本发明总地涉及中药领域，具体涉及中药组合物在制备治疗帕金森病药物中的应用。
背景技术：
帕金森病(pd)是一种以黑质纹状体通路神经退行性病变为主要特征的神经系统变性疾病，其临床特征主要表现为静止性震颤、肌肉强直、运动迟缓和姿势平衡障碍，且常伴有认知功能障碍。60岁以上人群中，pd发病率约为1％～2％，是严重影响人类健康的第二大神经退行性疾病。(张雪,张雯,杜立达,高丽,杜冠华.抗帕金森病药物及其作用靶点研究进展[j].国际药学研究杂志,2016,43(01):87-96.)
目前，临床上对pd均采用对症治疗，尚无有效的治疗手段能够恢复变性神经元。自1967年左旋多巴问市以来，左旋多巴已经成为pd运动症状的主要治疗药物。从目前的临床应用来看，尚无其他的多巴胺吧受体(dr)激动剂能够达到左旋多巴的临床效果，该药被誉为pd治疗的“金标准”，是pd的基础用药。但长期使用左旋多巴又会引起症状波动、开关现象以及运动障碍等副作用。
临床应用的主要是左旋多巴的复方制剂，目的是为了提高左旋多巴治疗效果，减少用量从而减轻不良反应。例如左旋多巴与卡比多巴等外周脱羧酶抑制剂合用，或者与金刚烷胺及苯海索等抗胆碱药合用。(张雪,张雯,杜立达,高丽,杜冠华.抗帕金森病药物及其作用靶点研究进展[j].国际药学研究杂志,2016,43(01):87-96.)
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种中药组合物在制备治疗帕金森病药物的应用。
本发明提供了一种中药组合物在制备治疗帕金森病药物中的应用，其中，所述中药组合物是由如下重量份比例的原料药制成：川芎5-25份，天麻1.5-8份。其中，川芎为伞形科植物川芎ligusticumchuanxionghort.的干燥根茎；天麻为兰科植物天麻gastrodiaelatabl.的干燥块茎。所述中药组合物亦还可包括药物所接受的辅料。
优选地，根据前述的应用，其中，所述中药组合物是由如下重量份比例的原料药制成：川芎8-15份，天麻2-6份。
优选地，根据前述的应用，其中，所述中药组合物是由如下重量份比例的原料药制成：川芎10份，天麻2.5份。
优选地，根据前述的应用，其中，所述中药组合物是由如下重量份比例的原料药制成：川芎9份，天麻5份。
更优选地，根据前述的应用，其中，所述中药组合物的制剂剂型为胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、口服液或丸剂。
还优选地，根据前述的应用，其中，所述中药组合物的制备方法包括：
(1)按川芎5-25，天麻1.5-8重量比例取川芎、天麻两种组分，将其干燥、粉碎、混合得混合物；
(2)用70％-90％乙醇回流提取所述混合物2-3次得提取液和药渣，每次1-3小时；
(3)合并所述提取液，过滤得滤液；
(4)所述滤液浓缩至55-65℃相对密度为1.21-1.30的清膏。
再优选地，根据前述的应用，其中，所述中药组合物的制备方法还包括：
(5)所述药渣用水煎煮1-2小时，合并煎液，过滤，所述煎液后的滤液浓缩至55-65℃相对密度为1.21-1.30的清膏，优选煎煮1小时；
(6)合并步骤(4)和步骤(5)所得清膏。
再优选地，根据前述的应用，其中，步骤(1)中川芎和天麻的重量比为10-25：1.5-8。
再优选地，根据前述的应用，其中，步骤(2)为采用90％乙醇回流提取所述混合物2次得提取液，每次2小时。
或再优选地，根据前述的应用，其中，步骤(4)和/或步骤(5)所得清膏的相对密度为1.27。
所述中药混合物的胶囊剂制备方法除上述步骤外，还包括：步骤(4)和/或步骤(5)所得清膏加入药物接受的辅料，如适量糊精，真空干燥，混和均匀，过筛，制粒，整粒，装胶囊。
本发明中药组合物由川芎和天麻2味中药组成，配伍简单，制备方法简便，该中药组合物具有活血平肝，通络止痛的功效。
发明人在临床实践中意外地发现，本中药组合物具有非常好抗帕金森作用，发明人对该药进行了药效学研究，证明其疗效确切。
试验研究表明，本发明的中药组合物可显著改善mptp造模小鼠行为学异常症状，对小鼠旋转行为有明显抑制，缩短小鼠爬杆时间并能增加小鼠悬挂能力，对于mptp引起的小鼠运动功能的损害具有一定的保护作用；增加小鼠纹状体da、dopac、hva含量，具有改善pd动物纹状体内da含量的作用；显著调节神经递质，保护6-ohda致神经元细胞损伤。效果与阳性对照药美多巴相似，提示该中药组合物将在治疗或预防帕金森方面发挥重要作用。
具体实施方式
本发明公开了一种中药组合物的应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
如本文所使用的，术语“治疗”指任何在治疗或改善损伤、病状、病症或症状(例如，疼痛)上的成功指标，包括任何客观或主观的参数，诸如消除；好转；症状减少或使患者更能忍受症状、损伤、病状或病症；降低症状或病症频率或持续时间；或者，在一些情况下，预防症状或病症的发作。症状的治疗或改善可以基于任何客观或主观参数，包括，例如身体检查的结果。
下述实施例所用原料及试剂均可由市场购得。
实施例1中药组合物的制备
取川芎784g、天麻196g，将其干燥、粉碎、混合；然后用90％乙醇回流提取2次得提取液和药渣，每次2小时，合并提取液，过滤得滤液；滤液浓缩至55-65℃相对密度为1.27的清膏；药渣用水煎煮2次，每次1小时，合并煎液，过滤，煎液后的滤液浓缩至55-65℃相对密度为1.27的清膏；与上述清膏合并；加入药物接受的辅料，真空干燥，混和均匀，过筛；制粒，整粒，装胶囊，制成1000粒备用，每粒胶囊装量为0.34g，相当于原药材0.98g。
实施例2中药组合物对小鼠帕金森模型的作用研究
1、实验材料
受试样品名称：按照实施例1的方法制备的中药组合物胶囊内容物；
阳性对照药：美多巴，规格：左旋多巴200mg或苄丝肼50mg，国药准字h10930198，上海罗氏制药有限公司生产；
1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(mptp)(美国sigma公司)；
spf级c57bl/6雄性小鼠，体重20-25g，由北京维通利华实验动物中心提供，生产许可证号：scxk(京)2016-0011。
2、实验方法
帕金森病(pd)小鼠模型制备：将小鼠随机分为6组，分别为正常对照组、模型对照组、中药组合物胶囊高、中、低剂量组、美多巴组。中药组合物胶囊高、中、低剂量组分别按剂量3.0g/kg、1.5g/kg、0.75g/kg灌胃21d，美多巴组按剂量2.8mg/kg灌胃，正常对照组和模型对照组分别灌胃等量去离子水。给药第22天造模，将模型对照组、中药组合物胶囊高、中、低剂量组和美多巴组腹腔注射mptp，剂量为72g/kg，分4次打完，每次间隔2h，正常对照组腹腔注射等量生理盐水，注射mptp0.5h后进行行为学指标测试。
3、观察指标
3.1行为学测试
3.1.1旋转实验：在直径为50cm的塑料盆中观察小鼠的旋转行为，每次注射mptp30分钟后，连续观察30分钟，记录小鼠的旋转次数。
3.1.2爬杆实验：将一直径为2.5cm的塑料小球固定于一根长50cm直径为1cm的木杆顶端，木杆上缠层纱布以防打滑。将小鼠放到球顶，记录以下3个时间：①小鼠爬完杆长的上半部分所需时间；②小鼠爬完杆长的下半部分所需的时间；③小鼠爬完杆长的全长所需时间。按以下标准打分：3秒内完成上述某一动作记3分，6秒内完成记2分，超过6秒记1分。3个时间分数总和为被测小鼠爬杆实验分数。
3.1.3悬挂实验：将小鼠双前肢悬挂于一水平金属线上，如小鼠用双后肢抓住金属线记3分；仅用一只后肢抓住金属线记2分；两只后肢均抓不住记1分；小鼠跌落记为0分。
3.2检测多巴胺(da)含量
小鼠断头放血处死,取小鼠脑纹状体,于-80℃保存，用于测定多巴胺含量。
4结果
4.1一般行为学观察
pd模型组小鼠于第1次注药(mptp)后5-15分钟均出现不同程度的震颤、竖毛、弓背、运动减少、竖尾等症状，正常对照组未出现上述行为学变化，亦无旋转行为；与模型对照组相比较，中药组合物胶囊高、中剂量组可改善上述行为学症状，对小鼠旋转行为有明显改善，缩短小鼠爬杆时间并能增加小鼠悬挂能力评分，p<0.01，p<0.05。见表1、2、3。
表1中药组合物胶囊对小鼠爬杆能力的影响
与模型对照组相比*p<0.05，**p<0.01
表2中药组合物胶囊对小鼠旋转行为的影响
与模型对照组相比*p<0.05，**p<0.01
表3中药组合物胶囊对小鼠悬挂行为的影响
与模型对照组相比*p<0.05，**p<0.01
4.2对小鼠纹状体中da及其代谢产物的影响
模型对照组的da，dopac(3,4-二羟基苯乙酸)，hva(高香草酸)的含量较正常组对照组均有明显下降(p<0.01)，与模型组相比较，中药组合物胶囊高、中剂量组da含量均有不同程度的增高(p<0.01)。见表4。
表4中药组合物胶囊对小鼠da及hva含量的影响
与模型对照组相比*p<0.05，**p<0.01
结果显示本中药组合物胶囊高、中、低剂量能显著改善mptp小鼠行为学异常症状，对小鼠旋转行为有明显抑制，缩短小鼠爬杆时间并能增加小鼠悬挂能力，增加小鼠纹状体da、dopac、hva含量，且有剂量依赖关系，其效果与阳性对照药美多巴相似，提示本中药组合物胶囊具有治疗或预防帕金森的药效学基础。
实施例3中药组合物对6-ohda致神经元细胞损伤实验研究
1、实验材料
受试样品名称：本中药组合物胶囊内容物；大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤pc12细胞株，6-ohda购自美国sigma公司，mtt购自biosharp，dmem高糖培养基购自hyclone，新生牛血清购自hyclone。
2、实验方法：
2.1细胞培养
pc12细胞接种于培养瓶中进行培养，培养液为含15％小牛血清的dmem高糖培养基，置于37℃，5％co2条件下培养箱中培养，隔天换液，待单层培养细胞80％汇合后，用0.25％胰蛋白酶消化，加含血清的培养基终止消化，吹打成为单细胞悬液，将pc12细胞浓度调整至1xl05/ml接种于96孔板中,每孔100μl,置于37℃，5％co2培养箱条件下培养。
2.2对6-ohda诱导pc12细胞损伤的活性测定
于细胞贴壁培养3天后，分为空白对照组，模型对照组，美多巴组(0.02mg/l)，中药组合物胶囊高、中、低剂量组(400，200，100mg/l)。其中空白对照组和模型对照组不加任何药物，其余各组加含不同浓度中药组合物胶囊的培养液培养24h后除空白对照组外其余各组分别加入浓度为100μmol/l6-ohda，空白对照组加入等量pbs，每组10个复孔，作用24h后，,每孔加入4μlmtt溶液(5mg·ml-1)，置于恒温37℃，含有5％co2的培养箱中再培养4h，离心后小心吸去孔内培养液，每孔加入150μldmso，轻轻摇动10min使结晶物充分溶解，在酶标仪od490nm处检测各孔的吸光值，计算细胞的抑制率。
表5中药组合物胶囊对对6-ohda诱导pc12细胞损伤的活性的影响
与模型对照组相比*p<0.05，**p<0.01
表5结果显示本中药组合物胶囊高、中、低剂量组对6-ohda损伤的pc12细胞有一定的保护作用，呈现剂量依赖关系，效果与阳性对照药美多巴相似，提示本中药组合物胶囊具有抗帕金森病的作用。
本发明还分别制备了不同重量配比的中药组合物，例如川芎：天麻为9：5、川芎：天麻为8：2、川芎：天麻为15：6。按上述相同实验方法研究发现：这些不同配比的中药组合物均能可显著改善mptp造模小鼠行为学异常症状，对小鼠旋转行为有明显抑制，缩短小鼠爬杆时间并能增加小鼠悬挂能力；增加小鼠纹状体da、dopac、hva含量。对6-ohda损伤的pc12细胞具有一定的保护作用。
最后应说明的是：显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之中。