本发明涉及医药技术领域，具体地说，是一种促炎症消退介质——巨噬素(maresin，mar1)通过调节th17/treg细胞平衡在制备预防或治疗类风湿性关节炎疾病药物中的应用。
背景技术：
类风湿性关节炎(ra)一种慢性致残性自身免疫性疾病，我国患病率为0.32％-0.36％。ra患者病理表现为多关节受累、滑膜炎症并过度增殖形成血管翳最后导致骨与软骨破坏并疼痛，严重影响患者的生活质量，晚期患者最终90％丧失劳动能力和生活自理能力(xinyuyang,pengchengqiu,bingbingchen,yaoyaolin,zhonghaozhou,renshange,haizou,jianminwang,*andjianguangwang,*kiaa1199asapotentialdiagnosticbiomarkerofrheumatoidarthritisrelatedtoangiogenesis.arthritisresearch&therapy,2015,17:140)。目前治疗类风湿性关节炎的药物主要有甲氨喋呤、非甾类抗炎药物和一些生物制剂(抗il-6受体的抗体、tnf-α抑制剂)，长期服用这些药物会对人体有较大副作用，会引起胃肠不适甚至出血，肝损伤和高血压等(jflima-garcia,rcdutra,kabsdasilva,emmotta,mmcamposandjbcalixto.theprecursorofresolvindseriesandaspirin-triggeredresolvind1displayanti-hyperalgesicpropertiesinadjuvant-inducedarthritisinrats.britishjournalofpharmacology,2011,164:278–293)。因此，寻求安全高效的防治治疗ra的临床药物是医学界有待解决的重要难题。
ra发病机理错综复杂至今尚不明确，新近研究结果显示当体内发生炎症反应时，激发炎症反应的因素被清除后，机体要进入主动的炎症消退过程，但若炎症不能及时消退就可能发生慢性炎症疾病，如ra。
巨噬素(7r,14s-二羟基-4z,8e,10e,12z,16z,19z-二十二碳六烯酸，maresin1，mar1)是以巨噬细胞分泌的二十二碳六烯酸(dha)为来源产生的一种新型促炎症消退介质，在炎症反应消退过程中有抑制粒细胞浸润，增强巨噬细胞吞噬能力，具有强大的抗炎消退作用(serhancn,dallij,karamnovs,choia,parkck,xuzz,jirr,zhum,petasisna.macrophageproresolvingmediatormaresin1stimulatestissueregenerationandcontrolspain.fasebj,2012,26(4):1755-1765.)。
至今未见巨噬素(7r,14s-二羟基-4z,8e,10e,12z,16z,19z-二十二碳六烯酸，maresin1，mar1)用于治疗类风湿性关节炎方面的报道。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种促炎症消退介质——巨噬素(7r,14s-二羟基-4z,8e,10e,12z,16z,19z-二十二碳六烯酸，maresin1，mar)通过调节th17/treg细胞平衡在制备预防或治疗类风湿性关节炎疾病药物中的应用。
本发明所用的用于干预ra动物模型的巨噬素购于cayman公司，化学结构式如式(i)所示，纯度≥95％，溶解于乙醇中，使用时用pbs(ph＝7.2)稀释。
本发明的第一方面，提供巨噬素在制备预防或治疗类风湿性关节炎的药物中的应用。
进一步的，所述的巨噬素降低关节炎指数，抑制踝关节肿胀程度。
进一步的，所述的巨噬素下调血清中肿瘤坏死因子(tnf-α)、白介素1β(il-1β)、白介素6(il-6)、白介素17(il-17)和干扰素(ifnγ)浓度，上调血清中白介素10(il-10)和转化生长因子-β(tgf-β)浓度。
进一步的，所述的巨噬素减少关节血管翳生成和软骨损伤。
进一步的，所述的巨噬素通过调节th17细胞和treg细胞的平衡来缓解类风湿性关节炎疾病发展。
本发明的第二方面，提供一种预防或治疗类风湿性关节炎的药物，包括有效量的巨噬素，和常规药用赋形剂、载体或稀释剂。
本发明的第三方面，提供巨噬素在制备调节th17细胞和treg细胞平衡的药物中的应用。
本发明通过大量实验证实了巨噬素通过促进炎症消退对ra治疗作用。首先临床样品巨噬素含量测定发现，ra活动期患者血清巨噬素浓度要明显低于正常人，说明巨噬素可能对ra疾病的发展起到重要作用。接下来进行了巨噬素延缓ra疾病进程的机制研究，有报道炎症消退过程中th17/treg细胞的失衡在ra疾病发展进程中发挥重要作用(noackm,miossecp.th17andregulatorytcellbalanceinautoimmuneandinflammatorydiseases.autoimmunrev2014,13:668-677)，th17细胞可以通过分泌细胞因子(如il-1β、il-6等)，趋化因子和基质金属蛋白酶促进炎症反应，破坏软骨或骨组织；而treg细胞可以分泌il-10和tgf-β抑制炎症反应，最终可以引起免疫耐受(koendersmi,joostenla,vandenbergwb.potentialnewtargetsinarthritistherapy:interleukin(il)-17anditsrelationtotumournecrosisfactorandil-1inexperimentalarthritis.annrheumdis2006,65suppl3:iii29-33.)。本发明基于以上理论基础开展了巨噬素对ra疾病进程发展影响的研究，研究巨噬素对cia小鼠关节肿胀程度和体内促炎因子的抑制作用，最后研究巨噬素对cia小鼠体内th17/treg细胞平衡的影响。
本发明采用类风湿性关节炎动物模型(inglisjj,notleyca,essexd,wilsonaw,feldmannm,anandp,williamsr.collagen-inducedarthritisasamodelofhyperalgesia:functionalandcellularanalysisoftheanalgesicactionsoftumornecrosisfactorblockade.arthritisrheum.2007,56(12):4015-4023)，观察巨噬素对cia小鼠尾静脉给药的治疗作用。
实验结果显示，巨噬素(0.8ug/kg(20ng/只)，4ug/kg(100ng/只))尾静脉给药后，可显著降低cia小鼠鼠关节炎指数，抑制踝关节肿胀程度；下调cia小鼠血清中肿瘤坏死因子(tnf-α)、白介素1β(il-1β)、白介素6(il-6)、白介素17(il-17)和干扰素(ifnγ)浓度，上调了cia小鼠血清中白介素10(il-10)和tgfβ浓度；病理切片显示，巨噬素可显著减少cia小鼠关节血管翳生成和软骨损伤。上述研究表明，巨噬素具有良好的抗ra活性。进一步通过流式细胞术实验检测巨噬素对cia小鼠体内th17细胞和treg细胞的比例，结果表明巨噬素可以通过改善cia小鼠体内th17/treg失衡的状态来缓解ra疾病发展。
本发明寻找到了通过改善th17/treg失衡来治疗ra的药物。
本发明优点在于：
1、本发明通过ii型胶原诱导的小鼠类风湿性关节炎模型证实了巨噬素可显著通过调节cia小鼠体内的th17/treg细胞的平衡来改善类风湿性关节炎小鼠症状，具有良好的抗类风湿性关节炎作用；
2、本发明涉及的化合物巨噬素可用于作为治疗类风湿性关节炎药物，为寻求安全有效的抗类风湿性关节炎药物提供了一种新的来源。
附图说明
图1：巨噬素对ii型胶原诱导ra模型小鼠关节炎指数的影响(cia，造模组；cia+20ngmar1，造模组给予巨噬素干预20ng/只；cia+100ngmar1，造模组给予巨噬素干预100ng/只)；
图2：巨噬素对ii型胶原诱导ra模型小鼠关节组织病理切片(he染色和甲苯胺蓝染色)的影响；
图3：巨噬素对ii型胶原诱导ra模型小鼠血清中il-1β(a)，il-6(b)，tnf-α(c)，ifn-γ(d)，il-17(e)，il-10(f)和tgf-β(g)的影响(*vs造模组，p<0.05)；
图4：巨噬素对ii型胶原诱导ra模型小鼠th17细胞和treg细胞的影响(a，巨噬素对cia小鼠体内th17细胞的影响，b，巨噬素对cia小鼠体内treg细胞的影响，*vs模型组，p<0.05)。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明提供的具体实施方式作详细说明。
实施例1：巨噬素通过调节th17/treg细胞比例改善类风湿性关节炎疾病进程
1.1实验材料
6-8周龄的雄性dba/1小鼠(上海斯莱克生物公司购买30只，小鼠血清il-1β，il-6，tnf-α，ifn-γ，il-17，il-10和tgf-β的elisa试剂盒(美国sigma公司)。主要仪器：酶标仪(bio-rad550)、离心机(labofuge400r，heraeus公司)、电子天平(fa110a型，上海精密科学仪器有限公司)、流式细胞仪。
1.2实验造模及给药
实验前将30只dba/1小鼠称重，按体质量随机分为3组，每组10只，自由饮食、进水。分为模型组、巨噬素20ng/只和巨噬素100ng/只三组。
造模组：第0天，将牛ii型胶原蛋白醋酸溶液与等容量的弗氏完全佐剂混合，充分乳化，dba/1小鼠尾根进行皮内注射(2mg/ml)，每只0.1ml；21日后，将牛ii型胶原蛋白醋酸溶液与等容量的不完全弗氏完全佐剂混合，充分乳化加强免疫，dba/1小鼠尾根进行皮内注射(2mg/ml)，每只0.1ml；
cia+20ngmar1组：与模型组同样造模，加强免疫后，给予小鼠每三天一次尾静脉注射巨噬素(20ng/只)，一直给药到第48天；
cia+100ngmar1组：与模型组同样造模，加强免疫后，给予小鼠每三天一次尾静脉注射巨噬素(100ng/只)，一直给药到第48天。
1.3观察指标
1.3.1对小鼠关节肿胀程度进行关节炎指数评分，每3天评分一次。
1.3.2在实验第49日，处理小鼠。进行以下操作：
(1)小鼠心脏采血，置37℃孵育15分钟后，以1500r/min离心15min，取上清，用elisa法测定三组小鼠血清中il-1β，il-6，tnf-α，ifn-γ，il-17，il-10和tgf-β水平，按elisa试剂盒说明书进行操作；
(2)取三组小鼠踝关节骨组织进行病理切片检查；
(3)取三组小鼠淋巴结提取淋巴结细胞，流式细胞术检测每组小鼠体内th17/treg细胞的比例。
1.4实验结果
(1)大鼠关节炎指数评分
如图1所示，两组巨噬素组关节炎指数均低于模型组关节炎指数为，提示巨噬素可显著降低ii型胶原诱导的ra小鼠关节炎指数，表明巨噬素对小鼠类风湿性关节炎模型有较好的缓解作用。
(2)病理切片
如图2所示，模型组小鼠病理组织切片显示滑膜增生、血管翳和软骨损伤严重，两组巨噬素组均可显著减少滑膜增生、血管翳生成和软骨损伤，提示巨噬素可有效抑制ra模型小鼠的关节损伤。
(3)血清学指标
如图3所示，与模型组相比，巨噬素能显著降低血清中il-1β，il-6，tnf-α，ifn-γ，il-17，il-10和tgf-β的水平，说明巨噬素尾静脉给药能显著降低类风湿性关节炎动物模型血清中的促炎因子的水平，可有效缓解ra小鼠的炎症反应。
(4)流式细胞术检测th17和treg细胞比例
如图4所示，模型组小鼠th17/treg细胞比例相比巨噬素处理组比例显著升高。
以上已对本发明创造的较佳实施例进行了具体说明，但本发明创造并不限于所述实施例，熟悉本领域的技术人员在不违背本发明创造精神的前提下还可做出种种的等同的变型或替换，这些等同的变型或替换均包含在本申请权利要求所限定的范围内。