一种防治猪咽喉炎的饲料添加剂及制备和质量检测方法与流程

本发明属于畜牧饲料技术领域，涉及一种防治猪咽喉炎的饲料添加剂及制备和质量检测方法。

背景技术：

猪咽喉炎多发生于寒冷季节，是指咽黏膜、黏膜下组织、软腭、扁桃体、肌肉及咽后淋巴结、咽淋巴滤泡及其深层组织的炎症。临诊体征为咽下困难或无法吞咽。其爆发原因多是机械性、温热性和化学性刺激，比如：①粗硬的饲料或异物、霉败的饲草和饲料对咽喉组织的刺激；②过热过冷的饲料、化学物质刺激。③受寒、感冒时，猪体的抵抗力降低，从而感染链球菌、葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏杆菌。④感染口炎、食管炎、猪瘟、口蹄疫等疫病时可继发咽喉炎。其主要临床症状为以食少，咀嚼缓慢，吞咽困难，流涎，头颈伸直，频咳，触诊咽部有疼痛等。该病会影响猪群的进食，进而影响猪的生产性能，给养猪业造成重大经济损失。

技术实现要素：

本发明解决的技术问题在于提供一种防治猪咽喉炎的饲料添加剂及制备和质量检测方法，本发明在咽喉炎预防及治疗方面具有很好的功效，不易产生耐药性，不影响猪的发育。

本发明是通过以下技术方案来实现：

一种防治猪咽喉炎的饲料添加剂，包括原料及各原料的重量含量如下：中药组份12～15份，辅料85-88份，发酵菌液0.4-0.45份。

优选的，所述中药组分包括柏子仁10～30份，黄芩8～10份，覆盆子8～10份，干漆12～18份，白蔹8～10份，芫花8～10份，苦木8～10份，荜茇8～10份，京大戟8～10份，番泻叶8～10份，萹蓄12～18份，蕲蛇8～10份。

优选的，所述中药组分的重量含量为：柏子仁15份，黄芩9份，覆盆子9份，干漆15份，白蔹9份，芫花9份，苦木9份，荜茇9份，京大戟9份，番泻叶9份，萹蓄15份，蕲蛇9份。

优选的，所述辅料包括豆粕、玉米、麸皮、豆油、磷酸氢钙、氯化钠。

优选的，所述辅料在猪饲料中的重量含量为：豆粕10-20份，玉米40-60份，麸皮3-8份，豆油2-3份，磷酸氢钙0.3-0.6份，氯化钠0.2-0.4份。

优选的，所述发酵菌液由包括乳酸菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌的复合发酵菌种进行扩繁而成，所述复合发酵菌种与发酵基料重量比为0.4-0.5：1000；

所述防治猪咽喉炎的饲料添加剂，其制备方法包括如下步骤：

(1)将辅料粉碎，粉碎粒度<1.5mm，按上述配比加入混料机，混合均匀得到混合料；

(2)按比例称取复合发酵菌种，加水扩繁，得到发酵菌液；

(3)将步骤(1)和步骤(2)所得混合料和发酵菌液混合均匀，得到发酵物料；

(4)将步骤(3)得到的发酵物料倒入发酵槽中，控制条件，间歇性翻搅，发酵4-5天，得到发酵初料；

(5)按比重称取柏子仁，黄芩，覆盆子，干漆，白蔹，芫花，苦木，荜茇，京大戟，番泻叶，萹蓄，蕲蛇，研磨后，加水浸泡40～60分钟后煎煮三次，每次加水量为药物重量的6～10倍，各煎煮30～40分钟，合并煎煮液，滤过，滤液合并，得制备好的中药煎煮液；

(6)将所得发酵初料和中药煎煮液混合，同时翻搅混合均匀，发酵1-2天，干燥制粒，即得饲料添加剂成品。

一种防治猪咽喉炎的饲料添加剂的质量检测方法，包括蕲蛇的鉴别方法，步骤如下：

(1)对照药材溶液的制备：取蕲蛇对照药材1～2g，加入正辛烷，加入量为蕲蛇对照药材质量的1～100倍，超声处理，过滤，滤液浓缩，即制得对照药材溶液；

(2)供试品溶液的制备：

取饲料添加剂45～60g作为待测样品，取样量为相当于1000制剂单位处方中蕲蛇药材质量的0.1‰～50‰倍，浓缩，加淀粉，干燥，加入正辛烷，加入量为待测样品体积的1～100倍，超声处理，过滤，滤液浓缩，即制得供试品溶液；

(3)阴性样品溶液的制备：按待测样品处方比例取缺蕲蛇的其他药材，制备不含蕲蛇的中药复方制剂，取与待测样品同量，再根据所得不含蕲蛇的中药复方制剂的物态，对应步骤(2)中同样物态待测样品的处理方法，处理不含蕲蛇的中药复方制剂，即得到阴性样品溶液；

(4)用毛细管点样器分别吸取对照药材溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各1～100μl，依次点于同一硅胶g薄层板上；

(5)取石油醚、乙酸乙酯混合，作为展开剂，置于干燥洁净的层析缸中，将步骤(4)得到的薄层板置于层析缸中，展开，取出，晾干；展开剂中石油醚与乙酸乙酯的体积比为6～8∶1；

(6)检视步骤(5)晾干后的薄层色谱板，对所得结果进行鉴别；所述步骤(6)中检视薄层色谱板为在365nm的紫外灯下检视；所述待测样品为含蕲蛇的中药复方。

一种防治猪咽喉炎的饲料添加剂中蕲蛇的鉴别方法，包括以下步骤：

(1)对照药材溶液的制备：取蕲蛇对照药材1g，加正辛烷30ml，超声处理15分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，即制得对照药材溶液；

(2)供试品溶液的制备：

取相当于含蕲蛇45g的饲料添加剂作为待测样品，浓缩至每1ml相当于含原药材2g，加相当于处方质量50％～70％的淀粉，干燥，加正辛烷50ml，超声处理15分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，即制得到供试品溶液；

(3)阴性样品溶液的制备：按待测样品处方比例取缺蕲蛇的其他药材，制备不含蕲蛇的中药复方样品，取和待测样品相同量，再根据所得不含蕲蛇的中药复方制剂的物态，对应步骤(2)中同样物态待测样品的处理方法，处理不含蕲蛇的中药复方制剂，即得到阴性样品溶液；

(4)用毛细管点样器分别吸取对照药材溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各2～5μl，依次点于同一硅胶g薄层板上；

(5)将石油醚和乙酸乙酯按照体积比为8∶1混合均匀，作为展开剂，置于干燥洁净的层析缸中，将步骤(4)得到的薄层板置于层析缸中，展开，取出，晾干；

(6)将步骤(5)晾干后的薄层板，置于365nm的紫外光灯下检视得到薄层色谱图，根据所得薄层色谱图判断是否含蕲蛇。

与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：

所选药材药性如下：

柏子仁，本品为柏科植物侧柏platycladusorientalis(l.)franco的干燥成熟种仁。甘，平。归心、肾、大肠经。养心安神，止汗，润肠。用于虚烦失眠，心悸怔忡，阴虚盗汗，肠燥便秘。《雷公炮制药性解》：“入肺、脾、肾三经。”《本经》：“主惊悸，安五藏，益气，除湿痹。”《别录》：“疗恍惚，虚损吸吸，历节，腰中重痛，益血止汗。”《药性论》：“能治腰肾中冷，膀胱中冷脓宿水，兴阳道，去头风，主小儿惊痫。”《日华子本草》：“治风，润皮肤。”《纲目》：“养心气，润肾燥，益智宁神；烧沥治疥癣。”

黄芩，本品为唇形科植物黄芩scutellariabaicalensisgeorgi的干燥根。苦，寒。归肺、胆、脾、大肠、小肠经。清热燥湿，泻火解毒，止血，安胎。用于湿温、暑温胸闷呕恶，湿热痞满，泻痢，黄疸，肺热咳嗽，高热烦渴，血热吐衄，痈肿疮毒，胎动不安。《本经》：“主诸热黄疸，肠澼，泄利，逐水，下血闭，(治)恶疮，疽蚀，火疡。”《别录》：“疗痰热，胃中热，小腹绞痛，消谷，利小肠，女子血闭，淋露下血，小儿腹痛。”《药性论》：“能治热毒，骨蒸，寒热往来，肠胃不利，破壅气，治五淋，令人宣畅，去关节烦闷，解热渴，治热腹中疞痛，心腹坚胀。”

覆盆子，本品为蔷薇科悬钩子属植物华东覆盆子rubuschingiihu的干燥果实。甘、酸，温。归肾、膀胱经。益肾，固精，缩尿。用于肾虚遗尿，小便频数，阳痿早泄，遗精滑精。《别录》：“主益气轻身，令发不白。”《日华子本草》：“安五脏，益颜色，养精气，长发，强志。疗中风身热及惊。”《开宝本草》：“补虚续绝，强阴建阳，悦泽肌肤，安和脏腑，温中益力，疗劳损风虚，补肝明目。”《本草衍义》：“益肾脏，缩小便。”

干漆，本品为漆树科漆树属植物漆树toxicodendronvernicifluum(stokes)f.a.barkl.的树脂经加工后的干燥品。辛，温；有毒。归肝、脾经。破瘀血，消积，杀虫。用于妇女闭经，瘀血症瘕，虫积腹痛。《本经》：“主绝伤，续筋骨，五缓六急，风寒湿痹。”《别录》：“疗咳嗽，消瘀血痞结腰痛，女子疝瘕，利小肠，去蛔虫。”《药性论》：“能杀三虫，主女人经脉不通。”《本草原始》：“妇人产后血运，多用干漆火烧熏鼻。”

白蔹，本品为葡萄科植物白蔹ampelopsisjaponica(thunb.)makino的干燥块根。苦，微寒。归心、胃经。清热解毒，消痈散结。用于痈疽发背，疔疮，瘰疠，水火烫伤。《本经》：“主痈肿疽疮，散结气，止痛。除热，目中赤，小儿惊痫，温疟，女子阴中肿痛。”《别录》：“下赤白，杀火毒。”《药性论》：“治面上疱疮。”《日华子本草》：“止惊邪，发背，瘰窃，肠风，痔漏，刀箭疮，扑损，温热疟疾，血痢，烫火疮，生肌止痛。”

苦木，本品为苦木科植物苦木picrasmaquassioides(d.don)benn.的干燥枝及叶。苦，寒；有小毒。归肺、大肠经。清热，祛湿，解毒。用于风热感冒，咽喉肿痛，腹泻下痢，湿疹，疮疖，毒蛇咬伤。

芫花，本品为瑞香科植物芫花daphnegenkwasieb.etzucc.的干燥花蕾，其根白皮(二层皮)也供药用。花：苦、辛，寒；有毒。根皮：辛、苦，平。有毒。归肺、脾、肾经。花：泻水逐饮，解毒杀虫。用于水肿胀满，胸腹积水，痰饮积聚，气逆喘咳，二便不利；外治疥癣秃疮，冻疮。根皮：消肿解毒，活血止痛。用于急性乳腺炎，痈疖肿毒，淋巴结结核，腹水，风湿痛，牙痛，跌打损伤。

荜茇，本品为胡椒科植物荜茇piperlonguml.的干燥近成熟或成熟果穗。辛，热。归胃、大肠经。温中散寒，下气止痛。用于脘腹冷痛，呕吐，泄泻，偏头痛；外治牙痛。《本草拾遗》：“温中下气，补腰脚，消食，除胃冷，阴疝，痃癖。”《海药本草》：“主老冷心痛，水泻，虚痢，呕逆醋心，产后泄利。”《日华子本草》：“治霍乱，冷气，心痛血气。”

京大戟，别名大戟、龙虎草、天平一枝香、膨胀草、将军草、震天雷。本品为大戟科植物大戟euphorbiapekinensisrupr.的干燥根。苦，寒；有毒。归肺、脾、肾经。泻水逐饮。用于水肿胀满，胸腹积水，痰饮积聚，气逆喘咳，二便不利。

番泻叶，本品为豆科植物狭叶番泻cassiaangustifoliavahl或尖叶番泻cassiaacutifoliadelile的干燥小叶。甘、苦，寒。归大肠经。泻热行滞，通便，利水。用于热结积滞，便秘腹痛，水肿胀满。《现代实用中药》：“番泻叶，少用为苦味健胃药，能促进消化；服适量能起缓下作用；欲其大泻则服4～6公分，作浸剂，约数小时即起效用而泄泻。”

萹蓄，别名扁蓄、大萹蓄、鸟蓼、扁竹、竹节草、猪牙草、道生草。本品为蓼科植物萹蓄polygonumavicularel.的干燥地上部分。夏季叶茂盛时采收，除去根及杂质，晒干。苦，微寒。归膀胱经。利尿通淋，杀虫，止痒。用于膀胱热淋，小便短赤，淋沥涩痛，皮肤湿疹，阴痒带下。利尿降压、抗菌止血、能增强呼吸运动的幅度及肺换气量，有轻度收敛作用，可作创伤用药。《药性论》：“主丹石毒发冲目肿痛，又敷热肿效。”《滇南本草》：“利小便。治五淋白浊，热淋，瘀精涩闭关窍，并治妇人气郁，胃中湿热，或白带之症。“

蕲蛇，本品为蝰科动物五步蛇agkisrrodonacutus(guenther)的干燥体。甘、咸，温；有毒。归肝经。祛风，通络，止痉。用于风湿顽痹，麻木拘挛，中风口眼歪斜，半身不遂，抽搐痉挛，破伤风，麻风疥癣。蕲蛇窖酒，色清澄，味清润而芳香，具有祛风、活络、舒筋活血、祛寒湿、强壮滋补和治疗跌打损伤等功效，是治疗麻风病的特效药。《鸡肋编》：“以轻小者为佳，四两者可值十千足。”又说：“夏月食盖盆子者，治疾犹有功。”

本发明配方制成的饲料中加入了多种中草药成分，配伍严谨，消炎化痰，活血消肿，清热解毒，对猪咽喉炎有一定的预防作用和治疗效果；

同时在饲料处理上，通过发酵处理，在温度湿度上都可以做到合适的控制，使得饲料不会过热或过冷；饲料软化，减少了了粗硬异物对咽喉部的刺激；几种草药成分的加入可增强猪对链球菌、葡萄球菌、大肠杆菌等的抵抗力。

附图说明

图1为按照本发明技术方案所得到的蕲蛇薄层色谱示意图；

图2为按照本发明技术方案所得到的蕲蛇薄层色谱照片；

其中，a为蕲蛇对照药材的斑点，b为所选药材样品(含蕲蛇)的斑点，c为阴性样品(缺蕲蛇)的斑点。

具体实施方式

下面结合附图对本发明做进一步详细描述，所述是对本发明的解释而不是限定。

一种防治猪咽喉炎的饲料添加剂，包括原料及各原料的重量含量如下：中药组份12～15份，辅料85-88份，发酵菌液0.4-0.45份。

前述中药组分包括柏子仁10～30份，黄芩8～10份，覆盆子8～10份，干漆12～18份，白蔹8～10份，芫花8～10份，苦木8～10份，荜茇8～10份，京大戟8～10份，番泻叶8～10份，萹蓄12～18份，蕲蛇8～10份。

前述中药组分的重量含量为：柏子仁15份，黄芩9份，覆盆子9份，干漆15份，白蔹9份，芫花9份，苦木9份，荜茇9份，京大戟9份，番泻叶9份，萹蓄15份，蕲蛇9份。

前述辅料包括豆粕、玉米、麸皮、豆油、磷酸氢钙、氯化钠。

前述辅料在猪饲料中的重量含量为：豆粕10-20份，玉米40-60份，麸皮3-8份，豆油2-3份，磷酸氢钙0.3-0.6份，氯化钠0.2-0.4份。

前述发酵菌液由包括乳酸菌、酵母菌和枯草芽孢杆菌的复合发酵菌种进行扩繁而成，所述复合发酵菌种与发酵基料重量比为0.4-0.5：1000；

前述防治猪咽喉炎的饲料添加剂，其制备方法包括如下步骤：

(1)将辅料粉碎，粉碎粒度<1.5mm，按上述配比加入混料机，混合均匀得到混合料；

(2)按比例称取复合发酵菌种，加水扩繁，得到发酵菌液；

(3)将步骤(1)和步骤(2)所得混合料和发酵菌液混合均匀，得到发酵物料；

(4)将步骤(3)得到的发酵物料倒入发酵槽中，控制条件，间歇性翻搅，发酵4-5天，得到发酵初料；

(5)按比重称取柏子仁，黄芩，覆盆子，干漆，白蔹，芫花，苦木，荜茇，京大戟，番泻叶，萹蓄，蕲蛇，研磨后，加水浸泡40～60分钟后煎煮三次，每次加水量为药物重量的6～10倍，各煎煮30～40分钟，合并煎煮液，滤过，滤液合并，得制备好的中药煎煮液；

(6)将所得发酵初料和中药煎煮液混合，同时翻搅混合均匀，发酵1-2天，干燥制粒，即得饲料添加剂成品。

一种防治猪咽喉炎的饲料添加剂的质量检测方法，包括蕲蛇的鉴别方法，步骤如下：

(1)对照药材溶液的制备：取蕲蛇对照药材1～2g，加入正辛烷，加入量为蕲蛇对照药材质量的1～100倍，超声处理，过滤，滤液浓缩，即制得对照药材溶液；

(2)供试品溶液的制备：

取饲料添加剂45～60g作为待测样品，取样量为相当于1000制剂单位处方中蕲蛇药材质量的0.1‰～50‰倍，浓缩，加淀粉，干燥，加入正辛烷，加入量为待测样品体积的1～100倍，超声处理，过滤，滤液浓缩，即制得供试品溶液；

(3)阴性样品溶液的制备：按待测样品处方比例取缺蕲蛇的其他药材，制备不含蕲蛇的中药复方制剂，取与待测样品同量，再根据所得不含蕲蛇的中药复方制剂的物态，对应步骤(2)中同样物态待测样品的处理方法，处理不含蕲蛇的中药复方制剂，即得到阴性样品溶液；

(4)用毛细管点样器分别吸取对照药材溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各1～100μl，依次点于同一硅胶g薄层板上；

(5)取石油醚、乙酸乙酯混合，作为展开剂，置于干燥洁净的层析缸中，将步骤(4)得到的薄层板置于层析缸中，展开，取出，晾干；展开剂中石油醚与乙酸乙酯的体积比为6～8∶1；

(6)检视步骤(5)晾干后的薄层色谱板，对所得结果进行鉴别；所述步骤(6)中检视薄层色谱板为在365nm的紫外灯下检视；所述待测样品为含蕲蛇的中药复方。

一种防治猪咽喉炎的饲料添加剂中蕲蛇的鉴别方法，包括以下步骤：

(1)对照药材溶液的制备：取蕲蛇对照药材1g，加正辛烷30ml，超声处理15分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，即制得对照药材溶液；

(2)供试品溶液的制备：

取相当于含蕲蛇45g的饲料添加剂作为待测样品，浓缩至每1ml相当于含原药材2g，加相当于处方质量50％～70％的淀粉，干燥，加正辛烷50ml，超声处理15分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，即制得到供试品溶液；

(3)阴性样品溶液的制备：按待测样品处方比例取缺蕲蛇的其他药材，制备不含蕲蛇的中药复方样品，取和待测样品相同量，再根据所得不含蕲蛇的中药复方制剂的物态，对应步骤(2)中同样物态待测样品的处理方法，处理不含蕲蛇的中药复方制剂，即得到阴性样品溶液；

(4)用毛细管点样器分别吸取对照药材溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各2～5μl，依次点于同一硅胶g薄层板上；

(5)将石油醚和乙酸乙酯按照体积比为8∶1混合均匀，作为展开剂，置于干燥洁净的层析缸中，将步骤(4)得到的薄层板置于层析缸中，展开，取出，晾干；

(6)将步骤(5)晾干后的薄层板，置于365nm的紫外光灯下检视得到薄层色谱图，根据所得薄层色谱图判断是否含蕲蛇。

实施例1

按重量比称取豆粕10份，玉米40份，麸皮3份，豆油2份，磷酸氢钙0.3份，氯化钠0.2份粉碎，粉碎粒度<1.5mm，按上述配比加入混料机，混合均匀得到混合料；按重量比为0.4：1000称取复合发酵菌种，加水扩繁，得到发酵菌液；将所得混合料和发酵菌液混合均匀，得到发酵物料；将发酵物料倒入发酵槽中，控制条件，间歇性翻搅，发酵4天，得到发酵初料；按比重称取柏子仁10份，黄芩8份，覆盆子8份，干漆12份，白蔹8份，芫花8份，苦木8份，荜茇8份，京大戟8份，番泻叶8份，萹蓄12份，蕲蛇8份，研磨后，加水浸泡40分钟后煎煮三次，每次加水量为药物重量的6倍，各煎煮30分钟，合并煎煮液，滤过，滤液合并，得制备好的中药组份；将所得发酵初料和中药组分混合，同时翻搅混合均匀，发酵1天，即得饲料添加剂成品。

实施例2

按重量比称取豆粕20份，玉米60份，麸皮8份，豆油3份，磷酸氢钙0.6份，氯化钠0.4份粉碎，粉碎粒度<1.5mm，按上述配比加入混料机，混合均匀得到混合料；按重量比为0.5：1000称取复合发酵菌种，加水扩繁，得到发酵菌液；将所得混合料和发酵菌液混合均匀，得到发酵物料；将发酵物料倒入发酵槽中，控制条件，间歇性翻搅，发酵5天，得到发酵初料；按比重称取柏子仁30份，黄芩10份，覆盆子10份，干漆18份，白蔹10份，芫花10份，苦木10份，荜茇10份，京大戟10份，番泻叶20份，萹蓄18份，蕲蛇10份，研磨后，加水浸泡60分钟后煎煮三次，每次加水量为药物重量的10倍，各煎煮40分钟，合并煎煮液，滤过，滤液合并，得制备好的中药组份；将所得发酵初料和中药组分混合，同时翻搅混合均匀，发酵2天，即得饲料添加剂成品。

实施例3

按重量比称取豆粕15份，玉米50份，麸皮5份，豆油2.5份，磷酸氢钙0.45份，氯化钠0.3份粉碎，粉碎粒度<1.5mm，按上述配比加入混料机，混合均匀得到混合料；按重量比为0.45：1000称取复合发酵菌种，加水扩繁，得到发酵菌液；将所得混合料和发酵菌液混合均匀，得到发酵物料；将发酵物料倒入发酵槽中，控制条件，间歇性翻搅，发酵4.5天，得到发酵初料；按比重称取柏子仁15份，黄芩9份，覆盆子9份，干漆15份，白蔹9份，芫花9份，苦木9份，荜茇9份，京大戟9份，番泻叶9份，萹蓄15份，蕲蛇9份，研磨后，加水浸泡50分钟后煎煮三次，每次加水量为药物重量的8倍，各煎煮45分钟，合并煎煮液，滤过，滤液合并，得制备好的中药组份；将所得发酵初料和中药组分混合，同时翻搅混合均匀，发酵1.5天，即得饲料添加剂成品。

实施例4，抗炎实验

以前述各个实施例制成药物，以nih小鼠为实验动物进行二甲苯抗炎试验，小鼠体重18～22g，雌雄各半，随机分组，空白对照组，实施例1组，实施例2组，实施例3组，除空白对照组外，各组按表1剂量分别灌胃给药，空白对照组给予等容积蒸馏水，每天给药1次，连续4天，末次给药0.5h后。将二甲苯100μl滴于小鼠右耳两面，左耳不涂作为对照，致炎0.5h后处死动物，沿耳廓基线剪下两耳，用直径9mm打下双耳同一部位圆片，电子分析天平，精密称重，以左、右耳片重量之差作为肿胀度，比较各组间差异，结果见表1。

表1本发明的药物对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响

注：与空白对照组比较*p＜0.05，**p＜0.01。

表1结果表明，与空白对照组比较，各组均能显著减轻二甲苯致炎小鼠的耳肿胀度(p值均＜0.01)，提示各实验组有较好的抗炎作用。

实施例5，皮肤过敏试验

以前述各个实施例制成药物，以sd大鼠为实验动物进行被动皮肤过敏试验，首先制备抗血清，取sd雄性大鼠，体重150～200g，每侧大腿肌肉注射1％卵清蛋白生理盐水0.5ml，皮下注射4％氢氧化铝凝胶0.1ml，14d后断颈取血，离心取血清，置-4℃冰箱备用。以同种雄性大鼠100只，随机分成空白对照组、实施例1组，实施例2组，实施例3组。除空白对照组外，各组按表2剂量分别灌胃给药，空白对照组给予等体积的蒸馏水，每天1次，连续灌胃给药14天。第15天背部剃毛，用1∶10稀释的抗血清作背部皮内注射。每侧两点，每点注射0.1ml。48h后，每只大鼠尾静脉注射1％伊文思蓝、1％卵清蛋白生理盐水的混合液1.0ml。30min后处死大鼠，剪下带有蓝斑的皮肤。置入盛有5ml丙酮生理盐水(7∶3)试管内浸泡48h，离心后上清液用分光光度计于610nm处测定光密度(od)值，结果见表2。

表2本发明药物对同种大鼠被动皮肤过敏试验的影响

注：与空白对照组比较*p＜0.05，**p＜0.01。

表2表明，与空白对照组比较，各个组，均能显著抑制同种大鼠被动皮肤过敏反应(pca)(p值均＜0.01)，提示各实验组均有较好的抗过敏作用。

实施例6

以前述各个实施例制成药物，以nih小鼠为实验动物进行肺炎双球菌感染试验，取nih小鼠140只，雌雄各半，体重18～22g，随机分组，空白对照组，实施例1组，实施例2组，实施例3组。预先灌胃给药1天，上、下午各1次，于第2天取肺炎双球菌混悬液12×109/ml以0.5ml/只给各组小鼠腹腔注射，于注射后第1、6小时，各灌胃给药一次，除空白对照组外，各组按表3剂量分别灌胃给药，空白对照组灌胃给予等容积的蒸馏水，连续观察7天。记录每日小鼠的死亡数，计算各组小鼠死亡率，比较各组间差异，结果见表3。

表3本发明药物对肺炎双球菌感染小鼠死亡保护作用

注：与空白对照组比较*p＜0.05，**p＜0.01。

表3结果表明，与空白对照组比较，各个组均有显著性差异(p值均＜0.01)，提示本发明药物对肺炎链球菌致小鼠死亡有较好的保护作用；提示本发明药物对肺炎链球菌有较好的抑制作用。

实施例7，止咳试验

以前述各个实施例制成药物，以nih小鼠为实验动物进行止咳试验，取nih小鼠100只，雌雄各半，体重18～22g，随机分组，每组10只，分为空白对照组，实施例1组，实施例2组，实施例3组。除空白对照组外，各组按表4剂量分别灌胃给药，空白对照组给予等容积蒸馏水，每天给药1次，连续4天。末次给药60min后，将小鼠置1000ml密闭玻璃容器内，以400mmhg恒压喷雾浓氨水15s，激发小鼠咳嗽，以小鼠同时出现腹肌收缩，缩胸，张嘴(咳声有无均可)，为咳嗽标准，记录，引咳潜伏期和1min小鼠咳嗽次数，比较各组间差异，结果见表4。

表4本发明饲料添加剂对氨水引咳小鼠的影响

注：与空白对照组比较，*p＜0.05，**p＜0.01。

表4结果表明，与空白对照组比较，各组均能显著延长氨水诱发小鼠咳嗽的潜伏期，减少1min内的咳嗽次数(p值均＜0.01)，并呈良好的剂量关系，提示各实验组均有较好的止咳作用。

实施例8，祛痰试验

以前述各个实施例制成药物，以nih小鼠为实验动物进行酚红法祛痰试验，取nih小鼠100只，雌雄各半，体重18～22g，随机分组，每组10只，分为空白对照组，实施例1组，实施例2组，实施例3组。除空白对照组外，各组按表5剂量分别灌胃给药，空白对照组给予等容积蒸馏水，每天给药1次，连续4天。末次给药0.5h后，腹腔注射50mg/ml酚红溶液0.2ml，30min后脱颈椎处死小鼠，剪下喉结至气管分叉处一段器官条，放入3ml的生理盐水中，再加1mol/l氢氧化钠0.1ml，用分光光度计在波长546nm下测od值，比较各组间差异，结果见表5。

表5本发明药物对小鼠酚红法祛痰的影响

注：与空白对照组比较，*p＜0.05，**p＜0.01。

表5结果表明，与空白对照组比较，各组均能显著增加小鼠酚红排出量(p值均＜0.01)，提示各实验组均有较好的祛痰作用，本发明药物药味之间的配伍应用对增加小鼠酚红排出量有协同增效作用。

实施例9，震镇静试验

以前述各个实施例制成药物，以nih小鼠为实验动物进行镇静试验，取nih小鼠100只，雌雄各半，体重18～22g，随机分组，即为空白对照组，实施例1组，实施例2组，实施例3组。除空白对照组外，各组按表6剂量分别灌胃给药，空白对照组给予等容积蒸馏水，每天给药1次，连续4天。末次给药1h、2h后，将小鼠置小动物自主活动仪中，使其适应3min后，记录5min内活动次数，进行组间比较，结果见表6。

表6本发明药物对小鼠自主活动次数的影响

注：与空白对照组比较，*p＜0.05，**p＜0.01。

表6结果表明，与空白对照组比较，各组给药1h和2h后均能显著减少小鼠5min内的自主活动次数(p值均＜0.01)，提示各实验组均有较好的镇静作用。证明本发明药物各组成药物之间的配伍应用对小鼠自主活动次数的抑制有协同作用。

实施例10

取含蕲蛇饲料添加剂供试品、不含蕲蛇的阴性样品及蕲蛇对照药材分别按照本发明技术方案进行薄层色谱鉴别试验。

结果见图1、2：供试品色谱中，在于对照药材色谱对应的位置上，显相同颜色的荧光主光斑。阴性样品在此位置无斑点显示。

实施例11

从山东地区的众多大型养猪场挑选试验用病猪，其中发病期病猪40头，分成对照1组、实施例1组、实施例2组、实施例3组共四组各10头病猪；实施例组饲喂相应的添加饲料添加剂饲料，对照组饲喂普通日粮，饲喂到3天、5天、7天、14天、21天一次进行肺气肿病症检查；在治愈后的病猪中在随机挑出40头，分为对照2组、实施例1组、实施例2组、实施例3组共四组，于3天、5天、7天、14天、21天观察病症复发情况，结果如表7所示。

表7本发明对猪咽喉炎的治疗效果

由表7可知，饲料中加入饲料添加剂实施例1-3，患有咽喉炎的病猪服用14天基本可全部治愈，而对照组1中，至少服用21天以上。另外饲料中添加实施例1-3的饲料添加剂，治愈后的病猪复发几率较小，而对照2组复发情况较严重。可见本发明饲料添加剂对猪咽喉炎有明显抑制作用。

以上给出的实施例是实现本发明较优的例子，本发明不限于上述实施例。本领域的技术人员根据本发明技术方案的技术特征所做出的任何非本质的添加、替换，均属于本发明的保护范围。