本发明涉及一种具有缓解疲劳作用的药物或保健食品组合物及其制备方法和用途。
背景技术：
疲劳是一个常见现象，既可见于健康人群、亚健康人群，又可见于很多疾病人群，也可因某些医疗措施(如癌症放疗、化疗后、骨髓移植后或使用某些生物制剂后)所导致。疲劳是机体复杂的生理生化过程，可不同程度地影响人们的生活质量，因此，随着医学模式的转变及对生活质量的逐步重视，对疲劳的研究也越来越受到研究者的关注。
我国中医认为，疲劳的产生与中医肝、脾两脏关系甚为密切。脾主运化和四肢肌肉，思虑或劳倦过度可损伤脾，导致脾运失常；肝藏血主疏泄，藏血功能可维护其疏泄功能，若肝血不足，可致肝失疏泄，则影响肝调畅气机的功能，从而影响脾脏化生精微、主四肢肌肉的功能。因此，治疗上不仅要补虚扶正，也应祛疲安神。一方面，补虚固元，滋养机体，虚得补，正则旺，疲劳自除；另一方面，调畅心志，舒心畅意，神得安，心则宁，疲劳可消。
正是由于中医独特的理论体系，辨证论治的诊疗思想，以及丰富的干预手段，使得中医药在调治疲劳方面具有得天独厚的优势。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种能够缓解疲劳的药物或保健食品组合物及其制备方法和用途。
本发明提供了一种具有缓解疲劳作用的药物或保健食品组合物，它是由含有下述重量配比的原料制备而成：
黄精2.4-3.6份、地龙蛋白1.6-2.4份、蛹虫草4-6份、人参28-42份、酸枣仁12-18份、玛咖44-66份、雪莲培养物2.4-3.6份。
地龙蛋白：为地龙提取物，含有胶原酶、纤溶酶、蚓激酶、核酸、微量元素等多种成分，其分子量在5000-10000，属于短链小分子物质。所述地龙蛋白可以是按照文献中方法制备得到或商业购买，本发明中地龙蛋白购自天津民生生物工程股份有限公司；
蛹虫草：又名北蛹虫草，为子囊菌门、肉座菌目、麦角菌科、虫草属蛹虫草cordycepsmilitaris的干燥子实体，味甘、性平，归肾、肺经。具有益肾补肺、补精髓、止血化痰的功效。
玛咖：为十字花科独行菜属植物玛咖(lepidiummeyenfi)的干燥块根，具有抗疲劳、改善性功能、调节内分泌系统等功效。
雪莲培养物：是指在无菌条件下，将雪莲离体的植物器官、组织、细胞、胚胎或原生质体培养在人工配制的培养基上，在人工控制的条件下进行培养，使其组织或细胞增值进而按照需要进行培养的技术；或使其脱分化产生愈伤组织，并再逐步分化出器官并长成完整的植株而生产的培养物。
所述雪莲培养物可以是按照文献中方法制备得到或商业购买，本发明中雪莲培养物购自大连普瑞康生物技术有限公司。
其中，它是由下述重量配比的原料制备而成：
黄精3份、地龙蛋白2份、蛹虫草5份、人参35份、酸枣仁15份、玛咖55份、雪莲培养物3份。
其中，所述地龙蛋白的蛋白质含量≧65％、水份≦8％、灰分：≦9％；
所述雪莲培养物的蛋白质≥20％、总黄酮≥7％、水分≤10％、灰分≤10％；
优选地，所述地龙蛋白购自天津民生生物工程股份有限公司；
所述雪莲培养物购自大连普瑞康生物技术有限公司。
其中，它是由所述原料的原生药粉，或水或有机溶剂提取物为活性成分，加上药物或保健品领域可接受的辅料或者辅助性成分制备成常用的口服制剂。
其中，所述口服制剂是口服液、膏剂、颗粒剂、粉剂、片剂、胶囊剂。
本发明还提供了上述组合物的制备方法，它包括如下步骤：
(1)取人参加水提取，然后酶解12小时后离心，过滤，浓缩，浓缩液备用；
(2)取蛹虫草加水提取、过滤、浓缩，浓缩液备用；
(3)将步骤(1)的浓缩液与步骤(2)的浓缩液混匀，得到浸膏，备用；
(4)取黄精、酸枣仁、玛咖粉、雪莲培养物、地龙蛋白加水提取、过滤、浓缩、浓缩液备用；
(5)将步骤(3)的浸膏与步骤(4)的浓缩液混合，喷雾干燥，加入药学或保健品领域可接受的辅料或辅助性成分制备成常用的制剂。
其中，步骤(1)中，提取的方法为：在多功能提取罐内提取2次，其中，第一次加水20倍量，65℃温浸30分钟，然后，保持95-100℃提取1.5小时，过滤；第二次加水10倍量，其它同第一次的提取方法，合并两次滤液；
和/或，浓缩采用二效浓缩法至相对密度为1.01(65～70℃)。
其中，步骤(2)中，提取的方法为：在多功能提取罐内提取2次，其中，第一次加水10倍量，100℃提取1小时，过滤；第二次加水8倍量，其它同第一次的提取方法，合并两次滤液；
和/或，浓缩采用二效浓缩法至相对密度为1.01(65～70℃)。
其中，步骤(4)中，提取的方法为：在多功能提取罐内提取2次，其中，第一次加水10倍量，100℃提取1小时，过滤；第二次加水8倍量，其它同第一次的提取方法，合并两次滤液；
和/或，浓缩采用二效浓缩法至相对密度为1.01(65～70℃)。
本发明还提供了上述组合物在制备具有缓解疲劳作用的药品或保健食品中的用途。
本发明提供的组合物可以显著改善疲劳症状，而且安全可靠、口感良好，适于长期服用，应用前景良好。
附图说明
图1本发明产品的制备工艺简图；虚线框内工序在10万级洁净区内进行。
具体实施方式
下面以实施例作进一步说明，但本发明不局限于这些实施例。
地龙蛋白：天津民生生物工程股份有限公司；色泽：浅黄色粉末；滋味、气味：气味腥、微咸；蛋白质含量≧65％；水份：≦8％；灰分：≦9％。
雪莲培养物：大连普瑞康生物技术有限公司；
鲜品质量要求：性状：紫红色团状颗粒；蛋白质≥1％；总黄酮≥0.4％；水分≤96％；灰分≤1％；
干品质量要求：性状：紫灰色粉末；蛋白质≥20％；总黄酮≥7％；水分≤10％；灰分≤10％。
实施例1本发明组合物的制备
原料：黄精0.3kg、地龙蛋白0.2kg、蛹虫草0.5kg、人参3.5kg、酸枣仁1.5kg、玛咖5.5kg、雪莲培养物(干品)0.3kg。
配制成10l制剂，制备工艺如下：
(一)人参提取
1.前处理：如果购进的是原药，还应该对其拣选，杂质及虫蛀霉变品，除去非食用部位，然后进行切制。
2.提取、过滤：将人参投于多功能提取罐内。第一次加水20倍量，65℃温浸30分钟，打开蒸汽阀门，调节提取罐内压力不得超过0.2mpa，打开蒸汽升温至微沸后计时，保持95-100℃提取1.5小时，先过20目筛，在100目滤布过滤，放液于酶解罐内；第二次加水10倍量，按第一次的提取方法再提一次，放液于酶解罐内，至两次滤液合并于酶解罐内，酶解12小时后高速离心，离心液通过陶瓷膜过滤，过滤后的液体及杂质反复离心。
3.浓缩：将滤液泵入二效浓缩器中浓缩至相对密度为1.01(65～70℃)。一效浓缩温度60～75℃，真空度0.03～0.05mpa；二效浓缩温度50～55℃，真空度0.03mpa-0.07mpa，蒸汽压力0.06～0.10mpa。浓缩液备用。
(二)蛹虫草提取
1.提取、过滤：将蛹虫草投于多功能提取罐内。第一次加水10倍量，打开蒸汽阀门，调节提取罐内压力不得超过0.2mpa，打开蒸汽升温至微沸后计时，保持100℃提取1小时，先过20目筛，在100目滤布过滤，放液于贮液罐内；第二次加水8倍量，按第一次的提取方法再提一次，放液于贮液罐内，至两次滤液合并于贮液罐内。
3.浓缩：将滤液泵入二效浓缩器中浓缩至相对密度为1.01(65～70℃)。一效浓缩温度60～75℃，真空度0.03～0.05mpa；二效浓缩温度50～55℃，真空度0.03mpa-0.07mpa，蒸汽压力0.06～0.10mpa。浓缩液备用。
(三)混合
将上述二种浓缩液边混合边搅拌。得到的浸膏备用。
(四)喷雾干燥
将第三步得到的浸膏送入喷雾干燥机中。
(五)中药原料的提取
1.前处理：如果购进的是原药，还应该对其拣选，杂质及虫蛀霉变品，除去非食用部位。
2.提取：将黄精、酸枣仁、玛咖粉、雪莲培养物(干品)、地龙蛋白
投于多功能提取罐内。第一次加水10倍量，打开蒸汽阀门，调节提取罐内压力不得超过0.2mpa，打开蒸汽升温至微沸后计时，保持100℃提取1小时，先过20目筛，在100目滤布过滤，放液于贮液罐内；第二次加水8倍量，按第一次的提取方法再提一次，放液于贮液罐内，至两次滤液合并于贮液罐内。3.浓缩：将滤液泵入二效浓缩器中浓缩至相对密度为1.01(65～70℃)。一效浓缩温度60～75℃，真空度0.03～0.05mpa；二效浓缩温度50～55℃，真空度0.03mpa-0.07mpa，蒸汽压力0.06～0.10mpa。浓缩液备用。
(六)将中药原料浓缩液送入喷雾干燥机，蒸汽压力控制在0.4mpa-0.5mpa之间，将喷雾干燥机进风温度设置为1650℃，出风温度设置80℃，将步骤(四)浸膏也送入喷雾干燥机中，进料速度设置在3.5—4.0hz，塔体压差保持在-100—-200pa。
(七)收集粉子，粉子收率为10-12％，人参总皂苷含量应≥0.2％，装入包装袋，不超过袋容积2/3，用真空机抽真空封口，称量贴签，备用。
(八)混合、调配：将配方投料量的喷雾粉子投入到配制缸中加入等重量纯化水，蒸汽加热至50℃，边加热边搅拌至均匀，再加入木糖醇0.02kg，然后缓缓加入纯化水定容1000l，调ph至6.5。
(九)灌装：20ml/瓶。
(十)灭菌：108℃恒温灭菌30分钟。
(十一)包装。
以下通过试验例具体说明本发明的有益效果。
试验例1本发明药物或保健食品的药效考察
1材料和方法
1.1样品：黄精地龙蛋白液(即按照本发明实施例1方法制备的组合物)，规格：20ml/瓶，固形物含量为3g的受试样品，样品置阴凉、干燥、通风处保存。为保证样品含量一致，实验采用固形物为剂量标准。
1.2实验动物：选用上海西普尔-必凯实验动物有限公司繁殖的spf级f1代健康雄性小鼠160只，体重20.0～23.8g，实验动物生产许可证号为scxk(沪)2008-0016，合格证编号：2008001626340。
按体重随机分为四大组，其中i组小鼠40只，分为4个剂量组，每组10只，进行负重游泳实验；ii组小鼠40只，分为4个剂量组，每组10只，进行血浆尿素测定；ⅲ组小鼠40只，分为4个剂量组，每组10只，进行肝糖原测定；ⅳ组小鼠40只，分为4个剂量组，每组10只，进行血乳酸测定。
1.3饲养条件：小鼠在温度为20～25℃、相对湿度为40％～70％的本实验室屏障系统中饲养。实验动物使用许可证号：syxk(苏)2012-0041。小鼠辐照灭菌饲料由苏州双狮实验动物饲料科技有限公司提供。
1.4剂量：受试样品人体推荐剂量为：20ml/瓶/人/日(按固形物计为3g/瓶/人/日(以60kg体重计)，设0.25g/kg·bw/d、0.50g/kg·bw/d、1.50g/kg·bw/d三个剂量组(分别相当于受试样品人体推荐摄入量的5倍、10倍、30倍)，另设0g/kg·bw/d组以无菌水代替受试物。受试样品用无菌水配制，低、中、高剂量配制浓度分别为25mg/ml、50mg/ml、150mg/ml，经口每日一次给予小鼠相应剂量的受试物，小鼠灌胃量为0.1ml/10g·bw。连续灌胃一个月后测各项缓解体力疲劳指标。
1.5主要仪器：t-1000型电子天平、t-2000型电子天平、ja-2003型电子天平、jj-100型电子天平、离心机、水浴锅、多功能酶标仪、游泳箱(大小约50cm×50cm×40cm)、铅丝、计时器。
1.6实验方法：按《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)之缓解体力疲劳功能检验方法进行。
1.6.1负重游泳试验
末次给小鼠受试物30min后，置于游泳箱中游泳，水深约35cm，水温25℃±1℃，鼠尾根部负荷5％体重的铅丝。记录小鼠自游泳开始至死亡的时间，作为小鼠负重游泳时间。
剂量组负重游泳时间明显长于0g/kg·bw/d组，且差异有显著性，可判定该实验结果阳性。
1.6.2血浆尿素测定
末次给小鼠受试物30min后，在温度为30℃的水中不负重游泳90min，休息60min后立即眼眶采血。血液离心后，吸取20μl血浆，用二乙酰—肟法测定血浆尿素值。
剂量组血浆尿素低于0g/kg·bw/d组，且差异有显著性，可判定该实验结果阳性。
1.6.3肝糖原测定：蒽酮法
末次给小鼠受试物30min后，立即处死，取肝脏经生理盐水漂洗后用滤纸吸干，精确称取肝脏75mg，加入碱溶液0.225ml，煮沸20min，配制成1％肝匀浆液，取1％肝匀浆液0.1ml，加2ml蒽酮试剂，煮沸5min，冷却后在620nm波长比色测定，根据所称取的肝脏重量计算肝糖原含量。
剂量组肝糖原含量明显高于0g/kg·bw/d组，且差异有显著性，可判定该实验结果阳性。
1.6.4血乳酸测定
末次给小鼠受试物30min后眼眶采血。然后不负重在温度为30℃的水中游泳10min后停止，立即眼眶采血，休息20min后再眼眶采血测定小鼠血清乳酸含量。血乳酸曲线下面积用下式表示：
血乳酸曲线下面积＝1/2×(游泳前血乳酸值+游泳后0min的血乳酸值)×10+1/2×(游泳后0min的血乳酸值+游泳后休息20min的血乳酸值)×20
剂量组血乳酸曲线下面积小于0g/kg·bw/d组，且差异有显著性，可判定该实验结果阳性。
1.7实验数据的数据处理
计量资料用方差分析，先进行方差齐性检验，满足方差齐要求的数据资料用单因素方差分析方法中多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理；对非正态分布或方差不齐的数据资料进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换所得的数据进行统计处理。对转换后仍不能满足正态或方差齐要求的，用秩和检验进行统计处理。
1.8结果判定
若负重游泳试验结果阳性，且血乳酸、血浆尿素、肝糖原三项生化指标中任二项指标阳性，即可判定该受试样品具有缓解体力疲劳作用。
2结果
2.1黄精地龙蛋白液对小鼠体重的影响
见表1。
表1黄精地龙蛋白液对小鼠体重的影响
续表1
续表1
续表1
由表1可见，小鼠的初始体重0.25g/kg·bw/d、0.50g/kg·bw/d、1.50g/kg·bw/d组与0g/kg·bw/d组比较，差异无统计学意义(p﹥0.05)。即小鼠的初始体重在各组间较为均衡。
经口给予小鼠不同剂量的黄精地龙蛋白液一个月，将体重增长值进行方差齐性检验后，满足方差齐性要求，用单因素方差分析方法中多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。由表1可见，0.25g/kg·bw/d、0.50g/kg·bw/d、1.50g/kg·bw/d组与0g/kg·bw/d组比较，差异无统计学意义(p﹥0.05)。因此，本发明组合物对小鼠体重无影响。
2.2黄精地龙蛋白液对小鼠负重游泳时间的影响
经口给予小鼠不同剂量的黄精地龙蛋白液一个月，末次给小鼠受试物30min后，鼠尾根部负荷5％体重的铅丝，置于游泳箱中游泳，测定各组小鼠的负重游泳时间。对所测定的负重游泳时间进行方差齐性检验，满足方差齐的要求，用单因素方差分析方法中多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理，结果见表2。
表2黄精地龙蛋白液对小鼠负重游泳时间的影响
由表2可见，1.50g/kg·bw/d组小鼠负重游泳时间长于0g/kg·bw/d组，且差异有统计学意义(p﹤0.05)，说明本发明药物可以延长小鼠负重游泳时间。
2.3黄精地龙蛋白液对小鼠游泳后血浆尿素水平的影响
经口给予小鼠不同剂量的黄精地龙蛋白液一个月，末次给小鼠受试物30min后，在温度为30℃的水中不负重游泳90min，休息60min后立即眼眶采血，取血浆测定各组小鼠游泳后血浆尿素水平。对血浆尿素进行方差齐性检验，满足方差齐的要求，用单因素方差分析方法中多个实验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理，结果见表3。
表3黄精地龙蛋白液对小鼠游泳后血浆尿素的影响
由表3可见，0.25g/kg·bw/d、0.50g/kg·bw/d、1.50g/kg·bw/d组血浆尿素水平与0g/kg·bw/d组比较，差异无统计学意义(p﹥0.05)。
2.4黄精地龙蛋白液对小鼠肝糖原储备量的影响
经口给予小鼠不同剂量的黄精地龙蛋白液一个月，末次给小鼠受试物30min后，立即处死，取肝脏，测定各组小鼠肝糖原储备量。将所测定的肝糖原储备量进行方差齐性检验，不满足方差齐的要求，用秩和检验进行统计处理，结果见表4。
表4黄精地龙蛋白液对小鼠肝糖原储备量的影响
由表4可见，1.50g/kg·bw/d组肝糖原储备量高于0g/kg·bw/d组，差异有统计学意义(p﹤0.05)。说明本发明药物可以提高小鼠肝糖原储备量。
2.5黄精地龙蛋白液对小鼠游泳前后血乳酸值及其曲线下面积的影响
经口给予小鼠不同剂量的黄精地龙蛋白液一个月，末次给小鼠受试物30min后眼眶采血，然后不负重在温度为30℃的水中游泳10min后停止，立即眼眶采血，休息20min后再眼眶采血，取血清测定小鼠血清乳酸含量。并将血乳酸曲线下面积值进行方差齐性检验，结果不满足方差齐性要求，用秩和检验进行统计处理，结果见表5。
表5黄精地龙蛋白液对小鼠游泳后血乳酸(mmol/l)
曲线下面积的影响
由表5可见，1.50g/kg·bw/d组小鼠游泳后血乳酸曲线下面积值小于0g/kg·bw/d组，差异有统计学意义(p﹤0.05)。说明本发明药物可以减少小鼠游泳后乳酸含量。
因此，经口给予小鼠不同剂量的黄精地龙蛋白液一个月，结果显示：本发明药物组合物可以延长小鼠负重游泳时间，提高小鼠肝糖原储备量、减少小鼠游泳后乳酸含量。根据《保健食品检验与评价技术规范》之缓解体力疲劳功能试验的结果判定，本发明药物组合物具有缓解体力疲劳的作用。