本发明属于化药领域，具体的涉及一种预防和/或治疗视神经损伤的化合物及其制备方法和用途。
背景技术
视神经是由视网膜神经节细胞发出的纤维，汇集成视乳头，其纤维穿过巩膜筛板出眼球，形成了视神经，视神经起于视盘，向后延伸入脑，是中枢神经系统的一部分，创伤、高眼压、缺血及肿瘤压迫等均能严重的损伤视神经，且受损后视神经不易再生，从而可能会导致视力的丧失，针对于视神经损伤多采用降低眼压，服用神经营养物质，治疗效果非常有限，目前仍然缺乏有效的治疗方法。
积雪草(centellaasiatica(l.)urban)，又称半边钱、铜钱草，为伞形科积雪草属植物，在中国陕西、江苏、安徽、浙江、江西、湖南、湖北、广东、广西等多省都有分布，全草可入药，具有清热利湿、解毒消肿的功效，常用于治疗暑热、痢疾、风疹、疥癣、跌打损伤等。积雪草所含化学成分主要为三萜皂苷类化合物，积雪草苷(asiaticoside)为积雪草中三萜皂苷类化合物的一种，现代药理学研究表明积雪草苷具有抗溃疡、促进伤口愈合、抗肿瘤、抗炎、提高免疫力、抗诱变作用、抗病毒作用、降低胆固醇、降低血糖、抗肿瘤和抗艾滋病毒等多重生理功能，而利用积雪草苷治疗视神经损伤还未见任何报道。
7，8-二羟黄酮(7,8-dihydroxyflavone，cas登记号：38183-03-8)属于类黄酮的一种，为酪氨酸激酶b受体的特异性激动剂，能够激动酪氨酸激酶b，具有神经保护作用，可用于改善学习记忆功能、治疗神经退行性疾病、调节心血管功能、抗氧化、抗炎、抗肿瘤等。中国专利cn104622867a已报道了7，8-二羟黄酮对兴奋性视神经损伤和视神经机械损伤具有很好的保护作用，可修复损伤的视网膜神经节细胞，可用于临床治疗视神经损伤。
本申请为了造福广大视神经损伤患者，致力于提供一种可有效预防和/或治疗视神经损伤的药物组合物。
技术实现要素：
本发明提供了一种预防和/或治疗视神经损伤的药物组合物及其制备方法和用途。
一方面，本发明提供了一种预防和/或治疗视神经的药物组合物，其特征在于所述药物组合物以积雪草苷为活性成分，添加药学上可接受的辅料制成。
优选的，所述药学上可接受的辅料选自：填充剂、黏合剂、崩解剂、润滑剂、溶剂、基质、冻干保护剂、渗透压调节剂、防腐剂、抗氧化剂等。
优选的，所述药物组合物中还包含7,8-二羟黄酮，所述积雪草苷与7、8-二羟黄酮的重量份数比为3-5：2-3，更优选的，所述积雪草苷与7、8-二羟黄酮的重量份数比为4：3。
本发明所述药物组合物可经胃肠道给药、局部给药或注射给药，所述胃肠道给药剂型选自：胶囊、片剂、颗粒剂、溶液剂、冲剂、丸剂、散剂、滴丸剂等；所述局部给药剂型选自：滴眼液、眼膏剂、眼用凝胶等；所述注射给药剂型选自：注射剂或冻干粉针剂等。
优选的所述胃肠道给药剂型为片剂，所述具备给药剂型为滴眼液，所述注射给药剂型为注射剂。
更优选的，所述片剂选自：肠溶片、薄膜衣片、分散片、双层片、缓释片等。
本发明药物组合物中作为活性成分的积雪草苷或积雪草苷与7,8-二羟黄酮的组合占药物组合物的1-50％，优选的，作为活性成分的积雪草苷或积雪草苷与7,8-二羟黄酮的组合占药物组合物的5-30％，更优选的，作为活性成分的积雪草苷或积雪草苷与7,8-二羟黄酮的组合占药物组合物的10-20％，最右选的，作为活性成分的积雪草苷或积雪草苷与7,8-二羟黄酮的组合占药物组合物的15％。
再一方面，本发明提供了积雪草苷在制备预防和/或治疗视神经损伤药物组合物中的用途。
积雪草苷与7,8-二羟黄酮的组合在制备预防和/或治疗视神经损伤药物组合物中的用途。
优选的，所述积雪草苷与7、8-二羟黄酮的重量份数比为3-5：2-3，更优选的，所述积雪草苷与7、8-二羟黄酮的重量份数比为4：3。
另一个方面，本发明还提供了一种预防和/或治疗视神经损伤的药物组合物的制备方法，其包括以下步骤：
(1)备料：称取配方量的积雪草苷或积雪草苷与7,8-二羟黄酮；
(2)制剂：按照本领域的常规方法，将其制备成相应的药物剂型。
优选的，本发明提供一种预防和/或治疗视神经损伤的片剂的制备方法，其包括以下步骤：
(1)备料：称取配方量的积雪草苷、7,8-二羟黄酮；
(2)制剂：采用湿法制粒或干法制粒，添加填充剂、黏合剂、崩解剂后将积雪草苷与7，8-二羟黄酮单独制粒后过30-100目筛，得积雪草苷颗粒、7,8-二羟黄酮，按配比混合积雪草苷颗粒与7，8-二羟黄酮颗粒，后添加适量的润滑剂及压片即得本发明预防和/或治疗视神经损伤的片剂。
优选的，本发明提供一种预防和/或治疗视神经损伤的胶囊剂的制备方法，其包括以下步骤：
(1)备料：称取配方量的积雪草苷、7,8-二羟黄酮；
(2)制剂：采用湿法制粒或干法制粒，添加填充剂、黏合剂、崩解剂后将积雪草苷与7，8-二羟黄酮单独制粒后过30-100目筛，得积雪草苷颗粒、7,8-二羟黄酮，按配比混合积雪草苷颗粒与7，8-二羟黄酮颗粒，添加适量的润滑剂后填充至明胶胶囊壳即得本发明预防和/或治疗视神经损伤的胶囊剂。
优选的，本发明提供一种预防和/或治疗视神经损伤的滴眼液的制备方法，其包括以下步骤：
(1)备料：称取配方量的积雪草苷；
(3)制剂：将积雪草苷溶解于蒸馏水中，加入渗透压调节剂、防腐剂后混合均匀，过滤除菌后灌注，即得本发明预防和/或治疗视神经损伤的滴眼液。
本发明的有益效果：
本发明首次发现了积雪草苷在预防和/或治疗视神经损伤方面的优异效果，具有促进视神经细胞生长、保护视神经节细胞、预防视神经节细胞的死亡、促进损伤后视神经节细胞的修复，可用于各类型的视神经损伤的预防和/或治疗。
为了进一步提升积雪草苷预防和/或治疗视神经损伤的效果，本申请发明人还通过大量筛选实验，获得了与积雪草苷具有预防和/或治疗视神经损伤协同效果的7,8-二羟黄酮，并通过研究两者的用量配比，筛选得到了两者的最优配比，在该最优配比下，积雪草苷与7,8-二羟黄酮联合使用可明显增强积雪草苷与7,8-二羟黄酮治疗视神经损伤的效果，从而为视神经损伤预防和/或治疗提供了一种切实有效的治疗药物。
具体实施方式
以下实施例旨在说明本发明而不是本发明进一步的限定，本发明可以按发明内容所述的任一方式实施。
实施例1：一种预防和/或治疗视神经损伤的滴眼液
以积雪草苷为活性成分，按照以下步骤制备：
(1)备料：称取积雪草苷150g；
(2)制剂：将积雪草苷溶解于蒸馏水中，加入氯化钠9g、羟苯甲酯0.2g、羟苯丙酯0.2g后搅拌均匀，使用0.22μm微孔滤膜过滤除菌后，灌注，即得本发明预防和/或治疗视神经损伤的滴眼液。
实施例2：一种预防和/或治疗视神经损伤的片剂
以积雪草苷和7,8-二羟黄酮为活性成分，按照以下步骤制备：
(3)备料：称取积雪草苷120g、7,8-二羟黄酮90g；
(4)制剂：在积雪草苷中添加微晶纤维素450g、羧甲基纤维素钠23g、交联聚维酮29g后采用湿法制粒，干燥后过40目筛，得积雪草苷颗粒，在7,8-二羟黄酮中添加微晶纤维素340g、羧甲基纤维素钠17g、交联聚维酮21g后采用湿法制粒，干燥后过40目筛，得7,8-二羟黄酮颗粒，按4：3的配比混合积雪草苷颗粒与7，8-二羟黄酮颗粒，后添加硬脂酸镁5g，混合均匀后压片，即得本发明预防和/或治疗视神经损伤的片剂。
效果例1：积雪草苷、积雪草苷与7,8-二羟黄酮的组合对视网膜神经节细胞的生长促进作用
1.1实验药物
(1)积雪草苷；(2)积雪草苷与7,8-二羟黄酮按照2：1、4：3、1：2的配比组成混合物；(3)7,8-二羟黄酮，使用pbs溶液配制成0.05g/ml；
1.2实验方法
取3天龄清洁级sd乳鼠，钝性分离视网膜，于无菌操作台将视网膜剪碎后，加入0.08％的胰蛋白酶，消化20min后，加入含小牛血清的dmem培养液终止消化后，离心，弃去上清液，加入含小牛血清的dmem培养液后，充分吹打为单细胞悬液后，计数，调整细胞浓度为1.5×103个/ml，将上述细胞悬液以1.5×103个/ml的密度接种于96孔板中，每孔400μl，放入37℃，5％co2培养箱培养24小时后，吸去上清液，使用无血清dmem培养液冲洗3次后，加入含小牛血清的dmem培养液每孔300μl，将细胞分为空白组、积雪草苷组、7,8-二羟黄酮、混合2：1组、混合4：3组和混合1：2组，每组平行三个孔，各组加入相应药物200μl,其中空白组加入pbs溶液，继续培养24小时后，采用mtt法测定各给药组吸光度值，计算各给药组对于视神经节细胞的促生长率，具体实验结果见表1，其中：
促生长率＝(实验组吸光度-空白组吸光度)/空白组吸光度。
1.3数据处理
实验数据采用spss19.0统计软件进行统计分析，所得数据作方差齐性试验后作t检验，p<0.05有统计学意义。
1.4实验结果
表1积雪草苷、积雪草苷与7,8-二羟黄酮的组合物对视神经节细胞的生长促进作用
表1实验结果显示了积雪草苷与7,8-二羟黄酮均显示了一定的促进视神经节细胞生长的作用，且积雪草苷的生长促进作用相对于7,8-二羟黄酮更优，而积雪草苷与7,8-二羟黄酮的组合物组则显示了更为优异的促进视神经细胞生长的作用，其中尤其以积雪草苷：7,8-二羟黄酮＝4：3组的视神经节细胞生长促进作用更为优异，在给药剂量相同的情况下，积雪草苷：7,8-二羟黄酮＝4：3组的视神经节细胞促生长率为单独积雪草苷的1.7倍，为单独7,8-二羟黄酮组的2.1倍，取得了促进视神经节细胞生长的协同效果。
效果例2：积雪草苷、积雪草苷与7,8-二羟黄酮的组合对视网膜神经节细胞的损伤保护作用
2.1实验药物
(1)积雪草苷；(2)积雪草苷与7,8-二羟黄酮按照2：1、4：3、1：2的配比组成混合物；(3)7,8-二羟黄酮，使用pbs溶液配制成0.05g/ml，n-甲基-天冬氨酸(nmda)配置成1mmol/l。
2.2实验方法
取3天龄清洁级sd乳鼠，钝性分离视网膜，于无菌操作台将视网膜剪碎后，加入0.08％的胰蛋白酶，消化20min后，加入含小牛血清的dmem培养液终止消化后，离心，弃去上清液，加入含小牛血清的dmem培养液后，充分吹打为单细胞悬液后，计数，调整细胞浓度为1.5×103个/ml，将上述细胞悬液以1.5×103个/ml的密度接种于96孔板中，每孔400μl，放入37℃，5％co2培养箱培养24小时后，吸去上清液，使用无血清dmem培养液冲洗3次后，加入含小牛血清的dmem培养液每孔300μl，将细胞分为空白组、模型组、积雪草苷组、7,8-二羟黄酮、混合2：1组、混合4：3组和混合1：2组，每组平行三个孔，除空白组外，各组细胞均加入nmda100μl，各组再分别加入相应药物200μl,其中空白组加入pbs溶液300μl，继续培养24小时后，采用mtt法测定各给药组吸光度值，计算各组视神经节细胞的损伤率，具体实验结果见表2，其中：
损伤率＝(空白组吸光度值-实验组吸光度值)/空白组吸光度值。
2.3数据处理
ˉ
实验数据采用spss19.0统计软件进行统计分析，各组数据均以x±s表示。所得数据作方差齐性试验后作t检验，p<0.05有统计学意义。
2.4实验结果
表2积雪草苷、积雪草苷与7,8-二羟黄酮的组合物对视神经节细胞的损伤保护作用
表2实验结果显示，nmda处理后模型组的视神经节细胞损伤率达到了57.64％，表明大量的视神经节细胞受到nmda损伤而死亡，而各给药组的视神经节细胞损伤均得到了一定程度的抑制，从而表明了积雪草苷与7,8-二羟黄酮均具有一定的视神经节细胞损伤保护作用，而积雪草苷与7,8-二羟黄酮的组合物组的视神经节细胞损伤保护作用更为优异，2：1组、4：3组和1：2组的视神经节细胞损伤率均明显低于模型组，且低于积雪草苷单独组和7,8-二羟黄酮单独组，表明积雪草苷与7,8-二羟黄酮组合后显示了协同增效的效果，其中尤其以积雪草苷：7,8-二羟黄酮＝4：3组的视神经节细胞损伤保护作用作为明显，在给药剂量相同的情况表，其视神经节细胞的损伤率仅为单独积雪草苷组的约0.55，为单独7,8-二羟黄酮的约0.46，从而证明了积雪草苷与7,8-二羟黄酮以4：3的比例组合时具有最优的视神经节细胞损伤保护作用。
效果例3：积雪草苷、积雪草苷与7,8-二羟黄酮的组合物对大鼠视神经损伤的治疗效果
3.1实验药物
(1)积雪草苷；(2)积雪草苷与7,8-二羟黄酮按照4：3的配比组成混合物；(3)7,8-二羟黄酮，使用pbs溶液配制成0.1g/ml，二硫化碳(cs2)油溶液50mg/ml。
2.2实验方法
雄性sd大鼠25只，体重180-200g，随机分为5组，每组5只，具体为：空白组、模型组、积雪草苷组、积雪草苷：7,8-二羟黄酮4：3组(组合组)、7,8-二羟黄酮组，所有大鼠适应性饲养1d后，除空白外，其他大鼠均以300mg/kg的用量腹腔注射cs2油溶液(50mg/ml)，每天1次，连续注射3周，空白组腹腔注射同等用量的生理盐水，腹腔注射7d后，各组小鼠灌胃相应药物1ml/100g体重，连续灌胃21d，其中空白组和模型组灌胃生理盐水1ml/100g体重。末次给药2h后，测定各组大鼠的闪光视觉诱发电位(fep)潜伏期，其中fep潜伏期是指各组大鼠受到闪光刺激后出现n1、p1、n2和p2峰所需时间(ms)，具体实验结果见表3。
3.3数据处理
ˉ
实验数据采用spss19.0统计软件进行统计分析，各组数据均以x±s表示。所得数据作方差齐性试验后作t检验，p<0.05有统计学意义。
3.4实验结果
表3积雪草苷、积雪草苷与7,8-二羟黄酮的组合物对大鼠视神经节细胞损伤的治疗作用
△与空白组相比，p<0.05,△△与空白组相比，p<0.01；
*与模型组相比，p<0.05,**与模型组相比，p<0.01.
表3实验结果显示了采用腹腔注射二硫化碳的方式可明显延长大鼠对于闪光刺激的fep潜伏期，表明了采用二硫化碳腹腔注射的方式可造成视神经的损伤，而灌胃积雪草苷、7,8-二羟黄酮及其混合物后均可以一定程度上纠正二硫化碳所造成的视神经损伤，显示了积雪草苷、7,8-二羟黄酮及其混合物均具有视神经损伤的保护作用，其中又以积雪草苷：7,8-二羟黄酮＝4：3组的视神经损伤保护作用更为明显，显示了积雪草苷与7,8-二羟黄酮以4：3配比组合使用时具有协同增效的视神经保护作用。
以上实施例仅为本发明的例举，以本发明中药组合物预防和/或治疗多囊卵巢综合征及其相关疾病的技术方案均落入本发明的保护范围内。