本发明涉及医药，特别是一种竹叶椒根茎总木脂素提取物的制备方法及其应用，所述的应用是在制备治疗炎症药物中的应用。
背景技术：
竹叶椒(zanthoxylumarmatum)是花椒属的一种常见的药用植物，其根、茎、叶、果及种子均用作草药，具有祛风散寒，行气止痛功效，治风湿性关节炎、牙痛、跌打肿痛等。竹叶椒在我国大部分地方有分布，且我国部分地区有栽种，资源较为丰富。临床上使用的中药竹叶椒片主要用于治疗胃脘痛、急性阑尾炎、盆腔炎、腹痛等疾病。
炎症是具有血管系统的生物机体对损伤因子所发生的复杂的防御反应。许多常见疾病(如自身免疫性疾病、动脉粥样硬化、创伤修复等)都属于炎症范畴。抗炎类药物是能消除炎症的药物统称，抗炎药能够阻断炎症介质的产生或释放，抑制炎性反应，是临床上常见的一大类药物。
长期的临床及实验都证实很多中药具有良好的抗炎作用，且其毒副作用小、资源丰富。近年来，从传统中药中开发新型抗炎药物成为当今世界上新药研发的热点，也是中医药现代研究极为活跃的领域。
以前的报道认为竹叶椒的醇提取物和醇提物的乙酸乙酯萃取部位都具有显著的抗炎活性(郭涛，antinociceptiveandanti-inflammatoryactivitiesofethylacetatefractionfromzanthoxylumarmatuminmice,2011，fitoterapia)；进一步研究发现，该部位含有大量的木脂素类成分，且这些木脂素单体成分很多在体内动物实验和体外细胞试验中被证实具有很强的抗炎作用(郭涛，2011，复旦大学博士学位论文)。因此研究制备具有抗炎作用的竹叶椒总木脂素，对于抗炎新药开发有重要意义。但如何从竹叶椒根茎中制备竹叶椒木脂素，并用于制备治疗炎症的药物至今未见有公开报导。
技术实现要素：
针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种竹叶椒根茎总木脂素提取物的制备方法及其应用，可有效解决从竹叶椒根茎中制备木脂素，并作为唯一有效成分制备治疗抗炎药物的问题。
本发明解决的技术方案是，一种竹叶椒根茎总木脂素提取物的制备方法，所述的总木脂素为竹叶椒根茎中的提取物，包括有以下成分：细辛脂素、辛夷脂素、芝麻素，分子式分别为：
其中细辛脂素质量含量不低于2.20％，辛夷脂素质量含量不低于0.56％、，芝麻素质量含量不低于0.17％；
其制备方法包括以下步骤：
(1)、将竹叶椒根茎粉碎成过20～100目筛的竹叶椒药粉a；
(2)、在竹叶椒药粉a中加入体积浓度为80％～95％的乙醇进行回流提取或渗漉提取或室温冷浸提取，将提取液减压浓缩后得到醇提物b；
所述的竹叶椒药粉a和乙醇的固液比为1︰7～18(kg/l)；
所述回流提取的温度为65～80℃、提取次数为2～4次、每次40min；
所述渗漉提取的温度为18～30℃、提取次数为2～4次、每次4～12d；
所述室温冷浸提取次数为2～4次、每次4～12d；
(3)、醇提物b用水混悬成分散液，用分散液等体积的氯仿或二氯甲烷或乙酸乙酯进行萃取，得到萃取部位，减压浓缩得到药物浸膏c，该药物浸膏c经大孔吸附树脂吸附后，依次用蒸馏水、体积浓度为20～30％的乙醇、体积浓度为60～70％的乙醇、体积浓度为85～95％的乙醇进行梯度洗脱，收集85～95％乙醇洗脱液；85～95％乙醇洗脱液经减压浓缩得到药物浸膏d，浸膏d经硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，石油醚与乙酸乙酯的体积比为6-22︰1，收集6-15︰1～6的石油醚-乙酸乙酯洗脱液，得洗脱液e，该洗脱液e经减压浓缩回收溶剂、干燥，得竹叶椒总木脂素提取物；
或所述醇提物b经大孔吸附树脂吸附，再依次用蒸馏水、体积浓度为20～30％的乙醇、体积浓度为60～70％的乙醇、体积浓度为85～95％的乙醇洗脱，收集85～95％乙醇洗脱液，将85～95％乙醇洗脱液经减压浓缩，除去有机溶剂，得到浓缩液，浓缩液用其等体积的氯仿或二氯甲烷或乙酸乙酯进行萃取，得到萃取液；所述萃取液经减压浓缩得到药物浸膏，浸膏经硅胶柱层析后，采用石油醚-丙酮混合液作洗脱液进行洗脱，收集22︰1-8︰1的洗脱液，该洗脱液经减压浓缩回收溶剂、干燥后即得竹叶椒总木脂素提取物；
所述的大孔吸附树脂为ab-8或d101；
所述硅胶柱层析中的硅胶为过100～300目筛的硅胶粉粒。
上述方法制备的竹叶椒总木脂素提取物具有抗炎之功效，作为唯一活性成分在制备治疗炎症药物中的应用。
本发明原料丰富，易生产制备，可有效解决从竹叶椒根茎中提取竹叶椒总木脂素，该竹叶椒总木脂素具有抗炎作用，作为唯一活性成分可有效用于制备治疗炎症药物，开拓了竹叶椒药用新价值，提高了竹叶椒的商业价值和使用价值，具有显著的经济和社会效益。
具体实施方式
以下结合实施例和具体情况对本发明的具体实施方式作详细说明。
本发明在具体实施中，可由以下实施例给出。
实施例1
本发明一种竹叶椒根茎总木脂素提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)、将竹叶椒根茎粉碎成过80目筛的竹叶椒药粉a；
(2)、在竹叶椒药粉a中加入体积浓度为95％的乙醇，65℃回流提取3次，每次40min，合并提取液，减压浓缩后得到醇提物b；
所述的竹叶椒药粉a和乙醇的固液比为1︰15(kg/l)；
(3)、醇提物b用水混悬成分散液，用分散液等体积的乙酸乙酯进行萃取，得到萃取部位，减压浓缩得到药物浸膏c，该药物浸膏c经ab-8大孔吸附树脂吸附后，依次用蒸馏水、体积浓度为30％的乙醇、体积浓度为70％的乙醇、体积浓度为95％的乙醇进行梯度洗脱，收集95％乙醇洗脱液；95％乙醇洗脱液经减压浓缩得到药物浸膏d，浸膏d经过100目筛的硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，石油醚与乙酸乙酯的体积比为6-15︰1，收集洗脱液，得洗脱液e，该洗脱液e经减压浓缩回收溶剂、干燥，得竹叶椒总木脂素提取物。
实施例2
本发明一种竹叶椒根茎总木脂素提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)、将竹叶椒根茎粉碎成过100目筛的竹叶椒药粉a；
(2)、按固液比1︰9(kg/l)在竹叶椒药粉a中加入体积浓度为80％的乙醇，70℃回流提取4次，每次40min，将提取液减压浓缩后得到醇提物b；
(3)、醇提物b用水混悬成分散液，用分散液等体积的氯仿进行萃取，得到萃取部位，减压浓缩得到药物浸膏c，该药物浸膏c经ab-8大孔吸附树脂吸附后，依次用蒸馏水、体积浓度为30％的乙醇、体积浓度为70％的乙醇、体积浓度为90％的乙醇进行梯度洗脱，收集90％乙醇洗脱液；90％乙醇洗脱液经减压浓缩得到药物浸膏d，浸膏d经过150目筛的硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，石油醚与乙酸乙酯的体积比为6-15︰1，收集洗脱液，得洗脱液e，该洗脱液e经减压浓缩回收溶剂、干燥，得竹叶椒总木脂素提取物。
实施例3
本发明一种竹叶椒根茎总木脂素提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)、将竹叶椒根茎粉碎成过80目筛的竹叶椒药粉a；
(2)、按固比1︰9(kg/l)，在竹叶椒药粉a中加入体积浓度为90％的乙醇，80℃回流提取2次，每次40min，将提取液减压浓缩后得到醇提物b；
(3)、醇提物b经d101大孔吸附树脂吸附，再依次用蒸馏水、体积浓度为30％的乙醇、体积浓度为65％的乙醇、体积浓度为95％的乙醇洗脱，收集95％乙醇洗脱液，将95％乙醇洗脱液经减压浓缩，除去溶剂，得到浓缩液，浓缩液用其等体积的氯仿进行萃取，得到萃取液；所述萃取液经减压浓缩得到药物浸膏，浸膏经过300目筛的硅胶柱层析后，采用石油醚-丙酮混合液作洗脱液进行洗脱，收集22︰1-8︰1的洗脱液，该洗脱液经减压浓缩回收溶剂、干燥后即得竹叶椒总木脂素提取物。
实施例4
本发明一种竹叶椒根茎总木脂素提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)、将竹叶椒根茎粉碎成过40目筛的竹叶椒药粉a；
(2)、按固液比1︰9(kg/l)，在竹叶椒药粉a中加入体积浓度为95％的乙醇，65℃回流提取3次，每次40min，将提取液减压浓缩后得到醇提物b；
(3)、醇提物b经ab-8大孔吸附树脂吸附，再依次用蒸馏水、体积浓度为30％的乙醇、体积浓度为70％的乙醇、体积浓度为95％的乙醇洗脱，收集95％乙醇洗脱液，将95％乙醇洗脱液经减压浓缩，除去有机溶剂，得到浓缩液，浓缩液用其等体积的氯仿进行萃取，得到萃取液；所述萃取液经减压浓缩得到药物浸膏，浸膏经过300目筛的硅胶柱层析后，采用石油醚-丙酮混合液作洗脱液进行洗脱，收集22︰1-8︰1的洗脱液，该洗脱液经减压浓缩回收溶剂、干燥后即得竹叶椒总木脂素提取物。
实施例5
本发明一种竹叶椒根茎总木脂素提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)、将竹叶椒根茎粉碎成过100目筛的竹叶椒药粉a；
(2)、按固液比1︰16(kg/l)，在竹叶椒药粉a中加入体积浓度为95％的乙醇，室温冷浸提取3次，第一次4d、第二次7d、第三次10d，提取液合并减压浓缩后得到醇提物b；
(3)、醇提物b经d101大孔吸附树脂吸附，再依次用蒸馏水、体积浓度为20％的乙醇、体积浓度为70％的乙醇、体积浓度为95％的乙醇洗脱，收集95％乙醇洗脱液，将95％乙醇洗脱液经减压浓缩，除去有机溶剂，得到浓缩液，浓缩液用其等体积的二氯甲烷进行萃取，得到萃取液；所述萃取液经减压浓缩得到药物浸膏，浸膏经过200目筛的硅胶柱层析后，采用石油醚-丙酮混合液作洗脱液进行洗脱，收集22︰1-8︰1的洗脱液，该洗脱液经减压浓缩回收溶剂、干燥后即得竹叶椒总木脂素提取物。
实施例6
本发明一种竹叶椒根茎总木脂素提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)、将竹叶椒根茎粉碎成过80目筛的竹叶椒药粉a；
(2)、以固液比为1︰14(kg/l)，在竹叶椒药粉a中加入体积浓度为95％的乙醇，室温冷浸提取3次，第一次3d、第二次6d、第三次8d，合并提取液，减压浓缩后得到醇提物b；
(3)、醇提物b用水混悬成分散液，用分散液等体积的氯仿进行萃取，得到萃取部位，减压浓缩得到药物浸膏c，该药物浸膏c经ab-8大孔吸附树脂吸附后，依次用蒸馏水、体积浓度为30％的乙醇、体积浓度为70％的乙醇、体积浓度为95％的乙醇进行梯度洗脱，收集95％乙醇洗脱液；95％乙醇洗脱液经减压浓缩得到药物浸膏d，浸膏d经过150目筛的硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，石油醚与乙酸乙酯的体积比为6-15︰1，收集6-15︰1的石油醚-乙酸乙酯洗脱液，得洗脱液e，该洗脱液e经减压浓缩回收溶剂、干燥，得竹叶椒总木脂素提取物。
实施例7
本发明一种竹叶椒根茎总木脂素提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)、将竹叶椒根茎粉碎成过80目筛的竹叶椒药粉a；
(2)、按固液比1︰16(kg/l)，在竹叶椒药粉a中加入体积浓度为95％的乙醇，室温冷浸提取2次，第一次6d、第二次10d，合并提取液，减压浓缩后得到醇提物b；
(3)、醇提物b用水混悬成分散液，用分散液等体积的氯仿进行萃取，得到萃取部位，减压浓缩得到药物浸膏c，该药物浸膏c经ab-8大孔吸附树脂吸附后，依次用蒸馏水、体积浓度为30％的乙醇、体积浓度为70％的乙醇、体积浓度为95％的乙醇进行梯度洗脱，收集95％乙醇洗脱液；95％乙醇洗脱液经减压浓缩得到药物浸膏d，浸膏d经过150目筛的硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，石油醚与乙酸乙酯的体积比为6-15︰1，收集6-15︰1的石油醚-乙酸乙酯洗脱液，得洗脱液e，该洗脱液e经减压浓缩回收溶剂、干燥，得竹叶椒总木脂素提取物。
实施例8
本发明一种竹叶椒根茎总木脂素提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)、将竹叶椒根茎粉碎成过40目筛的竹叶椒药粉a；
(2)、按固液比1︰12(kg/l)，在竹叶椒药粉a中加入体积浓度为95％的乙醇，渗漉提取3次，第一次4d、第二次6d、第三次6d，合并提取液，减压浓缩后得到醇提物b；
(3)、醇提物b用水混悬成分散液，用分散液等体积的二氯甲烷进行萃取，得到萃取部位，减压浓缩得到药物浸膏c，该药物浸膏c经ab-8大孔吸附树脂吸附后，依次用蒸馏水、体积浓度为30％的乙醇、体积浓度为70％的乙醇、体积浓度为95％的乙醇进行梯度洗脱，收集95％乙醇洗脱液；95％乙醇洗脱液经减压浓缩得到药物浸膏d，浸膏d经过150目筛的硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，石油醚与乙酸乙酯的体积比为6-15︰1，收集6-15︰1的石油醚-乙酸乙酯洗脱液，得洗脱液e，该洗脱液e经减压浓缩回收溶剂、干燥，得竹叶椒总木脂素提取物。
实施例9
本发明一种竹叶椒根茎总木脂素提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)、将竹叶椒根茎粉碎成过80目筛的竹叶椒药粉a；
(2)、按固液比1︰16(kg/l)，在竹叶椒药粉a中加入体积浓度为90％的乙醇，室温渗漉提取2次，第一次4d、第二次10d，合并提取液，减压浓缩后得到醇提物b；
(3)、醇提物b经d101大孔吸附树脂吸附，再依次用蒸馏水、体积浓度为30％的乙醇、体积浓度为70％的乙醇、体积浓度为90％的乙醇洗脱，收集90％乙醇洗脱液，将90％乙醇洗脱液经减压浓缩，除去有机溶剂，得到浓缩液，浓缩液用其等体积的乙酸乙酯进行萃取，得到萃取液；所述萃取液经减压浓缩得到药物浸膏，浸膏经过200目筛的硅胶柱层析后，采用石油醚-丙酮混合液作洗脱液进行洗脱，收集22︰1-8︰1的洗脱液，该洗脱液经减压浓缩回收溶剂、干燥后即得竹叶椒总木脂素提取物。
实施例10
本发明一种竹叶椒根茎总木脂素提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)、将竹叶椒根茎粉碎成过80目筛的竹叶椒药粉a；
(2)、按固液比1︰16(kg/l)，在竹叶椒药粉a中加入体积浓度为90％的乙醇，室温渗漉提取4次，第一次4d、第二次7d、第三次9d、第四次12d，合并提取液，减压浓缩后得到醇提物b；
(3)、醇提物b经ab-8大孔吸附树脂吸附，再依次用蒸馏水、体积浓度为25％的乙醇、体积浓度为70％的乙醇、体积浓度为95％的乙醇洗脱，收集95％乙醇洗脱液，将95％乙醇洗脱液经减压浓缩，除去有机溶剂，得到浓缩液，浓缩液用其等体积的二氯甲烷进行萃取，得到萃取液；所述萃取液经减压浓缩得到药物浸膏，浸膏经过200目筛的硅胶柱层析后，采用石油醚-丙酮混合液作洗脱液进行洗脱，收集22︰1-8︰1的洗脱液，该洗脱液经减压浓缩回收溶剂、干燥后即得竹叶椒总木脂素提取物。
本发明制备的竹叶椒提取物具有抗炎作用，并经液相波谱法测定为竹叶椒总木脂素，其中含有质量含量分别不低于2.20％、0.56％、0.17％的细辛脂素、辛夷脂素、芝麻素，竹叶椒总木脂素作为唯一活性成分具有很好的抗炎作用，并经实验取得了非常好的有益技术效果，有关资料如下：
一、动物实验
⑴实验动物：
昆明种小鼠(18～22g)，雌雄兼用。动物分笼饲养，自由摄食取水，室温22±2℃。实验前动物至少适应实验室环境3天。
⑵实验方法：
将60只小鼠，随机分为5组，第1组阳性对照组，口服灌胃给予阿司匹林100mg/kg(0.1g/ml)；第2组空白对照组，给予等体积1.5％吐温80水溶液；第3～5组，分别灌胃给予100mg/kg的(溶解于1.5％吐温80水溶液)实验药物本发明竹叶椒总木脂素。各组动物灌胃给药1h后，于每只动物的右耳里外两面涂布20μl二甲苯，该动物的左耳作为自身对照。4h之后，脱臼处死动物，迅速剪下动物对称的双耳，并沿边缘打下9mm耳片，称重，同一只动物左右耳的重量差即为肿胀度。
肿胀质量＝(右耳耳片重量-左耳耳片重量)，抑制率(％)＝[(空白组－实验组)/空白组]×100％。
⑶数据分析：
采用spss11.5软件进行单因素方差分析，用bonferroni’s-t检验进行各试验组与空白组的比较，实验数据以均数±标准差(x±s.d.)表示，显著性差异为p*<0.05。
⑷实验结果：
实验结果如表1所示，受试药物组都表现出显著的抗炎作用。
表1受试样品对二甲苯所致小白鼠耳肿胀的影响
**p<0.01,***p<0.05。
本发明组1在实验中采用实施例1制备的竹叶椒总木脂素，本发明组2在实验中采用实施例2制备的竹叶椒总木脂素，本发明组3在实验中采用实施例5制备的竹叶椒总木脂素，其他实施例也做了同样的实验，均都取得了明显的抗炎作用，这里不再一一列举。
二、临床实验
在动物实验确保安全的情况下，并经临床试验取得了非常好的有益技术效果，经对确诊的盆腔炎、急性阑尾炎、风湿性关节炎患者各38人进行试用，每天3次，每次1.5-2g，服药30min后见效，实验结果表明，对3种炎症都有明显的消炎止痛效果，盆腔炎经2-4周用药后，症状都有不同程度的改善，急性阑尾炎经3-7天用药后，除2例需动手术外，其余都获得了满意的治疗效果，炎症得到了有效缓解，引起的疼痛基本消失；风湿性关节炎经2-4周用药后，炎症也有明显的消失，疼痛大大减轻，而且在用药期间未发现任何不良反应和副作用，用药安全，竹叶椒总木脂素作为具有消炎之功效是实验证明了的事实。
结论
实验表明，本发明原料丰富，易生产制备，成本低，使用方便，效果好，具有抗炎、镇痛功效，有效率高达98％以上，其效果之好是未曾料到的，是消炎药物上的创新，开拓了竹叶椒的药用价值和市场价值，有巨大的经济和社会效益。