本发明属于医药和保健食品技术领域，特别涉及一种具有抗疲劳、免疫调节功能的组合物及其制备方法和应用。
背景技术：
现代人生活和工作压力较大，致使很多人都处于亚健康状态，在不进行剧烈体力活动或频繁脑力活动的情况下仍常常感到疲劳。疲劳是非器质性改变或未确诊为某种疾病，但身体出现功能变化的一种状态，包括躯体、心理出现的种种不适应感，呈现出活力以及对外界适应力的下降。长期的疲劳不仅会导致一些器官的实质性病变并引发一些相关的疾病，还会使免疫力下降。
免疫力是人体自身的防御机制，是人体识别、吞噬和消灭外来细菌、病毒和体内已衰老死亡的细胞、已突变的细胞以及引起变态反应的物质的能力，是维持体内环境稳定、保持机体健康的重要屏障。免疫力低下的人会出现感冒频繁且不易康复、伤口容易感染、肠胃病多发、易被感染或罹患癌症等情况，显著降低生活质量甚至生存期限。从30岁左右起，人体的免疫力即开始缓慢而持续地减退，免疫力的减退是衰老的最重要原因之一，而疲劳会加速免疫力的降低，使人体更早进入免疫力低下的状态。
技术实现要素：
针对疲劳、免疫力低下会损伤人体健康的技术问题，本发明提供一种具有抗疲劳、免疫调节功能的组合物。
以及，本发明还提供一种具有抗疲劳、免疫调节功能的组合物的制备方法。
以及，本发明还提供第二种具有抗疲劳、免疫调节功能的组合物的制备方法。
以及，本发明还提供第三种具有抗疲劳、免疫调节功能的组合物的制备方法。
以及，本发明还提供上述具有抗疲劳、免疫调节功能的组合物在制备药品或保健食品中的应用。
以及，本发明还提供一种具有抗疲劳、免疫调节功能的口服制剂。
为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下的技术方案：
一种具有抗疲劳、免疫调节功能的组合物，包括以下重量份数配比的原料：淫羊藿30～80份、人参2～40份、黄芪5～40份和山茱萸5～40份。
相对于现有技术，本发明所提供的具有抗疲劳、免疫调节功能的组合物通过多种活性成分的协同作用，提高机体的工作能力，减轻疲劳，促进食欲，从而能够增进机体、特别是年老体弱者的健康，还能够促进病后恢复。配方中人参、黄芪均为传统补益之佳品，人参、黄芪中含有多种皂苷及类黄酮类活性成分，可提高机体耐力，减少疲劳，增强机体的防御能力和适应性。人参甘温补益，而且补力雄厚，既能峻补肾中元气，又可增强脾肺之气而养血生津，兼入心经尚能助精养神，故有大补元气、补脾益肾之功效。淫羊藿补肝肾，坚筋骨，祛风胜湿，强心力，淫羊藿苷作为淫羊藿中含有的主要有效成分，能明显增强t细胞功能，产生免疫激活作用，促进脾细胞数增加，在抗应激、免疫调节系统、心血管系统等多方面都具有广泛的生理效应。山茱萸酸温质润，其性温而不燥，补而不腻，具有壮元气、添精髓之补益功效。本配方中，人参、黄芪益气健脾而使脾胃之气健旺，运化复常，资生气血，具有培补后天生气之功；淫羊藿辛甘温，补肝肾，壮筋骨；山茱萸酸补而不腻，收敛固涩，具有壮元气、添精髓之补益功效，并可使其余三味补益之阳气不散而敛，以发挥最大的效力。全方共奏补益先天、培补后天之功，效力专注，同时补敛并俱，药物配伍，药效协同，效力倍增。
优选地，所述组合物包括以下重量份数配比的原料：淫羊藿35～75份、人参2～30份、黄芪5～30份和山茱萸5～30份。
优选地，所述组合物包括以下重量份数配比的原料：淫羊藿40～70份、人参2～25份、黄芪10～30份和山茱萸10～30份。
优选地，所述组合物包括以下重量份数配比的原料：淫羊藿52份、人参5份、黄芪15份和山茱萸14份。
优选地，所述组合物包括以下重量份数配比的原料：淫羊藿45份、人参23份、黄芪23份和山茱萸22份。
以及，本发明实施例还提供了一种具有抗疲劳、免疫调节功能的组合物的制备方法，具体包括以下步骤：
根据上述组合物的原料配比称取各原料，将所述黄芪、山茱萸、淫羊藿和人参分别用水提取，或任意两种以上共同用水提取、剩余组分单独用水提取，将提取物混合即得。
优选地，该制备方法的具体实施方式为：将淫羊藿、黄芪、山茱萸和人参分别用水提取，制成淫羊藿提取物、黄芪提取物、山茱萸提取物和人参提取物，混合即得。
以及，本发明实施例还提供了第二种具有抗疲劳、免疫调节功能的组合物的制备方法，具体包括以下步骤：
根据上述组合物的原料配比称取各原料，将所述黄芪、山茱萸和淫羊藿分别用水提取，或该三种组分中任意两种以上共同用水提取、剩余组分单独用水提取，制成混合提取物；将人参粉碎，与所述混合提取物混合均匀，即得。
该方法将黄芪、山茱萸和淫羊藿用水进行提取，使其有效成分得以浓缩和聚集，使所得产品在单位重量内含有更高浓度的有效成分，同时将人参粉碎后直接加入，可以使人参中的有效成分全部被利用，充分发挥其补气养神的作用。
优选地，该制备方法包括以下具体实施方式：
将淫羊藿、黄芪和山茱萸分别用水提取，干燥，分别制成淫羊藿提取物、黄芪提取物和山茱萸提取物，混合后加入人参粉末，混合均匀即得；
或将淫羊藿、黄芪和山茱萸分别用水提取，分别制成淫羊藿提取液、黄芪提取液和山茱萸提取液，混合后加入人参粉末，混合均匀即得；
或将淫羊藿、黄芪和山茱萸分别用水提取，浓缩成清膏，制成淫羊藿清膏、黄芪清膏和山茱萸清膏，加入人参粉末，混合均匀后干燥，即得；
或将淫羊藿、黄芪和山茱萸用水混合提取，干燥，制成混合提取物，加入人参粉末混合均匀即得。
或将黄芪和山茱萸用水混合提取，干燥，将淫羊藿单独用水提取，干燥，制成混合提取物，加入人参粉末混合均匀即得。
以及，本发明实施例还提供了第三种具有抗疲劳、免疫调节功能的组合物的制备方法，具体包括以下步骤：
根据上述组合物的原料配比称取各原料，将所述黄芪、山茱萸、淫羊藿和部分人参分别用水提取，或前述组分中任意两种以上共同用水提取、剩余组分单独用水提取，制成混合提取物；将剩余部分人参粉碎，与所述混合提取物混合均匀，即得。
优选地，该制备方法包括以下具体实施方式：
将淫羊藿、黄芪、山茱萸和部分人参分别用水提取，干燥，分别制成淫羊藿提取物、黄芪提取物、山茱萸提取物和人参提取物，加入剩余人参粉混合均匀即得；
或将所述黄芪、山茱萸、淫羊藿和部分人参用水混合提取，干燥，制成混合提取物，加入剩余人参粉混合均匀即得；
上述三种制备方法及优选方法均生产流程简单，易于大生产。
以及，本发明实施例还提供上述具有抗疲劳、免疫调节功能的组合物在制备药品或保健食品中的应用。
将本发明中的组合物制成药品或保健食品后，更适宜疲劳、免疫力低下人群将其用于改善亚健康状态、抗疲劳以及提高免疫力。
以及，本发明实施例还提供一种具有抗疲劳、免疫调节功能的口服制剂，所述口服制剂包括用上述第一种制备方法制成的组合物，以及赋形剂；所述口服制剂的形式包括片剂、口服液、硬胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、散剂、丸剂或袋泡茶。
将按上述制备方法制成的组合物制成口服制剂后，使用更加方便、依从性更好。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进行进一步举例说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1
本发明实施例提供了一种具有抗疲劳、免疫调节功能的组合物，包括以下重量份数配比的原料：淫羊藿52g、人参5g、黄芪15g和山茱萸14g。
制备方法：
步骤a、根据上述组合物的原料配比称取各原料，将黄芪和淫羊藿切段，将山茱萸粉碎；将黄芪和山茱萸置提取罐，加水煎煮提取3次(每次用水量为290g)，第一次提取2h，第二次提取2h，第三次提取1h，过滤，合并提取液，减压浓缩成清膏，真空干燥，制成提取物粉末a；将淫羊藿置提取罐，加水煎煮提取3次(每次用水量为520g)，第一次提取2h，第二次提取2h，第三次提取1h，过滤，合并提取液，减压浓缩成清膏，真空干燥，制成提取物粉末b；将提取物粉末a与提取物粉末b混合，制成混合提取物；
步骤b、将人参粉碎过300目筛，与所述混合提取物混合均匀，即得。
实施例2
本发明实施例提供了一种具有抗疲劳、免疫调节功能的组合物，包括以下重量份数配比的原料：淫羊藿45g、人参23g、黄芪23g、山茱萸22g。
制备方法：
步骤a、根据上述组合物的原料配比称取各原料，将黄芪和淫羊藿切段；将黄芪和山茱萸置提取罐，加水煎煮提取2次(每次用水量为360g)，第一次提取3h，第二次提取2h，过滤，合并提取液，减压浓缩成清膏，喷雾干燥，制成提取物粉末a；将淫羊藿置提取罐，加水煎煮提取2次(每次用水量为360g)，第一次提取3h，第二次提取2h，过滤，合并提取液，减压浓缩成清膏，喷雾干燥，制成提取物粉末b；将提取物粉末a与提取物粉末b混合，制成混合提取物；
步骤b、将人参粉碎过100目筛，与所述混合提取物混合均匀，即得。
实施例3
本发明实施例提供了一种具有抗疲劳、免疫调节功能的组合物，包括以下重量份数配比的原料：淫羊藿52g、人参15g、黄芪15g、山茱萸14g。
制备方法：
步骤a、根据上述组合物的原料配比称取各原料，将黄芪、山茱萸和淫羊藿粉碎；将黄芪和山茱萸置提取罐，加水煎煮提取1次(用水量为174g)，提取3h，过滤，减压浓缩成清膏，真空干燥，制成提取物粉末a；将淫羊藿置提取罐，加水煎煮提取1次(用水量为312g)，提取3h，过滤，减压浓缩成清膏，真空干燥，制成提取物粉末b；
步骤b、将人参粉碎过80目筛，与提取物粉末a和提取物粉末b混合均匀，即得。
实施例4
本发明实施例提供了一种具有抗疲劳、免疫调节功能的组合物，包括以下重量份数配比的原料：淫羊藿60g、人参10g、黄芪20g、山茱萸25g。
制备方法：
步骤a、根据上述组合物的原料配比称取各原料，将黄芪、山茱萸和淫羊藿粉碎；将所述黄芪和山茱萸置提取罐，加水煎煮提取2次(每次用水量为225g)，第一次提取2h，第二次提取1h，过滤，合并提取液，减压浓缩成清膏，真空干燥，制成提取物粉末a；将淫羊藿置提取罐，加水煎煮提取2次(每次用水量为600g)，第一次提取2h，第二次提取1h，过滤，合并提取液，减压浓缩成清膏，真空干燥，制成提取物粉末b；将提取物粉末a与提取物粉末b混合，制成混合提取物；
步骤b、将人参粉碎过80目筛，与所述混合提取物混合均匀，即得。
实施例5
本发明实施例提供了一种具有抗疲劳、免疫调节功能的组合物，包括以下重量份数配比的原料：淫羊藿65g、人参20g、黄芪30g、山茱萸15g。
制备方法：
步骤a、根据上述组合物的原料配比称取各原料，将黄芪、山茱萸和淫羊藿粉碎；将所述黄芪和山茱萸置提取罐，加水煎煮提取3次(每次用水量为180g)，第一次提取3h，第二次提取2h，第三次提取1h，过滤，合并提取液，减压浓缩成清膏，真空干燥，制成提取物粉末a；将淫羊藿置提取罐，加水煎煮提取3次(每次用水量为520g)，第一次提取3h，第二次提取2h，第三次提取1h，过滤，合并提取液，减压浓缩成清膏，真空干燥，制成提取物粉末b；将提取物粉末a与提取物粉末b混合，制成混合提取物；
步骤b、将人参粉碎过100目筛，与所述混合提取物混合均匀，即得。
实施例6
本发明实施例提供了一种具有抗疲劳、免疫调节功能的组合物，包括以下重量份数配比的原料：淫羊藿50g、人参12g、黄芪25g、山茱萸20g。
制备方法：
步骤a、根据上述组合物的原料配比称取各原料，将黄芪、山茱萸和淫羊藿粉碎；将所述黄芪和山茱萸置提取罐，加水煎煮提取1次(用水量为180g)，提取2h，过滤，减压浓缩成清膏，真空干燥，制成提取物粉末a；将淫羊藿置提取罐，加水煎煮提取1次(用水量为300g)，提取2h，过滤，合并提取液，减压浓缩成清膏，真空干燥，制成提取物粉末b；将提取物粉末a与提取物粉末b混合，制成混合提取物；
步骤b、将人参粉碎过120目筛，与所述混合提取物混合均匀，即得。
实施例7
本发明实施例提供了一种具有抗疲劳、免疫调节功能的组合物，包括以下重量份数配比的原料：淫羊藿30g、人参2g、黄芪5g、山茱萸5g。
制备方法：
根据上述组合物的原料配比称取各原料，将黄芪、山茱萸、淫羊藿和人参粉碎，将黄芪、山茱萸、淫羊藿分别用相当于各原料重量10倍的水超声提取1次，提取2h，过滤，减压浓缩成清膏，得到淫羊藿清膏、黄芪清膏、山茱萸清膏，混合后加入人参粉末，混合均匀后减压干燥，即得。
实施例8
本发明实施例提供了一种具有抗疲劳、免疫调节功能的组合物，包括以下重量份数配比的原料：淫羊藿35g、人参2g、黄芪5g、山茱萸5g。
制备方法：
根据上述组合物的原料配比称取各原料，将黄芪、淫羊藿和人参分别切段，将山茱萸粉碎，分别加相当于各原料重量10倍的水超声提取1次，提取1h，过滤，减压浓缩成清膏，沸腾干燥，得到淫羊藿提取物、黄芪提取物、山茱萸提取物和人参提取物；将各混合物混合，即得。
实施例9
本发明实施例提供了一种具有抗疲劳、免疫调节功能的组合物，包括以下重量份数配比的原料：淫羊藿75g、人参30g、黄芪30g、山茱萸30g。
制备方法：
根据上述组合物的原料配比称取各原料，将黄芪、淫羊藿和一半人参分别切段，将山茱萸粉碎，分别加相当于各原料重量8倍的水煎煮提取1次，提取3h，过滤，减压浓缩成清膏，沸腾干燥，得到淫羊藿提取物、黄芪提取物、山茱萸提取物和人参提取物；将剩余人参粉碎过100目筛，与各混合物混合，即得。
实施例10
本发明实施例提供了一种具有抗疲劳、免疫调节功能的组合物，包括以下重量份数配比的原料：淫羊藿40g、人参2g、黄芪10g、山茱萸10g。
制备方法：
根据上述组合物的原料配比称取各原料，将黄芪、山茱萸和淫羊藿分别粉碎，分别加相当于各原料重量7倍的水煎煮提取2次，每次提取2h，过滤，合并提取液，减压浓缩成清膏，沸腾干燥，得到淫羊藿提取物、黄芪提取物和山茱萸提取物；将人参粉碎过100目筛，与各混合物混合，即得。
实施例11
本发明实施例提供了一种具有抗疲劳、免疫调节功能的组合物，包括以下重量份数配比的原料：淫羊藿70g、人参25g、黄芪30g、山茱萸30g。
制备方法：
根据上述组合物的原料配比称取各原料，将黄芪、山茱萸和淫羊藿和人参分别粉碎后混合，加水煎煮提取2次(每次用水量为1200g)，每次提取3h，过滤，合并提取液，减压浓缩成清膏，沸腾干燥，即得。
实施例12
本发明实施例提供了一种具有抗疲劳、免疫调节功能的组合物，包括以下重量份数配比的原料：淫羊藿80g、人参40g、黄芪40g、山茱萸40g。
制备方法：
根据上述组合物的原料配比称取各原料，将黄芪、山茱萸和淫羊藿和一半人参分别粉碎后混合，加水煎煮提取3次(每次用水量为1200g)，每次提取2h，过滤，合并提取液，减压浓缩成清膏，沸腾干燥，得提取物粉末；将剩余人参粉碎过100目筛，与提取物粉末混合，即得。
实施例13
本发明实施例提供了一种具有抗疲劳、免疫调节功能的胶囊：将实施例1得到的组合物加糊精和硬脂酸镁适量，混合至均匀，灌入胶囊，即得。
实施例14
本发明实施例提供了一种具有抗疲劳、免疫调节功能的软胶囊：将实施例1得到的组合物加植物油和蜂蜡适量，混合至均匀，压制成软胶囊，即得。
实施例15
本发明实施例提供了一种具有抗疲劳、免疫调节功能的口服液：将实施例2得到的组合物加水、矫味剂和防腐剂适量，混合，即得。
实施例16
本发明实施例提供了一种具有抗疲劳、免疫调节功能的颗粒剂：将实施例2得到的组合物加糊精适量，混合至均匀，制粒，即得。
实施例17
本发明实施例提供了一种具有抗疲劳、免疫调节功能的丸剂：将实施例1得到的组合物加淀粉和蜂蜜适量，混合至均匀，制丸，即得。
实施例18
本发明实施例提供了一种具有抗疲劳、免疫调节功能的散剂：将实施例5得到的组合物混合至均匀，分小袋包装，即得。
实施例19
本发明实施例提供了一种具有抗疲劳、免疫调节功能的片剂：在实施例1得到的组合物中加入微晶纤维素6g、淀粉8g，混匀，制粒、压片、包衣，即得。
实施例20
本发明实施例提供了一种具有抗疲劳、免疫调节功能的片剂：在实施例2得到的组合物中加入微晶纤维素27g、淀粉34g，混匀，制粒、压片、包衣，即得。
实施例21
本发明实施例提供了一种具有抗疲劳、免疫调节功能的片剂：在实施例3得到的组合物中加入微晶纤维素10g、淀粉15g，混匀，制粒、压片、包衣，即得。
实施例22
本发明实施例提供了一种具有抗疲劳、免疫调节功能的片剂：在实施例4得到的组合物中加入微晶纤维素15g、淀粉20g，混匀，制粒、压片、包衣，即得。
实施例23
本发明实施例提供了上述实施例19所得片剂的毒理实验：
1、小鼠急性毒性试验：选用清洁级昆明种小鼠40只，体重18-22克，雌雄各半，按horn氏法进行试验。最高剂量为21500mg/kg.bw(以蒸馏水为溶剂，下同)，采用等体积灌胃法(0.2ml/10g.bw)24小时内二次灌胃，连续观察两周。记录中毒表现及死亡情况。
2、大鼠急性毒性试验：选用wistar大鼠40只，体重180-220克，雌雄各半，按horn氏法进行试验。最高剂量为21500mg/kg.bw，采用等体积灌胃法(1ml/100g.bw)24小时内四次灌胃，连续观察两周。记录中毒表现及死亡情况。
3、遗传毒性试验：
(1)ames试验：本实验采用平板掺入法，分加与不加s9混合液两种。剂量分别为0.005、0.025、0.25、1.0、5.0mg/皿，另设空白对照和阳性对照组。阳性对照组使用2-af20ug/皿、2,4,7-tnfone1ug/皿、nan32.5ug/皿、丝裂霉素c4.0ug/皿、1，8-二羟基蒽醌50ug/皿，每个剂量组做3个平皿，重复做两次。菌种为ta97(a)、ta98、ta100、ta102四株菌。
(2)小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验：选用清洁级昆明种小鼠50只，体重25-30克，随机分为五组，每组10只，雌雄各半；设三个剂量组：2500、5000、10000mg/kg体重，同时设阴性对照组(蒸馏水)和阳性对照组(cp40mg/kg)，各组均间隔24小时两次给样，第二次给样后6小时取胸骨骨髓制片，每只动物计数1000个嗜多染红细胞，计算其微核发生率。
(3)小鼠精子畸形试验：选用清洁级昆明种雄性小鼠25只，体重30-35克，随机分为五组，每组五只；设三个剂量组：2500、5000、10000mg/kg体重，同时设阴性对照组(蒸馏水)和阳性对照组(cp40mg/kg)，连续经口给样5天。从首次给样计第35天处死动物，取双侧附睾制片，每只动物计数1000个精子，计算畸形率。
4、30天喂养试验
选用初断乳wistar大鼠80只，体重60-80g，随机分成四组，每组20只。雌雄各半，单笼饲养。受试物设三个试验剂量，分别为1.6g/kg体重、3.1g/kg体重、6.2g/kg体重(相当于推荐量的100倍)，另设一个阴性对照组。将受试物分别掺入到饲料中喂饲各组动物，连续30天。阴性对照组只给基础饲料。喂养期间各组动物均自由进食和饮水，每周称鼠体重并记录饲料消耗量一次，实验末期采尾血进行血液学和生化学检查。观察指标有生长发育、食物利用、血液学检查(采用血球计数仪测定)、生化学检查(分离血清后采用相应试剂盒及生化分析仪、756mc紫外可见分光光度计)。实验末期处死大鼠，解剖取肝、脾、肾、睾丸(卵巢)称重，计算脏器系数，然后对肝、肾、胃、肠进行病理组织学检查(石蜡切片)。
本实验结果表明，本发明组合物对两种性别的大、小鼠的ld50均大于21500mg/kg.bw，说明该产品属无毒物；三项致突变试验结果阴性；大鼠30天喂养试验各项指标均无明显异常。
实验例24
本发明实施例提供了上述实施例19所得片剂的抗疲劳药效学研究(动物试验)。
1、实验动物：清洁级雄性昆明种小鼠，体重18～22g，按体重随机分组。
2、实验样品：实施例19经粉碎后的细粉，人体推荐剂量为3.72g/日/60kg体重。
3、剂量选择：小鼠的等效剂量相当于人体推荐量的10倍，即每日摄入0.62g/kg体重为低剂量，再按低剂量的2倍和3倍各设一个剂量组，即1.24g/日/kg体重(中剂量)和1.86g/日/kg体重(高剂量)；对照组给蒸馏水，每天等体积灌胃一次，给予受试物30天后，测定各项指标。
4、实验方法：
(1)游泳试验：末次给予受试物30分钟后，小鼠尾根部负小鼠体重5％的铅皮，放入水温为25℃、水深35cm的游泳箱中。每一批小鼠下水之前均将水温调至25℃，并将室温恒定在25℃。每只水箱一次放入5只小鼠。用秒表记录自游泳开始至力竭死亡的时间，该时间为小鼠的游泳时间。
(2)血清尿素氮测定(二乙酰-肟法)：末次给予受试物30分钟后，将小鼠放于温度30℃的水中游泳90分钟，摘眼取血，取血清测定。用试剂盒法，按表1进行操作。
表1
按表1配制各待测溶液，充分混合，置沸水浴中煮沸10分钟，再于冷水中冷却。在520nm波长处以蒸馏水调零后，测定标准液、样品和空白的吸光度值。
(3)肝糖原测定(蒽醌法)：末次给予受试物30分钟后，将小鼠放于温度30℃的水中游泳90分钟，立即处死。取肝脏经生理盐水漂水后用滤纸吸干，精确称取肝脏200mg，加入4mltca，每管匀浆1分钟，将匀浆液倒入离心管，3000转/分离心15分钟，将上清液转移至另一试管内。在沉淀中再加入4mltca，匀浆1分钟，再次离心15分钟，取上清液，并与第一次离心的上清液合并，充分混匀，取1ml上清液放入10ml离心管中，每管加入95％的乙醇4ml，充分混匀至两种液体间不留有界面。用干净塞子塞上，室温下竖直放置过夜。沉淀完全后，将试管于3000转/分离心15分钟。小心倒掉上清液并使试管倒立放置10分钟。用2ml蒸馏水溶解糖原，加水时将管壁的糖原洗下，使之完全溶解。试剂空白：吸2ml蒸馏水到干净离心管。标准管：吸0.5ml葡萄糖标准液(含100mg/dl葡萄糖)和1.5ml蒸馏水放入同样的离心管中。测定：将10ml蒽酮试剂用力加入各管，液流直接进入管子中央，保证充分混合好。从管子中注入蒽酮试剂时起，将管子放入冷水中，达到冷水温度后，将其浸于沸水浴15分钟，然后移到冷水浴，冷却到室温。将管内液体移入比色皿，在620nm波长下用试剂空白调零后测定样品管和标准管的吸光度。根据肝脏重量换算成肝糖原含量(以mg/g肝表示)。
(4)血乳酸测定：末次给予受试物30分钟后，小鼠根部负小鼠体重4％的铅皮，放入水温为30℃、水深35cm的游泳箱中游泳10分钟后取出，即刻采尾血20ul，加入盛有40ul溶血剂的试管中混匀，用生物传感分析仪测定血乳酸值。此外，采用同样的方法测定游泳前和游泳后休息30分钟时的血乳酸水平。
5、结果
(1)组合物对小鼠体重的影响。
各组小鼠初始体重见表2。
表2
各组小鼠中期体重见表3。
表3
各组小鼠末期体重表4。
表4
由表2-4可见，经口给予小鼠不同剂量的组合物30天，各剂量组小鼠的体重变化与对照组相比，均没有显著性差异(p＞0.05)。
(2)组合物对小鼠游泳时间的影响见表5。
表5
由表5可见，经口给予小鼠不同剂量的组合物30天，中、高剂量组小鼠游泳时间长于对照组，有显著性差异(p＜0.05)。
(3)组合物对小鼠血清尿素氮的影响见表6。
表6
由表6可见，经口给予小鼠不同剂量的组合物30天，中剂量组小鼠的运动血清尿素氮低于对照组，有显著性差异(p＜0.05)。
(4)组合物对小鼠肝糖原的影响见表7。
表7
由表7可见，经口给予小鼠不同剂量的组合物30天，中、高剂量组小鼠的肝糖原含量明显高于对照组，有显著性差异(p＜0.05)。
(5)组合物对小鼠血乳酸的影响。
组合物对小鼠运动后血乳酸(mmol/l)升高幅度的影响见表8。
表8
由表8可见，经口给予小鼠不同剂量的组合物30天，低、高剂量组小鼠运动后血乳酸升高的幅度与对照组相比有显著性差异(p＜0.05)。
组合物对小鼠运动后血乳酸(mmol/l)消除幅度的影响见表9。
表9
由表9可见，经口给予小鼠不同剂量的组合物30天，各剂量组小鼠运动后血乳酸消除的幅度与对照组相比均无显著性差异(p＞0.05)。
6、小结
经口给予小鼠不同剂量的组合物30天，能明显延长小鼠游泳时间、显著降低小鼠运动后血清尿素氮，显著降低小鼠运动后血乳酸升高的幅度，并显著提高小鼠肝糖原含量。由此可见，该组合物具有抗疲劳作用。
实验例24
本发明实施例提供了上述实施例19所得片剂的免疫调节药效学研究(动物试验)。
1、实验动物：清洁级雌性昆明种小鼠，体重18～22g。
2、实验样品：实施例19经粉碎后的细粉，人体推荐剂量为3.72g/日/60kg体重。
3、剂量选择：小鼠的等效剂量相当于人体推荐量的10倍，即每日摄入0.62g/kg体重为低剂量，再按低剂量的2倍和3倍各设一个剂量组，即1.24g/日/kg体重(中剂量)和1.86g/日/kg体重(高剂量)，对照组给蒸馏水，连续等体积灌胃受试物15天后，测定各项指标。
4、试验方法：
(1)脏器/体重比值测定。
(2)迟发型变态反应(dth)(足跖增厚法)：小鼠腹腔注射2％(v/v)绵羊红细胞(srbc)0.2ml致敏后4天，测量左后足跖厚度，然后再测量部位皮下注射20％(v/v)srbc(20ul/鼠)，注射后于24小时测量左足跖部厚度，同一部位测量三次，取平均值。以前后足跖厚度的差值(足跖肿胀度)来表示dth的程度。
(3)脾脏抗体生产细胞检测(jeren改良玻片法)：取羊血，用生理盐水洗涤三次，每只鼠经腹腔注射2％(v/v)srbc0.2ml。将srbc免疫5天后的小鼠处死，取脾，制成细胞悬液。将表层培养基加热溶解后，与等量双倍hanks液混合，分装小试管，每管0.5ml，再向管内加50ul10％srbc(v/v，用sa缓冲液配制)、10ul脾细胞悬液，迅速混匀后，倾倒于已刷琼脂糖薄层的玻片上，待琼脂凝固后，将玻片水平扣放在片架上，放入二氧化碳培养箱中温育1.5小时，然后用sa缓冲液稀释的补体(1∶10)放入到玻片架凹槽内，继续温育1.5小时后，计数溶血空斑数。
(4)小鼠碳粒廓清试验：小鼠尾静脉注射1:3稀释的印度墨汁，待墨汁注入，立即计时。注入墨汁后10分钟，分别从内眦静脉丛取血20ul，并将其加到2mlna2co3溶液作空白对照。将小鼠处死，取肝脏和脾脏称重。计算吞噬指数a。
5、结果
(1)组合物对小鼠体重的影响。
各组小鼠初始体重见表10。
表10
各组小鼠的结束体重见表11。
表11
表10、11结果表明，经口给予小鼠一定剂量的组合物15天后，其体重与对照组比较无差异。(动物数减少是因意外死亡)
(2)组合物对小鼠脏器/体重比值的影响见表12。
表12
由表12可见，经口给予小鼠不同剂量的组合物15天，脾脏和胸腺的脏器系数三个剂量组与对照组比较均无显著性差异。
(3)组合物对小鼠迟发型变态反应(dth)的影响见表13。
表13
由表13可见，经口给予小鼠不同剂量的组合物15天，高剂量组的足跖肿胀度与对照组比较有显著差异。
(4)组合物对小鼠脾脏抗体生产细胞数的影响见表14。
表14
由表14可见，经口给予小鼠不同剂量的组合物15天，其抗体生产细胞数中、高剂量组与对照组比较有显著性差异。
(5)组合物对小鼠单核-巨噬细胞碳粒廓清功能的影响见表15。
表15
由表15可见，经口给予小鼠不同剂量的组合物15天，其各剂量组的单核-吞噬细胞吞噬指数与对照组比较均无显著性差异。(动物数减少是因为意外死亡)
6、小结
经口给予小鼠不同剂量的组合物15天，能明显提高小鼠的足跖厚度及脾脏抗体生产细胞数。根据《保健食品功能学评价程序和检验方法》的规定，可判定组合物具有免疫调节作用。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。