本发明涉及生物发酵领域，具体涉及一种具有抗宫颈癌作用的发酵组合物及其制备方法。
背景技术：
：宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤，在女性生殖器官癌瘤中占首位。目前治疗方案以手术和放射治疗为主，亦可采用中西医综合治疗，但中晚期患者治愈率很低。现有的化学抗癌药品，虽然对抑制癌细胞增殖方面具有一定的作用，但其对人体损伤较大，如何寻求一种更为对人体副作用小、同时具备抗癌的作用成为一个较为迫切的需求。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种具有抗癌作用、且副作用小的发酵组合物，本发明还提供该发酵组合物的制备方法。为解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：一种具有抗宫颈癌作用的发酵组合物，所述发酵组合物由培养基发酵制成，所述培养基包括按重量百分数计的如下组分：黄柏2-4％、苍术1-3％、地肤子1.5-2.5％、莪术1-2％、大蓟2-3％、丹参1.5-2.5％、蜈蚣0.8-1.5％、黄连1-2％、香附0.5-1％、蛇床子0.5-1％、苏子0.5-1％、全蝎0.2-0.5％、五灵脂0.5-1％、当归0.2-2％、续断0.5-1％，碳源6-10％、氮源1-5％、发酵菌种2-10％，余量为水。本发明中，优选的方案为所述碳源选自果糖、葡萄糖、蔗糖、乳糖、淀粉、麦芽糖中的至少一种。本发明中，优选的方案为所述氮源选自牛肉膏、蛋白胨、鱼粉、蚕蛹粉、玉米粉、花生饼粉中的至少一种。本发明中，优选的方案为所述发酵菌种嗜酸乳杆菌、青春双歧杆菌、动物双歧杆菌、两歧双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、嗜热链球菌、植物乳杆菌、醋酸菌、纳豆菌、地衣芽孢杆菌、光合菌和酵母菌中的两种或两种以上菌种混合而成。本发明中，优选的方案为所述培养基包括按重量百分数计的如下组分：黄柏3％、苍术2％、地肤子2.2％、莪术1.5％、大蓟2.3％、丹参2％、蜈蚣1％、黄连1.5％、香附0.8％、蛇床子0.8％、苏子0.6％、全蝎0.4％、五灵脂0.9％、当归1.5％、续断0.8％，碳源8％、氮源3％、发酵菌种7％，余量为水。本发明中，优选的方案为所述发酵组合物为片剂、胶囊剂、粉剂、膏剂或水剂。本发明中，优选的方案为所述粉剂为酵素粉。本发明还提供该具有抗宫颈癌作用的发酵组合物的制备方法，具体包括如下步骤：a.配制培养基混合液：按配方秤取好培养基各组分，混合、搅拌均匀，制得培养基混合液；b.灭菌处理：在经过a步骤制得的培养基混合液中通入110-125℃的水蒸汽，进行灭菌处理；c.冷却：将经过b步骤处理的培养基混合液降温至35-42℃；d.接种：在无菌环境中将混合菌种添加到经过c步骤处理的培养基混合液中，在恒温状态下搅拌混合液完成耗氧，制得发酵液；e.静置处理：将经过d步骤制得的发酵液置于密封容器中；每天保持罐内发酵温度为35-42℃，每天排放一次密封容器中的气体，将装有发酵液的密封容器静置28-35天，制得具有抗癌作用的生物发酵组合物。本发明中优选的方案为所述b步骤中的水蒸气的温度为120℃；所述c步骤中培养基混合液降温至42℃；所述e步骤中应保持在35-42℃，装有发酵液的密封容器静置时间为30天。本发明中优选的方案为将经过e步骤处理的具有抗癌作用的生物发酵组合物进行冷冻干燥以及粉碎处理。与现有技术相比，本发明具有如下优点：将各中药组分在培养基中进行发酵处理，得到多种人体所需的蛋白酶、氨基酸、多糖、维生素、酵素、抗氧化物质、小分子肽等物质，能够抑制hpv病毒增殖、提高宫颈组织细胞的机能，同时能够很好的抑制宫颈组织癌细胞的生长增殖，对宫颈癌有着良好的治疗及辅助治疗作用；此外，经过发酵作用，大分子的多糖、多肽等物质分解为小分子物质，使得人体更容易被人体吸收，同时混合菌落能够使肠胃系统中菌落达到很好的平衡、消灭有害细菌，使得人体更加健康，并且不含制备的组合物对人体无损伤及副作用，安全、服用方便，且制备方法简单。下面结合具体实施方式对本发明进行详细说明。具体实施方式一种具有抗宫颈癌作用的发酵组合物，所述发酵组合物由培养基发酵制成，所述培养基包括按重量百分数计的如下组分：黄柏2-4％、苍术1-3％、地肤子1.5-2.5％、莪术1-2％、大蓟2-3％、丹参1.5-2.5％、蜈蚣0.8-1.5％、黄连1-2％、香附0.5-1％、蛇床子0.5-1％、苏子0.5-1％、全蝎0.2-0.5％、五灵脂0.5-1％、当归0.2-2％、续断0.5-1％，碳源6-10％、氮源1-5％、发酵菌种2-10％，余量为水。本发明中，碳源的功能主要为发酵的菌落生长提供碳元素，可以为常规的培养基使用的碳源，如糖类、脂肪等，进一步的可以选自果糖、葡萄糖、蔗糖、乳糖、淀粉、麦芽糖中的至少一种。本发明中，氮源的功能主要为发酵的菌落生长提供碳元素，可以为常规的培养基使用的氮源，如蛋白粉、硝酸盐、氨基酸以及肉膏等；进一步的，所述氮源可以选自牛肉膏、蛋白胨、鱼粉、蚕蛹粉、玉米粉、花生饼粉中的至少一种。本发明中，优选的方案为所述发酵菌种嗜酸乳杆菌、青春双歧杆菌、动物双歧杆菌、两歧双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、嗜热链球菌、植物乳杆菌、醋酸菌、纳豆菌、地衣芽孢杆菌、光合菌和酵母菌中的两种或两种以上菌种混合而成。醋酸菌；可产生乳白色的菌膜，代谢产物含有纤维素，味道有酸腥味，与酵母菌共生在一起培养有促进生长的作用，产生的醋酸可清理肠胃，帮助消化。纳豆菌；是枯草芽孢杆菌的一个亚种，是一类好氧型、内生抗逆胞子的杆状细菌，自身没有致病性，只具有单层细胞外膜，能产生多种抗菌素和酶，具有广谱抗菌活性和极强的抗逆能力。地衣芽孢杆菌；可调整菌群失调达到治疗目的，可促使机体产生抗菌活性物质、杀灭致病菌，能产生抗活性物质，并具有独特的生物夺氧作用机制，能抑制致病菌的生长繁殖。光合菌；营养丰富，他的细胞干物质中蛋白质含量高达65％以上，其蛋白质氨基酸组成比较齐全，细胞中含有多种维生素，尤其是b族维生素极为丰富，vb2叶酸，泛酸，生物素的含量也很高，同时还含有大量的类胡萝卜素，辅酶q等活性物质。另外光合菌能够分解体内亚硝酸盐，硫化物等有害物质，维护体内微生态平衡抑制病原菌产生。嗜酸乳杆菌属，主要存在小肠中，释放乳酸，乙酸和一些对有害菌起作用的抗菌素。青春双歧杆菌，可明显增加血中超氧化物歧化酶(sod)的活性与含量。从而减少自由基的氧化反应和对人体细胞的损伤，具有延年益寿的功效。青春双歧杆菌还具有降低胆固醇和甘油三酯的作用，使胆固醇转化成人体不吸收的粪甾醇，从粪便排出体外。动物双歧杆菌，可提高机体的抗体水平，激活巨噬细胞的吞噬活性，对提高机体的抗感染能力、预防、抑制和杀死肿瘤细胞的产生具有重要作用。此外，动物双歧杆菌还具有保护肝脏、降低胆固醇的作用。嗜热链球菌，生成的多糖、细菌素、乳酸等具有抗肿瘤活性的作用，通过激活机体免疫系统，抑制细胞的突变来抵抗肿瘤的发生；产生超氧化物歧化酶(sod)可以清除体内代谢过程中产生的过量超氧阴离子自由基，延缓衰老；能使艰难梭菌、鼠伤寒沙门氏菌、大肠杆菌的菌落直径减少约30％；能使金黄葡萄球菌、单核细胞增生李斯特菌、产气荚膜梭菌的菌落直径减少约20％；但该益生菌对人白色念珠菌没有抑制效应。植物乳杆菌，而且其产出的酸性物质能降解重金属；由于此菌是厌氧细菌(兼性好氧)，在繁殖过程中能产出乳酸杆菌素。酵母菌，发酵后的酵母菌还是一种很强的抗氧化物，可以保护肝脏，有一定的解毒作用。酵母菌里的硒、铬等矿物质能抗衰老、抗肿瘤、预防动脉硬化，并提高人体的免疫力。本发明中，所述发酵组合物可以作为各种剂型存在，如片剂、胶囊剂、粉剂、膏剂、水剂等，具体的可以制成酵素粉的形式存在。黄柏，具有清热燥湿、泻火除蒸、解毒疗疮等功效。苍术，有燥湿健脾、祛风散寒等功效。地肤子，有清热利湿、祛风止痒等功效。莪术，有破血行气，消积止痛等功效。大蓟，有凉血止血、祛瘀消肿等功效。丹参，有活血祛瘀、通经止痛、清心除烦、凉血消痈等功效。蜈蚣，具有息风镇痉、通络止痛、攻毒散结等功效。黄连，具有清热燥湿、泻火解毒、抗炎消菌等功效。香附，又名香附子，具有疏肝解郁、理气宽中、调经止痛等功效。蛇床子，具有祛风除湿、温肾、杀菌抗炎等功效。苏子，，唇形科紫苏属的植物，又名紫苏子，具有降气消痰、止咳平喘、润肠通便等功效。全蝎，具有息风镇痉、通络止痛、攻毒散结等功效。五灵脂，具有活血散瘀、炒炭止血的功效。当归，具有补血活血、调经止痛、润肠通便等功效。续断，具有有补肝肾、强筋骨、续折伤、止崩漏等功效。本发明中，该具有抗宫颈癌作用的发酵组合物的制备方法，具体包括如下步骤：a.配制培养基混合液：按配方秤取好培养基各组分，混合、搅拌均匀，制得培养基混合液；b.灭菌处理：在经过a步骤制得的培养基混合液中通入110-125℃的水蒸汽，进行灭菌处理；c.冷却：将经过b步骤处理的培养基混合液降温至35-42℃；d.接种：在无菌环境中将混合菌种添加到经过c步骤处理的培养基混合液中，在恒温状态下搅拌混合液完成耗氧，制得发酵液；e.静置处理：将经过d步骤制得的发酵液置于密封容器中；每天保持罐内发酵温度为35-42℃，每天排放一次密封容器中的气体，将装有发酵液的密封容器静置28-35天，制得具有抗癌作用的生物发酵组合物。本发明中，进一步优选的方案是所述b步骤中的水蒸气的温度为120℃；所述c步骤中培养基混合液降温至42℃；所述e步骤中应保持在35-42℃，装有发酵液的密封容器静置时间为30天。为了将发酵组合物制成酵素粉，可以将经过e步骤处理的具有抗癌作用的生物发酵组合物进行冷冻干燥以及粉碎处理，即得。实施例1一种具有抗宫颈癌作用的发酵组合物，所述发酵组合物由培养基发酵制成，所述培养基包括按重量百分数计的如下组分：黄柏4％、苍术1％、地肤子2.5％、莪术1％、大蓟3％、丹参1.5％、蜈蚣1.5％、黄连1％、香附1％、蛇床子0.5％、苏子1％、全蝎0.2％、五灵脂1％、当归0.2％、续断1％，碳源6％、氮源5％、发酵菌种2％，余量为水；所述碳源为葡萄糖，所述氮源为牛肉膏，所述发酵菌种由嗜酸乳杆菌(15wt％)、青春双歧杆菌(8wt％)、两歧双歧杆菌(7wt％)、短双歧杆菌(3wt％)、婴儿双歧杆菌(18wt％)、长双歧杆菌(9wt％)、嗜热链球菌(8wt％)、植物乳杆菌(8wt％)、醋酸菌(6wt％)、纳豆菌(10wt％)、地衣芽孢杆菌(5wt％)、和酵母菌(3wt％)混合而成。上述发酵组合物通过如下步骤制得：a.配制培养基混合液：按配方秤取好培养基各组分，混合、搅拌均匀，制得培养基混合液；b.灭菌处理：在经过a步骤制得的培养基混合液中通入125℃的水蒸汽，进行灭菌处理；c.冷却：将经过b步骤处理的培养基混合液降温至42℃；d.接种：在无菌环境中将混合菌种添加到经过c步骤处理的培养基混合液中，在恒温状态下搅拌混合液完成耗氧，制得发酵液；e.静置处理：将经过d步骤制得的发酵液置于密封容器中；每天保持罐内发酵温度为42℃，每天排放一次密封容器中的气体，将装有发酵液的密封容器静置28天，制得具有抗癌作用的生物发酵组合物。实施例2一种具有抗宫颈癌作用的发酵组合物，所述发酵组合物由培养基发酵制成，所述培养基包括按重量百分数计的如下组分：黄柏2％、苍术3％、地肤子1.5％、莪术2％、大蓟2％、丹参2.5％、蜈蚣0.8％、黄连2％、香附0.5％、蛇床子1％、苏子0.5％、全蝎0.5％、五灵脂0.5％、当归2％、续断0.5％，碳源10％、氮源1％、发酵菌种10％，余量为水；所述碳源为葡萄糖，所述氮源为牛肉膏，所述发酵菌种由嗜酸乳杆菌(15wt％)、青春双歧杆菌(3wt％)、动物双歧杆菌(12wt％)、两歧双歧杆菌(8wt％)、婴儿双歧杆菌(12wt％)、长双歧杆菌(8wt％)、嗜热链球菌(5wt％)、植物乳杆菌(11wt％)、醋酸菌(11wt％)、纳豆菌(10wt％)、光合菌(5wt％)混合而成。上述发酵组合物通过如下步骤制得：a.配制培养基混合液：按配方秤取好培养基各组分，混合、搅拌均匀，制得培养基混合液；b.灭菌处理：在经过a步骤制得的培养基混合液中通入110℃的水蒸汽，进行灭菌处理；c.冷却：将经过b步骤处理的培养基混合液降温至35℃；d.接种：在无菌环境中将混合菌种添加到经过c步骤处理的培养基混合液中，在恒温状态下搅拌混合液完成耗氧，制得发酵液；e.静置处理：将经过d步骤制得的发酵液置于密封容器中；每天保持罐内发酵温度为35℃，每天排放一次密封容器中的气体，将装有发酵液的密封容器静置35天，制得具有抗癌作用的生物发酵组合物。实施例3一种具有抗宫颈癌作用的发酵组合物，所述发酵组合物由培养基发酵制成，所述培养基包括按重量百分数计的如下组分：黄柏3％、苍术2％、地肤子2.2％、莪术1.5％、大蓟2.3％、丹参2％、蜈蚣1％、黄连1.5％、香附0.8％、蛇床子0.8％、苏子0.6％、全蝎0.4％、五灵脂0.9％、当归1.5％、续断0.8％，碳源8％、氮源3％、发酵菌种7％，余量为水；所述碳源为葡萄糖，所述氮源为牛肉膏，所述发酵菌种由嗜酸乳杆菌(12wt％)、青春双歧杆菌(4wt％)、动物双歧杆菌(10wt％)、两歧双歧杆菌(11wt％)、短双歧杆菌(6wt％)、婴儿双歧杆菌(11wt％)、长双歧杆菌(4wt％)、嗜热链球菌(9wt％)、植物乳杆菌(8wt％)、醋酸菌(6wt％)、纳豆菌(5wt％)、地衣芽孢杆菌(5wt％)、光合菌(3wt％)和酵母菌(6wt％)混合而成。上述发酵组合物通过如下步骤制得：a.配制培养基混合液：按配方秤取好培养基各组分，混合、搅拌均匀，制得培养基混合液；b.灭菌处理：在经过a步骤制得的培养基混合液中通入120℃的水蒸汽，进行灭菌处理；c.冷却：将经过b步骤处理的培养基混合液降温至41℃；d.接种：在无菌环境中将混合菌种添加到经过c步骤处理的培养基混合液中，在恒温状态下搅拌混合液完成耗氧，制得发酵液；e.静置处理：将经过d步骤制得的发酵液置于密封容器中；每天保持罐内发酵温度为40℃，每天排放一次密封容器中的气体，将装有发酵液的密封容器静置30天，制得具有抗癌作用的生物发酵组合物。实施例41、抗肿瘤实验(1)实验材料受试组合物：采用本发明实施例1-3制得的生物发酵组合物经过冷冻干燥、粉碎，得到酵素粉，对应的编为酵素粉1-3。(2)实验方法接种10天的宫颈癌(hela宫颈癌细胞)瘤块，采用噻唑蓝还原法(mtt)进行体外抗肿瘤实验，以酵素粉1-3为受试药物，以环磷酰胺为阳性对照组，以样品的溶剂即生理盐水为阴性对照组。具体实验结果如表1所示：表1-宫颈癌细胞的抑制作用(ic50为半数抑制率)数据表酵素粉1酵素粉2酵素粉3环磷酰胺ic50值(μg/ml)2.37×10-22.48×10-21.62×10-23.51×10-2由上表中数据可以看出，酵素粉1-3具有良的宫颈癌细胞抑制率，能够用于治疗和辅助治疗癌症。取40个宫颈癌肿瘤(siha宫颈癌细胞)切片，每10个肿瘤切片分为一组，其中第一组至第三组分别用实施例1-3制得的组合物进行培养，第四组利用lb培养基进行培养，观察并计算肿瘤细胞的增殖率，增殖率按如下公式计算：增殖率＝(测试时肿瘤细胞浓度/初始细胞浓度×100％)；测试结果详见下表2：表2：增殖率测试数据表第1天第2天第5天第10天第一组78％74％57％40％第二组80％72％55％39％第三组77％68％51％35％第四组105％215％535％2580％从上表中数据可以看出，本发明的产品对宫颈癌细胞的增殖具有良好的抑制作用。2、副作用实验采用本发明实施例1-3制得的生物发酵组合物经过冷冻干燥、粉碎，得到酵素粉，对应的编为酵素粉1-3。然后招募30名志愿者，每名志愿者体质健康，没10名志愿者编为1组(共3组)，每组对应1种酵素粉；每名志愿者早晚各食用5g酵素粉，观察30天，各志愿者均无身体异常现象，可以看出，本发明的发酵组合物对人体无副作用。3、抑制hpv病毒性能测试取hpv16病毒株，分别加入4个lbs培养基(100ml)中，配制成浓度为1×104个细胞/ml(hpv16病毒)；然后分别向4个培养基中每天(共5天)加入2ml实施例1-3的发酵组合物、生理盐水，然后在第一天、第二天和第五天测试培养基中hpv16病毒浓度，具体测试数据详见下表3：表3：hpv16病毒抑制性能测试表第一天第二天第五天实施例10.8×104个/ml3.2×103个/ml0.21×102个/ml实施例20.8×104个/ml3.0×103个/ml0.18×102个/ml实施例30.8×104个/ml2.8×103个/ml0.12×102个/ml生理盐水1.2×104个/ml2.1×104个/ml1.5×106个/ml由上表中数据可以看出，本发明的发酵组合物对hpv病毒有着良好的抑制作用，对于预防和治疗宫颈癌也具有一定的作用。上述实施方式仅为本发明的优选实施方式，不能以此来限定本发明保护的范围，本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。当前第1页12