瘤、浆细胞瘤、网状细胞肉瘤或霍奇金病)，以及肺、乳腺、前列腺、卵巢、结肠、肾脏和肝脏的实体肿瘤。

如本文所用的术语“c-myc减少量”是指向受试者施用的列举的剂的降低受试者的细胞中c-myc的水平的量。

如本文所用的术语“akt抑制剂”是指阻断或降低akt的表达或活性的剂。akt抑制剂实例的非限制性列表提供在表1中。

如本文所用的术语“mtor抑制剂”是指阻断或降低mtor的表达或活性的剂。mtor抑制剂实例的非限制性列表提供在表1中。

术语“pi3k-akt-mtor信号传导途径抑制剂”是指pi3k抑制剂、双重pi3k/ck-1抑制剂、akt抑制剂或mtor抑制剂中的任一种。这些抑制剂的实例的非限制性列表提供在表1中。

如本文所用的术语“双重pi3k/ck-1抑制剂”包括降低pi3k和至少一种ck-1同种型两者的生物活性或表达的剂。通常，双重pi3k/ck-1抑制剂降低pi3kδ以及ck-1α、δ和/或ε的活性。已显示pi3k与ck1ε的双重抑制具有与蛋白酶体抑制剂施用相结合的杀死癌细胞的强协同效应。

术语“辅助c-myc抑制剂”是指pi3k-akt-mtor信号传导途径抑制剂、蛋白酶体抑制剂或ck-1抑制剂中的任一种。

如本文所用的术语“列举的治疗剂”或“列举的剂”是指c-myc减少剂、辅助c-myc抑制剂或辅助癌症治疗剂中的任一种。列举的治疗剂可包括本文指定的任何剂的类似物、衍生物或药学上可接受的盐。

如本文所用，“辅助癌症治疗剂”涉及相对于正常细胞对癌细胞具有选择性细胞毒性或细胞生长抑制作用的剂。辅助癌症治疗剂可与ck-1抑制剂、双重pi3k/ck-1抑制剂或pi3k-akt-mtor信号传导途径抑制剂与ck-1抑制剂的组合、任选地与蛋白酶体抑制剂一起共同施用。辅助癌症治疗剂的实例的非限制性列表提供在表2中。

如本文所用，术语“辅助癌症治疗方案”是指诸如手术、化学疗法、放射疗法、热疗法和激光疗法的疗法，并且当与施用ck-1抑制剂、双重pi3k/ck-1抑制剂和/或pi3k-akt-mtor抑制剂与ck-1抑制剂的组合以及前述中的任一种(任选地包括蛋白酶体抑制剂)结合施用时可提供有益作用。此类有益作用包括减小肿瘤大小、减缓肿瘤生长速率、抑制转移或以其他方式改善整体临床状况而不必根除癌症。靶向癌细胞的细胞生长抑制剂和细胞毒性剂被特别地考虑用于组合疗法。同样地，靶向血管生成或淋巴管生成的剂被特别地考虑用于组合疗法。

3.概述

c-myc是一种主转录因子并且是在大量人癌症之中最常改变的基因之一[1]。在达30％的弥漫性大b细胞淋巴瘤(dlbcl)(最常见类型的侵袭性淋巴瘤)病例中观察到c-myc的过表达[2]。虽然dlbcl可在60％-70％的患者中治愈[3]，但是极少数dlbcl患者仍然死于淋巴瘤。dlbcl可通过基因表达谱分析(gep)研究分为生发中心b细胞样(gcb)亚型和活化b细胞样(abc)亚型。虽然abc亚型与gcb亚型相比具有较差预后[4]，但是有证据表明c-myc过表达是两种亚型中的独立风险因素。

c-myc活化的最常见机制是在淋巴成熟期间易位至免疫球蛋白(ig)或t细胞受体基因座中的任一者。例如，在伯基特氏淋巴瘤中，8号染色体上的c-myc基因座最常易位至14号染色体上的ig重链基因座，而且易位至2号和22号染色体上的λ或κ轻链ig基因(magrath,于“epstein-barrvirusandassociateddiseases,”m.nijhoffpublishing:631,1986中)。在一些情况下，c-myc转录区在非编码外显子1区域中被改变；在此类情况下，转录起始于c-myc基因座的第一内含子中存在的隐藏性启动子。

savage[5]和barrans[6]的早期研究报道，9％至14％新诊断的dlbcl患者具有c-myc基因重排。在用方案r-chop(利妥昔单抗、环磷酰胺、羟基柔红霉素(阿霉素)、oncovin(长春新碱)和泼尼松)治疗的患者中，c-myc基因重排与仅为无c-myc易位的患者的一半的较差总体存活相关。随后johnson[7]、green[8]和hu[9]独立观察到新诊断的dlbcl患者的大样品集中相似频率的c-myc重排(10％-15％)和显著更高频率(30％)的c-myc蛋白表达。此外，这些后来的研究表明，仅在另一种致癌基因bcl2也过表达时，才存在与失调的c-myc相关的较差存活率。共表达c-myc和bcl-2蛋白的dlbcl(即双阳性(dp)-dlbcl)相较于gcb亚型显著富含abc亚型，并且似乎是abc亚型的相对较差存活率的主要原因。“二次打击(doublehit)”淋巴瘤(dhl)代表所有dlbcl的5％[10]，其特征在于涉及c-myc和bcl2两者的染色体重排。dlbcl表现出甚至比dp-dlbcl更差的预后[11]，并且令人感兴趣的是，在大多数情况下证明与gcb亚型一致的免疫组织化学染色[12]。

c-myc蛋白具有不到30分钟的短半衰期[13，并且需要在c-myc驱动的癌症中不断产生。c-myc的5'非翻译区(utr)的复杂二级结构使其翻译高度依赖于真核起始因子4f(eif4f)[14，15]。eif4f作为由eif4e、eif4a和eif4g组成的复合物存在。eif4e是eif4f的限速因子，因为eif4e可被4ebp1螯合[16]。哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mtor)引起4ebp1的磷酸化依赖性失活，从而导致eif4e从4ebp1释放和eif4f复合物的组装。mtor通过pi3k-akt途径活化。此外，泛素-蛋白酶体系统也关键性地参与mtor的活化[17-19]。相反，活化的mtor可通过编码蛋白酶体亚基的基因表达的整体增加来提高完整和活性蛋白酶体的水平[20]。

c-myc本身可充当mtor的上游刺激物[21]，并且是eif4f亚基转录所必需的[14]。已经观察到mtor充当协调复杂的上游信号以刺激c-myc的eif4f依赖性翻译的联结(nexus)。

多年来，c-myc一直是“无成药性(undruggable)”致癌基因的典型实例。对布罗莫结构域(bromodomain)介导染色质上的蛋白质-蛋白质相互作用中的作用的了解增加已经在下调转录活化因子中产生了新的机会[30–36]。

一些brd4抑制剂已进入小型i期临床研究，但尚无安全性和毒性数据。pelletier小组的研究工作发现了eif4f-myc前馈环路，其中eif4f刺激c-myc的翻译，并且c-myc增强eif4f亚基的转录[14]。本发明人已经认识到eif4f和c-myc的相互依赖性产生了抑制癌蛋白的另一机会。最近，已经在细胞系和动物模型中鉴别了许多小分子抑制剂，所述小分子抑制剂抑制eif4f亚基和辅因子的活性或相互作用，从而导致c-myc的下调、癌细胞的直接杀死、以及癌细胞对化学治疗剂的敏感性增强[14，15，37–42]。这些eif4f抑制剂均未进入临床开发。

4.结果的总结

以下是本申请的实施例中描述的实验的结果总结。

·cux-03166是作为tgr-1202pi3kkδ抑制剂的类似物开发的，并且与tgr-1202具有结构相似性；

·cux-03166降低了淋巴瘤细胞(淋巴瘤细胞系ly10)的活力，并且在24小时后在50μm下显示0％活力，并且这种活力降低显著大于tgr-1202(65％活力)和cal-101(80％活力)；

·cux-03166降低淋巴瘤细胞(淋巴瘤细胞系ly7)的活力：在15um浓度下，细胞的活力在24小时降低至40％，在48小时降低至10％，并且在72小时降低至约0％；并且在25um浓度下，活力在24小时降低至0％；并且

·与tgr-1202在ly7细胞中相比，cux-03166在减少c-myc方面显示出高50倍的效力。

·cux-0404a降低了淋巴瘤细胞(淋巴瘤细胞系ly10)的活力，并且分别在25μm和20μm下在24小时和48小时后显示0％活力；

·cux-0404a降低了淋巴瘤细胞(套细胞淋巴瘤)的活力，并且在24小时后在25μm下显示20％活力，并且这种活力降低显著大于tgr-1202(60％活力)；

·cux-0404a在ly7细胞中在20μm下显著减少c-myc。

·cux-0404a抑制ck1ε，但在抑制ck1ε方面的效力低于tgr-1202。

5.实施方案的详述

治疗剂

c-myc减少剂

在用于治疗过表达c-myc的癌症或血液癌症的治疗方法中使用的c-myc减少剂包括：

其中

r是h或基团a-g中的任一者：

并且其中

表示单键或双键；

r1是ch、取代的c或n；

r2

在所述式i化合物中是ch、取代的c或n；

在所述式ii化合物中是o、ch2、取代的c、nh或取代的n；

r3

在所述式i化合物中是ch、取代的c或n；

在所述式ii化合物中

当表示单键时，是ch、取代的c或n；或者

当表示双键时，是c；

每个r4独立地是取代的烷基、未取代的烷基、取代的烯基、未取代的烯基、取代的炔基、未取代的炔基或卤素；

每个r5独立地是取代的烷基、未取代的烷基、取代的烯基、未取代的烯基、取代的炔基、未取代的炔基或卤素；

r6是取代的c2-10烷基或未取代的c2-10烷基；

r7是h或选自基团j、k和h中的任一者的基团；

并且

每个r8独立地是取代的烷基、未取代的烷基、取代的o-烷基、未取代的o-烷基或卤素；

n

对于r4并且当r1不是n时，是0、1、2、3或4；

对于r4并且当r1是n时，是0、1、2或3；

对于r5，是0、1、2、3、4或5；

对于r8，是0、1、2、3、4或5；

其限制条件是：

-当r是基团g时，r7不是h；

-排除以下化合物：

c-myc减少剂包括上述式i和ii的化合物以及其类似物或衍生物或其药学上可接受的盐。

在具体实施方案中，从式i和ii中排除以下化合物：

·式i化合物，其中同时r是基团a，r1是ch，r3是n并且r7是j；

·式ii化合物，其中同时r是基团a，r1是ch，r2是o，r3是c，表示双键，并且r7是j。

在其他具体实施方案中，以下中的一者或多者适用于式i和ii：

·r6是取代的c3-10烷基或未取代的c3-10烷基。

·r6是取代的或未取代的丙基或者取代的或未取代的丁基。

·r6是取代的或未取代的乙基。

·r1是n。

·r2不是o。

·r3不是n。

·r4是卤素，并且对于r4，n是1或2。

·r4是f，并且对于r4，n是1或2。

·r4是f，对于r4，n是1，并且r4位于它所连接的喹唑啉-4-酮环的位置5处。

·对于r5，n是0。

·r6是me。

·r不是基团a。

·r是基团a。

·r7是j。

·r7不是j。

·对于r8，n是2，一个r8是异丙基或o-异丙基，并且另一个r8是卤素，优选f。

在其他实施方案中，r7是以下中的一者：

在具体实施方案中，c-myc减少剂是根据下式iii的化合物，或其类似物或衍生物，或其药学上可接受的盐：

式iii

其中r6是取代的c2-10烷基或未取代的c2-10烷基。

在其他具体实施方案中，以下适用于式iii：

·r6是取代的c3-10烷基或未取代的c3-10烷基；

·r6是取代的或未取代的丙基或者取代的或未取代的丁基；

·r6是取代的或未取代的乙基；或者

·r6是未取代的乙基。

在具体实施方案中，c-myc减少剂是cux-03166。cuc-03166可根据以下合成方案来制备：

根据式i、ii和iii的化合物可通过采用和/或改编pct公布号wo2015001491、wo2008/127226、wo2009/088986、wo2011/055215和wo2012/151525中所描述的合成方法来制备，所述公布以引用的方式并入本文。本领域技术人员将能够在通用常识中修改这些参考文献的制备方案以产生此类化合物。

c-myc减少剂的其他实施方案包括如下的剂：

式i或式ii：

其中

r是h或基团a-g中的任一者：

并且其中

表示单键或双键；

r1、r2和r3是n；

r4各自独立地是取代的烷基、未取代的烷基、取代的烯基、未取代的烯基、取代的炔基、未取代的炔基、氨基烷基、烷基二烷基或卤素；

r5各自独立地是取代的烷基、未取代的烷基、取代的烯基、未取代的烯基、取代的炔基、未取代的炔基或卤素；

r6是取代的c1-10烷基或未取代的c1-10烷基；

r7是h或选自基团j、k和h中的任一者的基团

；

并且

r8各自独立地是取代的烷基、未取代的烷基、取代的o-烷基、未取代的o-烷基或卤素；

对于r4并且当r1不是n时，n是0、1、2、3或4；

对于r4并且当r1是n时，n是0、1、2或3；

对于r5，n是0、1、2、3、4或5；并且

对于r8，n是0、1、2、3、4或5。

在具体实施方案中，当r1、r2和r3为n时，以下中的一者或多者适用于式i和ii：

-r6是甲基。

-对于r4，n是2。

-r4是溴并且是–n(ch3)2。

c-myc减少剂的另一个实施方案涉及以下：

一种根据式i或式ii的化合物：

其中

r是h或基团a-g中的任一者：

并且其中

表示单键或双键；

r1是ch、取代的c或n；

r2

在所述式i化合物中是ch、取代的c或n；

在所述式ii化合物中是o、ch2、取代的c、nh或取代的n；

r3

在所述式i化合物中是ch、取代的c或n；

在所述式ii化合物中

当表示单键时，是ch、取代的c或n；或者

当表示双键时，是c；

r4各自独立地是氨基烷基或氨基二烷基，并且任选地是卤素；

r5各自独立地是取代的烷基、未取代的烷基、取代的烯基、未取代的烯基、取代的炔基、未取代的炔基或卤素；

r6是取代的c1-10烷基或未取代的c1-10烷基；

r7是h或选自基团j、k和h中的任一者的基团：

；

并且

r8各自独立地是取代的烷基、未取代的烷基、取代的o-烷基、未取代的o-烷基或卤素；

对于r4并且当r1不是n时，n是0、1、2、3或4；

对于r4并且当r1是n时，n是0、1、2或3；

对于r5，n是0、1、2、3、4或5；并且

对于r8，n是0、1、2、3、4或5。

在具体实施方案中，c-myc减少剂是

cux-0404a的合成方案

将2-氨基-4-氯烟酸(50mg)和苯胺(0.026ml)溶解于dmf(1ml)中。向所述溶液中添加三乙胺(0.12ml)和hatu(154mg)，并将反应混合物在室温下搅拌4小时。将混合物干燥并通过柱纯化两次(第1柱：10％于dcm中的甲醇；第2柱：乙酸乙酯)，以产生4-(3h-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基氧基)-2-氨基-n-苯基烟酰胺(70mg，70％)。

将300mg的上述产物溶解于dmf(3ml)中。添加二甲胺(0.6g)，并且将所得混合物在室温下搅拌过夜且在真空中干燥。粗产物2-氨基-4-(二甲基氨基)-n-苯基烟酰胺无需纯化即用于下一步骤。

将丙酸(1.5ml)和丙酸酐(1.5ml)添加至上述粗产物中，并将混合物在120□c下搅拌4小时。在真空下除去溶剂，并将粗产物通过柱色谱法用8％于dcm中的甲醇洗脱进行纯化，以产生产物5-(二甲基氨基)-2-乙基-3-苯基吡啶并[2,3-d]嘧啶-4(3h)-酮(178mg，70％)。

将168mg的上述产物溶解于乙酸(1.5ml)中。添加乙酸钠(60mg)和溴(101mg)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。在真空下除去溶剂，并将粗产物溶解于dcm中，并与固体碳酸氢钠一起搅拌。将反应混合物通过柱色谱法用10％于dcm中的etoac洗脱进行纯化，以提供二溴化合物(108mg)。

将3-(3-氟-4-异丙氧基苯基)-1h-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-胺(7.7mg)溶解于乙醇(0.5ml)中。添加甲醇钠(0.052ml，0.5m于甲醇中)，并将反应混合物在室温下搅拌30分钟且在真空中干燥以提供粗钠盐。将上述二溴化合物(12mg)溶解于dmf(0.5ml)中并且添加至如此获得的钠盐中，并将反应混合物搅拌过夜。将反应混合物干燥并通过ptlc用10％于dcm中的甲醇进行纯化以产生cux-0404a(10.4mg，59％)。

辅助c-myc减少剂

除了上述c-myc减少剂外，还可与c-myc减少剂共同施用其他可减少c-myc(辅助c-myc抑制剂)并且适用于治疗过表达c-myc的癌症或血液癌症的剂。辅助c-myc抑制剂包括pi3k-akt-mtor信号传导途径抑制剂、蛋白酶体抑制剂或ck-1抑制剂中的任一种，包括其类似物或衍生物或其药学上可接受的盐。在选择的实施方案中，辅助c-myc抑制剂包括pi3k抑制剂，优选具有双重pi3k和ck-1抑制功能的那些；蛋白酶体抑制剂和ck-1的各种同种型的抑制剂，优选ck-1ε，其中治疗血液癌症和骨髓瘤；包括其类似物或衍生物或其药学上可接受的盐。表1和表3分别提供考虑用作抗癌剂的pi3k抑制剂和ck-1抑制剂的具体实例。

抑制剂的组合可用于共同施用治疗或用于制剂制备中，所述制剂包含例如至少一种c-myc减少剂和至少一种辅助c-myc抑制剂的组合以及任选的至少一种辅助癌症治疗剂。在具体实施方案中，辅助c-myc抑制剂包括但不限于pi3k-akt-mtor信号传导途径抑制剂、蛋白酶体抑制剂或ck-1抑制剂，包括其类似物或衍生物或其药学上可接受的盐。pi3k-akt-mtor信号传导途径抑制剂是双重pi3k/ck-1抑制剂。在更具体的实施方案中，单独施用c-myc减少剂或共同施用c-myc减少剂和辅助c-myc抑制剂可以某种方式作为导入c-myc沉默治疗提供以在施用辅助癌症治疗剂之前减少c-myc或引发c-myc的减少。

蛋白酶体抑制剂

根据本文的教义有用的蛋白酶体抑制剂的实例包括但不限于以下：

硼酸酯或硼酸，如硼替佐米(最初代码为ps-341，并且由millenniumpharmaceuticals作为万珂(velcade)销售)是化学实体[(1r)-3-甲基-1-({(2s)-3-苯基-2-[(吡嗪-2-基羰基)氨基]丙酰基}氨基)丁基]硼酸)的批准名称；或伊沙佐米(mln2238)；(r)-1-(2-(2,5-二氯苯甲酰胺基)乙酰胺基)-3-甲基丁基硼酸；

双硫仑[二硫烷二基双(硫代羰基次氮基)]四乙烷]；

表没食子儿茶素3-没食子酸酯(egcg)；

盐孢菌酰胺a:4r,5s)-4-(2-氯乙基)-1-((1s)-环己-2-烯基(羟基)甲基)-5-甲基-6-氧杂-2-氮杂双环[3.2.0]庚烷-3-7二酮；

卡非佐米(pr-171)；(s)-4-n-甲基-n-((s)-1-(((s)-4-甲基-1-((r)-2-甲基环氧乙烷-2-基)-1-氧代戊-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-2-((s)-2-(2-吗啉代乙酰胺基)-4-苯基丁酰胺基)戊酰胺；

奥普佐米；(onx-0912)；o-甲基-n-[(2-甲基-5-噻唑基)羰基]-l-丝氨酰基-o-甲基-n-[(1s)-2-[(2r)-2-甲基-2-环氧乙烷基]-2-氧代-1-(苯基甲基)乙基]-l-丝氨酰胺；

cep-18770：[(1r)-1-[[(2s,3r)-3-羟基-2-[[(6-苯基吡啶-2-基)羰基]氨基]-1-氧代丁基]氨基]-3-甲基丁基]硼酸；

mln9708：4-(羧甲基)-2-((r)-1-(2-(2,5-二氯苯甲酰胺基)乙酰胺基)-3-甲基丁基)-6-氧代-1,3,2-二氧杂硼杂环己烷-4-甲酸；

yu101：(αs)-α-(乙酰胺基)苯丁酰基-l-亮氨酰基-n-[(1s)-3-甲基-1-[[(2r)-2-甲基-2-环氧乙烷基]羰基]丁基]-l-苯基丙氨酰胺；

marizomib：(npi-0052)；(4r,5s)-4-(2-氯乙基)-1-((1s)-环己-2-烯基-(羟基)甲基)-5-甲基-6-氧杂-2-氮杂双环[3.2.0]庚烷-3,7-二酮；

环氧酶素：(2s,3s)-n-((2s,3r)-3-羟基-1-(((s)-4-甲基-1-((r)-2-甲基环氧乙烷-2-基)-1-氧代戊-2-基)氨基)-1-氧代丁-2-基)-3-甲基-2-((2s,3s)-3-甲基-2-(n-甲基乙酰胺基)戊酰胺基)戊酰胺；

mg132：n-(苄氧基羰基)亮氨酰基亮氨酰基亮氨醛z-leu-leu-leu-al；以及

乳胞素：2-(乙酰胺基)-3-[({3-羟基-2-[1-羟基-2-甲基丙基]-4-甲基-5-氧代吡咯烷-2-基}羰基)硫烷基]丙酸。

还参见，crawfordlj,walkerb,irvineae.proteasomeinhibitorsincancertherapy.journalofcellcommunicationandsignaling.2011；5(2):101-110.doi:10.1007/s12079-011-0121-7。

pi3k抑制剂

适用于施用以用于如本文所教导的癌症或自身免疫疗法的pi3k抑制剂的实例在表1中列出。在具体实施方案中，用作治疗剂的pi3k抑制剂是tgr1202。tgr-1202(先前称为rp5264)是磷脂酰肌醇3-激酶(pi3k)的δ同种型(称为pi3kδ)的高选择性抑制剂。它具有良好耐受性并且与其他选择性较低的pi3k抑制剂相比具有大大降低的肝脏毒性，并炔具有纳摩尔效力。

磷脂酰肌醇3-激酶(pi3k)抑制剂是一类抑制磷酸肌醇3-激酶的四种同种型(α、β、γ或δ)中的一种或多种的药物。这些酶是pi3k-akt-mtor信号传导途径的一部分，其调控细胞周期并且对癌细胞的存活是重要的。pi3k在一些血液癌症如慢性淋巴细胞性白血病(cll)中具有组成型活性。这种组成型活性允许细胞逃避细胞凋亡。δ同种型pi3kδ主要在血液起源的细胞中表达，并且主要局限于淋巴细胞。

ttgr-1202通过干扰pi3k-akt-mtor途径(抑制akt磷酸化)起作用以使癌细胞能够经历细胞凋亡。tgr-1202靶向pi3kδ。已显示它在体外对cll有效，并且正在针对其他血液癌症(例如b细胞淋巴瘤)的研究中进行测试。

ttgr-1202的化学结构在下文给出。

根据以下式iv的通用结构的化合物或其互变异构体、其n-氧化物、其药学上可接受的酯、其前药或其药学上可接受的盐也是可根据本文的实施方案使用的pi3kδ抑制剂：

其中r的每次出现独立地选自氢、卤素、-or^a、cn、取代的或未取代的c1-6烷基、取代的或未取代的c2-6烯基、取代的或未取代的c2-6炔基、取代的或未取代的c3-8环烷基以及取代的或未取代的杂环基团；

r¹和r²可相同或不同并且独立地选自氢、卤素和取代的或未取代的ci-6烷基，或者与共同原子直接键合的r¹和r²两者可连接形成氧代基团(＝0)或取代的或未取代的饱和的或不饱和的3-10元环(包含r¹和r²所键合的碳原子)，所述环可任选地包含一个或多个杂原子，所述杂原子可相同或不同并且是选自o、nr^a和s；

cy¹是选自取代的或未取代的环烷基、取代的或未取代的杂环基团、取代的或未取代的芳基和取代的或未取代的杂芳基的单环基团；

cy²是选自取代的或未取代杂环基团、取代的或未取代的芳基和取代的或未取代的杂芳基；

l1不存在或选自-(cr^ar^b)q-、-0-、-s(＝0)q-、-nr^a-或-c(＝y)-。r^a和r^b的每次出现可相同或不同并且独立地选自氢、卤素、羟基、氰基、取代的或未取代的(c1-6)烷基、-nr^cr^d(其中r^c和r^d独立地是氢、卤素、羟基、氰基、取代的或未取代的(c1-6)烷基和(c1-6)烷氧基)和-or^c(其中r^c是取代的或未取代的(c1-6)烷基)，或者当r^a和r^b与共同原子直接键合时，它们可连接形成氧代基团(＝0)或形成取代的或未取代的饱和的或不饱和3-10元环(包含r^a和r^b所直接键合的共同原子)，所述环可任选地包含一个或多个杂原子，所述杂原子可相同或不同并且是选自o、nr^d(其中r^d是氢或取代的或未取代的(c1-6)烷基)或s；

y是选自o、s和nr^a；n是1至4的整数；并且q是0、1或2；预期具有相同的活性并且被认为是本发明的一部分。

某些优选的化合物是根据式v的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中r的每次出现独立地选自氢、卤素、-or^a、cn、取代的或未取代的c1-6烷基、取代的或未取代的c2-6烯基、取代的或未取代的c2-6炔基、取代的或未取代的c3-8环烷基以及取代的或未取代的杂环基团；

r¹和r²可相同或不同并且独立地选自氢、卤素和取代的或未取代的c1-6烷基，或者与共同原子直接键合的r¹和r²两者可连接形成氧代基团(＝0)或取代的或未取代的饱和的或不饱和的3-10元环(包含r¹和r²所键合的碳原子)，所述环可任选地包含一个或多个杂原子，所述杂原子可相同或不同并且是选自o、nr^a和s；x的每次出现独立地选自cr³或n；并且r³的每次出现独立地选自氢、羟基、卤素、羧基、氰基、硝基、取代的或未取代的烷基、取代的或未取代的烷氧基、取代的或未取代的烯基、取代的或未取代的炔基、取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的芳基烷基、取代的或未取代的环烷基、取代的或未取代的环烷基烷基、取代的或未取代的环烯基烷基、取代的或未取代的环烯基、取代的或未取代的杂芳基、取代的或未取代的杂芳基烷基、取代的或未取代的杂环、取代的或未取代的杂环基烷基环、取代的或未取代的胍、-coor^x、-c(0)r^x、-c(s)r^x、-c(0)nr^xr^y、-c(0)onr^xr^y、-nr^yr^z、-nr^xconr^yr^z、-n(r^x)sor^y、-n(r^x)s02r^y、-(＝n-n(r^x)r^y)、-nr^xc(0)or^y、-nr^xr^y、-nr^xc(0)r^y-、-nr^xc(s)r^y-nr^xc(s)nr^yr^z、-sonr^xr^y-、-s02nr^xr^y-、-or^x、-or^xc(0)nr^yr^z、-or^xc(0)or^y-、-oc(0)r^x、-oc(0)nr^xr^y、-r^xnr^yc(0)r^z、-r^xor^y、-r^xc(0)or^y、-r^xc(0)nr^yr^z、-r^xc(0)r^x、-r^xoc(0)r^y、-sr^x、-sor^x、-s02r^x以及-on02，其中以上基团中的每个中的r^x、r^y和r^z可以是氢、取代的或未取代的烷基、取代的或未取代的烷氧基、取代的或未取代的烯基、取代的或未取代的炔基、取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的芳基烷基、取代的或未取代的环烷基、取代的或未取代的环烷基烷基、取代的或未取代的环烯基、取代的或未取代的杂芳基、取代的或未取代的杂芳基烷基、取代的或未取代的杂环、取代的或未取代的杂环基烷基环、或取代的或未取代的氨基，或者r^x、r^y和r^z中的任意两者可连接形成取代的或未取代的饱和的或不饱和的3-10元环，所述环可任选地包含杂原子，所述杂原子可相同或不同并且是选自o、nr^x(例如，r^x可以是氢或取代的或未取代的烷基)或s；r⁵的每次出现是氢、c1-6烷基或卤素；n是0、1、2、3或4；并且p是0、1、2、3、4或5。

在另一个实施方案中，pi3k抑制剂包括根据式iv的那些或其互变异构体、其n-氧化物、其药学上可接受的酯、其前药或其药学上可接受的盐，其中r的每次出现独立地选自氢、卤素、--or^f(其中r^f是取代的或未取代的(c1-6)烷基)、cn、取代的或未取代的c.1-6烷基、取代的或未取代的c2-6烯基、取代的或未取代的c2-6炔基、取代的或未取代的c3-8环烷基以及取代的或未取代的杂环基团；

r¹和r²可相同或不同并且独立地选自氢、卤素和取代的或未取代的c1-6烷基，或者与共同原子直接键合的r¹和r²两者可连接形成取代的或未取代的饱和的或不饱和的3-10元环(包含r¹和r²所键合的碳原子)，所述环可任选地包含一个或多个杂原子，所述杂原子可相同或不同并且是选自o、nr^a和s；

cy¹是选自取代的或未取代的环烷基、取代的或未取代的杂环基团、取代的或未取代的芳基和取代的或未取代的杂芳基的单环基团；

cy²是选自取代的或未取代杂环基团、取代的或未取代的芳基和取代的或未取代的杂芳基；

l¹是选自--s(＝o)q--和--nr^a--；并且r^a的每次出现是选自氢、卤素、羟基、氰基、取代的或未取代的(c1-6)烷基、--nr^cr^d(其中r^c和r^d独立地是氢、卤素、羟基、氰基、取代的或未取代的(c1-6)烷基和(c1-6)烷氧基)以及--or^c(其中r^c是取代的或未取代的(c1-6)烷基)；

n是1至4的整数；并且

q是0、1或2。

ck-1抑制剂

极少(如果有的话)ck-1抑制剂已经在人体中进行了测试。已发现某些目前称为pi3k抑制剂的化合物也具有ck-1抑制活性，即双重pi3k/ck-1抑制剂。因此，鉴于这些pi3k抑制剂化合物具有ck-1抑制作用的发现，它们实际上代表了将适用于人体试验的一类新的ck-1抑制剂。基于x射线晶体结构分析，tgr-1202在结构上与已知的ck-1ε抑制剂pf4800567相关。针对ck1ε的atp结合口袋的计算机对接研究显示，tgr-1202与pf4800567高度一致在结合模式中具有高对接分数。配备有这种信息，与tg1-1202化合物的某些部分具有结构相似性的化合物允许从已知化合物中鉴别ck-1抑制剂，或者设计具有ck-1活性的新化合物。

以上式iv和v的化合物代表了这类新的ck-1抑制剂的实例。此外，wo2015/001491(以引用的方式并入本文)中描述的化合物是属于这类新的ck-1抑制剂的化合物。此外，具有下文定义的r基团的式i或式ii的化合物代表了这类新的ck-1抑制剂的实施方案：

其中

r是h或基团a-g中的任一者：

并且其中

表示单键或双键；

r1是ch、取代的c或n；

r2

在所述式i化合物中是ch、取代的c或n；

在所述式ii化合物中是o、ch2、取代的c、nh或取代的n；

r3

在所述式i化合物中是ch、取代的c或n；

在所述式ii化合物中

当表示单键时，是ch、取代的c或n；或者

当表示双键时，是c；

每个r4独立地是取代的烷基、未取代的烷基、取代的烯基、未取代的烯基、取代的炔基、未取代的炔基或卤素；

每个r5独立地是取代的烷基、未取代的烷基、取代的烯基、未取代的烯基、取代的炔基、未取代的炔基或卤素；

r6是h、me或被卤素取代的me；

r7是h或选自基团j、k和h中的任一者的基团；

并且

每个r8独立地是取代的烷基、未取代的烷基、取代的o-烷基、未取代的o-烷基或卤素；

n

对于r4并且当r1不是n时，是0、1、2、3或4；

对于r4并且当r1是n时，是0、1、2或3；

对于r5，是0、1、2、3、4或5；

对于r8，是0、1、2、3、4或5；

在某些实施方案中，式vi化合物排除其中同时r是基团a，r1是ch，r3是n并且r7是j的那些。

在其他实施方案中，式vii化合物排除其中同时r是基团a，r1是ch，r2是o，r3是c，表示双键，并且r7是j的那些。

在其他某些实施方案中，当r是基团g时，r7不是h。

在其他实施方案中，化合物包括式vi和vii的那些化合物，其限制条件是

-其中同时r是基团a，r1是ch，r3是n并且r7是j的式vi化合物被排除；

-其中同时r是基团a，r1是ch，r2是o，r3是c，表示双键，并且r7是j的式vii化合物被排除；

-当r是基团g时，r7不是h。

在具体实施方案中，以下适用于式i和ii的紧接在前的定义：

r1是n；

r2不是o；

r3不是n；

r4是卤素，并且对于r4，n是1或2；

r4是f，并且对于r4，n是1或2；

r4是f，对于r4，n是1，并且r4位于它所连接的喹唑啉-4-酮环的位置5处；

对于r5，n是0；

r6是me；r不是基团a；

r是基团a；

r7是j；r7不是j；

对于r8，n是2，一个r8是异丙基或o-异丙基，并且另一个r8是卤素，优选f；和/或

r7是以下中的一者：

根据式i和ii的化合物可通过改编pct公布号wo2015001491、wo2008/127226、wo2009/088986、wo2011/055215和wo2012/151525的技术来制备，所述公布以引用的方式并入本文。本领域技术人员将能够修改这些参考文献的制备方案以产生此类化合物。

衍生物

根据某些实施方案，如本文所用，如本文所论述和如附表中列出的c-myc减少剂和辅助c-myc抑制剂的衍生物包括盐、酯、烯醇醚、烯醇酯、缩醛、缩酮、原酸酯、半缩醛、半缩酮、溶剂合物、水合物、代谢物或其前药。本领域技术人员可使用用于这种衍生化的已知方法容易地制备此类衍生物。所产生的化合物可施用于动物或人而无实质毒性作用，并且是药学活性的或是前药。药学上可接受的盐包括但不限于胺盐，如但不限于n,n'-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、氨、二乙醇胺和其他羟烷基胺、乙二胺、n-甲基葡糖胺、普鲁卡因、n-苄基苯乙胺、1-对-氯苄基-2-吡咯烷-1'-基甲基-苯并咪唑、二乙胺和其他烷基胺、哌嗪和三(羟甲基)氨基甲烷；碱金属盐，如但不限于锂、钾和钠、碱土金属盐，如但不限于钡、钙和镁；过渡金属盐，如但不限于锌；和其他金属盐，如但不限于磷酸氢钠和磷酸二钠；并且还包括但不限于无机酸的盐，如但不限于盐酸盐和硫酸盐；以及有机酸的盐，如但不限于乙酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、丁酸盐、戊酸盐和富马酸盐。药学上可接受的酯包括但不限于，酸性基团的烷基、烯基、炔基、烷(烯)(炔)基、芳基、芳烷基和环烷基酯，所述酸性基团包括但不限于羧酸、磷酸、次膦酸、磺酸、亚磺酸和硼酸。药学上可接受的烯醇醚包括但不限于，式c═c(or)的衍生物，其中r是氢、烷基、烯基、炔基、烷(烯)(炔)基、芳基、芳烷基或环烷基。药学上可接受的烯醇酯包括但不限于，式c═c(oc(o)r)的衍生物，其中r是氢、烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基或环烷基。药学上可接受的溶剂合物和水合物是化合物与一个或多个溶剂分子或水分子、或1至约100、或1至约10、或1至约2、3或4个溶剂分子或水分子的复合物。

根据其他实施方案，衍生物可包括但不限于示例性剂上或出自示例性剂的反应性成分的特定取代，其可包括但不限于以下中的一者或多者：氢、羟基、卤素、卤代烷基、硫代羰基、烷氧基、烯氧基、烷基芳氧基、芳氧基、芳基烷氧基、氰基、硝基、亚氨基、烷基氨基、氨基烷基、氨基二烷基、硫代、巯基、硫代烷基、烷硫基、磺酰基、c1-c6直链或支链烷基、c2-c6直链或支链烯基或炔基、芳基、芳烷基、杂芳基、碳环或杂环基团或部分或co2r7，其中r7是氢或c1-c9直链或支链烷基或c2-c9直链或支链烯基或部分。

应理解，本文提供的化合物可含有手性中心。此类手性中心可具有(r)或(s)构型，或者可以是它们的混合物。因此，本文提供的化合物可以是对映异构纯的，或者是立体异构体混合物或非对映异构体混合物。应理解，本文提供的化合物的手性中心可在体内经历差向异构化。因此，本领域技术人员将认识到，对于在体内经历差向异构化的化合物，以化合物的(r)形式施用化合物与以化合物的(s)形式施用化合物是等效的。

如本文所用，烷基是指非支链或支链烃链。烷基可以是未取代的或被一个或多个杂原子取代。

如本文所用，烯基是指包含一个或多个双键的非支链或支链烃链。烯基的双键可以是未缀合的或缀合至另一个不饱和基团。烯基可以是未取代的或被一个或多个杂原子取代。

如本文所用，炔基是指其中包含一个或多个三键的非支链或支链烃链。炔基的三键可以是未缀合的或缀合至另一个不饱和基团。炔基可以是未取代的或被一个或多个杂原子取代。

如本文所用，烷(烯)(炔)基是指包含至少一个双键和至少一个三键的非支链或支链烃基。烷(烯)(炔)基的双键或三键可以是未缀合的或缀合至另一个不饱和基团。烷(烯)(炔)基可以是未取代的或被一个或多个杂原子取代。

本文中的示例性烷基、烯基、炔基和烷(烯)(炔)基包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、异丁基、正丁基、仲丁基、叔丁基、异戊基、新戊基、叔戊基、异己基、烯丙基(丙烯基)和炔丙基(丙炔基)。

如本文所用，“芳基”是指含有6至19个碳原子的芳族单环或多环基团。芳基包括但不限于诸如未取代的或取代的芴基、未取代的或取代的苯基和未取代的或取代的萘基的基团。

如本文所用，“杂芳基”是指在某些实施方案中约5至约15元的单环或多环芳族环系统，其中环系统中的一个或多个、在一个实施方案中1至3个原子是杂原子，即除碳之外的元素，包括但不限于氮、氧或硫。杂芳基可任选地与苯环稠合。杂芳基包括但不限于呋喃基、咪唑基、嘧啶基、四唑基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、噻唑基、异噻唑基、噁唑基、异噁唑基、三唑基、喹啉基或异喹啉基。

如本文所用，“卤代”、“卤素”或“卤化物”是指f、cl、br或i。

如本文所用，碱是指在水或溶剂中接受质子的任何化合物。因此，示例性碱包括但不限于，碱金属氢氧化物和碱金属醇盐(即，mor，其中m是碱金属，如但不限于钾、锂或钠；并且r是氢、烷基、烯基、炔基或烷(烯)(炔)基)，如但不限于氢氧化钾、叔丁醇钾、叔戊醇钾、氢氧化钠、叔丁醇钠、氢氧化锂等)；其他氢氧化物，如但不限于氢氧化镁(mg(oh)2)、氢氧化钙(ca(oh)2)或氢氧化钡(ba(oh)2)；碱金属氢化物(即mh，其中m是如上文所定义)，如但不限于氢化钠、氢化钾或氢化锂；碳酸盐，如但不限于碳酸钾(k2co3)、碳酸钠(na2co3)、碳酸氢钾(khco3)或碳酸氢钠(nahco3)；烷基氢氧化铵、烯基氢氧化铵、炔基氢氧化铵或烷(烯)(炔)基氢氧化铵，如但不限于正四丁基氢氧化铵(tbah)；胺，如氨、二乙胺、2,2,6,6-四甲基哌啶(htmp)、叔胺(如但不限于二甲基乙胺、二异丙基乙胺、三甲胺、三乙胺、三丁胺、n-甲基吗啉、n-甲基吡咯烷、1,8-二氮杂双环[5.4.0]-7-十一碳烯(dbu)、1,5-二氮杂双环[4.3.0]-5-壬烯(dbn)或四亚甲基二胺(tmeda))、芳族胺(如但不限于吡啶、三甲基吡啶、二甲基吡啶、甲基吡啶、喹啉或n,n-二甲基苯胺)；氨基碱金属，如但不限于氨基锂、二甲基氨基锂、二异丙基氨基锂(lda)、四甲基哌啶锂(litmp)或碱金属六甲基二硅氮烷(如但不限于六甲基二硅氮烷钾(khmds)、六甲基二硅氮烷钠(nahmds)或六甲基二硅氮烷锂(lihmds))；烷基锂、烯基锂、炔基锂或烷(烯)(炔)基锂，如但不限于正丁基锂、仲丁基锂、异丙基锂；烷基卤化镁、烯基卤化镁、炔基卤化镁或烷(烯)(炔)基卤化镁，如但不限于甲基溴化镁。

如本文所用，溶剂是指完全或部分溶解固体、液体或气体溶质、从而产生溶液的任何液体，如但不限于己烷、苯、甲苯、乙醚、氯仿、乙酸乙酯、二氯甲烷、四氯化碳、1,4-二噁烷、四氢呋喃、甘醇二甲醚、二甘醇二甲醚、丙酮、乙腈、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、二甲基乙酰胺或n-甲基-2-吡咯烷酮。

如本文所用，脱水剂是指促进由羧酸形成羧酰胺的任何化合物，如但不限于亚硫酰氯、硫酰氯、碳二亚胺、酸酐或混合酸酐、苯酚(如但不限于硝基苯酚、五氟苯酚或苯酚)或式(a)化合物：

其中x和y各自独立地是未取代的或取代的杂芳基(如但不限于咪唑基、苯并咪唑基或苯并三唑基)。脱水剂的实例还包括但不限于苯并三唑-1-基-氧基-三-(二甲基氨基)-鏻六氟磷酸盐(bop)、n,n'-羰基二咪唑(cdi)、3-(二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4(3h)-酮(depbt)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(edc)、2-(7-氮杂-1h-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(hatu)、2-(1h-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(hbtu)、1-羟基苯并三唑(hobt)、苯并三唑-1-基-氧基-三-吡咯烷基-鏻六氟磷酸盐(pybop)、2-(1h-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(tbtu)、o-(3,4-二氢-4-氧代-1,2,3-苯并三嗪-3-基)-n,n,n,n-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(tdbtu)、3-(二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4(3h)-酮(depbt)、二环己基碳二亚胺(dcc)、n,n'-二异丙基碳二亚胺(dic)或1-羟基-7-氮杂苯并三唑(hoat)。

如本文所用，酸是指任何含有氢并在水或溶剂中解离以产生正氢离子的化合物，以及路易斯酸，包括但不限于盐酸、硫酸、磷酸、乙酸、三卤代乙酸(如但不限于三氟乙酸或三氯乙酸)、溴化氢、马来酸、磺酸(如但不限于甲苯磺酸或樟脑磺酸)、丙酸(如但不限于(r)-氯丙酸)、邻苯二甲酸(如但不限于n-[(r)-1-(1-萘基)乙基]邻苯二甲酸)、酒石酸(如但不限于l-酒石酸或二苄基-l-酒石酸)、乳酸、樟脑酸、天冬氨酸或香茅酸。

应理解，反应物、化合物、溶剂、酸、碱、催化剂、剂、反应性基团等可单独、同时、分开和以任何顺序添加。此外，应理解，反应物、化合物、酸、碱、催化剂、剂、反应性基团等可预先溶解在溶液中并作为溶液(包括但不限于水溶液)添加。此外，应理解，反应物、化合物、溶剂、酸、碱、催化剂、剂、反应性基团等可处于任何摩尔比。

应理解，反应物、化合物、溶剂、酸、碱、催化剂、剂、反应性基团等可原位形成。

对映异构体/互变异构体

在适当的情况下，剂还包括所列举的剂的所有对映异构体和互变异构体。技术人员将认识到具有光学性质(一个或多个手性碳原子)或互变异构特征的化合物。可通过本领域中已知的方法来分离/制备相应的对映异构体和/或互变异构体。

立体异构体和几何异构体

所列举的剂可作为立体异构体和/或几何异构体存在—例如它们可具有一个或多个不对称和/或几何中心，并且因此可以两种或更多种立体异构和/或几何形式存在。本文考虑了那些抑制剂的所有单独立体异构体和几何异构体以及其混合物的用途。权利要求书中使用的术语涵盖这些形式，条件是所述形式保留适当的功能活性(尽管不必达到相同的程度)。

所列举的剂还包括示例性剂或其药学上可接受的盐的所有合适的同位素变型。剂或其药学上可接受的盐的同位素变型被定义为其中至少一个原子被具有相同原子序数、但原子质量不同于通常在自然界中发现的原子质量的原子替代的那些。可并入所述剂和其药学上可接受的盐中的同位素实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟以及氯的同位素，如分别为2h、3h、13c、14c、15n、17o、18o、31p、32p、35s、18f以及36cl。所述剂和其药学上可接受的盐的某些同位素变型(例如其中并入放射性同位素如3h或14c的那些)可用于药物和/或底物组织分布研究。氚化(即，3h)和碳-14(即，14c)同位素由于其易于制备和可检测性而是特别优选的。另外，用诸如氘(即2h)的同位素取代可提供由较高代谢稳定性产生的某些治疗性优点，例如体内半衰期增加或剂量需求降低，并且因此在一些情况下可以是优选的。本公开的示例性剂和其药学上可接受的盐的同位素变型通常可使用合适试剂的适当同位素变型通过常规方法来制备。

溶剂合物

所列举的剂还包括示例性剂的溶剂合物形式。权利要求书中使用的术语涵盖这些形式。

多晶型物

所列举的剂还包括它们的各种晶体形式、多晶型和(无水)含水形式。在制药工业中已经公认的是，可通过稍微改变纯化方法和或在此类化合物的合成制备中使用的分离溶剂来分离呈此类形式中的任一种的化学化合物。

前药

本公开的实施方案还包括前药形式的所列举的剂。此类前药通常是其中一个或多个适当的基团已进行修饰、以使得可在施用于人或哺乳动物受试者后逆转所述修饰的化合物。这种逆转通常通过天然存在于这种受试者中的酶进行，但是有可能与这种前药一起施用第二剂以便在体内进行所述逆转。此类修饰的实例包括酯(例如，上述那些中的任一种)，其中可通过酯酶等进行所述逆转。其他此类系统对于本领域技术人员来说将是熟知的。

代谢物

同样落入本发明范围内的是所列举剂的体内代谢产物。“代谢物”是特定化合物或其盐通过在体内的代谢产生的药理学活性产物。此类产物可例如由所施用化合物的氧化、还原、水解、酰胺化、脱酰胺、酯化、脱酯化、酶促裂解等产生。因此，本发明包括示例性剂的代谢物，包括由一种方法产生的化合物，所述方法包括使本发明的化合物与哺乳动物接触持续足以产生其代谢产物的一段时间。

代谢产物例如通过以下方式来鉴别：制备本发明化合物的放射性标记的(例如，¹⁴c或³h)同位素，以可检测的剂量(例如，大于约0.5mg/kg)向动物如大鼠、小鼠、豚鼠、猴或向人肠胃外施用，从而允许代谢发生足够时间(通常为约30秒至30小时)，并且从尿、血液或其他生物样品中分离其转化产物。这些产物易于分离，因为它们是被标记的(其他的则通过使用能够结合代谢物中残存的表位的抗体进行分离)。代谢物结构以常规方式，例如通过ms、lc/ms或nmr分析来确定。一般来说，代谢物的分析以与本领域技术人员熟知的常规药物代谢研究相同的方式进行。代谢物，只要它们没有在体内被另外发现，就可用于本发明化合物的治疗性给药的诊断测定。

干扰分子

pi3k或ck-1的表达可针对本文提供的genbank登录号描述的序列的一部分通过许多方式(包括例如通过反义、mirna、shrna或sirna沉默)进行抑制。在一个实施方案中，pi3k或ck-1或蛋白酶体的抑制剂包含干扰分子，并且其中所述干扰分子包含选自由以下组成的组的成员：硫代磷酸酯吗啉代寡聚物(pmo)、mirna、sirna、甲基化sirna、处理的sirna、shrna、反义rna、dicer-底物27-聚体双链体以及其组合。

sirna分子可根据美国专利公布2006/0110440(以引用的方式并入本文)中提供的技术，针对编码pi3k或ck-1的核苷酸序列的一部分制备并用作治疗性化合物。shrna构建体通常由三种可能的方法中的一种制成；(i)退火的互补寡核苷酸，(ii)基于启动子的pcr或(iii)引物延伸。参见designandcloningstrategiesforconstructingshrnaexpressionvectors,glenj.mcintyre,gregoryc.fanning,bmcbiotechnology2006,6:1(2006年1月5日)。

关于mirna分子的制备的背景信息，参见例如美国专利公布2011/0020816；2007/0099196；2007/0099193；2007/0009915；2006/0130176；2005/0277139；2005/0075492；以及2004/0053411，所述专利公布的公开内容以引用的方式并入本文。还参见美国专利号7,056,704和7,078,196(mirna分子的制备)。合成mirna描述于vatolin等人,2006jmolbiol358,983–6和tsuda等人,2005intjoncol27,1299–306中。例如，关于用于靶向ck-1的干扰分子的其他实例，还参见专利文献wo2011/127202。

所列举的治疗剂的施用

某些实施方案涉及施用至少一种c-myc减少剂或c-myc减少剂与辅助c-myc抑制剂的组合以治疗癌症，如过表达c-myc的癌症(包括血液癌症)，以便将一种或多种剂递送至有需要的受试者。其他实施方案涉及施用至少一种c-myc减少剂与至少一种辅助c-myc抑制剂的组合和任选的至少一种辅助癌症治疗剂。在具体实施方案中，辅助c-myc抑制剂包括但不限于pi3k-akt-mtor信号传导途径抑制剂、蛋白酶体抑制剂或ck-1抑制剂，包括其类似物或衍生物或其药学上可接受的盐。pi3k-akt-mtor信号传导途径抑制剂是双重pi3k/ck-1抑制剂。在更具体的实施方案中，单独施用c-myc减少剂或共同施用c-myc减少剂和辅助c-myc抑制剂可以某种方式作为导入疗法提供以在施用辅助癌症治疗剂之前减少c-myc或引发-myc的减少。

施用方式包括但不限于口服施用、肠胃外施用如静脉内、皮下、肌肉内或腹膜内注射、通过栓剂直肠施用、透皮施用、眼内施用或通过将治疗有效量的药物或组合物递送至它所靶向的细胞或组织的任何途径或方法施用。或者，常规实验将确定其他可接受的施用途径。

通常，以有效实现所需治疗作用的量向受试者施用剂。治疗有效量将根据化合物、疾病和其严重程度以及待治疗受试者的年龄、体重等而变化。在治疗癌症的背景下，治疗有效量是指足以产生癌症以及其一种或多种症状的发展、复发或发作的预防、增强或改善另一种疗法的一种或多种预防作用、减轻癌症的严重程度、持续时间、改善癌症的一种或多种症状、预防癌症进展、引起癌症消退和/或增强或改善另一种疗法的一种或多种治疗作用的治疗的量。在本发明的一个实施方案中，在施用一种、两种、三种或更多种疗法后，治疗的量可有效实现以下结果中的一种、两种、三种或更多种：(1)癌症干细胞群体稳定、减少或消除；(2)癌细胞群体稳定、减少或消除；(3)肿瘤或赘生物的生长稳定或减少；(4)肿瘤形成受损；(5)原发性、区域性和/或转移性癌症的根除、切除或控制；(6)死亡率降低；(7)无疾病、无复发、无进展和/或总体存活持续时间或存活率提高；(8)应答率、应答持久性或者应答或缓解期患者的数量增加；(9)住院率下降；(10)住院时间缩短；(11)肿瘤的大小保持并且不增加或增加小于10％、优选小于5％、优选小于4％、优选小于2％；(12)缓解期患者的数量增加；(13)缓解期的长度或持续时间增加；(14)癌症复发率下降；(15)癌症复发的时间增加；以及(16)癌症相关症状和/或生活质量改善。

在某个实施方案中，本发明的组合物可施用于患有癌症的症状或被诊断患有癌症的受试者。本发明的组合物可预防性地施用，即在疾病、病症或病状的任何症状或表现发展之前施用。通常，在这种情况下，受试者将处于发展所述病状的风险中。治疗还可包括治疗表现出某种疾病、病症或病状的症状的受试者。

如本文所述，可通过施用包含两种或更多种剂的混合制剂(例如，单一组合物)来实现如本文所述的所列举治疗剂的组合的共同施用。或者，两种或更多种剂可分开施用。共同施用可通过施用治疗剂中的一种如c-myc减少剂的第一步骤和施用第二剂如辅助c-myc抑制剂的第二步骤进行，其中所述第一和第二施用步骤可同时或顺序进行。在顺序施用的情况下，所述第一步骤和第二步骤可以任何顺序进行，并且以任何合适的时间间隔(例如，1-60秒、1-60分钟、1-24小时或1-7天)分开。第一剂(如c-myc减少剂)和第二剂(如辅助c-myc抑制剂)可以当组合时治疗有效的量施用，所述量可由熟练的医师或医学研究人员确定。

辅助癌症治疗

本文公开了可减少过表达c-myc的细胞中的c-myc的新化合物的发现。c-myc表达降低使得过表达c-myc的细胞对其他辅助癌症治疗方案如化学疗法、手术、放射疗法、热疗法、癌症疫苗、免疫疗法、基因疗法和激光疗法更敏感。据信癌细胞中c-myc表达降低使细胞对蛋白酶体抑制的细胞毒性作用更敏感。这种相同作用延续到其他癌症治疗剂。因此，某些实施方案涉及包括施用c-myc减少剂或c-myc减少剂和辅助c-myc抑制剂的组合与治疗有效量的辅助癌症治疗剂以增强过表达c-myc的癌细胞的治疗的方法。

药物制剂

某些实施方案涉及包含c-myc减少量的c-myc减少剂、或c-myc减少量的c-myc减少剂与辅助c-myc抑制剂的组合的药物制剂，其中具有单独或与辅助c-myc抑制剂组合的c-myc减少剂的制剂任选地还包含治疗有效量的辅助癌症治疗剂。适用于本文所述的治疗方法的剂可以对于施用于受试者来说可接受的制剂或组合物的形式提供。通常，一种或多种剂与药学上可接受的载体一起提供。“药学上可接受的载体”意图包括可与药物施用相容的任何和所有溶剂、粘合剂、稀释剂、崩解剂、润滑剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。用于药物活性物质的此类介质和剂的使用是本领域中熟知的。只要任何常规介质或剂与活性剂相容，这种介质就可用于本发明的组合物中，并且补充活性剂或治疗剂也可并入组合物中。本发明的药物组合物被配制成与其预期的施用途径相容。

溶液或悬浮液可包含以下组分：无菌稀释剂，如注射用水、盐水溶液、不挥发性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶剂；抗细菌剂，如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，如乙二胺四乙酸；缓冲剂，如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐；和用于调节张力的剂，如氯化钠或葡萄糖。可用酸或碱，如盐酸或氢氧化钠调节ph。

适于可注射使用的药物组合物包括无菌水溶液(在治疗剂为水溶性的情况下)或分散液和用于临时制备无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末。对于静脉内施用，合适的载体包括生理盐水、抑菌水、cremophor(basf,parsippany,n.j.)或磷酸盐缓冲盐水(pbs)。在所有情况下，组合物必须是无菌的并且必须具有达到容易注射的程度的流动性。所述组合物应该在制造和储存条件下稳定且必须被保藏以防诸如细菌和真菌的微生物的污染作用。载体可以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)以及其合适混合物的溶剂或分散介质。可例如通过使用包衣(如卵磷脂)、通过在分散液的情况下维持所需粒度以及通过使用表面活性剂来维持适当的流动性。防止微生物的作用可通过不同的抗细菌剂和抗真菌剂，例如对羟苯甲酸酯、三氯叔丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等来实现。在许多情况下，将优选在组合物中包含等渗剂，例如糖、多元醇(诸如甘露醇、山梨糖醇)、氯化钠。可通过在组合物中包含延迟吸收的剂(例如单硬脂酸铝和明胶)来引起可注射组合物的延长吸收。

关于配制和施用技术的进一步详细信息可在remington:thescienceandpracticeofpharmacy,第22版(pharmaceuticalpress,philadelphia,pa,2012，其以引用的方式并入本文)的最新版本中找到。在制备药物组合物后，可将它们置于合适的容器中并针对指定病状的治疗进行标记。这种标记包括量、频率和施用方法。

如上所述，“治疗有效量”是指将引发由研究者、兽医、医师或其他临床医生所研究的组织、系统或受试者的生物学或医学应答的主题化合物的量。术语“治疗有效量”包括当施用时足以预防正治疗的病症或疾病的一种或多种病征或症状发展，或在某种程度上减轻所述一种或多种病征或症状的化合物的量。治疗有效量将根据化合物、疾病和其严重程度以及待治疗受试者的年龄、体重等而变化。在治疗癌症的背景下，治疗有效量是指足以产生癌症以及其一种或多种症状的发展、复发或发作的预防、增强或改善另一种疗法的一种或多种预防作用、减轻癌症的严重程度、持续时间、改善癌症的一种或多种症状、预防癌症进展、引起癌症消退和/或增强或改善另一种疗法的一种或多种治疗作用的治疗的量。在本发明的一个实施方案中，在施用一种、两种、三种或更多种疗法后，治疗的量可有效实现以下结果中的一种、两种、三种或更多种：(1)癌症干细胞群体稳定、减少或消除；(2)癌细胞群体稳定、减少或消除；(3)肿瘤或赘生物的生长稳定或减少；(4)肿瘤形成受损；(5)原发性、区域性和/或转移性癌症的根除、切除或控制；(6)死亡率降低；(7)无疾病、无复发、无进展和/或总体存活持续时间或存活率提高；(8)应答率、应答持久性或者应答或缓解期患者的数量增加；(9)住院率下降；(10)住院时间缩短；(11)肿瘤的大小保持并且不增加或增加小于10％、优选小于5％、优选小于4％、优选小于2％；(12)缓解期患者的数量增加；(13)缓解期的长度或持续时间增加；(14)癌症复发率下降；(15)癌症复发的时间增加；以及(16)癌症相关症状和/或生活质量改善。

治疗功效和毒性，例如ed50(在50％群体中治疗有效的剂量)和ld50(对50％群体致死的剂量)可通过细胞培养物或实验动物中的标准药学程序测定。毒性与治疗作用的剂量比是治疗指数，并且它可被表示为比率ld50/ed50。

鉴于与需要治疗的受试者相关的因素，确切剂量将由医师确定。调整剂量和施用以提供活性成分的足够水平或维持所需作用。可考虑的因素包括疾病状况的严重程度、受试者的一般健康状况、受试者的年龄、体重以及性别、饮食、施用时间和频率、一种或多种药物组合、反应灵敏度、以及对疗法的耐受性/应答。长效药物组合物可根据特定制剂的半衰期和清除率每3至4天、每周或每两周一次施用。

正常剂量可取决于施用途径从0.1至100,000微克变化，达约1g总剂量。上述化合物的有效量可在约0.1mg/kg至约500mg/kg、或者约1至约50mg/kg的范围内。有效剂量还将取决于施用途径以及与其他剂共同使用的可能性而变化。临床医生可使用本领域中已知的技术容易地确定治疗有效量。

关于特定剂量和递送方法的指导在文献中提供并且通常可由本领域技术人员获得。本领域技术人员将采用与蛋白质或其抑制剂不同的核苷酸制剂。类似地，多核苷酸或多肽的递送对于特定细胞、条件、位置等将是特定的。

优选地，治疗剂使靶基因的表达或靶多肽的活性相对于不存在试剂的情况下降低至少约10％、优选约50％、更优选约75％、90％或100％。可例如通过核苷酸探针与靶特异性mrna的杂交、定量rt-pcr、靶多肽的免疫检测或靶多肽活性的测量来评估被选择用于降低靶基因的表达水平或靶多肽的活性的机制的有效性。

在上述任何实施方案中，本发明的任何药物组合物都可与其他合适的治疗剂组合施用。根据常规药物原理，本领域普通技术人员可进行用于组合疗法的合适剂的选择。

治疗剂的组合可协同作用以实现癌症的治疗。使用这种方法，可能能够用较低剂量的每种剂实现治疗功效，从而降低不良副作用的可能性。上述任何治疗方法都可应用于需要这种治疗的任何受试者。

6.实施例

本发明不限于所描述或举例说明的特定方法、组合物或方法论，因为这些可变化。虽然可在本发明实施方案的实践或测试中使用与本文描述的那些方法和材料类似或等效的任何方法和材料，但是描述了优选的方法、装置和材料。然而，将显而易见的是：可在不脱离本发明的更广泛精神和范围的情况下对本发明做出各种修改和改变。以下提供实施例以有助于更完整地理解本发明。以下实施例说明制备和实施本发明的示例性模式，然而，本发明的范围不限于这些实施例中公开的具体实施方案，所述实施例仅用于说明的目的。本领域技术人员将会认识到或将能够确定仅使用常规实验，就可实现本文描述的具体实施方案的许多等效物。此类等效物被认为处于本发明的范围之内。

实施例1.材料和方法

细胞培养和试剂

细胞系获自atcc并在含有10％fcs的伊斯科夫氏改良的杜氏培养基(iscovemodifieddulbeccomedium)中生长。每2至3天添加新鲜培养基，并将细胞保持在0.1至1x10⁶/ml的细胞浓度。对于原代细胞，培养基是rpmi。所述试剂购自selleck，包括卡非佐米、硼替佐米、艾代拉里斯(idelalisib)/cal-101。tgr-1202由tgtherapeutics提供。

细胞毒性测定

如先前所述[22]，使用celltiterglo对培养的细胞进行细胞毒性。实验在96孔板中进行，每次处理一式三份。如所示，通常在处理后24小时、48小时和/或72小时取得样品。细胞毒性通过随时间变化，相对于来自相同实验的未处理对照，每次处理中活细胞的百分比降低来表示。使用calcusyn2.0版软件(biosoft)计算每种细胞系的ic50(半数最大抑制浓度)。

蛋白质印迹

在指定处理条件下对来自培养的细胞的全蛋白质提取物进行蛋白质印迹，最常见持续24小时。使用来自thermoscientific的化学发光检测系统，根据标准方案进行蛋白质印迹。除非另有说明，否则第一抗体购自cellsignalingtechnology，并且是针对这些蛋白质：4ebp1、phos-4ebp1、s6k、phos-s6k、bcl2、bcl-xl、parp、c-myc、b-连环蛋白、p-4ebp1(s65)、p-4ebp1(t70)。β-肌动蛋白和gapdh的信号用作负载对照。山羊抗兔或抗小鼠第二抗体购自santacruzbiotechnology。

ck1ε激酶活性测定

根据anastassiadis等人,natbiotechnol；29(11):1039–1045中公开的技术进行ck-1测定。简言之，在反应缓冲液中制备特异性激酶/底物对以及所需的辅因子；20mmhepesph7.5、10mmmgcl2、1mmegta、0.02％brij35、0.02mg/mlbsa、0.1mmna3vo4、2mmdtt、1％dmso(关于单独激酶反应组分的具体细节，参见补充表2，anastassiadis等人2011)。将化合物递送到反应中，约20分钟后添加atp(sigma,st.louismo)和33patp(perkinelmer,walthamma)的混合物至10μm最终浓度。反应在室温下进行120分钟，然后将反应物点样到p81离子交换滤纸(whatmaninc.,piscataway,nj)上。通过在0.75％磷酸中充分洗涤滤纸除去未结合的磷酸盐。在减去源自含有无活性酶的对照反应的背景后，将激酶活性数据表示为与媒介物(二甲基亚砜)反应相比，测试样品中的剩余激酶活性百分比。使用prism(graphpadsoftware)获得ic50值和曲线拟合。

-底物：肽底物，[krrral[ps]vaslpgl]，20μmatp10μm

-反应：底物+[γ-33p]-atp33p-底物+adp

-测定：放射性同位素过滤结合试验(反应生物学)。

以100μm开始用3倍连续稀释以10剂量ic50模式测试化合物。

-以20μm开始用3倍连续稀释以10剂量ic50模式测试对照化合物d4476

-反应在10μmatp下进行。

实施例2：cux-03166降低淋巴瘤细胞的活力

将淋巴瘤细胞系ly10用cux-03166(‘166化合物)处理24小时、48小时和72小时。从处理组和媒介物处理的阴性对照中收集细胞。通过来自promega的cell-titerglo测定定量活细胞。处理的细胞中的活细胞被表示为阴性对照的百分比。结果表明，与媒介物处理的阴性对照样品相比，作为单一剂的166化合物在25um浓度下在处理48小时后将活力降低至0％。在50um的浓度下，细胞的活力在仅24小时处理时降至0％。参见图1a。还用cal-101和tgr-1202处理细胞并且在24小时测定活力。对于5μm和15μm的较低浓度，对于两种处理活力降至约80％。然而，随着浓度增加至50μm，对于cal-101的活力保持在约80％，并且对于tgr-1202活力适度降至约65％，如图1b中所示。

实施例3：cux-03166降低ly7细胞的活力。

将淋巴瘤细胞系ly7用cux-03166处理24小时(菱形)、48小时(正方形)和72小时(三角形)。活力被确定类似于实施例2的活力。如图2中所示，在15um浓度下，细胞的活力在24小时降至40％，在48小时降低至10％，并且在72小时降低至约0％。在25um浓度下，活力在24小时降低至0％。

实施例4.cux-03166在抑制淋巴瘤中的c-myc方面比tgr-1202或cal-101活性更高。

将淋巴瘤细胞系ly10和ly7用作为单一剂的pf4800567(pf)、cal-101(cal)、tgr-1202(tg)和cux-03166处理6小时，所有浓度均为25um。对蛋白质提取物进行加工以用于使用针对c-myc、b-连环蛋白、磷酸化4ebp1、总4ebp1和β肌动蛋白的抗体进行蛋白质印迹。如图4中所示，使用ly-10细胞系的结果证明，与媒介物处理的阴性对照样品相比，cal-101、pf4800和tgr-1202处理产生c-myc水平和4ebp1磷酸化的中度抑制。cux-03166显示c-myc水平的显著更大降低。使用ly-7细胞系，cal-101处理显示c-myc几乎没有减少，并且pf4800处理显示适度减少。与cal-101或pf4800相比，tgr-1202显示c-myc的显著更大降低。然而，cux-03166显示c-myc水平下降至不可检测的水平。与tgr-1202相比，cux-03166在抑制c-myc方面显示出近50倍的效力增加。

实施例5：cux-0404a展现优于tgr-1202的药理学活性

cux-0404a降低oci-ly7细胞(生发中心弥漫性大b细胞淋巴瘤，gcb-dlbcl)的活力，参见图4。将淋巴瘤细胞系ly7用cux-0404a处理24小时(深色圆圈)、48小时(浅色圆圈)或cux0404b处理24小时(深色正方形)或48小时(浅色正方形)。活力被确定类似于图1的活力。在15um浓度下，细胞的活力在24小时降至60％，在48小时降低至约42％，在25um浓度下，活力在24小时降低至0％。图5.cux-0404a比tg-1202更有效地降低z-138(套细胞淋巴瘤，mcl)细胞的活力。图5示出用cux-0404a(正方形)、tgr-1202(菱形)或cux0404b(三角形)处理mcl细胞24小时的结果。活力被确定类似于图1的活力。在25um浓度下，与对于tgr-1202为60％相比，对于cux-0404a处理细胞的活力降低至20％

实施例6：cux-0404a展现对4e-bp1的磷酸化和c-myc的蛋白质水平的有效抑制

图6.cux-0404a在抑制淋巴瘤中的c-myc方面比tgr-1202或cux-0404b活性更高。图6示出用作为单一剂的cux0404a(cux4a)、cux-0404b(cux4b)和tgr-1202(tg)在15和20um浓度下处理gcb-dlbcl淋巴瘤细胞系12小时的结果。对蛋白质提取物进行加工以用于使用针对c-myc、b-连环蛋白、磷酸化4ebp1、总4ebp1、p-p70s6k、p70s6k、parp和β肌动蛋白的抗体进行蛋白质印迹。结果表明，与媒介物处理的阴性对照样品相比，tgr-1202处理产生c-myc水平和4ebp1磷酸化的中度抑制。cux-0404a显示c-myc水平的显著更大降低，并且在20um浓度下c-myc不可检测。

实施例7：cux-0404a具有中等ck1ε抑制活性

图7a和7b示出cux-0404a抑制ck1ε，但效力低于tgr-1202。使用放射性同位素过滤结合测定测试ck1ε的抑制。以100μm开始用3倍连续稀释以10剂量ic50模式测试化合物(图7a)。以20μm开始用3倍连续稀释以10剂量ic50模式测试对照化合物d4476(图7b)。反应在10μmatp下进行。cux-0404a具有3.21μm的ic50。tgr-1202具有0.62μm的ic50。

通过阅读本公开内容对于本领域技术人员显而易见的是，本发明的其他实施方案可按除了以上所确切公开的那些形式以外的形式来呈现。以上描述的具体实施方案因此应被认为是说明性的而非限制性的。本领域技术人员将会认识到或将能够确定仅使用常规实验，就可实现本文描述的具体实施方案的许多等效物。此类等效物被认为处于本发明的范围之内。虽然已经在前述说明性实施方案中描述和说明了本发明，但是应理解本公开仅通过举例的方式进行，并且可在不脱离本发明的精神和范围的情况下进行本发明的实施细节中的大量改变，本发明仅受以下权利要求书限制。在本发明的范围和精神内，可以各种方式组合和重新安排所公开实施方案的特征。本发明的范围是如所附权利要求书和其等效物中所阐述的，而非局限于前述描述中所包括的实施例。

表1：pi3k-akt-mtor信号传导途径的抑制剂的部分列表

表2：可与导入c-myc沉默治疗组合的辅助化学治疗剂的部分列表(不包括蛋白酶体抑制剂)

表3：酪蛋白激酶抑制剂

参考文献

本文中提及的所有出版物均以引用的方式整体并入。

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