红龙镇痛片在治疗抗痛风性关节炎中的应用的制作方法

本发明涉及一种藏药红龙镇痛片在治疗抗痛风性关节炎中的应用，属于医药领域。

背景技术

痛风是人体内嘌呤的新陈代谢发生紊乱，尿酸代谢异常造成血尿酸浓度过高，尿酸以钠盐的形式沉积在关节、软骨和肾脏中，引起组织炎症因子大量分泌产生的代谢疾病。目前治疗痛风的方法主要有抗炎镇痛及减少尿酸饮食摄入、纠正尿酸代谢等。中医则认为，痛风属于痹症的范畴，可通过舒筋活络、活血化瘀等治疗手段进行治疗。

红龙镇痛片为常用藏药，醒脑开窍，通络止痛。用于瘀阻脑络所引起的偏头痛，血管神经性头痛。现有文献及专利中，未发现红龙镇痛片与血中尿酸及痛风性关节炎有紧密联系的报道。

技术实现要素：

本发明的目的是提供红龙镇痛片在治疗抗痛风性关节炎中的应用。

术语说明：

红龙镇痛片是《中华人民共和国卫生部药品标准》中记载的药品名称，标准号为ws-10659-(zd-0659)-2002.，市场可购。

本发明是通过如下技术方案实现的：

红龙镇痛片在治疗抗痛风性关节炎中的应用。

所述的红龙镇痛片在治疗抗痛风性关节炎中的应用，抗痛风性关节炎为痛风性高尿酸血症。

所述的红龙镇痛片在治疗抗痛风性关节炎中的应用，抗痛风性关节炎为痛风伴有疼痛肿胀。

所述的红龙镇痛片在治疗抗痛风性关节炎中的应用，抗痛风性关节炎为抗痛风性功能障碍。

所述的应用，红龙镇痛片在制备具有抗痛风性关节炎药物中的应用，剂量为每日2次，每次0.9g。

有益效果：

本发明克服了红龙镇痛片应用方面的技术偏见。本发明通过实验研究发现，红龙镇痛片能够显著降低高尿酸血症动物的血清尿酸水平，显著抑制痛风性关节炎大鼠血、关节腔组织pge2及关节液中白细胞的渗出，显著降低醋酸所致小鼠扭体反应次数，明显改善模型大鼠后足踝关节的组织充血水肿、弥漫性中性粒细胞、单核细胞浸润，关节滑膜增厚、炎症细胞浸润、关节软骨增生等病理变化，降低炎症指数，改善功能障碍评分。

附图说明

图1为对照组大鼠关节病理变化。

图2为模型组大鼠关节病理变化。

图3为吲哚美辛组大鼠关节病理变化。

图4为低剂量红龙镇痛片组大鼠关节病理变化。

图5为中剂量红龙镇痛片组大鼠关节病理变化。

图6为高剂量红龙镇痛片组大鼠关节病理变化。

其中，图1-图6中，a为关节囊壁组织(×400)，b为关节软骨及滑膜(×400)。

具体实施方式

为了更好地理解本发明的实质，下面将通过药理研究来进一步说明红龙镇痛片具有抗痛风性关节炎作用。

实验例1、红龙镇痛片对次黄嘌呤致高尿酸血症小鼠血清尿酸影响及抗炎镇痛作用

1材料和方法

1.1仪器fa1004上皿天平、722型分光光度计(上海精科);ld4-2低速离心机(北京医用离心机厂);水浴箱(北京市医疗配件厂);岛津紫外uv-2550(日本);gj-8402热板测痛仪(宁海白石电子医药仪器厂)。

1.2药品与试剂：红龙镇痛片，金诃藏药股份公司，批号20170815；别嘌醇片，重庆科瑞制药有限责任公司；罗通定，广州康和药业有限公司，批号041601；msu（微晶尿酸钠），用前以无菌生理盐水配制，美国sigma公司；尿酸试剂盒，南京建成生物研究所，批号20160820；次黄嘌呤，sigma公司；尿酸，sigma公司；氢氧化钠，广东光华化学厂有限公司，批号20170110；氢氧化钾，天津市化学试剂三厂；甲醇，广东光华化学厂有限公司，批号20170811。

1.3动物昆明种小鼠，雌雄皆用，体重20±2g；wistar大鼠，雄性，体重200±20g，均为spf级，均由广西医科大学实验动物中心提供，动物合格证号为scxk桂2016-0003。饲养于20℃～25℃、相对湿度60%±10%环境中，每笼10只，颗粒饲料，自由饮水。

1.4红龙镇痛片对次黄嘌呤致高尿酸血症小鼠血清尿酸的影响：选取体重18～22g昆明种小鼠60只，雌雄各半，随机分为六组，每组10只，即对照组、模型组、阳性药别嘌醇(50mg/kg)组、红龙镇痛片高（0.45mg/g·bw）、中（0.24mg/g·bw）和低剂量（0.03mg/g·bw）(分别相当于15倍、8倍、1倍人体剂量)组。临用前用水提取2次，滤过并浓缩成每1ml含3g红龙镇痛片的溶液，适当稀释后分别灌胃给药，1次/天，对照组和模型组灌胃给予等容量蒸馏水连续10天。末次给药1h后腹腔注射次黄嘌呤10mg/kg，1h后眼球取血，3000r/min离心10min，取上清液测血清尿酸含量。

1.5红龙镇痛片对尿酸钠致大鼠足跖肿胀的影响：选取体重180～220gwistar雄性大鼠60只，随机分为六组，每组10只，即对照组、模型组、阳性药别嘌醇(20mg/kg)组、红龙镇痛片高（0.3mg/g·bw）、中（0.15mg/g·bw）和低剂量（0.03mg/g·bw）(分别相当于10倍、5倍、1倍人体剂量)组。临用前用水提取2次，滤过并浓缩成每1ml含3g红龙镇痛片的溶液，适当稀释后分别灌胃给药，1次/天，对照组和模型组灌胃给予等容量蒸馏水，连续12天。末次给药1h后，于大鼠右后足跖皮下注射0.15mlmsu(100g/l)致炎，分别于致炎前后测定右后足跖周径。观察和测定注射后第1h、3h、5h及7h大鼠右后足跖肿胀情况及其周径，计算其肿胀度。足跖肿胀度=(t时间周径－t0时间周径)/t0时间周径×100%。

1.6红龙镇痛片对痛风性关节炎模型大鼠前列素e2和白细胞的影响：取大鼠60只，分组、给药同1.5，末次给药后，除对照组外，其余各组大鼠用6号灭菌注射针在大鼠右侧踝关节背侧将尿酸钠溶液0.2ml注入关节腔，对照组给予等体积生理盐水，均造模5h后，断头处死，取血浆，测定血浆前列素e2(pge2);打开关节腔取关节积液，涂片，进行白细胞计数;取少量关节腔周围组织，匀浆后测定组织中pge2。

1.7红龙镇痛片对醋酸致小鼠疼痛的影响：选取体重18～22g昆明种小鼠50只，雌雄各半，随机分为五组，每组10只，即对照组、阳性药罗通定(60mg/kg)组、红龙镇痛片高、中和低剂量组给药方法同“1.4红龙镇痛片对次黄嘌呤致高尿酸血症小鼠血清尿酸的影响”，对照组给等容量蒸馏水。末次给药1h后每只小鼠腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2ml。观察并记录注射醋酸后15min内扭体(腹部内凹，躯干与后肢伸张，臀部高起)次数。

1.8统计学方法计量资料以x±s表示，采用方差分析，p＜0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1红龙镇痛片对次黄嘌呤致高尿酸血症小鼠血清尿酸的影响

与对照组比较，模型组小鼠血清尿酸含量明显升高(p＜0.05)，说明造模成功。与模型组比较，红龙镇痛片高剂量组能显著降低小鼠血清尿酸含量(p＜0.05)。提示，红龙镇痛片对次黄嘌呤致高尿酸血症小鼠血清尿酸有降低作用(表1)。

表1对次黄嘌呤致高尿酸血症小鼠血清尿酸的影响

注：与模型组比较，*p＜0.05，**p＜0.01

2.2红龙镇痛片对尿酸钠致大鼠足跖肿胀度的影响

与对照组比较，模型组大鼠足跖肿胀度明显升高(p＜0.01)，说明造模成功。与模型组比较，给药后3h，红龙镇痛片中剂量组和低剂量组能显著抑制大鼠足跖肿胀(p＜0.05);给药后5h，红龙镇痛片高、中、低剂量组均能显著抑制大鼠足跖肿胀p＜0.05或p＜0.01);给药后7h，红龙镇痛片高剂量组能显著抑制大鼠足跖肿胀(p＜0.05)。提示红龙镇痛片对msu所致大鼠足跖肿胀度有明显的抑制作用，且给药5h后效果最佳(表2)。

表2对尿酸钠致大鼠足跖肿胀度的影响(x±s，n=10)

注：与模型组比较，*p＜0.05，**p＜0.01

2.3红龙镇痛片对痛风性关节炎模型大鼠pge2及白细胞的影响

与对照组比较，模型组大鼠血、关节腔组织pge2及关节液中白细胞显著升高(p＜0.01)，说明造模成功。与模型组比较，红龙镇痛片高剂量组能显著抑制痛风性关节炎大鼠血中、关节腔组织pge2及关节液中白细胞的渗出(p＜0.05)，红龙镇痛片中剂量组能显著抑制痛风性关节炎大鼠血中pge2(p＜0.05)。提示红龙镇痛片可影响msu所致关节炎大鼠血及关节腔组织pge2含量及关节液中白细胞的渗出(表3)。

表3对痛风性关节炎模型大鼠pge2及白细胞的影响

注：与模型组比较，*p＜0.05，**p＜0.01

2.4红龙镇痛片对醋酸致小鼠疼痛的影响与对照组比较，红龙镇痛片高、低剂量组均可显著降低醋酸引起的扭体反应次数(p＜0.05)。提示红龙镇痛片具有镇痛作用(表4)

注：与对照组比较，*p＜0.05，**p＜0.01

3、实验结论

研究结果表明，红龙镇痛片实验所用剂量能够显著降低高尿酸血症血清尿酸水平和显著抑制关节肿胀，能显著抑制痛风性关节炎大鼠血、关节腔组织pge2及关节液中白细胞的渗出，能显著降低醋酸所致小鼠扭体反应次数，具有镇痛作用，提示红龙镇痛片对治疗痛风具有一定的疗效。

实验例2、红龙镇痛片对痛风大鼠关节的影响研究

1试验材料

1.1试验动物sd大鼠，雄性，体重190～240g。山东中医药大学试验动物中心提供，合格证号：scxk(鲁)20160015。

试验药品与试剂

受试药：红龙镇痛片，规格0.3g/片，批号：20160218，由金诃藏药股份有限公司提供。

阳性对照药：吲哚美辛，规格25mg/片，批号：a150205，市售。

试剂：尿酸，购于sigma公司；吐温80，山东省化学研究所，批号：160612；生理盐水，山东齐都药业有限公司；水合氯醛，国药集团化学试剂有限公司，分析纯，批号：t20160219；cmc-na，上海万邦化工，批号：20160118。

试验器材

电子天平（ohaus，ar124cn）；电子计量秤，上海寺冈电子有限公司制造，ds-671型。

试验内容

2.1动物分组、给药

sd大鼠按体重，随机分为6组：对照组、模型组、吲哚美辛（5mg/kg，运用体表面积法按照人的临床用药剂量折算大鼠用药剂量，以下同，此剂量为临床人用药剂量的1倍）组、红龙镇痛片（0.03，0.15，0.3g/kg，此剂量分别为临床人用药剂量的1、5、10倍）组，每组10只。每只大鼠灌胃给药，给药体积为1ml/100g，对照组给予同体积的1%cmc-na溶液。

指标测定

取1000mg尿酸，研磨后加入2ml吐温80，加生理盐水至20ml，加热溶解。腹腔注射水合氯醛（350mg/kg）麻醉大鼠，选右踝关节外侧后方为穿刺点，针口斜面朝前上方与胫骨成45°夹角刺入踝关节腔，以4.5号针头向关节腔一次性注入50μl尿酸溶液，以关节囊对侧膨起为注入标准，对照组大鼠关节腔注射同体积生理盐水。制备痛风性关节炎后各组大鼠给予相应药物，1次/d，连续给药5d，分别在第1、3、5d观察大鼠关节变化，第5d水合氯醛（350mg/kg）腹腔注射麻醉大鼠，取右踝关节进行病理检查。按下列规则对关节炎症指数、关节功能障碍评分。

(1)炎症指数分级标准：0级，正常；1级，关节皮肤红斑，轻度肿胀，骨性标志可见；2级，关节明显红肿，骨性标志消失，但肿胀局限于关节部位；3级，关节以外肢体肿胀。

(2)关节功能障碍评分标准：0级，正常步态，双足均匀着地，计0分；1级，足着地减轻，足趾未展开，轻度跛行，计2分；2级，足屈起，趾背着地，明显跛行，计4分；3级，足完全离地，三足步态，计6分。

数据处理

试验结果以表示，多组比较采用方差分析及lsd多组均数两两比较。p＜0.05为有统计学差异。

试验结果

2.4.1红龙镇痛片对痛风大鼠关节病理变化的影响

病理组织学检查表明：对照组后足踝关节囊壁组织未见异常，关节滑膜无增生、无炎症细胞浸润，关节软骨无增生。模型组大鼠后足踝关节囊壁组织充血水肿，弥漫性中性粒细胞、单核细胞浸润，关节滑膜增厚、炎症细胞浸润，关节软骨增生。红龙镇痛片各剂量组大鼠后足踝关节病理变化减轻（图1，表5，表6）。

红龙镇痛片对痛风大鼠炎症指数的影响

与对照组比较，模型组大鼠炎症指数显著增高（p＜0.01）；与模型组相比，红龙镇痛片组大鼠炎症指数明显降低(p＜0.05或p＜0.01，表5)。

注：与对照组比较：##p＜0.01；与模型组比较：*p＜0.05；**p＜0.01。

红龙镇痛片对痛风大鼠功能障碍评分的影响

与对照组比较，模型组大鼠功能障碍评分显著增高（p＜0.01）；与模型组相比，红龙镇痛片组大鼠功能障碍评分明显降低(p＜0.05或p＜0.01，表6)。

注：与对照组比较：##p＜0.01；与模型组比较：*p＜0.05；**p＜0.01。

试验结论

红龙镇痛片各剂量组大鼠后足踝关节的组织充血水肿、弥漫性中性粒细胞、单核细胞浸润，关节滑膜增厚、炎症细胞浸润、关节软骨增生等病理变化明显减轻，炎症指数明显降低，大鼠功能障碍评分明显降低，提示红龙镇痛片具有一定抗痛风作用。

以下实施例均能实现上述实验例的效果。

实施例所使用的复红龙镇痛片为金诃藏药股份有限公司生产的产品。

实施例1、红龙镇痛片在治疗痛风性高尿酸血症中的应用，剂量为每日2次，每次0.9g。

实施例2、红龙镇痛片在治疗痛风伴有疼痛肿胀中的应用，剂量为每日2次，每次0.9g。

实施例3、红龙镇痛片在治疗抗痛风性功能障碍中的应用，剂量为每日2次，每次0.9g。