本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种抗脑缺血再灌注损伤药丹酚的制备、药物组合物及其含量测定方法与临床应用。
背景技术：
近年来，脑卒中发病率逐年升高，是目前三大致死性疾病之一，具有高发病率、高患病率、高死亡率、高致残率、高复发率的特点。脑卒中分为缺血性脑卒中和出血性脑卒中，缺血性卒中发病率远高于出血性卒中，占脑卒中的70％以上，缺血脑组织在一定条件下恢复血液流动，出现了更加严重的脑功能障碍和结构损伤，称之为脑缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusioninjury，iri)。治疗缺血性脑卒中的主要途径是疏通脑血管恢复血液供应，而减轻缺血再灌注损伤已成为治疗环节中不可缺少的重要部分。
丹参为唇形科植物丹参(salviaemiltiorrhizabunge)干燥根和根茎。味苦，性微寒，归心、肝经。具有活血祛瘀，通经止痛，清心除烦，凉血消痈之功效。用于胸痹心痛，脘腹胁痛，瘕瘕积聚，热痹疼痛，心烦不眠，月经不调，痛经经闭，疮疡肿痛。有预防和/或治疗脑缺血、心肌缺血、抑制白内障形成等作用。
发明人已经获得“一种丹参提取物的制备、药物制剂和含量测定方法”专利(专利号：zl200510037786.5)，该专利工艺沿用了“水煮醇沉”经典工艺中的“水煮”，革除了“醇沉”。因此，本品的质、量和生产工艺等诸方面均与丹参制剂有很大区别，专利提取工艺省，纯度好，得量高、成本低，药品审评中心发文要求重新命名，并要求制定丹酚含量的上下限，经国家食品药品监督管理局核准本品名称定为“丹酚”，以示与已有的丹参制剂区别。但是，工艺中的长时间水煮，不仅耗用大量能源，而且还造成主成分降解。对此，发明人经多年不懈研究和创新，取得了突破性进展：室温/80～85℃超短时间快搅拌提取，首次10min，第2、3次各提取5min，主成分降解减少10～15％，收率提高10％以上，优化了提取用水量，提取效率提高到2.4倍；优化了树脂型号，使纯度提高了20％以上；改变精滤方式，过滤效率提高40倍；改减压热浓缩为稀的纯化液室温过柱富集，进一步节省能源，提取、分离纯化、浓缩全过程都不和/或很少加热，据不完全统计，按全国年产丹参注射剂计算，可节省标准煤58.368万吨，节省人民币63.037亿元，减少排放二氧化碳152.92416万吨、二氧化硫4962.816吨、氮氧化物4319.232吨，大大地降低中药制药行业对环境的污染，产量是原专利的近3倍，实现了丹酚提取工艺绿色化。本专利是前专利的续篇和补充。新专利与原专利相比，主要特点见表1。
表1新专利与原专利的主要区别
丹酚的生产工艺已经试生产放大验证，各关键技术参数重复性好，可行性高，新专利工艺在节能减排，产品纯度，生产周期、成本、质量标准等诸方面取得重大进展，为中药现代化迈出了坚实的一步。
技术实现要素：
本发明已经查明丹参中丹酚各成分及其主成分的生成与转化，不同地域、相似地域不同栽培条件、不同采收季节、不同干燥方式或不同炮制方法生产的丹参，其丹酚各成分的比例和含量是不同的，甚至是大不相同。丹参中主要活性成分丹酚酸b及其相关的大部分成分都是在和/或仅仅在“丹参光合作用终止”即采集后，丹参中某些“小分子底物”在“某种酶”的作用下生成“大分子”丹酚酸b，亦或丹酚酸b再降解生成丹参素、原儿茶醛、咖啡酸、紫草酸、丹酚酸a等。其合成条件和方法有或利用太阳光强晒，或加热烘干，或加强炮制，或调整提取工艺，改冷提为熱提，可使目标成分达到要求。在诸方法中调整提取温度是最有效、最便捷、最经济的方法。凡此操作均应适度，不能过度，过度了会使相关成分降解而降低。因此，在生产丹酚前进行预试验是必要的，即采集具有代表性的小样适量，粉碎成细粉，秤取丹参粉20g，加水/80～85℃热水100g，室温/低温快速搅拌提取10min，过滤，取滤渣1加水/80～85℃热水100g，室温/低温快速搅拌提取5min，过滤，滤渣2加水/80～85℃热水80g，室温/低温快速搅拌提取5min，过滤，合并三次滤液，放置3～4小时，使冷至室温，精密过滤，精滤液用18％盐酸调ph为3.5～4.0，放置6～15小时，精密过滤，取续滤液20μl注入hplc色谱仪，记录色谱图，计算丹参中丹酚含量应不低于3.0％，并与对照丹参hplc指纹图谱比较，相似度应不低于90.0％，符合丹参的企业内控质量标准。
如果丹参粉在80～85℃热搅拌提取结果有明显改善，但仍不符合企业内控标准，则可或适当提高热提温度，或适当延长热提时间，使之达到要求。即使仍达不到企业内控质量标准，如继续处理也可获得合格的丹酚，但收率会明显降低，从经济学考虑，则该丹参不适于作为制备丹酚的原料，甚至不能供药用。
能否获得合格提取液是制备丹酚重要的一步，进一步的工作就是纯化、浓缩和干燥。
一次过柱纯化上述丹参提取液过2号大孔树脂柱(径高比＝325∶1200)，依次用5bv纯化水、3bv3％乙醇、3bv10％乙醇洗涤，再用3～5bv20％乙醇洗脱，流速为0.3～0.5bv/h，收集含丹酚的洗脱液，用18％盐酸调ph为2.00～2.50，必要时精滤，供二次过柱富集；
二次过柱富集上述ph为2.00～2.50纯化液过3号树脂柱(径高比＝325∶300)富集(浓缩)，5bv注射用水洗，沥干柱中水，用0.8bv30％醇洗，沥干后，再用2bv50％醇洗脱，收集洗脱液至完，稍浓缩，使丹酚浓度为150～200mg/ml，精密过滤，待喷雾干燥；
喷雾干燥上述浓缩纯化液采用负压喷雾干燥，进风温度为105～110℃，出风温度为75±5℃，喷头转速250～300hz，进料速度15～30rp/min，得微黄色～黄色粉末状丹酚，秤重，计算收率。
本发明还公开了一组丹参全水溶性成分“丹酚”，而不是丹参中的少数几种含量很少的成分。
本发明还公开了超短时间室温/低温搅拌提取、高效分离纯化、不加热过树脂柱富集，减少热敏药物降解，亦或使制备热敏的纯品成为可能，最大限度使丹酚工艺绿色化。
本发明还公开了如何从一定的不同质量丹参能制备hplc指纹图谱与对照的丹参hplc指纹图谱相似度大于90.0％的丹酚的新方法。
本发明公开的丹酚制备方法重现性好，试生产的产品用《中药色谱指纹图谱相似度判断软件》计算，丹酚的指纹图谱与丹参的指纹图谱相似度大于90.0％，而不是几个标志性成分的保留时间或相对保留时间相近似。
本发明还公开了采用不少于6～8个对照品测定丹酚含量的方法，6～8个成分含量之和不少于95％。
本发明还公开了丹酚的新药物组合物及其制备新工艺和新技术。
本发明公开了“丹酚”的新药物组合物在预防和治疗缺血性心血管疾病、脑血管疾病及脑卒中恢复期等方面的临床应用。
附图说明
图1、新鲜丹参室温快速搅拌提取液hplc图谱(与对照图谱比，明显不相似，未列入计算相似度)。
图2、新鲜丹参加80～85℃热水快速搅拌提取液的hplc图谱。
图3、丹参煮沸快速搅拌提取液的hplc图谱。
图4、试生产的“丹酚”hplc图谱，拟作为说明书摘要附图。
图5、试生产的“丹酚滴丸”的hplc图谱。
图6、试生产的“注射用丹酚”的hplc图谱。
图7、丹参水提取液、80～85℃热水快速搅拌提取液、丹参煮沸快速搅拌提取液、丹酚、丹酚滴丸、注射用丹酚的hplc图谱相似度分析报告。
图8、丹参水煮提液、80～85℃热水快速搅拌提取液、丹酚、注射用丹酚、丹酚滴丸的hplc图谱相似度计算结果。
注：标准对照hplc图谱是由9张图谱合成，无法打印，不能提供。
具体实施方式
以下通过实施例来进一步描述本发明，应该理解的是，这些实施例仅用于例证的目的，决不限制本发明的保护范围。
实施例1丹酚的制备
预试验：取青岛产丹参(春季采挖，经加温闷热烘干处理过，放置，粉碎)粉20g，加水100g，室温快速搅拌10min，过滤，滤渣1加水100g，室温快速搅拌5min，过滤，滤渣2加水80g，室温快速搅拌5min，过滤，合并三次滤液，精密过滤，取续滤液20μl注入hplc色谱仪，记录色谱图，外标法计算丹酚含量为3.35％，并与对照丹参hplc指纹图谱比较，相似度为98.6％。符合丹参的内控质量标准。
提取取上述预试验同批的丹参粉50kg，加水250kg，快速搅拌10min，离心甩滤，滤渣1加水250kg，，快速搅拌5min，离心甩滤，滤渣2加水200kg，快速搅拌5min，离心甩滤，合并三次滤液，放置4h，使冷至室温，精密过滤，精滤液用18％盐酸调ph为3.65，放置15h，精密过滤，滤液用10％氢氧化钠液调ph为5.61，待一次过柱纯化。
一次过柱纯化上述提取液过2号大孔树脂柱(径高比＝325∶1200)，依次用5bv纯化水3bv3％醇、3bv10％醇洗涤，2bv18％醇洗脱，流速500±100ml/min，收集稀醇洗脱液160l，用18％盐酸调节ph为2.2，待二次过柱富集
二次过柱富集上述纯化液过3号树脂柱(径高比＝325∶300)富集，用5bv注射用水洗涤，沥干柱中水，用0.8bv30％醇洗涤，沥干后，再用1bv50％醇洗脱，收集20l洗脱液，稍浓缩，使丹酚浓度为188mg/ml，精密过滤，待喷雾干燥。
喷雾干燥上述纯化液负压喷雾干燥，喷雾干燥参数设计：进风温度105℃～110℃，出风温度70±5℃，喷头转速250～300hz，进料速度15～30rp/min，得黄色粉末，重1.265kg，收率为2.53％。
实施例2丹酚的制备
预试验：取青岛产丹参(秋季采挖，烘干，粉碎)粉20g，加水100g，室温快速搅拌10min，过滤，滤渣1加水100g，室温快速搅拌5min，过滤，滤渣2加水80g，室温快速搅拌5min，过滤，合并三次滤液，精密过滤，取续滤液20μl注入hplc色谱仪，记录色谱图，外标法计算丹酚含量为2.53％，并与对照丹参hplc指纹图谱比较，明显不相似。丹酚酸b的含量也明显偏低，不符合丹参的内控质量标准。
另取与预试验同批的青岛产丹参粉20g加80～85℃热水100g，快速搅拌10min，过滤，滤渣1加80～85℃热水100g，快速搅拌5min，过滤，滤渣2加80～85℃热水80g，快速搅拌15min，过滤，合并三次滤液，放冷3～4h，冷至室温，精密过滤，取续滤液20μl注入hplc色谱仪，记录色谱图，用外标法计算丹参中丹酚含量为3.49％，并与标准对照丹参hplc指纹图谱比较，相似度为99.83％，符合丹参内控质量标准。
提取取上述预试验同批的丹参粉50kg，加80～85℃热水250kg，快速搅拌10min，离心甩滤，滤渣1加80～85℃热水250kg，，快速搅拌5min，离心甩滤，滤渣2加80～85℃热水200kg，快速搅拌5min，离心甩滤，合并三次提取滤液，放置4h，使冷至室温，精密过滤，精滤液用18％盐酸调ph为3.65，放置15h，精密过滤，滤液用10％氢氧化钠液调ph为5.62，待一次过柱纯化。
一次过柱纯化上述提取液过2号大孔树脂柱(径高比＝325∶1200)，依次用5bv纯化水、3bv3％醇、3bv10％醇洗涤，3bv18％醇洗脱，流速500±100ml/min，收集稀醇洗脱液160l，用18％盐酸调节ph为2.2，待二次过柱富集
二次过柱富集上述纯化液过3号树脂柱(径高比＝325∶300)，用5bv注射用水洗涤，沥干柱中水，用0.8bv30％醇洗涤，沥干后，再用1bv50％醇洗脱，收集20l洗脱液，稍浓缩，使丹酚浓度为188mg/ml，必要时，精密过滤，待喷雾干燥。
喷雾干燥上述浓缩纯化液用负压喷雾干燥，喷雾干燥参数设计：进风温度105℃～110℃，出风温度70±5℃，喷头转速250～300hz，进料速度15～30rp/min，得黄色粉末，重1.275kg，收率为2.55％。
实施例3丹酚的制备
提取取实施例2丹参粉50.1kg，加80～85℃热水250kg，快速搅拌10min，离心甩滤，滤渣1加80～85℃热水250kg，快速搅拌5min，离心甩滤，滤渣2加80～85℃热水200kg，快速搅拌5min，离心甩滤，合并三次滤液，放置4h，使冷至室温，精密过滤，精滤液用18％盐酸调ph为3.61，放置15h，精密过滤，滤液用10％氢氧化钠液调ph为5.63，待一次过柱纯化。
一次过柱纯化上述提取液过2号大孔树脂柱(径高比＝325∶1200)，依次用5bv纯化水、3bv3％醇、3bv10％醇洗涤，2bv18％醇洗脱，流速500±100ml/min，收集稀醇洗脱液160l，用18％盐酸调ph为2.2，待二次过柱富集
二次过柱富集上述纯化液过3号树脂柱(径高比＝325∶300)，用5bv注射用水洗涤，沥干柱中水，用0.8bv30％醇洗涤，再沥干后，用1bv50％醇洗脱，收集20l洗脱液，稍浓缩，使丹酚浓度为191mg/ml，必要时精滤，待喷雾干燥。
喷雾干燥上述浓缩纯化液用负压喷雾干燥，喷雾干燥参数设计：进风温度105℃～110℃，出风温度70±5℃，喷头转速250～300hz，进料速度15～30rp/min，得黄色粉末，重1.287kg，收率为2.574％。
实施例4丹酚的制备
提取取实施例2丹参粉50.2kg，加80～85℃热水250kg，快速搅拌10min，离心甩滤，滤渣1加80～85℃热水250kg，快速搅拌5min，离心甩滤，滤渣2加80～85℃热水200kg，快速搅拌5min，离心甩滤，合并三次滤液，放置4h，使冷至室温，精密过滤，精滤液用18％盐酸调ph为3.61，放置11小时，精密过滤，滤液用10％氢氧化钠液调ph为5.7，待一次过柱纯化。
一次过柱纯化上述提取液过2号大孔树脂柱(径高比＝325∶1200)，依次用5bv纯化水、3bv3％醇、3bv10％醇洗涤，2bv18％醇洗脱，流速500±100ml/min，收集稀醇洗脱液160l，用18％盐酸调ph为2.3，待二次过柱富集
二次过柱富集上述纯化液过3号树脂柱(径高比＝325∶300)，用5bv注射用水洗涤，沥干柱中水，用0.8bv30％醇洗涤，沥干后，用1bv50％醇洗脱，收集20l洗脱液，稍浓缩，使丹酚浓度为177mg/ml，必要时精滤，待喷雾干燥。
喷雾干燥上述纯化液用负压喷雾干燥，喷雾干燥参数设计：进风温度105℃～110℃，出风温度70±5℃，喷头转速250～300hz，进料速度15～30rp/min，得黄色粉末，重1.259kg，收率为2.518％。
实施例2～4结果显示其纯度与收率的相对偏偏差较小
实施例5丹酚的制备
预试验：取丹参(青岛产，春季采挖，烘干，粉碎)粉20g，加水100g，室温快速搅拌10min，过滤，滤渣1加水100g，室温快速搅拌5min，过滤，滤渣2加水80g，室温快速搅拌5min，过滤，合并三次滤液，放置4h，精密过滤，取续滤液20μl注入hplc色谱仪，记录色谱图，按外标法计算丹酚含量为2.89％，并与标准对照丹参hplc指纹图谱比较，明显不相似。丹酚酸b的含量也明显偏低，不符合丹参的内控质量标准。
另取与预试验同批的青岛产丹参粉20g加80～85℃热水100g，快速搅拌10min，过滤，滤渣1加80～85℃热水100g，快速搅拌5min，过滤，滤渣2加80～85℃热水80g，快速搅拌5min，过滤，合并三次滤液，放置4h，使冷至室温，精密过滤，取续滤液20μl注入hplc色谱仪，记录色谱图，用外标法计算丹参中丹酚含量为3.68％，并与对照丹参hplc指纹图谱比较，相似度为99.88％，符合丹参内控质量标准。
提取取与预试验同批的青岛产丹参粉50kg，加80～85℃热水250kg，快速搅拌10min，离心甩滤，滤渣1加80～85℃热水250kg，，快速搅拌5min，离心甩滤，滤渣2加80～85℃热水200kg，快速搅拌5min，离心甩滤，合并三次滤液，放置4h，使冷至室温，精密过滤，精滤液用18％盐酸调ph为3.65，放置15h，精密过滤，滤液用10％氢氧化钠液调ph为5.62，待一次过柱纯化。
一次过柱纯化上述提取液过2号大孔树脂柱(径高比＝325∶1200)，依次用5bv纯化水、3bv3％醇、3bv10％醇、2bv18％醇洗，流速500±100ml/min，收集稀醇洗脱液160l，用18％盐酸调节ph为2.2，待二次过柱富集
二次过柱富集上述纯化液过3号树脂柱(径高比＝325∶300)，用5bv注射用水洗涤，沥干柱中水，用0.8bv30％醇洗涤，沥干后，用1bv50％醇洗脱，收集20l洗脱液，稍浓缩，使丹酚浓度为188mg/ml，精密过滤，待喷雾干燥。
喷雾干燥上述纯化液用负压喷雾干燥，喷雾干燥参数设计：进风温度105℃～110℃，出风温度70±5℃，喷头转速250～300hz，进料速度15～30rp/min，得黄色粉末，重1.275kg，收率为2.55％。
实施例6丹酚的制备
提取取实施例5的丹参粉50kg，加80～85℃热水250kg，快速搅拌10min，离心甩滤；取滤渣1加80～85℃热水250kg，快速搅拌5min，离心甩滤，取滤渣2加80～85℃热水200kg，搅拌5min，离心甩滤，合并三次滤液，放置4h，使冷至室温，精密过滤，精滤液用18％盐酸调ph为3.65，放置16小时(放置过夜)，精密过滤，滤液用10％氢氧化钠液调ph为5.6，待一次过柱纯化用。
一次过柱纯化上述提取液过2号大孔树脂柱(径高比＝325∶1200)，依次用5bv纯化水、3bv3％乙醇、3bv10％乙醇洗涤，用4bv20％乙醇洗脱，流速为0.3～0.5bv/h，收集洗脱液160l，用18％盐酸调ph为2.35，得纯化液，供二次过柱富集。
二次过柱富集取上述纯化液过3号树脂柱(径高比＝325∶300)，5bv纯化水/注射用水洗涤，沥干，用0.8bv30％醇洗涤，沥干后，用2bv50％醇洗脱脱，收集洗脱液20l，稍浓缩，使丹酚浓度为150～200mg/ml，放冷至室温，必要时精密过滤，待喷雾干燥；
喷雾干燥浓缩纯化液用负压喷雾干燥，进风温度为105～110℃，出风温度为70±5℃，喷头转速250～300hz，进料速度15～30rp/min，得淡黄色粉末，重1.205kg收率为2.41％
实施例7丹酚的制备
提取取实施例5丹参粉50kg，加250kg，在室温下快速搅拌10min，离心甩滤，滤渣1加水250kg，室温快速搅拌5min，离心甩滤，滤渣2加水250kg，室温快速搅拌5min，离心甩滤，合并三次滤液，精密过滤，精滤液用18％盐酸调ph为3.5～4.0，放置6～11小时，精密过滤，滤液用10％氢氧化钠液调ph为5.5～6.0，待一次过柱纯化。
一次过柱纯化上述提取液过2号大孔树脂柱(径高比＝325∶1200)，依次用5bv纯化水、3bv3％醇、3bv10％醇、2bv18％醇洗，流速500±100ml/民，收集稀醇洗液约160l，用18％盐酸调节ph为2.00～2.50，待二次过柱。
二次过柱富集上述纯化液过3号树脂柱(径高比＝325∶300)，5bv注射用水洗，沥干柱中水，用0.8bv30％醇洗，沥干后，用1bv50％醇洗，初10l弃去，接收20l洗脱液，稍浓缩使丹酚浓度为175mg/ml，放冷至室温，待喷雾干燥。
喷雾干燥上述浓缩纯化液用负压喷雾干燥，喷雾干燥参数设计：进风温度105℃～110℃，出风温度70±5℃，喷头转速250～300hz，进料速度15～30rp/min，得淡黄色粉末，重1.231kg收率为2.462％。
实施例5～7结果显示其纯度与收率的相对偏差较小；2～7显示同一产地，不同采收季节，获得的产品纯度与收率的相对偏差也较小。
实施例8注射用丹酚的制备
处方
注：以下实施例所用丹酚是以上实施例2～7所得丹酚充分混合均匀，过80目筛，经检测，丹酚含量为98.55％，水分为1.43％，据此折纯称取丹酚投料。
工艺过程：
取丹酚和甘露醇置烧杯中。
加新鲜制备的注射用水溶解并稀释至1500ml。
加0.05％针用活性炭，搅拌10min，过0.2μl微孔滤膜过滤。
分装于10ml西林瓶中，每瓶1.5ml，虚塞胶塞。
置-50℃温度下预冷冻3h
将预冷的样品置冷冻干燥箱中冷冻干燥16h后，然后逐渐升温至25℃，继续干燥3h。
在真空下将胶塞压紧，取出，扎盖，贴标签，包装，装箱，入库。
取样全检。
实施例9丹酚滴丸的制备
丸芯处方
包衣液处方
丸芯5000丸
欧巴代15.0g
纯化150ml
制备过程
原辅料预处理：丹酚过100目筛后烘干，peg6000、peg4000分别研细过100目筛，欧巴代用纯化水搅拌45分钟以上，制成10％的混悬液备用。
熔融：按处方比例称取丹酚、peg6000、peg4000，混合均匀，于72℃±2℃水浴熔融，电动搅拌使药液混合均匀。
药液转移：将上述均匀药液迅速转移至70℃预热的料液灌中。
滴制：调控滴速，使药液匀速滴入0℃的200cs甲基硅油中，集丸。
除油：擦拭除油。
包衣：取丸芯，置包衣锅中，锅转速15-20r/min，用喷枪将欧巴代液均匀地喷洒到丸芯表面，暖风加热，使丸芯干燥(丸芯温度在30～35℃)，滴丸包薄膜衣增重1～3％，即成。
包装：将包衣好的丹酚滴丸，用高密度聚乙烯瓶包装，每瓶150丸，每瓶连同使用说明书装入小盒，按拟订的要求包装后，入库。
全检：取样按拟定的丹酚滴丸质量标准全检
实施例10复方丹酚滴丸的制备
丸芯处方
包衣处方
丸芯10000粒
欧巴代32g
制备过程
原辅料预处理：聚乙二醇6000研细后过100目筛；三七总皂苷、天然冰片研细后过100目筛，作为原料药。欧巴代用纯化水搅拌45分钟以上，制成10％的混悬液备用。
熔融：按处方比例称取丹酚、三七总皂苷、天然冰片、peg6000置75℃化料罐中，于72℃±2℃水浴，熔融电动搅拌使药液混合均匀。
制丸：滴丸机装12孔滴盘，滴头内径1.5mm，滴盘温度75℃，保温75℃，滴距4cm，冷凝液为200cs二甲基硅油，冷凝液温度0℃，管口温度5
除油：取上述滴丸包裹于除油布中除油。
筛丸：将不合要求的滴丸筛除。
包衣：取外观圆整丸重合格的滴丸，置包衣锅中，锅转速5-15r/min，用喷枪将欧巴代液均匀地喷洒到丸芯表面，热风加热，使丸芯干燥(保持丸芯温度在30
分装、包装、入库：按每瓶70粒，每盒装10瓶，每箱装100盒，贴标签，入库。
全检：取样按拟定的复方丹酚滴丸质量标准全检。
实施例11丹酚软胶囊的制备
囊壳处方(重量比，囊壳壁厚0.6
内容物处方：
制备过程
主要参数设定
工艺过程
原辅料预处理
按囊壳处方准备好相关辅料。按内容物处方准备好相关原辅料，并将其中固体原辅料粉碎，过120目筛。
囊壳制备
溶胀，取明胶置熔胶罐中，加水和甘油，室温溶胀2h。
熔胶，向熔胶罐夹层通80℃热水，待熔胶罐内容物达70℃时，维持30分钟。
加入富马酸和尼泊金乙酯，搅拌均匀
水循环式抽气泵减压脱气15分钟，以保证做成的囊壳无气泡。
开启软胶囊机，调节囊壳的相关参数，开启空压机，使胶液进入软胶囊机制胶皮，并微调相关技术参数，使制得胶皮的厚度为0.80±0.05mm，并使左右两边的胶皮厚度一致。
调节两压制滚轮的相对位置，以便压制胶囊。
内容物制备按处方比例，取丹酚、癸酸钠、焦亚硫酸钠充分混匀，加入吐温80的1，2-丙二醇的混合物，搅匀，再加入peg400，充分搅匀后，加到内容物储槽，待用。
压制软胶囊开始喷体开关，并调节流量使符合设定要求，即进行制备丹酚软胶囊。
筛选与除油剔除外形不整，充填不满等不合要求的软胶囊后，包裹于除油布中除油。
分装与包装经筛选与除油的软胶囊进行分装、贴标签、包装，入库。
全检取样按拟定的丹酚软胶囊质量标准进行全检。
实施例12丹酚缓控释微丸的制备
处方1正常溶出度的微丸
工艺过程
预处理取丹酚过100目筛。
混料丹酚(过100目筛)、淀粉、预胶化淀粉、羧甲淀粉钠(内加2.5g)、微晶纤维素按照等量递增的原则混合均匀。
制软材用70％的乙醇润湿制成软硬适度的软材。
挤压与滚圆将软材通过挤压成条，再经过切割滚圆，即成微丸。
干燥将微丸置真空干燥箱中于35℃真空干燥。
包衣取微丸包绿色胃溶薄膜衣，即得。
全检取样按临床研究用质量标准全检，各检测指标应符合规定。
处方2缓释6h的微丸
工艺过程
原辅料预处理取丹酚、乳糖、环拉酸钠、羟丙甲纤维素、卡波姆分别过80目筛，聚维酮k30用75％乙醇配制成5％(w/v)溶液。
制软材称取丹酚、乳糖、羟丙甲纤维素、卡波姆，混匀，加入聚维酮k30液制成软材。
挤压与滚圆将软材通过挤压成条，再经切割、滚圆。
干燥将微丸置真空干燥箱中于35℃真空干燥，去除细粉，即得微丸。
包衣取微丸包黄色丙烯酸树脂iv薄膜衣，即得。
全检取样按临床研究用质量标准全检，各检测指标应符合规定。
处方3缓释12h的微丸
*：乙基纤维素用80％乙醇制成6％的溶液，作粘合剂。80％乙醇用量可以按需要适当调整。
工艺过程
原辅料预处理丹酚过80目筛，羟丙甲纤维素k100mcr(hpmck100mcr)过80目筛；乙基纤维素(ec)用80％乙醇浸泡溶解制成6％(w/v)的溶液，备用。
制软材按处方称取丹酚和羟丙基甲基纤维素k100m混合均匀，加入6％的ec液，反复搓揉使成均匀的软材
挤压滚圆通过挤压滚圆机，挤压成条、切割、滚圆，即得湿微丸。
微丸干燥将湿微丸置干燥箱中干燥。
包衣取微丸包红色丙烯酸树脂i薄膜衣，即得。
全检取样按临床研究用质量标准全检，各检测指标应符合规定。
丹酚缓控释微丸胶囊/片
混丸分别称取处方1、2、3微丸100g、90g、120g，充分混匀。
装胶囊取混合微丸装入适宜囊壳内，每丸内容物重310mg，标示量为150mg。
分装与包装分装，贴标签、包装、入库。
全检取样按临床研究用质量标准全检，各项指标均应符合规定。
含量测定方法
本发明涉及丹酚的含量测定方法是应用uhplc与高精度质谱连用，对丹酚的各成分按分子量定位，选择含量和活性相对较高的成分作为选择对照品的依据。用丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸b、丹酚酸a6个对照品，分别按外标法计算各成分含量，6个成分的含量约占标示量的93-97％。其余小峰面积之和，以丹酚酸b作参照品，按外标法计算含量，约占标示量的2-6％。两部分含量之和即为丹酚含量，丹酚的含量为标示量的98％以上。
丹酚的临床应用
本发明还涉及丹酚制剂在制备抗脑缺血再灌注损伤的新用途：通过大鼠动脉栓塞模型(mcao)建立脑缺血再灌注动物模型，观察行为学、脑梗死面积、脑含水量、脑组织中乳酸脱氢酶(ldh)、肌酸激酶(ck)、超氧化物歧化酶(sod)及丙二醛(mda)、il-6、il-1β、tnf-α水平，he染色观察mcao造模以及给药后大鼠皮层损伤情况。结果均证明给大鼠用丹酚ip15mg/kg具有显著的抗脑缺血再灌注损伤的作用，且明显优于缺血性脑卒中一线治疗化药尼莫地平ip20mg/kg的疗效，可以用于制备抗脑缺血再灌注损伤的预防和/或治疗缺血性脑卒中的药物。