本发明属于中药制剂技术领域，具体涉及一种知柏地黄颗粒及其制备方法。
背景技术：
知柏地黄丸为《中国药典》2015版一部收载的品种，具有滋阴降火的功效。用于阴虚火旺，潮热盗汗，口干咽痛，耳鸣遗精，小便短赤。其处方为：知母、黄柏分别40g，熟地黄160g，山药、山茱萸(制)各80g，牡丹皮、茯苓、泽泻各60g。制法为：以上八味，粉碎成细粉，过筛，混匀。加炼蜜或蜜水制成蜜丸或水蜜丸。处方中药材细粉入药，丸剂服药剂量较大，蜜丸一次用量为9g，水蜜丸一次用量为6g。
山茱萸味酸，性微温，功能补益肝肾，收敛固涩；山药味甘，性平，能益气养阴，补脾补肺补肾；知母味苦、甘，性寒，长于清热泻火，又能滋阴润燥、生津止渴，对阴虚火旺，骨蒸潮热、盗汗、心烦口渴诸证，有滋阴降火的作用。以上三药均能辅助君药直对主证，为本方臣药。
方中泽泻味甘、淡，性寒。能清泄相火，并防熟地黄之滋腻；牡丹皮味苦、辛，性微寒。能清泄肝火，并制山茱萸之温；茯苓味甘、淡，性平。能利水渗湿，健脾，安神，并助山药之健运；黄柏味苦，性寒。能退虚热，与知母相须为用，善治相火妄动。以上四味，既可协助主辅药更好地发挥治疗作用又有监制或反佐之功，并用于多种兼证，共为本方佐药。
黄柏主入肾经，退虚热，制相火的作用较强，在处方中用量较小，兼有使药的功能。
知柏地黄丸早已在市场上有销售。传统的知柏地黄丸剂型为水蜜丸或者蜜丸，丸剂服药剂量较大，溶散作用缓慢，生物利用度不高；再者蜜丸、水蜜丸保存不方便，丸子体积大，使用不便，特别是给老人、儿童及吞咽困难的病患带来不少麻烦；且知柏地黄丸崩解较慢，吸收不完全，生物利用度不高，疗效较缓慢。为此，急需一种生物利用度高，固体分散性好，吸收完全，疗效显著的剂型。
技术实现要素：
基于此，本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种知柏地黄颗粒，其生物利用度高，固体分散性好，吸收完全，服用方便，疗效更佳。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：一种知柏地黄颗粒，包含以下重量份的组分：知母300-380份、山茱萸650-700份、茯苓500-550份、黄柏300-350份、泽泻500-550份、牡丹皮500-550份、熟地黄1350-1400份、山药650-700份和稀释剂7000-7400份。
优选地，所述的知柏地黄颗粒包含以下重量份的组分：知母350份、山茱萸680份、茯苓530份、黄柏325份、泽泻530份、牡丹皮525份、熟地黄1380份、山药675份和稀释剂7200份。本申请发明人经过大量的研究和分析发现，含上述重量份原料的知柏地黄颗粒疗效更好。
优选地，所述稀释剂选自糊精、乳糖、微晶纤维素、甘露醇、蔗糖。
本发明还提供了所述知柏地黄颗粒的制备方法，其利用水蒸汽蒸馏法和酒精提取的方法提取药材中的有效成份，能充分保留有效成分。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：一种知柏地黄颗粒的制备方法，包括以下步骤：
(1)按配方称取牡丹皮，加水浸泡10-30小时，用水蒸汽蒸馏3-5小时，收集蒸馏液，分离上层挥发油；或将蒸馏液在6℃以下静置，过滤得粗结晶，然后加入体积分数为70％-95％的乙醇溶解，得到蒸馏液a和药渣b；
或将牡丹皮进行二氧化碳超临界萃取，萃取温度45-50℃，萃取时间2-5小时，萃取压力20-35mpa，二氧化碳的流量为10-20kg/h，得萃取药液，萃取药液在3℃以下1.5-2h后取出，采用目滤布过滤，即得丹皮酚结晶，然后加入体积分数为70％-95％的乙醇溶解，得到萃取液a和药渣b；
(2)按配方称取山茱萸、熟地黄、黄柏，加入体积分数为65％-90％的乙醇溶液，加热回流二次，每次1-4小时，滤过，回收乙醇，得浓缩液c和药渣d；
(3)将药渣b、药渣d和配方中其余4味药材加水煎煮二次，第一次1-4小时，第二次1-3小时，合并煎煮液，滤过，浓缩，放冷，加入乙醇，搅拌均匀，使含醇量为30-60％，静置10-30小时，滤过，回收乙醇；
(4)向步骤(3)获得的产物中加入蒸馏液a/萃取液a和浓缩液c，浓缩，得流膏，加稀释剂，即得所述知柏地黄颗粒。
优选地，所述步骤(1)中加入水的量为牡丹皮重量的3～6倍。
优选地，所述步骤(1)中蒸馏液在6℃以下静置的时间为10～30小时。
优选地，所述步骤(2)中加入85％乙醇溶液的量为山茱萸重量的8～12倍。
更优选地，所述步骤(2)中加入85％乙醇溶液的量为山茱萸重量的10倍。
优选地，所述步骤(3)中每次煎煮加入水的量为药渣b、药渣d和配方中其余4味药材总重量的6-10倍。
优选地，所述步骤(3)中合并的煎煮液滤过后浓缩至热测比重为1-1.2。
优选地，所述步骤(4)中浓缩至热测比重为1.2-1.5。
本申请发明人经过大量的研究和分析发现，本发明制备方法能更有效地保留药材中的有效成分，从而减少患者服药的剂量。
相对于现有技术，本发明的有益效果为：(1)本发明提供的知柏地黄颗粒在以滋补肝肾为主要作用的六味地黄丸基础上加知母和黄柏，滋阴降火力更强，主治阴虚火旺所致的多种病症；(2)本发明创造性的提出水蒸汽蒸馏法和乙醇提取法提取药材中的有效成分，可充分保留有效成分，达到减少患者服药剂量的目的；(3)本发明剂型生产工艺更趋完善合理，充分保留了药材的有效成分，具有生物利用度高，固体分散性好，吸收完全，服用方便，携带方便，疗效更佳等优点，提高了患者的顺应性。
具体实施方式
为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
本发明知柏地黄颗粒的一种实施例，包含以下重量份的组分：知母300-380份、山茱萸650份、茯苓550份、黄柏315份、泽泻535份、牡丹皮550份、熟地黄1380份、山药700份和糊精7000份。
所述柏地黄颗粒的制备方法包括以下步骤：
(1)按配方称取牡丹皮，加入牡丹皮重量3倍的水，浸泡10小时，用水蒸汽蒸馏5小时，收集蒸馏液，分离上层挥发油，得到蒸馏液a和药渣b；
(2)按配方称取山茱萸、熟地黄、黄柏，加入山茱萸重量9倍的体积分数为65％的乙醇溶液，加热回流二次，每次1小时，滤过，回收乙醇，得浓缩液c和药渣d；
(3)取药渣b、药渣d和配方中其余4味药材，加入药渣b、药渣d和其余6味药材总重量6倍的水煎煮二次，第一次1小时，第二次1小时，合并煎煮液，滤过，浓缩至热测比重为1，放冷，加入乙醇，搅拌均匀，使含醇量为30％，静置25小时，滤过，回收乙醇；
(4)向步骤(3)获得的产物中加入蒸馏液a和浓缩液c，浓缩至热测比重为1.2，得流膏；检测水份，折算成固状物重量，加入处方量的甘露醇和糊精，混匀，制成颗粒，干燥，喷入挥发油或醇溶液，即得所述知柏地黄颗粒。
实施例2
本发明知柏地黄颗粒的一种实施例，包含以下重量份的组分：知母300-380份、山茱萸675份、茯苓500份、黄柏340份、泽泻550份、牡丹皮518份、熟地黄1350份、山药650份和乳糖7400份。
所述柏地黄颗粒的制备方法包括以下步骤：
(1)按配方称取牡丹皮，加入牡丹皮重量5倍的水，浸泡30小时，用水蒸汽蒸馏3小时，收集蒸馏液，分离上层挥发油，得到蒸馏液a和药渣b；
(2)按配方称取山茱萸、熟地黄、黄柏，加入山茱萸重量8倍的体积分数为90％的乙醇溶液，加热回流二次，每次4小时，滤过，回收乙醇，得浓缩液c和药渣d；
(3)取药渣b、药渣d和配方中其余4味药材，加入药渣b、药渣d和其余6味药材总重量8倍的水煎煮二次，第一次2小时，第二次3小时，合并煎煮液，滤过，浓缩至热测比重为1.05，放冷，加入乙醇，搅拌均匀，使含醇量为50％，静置10小时，滤过，回收乙醇；
(4)向步骤(3)获得的产物中加入蒸馏液a和浓缩液c，浓缩至热测比重为1.4，得流膏；检测水份，折算成固状物重量，加入处方量的乳糖，混匀，制成颗粒，干燥，喷入挥发油或醇溶液，即得所述知柏地黄颗粒。
实施例3
本发明知柏地黄颗粒的一种实施例，包含以下重量份的组分：知母300-380份、山茱萸700份、茯苓515份、黄柏300份、泽泻520份、牡丹皮536份、熟地黄1365份、山药676份和甘露醇7285份。
所述柏地黄颗粒的制备方法包括以下步骤：
(1)按配方称取牡丹皮进行二氧化碳超临界萃取萃取温度50℃，萃取时间5小时，萃取压力35mpa，二氧化碳的流量为20kg/h，得萃取药液，萃取药液在3℃下2h后取出，采用目滤布过滤，即得丹皮酚结晶，然后加入体积分数为95％的乙醇溶解，得到萃取液a和药渣b；
(2)按配方称取山茱萸、熟地黄、黄柏，加入山茱萸重量12倍的体积分数为85％的乙醇溶液，加热回流二次，每次2小时，滤过，回收乙醇，得浓缩液c和药渣d；
(3)取药渣b、药渣d和配方中其余4味药材，加入药渣b、药渣d和其余6味药材总重量10倍的水煎煮二次，第一次3.5小时，第二次1.5小时，合并煎煮液，滤过，浓缩至热测比重为1.2，放冷，加入乙醇，搅拌均匀，使含醇量为40％，静置30小时，滤过，回收乙醇；
(4)向步骤(3)获得的产物中加入蒸馏液a和浓缩液c，浓缩至热测比重为1.35，得流膏；检测水份，折算成固状物重量，加入处方量的甘露醇，混匀，制成颗粒，干燥，喷入挥发油或醇溶液，即得所述知柏地黄颗粒。
实施例4
本发明知柏地黄颗粒的一种实施例，包含以下重量份的组分：知母300-380份、山茱萸700份、茯苓515份、黄柏300份、泽泻520份、牡丹皮536份、熟地黄1365份、山药676份和甘露醇7285份。
所述柏地黄颗粒的制备方法包括以下步骤：
(1)按配方称取牡丹皮，进行二氧化碳超临界萃取，萃取温度45℃，萃取时间2小时，萃取压力20mpa，二氧化碳的流量为10kg/h，得萃取药液，萃取药液在3℃下1.5h后取出，采用目滤布过滤,即得丹皮酚结晶，然后加入体积分数为70％的乙醇溶解，得到萃取液a和药渣b；
(2)按配方称取山茱萸、熟地黄、黄柏，加入山茱萸重量12倍的体积分数为85％的乙醇溶液，加热回流二次，每次2小时，滤过，回收乙醇，得浓缩液c和药渣d；
(3)取药渣b、药渣d和配方中其余4味药材，加入药渣b、药渣d和其余6味药材总重量10倍的水煎煮二次，第一次3.5小时，第二次1.5小时，合并煎煮液，滤过，浓缩至热测比重为1.2，放冷，加入乙醇，搅拌均匀，使含醇量为40％，静置30小时，滤过，回收乙醇；
(4)向步骤(3)获得的产物中加入蒸馏液a和浓缩液c，浓缩至热测比重为1.35，得流膏；检测水份，折算成固状物重量，加入处方量的甘露醇，混匀，制成颗粒，干燥，喷入挥发油或醇溶液，即得所述知柏地黄颗粒。
实施例5
本发明知柏地黄颗粒的一种实施例，包含以下重量份的组分：知母300-380份、山茱萸685份、茯苓540份、黄柏350份、泽泻500份、牡丹皮500份、熟地黄1400份、山药682份和蔗糖7380份。
所述柏地黄颗粒的制备方法包括以下步骤：
(1)按配方称取牡丹皮，加入牡丹皮重量6倍的水，浸泡24小时，用水蒸汽蒸馏4.5小时，收集蒸馏液，将蒸馏液在6℃以下静置10小时，过滤得粗结晶，然后加入体积分数为95％的乙醇溶解，得到蒸馏液a和药渣b；
(2)按配方称取山茱萸、熟地黄、黄柏，加入山茱萸重量12倍的体积分数为85％的乙醇溶液，加热回流二次，每次2小时，滤过，回收乙醇，得浓缩液c和药渣d；
(3)取药渣b、药渣d和配方中其余4味药材，加入药渣b、药渣d和其余6味药材总重量9倍的水煎煮二次，第一次4小时，第二次2.5小时，合并煎煮液，滤过，浓缩至热测比重为1.15，放冷，加入乙醇，搅拌均匀，使含醇量为60％，静置15小时，滤过，回收乙醇；
(4)向步骤(3)获得的产物中加入蒸馏液a和浓缩液c，浓缩至热测比重为1.45，得流膏；检测水份，折算成固状物重量，加入适量的蔗糖粉，混匀，制成颗粒，干燥，喷入挥发油或醇溶液，即得所述知柏地黄颗粒。
实施例6
本发明知柏地黄颗粒的一种实施例，包含以下重量份的组分：知母350份、山茱萸680份、茯苓530份、黄柏325份、泽泻530份、牡丹皮525份、熟地黄1380份、山药675份和微晶纤维素7200份。
所述柏地黄颗粒的制备方法包括以下步骤：
(1)按配方称取牡丹皮，加入牡丹皮重量5倍的水，浸泡20小时，用水蒸汽蒸馏4小时，收集蒸馏液，将蒸馏液在6℃以下静置30小时，过滤得粗结晶，然后加入体积分数为70％的乙醇溶解，得到蒸馏液a和药渣b；
(2)按配方称取山茱萸、熟地黄、黄柏，加入山茱萸重量10倍的体积分数为80％的乙醇溶液，加热回流二次，每次2.5小时，滤过，回收乙醇，得浓缩液c和药渣d；
(3)取药渣b、药渣d和配方中其余4味药材，加入药渣b、药渣d和其余6味药材总重量8倍的水煎煮二次，第一次3小时，第二次2小时，合并煎煮液，滤过，浓缩至热测比重为1.2，放冷，加入乙醇，搅拌均匀，使含醇量为45％，静置20小时，滤过，回收乙醇；
(4)向步骤(3)获得的产物中加入蒸馏液a和浓缩液c，浓缩至热测比重为1.5，得流膏；检测水份，折算成固状物重量，加入处方量的微晶纤维素，混匀，制成颗粒，干燥，喷入挥发油或醇溶液，即得所述知柏地黄颗粒。
实施例7
本实施例研究本发明制备方法及现有方法提取药材时得到的有效成分的含量。
设置实验组1和对照组1，其中，实验组1利用实施例6所述方法制备得到知柏地黄颗粒；对照组1利用现有方法制备得到知柏地黄颗粒，即包括以下步骤：取药材，粉碎成细粉，过筛，混匀后加入适量的糖粉，混匀，制成颗粒，干燥，得知柏地黄颗粒。然后取相同重量的知柏地黄颗粒，检测各有效成分的含量。实验组1和对照组1中知柏地黄颗粒的配方同实施例5，即两组中药材种类和用量完全相同。实验结果如表1所示。
表1实验结果
从表1中的实验结果可知，本发明方法能更有效地提取出药材中的有效成分，制备得到的知柏地黄颗粒中有效成分含量更高，因此可以减少患者服药剂量，具有疗效更好的优点。
实施例8
为了证明本发明知柏地黄颗粒剂型的优越性，我们对本发明知柏地黄颗粒和市售的知柏地黄丸进行药效学研究。
1.1对甲亢阴虚型小鼠常压耐氧的影响
取小鼠48只，体重19-24g，雌雄各半，均分为4组。分别设知柏地黄颗粒2.6g/kg、知柏地黄丸2.6g/kg、甲亢阴虚型模型组及正常对照组。知柏地黄颗粒组、知柏地黄丸组小鼠按照表2所示剂量灌胃给药，容量0.3ml/10g，每日1次，连用7天；正常对照组及甲亢阴虚组给予同容量的1％cmc液，除正常对照组外，其余各组均从第5天起同时灌服甲状腺片25ml/kg.d-1。末次给药后45min，将小鼠分别置入盛有10g钠石灰的200ml广口瓶中，密封瓶口，观察记录各鼠存活时间。试验结果如表2所示。
表2知柏地黄颗粒对甲亢阴虚型小鼠耐缺氧的影响
备注：知柏地黄颗粒与丸剂的剂量指的是含生药材的剂量。
表中与正常对照组比较，△△p＜0.01；与甲亢阴虚组比较，*p＜0.05，**p＜0.01；与同剂量知柏地黄丸比较，#p＜0.05。
结果显示，甲亢阴虚组小鼠存活时间明显短于正常对照组，加知柏地黄丸或颗粒后，小鼠存活时间明显延长。在等生药剂量时，小鼠加知柏地黄颗粒与知柏地黄丸比较，小鼠存活时间有显著性差异，表明颗粒有更好的生物利用度。
1.2对氢化可的松致大鼠阴虚型的影响
大鼠48只，体重210-250g，雌雄各半，均分为4组。分别设知柏地黄颗粒2.6g/kg、知柏地黄丸2.6g/kg、模型组及正常对照组。知柏地黄颗粒组、知柏地黄丸组按表3剂量给药，容量为1ml/100g，每天一次，连续7天，正常对照组和氢化可的松阴虚(模型)组给予同容量的1％cmc液。第3天起，除正常对照组没鼠肌注0.2ml生理盐水外，其余各组每鼠肌注对氢化可的松5mg.d-1,连续4天。于第7天灌药后1h，称体重，戊巴比妥钠ip麻醉，腹主动脉采血，用二乙酰-显色法测尿素氮，苦味酸法测肌酐，并剥离肾上腺称湿重，计算器重量系数(脏器mg/100g体重)。试验结果如表3所示。
表3知柏地黄颗粒对氢化可的松致大鼠阴虚模型的影响
表中，与正常对照组比较，△△p＜0.01；与模型组比较，**p＜0.01；与同剂量知柏地黄丸比较，#p＜0.05，##p＜0.01。
结果显示，阴虚组大鼠体重和肾上腺重量系数下降，血清尿素氮和肌酐上升，给知柏地黄丸或颗粒后，上述指标均明显改善。在等生药剂量时，小鼠加知柏地黄胶颗粒与知柏地黄丸比较，大鼠上述各指标的改善效果存在显著性差异，表明颗粒有更好的生物利用度。
1.3对环磷酰胺抑制小鼠免疫功能的影响
小鼠48只，体重22-26g，雌雄各半，均分为4组。分别设知柏地黄颗粒2.6g/kg、知柏地黄丸2.6g/kg、环磷酰胺(cy)模型组及正常对照组。知柏地黄颗粒组、知柏地黄丸组按照表4剂量灌胃给药，容量均为0.3ml/10g，每日1次，连用12天；cy模型组和正常对照组给同容量的1％cmc液。在给药后7天，同时ipcy100mg/kg一次，以制造免疫抑制模型；正常对照组ip生理盐水。末次给药后1h摘眼球取血，测定免疫球蛋白g(igg)和红细胞cab(rbccabr)受体花环率；同时剥离胸腺和脾脏，称湿重，计算脏器(mg)重量系数(mg/10g体重)。试验结果如表4所示。
表4知柏地黄颗粒对cy致小鼠免疫功能低下的影响
表中，与正常对照组比较，△△p＜0.01；与模型组比较，*p＜0.05，**p＜0.01；与同剂量知柏地黄丸比较，#p＜0.05，##p＜0.01。
结果显示，用cy后，igg、rbccabr花环率均明显降低，胸腺和脾系数减少。知柏地黄颗粒和丸，均可使igg、rbccabr花环率、胸脾系数得到改善。在等生药剂量时，小鼠加知柏地黄胶颗粒与知柏地黄丸比较，大鼠上述各指标的改善效果存在显著性差异，表明颗粒有更好的生物利用度。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。