本发明涉及饲料添加剂
技术领域：
，尤其是涉及一种以党参和黄芪为原料，经过水煎煮制得的提取物及其制备方法。
背景技术：
：上世纪40年代开始，化学合成药物及抗生素的应用曾带动了畜牧业迅猛发展。随着消费者环保意识和健康意识的增强，有药物残留的肉食品销路明显受阻，养殖业经济利益受到威胁。养殖业面临产业结构升级与调整，向绿色生态养殖发展。随着畜牧业的发展，畜禽疾病也越来越复杂，其中有许多疾病具有免疫抑制性。免疫抑制，就是在一种或多种致病因素的作用下，畜禽免疫系统受损，导致暂时性的或持久性的免疫应答功能紊乱。在这类疾病中，有的临床症状表现明显，其危害性容易被人们所认识和重视，而有些疾病则不表现明显的临床症状，但由于造成的免疫抑制使机体的免疫力下降，容易使家禽感染其它继发症，造成治疗难度大，死亡率高，给养殖业造成巨大的经济损失。现代医学研究表明，许多中药具有免疫增强作用，能刺激免疫系统，提高免疫系统组织细胞活性，增加机体免疫细胞的生长及抗体的合成。党参、黄芪是常用的补气药，党参味甘性平，具有补中益气、健脾益肺功能；黄芪味甘性温，具有补气升阳、益卫固表、利水消肿、托毒排脓、敛疮生肌等功能。党参主要含党参多糖、黄酮类、生物碱和挥发油等成分，具有增强免疫、抗衰老、抗氧化、抗肿瘤等药理作用。黄芪主要含黄芪多糖，是黄芪发挥免疫增强作用的主要成分，此外还有黄芪皂甙、黄酮类、氨基酸、微量元素等多种成分，具有增强免疫、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、抗衰老等多种功能，能影响动物胸腺、脾脏和法氏囊等免疫器官的发育，促进淋巴细胞转化和增殖及巨噬细胞吞噬功能，提高动物机体的细胞免疫和体液免疫能力。黄芪党参汤在民间常用于提高人体免疫力，用于体弱者和病后恢复期的病人提高机体抵抗力，增强体质。技术实现要素：针对现有技术存在的上述问题，本发明申请人提供了一种参芪粉及其制备方法。本发明以党参、黄芪为原料研制开发出参芪提取物拟用作动物免疫增强剂，在临床中用于预防免疫抑制疾病和调节动物免疫力，使动物健康，减少疾病的发生和抗生素的使用量，具有良好的经济效益和生态效益。本发明的技术方案如下：一种参芪粉，所述参芪粉以党参、黄芪为原料，经过水煎煮提取制得；所述党参与黄芪的质量比为1:4。一种所述参芪粉的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：(1)将党参、黄芪饮片按照质量比为1:4的处方混合，加8倍量水，浸泡30min，之后煎煮回流提取30min，过滤分别收集滤渣、滤液；(2)在步骤(1)制得的滤渣中再加8倍量水，煎煮回流提取30min，过滤分别收集滤渣、滤液；(3)在步骤(2)制得的滤渣中再加8倍量水，煎煮回流提取30min，过滤分别收集滤渣、滤液；(4)合并步骤(1)、(2)、(3)所得的滤液，减压浓缩成浓缩液，之后喷雾干燥，制得所述参芪粉。所述浸泡温度为30～35℃，煎煮回流温度95～100℃。所述减压浓缩的条件为：一效温度：85℃、二效温度：75℃、一效真空负压：0.04MPa、二效真空负压：0.08MPa，循环冷却水0.2MPa条件下浓缩8小时。所述浓缩液的相对密度为1.01。本发明有益的技术效果在于：本发明参芪粉，是立足于国内外养殖情况，适应当前畜牧业的需求，同时作为一种天然药物疗效确切、无毒、无残留，为保障动物健康和养殖业的健康发展提供保障，同时对引导无公害生态养殖，促进产业结构升级也有一定的意义。本发明参芪粉是由党参和黄芪提取制备的中药制剂。党参主要含党参多糖、黄酮类、生物碱和挥发油等成分，具有增强免疫、抗衰老、抗氧化、抗肿瘤等药理作用。黄芪主要含黄芪多糖，是黄芪发挥免疫增强作用的主要成分，此外还有黄芪皂甙、黄酮类、氨基酸、微量元素等多种成分，具有增强免疫、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、抗衰老等多种功能，能影响动物胸腺、脾脏和法氏囊等免疫器官的发育，促进淋巴细胞转化和增殖及巨噬细胞吞噬功能，提高动物机体的细胞免疫和体液免疫能力，黄芪皂苷能增强巨噬细胞的免疫作用，通过升高细胞内Ca2+浓度激活巨噬细胞发挥免疫调节作用。因此，参芪粉增强免疫的效果可靠。用参芪粉配合新城疫疫苗免疫雏鸡，多个剂量组在多个时间点的抗体效价显著高于不给药的免疫对照组和给予左旋咪唑-黄芪多糖的药物对照组，表明参芪粉有较好的增强体液免疫作用。健康观察和增重测定结果显示，参芪粉对鸡的健康和生长无不良影响，尤其是前几个高剂量组的日均增重多显著高于药物对照组、免疫对照和空白对照组，表明参芪粉有较好的促进增重作用，临床应用安全。各剂量组相比，以0.1％比例饮水组的效果最好，其次为0.125％和0.075％组。因此，0.1％比例饮水可以作为临床试验的最佳剂量。附图说明图1为本发明制备方法的流程图。图2为本发明亚毒性测试中高剂量组小鼠肝脏切片(×200)。图3为本发明亚毒性测试中高剂量组小鼠肾脏切片(×400)。具体实施方式下面结合附图和实施例，对本发明进行具体描述。实施例1一种参芪粉，所述参芪粉以党参、黄芪为原料，经过水煎煮提取制得；制备方法包括如下步骤：(1)将20g党参、80g黄芪饮片混合，加8倍量水，30℃条件下浸泡30min，之后95℃煎煮回流提取30min，过滤分别收集滤渣、滤液；(2)在步骤(1)制得的滤渣中再加8倍量水，100℃煎煮回流提取30min，过滤分别收集滤渣、滤液；(3)在步骤(2)制得的滤渣中再加8倍量水，100℃煎煮回流提取30min，过滤分别收集滤渣、滤液；(4)合并步骤(1)、(2)、(3)所得的滤液，减压浓缩(一效温度：85℃、二效温度：75℃、一效真空负压：0.04MPa、二效真空负压：0.08MPa，循环冷却水0.2MPa)8h，至相对密度为1.01，制得浓缩液，之后喷雾干燥，制得所述参芪粉。测试例：(1)稳定性测试：将实施例1制得的参芪粉置于温度为40±2℃、相对湿度为75％±5％的药物稳定性实验箱内，分别在第0月、1月、2月、3月和6月末各取样一次，参照“参芪粉”质量标准方法(农业部第1796号公告)，采用蒸发光散射检测器检测黄芪甲苷含量，采用苯酚-硫酸法测定参芪混合提取物中多糖的含量，产品加速稳定性结果见表1。表1检查项目0月1月2月3月6月性状符合规定符合规定有轻微结块现象出现整体结块整体结块且较硬黄芪甲苷鉴别符合规定符合规定符合规定符合规定符合规定党参炔苷鉴别符合规定符合规定符合规定符合规定符合规定水分(％)7.437.267.578.308.53黄芪甲苷含量(％)0.200.210.190.200.18总多糖含量测定(％)75.7276.1275.4975.8276.15将本发明实施例1所得参芪粉置于温度为25±2℃、湿度为60±5％的人工气候箱中，分别于第0月、3月、6月末各取样一次，照“参芪粉”质量标准(草案)方法，依法测定，长期稳定性实验结果见表2。表2检查项目0月3月6月9月12月性状符合规定符合规定符合规定符合规定符合规定黄芪甲苷鉴别符合规定符合规定符合规定符合规定符合规定党参炔苷鉴别符合规定符合规定符合规定符合规定符合规定水分(％)7.457.647.487.827.94黄芪甲苷含量(％)0.200.200.210.180.19总多糖含量(％)75.7276.1875.9376.0676.23(2)主要药效学和安全药理学体内试验：选用购自南京汤泉农垦种鸡场的1日龄非免疫健康罗曼蛋公鸡，饲养至14日龄时取300只，随机分为10组，每组30只，空白对照组隔离饲养，不做任何处理；其余9组分别用NDV-Ⅳ(中牧股份南京药械厂产品，批号090820)滴鼻、点眼免疫(3羽份/羽)，本发明参芪粉的7个剂量组分别按0.2％、0.175％、0.15％、0.125％、0.1％、0.075％和0.05％的比例饮服参芪粉，药物对照组按0.2％的比例饮服盐酸左旋咪唑-黄芪多糖(湖南威克尔生物科技有限公司产品，每袋100g，含盐酸左旋咪唑5g、黄芪多糖8g，批号20090112)，连用7天。给药后分别观察鸡的健康状况、血清抗体效价和增重情况。(2.1)健康状况：给药后每天观察鸡的精神、活动、采食、饮水和发病死亡情况，死亡鸡剖检。通过观察发现整个试验期间，各组鸡均精神活泼、采食、饮水和粪便正常，未出现发病和死亡，尤其是高剂量组的鸡生长最好，未见任何不良反应。(2.2)清抗体效价：分别于免疫后第7d(D7)、14d(D14)、21d(D21)和28d(D28)每组随机抽取6羽翼静脉采血，分离血清，用β-微量法检测ND-HI抗体效价。测试结果见表3。(2.3)增重情况：分别于免疫前、免疫后第7d(W1)、14d(W2)、21d(W3)、28d(W4)每组随机抽取15只称重，计算平均体重，作为末重，以前一时间点平均体重为始重计算平均日增重。平均日增重(g/d/羽)＝(平均末重－平均始重)÷饲喂天数。测试结果见表4。表3注：同列数据上标无相同字母者差异显著(P<0.05)，下同。由表3可以看出，免疫后第7d，参芪粉除0.175％组外其余剂量组的抗体效价均显著高于免疫对照组和药物对照组(P<0.05)，以0.1％组最高，显著高于除0.075％外的其余剂量组；免疫后第14d，参芪粉前6个剂量组的抗体效价均显著高于免疫对照组和药物对照组(P<0.05)，以0.1％组最高，显著高于除0.125％组外的其余剂量组；免疫后第21d，0.1％、0.125％、0.075％和0.15％组的抗体效价显著高于免疫对照组和药物对照组(P<0.05)，以0.1％组最高，显著高于除0.125％组外的其余剂量组(P<0.05)；免疫后第28d，0.1％、0.125％、0.15％和0.2％组的抗体效价显著高于免疫对照组和药物对照组(P<0.05)；以0.1％组最高，显著高于除0.125％组外的其余剂量组(P<0.05)。表4组别W1W2W3W40.2％8.64±0.08a9.83±0.48a12.16±0.68a8.79±0.41a0.175％8.08±0.44b9.64±0.32a11.90±0.60ab8.64±0.54a0.15％7.32±0.42cde9.62±0.35a11.76±0.42ab8.47±0.32a0.125％7.72±0.23bcd9.76±0.20a11.56±0.49abc8.39±0.24a0.1％7.78±0.26bcd9.62±0.42a11.06±0.49bcd8.24±0.18ab0.075％7.52±0.37bcde8.79±0.42b10.73±0.52cde7.79±0.38bc0.05％7.26±0.22de7.85±0.51cd9.76±0.55f7.36±0.22c药物对照7.89±0.29bc8.39±0.39bc9.27±0.48f7.37±0.17c免疫对照7.33±0.29cde7.59±0.52d10.14±0.56def7.17±0.25c空白对照7.02±0.35e7.37±0.30d10.06±0.18ef7.40±0.42c由表4可以看出，免疫后第1周，参芪粉0.2％和0.175％组的平均日增重显著高于免疫对照组和空白对照组(P<0.05)，0.2％组显著高于药物对照组(P<0.05)；免疫后第2周，参芪粉前6个剂量组的平均日增重显著高于免疫对照组和空白对照组(P<0.05)，前5个剂量组显著高于药物对照组(P<0.05)；免疫后第3周，参芪粉前4个剂量组的平均日增重显著高于免疫对照组和空白对照组(P<0.05)，前6个剂量组显著高于药物对照组(P<0.05)；免疫后第4周，参芪粉前5个剂量组的平均日增重显著高于药物对照组、免疫对照组和空白对照组(P<0.05)。(3)安全药理学体外试验：将本发明实施例1所得参芪粉用三蒸水配成250μg·mL-1溶液，100℃煮沸30min消毒，临用前用RPMI1640培养液自125μg·mL-1倍比稀释至0.123μg·mL-1共11个浓度，测定其最大安全浓度。(3.1)对淋巴细胞安全浓度的测定：用MTT法，取成年鸡心脏无菌采血，肝素抗凝，血样用Hank’s液稀释1倍，小心加在淋巴细胞分离液上层，2000rpm离心20min，吸取中间云雾状白细胞层，用Hank's液洗2遍，1500rpm离心15min。细胞计数活细胞大于90％后，用RPMI1640培养液调整细胞浓度为5×106个·mL-1，加入到96孔细胞培养板中，每孔100μL，然后每孔加入各浓度参芪粉100μL，每个样品重复4孔，另设细胞对照孔。将细胞板置于39.5℃、5％CO2条件下培养44h，每孔加入MTT30μL，继续培养4h后，每孔加裂解液DMSO100μL，将细胞板置于微量震荡器上震荡5min使沉淀完全溶解，在酶联免疫仪上检测570nm处的吸光度(A570值)。选择A570值不显著小于细胞对照组的浓度作为参芪粉的最大安全浓度。测试结果见表5。(3.2)淋巴细胞增殖测定：用MTT法，根据安全浓度测定结果，将参芪粉用RPMI1640培养液自7.813μg·mL-1倍比稀释至0.016μg·mL-1共10个浓度备用。淋巴细胞制备过程同上，活细胞计数后用RPMI1640培养液调整细胞浓度为5×106个·mL-1，分为2份，其中1份加入PHA(终浓度为10μg·mL-1)，然后分别加入到96孔细胞培养板中，每孔100μL，然后每孔加入各浓度参芪粉100μL，每个样品重复4孔，另设细胞对照和PHA的对照孔，同上法测定A570值。测试结果见表6。表5注：同列数据标注无相同字母者差异显著(P<0.05)。由表5可以看出，参芪粉在125～15.625μg·mL-1范围内的A570值显著小于细胞对照组(P<0.05)，在7.813μg·mL-1时的A570值不显著小于细胞对照组，因此可将该浓度定为参芪粉的最大安全浓度。在0.977～0.245μg·mL-1时的A570值显著大于细胞对照组(P<0.05)，表明此浓度范围内能显著促进淋巴细胞增殖。表6注：同列数据标注无相同字母者差异显著(P<0.05)。由表6可以看出，参芪粉在7.813～0.016μg·mL-110个浓度组的A570值均显著高于细胞对照组(P<0.05)，表明参芪粉单独能显著刺激淋巴细胞增殖。参芪粉+PHA在7.813～1.953μg·mL-1组的A570值显著大于PHA对照组(P<0.05)，说明参芪粉在这些浓度能协同PHA显著刺激淋巴细胞增殖。(4)急性毒性试验：将本发明实施例1制得的参芪粉用蒸馏水溶解，稀释成0.8g·mL-1的药液，取小鼠20只，雌雄各半，适应3天后，每只小鼠每次灌服0.6mL参芪粉药液，12h内灌服2次，给药后每天观察小鼠的毒性反应及死亡情况，如有死亡，剖检观察病理变化，连续观察14天。通过试验发现，小鼠在灌药后有精神沉郁、扎堆等不适反应，但很快恢复正常。此后再未出现任何异常反应，14天内所有小鼠无死亡。小鼠一日内总给药量为0.96g，相当于48g/kg·W。这说明小鼠对参芪粉的最大耐受量为48g/kg·W。根据规定，LD50在5g/kg·W以上者为实际无毒，而参芪粉的最大耐受量为48g/kg·W，远远大于5g/kg·W，因此认为参芪粉无毒，临床应用安全。(5)亚慢性毒性试验：将本发明实施例1制得的参芪粉药粉用蒸馏水溶解，稀释成0.6、0.3和0.075g/mL，根据急性毒性试验结果和临床用药剂量，拟定高、中、低剂量分别为15.0、7.5和1.875g/kg·W。选清洁级健康ICR小鼠80只，体重18～22g，购于南通大学实验动物中心，合格证号SCXK(苏)2008-0010。预饲7天后随机分为4组，每组20只，雌雄各半，分笼饲养。参芪粉的高、中、低剂量组分别灌服的高、中、低浓度的参芪粉药液0.5mL，对照组灌服等量生理盐水，每天1次，连续灌胃28天。停药后观察14天。观察小鼠的健康情况、增重情况、器官、血液指标等。(5.1)健康情况：每天观察小鼠的活动、采食、饮水、发病和死亡情况，对死亡小鼠剖检，记录病理变化。结果发现小鼠在前3次灌药后有轻微精神不振、扎堆、粪便稀软等不适现象，此后未见异常，整个试验期间各组小鼠精神良好，无死亡。(5.2)增重情况：在给药期间和观察期间，参芪粉3个剂量组小鼠的平均增重稍低于对照组，但无显著差异(P>0.05)，结果如表7所示。表7注：同列数据上标字母不同者差异显著(P<0.05)。下同。(5.3)器官指数的变化：停药后第1天，各组小鼠的心、肝、脾、肺、肾指数均无显著差异(P>0.05)；停药后第14天，各组小鼠的心、肝、脾、肺、肾指数均无显著差异(P>0.05)检测结果分别见表8、9。表8(n＝6)表9(n＝6)(5.4)血液学指标的变化：停药后第1天，参芪粉中剂量组小鼠的LY显著高于其余各组(P<0.05)，各组小鼠的WBC、RBC、HB、PLT均无显著差异(P>0.05)(表10)。停药后第14天，各组小鼠的WBC、RBC、HB、PLT和LY均无显著差异(P>0.05)(表10、11)。表10表11(5.5)血液生化指标：停药后第1天，各组小鼠的ALT、AST、ALP和BUN均无显著差异(P>0.05)(表12)。停药后第14天，各组小鼠的AST、ALP和BUN均无显著差异(P>0.05)(表13)。表12表13(5.6)剖检和组织学变化：在停药后第1和14天，剖检见各组小鼠各器官的颜色、大小、硬度均正常，未见出血、肿胀、坏死等眼观病理变化。组织学检查，心、肝、脾、肺、肾的切片未见明显的病理变化(图2、图3)。试验结果显示，用参芪粉灌胃，小鼠仅在前3次灌药后有不适现象，属于灌药刺激反应。连续给药28天及停药后14天，各组小鼠均无死亡，平均增重、器官指数、血清生化指标均无显著差异，剖检和组织学观察未见明显的病理变化，多数血液学指标无显著差异，表明参芪粉无明显的亚慢性毒性。血液学检查发现，在停药后第1天中剂量组的淋巴细胞百分率显著高于对照组。淋巴细胞是机体的免疫细胞，主要参与机体的特殊免疫反应，本试验结果说明参芪粉还有一定的增强免疫作用。本试验中参芪粉的3个剂量都远远大于临床用药剂量，且给药时间长达4周，在给药后和给药后2周内小鼠各项指标无显著异常，证明长期服用参芪粉没有明显的毒副作用，临床应用安全。(6)增强鸡新城疫疫苗免疫效果试验：选用购自南京汤泉农垦种鸡场的1日龄非免疫健康罗曼蛋公鸡，饲养至14日龄时(测得母源抗体效价3.3log2)选取600只，随机分为6组。空白对照组60只隔离饲养，不做任何处理。其余5组，每组90只(免疫对照组另加90只用于攻毒剂量测定)，设3个重复，均用新城疫IV系苗滴鼻点眼免疫，2羽份/羽；28日龄重复免疫；在免疫的同时，3个药物试验组开始饮服高(0.15％)、中(0.1％)、低(0.05％)剂量的参芪粉，药物对照组开始饮服盐酸左旋咪唑-黄芪多糖粉(0.1％)(湖南威克尔生物科技有限公司产品，每袋100g，含盐酸左旋咪唑5g、黄芪多糖8g，批号20090112)，连续7天，免疫对照组不给药；42日龄时，各组留取60只，用新城疫强毒攻毒，同时3个药物试验组和药物对照组饮服相应药物，连续7天，免疫对照组不给药。分别于首免后第7(D7)、14(D14)、21(D21)和28(D28)d采血，用β-微量法和MTT法测定血清新城疫抗体效价和外周血淋巴细胞增殖。42日龄时各组留取60只，用新城疫强毒攻毒，同时饮服相应药物，连续7d。每天观察新城疫的发病和死亡情况，连续观察14d，统计发病率、死亡率和免疫保护率。结果显示，参芪粉高、中剂量能显著提高抗体效价，促进淋巴细胞增殖，提高新城疫苗的免疫效果，对雏鸡有一定的促进增重作用，在多数时间点的效果优于药物对照组，高、中剂量组之间多无显著差异。表明参芪粉高、中剂量有较好的增强免疫作用。鉴于高、中剂量之间多无显著差异，建议中剂量作为临床应用剂量。(6.1)新城疫抗体效价：分别于首免后第7d(D7)、14d(D14)、21d(D21)、28d(D28)每组随机抽取12只(每个重复4只)，翼静脉采血，分离血清，用β-微量法测定新城疫抗体效价。结果见表14。表14(log2)组别D7D14D21D28药物高剂量5.67±0.52a7.00±0.00a7.17±0.41b7.83±0.41a药物中剂量5.83±0.41a7.33±0.52a7.83±0.75a8.17±0.75a药物低剂量4.17±0.41bc5.33±0.52b5.83±0.41cd6.17±0.41c药物对照4.33±0.52b5.50±0.55b6.17±0.75c6.83±0.75b免疫对照3.67±0.51c5.17±0.41b5.50±0.55d5.67±0.52d空白对照2.50±0.55d2.40±0.54c2.20±0.45e2.00±0.00e注：同列数据上标无相同字母者差异显著(P<0.05)，下同。由表14可以看出，在首免后第7天(D7)，参芪粉高、中剂量组和药物对照组的抗体效价显著高于免疫对照组(P<0.05)，高、中剂量组显著高于药物对照组(P<0.05)，高、中剂量组之间无显著差异(P>0.05)；在D14，参芪粉高、中剂量组的抗体效价显著高于其余各组(P<0.05)，高、中剂量组之间无显著差异(P>0.05)；在D21，参芪粉高、中剂量组和药物对照组的抗体效价显著高于其余各组(P<0.05)，中剂量组显著高于高剂量组和药物对照组(P<0.05)；在D28，参芪粉3个剂量组和药物对照组的抗体效价显著高于免疫对照组(P<0.05)，高、中剂量组之间无显著差异(P>0.05)。(6.2)外周血淋巴细胞增殖：分别于首免后第7d(D7)、14d(D14)、21d(D21)、28d(D28)，每组随机抽取6只(每个重复2只)，心脏采血，肝素抗凝，用MTT法测定外周血淋巴细胞增殖。主要步骤为：分离淋巴细胞，活细胞计数，调整细胞浓度为2.5×106个·mL-1，加入到96孔细胞培养板中，80μL/孔，每孔再加20μLPHA(终浓度为10μg·mL-1)，每个样品重复6孔，39.5℃、5％CO2培养44h，每孔加入20μLMTT(终浓度为1.0mg·mL-1)，继续培养4h，每孔加裂解液二甲亚砜(DMSO)100μL，在酶联免疫仪上检测570nm处的吸光度(A570值)，作为淋巴细胞增殖的指标。测试结果见表15。表15(A570值)组别D7D14D21D28药物高剂量0.288±0.024a0.262±0.008a0.225±0.012a0.249±0.019a药物中剂量0.278±0.023a0.254±0.018ab0.217±0.007a0.240±0.017a药物低剂量0.217±0.015bc0.185±0.009c0.194±0.010ab0.190±0.015b药物对照0.253±0.020ab0.229±0.010b0.173±0.015b0.156±0.016b免疫对照0.207±0.005bc0.196±0.006c0.171±0.010b0.158±0.020b空白对照0.187±0.008c0.182±0.006c0.165±0.001b0.146±0.013b由表15数据可以看出，在D7，参芪粉高、中剂量组的A570值显著大于除药物对照组外的其余各组(P<0.05)，高、中剂量组之间无显著差异；在D14，参芪粉高、中剂量组和药物对照组的A570值显著大于免疫对照组(P<0.05)，高、中剂量之间无显著差异，高剂量组显著大于药物对照组(P<0.05)；在D21，参芪粉高、中剂量组的A570值显著大于除低剂量组外的其余各组(P<0.05)，两组之间无显著差异；在D28，参芪粉高、中剂量组的A570值显著大于其余各组(P<0.05)，两组之间无显著差异。(6.3)免疫保护效果：攻毒剂量筛选：32日龄时，从免疫对照组随机抽取90只，均分为3组，根据以往攻毒成功的经验，分别胸肌注射104、105、106EID50的NDV0.5mL，观察10d。测得各组的死亡率分别为3.3％、6.7％和10％，选择106EID50作为攻毒剂量。攻毒试验：42日龄时，每组留取60只，分别每羽胸肌注射106EID50的NDV0.5mL。每天观察各组鸡的发病和死亡情况，死亡鸡剖检观察病理变化，连续观察14d，计算发病率、死亡率和免疫保护率。免疫保护率＝存活健康鸡数/样本数。测试结果如表16所示。表16攻毒后第3d(D3)，免疫对照组和药物对照组鸡开始零星出现绿色稀便，但精神和饮食正常；到D4时，少部分鸡只聚堆、羽毛松乱、精神沉郁，采食下降。参芪粉高、中剂量组发病率较低。到D5时，免疫对照组和药物对照组鸡开始出现零星死亡。死亡鸡剖检，可见口腔、鼻孔有黏液，喉头和气管黏膜充血，直肠粘膜和盲肠扁桃体出血，少数病鸡腺胃乳头出血，黏膜、浆膜出血。到D10时，死亡停止。至D14时，所有存活鸡全部恢复正常。参芪粉高、中剂量组的免疫保护率为100％，显著高于其余3组(P<0.05)。(6.4)增重效果：分别于14、28、42、56日龄时，各组以重复为单位称重，分别计算14～28、29～42、43～56日龄3个时间段的平均日增重。平均日增重(g/d/羽)＝(平均末重－平均始重)/饲喂天数。测试结果见表17。表17(g)组别14～28d29～42d43～56d药物高剂量10.82±0.74a12.06±0.68a10.48±1.12b药物中剂量10.18±0.04ab11.61±0.23ab10.18±1.36b药物低剂量9.61±0.24abc9.36±1.06c9.24±1.07b药物对照9.08±0.31bc11.11±0.89ab8.98±0.85b免疫对照8.62±0.80c9.25±0.21c8.52±0.81b空白对照8.21±0.09c10.08±0.09bc16.84±1.27a在14～28日龄，参芪粉高、中剂量组的日均增重显著大于免疫对照组和空白对照组(P<0.05)，高剂量组显著大于药物对照组(P<0.05)，高、中剂量组之间无显著差异(P>0.05)；在29～42日龄，参芪粉高、中剂量组和药物对照组的日均增重显著大于免疫对照组(P<0.05)，3组之间无显著差异(P>0.05)；在43～56日龄，各攻毒组存活鸡的平均日增重显著低于空白对照组，参芪粉3个剂量组大于免疫对照组和药物对照组，3组之间无显著差异(P>0.05)。(7)增强猪瘟疫苗免疫效果试验：由无锡南洋农畜有限公司猪场提供20日龄仔猪150头，随机分为5组，每组30头，各组均用猪瘟疫苗免疫，1头份/头。同时，3个药物剂量组按0.3％、0.2％和0.1％的比例混饲参芪粉，药物对照组按0.1％的比例混饲盐酸左旋咪唑-黄芪多糖可溶性粉(湖南威克尔生物科技有限公司产品，每袋100g，含盐酸左旋咪唑5g、黄芪多糖8g，批号20090112)，连续3d；疫苗对照组，不给药；首免后30d进行二免，1头份/头，同时重复以上给药3d分别于首免后10d(D10)、20d(D20)、30d(D30)、40d(D40)、50d(D50)、60d(D60)、70d(D70)，每组随机抽取6头，耳缘静脉采血，分离血清，按试剂盒说明书用正向间接凝集法测定猪瘟抗体效价。同时每组随机抽取6头称重，统计各组每月的日均增重。结果显示，用参芪粉配合猪瘟疫苗免疫仔猪，高、中剂量组在多个时间点的抗体效价显著高于左旋咪唑-黄芪多糖的药物对照组和免疫对照组，前期高剂量组的效价最高，后期中剂量组的效价最高；高、中剂量组仔猪的日增重多显著高于药物对照组和免疫对照组，前期中剂量组的日增重最高，后期高剂量组的日增重最高，表明参芪粉高、中剂量有较好的增强免疫和促进增重作用。鉴于高、中剂量组之间多无显著差异，建议中剂量为临床应用剂量。(7.1)猪瘟血清抗体效价：分别于首免后10d(D10)、20d(D20)、30d(D30)、40d(D40)、50d(D50)、60d(D60)、70d(D70)，每组随机抽取6头，耳缘静脉采血，分离血清，按试剂盒说明书用正向间接凝集法测定猪瘟抗体效价。测试结果如表18所示。表18注：同行数据上标无相同字母者表示差异显著(P<0.05)。首免后第10d(D10)，参芪粉高剂量组抗体效价显著高于免疫对照组(P<0.05)、高于药物对照组(P>0.05)；在D20，参芪粉高、中剂量组抗体效价显著高于免疫对照组(P<0.05)、高于药物对照组(P>0.05)，高、中剂量组之间的差异不显著(P>0.05)；在D30，参芪粉3个剂量组的抗体效价高于免疫对照组和药物对照组(P>0.05)；在D40，参芪粉高、中剂量组和药物对照组抗体效价显著高于免疫对照组(P<0.05)，高、中剂量组之间的差异不显著(P>0.05)；在D50～D70，参芪粉高、中剂量组抗体效价显著高于免疫对照组(P<0.05)，中剂量组显著高于药物对照组(P<0.05)、稍高于高剂量组(P>0.05)。(7.2)增重变化：分别于首免前和首免后30、60、90d每组随机抽取6头称重，计算平均日增重的变化。结果见表19所示。表19组别25～55日龄55～85日龄85～115日龄药物高剂量组0.364±0.006b0.568±0.005a0.837±0.011a药物中剂量组0.410±0.016a0.544±0.025ab0.832±0.015a药物低剂量组0.326±0.003c0.552±0.013ab0.814±0.013b药物对照组0.296±0.021d0.554±0.021ab0.809±0.017b免疫对照组0.308±0.020d0.537±0.025b0.806±0.009b注：同列数据上标无相同字母者表示差异显著(P<0.05)在25～55日龄，参芪粉3个剂量组的平均日增重均显著高于药物对照组和免疫对照组(P<0.05)，中剂量组显著高于高、低剂量组(P<0.05)，高剂量组显著高于低剂量组(P<0.05)；在55～85日龄，参芪粉高剂量组的平均日增重显著高于免疫对照组(P<0.05)、高于药物对照组(P>0.05)；在85～115日龄，参芪粉高、中剂量组的平均日增重均显著高于药物对照组和免疫对照组(P<0.05)。当前第1页1 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