本发明涉及生物材料技术领域，尤其是涉及一种小肠黏膜下层基质修复凝胶。
背景技术：
组织器官的修复与重建是指组织、器官损伤后由临近健康细胞通过再生来修补恢复的过程，由于组织自发愈合过程固有的缺陷，一旦组织和器官出现缺损或功能障碍时，就会造成一定程度上的再生障碍或者是永久性缺损。因此组织器官的修复与重建一直是生物、医学等相关领域的焦点。伴随着对组织再生修复机制及组织工程学研究的开展和深入，寻找及研制各种有应用价值的可吸收并能促进再生的生物物质，已经成为该领域的一个热点。
细胞外基质(extracellularmatrix，ecm)是由动物细胞合成并分泌到细胞外、分布在细胞表面或细胞之间的大分子，主要成分包括胶原纤维、糖蛋白、黏蛋白等，其他成分有氨基葡聚糖(透明质酸、硫酸软骨素)等糖类，还有一些脂质和生长因子。这些物质构成复杂的网架结构，支持并连接组织结构，调节组织的发生和细胞的生理活动，在细胞迁移、分化和增殖方面有着重要的作用。
异种或异体细胞抗原由于被宿主认为是外来体，因此引发了宿主的炎性反应和免疫介导的排斥反应。然而细胞外基质是结构蛋白和功能蛋白的复合物，该组分常常在不同物种间保守，并能被异种受体耐受。许多动物组织器官和人体具有相似的细胞外基质成分和结构，通过脱细胞技术获得的ecm生物支架已被广泛应用与人体组织重建，如心脏膜瓣、皮肤、肌腱和硬脑膜等，其三维结构与体内细胞生长的天然环境接近，不仅可以起着支架材料的作用，而且包含多种生长因子，在组织修复和重建中有重要促进作用。
本发明针对现有脱细胞基质修复材料的局限性，提供了一种小肠黏膜下层基质凝胶的制备方法，通过脱细胞处理和凝胶化处理，消除了异种(体)组织的免疫原性，最大限度的保留了组织细胞外基质成分的活性，能够特异性修复人体受损组织器官，诱导组织再生，并且适用性强，能满足不同组织各种不规则形状修复区域的需要。
技术实现要素：
本发明提供一种小肠黏膜下层基质修复凝胶的制备方法，包括以下步骤：
s1.对小肠黏膜下层组织进行脱细胞处理，冻干后打粉；
s2.将小肠黏膜下层粉末溶解于pbs缓冲液中，然后将溶解液与1.5-3.5mol/l纤维素溶液、1.0-5.0mol/l环氧氯丙烷溶液进行混合，室温孵育后即可得到小肠黏膜下层基质凝胶。
优选地，所述脱细胞处理采用含去垢剂的pbs缓冲溶液脱除细胞膜脂质成分，脱除处理后采用pbs缓冲液清洗。
优选地，所述去垢剂的浓度为0.1～2wt％；去垢剂的种类选自曲拉通x-100、脱氧胆酸钠、平平加，以及十二烷基磺酸钠中的任一种。
优选地，所述冻干打粉是将小肠黏膜脱细胞基质进行冷冻干燥，再用粉碎机把脱细胞基质磨成粉末，获得脱细胞基质粉末。
优选地，s2所得混合溶液中溶解液、纤维素溶液、环氧氯丙烷的体积比为1-5：1：1。
优选地，s2室温孵育的时间为24～48h。
本发明的创新点是：
(1)制备凝胶的方法简单，条件温和，对细胞外基质中的营养因子和生长因子破坏小，修复效果好；
(2)首次将小肠黏膜下层基质与纤维素、环氧氯丙烷进行组合制得修复凝胶，最大限度的保留细胞外基质成分的活性，安全性高，适用性强，修复人体受损组织器官具有特异性，能够诱导组织再生修复。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
具体实施方式
实施例1
一种小肠黏膜下层基质修复凝胶的制备方法，包括以下步骤：
取屠宰后半个小时的新鲜猪小肠，用水冲去小肠内容物，翻转小肠，加入盐揉搓后用水反复冲洗3次，用手术刀剖开小肠，然后剪成15厘米长的肠段。用压舌板刮除肌层，浆膜层，置于生理盐水中4℃保存过夜分离出sis。采用含1wt％曲拉通x-100的pbs缓冲溶液脱除细胞膜脂质成分，脱除处理后采用pbs缓冲液清洗。将小肠黏膜脱细胞基质进行冷冻干燥，再用粉碎机把脱细胞基质磨成粉末，获得小肠黏膜下层基质粉末。将小肠黏膜下层基质粉末溶解于pbs缓冲液中得溶解液，然后将溶解液与1.5mol/l纤维素溶液、1.0mol/l环氧氯丙烷溶液进行混合，所得混合溶液中溶解液、纤维素溶液、环氧氯丙烷的体积比为1：1：1，室温孵育后即可得到小肠黏膜下层基质凝胶，孵育的时间为24h。
将修复凝胶用环氧乙烷灭菌后植入雄性sd大鼠背部皮下，植入后于1，2，4，8周分别取材(n＝3)进行组织学观察，进行炎性细胞计数。实验结果表明，本发明修复材料组炎性细胞数维持在较低水平，基本不变，具有良好的组织相容性，可用于体内修复。
实施例2
一种小肠黏膜下层基质修复凝胶的制备方法，包括以下步骤：
取屠宰后半个小时的新鲜猪小肠，用水冲去小肠内容物，翻转小肠，加入盐揉搓后用水反复冲洗3次，用手术刀剖开小肠，然后剪成15厘米长的肠段。用压舌板刮除肌层，浆膜层，置于生理盐水中4℃保存过夜分离出sis。采用含0.1wt％平平加的pbs缓冲溶液脱除细胞膜脂质成分，脱除处理后采用pbs缓冲液清洗。将小肠黏膜脱细胞基质进行冷冻干燥，再用粉碎机把脱细胞基质磨成粉末，获得小肠黏膜下层基质粉末。将小肠黏膜下层基质粉末溶解于pbs缓冲液中得溶解液，然后将溶解液与1.5mol/l纤维素溶液、5.0mol/l环氧氯丙烷溶液进行混合，所得混合溶液中溶解液、纤维素溶液、环氧氯丙烷的体积比为3：1：1，室温孵育后即可得到小肠黏膜下层基质凝胶，孵育的时间为36h。
将修复凝胶用环氧乙烷灭菌后植入雄性sd大鼠背部皮下，植入后于1，2，4，8周分别取材(n＝3)进行组织学观察，进行炎性细胞计数。实验结果表明，本发明修复材料组炎性细胞数维持在较低水平，基本不变，具有良好的组织相容性，可用于体内修复。
实施例3
一种小肠黏膜下层基质修复凝胶的制备方法，包括以下步骤：
取屠宰后半个小时的新鲜猪小肠，用水冲去小肠内容物，翻转小肠，加入盐揉搓后用水反复冲洗3次，用手术刀剖开小肠，然后剪成15厘米长的肠段。用压舌板刮除肌层，浆膜层，置于生理盐水中4℃保存过夜分离出sis。采用含1wt％十二烷基磺酸钠的pbs缓冲溶液脱除细胞膜脂质成分，脱除处理后采用pbs缓冲液清洗。将小肠黏膜脱细胞基质进行冷冻干燥，再用粉碎机把脱细胞基质磨成粉末，获得小肠黏膜下层基质粉末。将小肠黏膜下层基质粉末溶解于pbs缓冲液中得溶解液，然后将溶解液与3.5mol/l纤维素溶液、1.0mol/l环氧氯丙烷溶液进行混合，所得混合溶液中溶解液、纤维素溶液、环氧氯丙烷的体积比为4：1：1，室温孵育后即可得到小肠黏膜下层基质凝胶，孵育的时间为36h。
将修复凝胶用环氧乙烷灭菌后植入雄性sd大鼠背部皮下，植入后于1，2，4，8周分别取材(n＝3)进行组织学观察，进行炎性细胞计数。实验结果表明，本发明修复材料组炎性细胞数维持在较低水平，基本不变，具有良好的组织相容性，可用于体内修复。
实施例4
一种小肠黏膜下层基质修复凝胶的制备方法，包括以下步骤：
取屠宰后半个小时的新鲜猪小肠，用水冲去小肠内容物，翻转小肠，加入盐揉搓后用水反复冲洗3次，用手术刀剖开小肠，然后剪成15厘米长的肠段。用压舌板刮除肌层，浆膜层，置于生理盐水中4℃保存过夜分离出sis。采用含2wt％脱氧胆酸钠的pbs缓冲溶液脱除细胞膜脂质成分，脱除处理后采用pbs缓冲液清洗。将小肠黏膜脱细胞基质进行冷冻干燥，再用粉碎机把脱细胞基质磨成粉末，获得小肠黏膜下层基质粉末。将小肠黏膜下层基质粉末溶解于pbs缓冲液中得溶解液，然后将溶解液与2.0mol/l纤维素溶液、4.0mol/l环氧氯丙烷溶液进行混合，所得混合溶液中溶解液、纤维素溶液、环氧氯丙烷的体积比为5：1：1，室温孵育后即可得到小肠黏膜下层基质凝胶，孵育的时间为48h。
将修复凝胶用环氧乙烷灭菌后植入雄性sd大鼠背部皮下，植入后于1，2，4，8周分别取材(n＝3)进行组织学观察，进行炎性细胞计数。实验结果表明，本发明修复材料组炎性细胞数维持在较低水平，基本不变，具有良好的组织相容性，可用于体内修复。
实验证明，本发明小肠黏膜下层基质凝胶，可以有效抵抗酸和胃蛋白酶的降解，力学性能优良，无细胞毒性，溶血率低，组织相容性性好，孔径大小合适，适于细胞生长，同时含有大量生长因子，体内修复无明显钙化现象，可用于促进消化道粘膜修复，使用安全，制备方法简单，具有良好的临床应用价值。