本发明属于兽药技术领域，具体涉及一种净化种鸡沙门菌的药物组合物。
背景技术：
由食源性病原体引发的食品安全问题日益得到人们的重视，其中沙门菌(salmonella)是对家禽生产和公共卫生都非常重要的病原体之一。鸡沙门菌病是由沙门氏杆菌引起的一类常见多发病，雏鸡以高发病、高死亡率为特征，成年鸡感染多呈慢/隐性经过，但往往会诱发内源性感染，成为水平和垂直传播传染源。近年，因种源性污染，致使雏鸡频发鸡白痢和高死亡率的例子屡见不鲜，给商品鸡饲养户带来巨大经济损失。《国家中长期动物疫病防治规划(2012—2020年)》明确要求，促进鸡沙门菌的种源正向系统净化，健全种鸡健康标准。
目前，种鸡沙门菌净化主要采取监测淘汰阳性鸡和定期投喂大剂量抗菌药物以暂时性预防作用。前者经济成本高，多在育种公司实施，后者广泛应用于种鸡繁育场，造成了沙门菌菌株耐药性增强，耐药谱增宽。研究表明，自上世纪60年代始，鸡沙门菌对青霉素、链霉素、磺胺类药物、四环素、卡那霉素以及庆大霉素等的耐药性呈现显著增强变化趋势。疫苗接种是控制沙门菌感染的一种理想手段，但由于沙门菌血清型众多，现有针对特定血清型的灭活苗和弱毒苗，其保护效力十分有限，新型广谱高效疫苗尚在研究之中。
技术实现要素：
为了解决现有技术中存在的问题，本发明提供了一种安全可靠、无激素、无副作用及药物残留的预防和治疗鸡沙门菌病的药物组合物，可以用于净化种鸡沙门菌。
本发明的第一个目的是提供一种净化种鸡沙门菌的药物组合物，各原料药按重量份计为：黄芩黄酮30-50份，l-赖氨酸20-40份，l-精氨酸30-50份。
作为优选，各原料药按重量份计为：黄芩黄酮35份，l-赖氨酸30份，l-精氨酸35份。
作为优选，所述黄芩黄酮的制备方法为：将黄芩饮片粉碎后用二甲基亚砜溶液提取，过滤收集滤液，将滤液进行膜分离，得到黄芩黄酮浓缩液，然后进行喷雾干燥。
作为优选，所述黄芩黄酮的制备方法为：将黄芩饮片粉碎，过80目筛网，加入5-10倍药材重量50％二甲基亚砜溶液，40-60℃浸提1-3次，每次30-90分钟，滤过，合并滤液，选用10nm的无机陶瓷膜，流量为1.2-1.8l/min、压力0.12mpa和料液温度25-40℃，进行超滤，得黄芩黄酮浓缩液，以进风温度100-150℃，进料体积流量6-12ml/min，喷雾干燥。
作为进一步优选，所述黄芩黄酮的制备方法为：将黄芩饮片粉碎，过80目筛网，加入5倍药材重量50％二甲基亚砜溶液，40℃浸提2次，每次60分钟，滤过，合并滤液，选用10nm的无机陶瓷膜，流量为1.5l/min、压力0.12mpa和料液温度30℃，进行超滤，得黄芩黄酮浓缩液，以进风温度120℃，进料体积流量9ml/min，喷雾干燥。
本发明的第二个目的是提供上述药物组合物的制备方法，按照处方量，称取黄芩黄酮、l-赖氨酸、l-精氨酸，混匀，分装，即得。
本发明的第三个目的是提供上述药物组合物在制备预防和/或治疗鸡沙门菌的药物中的应用。
作为优选，所述药物组合物在制备净化种鸡沙门菌的药物中的应用。
本发明的第四个目的是提供上述药物组合物在提高种鸡生产性能和种蛋孵化性能中的应用。
本发明涉及的药物组合物针对种鸡养殖企业鸡沙门菌病发生于传播的关键环节，通过净化预产期种鸡沙门菌，达到净化种鸡沙门菌病的目的。本发明是根据传统兽医药理论和现代营养药理学原理，将中药提取物和营养素有机结合起来，形成了以“本源调理”为核心的种鸡沙门菌净化的药物组合物。其中黄芩是常用传统中药，具有清热解毒、止血安胎等功效。黄芩药效活性成分主要为黄酮类，如黄芩苷、汉黄芩苷及其苷配基黄芩素、汉黄芩素，具有抗细菌病毒、抗炎、护肝及抗癌等多种药理作用。l-赖氨酸和l-精氨酸均为机体必需氨基酸，除了一般营养功能外，同时也具有多效生物活性。其中，l-赖氨酸具有抗炎镇痛、保护肝细胞、利尿、免疫增强作用以及抗病毒作用。l-精氨酸是机体一氧化氮的前体物质，可在一氧化氮合酶(nos)催化生成具有生物活性的no，从而改善肠粘膜结构，增强机体免疫力。同时，l-赖氨酸和l-精氨酸的使用亦具有增加黄芩黄酮溶解和提高黄芩黄酮生物利用度的作用，适合规模化养殖水线给药途径的用药需求。本发明药物组合物不仅可以有效抑杀沙门菌，同时可以通过调节种鸡免疫防御力和肠道健康水平，故可有效降低种鸡沙门菌的水平传播和潜在内源性位移造成的种蛋携菌污染，净化种鸡沙门菌，提高种鸡生产性能和种蛋孵化性能，降低母源性感染，保障雏鸡健康。其着眼点在于调节种鸡机体本身的自愈力，达到“阴平阳秘”的健康状态。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为市售。
本发明的净化种鸡沙门菌的药物组合物包括以下质量份数的各组分：
黄芩黄酮30-50份，l-赖氨酸20-40份，l-精氨酸30-50份。
上述组合物中的黄芩黄酮，按照以下提取方法进行制备，获得黄芩黄酮的含量以黄芩苷计可达90-96％。
(1)黄芩黄酮提取：将黄芩饮片粉碎，过80目筛网，加入5-10倍药材重量50％二甲基亚砜溶液，40-60℃浸提1-3次，每次30-90分钟，滤过，合并滤液，备用。
(2)膜分离：将步骤(1)得到的滤液进行膜分离，膜分离条件为：选用10nm的无机陶瓷膜，流量为1.2-1.8l/min、压力0.12mpa和料液温度25-40℃，得黄芩黄酮浓缩液。
(3)喷雾干燥：将步骤(2)得到的黄芩黄酮浓缩液进行喷雾干燥，喷雾干燥条件为：进风温度100-150℃，进料体积流量6-12ml/min。
在以下述最优条件进行提取时，获得黄芩黄酮的含量以黄芩苷计，达到最高，可达95.0％以上。
(1)黄芩黄酮提取：将黄芩饮片粉碎，过80目筛网，加入5倍药材重量50％二甲基亚砜溶液，40℃浸提2次，每次60分钟，滤过，合并滤液，备用。
(2)膜分离：将步骤(1)得到的滤液进行膜分离，膜分离条件为：选用10nm的无机陶瓷膜，流量为1.5l/min、压力0.12mpa和料液温度30℃，得黄芩黄酮浓缩液。
(3)喷雾干燥：将步骤(2)得到的黄芩黄酮浓缩液进行喷雾干燥，喷雾干燥条件为：进风温度120℃，进料体积流量9ml/min。
本发明的净化种鸡沙门菌的药物组合物的制备方法为：按处方比例，称取黄芩黄酮、l-赖氨酸和l-精氨酸，混匀，分装，即得。
本发明的净化种鸡沙门菌的药物组合物的使用方法为：在按照国家鸡白痢净化要求第一次血清学检测后，以0.1g/kg·bw剂量，连续给药7天，为一个疗程，以后每间隔30天用药一个疗程，至种鸡淘汰为止。
实施例1
本发明的净化种鸡沙门菌的药物组合物的配方为：
黄芩黄酮30重量份、l-赖氨酸20重量份、l-精氨酸30重量份。
其中，黄芩黄酮的制备方法为：
(1)黄芩黄酮提取：将黄芩饮片粉碎，过80目筛网，加入5倍药材重量50％二甲基亚砜溶液，40℃浸提2次，每次60分钟，滤过，合并滤液，备用。
(2)膜分离：将步骤(1)得到的滤液进行膜分离，膜分离条件为：选用10nm的无机陶瓷膜，流量为1.5l/min、压力0.12mpa和料液温度30℃，得黄芩黄酮浓缩液。
(3)喷雾干燥：将步骤(2)得到的黄芩黄酮浓缩液进行喷雾干燥，喷雾干燥条件为：进风温度120℃，进料体积流量9ml/min。得到的黄芩黄酮的含量以黄芩苷计，达到最高，可达95.0％。
本发明的净化种鸡沙门菌的药物组合物的制备方法为：按处方比例，称取黄芩黄酮、l-赖氨酸和l-精氨酸，混匀，分装，即得。
按照处方比例，称取黄芩黄酮30kg、l-赖氨酸20kg、l-精氨酸30kg，混匀，分装，得到净化种鸡沙门菌的药物组合物。
实施例2
本发明的净化种鸡沙门菌的药物组合物的配方为：
黄芩黄酮35重量份，l-赖氨酸30重量份，l-精氨酸35重量份。
黄芩黄酮的制备方法与实施例1相同。
按照处方比例，称取黄芩黄酮35kg，l-赖氨酸30kg，l-精氨酸35kg，混匀，分装，得到净化种鸡沙门菌的药物组合物。
实施例3
本发明的净化种鸡沙门菌的药物组合物的配方为：
黄芩黄酮50重量份、l-赖氨酸40重量份、l-精氨酸50重量份。
黄芩黄酮的制备方法与实施例1相同。
按照处方比例，称取黄芩黄酮50kg、l-赖氨酸40kg、l-精氨酸50kg，混匀，分装，得到净化种鸡沙门菌的药物组合物。
实施例4
本发明的净化种鸡沙门菌的药物组合物的配方为：
黄芩黄酮40重量份、l-赖氨酸25重量份、l-精氨酸35重量份。
黄芩黄酮的制备方法为：
(1)黄芩黄酮提取：将黄芩饮片粉碎，过80目筛网，加入8倍药材重量50％二甲基亚砜溶液，50℃浸提1次，每次30分钟，滤过，合并滤液，备用。
(2)膜分离：将步骤(1)得到的滤液进行膜分离，膜分离条件为：选用10nm的无机陶瓷膜，流量为1.2l/min、压力0.12mpa和料液温度25℃，得黄芩黄酮浓缩液。
(3)喷雾干燥：将步骤(2)得到的黄芩黄酮浓缩液进行喷雾干燥，喷雾干燥条件为：进风温度100℃，进料体积流量6ml/min。得到的黄芩黄酮的含量以黄芩苷计，可达93.0％。
按照处方比例，称取黄芩黄酮40kg、l-赖氨酸25kg、l-精氨酸35kg，混匀，分装，得到净化种鸡沙门菌的药物组合物。
实施例5
本发明的净化种鸡沙门菌的药物组合物的配方为：
黄芩黄酮45重量份、l-赖氨酸35重量份、l-精氨酸45重量份。
黄芩黄酮的制备方法为：
(1)黄芩黄酮提取：将黄芩饮片粉碎，过80目筛网，加入10倍量50％二甲基亚砜溶液，60℃浸提3次，每次90分钟，滤过，合并滤液，备用。
(2)膜分离：将步骤(1)得到的滤液进行膜分离，膜分离条件为：选用10nm的无机陶瓷膜，流量为1.8l/min、压力0.12mpa和料液温度40℃，得黄芩黄酮浓缩液。
(3)喷雾干燥：将步骤(2)得到的黄芩黄酮浓缩液进行喷雾干燥，喷雾干燥条件为：进风温度150℃，进料体积流量12ml/min。得到的黄芩黄酮的含量以黄芩苷计，可达91.0％。
按照处方比例，称取黄芩黄酮45kg、l-赖氨酸35kg、l-精氨酸45kg，混匀，分装，得到净化种鸡沙门菌的药物组合物。
为了进一步说明本发明的实质以及本发明药物组合物净化种鸡沙门菌的有益效果，申请人对本发明药物组合物进行了临床治疗试验研究，来说明本发明药物组合物的优异效果。
实施例6
(一)本发明药物组合物治疗种鸡沙门菌病的临床疗效评价试验研究
1试验药品
本发明药物组合物。
2试验动物
兰州永登某养殖场的鸡沙门菌抗体阳性鸡群，该场种鸡产蛋率及受精率均较低，死胚率较高，利用鸡白痢、鸡伤寒多价平板凝集抗原(中国兽药监察所生产)检测为鸡沙门菌抗体阳性的鸡只纳入本试验研究，共有320只，均为产蛋高峰期鸡。
3试验设计
3.1随机分组将上述符合本研究的鸡沙门菌抗体阳性的种鸡随机分为4组，其中对照组(80只)，试验1组(实施例1，80只)、试验2组(实施例2，80只)和试验3组(实施例3，80只)。
3.2治疗方案本发明药物组合物组(试验1组、试验2组和试验3组)，按照0.1g/kg·bw剂量口服给药，一天一次，连用7天。对照组，阿莫西林可溶性粉，一次量，每1kg体重30mg，一日2次，连用7日。
3.3疗效判定与检测方法
3.3.1疗效评价指标
有效末次用药治疗后第14天，采用血液平板凝集试验检测沙门菌抗体，转阴者判为有效。
无效末次用药治疗后第14天，采用血液平板凝集试验检测沙门菌抗体，为阳性者判为无效。
3.3.2检测方法将鸡白痢、鸡伤寒多价平板凝集抗原充分摇匀后，用移液器吸取20μl滴于玻璃板上，然后用针头刺破鸡翼下静脉，待血液流出后，立即用移液器吸取20μl血液放入抗原液中，将血液与抗原混合均匀，并使其散开至直径约为2cm，轻轻摇动反应板，仔细观察，在2min内判定结果。出现明显颗粒或块状凝集者为阳性，不发生颗粒或凝集者为阴性，介于上述两者之间为可疑，于7天后再采集血液进行检测确认。
4数据统计
利用
5结果
本试验共收治种鸡沙门菌病例320例，每个试验组80例，结果见表1。与对照组比较，本发明药物组合物治疗种鸡沙门菌的痊愈率极显著提高(p<0.01)，三个组别的治愈率分别为86.25％、90.00％和88.75％。
表1本发明药物组合物治疗种鸡沙门菌病临床疗效试验结果
注：同列数据肩标有相同字母者差异不显著(p>0.05)，标注不同小写字母者差异显著(p<0.05)；同一组别同列标注不同大写字母者差异显著(p<0.01)。下同。
6结论本发明药物组合物可有效治疗种鸡沙门菌病。由于实施例2的药物组合物在治疗性试验结果中治疗效果最佳，故作为预防性治疗试验和净化临床试验的受试药物。
(二)本发明预防种鸡沙门菌的临床疗效评价试验研究
1试验药品
实施例2的本发明药物组合物。
2试验动物
兰州永登某养殖场的鸡白痢阳性鸡群，该场种鸡产蛋率及受精率均较低，死胚率较高，从产蛋受精率低的种鸡群中随机选两栋49周龄，鸡白痢阳性率为35％，产蛋率变化幅度在5％-10％且受精率也下降的鸡群，共7900只种鸡。
3试验设计
3.1随机分组将符合本研究的鸡群随机分为2组，以一栋鸡舍鸡只为一组，其中对照组4000只，试验组3900只。
3.2治疗方案本发明药物组合物组，按照0.1g/kg·bw剂量口服给药，一天一次，连用7天。对照组，阿莫西林可溶性粉，一次量，每1kg体重30mg，一日2次，连用7日。
3.3检测指标末次用药治疗后第14天，采用血液平板凝集试验检测鸡沙门菌抗体阳性率。方法同上。
4数据统计
利用
5结果
5.1本发明药物组合物预防种鸡沙门菌的效果
本发明药物组合物预防种鸡沙门菌病的效果结果见表2。与对照组比较，本发明药物组合物中种鸡白痢阳性率为极显著降低(p<0.01)，预防有效率达97.5％。
表2本发明药物组合物预防种鸡沙门菌病的临床疗效试验结果
5.2本发明药物组合物对受试种鸡生产性能的影响
本发明药物组合物对受试种鸡生产性能的影响见表3。与对照组比较，本发明药物组合物可提高受试鸡只的产蛋率，差异极显著(p<0.01)，显著提高种蛋受精率(p<0.05)，显著降低死胚率(p<0.05)，表明本发明药物组合物作为预防性干预措施可有效提高受试种鸡的生产性能。
表3本发明药物组合物对受试种鸡生产性能的影响
6结论本发明药物组合物可提高受试鸡只的产蛋率，显著提高种蛋受精率，显著降低死胚率，并提高其生产性能。
(三)本发明药物组合物净化种鸡沙门菌的临床效果
1试验药品
实施例2的本发明药物组合物。
2试验动物
河南省郑州市城郊某aa+父母代种鸡繁殖场，共6300套父母代种鸡，28周龄，平均体重是3.2kg/只。
3净化方案按照栋别分为对照组(3300套)和净化给药组(3000套)，于28周龄开始净化用药，按照0.1g/kg·bw剂量口服给药，给药7天，为一个疗程，以后每间隔30天用药一个疗程，至58周龄淘汰，共用药干预28周。而对照组不给药，两组别在鸡舍结构、笼具、饲料、饮水、光照和免疫等饲养管理条件上完全一致。
4试验指标观察与记录
4.1沙门菌抗体阳性率检测于给药前(第28周)、第40周和52周，采用血液平板凝集试验检测鸡沙门菌抗体阳性率。方法同上。
4.2受试鸡生产性能和孵化性能观察观察、记录和统计两组受试鸡的种蛋合格率、受精率、孵化率和健雏率等指标。
5数据处理
利用
6本发明药物组合物净化种鸡沙门菌的临床效果
6.1本发明药物组合物净化种鸡沙门菌的效果
本发明药物组合物净化种鸡沙门菌病的效果结果见表4。与对照组比较，试验前，两组中鸡沙门菌阳性率无差异(p＞0.05)；第40周和第52周，本发明药物组合物中种鸡沙门菌抗体阳性率均极显著降低(p<0.01)。两次时间节点的沙门菌抗体阳性检出率均小于0.5％，符合父母代种鸡场沙门菌净化的国家标准要求。
表4本发明药物组合物净化种鸡沙门菌病的临床疗效试验结果
6.2本发明药物组合物对受试鸡群的孵化性能的影响
本发明药物组合物对受试鸡群的孵化性能的影响见表5。与对照组比较，受试鸡群的种蛋合格率，种蛋受精率，出雏率以及健雏率均提高，差异极显著(p<0.01)。表明按照本发明药物组合物施予方法和净化方案，可有效提高受试种鸡群的孵化性能。
表5本发明药物组合物对受试鸡群的孵化性能的影响
7结论按照本发明药物组合物施予方法和净化方案，可有效降低种鸡沙门菌阳性率，符合父母代种鸡场沙门菌净化的国家标准要求(抗体阳性检出率＜0.5％)，并提高受试种鸡群的孵化性能，达到净化目的。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。