本发明属于治疗阿尔茨海默氏病及与淀粉样蛋白β(aβ)肽（淀粉样蛋白前体蛋白(app)的一种神经毒性的且高度聚集的肽片段）有关的其它疾病和病症的领域。阿尔茨海默氏病是在世界范围内影响数百万患者的破坏性神经退行性病症。考虑到目前批准的上市药剂仅给患者提供暂时的针对症状的益处，在阿尔茨海默氏病的治疗中存在显著的未满足的需要。阿尔茨海默氏病的特征在于aβ在脑中的产生、聚集和沉积。已经显示β-分泌酶(β-位点淀粉样蛋白前体蛋白切割酶；bace)的完全或部分抑制对小鼠模型中的斑块相关的和斑块依赖性的病理学具有显著影响。这提示，即使aβ肽水平的小幅下降也可能导致斑块负荷和突触不足的长期显著下降，因而提供显著的治疗益处，尤其是在阿尔茨海默氏病的治疗中。此外，已经证实特异性地靶向n3pgluaβ的抗体会降低体内斑块水平(美国专利号8,679,498)。n3pgluabeta（也被称作n3pgluaβ、n3pe或aβp3-42）是仅在斑块中发现的aβ肽的截短形式。尽管n3pgluaβ肽是在脑中沉积的aβ的微小组分，但是研究已经证实，n3pgluaβ肽具有侵袭性的聚集性能并且在沉积级联中在早期积累。bace抑制剂和结合n3pgluaβ肽的抗体的组合是提供aβ肽介导的病症诸如阿尔茨海默氏病的治疗所期望的，所述组合可以比单独的任一种药物更有效。例如，与单独使用的每种药物相比，使用这种组合的治疗可以允许使用更低剂量的任一种或两种药物，潜在地导致更低的副作用，同时维持效力。据信，用抗-n3pgluaβ抗体和bace抑制剂靶向aβ的沉积形式的除去将会促进预先存在的斑块沉着物的吞噬除去，同时通过抑制aβ的产生而减少或防止aβ的进一步沉积。美国专利号8,278,334公开了一种治疗认知或神经退行性疾病的方法，所述方法包括施用取代的环胺bace-1抑制剂和抗-淀粉样蛋白抗体。wo2016/043997公开了一种治疗以aβ的形成和沉积为特征的疾病的方法，所述方法包括与抗-n3pgluaβ单克隆抗体组合的某种bace抑制剂。因此，本发明提供了一种治疗认知或神经退行性疾病的方法，所述方法包括给需要这种治疗的患者施用与有效量的选自he8l、b12l、r17l、抗体i和抗体ii的抗-n3pgluaβ抗体组合的有效量的式i的化合物或其药学上可接受的盐：本发明也提供了一种治疗以aβ的形成和沉积为特征的疾病的方法，所述方法包括给需要这种治疗的患者施用与有效量的选自he8l、b12l、r17l、抗体i和抗体ii的抗-n3pgluaβ抗体组合的有效量的式i的化合物或其药学上可接受的盐。本发明进一步提供了一种治疗阿尔茨海默氏病的方法，所述方法包括给需要这种治疗的患者施用与有效量的选自he8l、b12l、r17l、抗体i和抗体ii的抗-n3pgluaβ抗体组合的有效量的式i的化合物或其药学上可接受的盐。本发明也提供了一种治疗轻度阿尔茨海默氏病的方法，所述方法包括给需要这种治疗的患者施用与有效量的选自he8l、b12l、r17l、抗体i和抗体ii的抗-n3pgluaβ抗体组合的有效量的式i的化合物或其药学上可接受的盐。本发明进一步提供了一种治疗轻度认知损害的方法，所述方法包括给需要这种治疗的患者施用与有效量的选自he8l、b12l、r17l、抗体i和抗体ii的抗-n3pgluaβ抗体组合的有效量的式i的化合物或其药学上可接受的盐。本发明进一步提供了一种治疗前驱阿尔茨海默氏病的方法，所述方法包括给需要这种治疗的患者施用与有效量的选自he8l、b12l、r17l、抗体i和抗体ii的抗-n3pgluaβ抗体组合的有效量的式i的化合物或药学上可接受的盐。另外，本发明提供了一种用于预防轻度认知损害进展至阿尔茨海默氏病的方法，所述方法包括给需要这种治疗的患者施用与有效量的选自he8l、b12l、r17l、抗体i和抗体ii的抗-n3pgluaβ抗体组合的有效量的式i的化合物或其药学上可接受的盐。本发明进一步提供了一种治疗脑淀粉样蛋白血管病(caa)的方法，所述方法包括给需要这种治疗的患者施用与有效量的选自he8l、b12l、r17l、抗体i和抗体ii的抗-n3pgluaβ抗体组合的有效量的式i的化合物或其药学上可接受的盐。本发明进一步提供了一种治疗患者中的阿尔茨海默氏病的方法，所述方法包括给需要这种治疗的患者施用与有效量的抗-n3pgluaβ抗体组合的有效量的式i的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述抗-n3pgluaβ抗体包含轻链可变区(lcvr)和重链可变区(hcvr)，其中所述lcvr包含lcdr1、lcdr2和lcdr3，且所述hcvr包含hcdr1、hcdr2和hcdr3，它们选自：a)lcdr1是seqid.no:17、lcdr2是seqid.no:18、lcdr3是seqid.no:19、hcdr1是seqid.no:20、hcdr2是seqid:no:22且hcdr3是seqid.no:23；和b)lcdr1是seqid.no:17、lcdr2是seqid.no:18、lcdr3是seqid.no:19、hcdr1是seqid.no:21、hcdr2是seqid.no:22且hcdr3是seqid.no:24;c)lcdr1是seqid.no:17、lcdr2是seqid.no:18、lcdr3是seqid.no:19、hcdr1是seqid.no:36、hcdr2是seqid.no:22且hcdr3是seqid.no:37;d)lcdr1是seqid.no:4、lcdr2是seqid.no:6、lcdr3是seqid.no:7、hcdr1是seqid.no:1、hcdr2是seqid.no:2且hcdr3是seqid.no:3；e)lcdr1是seqid.no:4、lcdr2是seqid.no:5、lcdr3是seqid.no:7、hcdr1是seqid.no:1、hcdr2是seqid.no:2且hcdr3是seqid.no:3。此外，本发明提供了式i的化合物或其药学上可接受的盐，其用于在阿尔茨海默氏病的治疗中与选自he8l、b12l、r17l、抗体i和抗体ii的抗-n3pgluaβ抗体同时、单独或相继组合。另外，本发明提供了式i的化合物或其药学上可接受的盐，其用于在轻度阿尔茨海默氏病的治疗中与选自he8l、b12l、r17l、抗体i和抗体ii的抗-n3pgluaβ抗体同时、单独或相继组合。进一步，本发明提供了式i的化合物或其药学上可接受的盐，其用于在前驱阿尔茨海默氏病的治疗中与选自he8l、b12l、r17l、抗体i和抗体ii的抗-n3pgluaβ抗体同时、单独或相继组合。本发明提供了式i的化合物或其药学上可接受的盐，其用于在预防轻度认知损害进展至阿尔茨海默氏病中与选自he8l、b12l、r17l、抗体i和抗体ii的抗-n3pgluaβ抗体同时、单独或相继组合。本发明提供了式i的化合物或其药学上可接受的盐，其用于在阿尔茨海默氏病的治疗中与抗-n3pgluaβ同时、单独或相继组合，其中所述抗-n3pgluaβ抗体包含轻链可变区(lcvr)和重链可变区(hcvr)，其中所述lcvr包含lcdr1、lcdr2和lcdr3，且所述hcvr包含hcdr1、hcdr2和hcdr3，它们选自：a)lcdr1是seqid.no:17、lcdr2是seqid.no:18、lcdr3是seqid.no:19、hcdr1是seqid.no:20、hcdr2是seqid:no:22且hcdr3是seqid.no:23；和b)lcdr1是seqid.no:17、lcdr2是seqid.no:18、lcdr3是seqid.no:19、hcdr1是seqid.no:21、hcdr2是seqid.no:22且hcdr3是seqid.no:24;c)lcdr1是seqid.no:17、lcdr2是seqid.no:18、lcdr3是seqid.no:19、hcdr1是seqid.no:36、hcdr2是seqid.no:22且hcdr3是seqid.no:37;d)lcdr1是seqid.no:4、lcdr2是seqid.no:6、lcdr3是seqid.no:7、hcdr1是seqid.no:1、hcdr2是seqid.no:2且hcdr3是seqid.no:3；e)lcdr1是seqid.no:4、lcdr2是seqid.no:5、lcdr3是seqid.no:7、hcdr1是seqid.no:1、hcdr2是seqid.no:2且hcdr3是seqid.no:3。本发明进一步提供了包含式i的化合物或其药学上可接受的盐与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物，其与选自he8l、b12l、r17l、抗体i和抗体ii的抗-n3pgluaβ抗体与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物组合。本发明还提供了包含式i的化合物或其药学上可接受的盐与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物，其与抗-n3pgluaβ抗体与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物组合，其中所述抗-n3pgluaβ抗体包含轻链可变区(lcvr)和重链可变区(hcvr)，其中所述lcvr包含lcdr1、lcdr2和lcdr3，且所述hcvr包含hcdr1、hcdr2和hcdr3，它们选自：a)lcdr1是seqid.no:17、lcdr2是seqid.no:18、lcdr3是seqid.no:19、hcdr1是seqid.no:20、hcdr2是seqid:no:22且hcdr3是seqid.no:23；和b)lcdr1是seqid.no:17、lcdr2是seqid.no:18、lcdr3是seqid.no:19、hcdr1是seqid.no:21、hcdr2是seqid.no:22且hcdr3是seqid.no:24;c)lcdr1是seqid.no:17、lcdr2是seqid.no:18、lcdr3是seqid.no:19、hcdr1是seqid.no:36、hcdr2是seqid.no:22且hcdr3是seqid.no:37;d)lcdr1是seqid.no:4、lcdr2是seqid.no:6、lcdr3是seqid.no:7、hcdr1是seqid.no:1、hcdr2是seqid.no:2且hcdr3是seqid.no:3；e)lcdr1是seqid.no:4、lcdr2是seqid.no:5、lcdr3是seqid.no:7、hcdr1是seqid.no:1、hcdr2是seqid.no:2且hcdr3是seqid.no:3。另外，本发明提供了一种试剂盒，其包含式i的化合物或其药学上可接受的盐以及选自he8l、b12l、r17l、抗体i和抗体ii的抗-n3pgluaβ抗体。本发明进一步提供了一种试剂盒，其包含：包含式i的化合物或其药学上可接受的盐与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物，和包含选自he8l、b12l、r17l、抗体i和抗体ii的抗-n3pgluaβ抗体与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物。本文中使用的“试剂盒”包括在单个包装中的每种组分的单独容器，其中一种组分是式i的化合物或其药学上可接受的盐，且另一种组分是选自he8l、b12l、r17l、抗体i和抗体ii的抗-n3pgluaβ抗体。“试剂盒”还可以包括在单独包装中的每种组分的单独容器，其中一种组分是式i的化合物或其药学上可接受的盐，且另一种组分是选自he8l、b12l、r17l、抗体i和抗体ii的抗-n3pgluaβ抗体，所述单独包装含有施用每种组分作为组合的说明书。本发明进一步提供了式i的化合物或其药学上可接受的盐用于制备药物的用途，所述药物用于治疗阿尔茨海默氏病、轻度阿尔茨海默氏病、前驱阿尔茨海默氏病或用于预防轻度认知损害进展至阿尔茨海默氏病，其中所述药物要与选自he8l、b12l、r17l、抗体i和抗体ii的抗-n3pgluaβ抗体同时地、单独地或相继地施用。以下化合物在所述组合中是优选的：n-[3-[(4as,5s,7as)-2-氨基-5-(1,1-二氟乙基)-4,4a,5,7-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-7a-基]-4-氟-苯基]-5-(1,2,4-三唑-1-基)吡嗪-2-甲酰胺及其药学上可接受的盐；和n-[3-[(4as,5s,7as)-2-氨基-5-(1,1-二氟乙基)-4,4a,5,7-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-7a-基]-4-氟-苯基]-5-(1,2,4-三唑-1-基)吡嗪-2-甲酰胺水合物。另外，n-[3-[(4as,5s,7as)-2-氨基-5-(1,1-二氟乙基)-4,4a,5,7-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-7a-基]-4-氟-苯基]-5-(1,2,4-三唑-1-基)吡嗪-2-甲酰胺是特别优选的。此外，n-[3-[(4as,5s,7as)-2-氨基-5-(1,1-二氟乙基)-4,4a,5,7-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-7a-基]-4-氟-苯基]-5-(1,2,4-三唑-1-基)吡嗪-2-甲酰胺丙二酸盐；和n-[3-[(4as,5s,7as)-2-氨基-5-(1,1-二氟乙基)-4,4a,5,7-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-7a-基]-4-氟-苯基]-5-(1,2,4-三唑-1-基)吡嗪-2-甲酰胺4-甲基苯磺酸盐是特别优选的。优选的抗体是he8l和b12l、r17l、抗体i和抗体ii，其中he8l和b12l是特别优选的，且he8l是最优选的。抗-n3pgluaβ抗体包含轻链可变区(lcvr)和重链可变区(hcvr)，其中所述lcvr包含lcdr1、lcdr2和lcdr3，且所述hcvr包含hcdr1、hcdr2和hcdr3，它们选自：a)lcdr1是seqid.no:17、lcdr2是seqid.no:18、lcdr3是seqid.no:19、hcdr1是seqid.no:20、hcdr2是seqid:no:22且hcdr3是seqid.no:23；和b)lcdr1是seqid.no:17、lcdr2是seqid.no:18、lcdr3是seqid.no:19、hcdr1是seqid.no:21、hcdr2是seqid.no:22且hcdr3是seqid.no:24;c)lcdr1是seqid.no:17、lcdr2是seqid.no:18、lcdr3是seqid.no:19、hcdr1是seqid.no:36、hcdr2是seqid.no:22且hcdr3是seqid.no:37;d)lcdr1是seqid.no:4、lcdr2是seqid.no:6、lcdr3是seqid.no:7、hcdr1是seqid.no:1、hcdr2是seqid.no:2且hcdr3是seqid.no:3；e)lcdr1是seqid.no:4、lcdr2是seqid.no:5、lcdr3是seqid.no:7、hcdr1是seqid.no:1、hcdr2是seqid.no:2且hcdr3是seqid.no:3。在其它实施方案中，所述抗-n3pgluaβ抗体包含轻链可变区(lcvr)和重链可变区(hcvr)，其中所述lcvr和hcvr选自：a)seqidno:25的lcvr和seqidno:26的hcvr；b)seqidno:25的lcvr和seqidno:27的hcvr；c)seqidno:32的lcvr和seqidno:34的hcvr；d)seqidno:9的lcvr和seqidno:8的hcvr；和e)seqidno:10的lcvr和seqidno:8的hcvr。在其它实施方案中，所述抗-n3pgluaβ抗体包含轻链(lc)和重链(hc)，其中所述lc和hc选自：a)seqidno:28的lc和seqidno:29的hc；b)seqidno:28的lc和seqidno:30的hc；c)seqidno:33的lc和seqidno:35的hc；d)seqidno:12的lc和seqidno:11的hc；和e)seqidno:13的lc和seqidno:11的hc。在其它实施方案中，所述抗-n3pgluaβ抗体包含两个轻链(lc)和两个重链(hc)，其中每个lc和每个hc选自：a)seqidno:28的lc和seqidno:29的hc；b)seqidno:28的lc和seqidno:30的hc；c)seqidno:33的lc和seqidno:35的hc；d)seqidno:12的lc和seqidno:11的hc；和e)seqidno:13的lc和seqidno:11的hc。在某些实施方案中，所述抗-n3pgluaβ抗体包含he8l，其分别具有seqidno:33和35的轻链(lc)和重链(hc)。he8l进一步分别具有seqidno:32和34的轻链可变区(lcvr)和重链可变区(hcvr)。he8l的hcvr进一步包含seqidno:36的hcdr1、seqidno:22的hcdr2和seqidno:37的hcdr3。he8l的lcvr进一步分别包含seqidno.17的lcdr1、seqidno.18的lcdr2和seqidno:19的lcdr3。在某些实施方案中，所述抗-n3pgluaβ抗体包含b12l，其分别具有seqidno:28和29的轻链(lc)和重链(hc)。b12l进一步分别具有seqidno:25和26的轻链可变区(lcvr)和重链可变区(hcvr)。b12l的hcvr进一步包含seqidno:20的hcdr1、seqidno:22的hcdr2和seqidno:23的hcdr3。b12l的lcvr进一步分别包含seqidno.17的lcdr1、seqidno:18的lcdr2和seqidno:19的lcdr3。在某些实施方案中，所述抗-n3pgluaβ抗体包含r17l，其分别具有seqidno:28和30的轻链(lc)和重链(hc)。r17l进一步分别具有seqidno:25和27的轻链可变区(lcvr)和重链可变区(hcvr)。r17l的hcvr进一步包含seqidno:21的hcdr1、seqidno:22的hcdr2和seqidno:24的hcdr3。r17l的lcvr进一步分别包含seqidno.17的lcdr1、seqidno:18的lcdr2和seqidno:19的lcdr3。在某些实施方案中，所述抗-n3pgluaβ抗体包含抗体i，其分别具有seqidno:12和11的轻链(lc)和重链(hc)。抗体i进一步分别具有seqidno:9和8的轻链可变区(lcvr)和重链可变区(hcvr)。抗体i的hcvr进一步包含seqidno:1的hcdr1、seqidno:2的hcdr2和seqidno:3的hcdr3。抗体i的lcvr进一步分别包含seqidno:4的lcdr1、seqidno:6的lcdr2和seqidno:7的lcdr3。在某些实施方案中，所述抗-n3pgluaβ抗体包含抗体ii，其分别具有seqidno:13和11的轻链(lc)和重链(hc)。抗体ii进一步分别具有seqidno:10和8的轻链可变区(lcvr)和重链可变区(hcvr)。抗体ii的hcvr进一步包含seqidno:1的hcdr1、seqidno:2的hcdr2和seqidno:3的hcdr3。抗体ii的lcvr进一步分别包含seqidno:4的lcdr1、seqid.no.5的lcdr2和seqidno:7的lcdr3。本领域普通技术人员将进一步明白和认识到，“抗-n3pgluaβ抗体”和具体抗体“he8l”、“b12l”和“r17l”与制备和使用所述抗体的方法一起由本领域普通技术人员在于2014年3月25日授权的标题为“抗-n3pglu淀粉样蛋白β肽抗体及其用途（anti-n3pgluamyloidbetapeptideantibodiesandusesthereof）”的美国专利号8,679,498b2(美国系列号13/810,895)中鉴别和公开。参见例如美国专利号8,679,498b2的表1。抗体he8l、b12l和r17l可以用作本发明的抗-n3pgluaβ抗体。在其它实施方案中，所述抗-n3pgluaβ抗体可以包含本文描述的抗体“抗体i”。在其它实施方案中，所述抗-n3pgluaβ抗体可以包含本文描述的“抗体ii”。另外，在下面在表a中提供了在本发明中使用的某些抗体的氨基酸序列：表a-抗体seqidno抗体轻链重链lcvrhcvrb12l28292526r17l28302527he8l33353234抗体i121198抗体ii1311108关于“he8l”、“b12l”、“r17l”、“抗体i”和“抗体ii”，在表b中提供了这样的抗体的另外氨基酸序列：表b-“he8l”、“b12l”、“r17l”、“抗体i”和“抗体ii”的另外seqidno本发明的抗体结合n3pgluaβ。n3pgluaβ的序列是seqidno:31的氨基酸序列。aβ的序列是seqidno:38。本文中使用的“抗体”是包含通过二硫键互连的2个重链(hc)和2个轻链(lc)的免疫球蛋白分子。每个lc和hc的氨基端部分包括经由其中所含的互补性决定区(cdr)负责抗原识别的可变区。所述cdr散布在被称作框架区的更保守的区域内。氨基酸向本发明的抗体的lcvr和hcvr区域内的cdr结构域的分配是基于众所周知的kabat编号惯例(诸如下述:kabat,等人,ann.nyacad.sci.190:382-93(1971);kabat等人,sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,第五版,u.s.departmentofhealthandhumanservices,nihpublicationno.91-3242(1991))和north编号惯例(north等人,anewclusteringofantibodycdrloopconformations,journalofmolecularbiology,406:228-256(2011))。本文中使用的术语“分离的”表示这样的蛋白、肽或核酸：其在自然界中不存在，且不含有或基本上不含有在细胞环境中发现的其它大分子物质。本文中使用的“基本上不含有”是指目标蛋白、肽或核酸包含超过80%(以摩尔为基础)的存在的大分子物质，优选地超过90%，且更优选地超过95%。在抗体表达和分泌以后，使用许多常用技术中的任一种将培养基澄清以除去细胞并将澄清的培养基纯化。根据众所周知的配制用于胃肠外施用、特别是用于皮下、鞘内或静脉内施用的蛋白和抗体的方法，可以将纯化的抗体配制成药物组合物。可以将所述抗体与适当的药学上可接受的赋形剂一起冻干，然后在以后在使用前用基于水的稀释剂重构。在任一种情况下，所述抗体的药物组合物的储存形式和注射形式将含有一种或多种药学上可接受的赋形剂，所述赋形剂是除所述抗体以外的成分。成分是否是药学上可接受的依赖于它对安全性和有效性的影响，或对药物组合物的安全性、纯度和效能的影响。如果一种成分被判断为对安全性或有效性（或对安全性、纯度或效能）具有足够不利的影响以确保它不会被用在用于施用给人类的组合物中，那么它不是药学上可接受的以用在所述抗体的药物组合物中。术语“以aβ的沉积为特征的疾病”是在病理学上以脑中或脑血管系统中的aβ沉着物为特征的疾病。这包括诸如阿尔茨海默氏病、唐氏综合征和脑淀粉样蛋白血管病等疾病。作为本领域技术人员的主治诊断医生或健康护理专业人员通过使用已知技术和通过观察结果，可以容易地确定阿尔茨海默氏病的临床诊断、分期或进展。这通常包括某种形式的脑斑块成像、精神或认知评估（例如临床痴呆等级评定-盒总结（cdr-sb）、简易精神状态检查25（mmse）或阿尔茨海默氏病评估量表-认知（adas-cog））或功能评估（例如阿尔茨海默氏病协作研究-日常生活活动（adcs-adl）。本文中使用的“临床阿尔茨海默氏病”是阿尔茨海默氏病的诊断阶段。它包括被诊断为前驱阿尔茨海默氏病、轻度阿尔茨海默氏病、中度阿尔茨海默氏病和重度阿尔茨海默氏病的状况。术语“临床前阿尔茨海默氏病”是先于临床阿尔茨海默氏病的阶段，其中生物标记物（诸如cspaβ42水平或通过淀粉样蛋白pet确定的沉积脑斑块）的可测量变化会指示具有阿尔茨海默氏病病状的患者的最早征象，向临床阿尔茨海默氏病进展。这经常在可注意到症状诸如记忆丧失和意识错乱之前。本文中使用的术语“治疗”包括限制、减慢、终止、降低或逆转存在的症状、病症、状况或疾病的进展或严重程度。本文中使用的术语“患者”表示人。术语“抑制aβ肽的产生”用于指降低患者中的aβ肽的体内水平。本文中使用的术语“有效量”表示式i的化合物或其药学上可接受的盐的量或剂量，并表示选自he8l、b12l、r17l、抗体i和抗体ii的抗-n3pgluaβ抗体的量或剂量，其在以单剂量或多剂量施用给患者后，在接受诊断或治疗的患者中提供期望的作用。应当理解，通过以任何方式与选自he8l、b12l、r17l、抗体i和抗体ii的抗-n3pgluaβ抗体一起施用式i的化合物或其药学上可接受的盐而实现本发明的组合疗法，所述任何方式在体内提供有效水平的式i的化合物和选自he8l、b12l、r17l、抗体i和抗体ii的抗-n3pgluaβ抗体。主治诊断医生（如本领域技术人员）通过使用已知技术和通过观察在类似情况下得到的结果可以容易地确定有效量。在确定患者的有效量时，主治诊断医生会考虑许多因素，包括、但不限于：患者的物种；其大小、年龄和一般健康；涉及的具体疾病或病症；疾病或病症的程度或牵连或严重程度；个体患者的应答；施用的特定化合物；施用模式；施用的制品的生物利用度特征；选择的给药方案；伴随药物的使用；和其它有关的情况。式i的化合物或其药学上可接受的盐在本发明的组合中在宽剂量范围内通常是有效的。例如，式i的化合物的每天剂量通常落在约0.1mg/天至约500mg/天、优选约0.1mg/天至约200mg/天和最优选约0.1mg/天至约100mg/天的范围内。在某些实施方案中，式i的化合物的剂量是约0.1mg/天至约25mg/天。另外，选自he8l、b12l、r17l、抗体i和抗体ii的抗-n3pgluaβ抗体在本发明的组合中在宽剂量范围内通常是有效的。在某些情况下，低于上述范围的下限的剂量水平可能是更合适的，而在其它情况下，可以与可接受的不利事件一起采用再更大的剂量，因此，以上剂量范围无意以任何方式限制本发明的范围。优选地将本发明的bace抑制剂和抗体配制为药物组合物，其通过使所述化合物可生物利用的任何途径施用。可以以任何方式改变施用途径，受限于药物的物理性能以及患者和护理人员的便利性。优选地，将抗-n3pgluaβ抗体组合物用于胃肠外施用，诸如静脉内或皮下施用。另外，将式i的bace抑制剂化合物或其药学上可接受的盐用于口服或胃肠外施用，包括静脉内或皮下施用。这样的药物组合物及其制备方法是本领域众所周知的(参见，例如，remington:thescienceandpracticeofpharmacy,l.v.allen,编,第22版,pharmaceuticalpress,2012)。本文中使用的短语“与……组合”表示bace抑制剂诸如式i的化合物或其药学上可接受的盐：与选自he8l、b12l、r17l、抗体i和抗体ii的抗-n3pgluaβ抗体同时或以任意次序相继组合，或它们的任意组合。所述两种分子可以作为同一药物组合物的部分或在单独的药物组合物中施用。式i的化合物或其药学上可接受的盐的施用可以先于、晚于抗-n3pgluaβ抗体的施用或者在同时，或以它们的某种组合。在以重复间隔施用抗-n3pgluaβ抗体的情况下(例如在标准疗程中)，bace抑制剂的施用可以先于、晚于抗-n3pgluaβ抗体的每次施用或者在同时，或以它们的某种组合，或关于使用抗-n3pgluaβ抗体的疗法在不同的间隔，或在使用抗-n3pgluaβ抗体的疗程之前、之后或过程中的任何时间以单个或多个剂量。通过本领域已知的多种程序可以制备本发明的化合物，在下面的制备和实施例中举例说明了一些程序。所描述的每个途径的具体合成步骤可以以不同的方式组合，或与不同程序的步骤结合，以制备式i的化合物或其盐。通过本领域众所周知的常规方法，包括萃取、蒸发、沉淀、色谱法、过滤、研磨和结晶，可以回收每个步骤的产物。另外，除非另有说明，否则所有的取代基如以前所定义。试剂和起始原料是本领域普通技术人员容易得到的。本领域普通技术人员会理解，术语“甲苯磺酸盐”、“甲苯磺酸”、“对甲苯磺酸”和“4-甲基苯磺酸”表示下述结构的化合物：。本文中使用的“bsa“表示牛血清白蛋白；“edta”表示乙二胺四乙酸；“ee”表示对映体过量；“ex”表示实施例；“f12”表示ham氏f12培养基；“hr表示小时；“hrp”表示辣根过氧化物酶；“ic50”表示药剂产生对于该药剂而言可能的最大抑制应答的50%时的浓度；“min”表示分钟；“pbs”表示磷酸盐缓冲盐水；“pdapp”表示血小板衍生的淀粉样蛋白前体蛋白；“prep”表示制备；“psi”表示磅/平方英寸；“rt”表示保留时间；“scx”表示强阳离子交换色谱法；“thf”表示四氢呋喃，且“tmb”表示3,3’,5,5’-四甲基联苯胺。可以形成本发明的化合物的药学上可接受的盐（诸如盐酸盐），例如，通过在本领域众所周知的标准条件下在合适的溶剂（诸如乙醚）中使适当的式i的游离碱和适当的药学上可接受的酸（诸如盐酸、对甲苯磺酸或丙二酸）反应。另外，这样的盐的形成可以在氮保护基的去保护后同时发生。这样的盐的形成是在本领域中众所周知的和理解的。参见，例如，gould,p.l.,“saltselectionforbasicdrugs,”internationaljournalofpharmaceutics,33:201-217(1986);bastin,r.j.,等人“saltselectionandoptimizationproceduresforpharmaceuticalnewchemicalentities”。以下制备例和实施例进一步例证本发明。制备1(2s)-1-三苯甲基氧基丁-3-烯-2-醇方案1,步骤a:将三甲基碘化锍(193.5g,948.2mmol)在thf(1264ml)中在环境温度搅拌75分钟。将混合物冷却至-50℃并历时30分钟经由插管加入正丁基锂(2.5mol/l在己烷类中，379ml,948.2mmol)。使反应物逐渐温热至-30℃并搅拌60分钟。逐份加入(2s)-2-三苯甲基氧基甲基氧杂环丙烷(100g,316.1mmol)，同时保持温度低于-10℃。完全加入以后，将反应混合物温热至室温并搅拌2小时。将反应物倒入饱和的氯化铵中，分离各相，并用乙酸乙酯萃取水相。合并有机层并经硫酸镁干燥。过滤并在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过硅胶色谱法纯化，用甲基叔丁基醚:己烷类(10-15%梯度)洗脱，以得到标题化合物(56.22g,54%)。es/msm/z353(m+na)。替代制备1(2s)-1-三苯甲基氧基丁-3-烯-2-醇方案2,步骤a起始原料:将三苯基甲基氯(287g,947.1mmol)、dmap(7.71g,63.1mmol)和三乙胺(140g,1383.5mmol)加入(2s)-丁-2-烯-1,2-二醇(制备参见jacs,1999,121,8649)(64.5g,631mmol)在二氯甲烷(850ml)中的溶液中。在24℃搅拌24小时。加入1n柠檬酸水溶液(425ml)。分离各层并将有机萃取物在减压下浓缩至干燥。加入甲醇(900ml)并冷却至5℃保持1小时。将固体通过过滤进行收集并用5℃甲醇(50ml)洗涤。抛弃固体并将母液在减压下浓缩至干燥。加入甲苯(800ml)并浓缩至268g的质量以得到在48重量%的甲苯溶液中的标题化合物(129g,67%)。制备21-吗啉代-2-[(1s)-1-(三苯甲基氧基甲基)烯丙氧基]乙酮方案2,步骤a:将四丁基硫酸氢铵(83.2g,245.0mmol)和4-(2-氯乙酰基)吗啉(638.50g,3902.7mmol)加入0-5℃的1-三苯甲基氧基丁-3-烯-2-醇(832.4,2519mmol)在甲苯(5800ml)中的溶液中。加入在水(1041ml)中的氢氧化钠(1008.0g,25202mmol)。在0-5℃之间搅拌19小时。加入水(2500ml)和甲苯(2500ml)。分离各层并用水(2×3500ml)洗涤有机萃取物。将有机萃取物在减压下浓缩至干燥。将甲苯(2500ml)加入残余物并然后缓慢地加入正庚烷(7500ml)。搅拌16小时。将得到的固体通过过滤进行收集并用正庚烷(1200ml)洗涤。将所述固体在真空下干燥以得到标题化合物(1075.7g,98%)。制备31-(5-溴-2-氟-苯基)-2-[(1s)-1-(三苯甲基氧基甲基)烯丙氧基]乙酮方案2,步骤b:在维持反应温度低于5℃的速率，将1.3m的异丙基氯化镁氯化锂络合物(3079ml,2000mmol)在thf中的溶液加入4-溴-1-氟-2-碘苯（benze）(673.2g,2237.5mmol)在甲苯(2500ml)中的溶液中。搅拌1小时。在维持反应温度低于5℃的速率，将得到的grignard溶液(5150ml)加入1-吗啉代-2-[(1s)-1-(三苯甲基氧基甲基)烯丙氧基]乙酮(500g,1093mmol)在甲苯(5000ml)中的溶液中。搅拌3小时，同时维持温度低于5℃。加入另外的制备的grignard溶液(429ml)并搅拌1小时。在维持温度低于5℃的速率加入1n柠檬酸水溶液(5000ml)。分离各层并用水(5000ml)洗涤有机萃取物。将溶液在减压下浓缩至干燥。将甲醇(2000ml)加入残余物并浓缩以得到标题化合物作为残余物(793g,73.4%效能,83%)。制备41-(5-溴-2-氟-苯基)-2-[(1s)-1-(三苯甲基氧基甲基)烯丙氧基]乙酮肟方案2,步骤c:将盐酸羟胺(98.3g)加入1-(5-溴-2-氟-苯基)-2-[(1s)-1-(三苯甲基氧基甲基)烯丙氧基]乙酮(450g,707mmol)和醋酸钠(174g)在甲醇(3800ml)中的溶液中。将所述溶液加热至50℃保持2小时。冷却至24℃并浓缩。将水(1000ml)和甲苯(1500ml)加入残余物。分离各层并用甲苯(500ml)萃取水相。合并有机萃取物并用水(2×400ml)洗涤。将溶液在减压下浓缩以得到标题化合物作为残余物(567g,61.4%效能,88%)。制备52-[(1s)-1-(三苯甲基氧基甲基)烯丙氧基]乙酸叔丁酯方案1,步骤b:将(2s)-1-三苯甲基氧基丁-3-烯-2-醇(74.67g,226.0mmol)加入四正丁基硫酸铵(13.26g,22.6mmol)在甲苯(376ml)中的溶液中。加入在水(119ml)中的氢氧化钠(50%质量)，随后加入2-溴乙酸叔丁酯(110.20g,565.0mmol)。将反应混合物在环境温度搅拌18小时。倒入水中，分离各相，并用乙酸乙酯萃取水相。合并有机层并经硫酸镁干燥。将混合物过滤并在减压下浓缩以得到标题化合物(77.86g,77%)。es/msm/z467(m+na)。制备6(1e)-2-[(1s)-1-(三苯甲基氧基甲基)烯丙氧基]乙醛肟方案1,步骤c:将2-[(1s)-1-(三苯甲基氧基甲基)烯丙氧基]乙酸叔丁酯(77.66g,174.7mmol)在二氯甲烷(582.2ml)中的溶液冷却至-78℃。历时35分钟逐滴加入二异丁基氢化铝在己烷类(1mol/l,174.7ml)中的溶液并维持温度低于-70℃。在-78℃搅拌5小时。将盐酸在水中的溶液(2mol/l,192.1ml)逐滴加入反应混合物，同时保持温度低于-60℃。使反应物逐渐温热至环境温度并搅拌60分钟。将有机萃取物分离并用饱和碳酸氢钠洗涤。将溶液经硫酸镁干燥，过滤，并在减压下浓缩以得到残余物。将残余物溶解在二氯甲烷中。加入醋酸钠(28.66g,349.3mmol)，随后加入盐酸羟胺(18.21g,262.0mmol)。在环境温度搅拌18小时。倒入水中，分离各相，并用二氯甲烷萃取水相。合并有机层并经硫酸镁干燥。将混合物过滤并在减压下浓缩以得到标题化合物(68.38g,101%)。es/msm/z386(m-h)。制备7(3ar,4s)-4-(三苯甲基氧基甲基)-3,3a,4,6-四氢呋喃并[3,4-c]异噁唑方案1,步骤d:将(1e)-2-[(1s)-1-(三苯甲基氧基甲基)烯丙氧基]乙醛肟(55.57g,143.4mmol)在叔丁基甲基醚(717ml)中的溶液冷却至5℃。逐滴加入次氯酸钠(5%在水中,591ml,430.2mmol)，同时保持温度低于10℃。在10℃搅拌30分钟。使反应物温热至15℃。在15℃搅拌18小时。将反应混合物用乙酸乙酯稀释并用饱和碳酸氢钠洗涤。分离各相，将有机相用5%亚硫酸氢钠溶液和盐水洗涤。将溶液经硫酸镁干燥，过滤，并在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过硅胶色谱法纯化，用50%甲基叔丁基醚/二氯甲烷:己烷类(20-27%梯度)洗脱，以得到标题化合物(35.84g,65%)。es/msm/z408(m+na)。制备8(3ar,4s,6ar)-6a-(5-溴-2-氟-苯基)-4-(三苯甲基氧基甲基)-3,3a,4,6-四氢呋喃并[3,4-c]异噁唑方案1,步骤e:将4-溴-1-氟-2-碘-苯(86.94g,288.9mmol)在thf(144.5ml)和甲苯(1445ml)中的溶液冷却至-78℃。逐滴加入正丁基锂(2.5m在己烷类中，120ml,288.9mmol)，同时保持温度低于-70℃。在-78℃搅拌30分钟。逐滴加入三氟化硼二乙基乙醚络合物(36.5ml,288.9mmol)，同时保持温度低于-70℃。将所述溶液在-78℃搅拌30分钟。将(3ar,4s)-4-(三苯甲基氧基甲基)-3,3a,4,6-四氢呋喃并[3,4-c]异噁唑(55.69g,144.5mmol)在thf(482ml)中的溶液历时30分钟逐滴加入反应物中，同时保持温度低于-65℃。在-78℃搅拌90分钟。快速地加入饱和氯化铵，同时保持温度低于-60℃。倒入盐水中，并用乙酸乙酯萃取水相。合并有机萃取物并经硫酸镁干燥。过滤并在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过硅胶色谱法纯化，用10-15%乙醚:己烷类(0-70%梯度)洗脱，以得到标题化合物(36.52g,45%)。es/msm/e(79br/81br)560/562[m+h]。替代制备8方案2,步骤d:将1-(5-溴-2-氟-苯基)-2-[(1s)-1-(三苯甲基氧基甲基)烯丙氧基]乙酮肟(458g,502mmol)和氢醌(56.3g511mmol)在甲苯(4000ml)中的溶液在氮气下加热至回流保持27小时。将所述溶液冷却至24℃并加入碳酸钠水溶液(800ml)。分离各层并用甲苯(300ml)萃取水相。合并有机萃取物并用水(2×500ml)洗涤。将溶液在减压下浓缩以得到残余物。加入异丙醇(1500ml)并加热至回流。冷却至24℃并将固体通过过滤进行收集。将所述固体在真空下干燥以得到标题化合物(212g,75%)。制备91-[(3ar,4s,6as)-6a-(5-溴-2-氟-苯基)-4-(三苯甲基氧基甲基)-3,3a,4,6-四氢呋喃并[3,4-c]异噁唑-1-基]乙酮方案2,步骤e:在氮气下将乙酰氯(35.56g,503.9mmol)加入(3ar,4s,6ar)-6a-(5-溴-2-氟-苯基)-4-(三苯甲基氧基甲基)-3,3a,4,6-四氢呋喃并[3,4-c]异噁唑(235.3g,420mmol)、dmap(5.13g,42.0mmol)和吡啶(66.45g,840.1mmol)在二氯甲烷(720ml)中的溶液中，同时维持内部温度低于5℃。搅拌1小时，并然后加入水(300ml)和1m硫酸(300ml)。将混合物搅拌10分钟并分离各层。将有机萃取物收集并用饱和碳酸钠(500ml)和水(500ml)洗涤。将溶液经硫酸镁干燥。过滤并在减压下浓缩以得到作为灰色固体的1-[(3ar,4s,6as)-6a-(5-溴-2-氟-苯基)-4-(三苯甲基氧基甲基)-3,3a,4,6-四氢呋喃并[3,4-c]异噁唑-1-基]乙酮(235g,93%)。制备101-[(3ar,4s,6as)-6a-(5-溴-2-氟苯基)-4-(羟基甲基)四氢-1h,3h-呋喃并[3,4-c][1,2]噁唑-1-基]乙酮方案3,步骤a:在20l带夹套的反应器中，在氮气下将乙酰氯(290ml,4075mmol)加入(3ar,4s,6ar)-6a-(5-溴-2-氟-苯基)-4-(三苯甲基氧基甲基)-3,3a,4,6-四氢呋喃并[3,4-c]异噁唑(1996g,3384mmol)、dmap(56.0g,458mmol)、吡啶(500ml,6180mmol)在二氯甲烷(10l)中的溶液中，同时维持内部温度低于10℃。完全加入(1小时)以后，温热至20℃并搅拌过夜。如果反应是不完全的，加入乙酰氯、dmap、吡啶和二氯甲烷直到观察到完全反应。将反应混合物冷却至0℃并缓慢地加入水(5l)，将反应混合物在10℃搅拌30分钟并分离各层。将有机萃取物收集并用二氯甲烷(1l)洗涤水相。将合并的有机萃取物用1n盐酸水溶液(2×4l)洗涤，将水相用二氯甲烷(2×1l)萃取。将合并的有机萃取物用水(4l)洗涤并在减压下除去溶剂，得到大约5l的总体积。加入90%甲酸(1800ml)并在环境温度静置3天。温热至40℃保持2小时，然后在减压下除去溶剂。将残余物用甲醇(4l)稀释并缓慢地加入饱和碳酸钠水溶液(3l)。加入固体碳酸钠(375g)以将ph调至8-9。在45℃搅拌1小时，然后冷却至环境温度。将固体通过过滤除去，用甲醇(4×500ml)洗涤，然后用2n氢氧化钠水溶液(100ml)处理，并在环境温度静置1小时。将固体通过过滤除去，用甲醇(2×100ml)洗涤。在减压下蒸发溶剂并在乙酸乙酯(5l)和水(2l)之间分配残余物。用乙酸乙酯(2l)萃取水相，并将合并的有机萃取物用盐水(2×1l)洗涤。在减压下除去溶剂，加入甲基叔丁基醚(2.5l)并蒸发至干燥。加入甲基叔丁基醚(4l)并在65℃搅拌1小时，冷却至环境温度并将固体通过过滤进行收集，用甲基叔丁基醚(3×500ml)洗涤。在真空下干燥为米色固体。将该固体在甲苯(7.5l)中加热至110℃直到完全溶解，历时1小时冷却至18℃，并在该温度搅拌1小时。温热至40℃且当沉淀物形成时，再次冷却至18℃。搅拌45分钟然后将固体通过过滤进行收集，用甲苯(2×500ml)洗涤。将所述固体在真空下干燥以得到标题化合物(443.1g,36%,通过lcms确定95%纯度)。在真空下蒸发滤液以得到残余物。将残余物通过硅胶快速色谱法纯化，用20%至100%的乙酸乙酯在异己烷中的溶液洗脱。将含有产物的级分在甲基叔丁基醚(2l)中在60℃制浆30分钟，冷却至环境温度，并将固体通过过滤进行收集，用甲基叔丁基醚(2×200ml)洗涤。将所述固体在真空下干燥以得到作为米色结晶固体的标题化合物(304g,24%,通过lcms确定88%纯度)。将滤液在真空下蒸发成残余物。将残余物通过硅胶快速色谱法纯化，用20%至100%的乙酸乙酯在异己烷中的溶液洗脱以得到标题化合物(57.8g,5%,通过lcms确定88%纯度)。es/ms:m/z(79br/81br)360.0/362.0[m+h]。替代制备10方案3,步骤a:将1-[(3ar,4s,6as)-6a-(5-溴-2-氟-苯基)-4-(三苯甲基氧基甲基)-3,3a,4,6-四氢呋喃并[3,4-c]异噁唑-1-基]乙酮(69g,114.5mmol)加入对甲苯磺酸一水合物(2.2g,11.45mmol)、二氯甲烷(280ml)和甲醇(700ml)的15℃溶液中。搅拌18小时，并然后在减压下除去溶剂。将残余物用二氯甲烷(350ml)稀释并加入1m碳酸钠水溶液(140ml)和水(140ml)。分离各层并在减压下蒸发有机层。将甲苯(350ml)加入残余物并加热至回流保持1小时。在10℃/小时的速率冷却至10-15℃。将固体通过过滤进行收集并用甲苯(70ml)洗涤。将所述固体在真空下干燥以得到作为灰色固体的标题化合物(30g,65%)。制备11(3ar,4s,6as)-1-乙酰基-6a-(5-溴-2-氟-苯基)-3,3a,4,6-四氢呋喃并[3,4-c]异噁唑-4-甲酸方案3,步骤b:在20l带夹套的反应器中，将水(2l)加入1-[(4s,6as)-6a-(5-溴-2-氟-苯基)-4-(羟基甲基)-3,3a,4,6-四氢呋喃并[3,4-c]异噁唑-1-基]乙酮(804.9g,2177mmol)、tempo(40.0g,251mmol)在乙腈(4.5l)中的混悬液中，并冷却至5℃的内部温度。历时30分钟逐份加入(二乙酰氧基碘)苯(1693g,4993.43mmol)。使用反应器冷却控制放热，并然后保持在20℃直到lcms显示完全反应。在环境温度缓慢地加入亚硫酸氢钠(70g,672.68mmol)在水(300ml)中的混悬液，同时维持内部温度低于25℃。搅拌30分钟并然后冷却至5℃。加入水(2l)，然后历时1小时缓慢地加入47重量%的氢氧化钠水溶液(780ml)，同时维持内部温度低于10℃。加入乙酸乙酯(2l)和异己烷(5l)，剧烈搅拌并分离各层。将双相有机层用水(1l)萃取，并将合并的水相用甲基叔丁基醚(2.5l)洗涤。将水性提取物冷却至5℃并历时30分钟缓慢地加入37%盐酸(1.4l)，同时维持内部温度约5℃。加入乙酸乙酯(5l)，分离各层并将有机层用盐水(3×1l)洗涤。将合并的水性提取物用乙酸乙酯(2.5l)萃取，将合并的有机层用盐水(1l)洗涤，然后用硫酸钠干燥，并过滤。将有机物用庚烷(2.5l)稀释并在减压下蒸发至干燥。加入甲基叔丁基醚(1.5l)和庚烷(1.5l)并蒸发至干燥。加入庚烷(2.5l)并蒸发至干燥2次。加入庚烷(500ml)和甲基叔丁基醚(500ml)并在40℃搅拌30分钟，然后将沉淀物通过过滤进行收集，用庚烷/甲基叔丁基醚(1:1,1l)洗涤，然后用甲基叔丁基醚(3×300ml)洗涤并风干以得到作为米色结晶固体的标题化合物(779g,91%)。es/ms:m/z(79br/81br)374.0/376.0[m+h]。[α]d20=-19.0°(c=1.004,氯仿)。替代制备11方案3,步骤b:将水(150ml)和乙腈(150ml)加入1-[(4s,6as)-6a-(5-溴-2-氟-苯基)-4-(羟基甲基)-3,3a,4,6-四氢呋喃并[3,4-c]异噁唑-1-基]乙酮(30g,73.3mmol)、tempo(1.14g,7.30mmol)和(二乙酰氧基碘)苯(51.9g,161mmol)。冷却至15℃并搅拌2小时。在环境温度缓慢地加入硫代硫酸钠(21g)和碳酸钾(22g)在水(150ml)中的溶液。搅拌1小时并然后加入甲基叔丁基醚(150ml)。分离各层并将水层的ph用浓硫酸调至2-3。加入乙酸乙酯(150ml)并分离各层。在减压下蒸发有机层至干燥。加入正庚烷(90ml)并加热至回流保持1小时。冷却至15℃并然后将沉淀物通过过滤进行收集，用正庚烷(90ml)洗涤。在真空下干燥以得到作为白色固体的标题化合物(27g,98%)。制备12(3ar,4s,6as)-1-乙酰基-6a-(5-溴-2-氟苯基)-n-甲氧基-n-甲基四氢-1h,3h-呋喃并[3,4-c][1,2]噁唑-4-甲酰胺方案3,步骤c:在10l带夹套的反应器中，在氮气下将(3ar,4s,6as)-1-乙酰基-6a-(5-溴-2-氟-苯基)-3,3a,4,6-四氢呋喃并[3,4-c]异噁唑-4-甲酸(771g,2019mmol)在二氯甲烷(7.0l)中的溶液冷却至0℃，并历时40分钟逐份加入cdi(400g,2421mmol)。将反应器夹套冷却至-20℃并搅拌1小时，并然后历时约30分钟逐份加入n,o-二甲基羟胺盐酸盐(260.0g,2612mmol)。在-20℃搅拌1小时，在0℃搅拌2小时，并在10℃搅拌7小时。加入cdi(175g,1058mmol)并在10℃搅拌过夜。在10℃加入另外的cdi(180g,1088mmol)并搅拌1小时，然后加入n,o-二甲基羟胺盐酸盐(140g,1407mmol)并继续在10℃搅拌。如果反应是不完全的，先后进一步加载cdi和n,o-二甲基羟胺盐酸盐，直到观察到完全反应。将反应混合物冷却至5℃并用1n盐酸水溶液(5l)洗涤，然后用2n盐酸水溶液(5l)洗涤。将合并的水溶液用二氯甲烷(1l)萃取，合并有机萃取物并用水(2.5l)、1n氢氧化钠水溶液(2.5l)和水(2.5l)洗涤，经硫酸镁干燥，过滤，并在减压下蒸发以得到残余物。加入甲基叔丁基醚(3l)并在减压下蒸发。加入另外的甲基叔丁基醚(2l)并在50℃搅拌1小时，冷却至25℃并搅拌30分钟。将得到的固体通过过滤进行收集，用甲基叔丁基醚(2×500ml)洗涤并在真空下干燥以得到作为白色固体的标题化合物(760g,88%)。es/ms:m/z(79br/81br)417.0/419.0[m+h]。替代制备12方案3,步骤c:在氮气下将(3ar,4s,6as)-1-乙酰基-6a-(5-溴-2-氟-苯基)-3,3a,4,6-四氢呋喃并[3,4-c]异噁唑-4-甲酸(27g,70.7mmol)在n,n-二甲基甲酰胺(135ml)中的溶液冷却至0℃，并加入cdi(14.9g,91.9mmol)。搅拌1小时并然后加入n,o-二甲基羟胺盐酸盐(9.0g,92mmol)和三乙胺(14.3g,141mmol)。在15℃搅拌16小时。将反应混合物冷却至0℃并加入0.5m硫酸水溶液(675ml)。搅拌1小时。将得到的固体通过过滤进行收集。将固体在甲基叔丁基醚(90ml)中制浆1小时。将固体通过过滤进行收集，用甲基叔丁基醚(30ml)洗涤。在真空下干燥以得到作为固体的标题化合物(23g,78%)。制备131-[(3ar,4s,6as)-1-乙酰基-6a-(5-溴-2-氟-苯基)-3,3a,4,6-四氢呋喃并[3,4-c]异噁唑-4-基]乙酮方案3,步骤d:在20l带夹套的反应器中，将(3ar,4s,6as)-1-乙酰基-6a-(5-溴-2-氟苯基)-n-甲氧基-n-甲基四氢-1h,3h-呋喃并[3,4-c][1,2]噁唑-4-甲酰胺(654.0g,1536mmol)在thf(10l)中的溶液冷却至-60℃并逐滴加入甲基溴化镁在2-甲基四氢呋喃(660ml,2110mmol)中的3.2m溶液，同时维持内部温度低于-40℃。将反应混合物在-40℃搅拌30分钟，然后冷却至-50℃并加入1n盐酸水溶液(2l)在thf(2l)中的溶液，同时维持内部温度低于-38℃。使温度升高至10℃并加入乙酸乙酯(5l)和水(1l)，搅拌并使内部温度达到5℃并分离各层。将水层用乙酸乙酯(1l)萃取并将有机萃取物合并。将有机萃取物用水(2l)洗涤，并将水层用乙酸乙酯(1l)萃取。合并有机萃取物并用盐水(3×2l)洗涤，然后经硫酸镁干燥，过滤，并在减压下蒸发至残余物。加入环己烷(2.5l)，在60℃搅拌1小时然后在20℃搅拌30分钟，并将固体通过过滤进行收集，用环己烷(500ml)洗涤。将所述固体在真空下干燥以得到作为白色固体的标题化合物(565g,99%)。es/ms:m/z(79br/81br)372.0/374.0[m+h],[α]d20=-58.0°(c=1.000,氯仿)。替代制备13方案3,步骤d:将(3ar,4s,6as)-1-乙酰基-6a-(5-溴-2-氟苯基)-n-甲氧基-n-甲基四氢-1h,3h-呋喃并[3,4-c][1,2]噁唑-4-甲酰胺(4.0g,9.59mmol)在thf(60ml)中的溶液冷却至-5℃，并逐滴加入甲基溴化镁在2-甲基四氢呋喃(5.0ml,15mmol)中的3.0m溶液，同时维持内部温度在-5和0℃之间。将反应混合物在-5和0℃之间搅拌60分钟，然后加入饱和氯化铵溶液(20ml)。加入甲基叔丁基醚(40ml)，使内部温度达到5℃并分离各层。在减压下蒸发有机层至残余物。加入正庚烷(50ml)，搅拌，并将固体通过过滤进行收集。将所述固体在真空下干燥以得到作为固体的标题化合物(3.0g,77%)。制备141-[(3ar,4s,6as)-6a-(5-溴-2-氟苯基)-4-(1,1-二氟乙基)四氢-1h,3h-呋喃并[3,4-c][1,2]噁唑-1-基]乙酮方案3,步骤e:在0-5℃将1-[(3ar,4s,6as)-1-乙酰基-6a-(5-溴-2-氟-苯基)-3,3a,4,6-四氢呋喃并[3,4-c]异噁唑-4-基]乙酮(5.08g,13.6mmol)一次性加入xtalfluor-m®(10.02g,39.18mmol)在无水二氯甲烷(100ml)中的搅拌混悬液中。将所述混合物搅拌10分钟并历时10分钟逐滴加入三乙胺三氢氟酸盐(4.5ml,27mmol)。将反应混合物在冰浴中搅拌8小时，然后温热至环境温度并搅拌过夜。加入饱和碳酸钠水溶液(100ml)并搅拌1小时。分离各层并将水层用二氯甲烷(2×50ml)萃取。合并有机萃取物并用饱和碳酸氢钠水溶液(100ml)、2n盐酸水溶液(2×100ml)和盐水(100ml)洗涤。蒸发至干燥以得到浅棕色固体并在60℃溶解在甲基叔丁基醚(300ml)中。将热溶液过滤并蒸发滤液以得到棕色固体(5.3g,81%,通过lcms确定82%纯度)，将其不经进一步纯化地使用。es/ms:m/z(79br/81br)393.8/395.8[m+h]。替代制备14方案3,步骤e:在-14℃将xtalfluor-m®(1.21kg,4.73mol)逐份加入1-[(3ar,4s,6as)-1-乙酰基-6a-(5-溴-2-氟-苯基)-3,3a,4,6-四氢呋喃并[3,4-c]异噁唑-4-基]乙酮(565g,1.51mol)在无水二氯甲烷(5l)中的搅拌溶液中。将所述混合物搅拌10分钟并历时20分钟逐滴加入三乙胺三氢氟酸盐(550g,3.34mol)。将反应混合物在-10℃搅拌大约10小时，然后温热至环境温度并搅拌过夜。缓慢地加入50%氢氧化钠水溶液(750ml)，同时维持内部温度低于10℃，然后加入水(1.5l)和饱和碳酸氢钠水溶液(1l)并搅拌30分钟。分离各层并将水层用二氯甲烷(1l)萃取。合并有机萃取物并用盐水(3l)、2n盐酸水溶液(5l)和盐水(3l)洗涤。蒸发以得到残余物并通过硅胶色谱法纯化，用50-100%的二氯甲烷在异己烷中的溶液洗脱，然后用10%的甲基叔丁基醚在二氯甲烷中的溶液洗脱，以得到作为白色粉末的标题化合物(467g,73%,通过lcms确定94%纯度)。es/ms:m/z(79br/81br)393.8/395.8[m+h]。制备15(3ar,4s,6as)-6a-(5-溴-2-氟-苯基)-4-(1,1-二氟乙基)-3,3a,4,6-四氢-1h-呋喃并[3,4-c]异噁唑方案3,步骤f:在10l带夹套的反应器中将37重量%的盐酸水溶液(1.3l,16mol)加入1-[(3ar,4s,6as)-6a-(5-溴-2-氟苯基)-4-(1,1-二氟乙基)四氢-1h,3h-呋喃并[3,4-c][1,2]噁唑-1-基]乙酮(570g,1.45mol)在1,4-二噁烷(5l)中的溶液中，并在100℃搅拌大约3小时或直到lcms显示完全反应。将反应混合物冷却至10℃，用水(1l)稀释并缓慢地加入50重量%的氢氧化钠水溶液(800ml)和水(1l)的混合物，同时维持内部温度低于20℃。加入乙酸乙酯(2.5l)并剧烈搅拌，然后分离各层并将有机相用盐水(2l)、另外盐水(1l)和水(1l)洗涤。经硫酸镁干燥，过滤，并在减压下浓缩至干燥以得到残余物。加入环己烷(2.5l)并蒸发至干燥，然后重复以得到作为棕色油的标题化合物(527g,89%,通过lcms确定86%纯度)。es/ms:m/z(79br/81br)351.8/353.8[m+h]。制备16[(2s,3r,4s)-4-氨基-4-(5-溴-2-氟苯基)-2-(1,1-二氟乙基)四氢呋喃-3-基]甲醇方案3,步骤g:在环境温度将锌粉(6.0g,92mmol)加入(3ar,4s,6as)-6a-(5-溴-2-氟-苯基)-4-(1,1-二氟乙基)-3,3a,4,6-四氢-1h-呋喃并[3,4-c]异噁唑(5.06g,13.4mmol)在乙酸(100ml)中的溶液中并搅拌过夜。将混合物用乙酸乙酯(200ml)和水(300ml)稀释并在加入碳酸钠(97g,915mmol)的同时剧烈搅拌。分离各层并将有机层用盐水(2×200ml)洗涤，经硫酸镁干燥，过滤，并浓缩以得到残余物。将残余物通过硅胶色谱法纯化，用0%至100%的甲基叔丁基醚在异己烷中的溶液洗脱，得到作为蜡样固体的标题化合物(4.67g,89%,通过lcms确定90%纯度)。es/ms:m/z(79br/81br)354.0/356.0[m+h]。替代制备16方案3,步骤g:在20℃将锌粉(200g,3.06mol)逐份加入(3ar,4s,6as)-6a-(5-溴-2-氟-苯基)-4-(1,1-二氟乙基)-3,3a,4,6-四氢-1h-呋喃并[3,4-c]异噁唑(304g,75%纯度,647mmol)在乙酸(2l)和水(2l)中的溶液中，然后温热至40℃并搅拌过夜。将混合物用水(2l)稀释并在加入碳酸钠(4kg,43.4mol)的同时剧烈搅拌，然后用另外的碳酸钠调至ph8-9。加入乙酸乙酯(5l)和水(2.5l)，搅拌30分钟并穿过硅藻土过滤，用2:1乙腈/水洗涤。分离各层，将水相用乙酸乙酯(2×2.5l)萃取，并将合并的有机萃取物用盐水(2×2.5l)洗涤，经硫酸镁干燥，过滤，并浓缩以得到残余物。通过sfc纯化残余物，柱:chiralpakad-h(5),50×250mm；洗脱液:12%乙醇(0.2%二乙基甲基胺在co2中；流速:340g/分钟，在uv220nm)，以得到作为白色固体的标题化合物(197.7g,84%)。[α]d20=-6.93°(c=0.678,氯仿)。es/ms:m/z(79br/81br)354.0/356.0[m+h]。制备17[(2s,3r,4s)-4-氨基-4-(5-溴-2-氟-苯基)-2-(三苯甲基氧基甲基)四氢呋喃-3-基]甲醇方案1,步骤f:将(3ar,4s,6ar)-6a-(5-溴-2-氟-苯基)-4-(三苯甲基氧基甲基)-3,3a,4,6-四氢呋喃并[3,4-c]异噁唑(31.30g,55.9mmol)加入乙酸(186ml)中以得到混悬液。加入锌(25.6g,391mmol)并将反应混合物剧烈搅拌18小时。将混合物用甲苯稀释并穿过硅藻土过滤。在减压下浓缩滤液。将残余物用乙酸乙酯溶解，用盐水和饱和碳酸氢钠洗涤。分离各相，经硫酸镁干燥，过滤，并在减压下浓缩以得到标题化合物(31.35g,99%)。es/msm/e(79br/81br)562/564[m+h]。制备18n-[[(3s,4r,5s)-3-(5-溴-2-氟-苯基)-4-(羟基甲基)-5-(三苯甲基氧基甲基)四氢呋喃-3-基]硫代氨基甲酰基]苯甲酰胺方案1,步骤g:将[(2s,3r,4s)-4-氨基-4-(5-溴-2-氟-苯基)-2-(三苯甲基氧基甲基)四氢呋喃-3-基]甲醇(31.35g,55.73mmol)溶解在二氯甲烷(557ml)中并冷却至5℃。加入苯甲酰基异硫氰酸酯(9.74ml,72.45mmol)。加入结束以后，将反应混合物温热至室温并搅拌2小时。倒入饱和碳酸氢钠，分离各相，并用二氯甲烷萃取水相。合并有机萃取物并经硫酸镁干燥。将溶液过滤并在减压下浓缩以得到标题化合物(42.95g,106%)。es/msm/e(79br/81br)747/749[m+na]。制备19n-[(4as,5s,7as)-7a-(5-溴-2-氟苯基)-5-(1,1-二氟乙基)-4a,5,7,7a-四氢-4h-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基]苯甲酰胺方案3,步骤h:在环境温度将苯甲酰基异硫氰酸酯(1.80ml,13.3mmol)加入[(2s,3r,4s)-4-氨基-4-(5-溴-2-氟苯基)-2-(1,1-二氟乙基)四氢呋喃-3-基]甲醇(4.67g,11.9mmol)在二氯甲烷(20ml)中的溶液中1小时，直到lcms显示反应完全。在真空下蒸发反应混合物至残余物。加入环己烷(50ml)，温热至60℃并加入甲基叔丁基醚直到沉淀物完全溶解(100ml)。将热溶液过滤，冷却至室温并在减压下缓慢地蒸发直到形成白色沉淀物。在减压下除去溶剂并将残余物溶解在无水二氯甲烷(30ml)中，加入吡啶(2.4ml,30mmol)并将所述溶液冷却至-25℃。历时30分钟逐滴加入三氟甲烷磺酸酐(2.2ml13mmol)并历时1小时使其温热至0℃。将反应混合物用水(25ml)、2n盐酸水溶液(25ml)、水(25ml)、饱和碳酸氢钠水溶液(25ml)和水(25ml)洗涤，经硫酸镁干燥，过滤，并浓缩至干燥。将残余物通过硅胶色谱法纯化，用5%的甲基叔丁基醚在二氯甲烷中的溶液洗脱，以得到作为浅黄色泡沫的标题化合物(5.0g,76%,通过lcms确定90%纯度)。es/ms:m/z(79br/81br)499.0/501.0[m+h]。替代制备19方案3,步骤h:在30℃将苯甲酰基异硫氰酸酯(98ml,724.9mmol)加入[(2s,3r,4s)-4-氨基-4-(5-溴-2-氟苯基)-2-(1,1-二氟乙基)四氢呋喃-3-基]甲醇(197.6g,546.7mmol)在二氯甲烷(1.2l)中的溶液中1小时。加入cdi(101g,610.4mmol)并在环境温度搅拌3小时。进一步加载cdi以确保硫脲中间体的完全消耗。加热至90℃保持42小时并将所述溶液冷却至环境温度。将反应混合物用乙酸乙酯(2l)稀释并加入2n盐酸水溶液(2l)，搅拌，加入盐水(1l)并分离各层。将有机层用2n盐酸水溶液(0.5l)、盐水(2×1l)和饱和碳酸氢钠水溶液(1l)洗涤。经硫酸镁干燥，过滤，并浓缩以得到残余物。将残余物通过硅胶色谱法纯化，用0-100%的乙酸乙酯在异己烷中的溶液洗脱以得到作为浅黄色固体的标题化合物(234g,83%)。es/ms:m/z(79br/81br)499.0/501.0[m+h]。制备20n-[(4as,5s,7as)-7a-(5-溴-2-氟-苯基)-5-(三苯甲基氧基甲基)-4,4a,5,7-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基]苯甲酰胺方案1,步骤h:将n-[[(3s,4r,5s)-3-(5-溴-2-氟-苯基)-4-(羟基甲基)-5-(三苯甲基氧基甲基)四氢呋喃-3-基]硫代氨基甲酰基]苯甲酰胺(42.95g,59.18mmol)溶解在二氯甲烷(591ml)中并冷却至-20℃。加入吡啶(12.0ml,148.0mmol)，随后加入三氟甲烷磺酸酐(10.97ml,65.10mmol)。监测加入，同时保持温度低于-20℃。将反应混合物在-20℃搅拌30分钟。将反应混合物温热至室温。倒入饱和氯化铵，分离各相，并用二氯甲烷萃取水相。合并有机萃取物并经硫酸镁干燥。将溶液过滤并在减压下浓缩以得到标题化合物(45.24g,108%)。es/msm/e(79br/81br)707/709[m+h]。制备21n-[(4as,5s,7as)-7a-(5-溴-2-氟-苯基)-5-(羟基甲基)-4,4a,5,7-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基]苯甲酰胺方案1,步骤i:将n-[(4as,5s,7as)-7a-(5-溴-2-氟-苯基)-5-(三苯甲基氧基甲基)-4,4a,5,7-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基]苯甲酰胺(45.24,63.93mmol)溶解在甲酸(160ml)中并在环境温度搅拌1小时。历时5分钟加入水(29ml)。搅拌50分钟。将混合物在减压下浓缩至残余物。将残余物溶解在甲醇(639ml)中，加入三乙胺(26.7ml,191.8mmol)并在环境温度搅拌过夜。倒入盐水，分离各相，并用氯仿萃取水相。合并有机萃取物并经硫酸镁干燥。过滤并在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过硅胶色谱法纯化，用丙酮:己烷类(25-38%梯度)洗脱，以得到标题化合物(16.04g,54%)。es/msm/e(79br/81br)465/467[m+h]。制备22(4as,5s,7as)-2-苯甲酰氨基-7a-(5-溴-2-氟-苯基)-4,4a,5,7-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-5-甲酸方案1,步骤j:将n-[(4as,5s,7as)-7a-(5-溴-2-氟-苯基)-5-(羟基甲基)-4,4a,5,7-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基]苯甲酰胺(16.04g,34.47mmol)加入dmso(172ml)中。加入2-碘酰基苯甲酸(35.56g,120.70mmol)并在环境温度搅拌3小时。将反应混合物用氯仿(300ml)稀释并倒入饱和氯化铵(400ml)。分离有机相并经硫酸镁干燥。将溶液过滤并在减压下浓缩以得到残余物。将残余物溶解在乙酸乙酯(400ml)中并用饱和氯化铵(2×250ml)洗涤。分离有机相，经硫酸镁干燥，过滤，并在减压下浓缩以得到残余物。将残余物溶解在二氯甲烷:甲醇混合物中，并加入乙醚直到固体沉淀。将固体通过过滤进行收集并在减压下干燥以得到标题化合物(5.78g,35%)。es/msm/e(79br/81br)479/481[m+h]。制备23(4as,5s,7as)-2-苯甲酰氨基-7a-(5-溴-2-氟-苯基)-n-甲氧基-n-甲基-4,4a,5,7-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-5-甲酰胺方案1,步骤k:将(4as,5s,7as)-2-苯甲酰氨基-7a-(5-溴-2-氟-苯基)-4,4a,5,7-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-5-甲酸(5.78g,12.1mmol)溶解在二氯甲烷(201ml)和n,o-二甲基羟胺盐酸盐(1.76g,18.1mmol)中。加入三乙胺(5.29ml,36.2mmol)，随后加入hatu(7.02g,18.1mmol)。在环境温度搅拌3天。倒入饱和氯化铵，分离各相，并用乙酸乙酯萃取水相。合并有机萃取物并经硫酸镁干燥。过滤并在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过硅胶色谱法纯化，用乙酸乙酯:二氯甲烷(0-50%梯度)洗脱以得到标题化合物(4.15g,66%)。es/msm/e(79br/81br)522/524[m+h]。制备24n-[(4as,5s,7as)-5-乙酰基-7a-(5-溴-2-氟-苯基)-4,4a,5,7-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基]苯甲酰胺方案1,步骤l:向(4as,5s,7as)-2-苯甲酰氨基-7a-(5-溴-2-氟-苯基)-n-甲氧基-n-甲基-4,4a,5,7-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-5-甲酰胺(1.51g,2.89mmol)在thf(57.8ml)中的-78℃溶液中逐滴加入甲基溴化镁(3.0mol/l在乙醚中，4.8ml,14.5mmol)。将反应物在-78℃搅拌5分钟并使其逐渐温热至环境温度。搅拌30分钟。将反应用甲醇(4ml)淬灭，用饱和氯化铵稀释，并用乙酸乙酯萃取。合并有机萃取物并经硫酸钠干燥。过滤并在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过硅胶色谱法纯化，用乙酸乙酯:己烷类(0-100%梯度)洗脱以得到标题化合物(1.28g,93%)。es/msm/e(79br/81br)477/479[m+na]。制备25n-[(4as,5s,7as)-7a-(5-溴-2-氟-苯基)-5-(1,1-二氟乙基)-4,4a,5,7-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基]苯甲酰胺方案1,步骤m:将二氯甲烷(34ml)、deoxo-fluor®(1.52ml,6.88mmol)和三氟化硼二乙基乙醚络合物(0.89ml,6.88mmol)加到一起。在环境温度搅拌2小时。一次性加入n-[(4as,5s,7as)-5-乙酰基-7a-(5-溴-2-氟-苯基)-4,4a,5,7-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基]苯甲酰胺(0.821g,1.72mmol)，随后加入三乙胺三氢氟酸盐(1.13ml,6.88mmol)。在环境温度搅拌18小时。倒入饱和氯化铵，分离各相，并用乙酸乙酯萃取水相。合并有机萃取物并经硫酸镁干燥。过滤并在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过硅胶色谱法纯化，用二氯甲烷:己烷类(80-100%梯度)洗脱，以得到标题化合物(0.552g,64%)。es/msm/e(79br/81br)499/501[m+h]。制备26n-[(5s,7as)-5-(1,1-二氟乙基)-7a-{2-氟-5-[(三氟乙酰基)氨基]苯基}-4a,5,7,7a-四氢-4h-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基]苯甲酰胺方案4,步骤a:将n-[(4as,5s,7as)-7a-(5-溴-2-氟苯基)-5-(1,1-二氟乙基)-4a,5,7,7a-四氢-4h-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基]苯甲酰胺(234g,454.6mmol)溶解在1,4-二噁烷(2l)中，并在氮气流下加入4å分子筛(37g)、2,2,2-三氟乙酰胺(91g,780.9mmol)、精细粉碎的碳酸钾(114g,824.9mmol)、碘化钠(117g,780.6mmol)、碘化亚铜(i)(17.5g,91.9mmol)和外消旋的反式-n,n’-二甲基-1,2-环己烷二胺(20g,140.6mmol)。将容器用3次真空氮气切换进行净化，并加热至123℃保持18小时。冷却至环境温度并将溶液穿过硅藻土过滤，并用乙酸乙酯洗涤。加入饱和氯化铵水溶液(2l)并剧烈搅拌45分钟。分离各层并将有机层用饱和氯化铵水溶液(3×1l)、盐水(300ml)洗涤，经硫酸镁干燥，过滤，并蒸发以得到残余物。将残余物通过硅胶色谱法纯化，用0-100%的乙酸乙酯在异己烷中的溶液洗脱以得到作为浅黄色固体的标题化合物(297.9g,95%,81%纯度)。es/ms:m/z532.0[m+h]。制备27n-[(4as,5s,7as)-7a-(5-氨基-2-氟-苯基)-5-(1,1-二氟乙基)-4,4a,5,7-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基]苯甲酰胺方案1,步骤n:在乙醇(30ml)中将n-[(4as,5s,7as)-7a-(5-溴-2-氟-苯基)-5-(1,1-二氟乙基)-4,4a,5,7-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基]苯甲酰胺(0.372g,0.74mmol)与(1r,2r)-n,n'-二甲基-1,2-环己烷二胺(0.037ml,0.22mmol)组合。加入叠氮化钠(0.194g,2.98mmol)，随后加入l-抗坏血酸钠(0.66m溶液,0.50ml,0.33mmol)。将烧瓶的顶部用氮气净化，并加入硫酸铜(0.33m溶液,0.68ml,0.22mmol)。将反应混合物加热至80℃并搅拌5小时。将反应物冷却并加入冷水。将混合物用乙酸乙酯萃取。合并有机萃取物并经硫酸钠干燥。过滤并在减压下浓缩以得到残余物。在乙醇(50ml)和thf(10ml)中将残余物与钯(10质量%在碳上,0.35g,0.16mmol)组合。将混合物用氮气和氢气净化。在环境温度在50psi的氢气下搅拌1小时。滤出催化剂并用乙酸乙酯洗涤。将溶液在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过硅胶色谱法纯化，用乙酸乙酯:二氯甲烷(0-20%梯度)洗脱，以得到标题化合物(0.2184g,67%)。es/msm/z436(m+h)。替代制备27方案4,步骤b:在室温将7n的氨在甲醇中的溶液(600ml,4.2mol)加入n-[(5s,7as)-5-(1,1-二氟乙基)-7a-{2-氟-5-[(三氟乙酰基)氨基]苯基}-4a,5,7,7a-四氢-4h-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基]苯甲酰胺(250g,80%纯度,376.3mmol)在甲醇(200ml)中的搅拌混悬液中，并在环境温度搅拌18小时。蒸发至干燥以得到作为棕色胶质的标题化合物(190g,375.2mmol,86%纯度)。es/ms:m/z436.0[m+h]。制备28(4as,5s,7as)-7a-(5-氨基-2-氟苯基)-5-(1,1-二氟乙基)-4a,5,7,7a-四氢-4h-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-胺方案4,步骤b:将n-[(4as,5s,7as)-7a-(5-氨基-2-氟-苯基)-5-(1,1-二氟乙基)-4,4a,5,7-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基]苯甲酰胺(216.4g,88%纯度,435.9mmol)溶解在吡啶(400ml)、乙醇(100ml)和thf(300ml)中。加入o-甲氧基胺盐酸盐(190g,2275.0mmol)并在环境温度搅拌18小时。用2-甲基四氢呋喃(1l)稀释并用水(2×300ml)洗涤。分离有机层并将35%的氢氧化铵水溶液(100ml)加入水层。用2-甲基四氢呋喃(300ml)萃取，然后用氯化钠饱和并用2-甲基四氢呋喃(2×300ml)萃取。合并有机萃取物，用盐水(300ml)洗涤并蒸发至残余物。溶解在甲醇(200ml)中，加入7n的氨在甲醇中的溶液(100ml,700mmol)并在室温搅拌18小时。如果残留任何三氟乙酰胺杂质，可以加入另外的氨。在减压下除去溶剂并将残余物溶解在2n盐酸水溶液(1.5l)中。用二氯甲烷(6×500ml)萃取，合并有机层并在减压下除去溶剂至约1l的总体积。用2n盐酸水溶液(300ml)洗涤和合并所有水性洗液。加入2-甲基四氢呋喃(1l)并在用碳酸氢钠将ph调至碱性的同时剧烈搅拌，直到观察到没有气体形成。分离各层并将水层用2-甲基四氢呋喃(2×500ml)萃取。将合并的有机萃取物用硫酸镁干燥，过滤，并蒸发以得到棕色固体。将残余物通过硅胶色谱法纯化，用0-100%的二氯甲烷在thf中的溶液洗脱。用乙酸乙酯/庚烷蒸发含有产物的级分以得到作为细米色粉末的标题化合物(106g,70%,95%纯度)。es/ms:m/z332.0[m+h],[α]d20=+42.11°(c=0.532,氯仿)。制备295-(1h-1,2,4-三唑-1-基)吡嗪-2-甲酸将5-氯吡嗪-2-甲酸甲酯(124g,718.55mmol)、1h-1,2,4-三唑(198.5g,2874.2mmol)和碳酸钾(297.92g,2155.6mmol)在n,n-二甲基甲酰胺(1l)中的混合物在100℃搅拌15小时。冷却至环境温度并倒入水(2l)中。使用浓缩的盐酸水溶液(约500ml)将溶液的ph调至2-3并搅拌30分钟。将得到的固体通过过滤进行收集并用水洗涤。加入水(500ml)和乙醇(500ml)，加热至50-60℃保持4小时，并冷却至环境温度。将固体通过过滤进行收集并在真空下在40℃干燥以得到作为白色固体的标题化合物。es/ms:m/z190.0(m-h)。制备30n-[3-[(4as,5s,7as)-2-苯甲酰氨基-5-(1,1-二氟乙基)-4,4a,5,7-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-7a-基]-4-氟-苯基]-5-(1,2,4-三唑-1-基)吡嗪-2-甲酰胺方案3,步骤a:在二氯甲烷(4ml):二甲基甲酰胺(1ml)中将n-[(4as,5s,7as)-7a-(5-氨基-2-氟-苯基)-5-(1,1-二氟乙基)-4,4a,5,7-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基]苯甲酰胺(0.139g,0.32mmol)、5-(1h-1,2,4-三唑-1-基)吡嗪-2-甲酸(0.0852g,0.45mmol)和hoat(0.0575g,0.41mmol)加到一起。将n,n-二异丙基乙胺(0.11ml,0.63mmol)加入溶液中，随后一次性加入edci(0.079g,0.41mmol)。将反应混合物在环境温度搅拌18小时。将溶液用乙酸乙酯稀释，用水和盐水洗涤，并分离各相。用乙酸乙酯萃取。合并有机萃取物并经硫酸镁干燥。将溶液过滤并在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过硅胶色谱法纯化，用乙酸乙酯:二氯甲烷(0-30%梯度)洗脱，以得到标题化合物(0.1140g,59%)。es/msm/z609(m+h)。实施例1n-[3-[(4as,5s,7as)-2-氨基-5-(1,1-二氟乙基)-4,4a,5,7-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-7a-基]-4-氟-苯基]-5-(1,2,4-三唑-1-基)吡嗪-2-甲酰胺方案3,步骤b:将n-[3-[(4as,5s,7as)-2-苯甲酰氨基-5-(1,1-二氟乙基)-4,4a,5,7-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-7a-基]-4-氟-苯基]-5-(1,2,4-三唑-1-基)吡嗪-2-甲酰胺(0.1148g,0.189mmol)、o-甲氧基胺盐酸盐(0.1575g,1.886mmol)和吡啶(0.15ml,1.886mmol)在thf(2ml)和乙醇(2ml)中的混合物在45℃加热5小时。将反应混合物冷却至环境温度并搅拌2天。将溶液在减压下浓缩以得到残余物。将残余物通过硅胶色谱法纯化，用7n的nh3在甲醇中的溶液:二氯甲烷(0-3%梯度)洗脱，以得到标题化合物(0.086g,90%)。es/msm/z505(m+h)。替代制备实施例1方案4步骤d:在氮气氛下在50℃搅拌(4as,5s,7as)-7a-(5-氨基-2-氟苯基)-5-(1,1-二氟乙基)-4a,5,7,7a-四氢-4h-呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-胺(96.5g,291mmol)在乙酸乙酯(1l)中的溶液，并将5-(1h-1,2,4-三唑-1-基)吡嗪-2-甲酸(84g,439.45mmol)缓慢地加入温溶液中。搅拌10分钟并加入t3p®(1.67m在乙酸乙酯中,350ml,585mmol)，并在50℃搅拌17小时。冷却至环境温度，用二氯甲烷(1l)稀释并搅拌，同时用碳酸钠在水中的溶液(128g,1.21mol在1l中)淬灭。用二氯甲烷(1l)和水(2l)稀释并剧烈搅拌1小时。穿过硅藻土过滤，并用二氯甲烷(3×500ml)、甲醇(500ml)、水(500ml)、饱和碳酸氢钠水溶液(500ml)和1:1甲醇:二氯甲烷(6×500ml)洗涤。分离各层并将水层用二氯甲烷(3×1l)萃取。合并所有有机相并蒸发以得到残余物。将残余物在二氯甲烷(1l)中超声处理15分钟并将固体通过过滤进行收集，用二氯甲烷(5×200ml)洗涤。加入饱和碳酸氢钠水溶液直到得到ph8，并与二氯甲烷(1l)和甲醇(500ml)一起剧烈搅拌。通过过滤除去固体，并用二氯甲烷(2×500ml)萃取滤液。将固体用二氯甲烷:甲醇(1:1,500ml)溶解并将该溶液与其它有机相合并。在减压下除去溶剂，加入二氯甲烷以维持溶液，并然后一旦得到约300ml的终体积，就通过硅胶色谱法纯化溶液，用5%的0.3m氨/甲醇在二氯甲烷中的溶液洗脱以得到浅棕色固体。将固体溶解在热乙醇(2.5l)中，趁热过滤，并历时1小时冷却至环境温度。将固体通过过滤进行收集并用乙醇(2×250ml)洗涤和在真空下干燥。蒸发滤液至干燥并通过硅胶色谱法进一步纯化，首先用65%乙酸乙酯在50:1的异己烷/7n的氨在甲醇中的溶液中的溶液洗脱，然后用50:1的乙酸乙酯/7n的氨在甲醇中的溶液洗脱。如果需要的话，可以通过sfc完成进一步纯化，柱:chiralpakad-h(5µ),50×250mm；洗脱液:35%异丙醇(0.2%二乙基甲基胺)在co2中；流速:300g/分钟，在uv220nm。蒸发和真空干燥以后，将所述物质在乙醇(1.5l)中制浆，并在温和加热(36至45℃之间)下搅拌20分钟。将固体通过过滤进行收集，用乙醇(100ml)洗涤。可以从滤液回收其它物质；蒸发至干燥，在乙醇中回流，通过热过滤除去固体，并然后将滤液冷却至环境温度。将固体通过过滤进行收集，用乙醇洗涤和与得自以上过滤的物质合并。将合并的固体在真空下在40℃干燥以得到作为白色固体的标题化合物(103.3g,68%，含有2.5重量%的乙醇)。es/msm/z505.0(m+h),[α]d20=+149.4°(c=1,氯仿)。实施例1an-[3-[(4as,5s,7as)-2-氨基-5-(1,1-二氟乙基)-4,4a,5,7-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-7a-基]-4-氟-苯基]-5-(1,2,4-三唑-1-基)吡嗪-2-甲酰胺4-甲基苯磺酸盐将n-[3-[(4as,5s,7as)-2-氨基-5-(1,1-二氟乙基)-4,4a,5,7-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-7a-基]-4-氟-苯基]-5-(1,2,4-三唑-1-基)吡嗪-2-甲酰胺(600mg,1.189mmol)溶解在丙酮(9ml)和水(1ml)中。将得到的混悬液加热至60℃。加入溶解在丙酮(1ml)中的对甲苯磺酸一水合物(420mg,2.208mmol)。将混合物在60℃搅拌过夜。将混合物冷却至室温，将固体真空过滤，并用丙酮(1ml)洗涤和风干过夜以得到标题化合物(743mg,73%)。x-射线粉末衍射(xrd)在配备cuka源（λ=1.54060å）和vantec检测器的brukerd4endeavorx-射线粉末衍射仪（运行在35kv和50ma）上得到结晶固体的xrd图样。在4和40°（2θ）之间扫描样品，步长为0.009°（2θ），扫描速率为0.5秒/步长，具有0.6mm发散、5.28固定的防散射和9.5mm检测器狭缝。将干粉填装到石英样品座上，并使用载玻片得到光滑表面。在环境温度和相对湿度下收集晶型衍射图样。在晶体学领域中众所周知，对于任何给定的晶型，衍射峰的相对强度可能由于择优取向（其由诸如晶体形态学和特性等因素引起）而变化。在有择优取向效应存在下，会改变峰强度，但是多晶型物的特征峰位置没有变化。参见，例如，theunitedstatespharmacopeia#23,nationalformulary#18,第1843-1844页,1995。此外，在晶体学领域中还众所周知，对于任何给定的晶型，角峰位置可能轻微变化。例如，由于分析样品时的温度或湿度的变化、样品替换、或内部标准品的存在或不存在，峰位置可以漂移。在该情况下，±0.2（2θ）的峰位置的变化将会考虑到这些可能的变化，而不会妨碍所指出的晶型的明确鉴别。基于特征峰（通常是更突出的峰）（以°2θ为单位）的任何独特组合，可以证实晶型。基于nist675标准峰（在8.853和26.774度2θ），调节在环境温度和相对湿度下收集的晶型衍射图样。将制备的结晶n-[3-[(4as,5s,7as)-2-氨基-5-(1,1-二氟乙基)-4,4a,5,7-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-7a-基]-4-氟-苯基]-5-(1,2,4-三唑-1-基)吡嗪-2-甲酰胺4-甲基苯磺酸盐的样品使用cuka辐射通过xrd图样表征为具有如下表所示的衍射峰(2-θ值)。具体地，所述图样含有与一个或多个选自14.8、12.7和4.9的峰组合的在17.3°的峰；具有0.2度的衍射角容差。表1:实施例1a的x-射线粉末衍射峰.峰角度(°2-θ±0.2°)相对强度(最强烈峰的百分比)14.94829.414312.752414.860517.3100619.844724.935825.337926.8191028.214实施例1bn-[3-[(4as,5s,7as)-2-氨基-5-(1,1-二氟乙基)-4,4a,5,7-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-7a-基]-4-氟-苯基]-5-(1,2,4-三唑-1-基)吡嗪-2-甲酰胺丙二酸盐在95%乙醇-水(15ml)中将n-[3-[(4as,5s,7as)-2-氨基-5-(1,1-二氟乙基)-4,4a,5,7-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-7a-基]-4-氟-苯基]-5-(1,2,4-三唑-1-基)吡嗪-2-甲酰胺(201mg,0.398mmol)和丙二酸(104mg,0.999mmol)加到一起。将混合物在65℃搅拌直到得到澄清溶液。浓白色固体在几分钟以后沉淀。将混悬液在55℃搅拌1小时，并然后在搅拌下冷却至室温。将固体在真空下过滤并风干2天以得到标题化合物(477mg,80%)。将制备的结晶n-[3-[(4as,5s,7as)-2-氨基-5-(1,1-二氟乙基)-4,4a,5,7-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-7a-基]-4-氟-苯基]-5-(1,2,4-三唑-1-基)吡嗪-2-甲酰胺丙二酸盐的样品使用cuka辐射通过xrd图样表征为具有如下表2所示的衍射峰(2-θ值)。具体地，所述图样含有与一个或多个选自16.8、17.2和24.0的峰组合的在22.7°的峰；具有0.2度的衍射角容差。表2:实施例1b的x-射线粉末衍射峰.峰角度(°2-θ±0.2°)相对强度(最强烈峰的百分比)15.539210.344311.855415.339516.862617.257718.341822.460922.71001024.053实施例1cn-[3-[(4as,5s,7as)-2-氨基-5-(1,1-二氟乙基)-4,4a,5,7-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-7a-基]-4-氟-苯基]-5-(1,2,4-三唑-1-基)吡嗪-2-甲酰胺水合物在70℃将n-[3-[(4as,5s,7as)-2-氨基-5-(1,1-二氟乙基)-4,4a,5,7-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-7a-基]-4-氟-苯基]-5-(1,2,4-三唑-1-基)吡嗪-2-甲酰胺(116mg,0.23mmol)悬浮在1:1thf:水(2ml)中。将所述溶液搅拌至少2天，过滤固体，并在氮气流下干燥以得到标题化合物。将制备的n-[3-[(4as,5s,7as)-2-氨基-5-(1,1-二氟乙基)-4,4a,5,7-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-7a-基]-4-氟-苯基]-5-(1,2,4-三唑-1-基)吡嗪-2-甲酰胺水合物的样品使用cuka辐射通过xrd图样表征为具有如下表3所示的衍射峰(2-θ值)。具体地，所述图样含有与一个或多个选自7.8、10.5、11.0、14.9、19.7、21.3和26.9的峰组合的在13.0°的峰；具有0.2度的衍射角容差。表3.实施例1c的x-射线粉末衍射峰.峰角度(°2-θ±0.2°)相对强度(最强烈峰的百分比)17.882210.568311.038413.0100513.248614.944716.630819.132919.7931021.1291121.3731222.0261322.3521426.965体外测定程序：为了评估bace1相对于bace2的选择性，如下所述使用bace1和bace2的特异性底物在基于fret的酶测定中评价测试化合物。对于体外酶促测定和细胞测定，在dmso中制备测试化合物以构成10mm储备溶液。在进行体外酶促测定和全细胞测定之前，在96-孔圆底板中将储备溶液在dmso中系列稀释以得到10-点稀释曲线，其具有在10µm至0.05nm的范围内的最终化合物浓度。体外蛋白酶抑制测定：hubace1:fc和hubace2:fc的表达通过rt-pcr从总脑cdna克隆人bace1(登录号:af190725)和人bace2(登录号:af204944)。将与氨基酸序列#1-460对应的核苷酸序列插入编码人igg1(fc)多肽的cdna中(vassar等人,science,286,735-742(1999))。将bace1(1-460)或bace2(1-460)和人fc的该融合蛋白（分别命名为hubace1:fc和hubace2:fc）构建进pjb02载体中。在hek293细胞中短暂地表达人bace1(1-460):fc(hubace1:fc)和人bace2(1-460):fc(hubace2:fc)。将250μg的每种构建体的cdna与fugene6混合并加入1升hek293细胞中。转染以后4天，收获条件培养基用于纯化。如下所述通过蛋白a色谱法纯化hubace1:fc和hubace2:fc。将所述酶分成小等分试样在-80℃储存。(参见yang,等人,j.neurochemistry,91(6)1249-59(2004)。hubace1:fc和hubace2:fc的纯化收集用hubace1:fc或hubace2:fccdna瞬时转染的hek293细胞的条件培养基。通过将所述条件培养基穿过0.22μm无菌过滤器过滤，除去细胞碎片。将5ml蛋白a-琼脂糖(床体积)加入4升条件培养基。将该混合物在4℃轻轻搅拌过夜。收集蛋白a-琼脂糖树脂并填充进低压强色谱柱中。将所述柱用20个床体积的pbs以20ml/小时的流速洗涤。将结合的hubace1:fc或hubace2:fc蛋白用50mm乙酸（ph3.6）以20ml/小时的流速洗脱。立即将洗脱液的1ml级分用0.5ml200mm乙酸铵（ph6.5）中和。在4-20%tris-甘氨酸sds-page中通过电泳评估终产物的纯度。将所述酶分成小等分试样在-80℃储存。bace1fret测定如上所述制备测试化合物的系列稀释物。将所述化合物在kh2po4缓冲液中进一步稀释20倍。将10μl每种稀释液加入到在相应低蛋白结合黑色板的行a至h上的每个孔中，所述孔含有反应混合物(25μl50mmkh2po4,ph4.6,1mmtriton®x-100,1mg/mlbsa,和15μm基于app序列的fret底物)(参见yang,等人,j.neurochemistry,91(6)1249-59(2004))。将内容物在板振荡器上充分混合10分钟。将在kh2po4缓冲液中的15μl的200pm人bace1(1-460):fc(参见vasser,等人,science,286,735-741(1999))加入到含有底物和测试化合物的板中以使反应开始。在板振荡器上简单混合之后，在激发波长355nm和发射波长460nm记录在时间0的混合物的rfu。用铝箔覆盖反应板，并在室温在暗的潮湿烘箱中保持16-24小时。记录在温育结束时的rfu，激发和发射设置与时间0所使用的相同。在时间0时与温育结束时的rfu的差值代表在化合物处理下的bace1的活性。将rfu差值相对于抑制剂浓度作图，并将曲线与四参数逻辑方程拟合以得到ic50值。(may,等人,journalofneuroscience,31,16507-16516(2011))。基本上如上所述测试本文实施例1的化合物，对bace1表现出1.19nm±0.48（n=4）的ic50(平均值±sem;sem=平均值标准误差)。该数据证实，实施例1的化合物在体外抑制纯化的重组bace1酶活性。bace2tmem27fret测定跨膜蛋白27(tmem27)(登录号nm_020665)，也被称作collectrin)是最近描述的bace2的底物，但不是bace1的底物(esterhazy,等人,cellmetabolism,14,365-377(2011))。为了评价测试化合物对bace2酶活性的抑制，将基于人tmem27的氨基酸序列的fret肽(dabcyl-qtleflkips-lucy)用作底物(esterhazy,等人,cellmetabolism,14,365-377(2011))。如上所述制备测试化合物的系列稀释物。将所述化合物在kh2po4缓冲液中进一步稀释20倍。将10μl每种稀释液加入到在相应低蛋白结合黑色板的行a至h上的每个孔中，所述孔含有反应混合物(25μl50mmkh2po4,、ph4.6、1mmtriton®x-100、1mg/mlbsa和5μmtmemfret底物)。然后将15μl的在kh2po4缓冲液中的20µm人bace2(1-460):fc(参见vasser,等人,science,286,735-741(1999))加入到含有底物和测试化合物的板中以使反应开始。将内容物在板振荡器上充分混合10分钟。在激发波长430nm和发射波长535nm记录在时间0的混合物的rfu。用铝箔覆盖反应板，并在室温在暗的潮湿烘箱中保持16-24小时。记录在温育结束时的rfu，激发和发射设置与时间0所使用的相同。在时间0时与温育结束时的rfu的差值代表在化合物处理下的bace2的活性。将rfu差值相对于抑制剂浓度作图，并将曲线与四参数逻辑方程拟合以得到ic50值。(may,等人,journalofneuroscience,31,16507-16516(2011))。基本上如上所述测试本文实施例1的化合物，对bace2表现出479nm±202（n=4）的ic50(平均值±sem;sem=平均值标准误差)。bace1(fretic50酶测定)与bace2(tmem27fretic50测定)的比率是约400倍，从而指示关于抑制bace1酶的功能选择性。上述的数据证实，实施例1的化合物相对于bace2而言对bace1是选择性的。sh-sy5yapp695wt全细胞测定用于测量bace1活性的抑制的常规全细胞测定利用稳定地表达人app695wtcdna的人神经母细胞瘤细胞系sh-sy5y(atcc登记号crl2266)。将细胞常规地使用直到第6代并然后抛弃。将sh-sy5yapp695wt细胞以5.0×104个细胞/孔在200μl培养基(50%mem/ebss和ham氏f12,1×每种丙酮酸钠、非必需氨基酸和碳酸氢钠，含有10%fbs)中铺板在96孔组织培养板中。次日，从细胞除去培养基，加入新鲜培养基，然后在有/没有所需浓度范围的测试化合物存在下在37℃温育24小时。在温育结束时，通过特定夹心elisa通过aβ肽1-40和1-42的分析针对β-分泌酶活性的证据来分析条件培养基。为了测量aβ的这些具体同种型，将单克隆2g3用作aβ1-40的捕获抗体并将单克隆21f12用作aβ1-42的捕获抗体。aβ1-40和aβ1-42elisa都使用生物素化的3d6作为报告抗体(关于抗体的描述，参见johnson-wood,等人,proc.natl.acad.sci.usa94,1550-1555(1997))。在化合物处理以后在条件培养基中释放的aβ的浓度对应于在这样的条件下bace1的活性。绘制10-点抑制曲线，并与四参数逻辑方程拟合以得到关于aβ-降低效应的ic50值。基本上如上所述测试实施例1的化合物，并表现出关于aβ-降低效应的下述活性，如在表4中所示。表4(平均值±sem;sem=平均值标准误差)。β-分泌酶的体内抑制几种动物模型（包括小鼠、豚鼠、狗和猴）可以用于筛选在化合物处理之后的体内β-分泌酶活性抑制。在本发明中使用的动物可以是野生型、转基因或基因敲除的动物。例如，pdapp小鼠模型（如在games等人,nature373,523-527(1995)中所述制备）和其它非转基因的或基因敲除的动物可用于分析在有抑制性化合物存在下aβ和sappβ产生的体内抑制。通常，经由口服、皮下、静脉内、进食或其它施用途径，给2月龄pdapp小鼠、基因敲除的小鼠或非转基因的动物施用在媒介物（诸如玉米油、β-环葡聚糖、磷酸盐缓冲液、pharmasolve®）或其它合适的媒介物中配制的化合物。施用化合物以后1-24小时，将动物处死，并取脑用于分析aβ1-x。本文中使用的“aβ1-x”表示开始于残基1且结束于大于残基28的c-端的aβ物质的总和。这会检测大多数aβ物质且经常被称作“总aβ”。使用单克隆266作为捕获抗体和使用生物素化的3d6作为报告抗体，通过夹心elisa测量总aβ肽(aβ1-x)水平。(参见may,等人,journalofneuroscience,31,16507-16516(2011))。对于急性研究，施用化合物或适当的媒介物，并在给药后约3小时处死动物。从选定的动物得到脑组织，并分析aβ1-x的存在。在长期给药以后，也可以针对化合物处理后β-淀粉样蛋白斑块的量分析更老的app转基因动物的脑组织。与媒介物处理的对照或时间零点对照相比，施用了抑制性化合物的动物(pdapp或其它app转基因的或非转基因的小鼠)可能表现出脑组织中aβ的减少。例如，给年轻雌性pdapp小鼠的3、10和30mg/kg口服剂量的实施例1分别使脑海马中的aβ1-x肽水平下降了23%(非显著的)、43%(p<0.05)和58%(p<0.01)。在脑皮质组织中，在给药后3小时，与媒介物处理的小鼠相比，3、10和30mg/kg的实施例1的剂量分别使aβ1-x水平下降了43%、59%和73%(所有值p<0.01)。鉴于实施例1对bace1酶的体外活性，这些aβ-降低效应与体内bace抑制相一致，且进一步证实实施例1的cns穿透。实施例2经工程改造的n3pgluaβ抗体的表达和纯化可以基本上如下表达和纯化本发明的抗-n3pgluaβ抗体(抗体i或ii)。使用谷氨酰胺合成酶(gs)表达载体通过电穿孔转染中国仓鼠卵巢细胞系(cho)，所述表达载体含有编码seqidno:12或13的lc氨基酸序列的dna序列和编码seqidno:11的hc氨基酸序列的dna序列。所述表达载体编码sv早期(猿猴病毒40e)启动子和gs的基因。转染后，细胞经历使用0-50μml-甲硫氨酸亚砜亚胺(msx)的集团选择。然后将选择的集团细胞或主要孔在待用于生产的无血清悬浮培养物中放大。将澄清的培养基（在其中已经分泌了抗体）应用于蛋白a亲和柱，该柱已经用适合的缓冲液诸如磷酸盐缓冲盐水(ph7.4)平衡过。将该柱用1mnacl洗涤以除去非特异性结合组分。将结合的抗-n3pgluaβ抗体用例如ph(约)3.5的柠檬酸钠洗脱，并将级分用1mtris缓冲液中和。检测抗-n3pgluaβ抗体级分，诸如通过sds-page或分析型尺寸排阻，然后合并。将本发明的抗-n3pgluaβ抗体(抗体i或抗体ii)在pbs缓冲液（ph7.4）或10mm柠檬酸钠缓冲液、150mmnacl（ph约6）中浓缩。可以将最终物质使用普通技术无菌过滤。抗-n3pgluaβ抗体的纯度大于95%。可以将本发明的抗-n3pgluaβ抗体(抗体i或抗体ii)立即在-70℃冷冻或在4℃储存几个月。结合亲和力和动力学使用biacore®3000(gehealthcare)通过表面等离子体共振测量抗-n3pgluaβ抗体(抗体i或抗体ii)与pe3-42aβ肽或与aβ1-40肽的结合亲和力和动力学。如下测量结合亲和力：将抗-n3pgluaβ抗体经由固定化的蛋白a捕获在biacore®cms芯片上，并流动pe3-42aβ肽或aβ1-40肽，从100nm开始以2倍系列稀释度下降至3.125nm。在hbs-ep缓冲液(gehealthcarebr100669;10mmhepes,150mmnacl,3mmedta,0.05%表面活性剂p20,ph7.4)中在25℃进行实验。对于每个循环，用10μl/min流速以10μg/ml浓度用抗体溶液的5μl注射捕获抗体。所述肽与50μl/min的250μl注射结合，然后解离10分钟。在10μl/ml流速用甘氨酸缓冲液（ph1.5）的5μl注射使芯片表面再生。使数据拟合至1:1langmiur结合模型以导出kon、koff并计算kd。按照基本上如上所述的程序，观察到下述参数(显示在表2中)。表2.结合亲和力和动力学.抗体kon(x1051/ms)koff(x10-41/s)kd(nm)i1.391.310.71ii3.631.280.35没有检测到可察觉的与aβ1-40的结合，从而指示与aβ1-40相比，抗体i和抗体ii特异性地结合pe3-42aβ肽。离体靶标接合为了在来自固定的pdapp脑的脑切片上确定离体靶标接合，用外源地添加的抗-n3pgluaβ抗体(抗体i或抗体ii)执行免疫组织化学分析。将来自成年pdapp小鼠(25-月龄)的低温恒温器系列冠向切片与20μg/ml的本发明的示例n3pgluaβ抗体(抗体i或抗体ii)一起温育。采用对人igg特异性的第二hrp试剂，并将沉积的斑块用dab-plus(dako)显影。将生物素化的鼠3d6抗体（用step-hrp第二抗体跟踪）用作阳性对照。阳性对照抗体(生物素化的3d6)标记pdapp海马中的显著量的沉积的aβ，且抗-n3pgluaβ抗体(抗体i或抗体ii)标记沉着物的子集。这些组织学研究证实，抗-n3pgluaβ抗体(抗体i和抗体ii)离体接合沉积的aβ靶标。下述实施例和测定证实了可以如何设计研究来验证(在动物模型中)与本文所述化合物组合的本发明的抗体的组合可以用于治疗以aβ的沉积为特征的疾病，诸如阿尔茨海默氏病、唐氏综合征和caa。但是，应当理解，阐述下述描述作为例证而不是限制，并且本领域普通技术人员可以做出多种修改。组合研究bace抑制剂进食测试性研究在饲喂含有bace抑制剂诸如n-[3-[(4as,5s,7as)-2-氨基-5-(1,1-二氟乙基)-4,4a,5,7-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-7a-基]-4-氟-苯基]-5-(1,2,4-三唑-1-基)吡嗪-2-甲酰胺或其药学上可接受的盐的饲料的pdapp小鼠中进行测试性药代动力学和药效动力学研究，以便定义通过单独的bace抑制提供最小至显著的血浆和脑aβ降低的剂量。给年轻pdapp小鼠饲喂含有饲料（chowdiet）的食物14天，所述饲料含有3mg/kg、10mg/kg、30mg/kg或100mg/kg的“拟-bid”等效剂量的bace抑制剂。在sorvall混合器中，对于每克经检验的啮齿动物饮食#8728cm(harlanlabs)，混合大约0.05、0.15、0.5或1.5mg的bace抑制剂10分钟，并然后用hobart混合器混合15分钟，然后制粒。根据亲本品系，将32只年轻雌性pdapp小鼠随机分成4组，每组8只，由赋形剂处理组和三种剂量的bace抑制剂组成。使小鼠随意获取食物14天，随后处死。用co2麻醉小鼠，并通过心脏穿刺将血液收集到edta包被的微量离心管中，并在冰上储存。随后，通过将血液样品在室温在14,000rpm离心4分钟来收集血浆，将其转移至未经处理的微量离心管，然后在干冰上冷冻并在-80℃储存直到分析。通过断头术处死小鼠，将脑快速地显微解剖为两半，在干冰上快速冷冻并在-80℃储存直到分析(一半用于aβ分析，另一半用于化合物暴露测量)。为了分析实质aβ，将脑样品在5.5m盐酸胍缓冲液中(每个半脑使用0.5ml)中使用组织匀浆机(模号985-370)在速度5匀浆化约1分钟。将匀浆化的脑样品在室温下垂（nutated）过夜。对于aβelisa分析，收集提取物，在酪蛋白缓冲液(1xpbs，含有0.25%酪蛋白、0.05%吐温20、0.1%硫柳汞，ph7.4，以及蛋白酶抑制剂混合液(sigmap9340，在0.01mg/ml))中至少1:10稀释，并在14000rpm离心10分钟。对于血浆aβ的分析，将样品在样本缓冲液(pbs;0.05%tritonx-405;0.04%硫柳汞,0.6%bsa)中1:2稀释，然后通过elisa进行分析。使用m266.2(抗-aβ13-28)和生物素化的3d6(抗-aβ1-5)分别作为捕获和报道抗体，通过夹心elisa来确定血浆人aβ1-x。将未知物一式两份地测定，通过从8点标准曲线内插(softmaxprov.5.0.1，moleculardynamics，使用参考曲线的4参数拟合)并然后对稀释物进行调节，确定pg/ml。如上所述通过夹心elisa确定实质aβ，并将值归一化至蛋白水平(通过bradfordcoomassieplusprotein方法一式两份地测定)，并且表示为pg/mg蛋白。为了确定bace抑制剂的组织和血浆水平，采用下述方法∶将0.1mg/ml的bace抑制剂的储备溶液用甲醇/水(1:1,v/v)系列稀释以制备工作溶液，然后将其用于强化对照血浆和脑匀浆物，以得到1、5、10、20、50、100、500、1000、2000、4000和5000ng/ml的分析物浓度。在分析之前，将脑样品在3体积的甲醇/水(1:4,v/v)中用超声粉碎机匀浆化。将每个研究样品的一个等分试样、适当的校准标准物和对照基质样品转移至96-孔板，并然后与含有内部标准品的乙腈混合。混合之后，将样品离心以使沉淀的蛋白沉淀。然后将得到的上清液的等分试样转移至干净的96-孔板，并用甲醇/水(1:1,v/v)稀释，并通过lc-ms/ms分析10微升等分试样。使用通过校正曲线样品的多元回归所确定的应答与浓度的关系，计算分析物浓度。体内组合研究为了评价抗-n3pgluaβ抗体诸如he8l、抗体i或抗体ii和bace抑制剂诸如n-[3-[(4as,5s,7as)-2-氨基-5-(1,1-二氟乙基)-4,4a,5,7-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-7a-基]-4-氟-苯基]-5-(1,2,4-三唑-1-基)吡嗪-2-甲酰胺或其药学上可接受的盐的组合斑块降低疗法，将大组群的pdapp小鼠首先养至16-18个月龄。基于性别、亲本品系和年龄，将成年pdapp小鼠随机分为五个处理组。每个处理组有20-30只成年pdapp小鼠。在研究开始将组1处死作为时间零点，以便确定治疗性处理之前的病变的基线水平(尸检如下所述)。然后如下处理四个其它组∶组-2，接受安慰剂饲料和12.5mg/kg的对照同种型igg2a抗体的每周注射的对照动物；组-3，接受12.5mg/kg抗-n3pglu-aβ抗体的每周注射的动物；组-4，以在测试性进食研究中预先确定的剂量接受bace抑制剂饲料的动物，但通常是~3-30mg/kg/天；组-5，接受bace抑制剂饲料(~3-30mg/kg/天)和12.5mg/kg抗-n3pglu-aβ抗体的每周注射的动物。从由在pbs缓冲液中的抗体组成的无菌储备溶液稀释抗-n3pglu-aβ抗体，并通过腹膜内注射施用给动物。将bace抑制剂与松散的饲料(~0.15-1.5mg化合物/克饲料，取决于期望的剂量)混合，并压制成饲料颗粒。在研究开始时记录动物体重，随后在第一个月的治疗中每周记录，然后在研究持续期间每月记录。还在研究过程中定期监测食物摄入。动物接受研究治疗共4个月。动物继续保持它们各自的饮食直到尸检，所述尸检发生在最后一次抗体注射之后一周。在尸检时，将动物麻醉，使用edta预冲洗的1ml注射器通过心脏穿刺得到血液。将血液样品收集在冰上，并通过标准离心来分离血浆。随后，用冷的肝素化的盐水灌注动物，取出脑，并解剖为左半球和右半球。将一个脑半球快速冷冻并保存用于组织学分析。将剩余的脑半球解剖为由海马、皮质、小脑和中脑组成的组织区段，并随后在干冰上冷冻。将血浆和组织样品在-80℃储存直到分析时。药代动力学评价利用在尸检时得到的血浆样品确定血浆药代动力学。在抗原结合elisa测定中确定血浆抗体水平，其中将平板用抗原(aβp3-42)包被，并随后与稀释的血浆样品或参比标准品(由抗-n3pglu抗体在测定缓冲液(pbs+对照鼠血浆)中的系列稀释物组成)一起温育。将所述平板洗涤之后，用抗-鼠-hrp缀合的抗体检测结合的鼠抗体，随后用tmb显色。为了确定bace抑制剂的组织(中脑)和血浆水平，采用下列方法∶将0.1mg/ml的bace抑制剂储备溶液用甲醇/水(1:1,v/v)系列稀释以制备工作溶液，然后将其用于强化对照物血浆和脑匀浆，以产生1、5、10、20、50、100、500、1000、2000、4000和5000ng/ml的分析物浓度。在分析之前，将脑样品在3体积的甲醇/水(1:4,v/v)中用超声粉碎机匀浆化。将每个研究样品的一个等分试样、适当的校准标准物和对照基质样品转移至96-孔板，并然后与含有内部标准品的乙腈混合。混合之后，将样品离心以使沉淀的蛋白聚集。然后将得到的上清液的等分试样转移至干净的96-孔板，并用甲醇/水(1:1,v/v)稀释，并通过lc-ms/ms分析10微升等分试样。使用通过校正曲线样品的多元回归所确定的应答与浓度的关系，计算分析物浓度。药效动力学评价通过夹心elisa，在胍溶解的组织匀浆中确定实质aβ浓度。用珠磨技术执行组织提取，其中在含有1ml硅化玻璃珠的2ml深孔盘中，在1ml5.5m胍/50mmtris/0.5x蛋白酶抑制剂混合液(ph8.0)中提取冷冻组织(将密封板摇动两个各3分钟的时间段)。通过夹心elisa来分析得到的组织裂解物中的aβ1-40和aβ1-42∶将珠磨样品在2%bsa/pbs-t中1:10稀释，并穿过样品滤板(millipore)过滤。将样品、空白、标准品、质量控制样品在0.55m胍/5mmtris（在2%bsa/pbst中）中进一步稀释，然后加载样品板。将参比标准品在样品稀释剂中稀释。将用15µg/ml的捕获抗体21f12(抗-aβ42)或2g3(抗-aβ40)包被的平板与样品一起温育，并如下完成检测：用在2%bsa/pbs-t中稀释的生物素化的3d6(抗-aβ1-x)，随后用在2%bsa/pbs-t中的1:20k稀释中和亲和素-hrp(pierce)，和用tmb(pierce)显色。从标准曲线内插aβ水平，并将最终的组织浓度计算为每毫克组织湿重的aβ纳克数。在组织学上确定沉积的aβ所占据的海马和皮质的面积百分比。将低温恒温器系列冠向切片(7-10µm厚)与10µg/ml生物素化的3d6(抗-aβ1-x)或阴性对照鼠igg(生物素化)一起温育。采用对生物素特异性的第二hrp试剂，并将沉积的aβ用dab-plus(dako)显影。通过用imageproplus软件(mediacybernetics)分析捕获的图像，在海马或皮质内的确定目标区域中定量免疫反应性的aβ沉着物。这些研究可表明，抗-n3pglu-aβ抗体诸如he8l、b12l、r17l、抗体i或抗体ii与bace抑制剂诸如n-[3-[(4as,5s,7as)-2-氨基-5-(1,1-二氟乙基)-4,4a,5,7-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]噻嗪-7a-基]-4-氟-苯基]-5-(1,2,4-三唑-1-基)吡嗪-2-甲酰胺或其药学上可接受的盐的组合疗法可导致与各种单一疗法相比增强的aβ减少。序列<seqidno:1;prt1；人工的>hcdr1-抗体i和抗体iikasgytftdyyin<seqidno:2;prt1；人工的>hcdr2-抗体i和抗体ii抗体i和抗体iihcdr2(seqidno:2)winpgsgntkynekfkg<seqidno:3;prt1；人工的>hcdr3-抗体i和抗体iitregetvy<seqidno:4;prt1；人工的>lcdr1-抗体i和抗体iikssqsllysrgktyln<seqidno:5;prt1；人工的>lcdr2-抗体iiyavsklds<seqidno:6;prt1；人工的>lcdr2-抗体iydvsklds<seqidno:7;prt1；人工的>lcdr3-抗体i和抗体iivqgthypft<seqidno:8;prt1；人工的>hcvr-抗体i和抗体iiqvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytftdyyinwvrqapgqglewmgwinpgsgntkynekfkgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctregetvywgqgtlvtvss<seqidno:9;prt1；人工的>lcvr-抗体idvvmtqsplslpvtlgqpasisckssqsllysrgktylnwfqqrpgqsprrliydvskldsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycvqgthypftfgqgtkleik<seqidno:10;prt1；人工的>lcvr-抗体iidiqmtqspstlsasvgdrvtitckssqsllysrgktylnwlqqkpgkapklliyavskldsgvpsrfsgsgsgteftltisslqpddfatyycvqgthypftfgqgtkleik<seqidno:11;prt1；人工的>重链-抗体i和抗体iiqvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytftdyyinwvrqapgqglewmgwinpgsgntkynekfkgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctregetvywgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspg<seqidno:12;prt1；人工的>轻链-抗体idvvmtqsplslpvtlgqpasisckssqsllysrgktylnwfqqrpgqsprrliydvskldsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycvqgthypftfgqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec<seqidno:13;prt1；人工的>轻链-抗体iidiqmtqspstlsasvgdrvtitckssqsllysrgktylnwlqqkpgkapklliyavskldsgvpsrfsgsgsgteftltisslqpddfatyycvqgthypftfgqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec<seqidno:14;dna；人工的>用于表达seqidno:11的抗体重链的示例dnacaggtgcagctggtgcagtctggggctgaggtgaagaagcctgggtcctcggtgaaggtctcctgcaaggcttctggatacaccttcaccgactattatatcaactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggatggatcaaccctggcagtggtaatacaaagtacaatgagaagttcaagggcagagtcacgattaccgcggacgaatccacgagcacagcctacatggagctgagcagcctgagatctgaggacacggccgtgtattactgtacaagagaaggcgagacggtctactggggccagggaaccctggtcaccgtctcctcagcctccaccaagggcccatcggtcttcccgctagcaccctcctccaagagcacctctgggggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaacgtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagaaagttgagcccaaatcttgtgacaaaactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggacgagctgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgccccccgtgctggactccgacggctccttcttcctctatagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggt<seqidno:15;dna；人工的>用于表达seqidno:12的抗体轻链的示例dnagatgttgtgatgactcagtctccactctccctgcccgtcacccttggacagccggcctccatctcctgcaagtctagtcaaagcctcctgtacagtcgcggaaaaacctacttgaattggtttcagcagaggccaggccaatctccaaggcgcctaatttatgatgtttctaaactggactctggggtcccagacagattcagcggcagtgggtcaggcactgatttcacactgaaaatcagcagggtggaggctgaggatgttggggtttattactgcgtgcaaggtacacactaccctttcacttttggccaagggaccaagctggagatcaaacggaccgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgc<seqidno:16;dna；人工的>用于表达seqidno:13的抗体轻链的示例dnagacatccagatgacccagtctccttccaccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgcaagtccag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