一种蝽科昆虫腹部器官的解剖方法与流程

文档序号:16471648发布日期:2019-01-02 23:09阅读:1689来源:国知局

本发明涉及昆虫解剖领域,具体涉及一种蝽科昆虫腹部器官的解剖方法。



背景技术:

蝽科属半翅目,是异翅目中最常见的大科之一。蝽科大多数为植食性种类,是重要的农林害虫,他们的若虫及成虫刺吸植物的枝叶、花果等,使寄主植物缺少养分萎蔫枯死、或造成果实品质下降等,同时还传播病毒和病害,给农林经济造成极大地损失。其少部分是肉食性种类,如蠋蝽、疣蝽、厉蝽及益蝽亚科等,他们以鳞翅目、鞘翅目、的幼虫和同翅目的若虫与成虫为猎捕对象,捕食范围广,是重要的天敌昆虫。农林害虫需要防治、天敌昆虫需要保护和扩繁并应用于生物防治,都是昆虫学研究的重点。

随着对蝽科研究的深入,其腹部内器官功能、基因及微生物的相关研究逐渐成为研究的重点。像对其肠道、卵巢、精巢等器官的研究,亦是当下研究的热点,在这些研究中,无论是对其形态还是对其功能及基因功能的研究,器官的获取都是实验中至关重要的一步骤,为及时准确获得控制蝽科害虫方法、保护蝽科天敌的途径提供科学保障。目前,解剖大部分小型昆虫,获得肠道、中肠、卵巢、精巢,一般都是将其器官从昆虫尾部直接拉出,置于生理盐水或者相关的保护液中,而蝽科的特殊生理结构,使其在使用该方法取相关器官时,不能获得完整的器官,对于一些分子实验、使用该方法取样,常常会造成样品的源头污染降解,给后续的研究带来极大的不便、影响后续研究的准确性。



技术实现要素:

与现有技术相比,本发明提供了一种蝽科昆虫腹部器官的解剖方法,以解决现有技术问题中的至少一种技术问题。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下:一种蝽科昆虫腹部器官的解剖方法,所述解剖方法包括:

1)剪去蝽科昆虫虫体的足、触角、口器、盾片和翅;

2)将步骤1)中得到的虫体用酒精消毒,将消毒后的虫体用灭菌蒸馏水进行冲洗后擦干;

3)将步骤2)中得到的虫体腹部腹板和腹部背板连接处剪开,用灭菌解剖针在虫体胸部处扎下,将虫体固定在解剖盘上;

4)将步骤3)中得到的虫体的腹部背板去除;

5)向步骤4)中固定有虫体的解剖盘内加入组织定型液或组织拓展液中,所述组织定型液或组织拓展液需没过虫体;

6)将步骤5)中得到的虫体中需剥离的目标器官与其他器官的连接处用剪刀剪开,剖出目标器官,即得到目标器官组织。

在上述技术方案的基础上,本发明还可以做如下改进:

优选的,将步骤2)中得到的虫体置于培养皿中,向培养皿中倒入75%乙醇对虫体进行消毒1~2min;将经过消毒的虫体用灭菌蒸馏水反复冲洗30~60s后,用滤纸拭去虫体表面水分。

优选的,步骤3)中用直头解剖剪将虫体腹部腹板和腹部背板连接处剪开,取灭菌解剖针在虫体胸部处扎下,将虫体固定在解剖盘上。

优选的,步骤3)中的所述解剖盘为透光解剖盘。

优选的,将步骤4)中得到的虫体用解剖镊夹住虫体腹部背板,将腹部背板沿腹部背板和胸部背板的连接处缓缓拉开,去除腹部背板。

优选的,向步骤5)中固定有虫体的解剖盘内加入组织定型液,所述组织定型液选自多聚甲醛、酒精、甲醛、醋酸中的一种或多种,所述组织定型液需没过虫体。

优选的,向步骤5)中固定有虫体的解剖盘内加入组织拓展液,所述组织拓展液选自生理盐水、dna保存液、rna保护液或灭菌蒸馏水中的一种或多种,所述组织定型液需没过虫体。

优选的,所述解剖方法还包括步骤7),将步骤6)中得到的目标器官保存在组织保护液或组织定型液中,所述的组织保护液选取自液氮、dna保存液或rna保护液任一种,所述组织定型液选自多聚甲醛、酒精、甲醛、醋酸中的一种或多种。

优选的,所述目标器官为肠道组织、马氏管、气管、精巢及输精管或卵巢及卵巢管。

优选的,所述解剖方法在显微镜下和/或无菌工作台内进行操作。

综上所述,本发明的有益效果是:通过本发明的解剖方法,能最大程度的保证目标器官结构的完整性、新鲜程度,减少了操作过程中的细菌污染,提高了解剖效率,用作分子实验时,改方法可尽可能的节省取样时间,尽可能地减少降解和污染,同时也为之后关于目标器官研究提供了便利。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明的原理和特征进行描述,所举实例只用于解释本发明,并非用于限定本发明的范围。

本申请涉及一种蝽科昆虫腹部器官的解剖方法,所述解剖方法包括:1)剪去蝽科昆虫虫体的足、触角、口器、盾片和翅;2)将步骤1)中得到的虫体用酒精消毒,将消毒后的虫体用灭菌蒸馏水进行冲洗后擦干;3)将步骤2)中得到的虫体腹部腹板和腹部背板连接处剪开,用灭菌解剖针在虫体胸部处扎下,将虫体固定在解剖盘上;4)将步骤3)中得到的虫体的腹部背板去除;5)向步骤4)中固定有虫体的解剖盘内加入组织定型液或组织拓展液中,所述组织定型液或组织拓展液需没过虫体;6)将步骤5)中得到的虫体中需剥离的目标器官与其他器官的连接处用剪刀剪开,剖出目标器官,即得到目标器官组织。通过本发明的解剖方法,能最大程度的保证目标器官结构的完整性、新鲜程度,减少了操作过程中的细菌污染,提高了解剖效率,同时也为之后关于目标器官研究提供了便利。

在至少一种实施例中,将步骤2)中得到的虫体置于培养皿中,向培养皿中倒入75%乙醇对虫体进行消毒1~2min;将经过消毒的虫体用灭菌蒸馏水反复冲洗30~60s后,用滤纸拭去虫体表面水分。经过消毒处理的虫体减少了细菌对实验造成的干扰因素,这里用灭菌蒸馏水反复冲洗虫体,将残余的酒精从虫体上冲走,以减少酒精对实验的干扰和对虫体组织的损坏,降低虫体组织变硬造成的实验误差。

在一个或多个实施例中,步骤3)中用直头解剖剪将虫体腹部腹板和腹部背板连接处剪开,取灭菌解剖针在虫体胸部处扎下,将虫体固定在解剖盘上。选用直头解剖剪的操作更加方便,当然其他型号、形状的解剖剪也可以应用在解剖中。此处的解剖剪、解剖盘均经过灭菌处理。优选的,步骤3)中可一次性固定同一样品中的多头昆虫在解剖盘上,这样在进行下一步骤时,可以缩短取样时间,增加取样量,从而减少目标组织在外暴露时间,提高解剖效率,有助于保持组织新鲜度,同时减少样品污染。

在一些实施例中,步骤3)中的解剖盘为透光解剖盘。解剖盘的底部下方设有光源。这样的设置有利于目标器官在解剖过程中的辨别。透光解剖盘用在低龄若虫及部分形态较小器官的解剖,高龄期若虫、成虫及形态较大的器官(如肠道等)的解剖用普通解剖盘即可。

具体的,在一些实施例中,将步骤4)中得到的虫体用解剖镊夹住虫体腹部背板,将腹部背板沿腹部背板和胸部背板的连接处缓缓拉开,去除腹部背板。这里的解剖镊为钝头镊子。用钝头镊子牵拉主唾液腺上下叶连接处,方便操作者用适当的力操作,同时不容易损伤到组织。

在一个或多个实施例中,当解剖蝽科昆虫腹部器官是为了作形态观察用,则向步骤5)中固定有虫体的解剖盘内加入组织定型液,所述组织定型液选自多聚甲醛、酒精、甲醛、醋酸中的一种或多种,所述组织定型液需没过虫体。组织定型液可以延缓目标器官的降解,以提高在唾液腺的分子实验中的成功率。由于酒精会造成组织脱水变脆,易破碎,非需要脱水预处理的形态观察实验尽量不选择酒精作为组织定型液,而在电镜观察等需要用酒精对样品进行预处理的实验中,优选酒精作为组织定型液。

而当解剖蝽科昆虫腹部器官是为了作分子实验用,则向步骤5)中固定有虫体的解剖盘内加入组织拓展液,所述组织拓展液选自生理盐水、dna保存液、rna保护液或灭菌蒸馏水中的一种或多种,所述组织拓展液需没过虫体。组织拓展液可以延缓目标器官的降解,以提高在唾液腺的分子实验中的成功率。

在至少一种实施例中,所述解剖方法还包括步骤7),将步骤6)中得到的目标器官保存在组织保护液或组织定型液中。优选的,步骤7)中所述的组织保护液选取自液氮、dna保存液或rna保护液任一种,所述组织定型液选自多聚甲醛、酒精、甲醛、醋酸中的一种或多种。

需注意的是,若选择组织定型液、组织保护液为挥发性有毒物质,解剖过程则需要在通风橱内进行;若成虫虫体较小或者解剖对象为若虫,则需要在显微镜下进行解剖工作。

一般来说,在一些实施例中,所述目标器官为肠道组织、精巢及输精管或卵巢及卵巢管。需要说明的是,解剖方法中涉及的所有工具,如解剖针、昆虫针、解剖镊、解剖盘等结构,均为已经过消毒处理的工具。本发明的解剖方法适用于绝大部分蝽科昆虫。

在一些实施例中,通过本解剖方法得到的目标组织要进行形态观察实验或分子实验,具体的通过下列实验来说明:

本发明所采用的技术方案为:(一)剪去虫体的足、触角、口器、盾片及翅膀,消毒,用解剖针将虫体固定于解剖盘上,除去腹部背板,剖出所需组织,及试验前处理。形态观察用,具体步骤如下:

(1)剪去虫体的足、触角、口器、盾片、翅(此顺序没有先后之分),该步骤是防止虫体在解剖过程中乱动、影响样品的品质。

(2)将处理完的虫体置于培养皿中,倒入75%乙醇消毒2min,消毒完成后用灭菌蒸馏水反复冲洗30-60s,用滤纸拭去表面水分。

(3)用解剖剪将虫体腹部腹板和腹部背板连接处剪开,取灭菌解剖针在虫体胸部处扎下,将虫体固定在蜡盘上。这里也可以用解剖盘。

(4)用镊子夹住虫体腹部背板,将腹部背板沿腹部背板和胸部背板的连接处缓缓拉开,除去腹部背板。

(5)向蜡盘中加入定型液(多聚甲醛、酒精、甲醛、醋酸等,根据实验的需要选择)将组织固定,将目标组织固定。

(6)剥离目的器官上其他组织,将其与其他器官的连接处用剪刀剪开,剖出器官,即可得到完整的器官组织。

分子实验用,具体步骤如下:

(1)实验前,所有解剖工具用75%乙醇消毒5-10min,用灭菌滤纸拭去表面酒精,显微镜用75%乙醇擦拭(成虫虫体较小或者解剖对象为若虫时使用),解剖工具、显微镜和蜡盘紫光灯照射30min。

(2)剪去虫体的足、触角、口器、盾片、翅(此顺序没有先后之分),该步骤是防止虫体在解剖过程中乱动、影响样品的品质,同时也增加消毒的效果。

(3)将处理完的虫体置于培养皿中,倒入75%乙醇消毒2min,消毒完成后用灭菌蒸馏水反复冲洗30-60s,用滤纸拭去表面水分。

(4)用解剖剪将虫体腹部腹板和腹部背板连接处剪开,取灭菌解剖针在虫体胸部处扎下,将虫体固定在蜡盘上。

(5)根据不同实验的需求,向蜡盘中加入生理盐水、dna保存液、rna保护液或灭菌蒸馏水,加入的液体需没过虫体。

(6)用镊子夹住虫体腹部背板,将腹部背板沿腹部背板和胸部背板的连接处缓缓拉开,除去腹部背板。

(7)剥离目的器官上其他组织,将其与其他器官的连接处用剪刀剪开,剖出器官,即可得到完整的器官组织。

得到的器官组织可用于接下来得实验,若不及时使用,则将器官组织根据实验需求保存在液氮、dna保存液、rna保护液中,置于-80℃保存。

(二)当同一虫体,其头部、胸部及腹部器官同时都需要用于实验时,一种蝽科昆虫腹部器官的解剖方法,包括以下步骤:剪去虫体的足、触角、口器、盾片及翅膀,消毒,沿腹部背板线剪下保存其头部和胸部并及时处理,将腹部腹板和腹部背板连接处剪开,用解剖针将虫体固定于解剖盘上,剖出所需组织,及试验前处理。形态观察用,具体步骤如下:

(1)剪去虫体的足、触角、口器、盾片、翅(此顺序没有先后之分),该步骤是防止虫体在解剖过程中乱动、影响样品的品质。

(2)将处理完的虫体置于培养皿中,倒入75%乙醇消毒2min,消毒完成后用灭菌蒸馏水反复冲洗30-60s,用滤纸拭去表面水分。

(3)沿腹部背板线剪下保存其头部和胸部并及时处理。

(4)用解剖剪将余下虫体任意一侧腹部腹板和腹部背板连接处剪开,取灭菌解剖针插入处理过一侧虫体胸部腹板,将虫体固定在蜡盘上。

(5)用镊子夹住处理过一侧虫体腹部背板,反方向将腹部背板缓缓拉开,用灭菌解剖针固定腹部背板。

(6)向蜡盘中加入定型液(多聚甲醛、酒精、甲醛、醋酸等,根据实验的需要选择)将组织固定,将目标组织固定。

(7)剥离目的器官上其他组织,将其与其他器官的连接处用剪刀剪开,剖出器官,即可得到完整的器官组织。

分子实验用,具体步骤如下:

(1)实验前,所有解剖工具用75%乙醇消毒5-10min,用灭菌滤纸拭去表面酒精,显微镜用75%乙醇擦拭(成虫虫体较小或者解剖对象为若虫时使用),解剖工具、显微镜和蜡盘紫光灯照射30min。

(2)剪去虫体的足、触角、口器、盾片、翅(此顺序没有先后之分),该步骤是防止虫体在解剖过程中乱动、影响样品的品质,同时也增加消毒的效果。

(3)将处理完的虫体置于培养皿中,倒入75%乙醇消毒2min,消毒完成后用灭菌蒸馏水反复冲洗30-60s,用滤纸拭去表面水分。

(4)沿腹部背板线剪下保存其头部和胸部并及时处理。

(5)用解剖剪将余下虫体任意一侧腹部腹板和腹部背板连接处剪开,取灭菌解剖针插入处理过一侧虫体胸部腹板,将虫体固定在蜡盘上。

(6)根据不同实验的需求,向蜡盘中加入生理盐水、dna保存液、rna保护液或灭菌蒸馏水,加入的液体需没过虫体。

(7)用镊子夹住处理过一侧虫体腹部背板,反方向将腹部背板缓缓拉开,用灭菌解剖针固定腹部背板。

(8)剥离目器官上其他组织,将其与其他器官的连接处用剪刀剪开,剖出器官,即可得到完整的器官组织。

得到的器官组织可用于接下来得实验,若不及时使用,则将器官组织根据实验需求保存在液氮、dna保存液、rna保护液中,置于-80℃保存。

获得的器官若不及时使用,则置解剖时所用定型液中保存;若选择定型液为挥发性有毒物质,解剖过程则需要在通风橱内进行;若成虫虫体较小或者解剖对象为若虫,则需要在显微镜下进行解剖工作。

下面通过具体实施例,进一步说明本申请:

实施例1

取实验室饲养蠋蝽成虫,解剖取其肠道进行形态观察实验,不保留头部及胸部做实验,其解剖具体步骤如下:

剪去蠋蝽的足、触角、口器、盾片、翅,将其置于盛有75%乙醇的培养皿消毒5min后,用灭菌蒸馏水冲洗干净,用灭菌滤纸拭去虫体表面的水分;在通风橱中将虫体腹部腹板和腹部背板连接处剪开,取灭菌解剖针在虫体头部处扎下,将虫体固定在蜡盘或解剖盘上;用镊子夹住虫体腹部背板,将腹部背板沿腹部背板和胸部背板的连接处拉开,除去腹部背板;向蜡盘或解剖盘中加入多聚甲醛固定液,剥离肠道上其他组织,将其与其他器官的连接处用剪刀剪开,剖出肠道,即可得到完整的肠道组织。获得的肠道组织可立即用于实验,若不立即使用,将其保存在盛有多聚甲醛固定液的离心管中4℃保存。

实施例2

取实验室饲养蠋蝽若虫,解剖取其肠道进行形态观察实验,不保留头部及胸部做实验,其解剖具体步骤如下:

剪去蠋蝽的足、触角、口器、盾片、翅芽,将其置于盛有75%乙醇的培养皿消毒5min后,用灭菌蒸馏水冲洗干净,用灭菌滤纸拭去虫体表面的水分;在通风橱中将虫体腹部腹板和腹部背板连接处剪开,取灭菌解剖针在虫体头部处扎下,将虫体固定在蜡盘上,将解剖蜡盘置于显微镜下;用镊子夹住虫体腹部背板,将腹部背板沿腹部背板和胸部背板的连接处拉开,除去腹部背板;向蜡盘中加入多聚甲醛固定液,剥离肠道上其他组织,将其与其他器官的连接处用剪刀剪开,剖出肠道,即可得到完整的肠道组织。获得的肠道组织可立即用于实验,若不立即使用,将其保存在盛有多聚甲醛固定液的离心管中4℃保存。

实施例3

取实验室饲养蠋蝽成虫,解剖取其肠道提取肠道细菌总dna实验,不保留头部及胸部做实验,其解剖具体步骤如下:

实验前将解剖工具置于75%乙醇消毒10min、用灭菌滤纸拭去表面酒精,将解剖工具和蜡盘用紫光灯照射30min。剪去蠋蝽的足、触角、口器、盾片、翅,在工作台中将蠋蝽置于盛有75%乙醇的培养皿消毒5min后,用灭菌蒸馏水冲洗干净,用灭菌滤纸拭去虫体表面的水分;将虫体腹部腹板和腹部背板连接处剪开,取灭菌解剖针在虫体头部处扎下,将虫体固定在蜡盘上;向蜡盘中注入dna保存液,用镊子夹住虫体腹部背板,将腹部背板沿腹部背板和胸部背板的连接处拉开,除去腹部背板;剥离肠道上其他组织,将其与其他器官的连接处用剪刀剪开,剖出肠道,即可得到完整的肠道组织。

实验过程中,开一盏酒精灯、准备一杯75%乙醇备用,每解剖完一头虫子,将解剖工具置于75%乙醇中消毒后再在酒精灯上灼烧。获得的肠道组织可立即用于肠道细菌总dna的抽提,若不立即使用,将其每20-30头保存在一个盛有dna保存液的离心管中-80℃保存。

实施例4

取实验室饲养茶翅蝽若虫,解剖取其中肠提取肠道细菌总dna实验,不保留头部及胸部做实验,其解剖具体步骤如下:

实验前将解剖工具置于75%乙醇消毒10min、用灭菌滤纸拭去表面酒精,用75%乙醇将显微镜仔细擦拭,将解剖工具、显微镜和蜡盘用紫光灯照射30min。剪去茶翅蝽的足、触角、口器、盾片、翅芽,在工作台中将茶翅蝽置于盛有75%乙醇的培养皿消毒5min后,用灭菌蒸馏水冲洗干净,用灭菌滤纸拭去虫体表面的水分;将虫体腹部腹板和腹部背板连接处剪开,取灭菌解剖针在虫体头部处扎下,将虫体固定在蜡盘上;向蜡盘中注入dna保存液,用镊子夹住虫体腹部背板,将腹部背板沿腹部背板和胸部背板的连接处拉开,除去腹部背板;剥离肠道上其他组织,将其与其他器官的连接处用剪刀剪开,剖出肠道,即可得到完整的肠道组织。

实验过程中,开一盏酒精灯、准备一杯75%乙醇备用,每解剖完一头虫子,将解剖工具置于75%乙醇中消毒后再在酒精灯上灼烧。获得的肠道组织可立即用于肠道细菌总dna的抽提,若不立即使用,将其每20-30头保存在一个盛有dna保存液的离心管中-80℃保存。。

实施例5

取实验室饲养茶翅蝽成虫,解剖取其精巢进行形态观察实验,保留头部及胸部做其他实验(取唾液腺),其解剖具体步骤如下:

剪去茶翅蝽的足、触角、口器、盾片、翅,将其置于盛有75%乙醇的培养皿消毒5min后,用灭菌蒸馏水冲洗干净,用灭菌滤纸拭去虫体表面的水分;沿腹部背板线剪下保存其头部和胸部并及时处理;用解剖剪将余下虫体任意一侧腹部腹板和腹部背板连接处剪开,取灭菌解剖针插入处理过一侧虫体胸部腹板,将虫体固定在蜡盘上;用镊子夹住处理过一侧虫体腹部背板,反方向将腹部背板缓缓拉开,用灭菌解剖针固定腹部背板;将蜡盘置于通风橱中,向蜡盘中加入多聚甲醛,将精巢及输精管形态固定,剥离精巢及输精管上其他组织,将其与其他器官的连接处用剪刀剪开,剖出精巢及输精管,即可得到完整的精巢和输精管。获得的精巢及输精管可立即用于实验,若不立即使用,将其保存在盛有多聚甲醛固定液的离心管中4℃保存。

实施例6

取实验室饲养茶翅蝽成虫,解剖取其卵巢进行rna抽提,保留头部及胸部做其他实验(取唾液腺),其解剖具体步骤如下:

实验前将解剖工具置于75%乙醇消毒10min、用灭菌滤纸拭去表面酒精,用75%乙醇将显微镜仔细擦拭,将解剖工具、显微镜和蜡盘用紫光灯照射30min。剪去茶翅蝽的足、触角、口器、盾片、翅,在工作台中,将处理过的茶翅蝽置于盛有75%乙醇的培养皿消毒5min后,用灭菌蒸馏水冲洗干净,用灭菌滤纸拭去虫体表面的水分;沿腹部背板线剪下保存其头部和胸部并及时处理;用解剖剪将余下虫体任意一侧腹部腹板和腹部背板连接处剪开,取灭菌解剖针插入处理过一侧虫体胸部腹板,将虫体固定在蜡盘上;向蜡盘中注入rna保护液,rna保护液没过虫体;用镊子夹住处理过一侧虫体腹部背板,反方向将腹部背板缓缓拉开,用灭菌解剖针固定腹部背板;剥离卵巢及卵巢管上其他组织,将其与其他器官的连接处用剪刀剪开,剖出卵巢及卵巢管,即可得到完整的卵巢及卵巢管。

实验过程中,开一盏酒精灯、准备一杯75%乙醇备用,每解剖完一头虫子,将解剖工具置于75%乙醇中消毒后再在酒精灯上灼烧。获得的卵巢及卵巢管可立即用于rna的抽提,若不立即使用,将其以20-30头虫体卵巢及卵巢管的量保存在盛有rna保护液的离心管中在-80℃保存。

实施例7

取实验室饲养益蝽若虫,解剖取其中肠进行形态观察实验,保留头部及胸部做其他实验,其解剖具体步骤如下:

剪去益蝽的足、触角、口器、盾片、翅芽,将其置于盛有75%乙醇的培养皿消毒5min后,用灭菌蒸馏水冲洗干净,用灭菌滤纸拭去虫体表面的水分;沿腹部背板线剪下保存其头部和胸部并及时处理;用解剖剪将余下虫体任意一侧腹部腹板和腹部背板连接处剪开,取灭菌解剖针插入处理过一侧虫体胸部腹板,将虫体固定在蜡盘上;用镊子夹住处理过一侧虫体腹部背板,反方向将腹部背板缓缓拉开,用灭菌解剖针固定腹部背板;将显微镜置于通风橱中,蜡盘置于显微镜上,向蜡盘中加入多聚甲醛,将中肠形态固定,剥离中肠上其他组织,将其与其他器官的连接处用剪刀剪开,剖出中肠,即可得到完整的中肠。获得的中肠可立即用于实验,若不立即使用,将其保存在盛有多聚甲醛固定液的离心管中4℃保存。

实施例8

取采集的稻绿蝽成虫,解剖取其中肠提取肠道细菌总dna实验,不保留头部及胸部做实验,其解剖具体步骤如下:

实验前将解剖工具置于75%乙醇消毒10min、用灭菌滤纸拭去表面酒精,将解剖工具和蜡盘用紫光灯照射30min。剪去稻绿蝽的足、触角、口器、盾片、翅,在工作台中将蠋蝽置于盛有75%乙醇的培养皿消毒5min后,用灭菌蒸馏水冲洗干净,用灭菌滤纸拭去虫体表面的水分;将虫体腹部腹板和腹部背板连接处剪开,取灭菌解剖针在虫体头部处扎下,将虫体固定在蜡盘上;向蜡盘中注入dna保存液,用镊子夹住虫体腹部背板,将腹部背板沿腹部背板和胸部背板的连接处拉开,除去腹部背板;剥离中肠上其他组织,将其与其他器官的连接处用剪刀剪开,剖出中肠,即可得到完整的中肠组织。

实验过程中,开一盏酒精灯、准备一杯75%乙醇备用,每解剖完一头虫子,将解剖工具置于75%乙醇中消毒后再在酒精灯上灼烧。获得的肠道组织可立即用于肠道细菌总dna的抽提,若不立即使用,将其每20-30头保存在一个盛有dna保存液的离心管中-80℃保存。

以上所述仅为本发明的较佳实施例,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。

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