本发明属于化妆品技术领域，尤其涉及一种多效祛痘凝胶。
背景技术：
痤疮又名粉刺、暗疮，是一种毛囊皮脂腺的慢性炎症的皮肤病，常见于青春发育期的青年男女,因此又称为青春痘。由于其发病机理复杂，严重者会损毁容颜、伤及自尊。因而能否快速有效地将其祛除、重现健康靓丽的肌肤成为众多年轻人最关心的问题，也是目前祛痘化妆品亟待解决的问题。
所谓祛痘化妆品，是通过在护肤品中添加一些具有祛痘功效的活性成分而达到祛痘作用的，添加的成分会随着科技的发展而不断地更新换代。严格来说，合格的祛痘产品既要有良好的祛痘效果，更要保证其使用的安全性，不能对皮肤产生明显刺激和损伤。
目前市场上主要的添加成分包括：
添加合成化学品：如硫磺具有很好的杀菌能力，能够杀灭脸部的寄生菌群，通过控制细菌感染和炎症，进而减少粉刺形成；水杨酸具有一定的去角质、疏通毛孔的功能；过氧化苯甲酰则可以强行代谢剥落角质，以此来减少毛囊堵塞，同样可以缓解粉刺生长。这些活性物质添加到化妆品中后由于受添加量的限制，各自发挥的效率并不高，且随之而来的过敏等副作用会对皮肤造成更大的伤害。
添加抗生素：借助医学成果，在化妆品中添加一些抗生素类物质用于消炎杀菌，如甲硝唑、氯霉素等，这些成分对于抑制痤疮致病菌的繁殖确实有一定的效果，但长期使用病菌会产生耐药性，同时也引起人体的不良反应，一旦停用就会出现更严重的皮肤问题。
添加安全性高的活性物：选用安全性高又有一定祛痘功效的成分，从预防痘痘产生、祛痘、养肤等关键环节入手，其中包括公认的祛痘活性成分视黄醇棕榈酸酯、尿囊素、果酸、烟酰胺等，由于对祛痘产品的稳定性有一定的要求使得各活性成分在产品中的添加量有着一定的限制。
随着科技的发展，很多厂家通过包裹改良、衍生物合成、改进提取工艺等方法得到了安全性、活性更高的活性物，使其在具有一定祛痘效果的同时还能够对产品功效的发挥起到一定促进作用，但随之而来是成本在不断的升高。
大量的科学研究表明，痤疮的发病与机体内的雄激素水平过高相关。在人体血液中具有生理活性的雄激素睾酮(t)，在经体内5α-还原酶催化后会产生活性更强的二氢睾酮(dht)。5α-还原酶作为依赖于还原性辅酶ⅱ的膜蛋白酶，其主要功能是将睾酮还原为二氢睾酮。5α-还原酶基因表达过程中，受前列腺和肝脏组织中雄性激素的调节，在几种由内分泌紊乱而引发的疾病中发挥影响，如前列腺增生、多毛症、秃顶等。由于痤疮患者体内的雄性激素水平过高会使皮脂分泌异常，当过度分泌的皮脂集聚在皮肤表面会被空气中的氧气氧化，随之就会为微生物(最主要的是痤疮丙酸杆菌和金黄色葡萄球菌)的繁殖提供合适的生存环境，使其大量繁殖；微生物大量繁殖后产生的脂酶会引起炎症反应，加重皮损症状。
对于祛痘化妆品来说，导致其祛痘功效不明显的原因可能是化妆品中添加的活性成分只是在痤疮产生的某个阶段会有一定的效果。因此新一代的祛痘产品需要其在痤疮产生的各个阶段都有一定的抑制作用，这样才能够达到较好的祛痘功效；而在具有较好的祛痘功效的同时，也要保证产品的安全性，不能对皮肤造成新的负担。在对痤疮的产生机制进行了系统的分析之后，发现适应消费者要求的祛痘产品应该是在保证对皮肤安全无害的基础上，要同时具有降低体内雄性激素水平、抑制皮脂氧化、抑制炎症反应、抑菌等作用。
目前市场上的中草药祛痘产品主要为抑菌或抗炎，功效宣称比较单一，并没有根据痤疮产生的机理，有针对性的、较全面的设计祛痘产品。对中草药的祛痘功效也没有做过系统的比较和分析。
在对中草药水提液降低体内雄性激素水平、抑制皮脂氧化、抑制炎症反应及抑菌能力进行较为全面的比较研究的基础上，本发明选取具有成分简单、肤感清爽、不含油脂等特点的凝胶为载体，以最佳复配比的黄连、黄柏、黄芩、大黄为主要祛痘成分，复配连翘以增强对5α-还原酶的抑制效果，添加桑黄水提物用来增强产品的抗氧化、抗炎能力，研制出具有多重功效的祛痘产品。该产品有较强的抑菌、抗炎、抗氧化作用，能减轻皮脂分泌，有效缓解痤疮的症状，减轻痤疮患者的烦恼，达到安全祛痘的目的。
技术实现要素：
本发明的目的就是为了弥补已有技术的缺陷，提供一种多效祛痘凝胶。
为了实现上述目的，本发明提供以下技术方案：
一种多效祛痘凝胶，包括a相、b相和c相；
所述a相包括如下重量份的原料：
所述b相包括如下重量份的原料：
复配中草药水提液75-85份；
所述c相包括如下重量份的原料：
桑黄水提物0.08-0.12份
pcg(1,2-辛二醇和2-苯氧基乙醇的混合物)0.9-1.1份
水加至100份。
优选的，所述a相包括如下重量份的原料：
所述b相包括如下重量份的原料：
复配中草药水提液80份；
所述c相包括如下重量份的原料：
桑黄水提物0.1份
pcg(1,2-辛二醇和2-苯氧基乙醇的混合物)1.0份
水加至100份。
所述复配中草药水提液的制备方法为：选择黄连、黄柏、黄芩、大黄的中草药水提液作为祛痘功效成分，采用四因素三水平的正交试验方法进行复配，通过现代测试方法分析各复方对dpph·的清除能力，对透明质酸酶、5α-还原酶活性的抑制能力及对金黄色葡萄球菌的抑制作用，从四个方面进行综合比较，确定其最佳的复配比例。根据其最佳的复配比例按重量份称取1.25份黄连、1.25份黄柏、2.5份黄芩、1.88份大黄，另外称取2.5份连翘混匀后装入无纺布袋，置于烧杯中，并加入100份水作为提取溶剂，沸水浴1h后，将提取液倒出，继续加入100份水，沸水浴1h后取出，合并两次提取液，浓缩至80重量份，制得复配中草药水提液。
所述祛痘凝胶的制备方法为：在烧杯中加入b相原料复配中草药水提液，置于75℃水浴锅中，边搅拌边将a相中卡波姆u-21分散至其中，待分散均匀后再依次加入a相中甘油、丁二醇、甜菜碱、edta，最后加入三乙醇胺，快速搅拌20分钟后降温，温度降至45℃时将c相加入搅拌至均匀，最后冷却的同时再加入适量的蒸馏水，令制成品总量保持为100重量份。
本发明的优点是：
本发明选择了肤感清爽的水性凝胶为基质，以正交实验筛选出的最佳配比的黄连、黄柏、黄芩、大黄作为主要祛痘功效成分，复配连翘以强化其对5α-还原酶的抑制效果，同时添加桑黄水提物以增强产品的抗氧化、抗炎能力；通过对dpph·自由基清除率、透明质酸酶抑制率、睾酮转化率的测定及金黄色葡萄球菌抑菌实验，从抗氧化、抗炎、抑制5α-还原酶活性、抑菌4个方面综合评价该发明产品的祛痘功效。
本发明的祛痘凝胶质地清爽、肤感较好；不添加油脂、乙醇、香精，温和、无刺激；具有较强的抑菌、抗炎、抗氧化作用，能减轻皮脂分泌，有效缓解痤疮的症状，减轻痤疮患者的烦恼，达到安全祛痘的目的。产品制备方法简单，易于规模化生产，市场前景广阔。
具体实施方式
以下结合具体的实例对本发明的技术方案做进一步说明：
实施例
实施例所用原料：
甜菜碱，杭州万景新材料有限公司；1,2-辛二醇和2-苯氧基乙醇的混合物(pcg)，南京斯拜科生化实业有限公司；桑黄水提物，安徽丹皇本草科技有限公司；黄连、黄芩、大黄、黄柏、连翘，均购自合肥市百姓缘大药房；硼酸、对-二甲氨基苯甲醛、还原性辅酶ⅱ(nadph，95％)，睾酮(98％)，阿拉丁试剂(上海)有限公司；三羟甲基氨基甲烷(tris，99.9％生物技术级)，考马斯亮蓝g-250(ar，无蛋白酶)，10mg/ml牛血清蛋白标准溶液(分析标准品)，上海麦克林生化科技有限公司；爱普列特(5mg/片，有效成分含量)，江苏联环药业股份有限公司；5α-还原酶提取液，实验室提取，浓度为0.29mg/ml。
一种多效祛痘凝胶，包括a相、b相和c相；
所述a相包括如下的原料：
所述b相包括如下重量份的原料：
复配中草药水提液80g；
所述c相包括如下重量份的原料：
桑黄水提物0.1g
pcg(1,2-辛二醇和2-苯氧基乙醇的混合物)1.0g
水加至100g。
所述复配中草药水提液的制备方法为：按重量份称取1.25g黄连、1.25g黄柏、2.5g黄芩、1.88g大黄、2.5g连翘混匀后装入无纺布袋，置于烧杯中，并加入100g水作为提取溶剂，沸水浴1h后，将提取液倒出，继续加入100g水，沸水浴1h后取出，合并两次提取液，浓缩至80g，制得复配中草药水提液。
所述祛痘凝胶的制备方法为：在烧杯中加入b相原料复配中草药水提液80g，置于75℃水浴锅中，边搅拌边将a相中卡波姆u-21分散至其中，待分散均匀后再依次加入a相中甘油、丁二醇、甜菜碱、edta，最后加入三乙醇胺，快速搅拌20分钟后降温，温度降至45℃时将c相加入搅拌至均匀，最后冷却的同时再加入适量的蒸馏水，令制成品总量保持为100g。
祛痘凝胶的性能测试：
称取制得的凝胶2.5g，在小烧杯中用水溶解后定容至25ml容量瓶中作为待测液。
1、dpph·自由基清除率的测定
分别取待测液和物质的量浓度为2.00×10-4mol/l的dpph·乙醇溶液各3ml加入同一具塞试管中，摇匀，避光放置30min后，用紫外-可见分光光度计测定混合溶液在517nm处的吸光度ai，同时测定3ml的纯水与3ml浓度为2.00×10-4mol/l的dpph·乙醇溶液混合后的吸光度a0和3ml待测样品溶液与3ml无水乙醇混合后的吸光度aj，根据式(1)计算清除率p：
p＝[1－(ai－aj)/a0]×100％(1)
2、透明质酸酶抑制率的测定
(1)溶液的配置
醋酸缓冲溶液的配制：分别取113ml0.2mol/l醋酸钠溶液和12ml0.2mol/l的醋酸溶液至250ml容量瓶中，调节ph至5.6，并用蒸馏水定容。
0.5mg/ml透明质酸钠溶液的配制：准确称取透明质酸钠50mg，以醋酸缓冲溶液溶解，定容至100ml容量瓶中。
1mg/ml的透明质酸酶溶液的配制：准确称取透明质酸酶50mg，以醋酸缓冲溶液溶解，定容至50ml容量瓶中。
埃尔利希试剂的配制：准确称取对二甲氨基苯甲醛0.8g，分别加入15ml无水乙醇、15ml浓hcl溶解，得到埃尔利希试剂。
其余溶液的配制仅用水作溶剂。
(2)实验操作
取0.25mmol/l的cacl2溶液0.2ml和1mg/ml透明质酸酶溶液1ml，37℃保温培养20min；加入待测液1ml，37℃保温培养20min；加入0.5mg/ml透明质酸钠溶液1ml，37℃保温40min；加入0.4mol/l氢氧化钠溶液0.2ml，冰水浴8min；加入1mg/ml硼酸溶液0.2ml，沸水浴10分钟后立即冰水浴8min终止反应，加入埃尔利希试剂4.0ml，37℃保温放置5min显色，以去离子水作为参比，紫外-可见分光光度计在585nm下测定吸光度。按公式(2)计算透明质酸酶抑制率i：
i＝[1－(c－d)/(a－b)]×100％(2)
式中：a为对照溶液吸光度值(用溶剂代替样品溶液)；b为空白对照溶液吸光度值(用溶剂代替样品溶液，ph＝5.6的醋酸缓冲溶液代替透明质酸酶溶液)；c为待测液吸光度值；d为样品对照溶液吸光度值(ph＝5.6的醋酸缓冲溶液代替透明质酸酶溶液)。
3、金黄色葡萄球菌抑制实验
(1)溶液的配制
牛肉膏蛋白胨培养基(液体)：于1000ml烧杯中，称取牛肉膏3g，氯化钠5g，蛋白胨5g，加入水950ml，于电炉上加热溶解，随之将其冷却，定容至1000ml(ph于7.2-7.4之间)，再将其分装于规格为250ml三角瓶内，用牛皮纸包扎。
菌种及菌液制备：金黄色葡萄球菌4℃冷藏，菌种接种于50ml的液体牛肉膏蛋白胨培养基中，37℃培养24h活化，冰箱冷藏。
抑菌实验：将菌液用液体培养基稀释为104cfu/ml，取灭菌ep管数支，每支管中加入1ml液体培养基，再分别向管中加入待测液各1ml，充分混合后，37℃下进行培养。
实验所需的对照组包括接种了同数量的菌液且不加抗菌药的培养物对照和不接种菌液也不加抗菌药的培养基对照。当培养物对照中的颜色变成了桔黄色，而培养基对照没有发生颜色变化时，记下发生颜色变化的管数，以此来筛选出具有抑菌作用的待测液。
将培养基放置37℃下培养3天，持续观察颜色变化，得到具有抑菌能力的待测液。
4、睾酮转化率的测定
(1)色谱条件
色谱柱：waterssunfiretmc18柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相：甲醇-水(70:30，v/v)，双泵；检测波长：242nm；流速：1.0ml/min，进样量20.00μl，柱温30℃。
(2)反应物溶液及阳性对照药系列浓度的配制
以甲醇为溶剂配制1.0mg/ml的睾酮溶液，以0.1mol/ltris缓冲液为溶剂配制4.25mg/ml的nadph溶液。
阳性对照药系列浓度的配制：取25片爱普列特片放入研钵中，充分研磨至粉末后倒入烧杯中。加适量甲醇(50％)充分溶解，转入25ml容量瓶中，定容，摇匀得浓度为5mg/ml的爱普列特溶液，再将其稀释后分别得到0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mg/ml系列浓度的阳性对照液。
(3)睾酮标准曲线的制备
准确移取1.0mg/ml的睾酮溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8ml于5ml的容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀静置待用。按4(1)中色谱条件进样，保留时间t＝10.3min。以睾酮含量为x，峰面积为y，绘制标准曲线，计算得其标准曲线方程为y＝7.50×104x－88.5(r＝0.999)。
(4)反应体系的建立
将睾酮、nadph溶液、5α-还原酶提取液、爱普列特溶液、tris缓冲液、待测液按表3中组合依次加入反应体系，分别设为阳性对照组、空白对照组、实验组，放入温度为37℃的恒温培养箱中反应。
表1体外反应体系
(5)睾酮转化率的测定
表1的体外反应进行1h后，将反应液从恒温培养箱中取出，加入2ml的甲醇，终止反应。将反应体系充分摇匀，以4000r/min离心2min，取上清液。用微孔有机滤膜(0.45um)过滤上清液，将过滤后的反应液进样。用高效液相色谱仪检测反应后的溶液，将睾酮的峰面积代入其标准曲线中，算出未反应的睾酮的含量x1，睾酮的原始含量为x0，根据公式计算出睾酮转化率t。
t＝(1-x1/x0)×100％
5、祛痘凝胶的稳定性测试
在阳光直射下，观察祛痘凝胶的颜色、光泽度、均匀性、形态等，同时用手触摸样品的稠度、粘度、触变性；分别于45℃，-10℃条件下放置一天后取出，观察样品是否出现变化。
6、祛痘凝胶的试用调查
25名志愿者，连续使用祛痘凝胶40日，并填写问卷调查表。同时通过皮肤测试仪对试用者皮肤中水分、油分、色素含量进行跟踪测试。
黄连、黄柏、黄芩、大黄的配比测试：
以黄连、黄柏、黄芩、大黄4种中草药作为正交试验的四个因素，分别命名为a、b、c、d，另外分别取4种中草药水提液的不同浓度50mg/ml、75mg/ml、100mg/ml作为因素的三水平，列出筛选实验中的四因素三水平，选取l9(34)正交试验的方法，进行等体积复配，得到由4种中草药不同浓度的水提液复配的y-1到y-9的9组复配液。
四因素三水平表和正交试验方案见表2和表3：
表2四因素三水平表
表3正交试验方案表
分别对表3中的各组复配液进行dpph·自由基清除率、透明质酸酶抑制率、睾酮转化率的测定及金黄色葡萄球菌抑菌实验测试，结果如表4所示：
“+”表示有菌生长，不抑菌；“-”表示无菌生长，有抑菌作用。
表4正交试验结果
选择对dpph·自由基的清除率p(越高越好)、透明质酸酶抑制率i(越高越好)、抑菌效果和睾酮转化率t(越低越好)作为正交试验筛选复配组合的四个指标来选择最优组合。
通过对正交试验表中九组复配组合的实验结果进行汇总可以得到表4。在抑菌实验中，发现9个组合对金黄色葡萄球菌均有抑制作用，抑菌实验对9组复方没有选择性。因此，正交试验只有对dpph·自由基的清除率p、透明质酸酶抑制率i和睾酮转化率t三个指标进行筛选。
在对9组复方组合的dpph·自由基的清除率p测试结果进行比较后，可以发现其中清除率最高的组合是a2b3c1d2。再对九组结果进行正交试验的分析，由四因素的极差可以得出四黄对dpph·清除率影响主次分别为大黄>黄芩>黄连>黄柏，根据k值的比较选出一个复配组合a2b3c3d2。
四黄对透明质酸酶的抑制率影响主次分别为黄柏>黄芩>黄连>大黄，从测出的九组数据中可以选出抑制率最高的组合a2b1c2d3，由k值选出一个复配组合a2b1c3d2。
四黄复配液对睾酮转化率的影响主次分别为黄连>大黄>黄柏>黄芩，从测出的九组数据中可以选出抑制率最高的组合a1b2c2d2，由k值选出一个复配组合a1b1c2d2。
最后，以上作为筛选最优组合的三个因素，利用矩阵分析法对实验进行优化，通过计算得到一个复配组合a1b1c3d2。
综合以上对实验结果影响因素的分析及矩阵分析法计算的优化选择得到最后的七个组合，分别为a2b3c1d2、a2b3c3d2、a2b1c2d3、a2b1c3d2、a1b2c2d2、a1b1c2d2、a1b1c3d2。
通过以上正交试验的选择得到了7组复配组合，再对选出的7个组合按照功效测试中的测试方法进行实验，得到了对dpph·的清除率、透明质酸酶抑制率、睾酮转化率及抑菌效果。实验发现7个组合对金黄色葡萄球菌都具有很好的抑制作用，如表5所示。
“+”表示有菌生长，不抑菌；“-”表示无菌生长，有抑菌作用。
表5复方组合功效测试结果
通过以上的测试数据可以发现在7个复配组合中，抗氧化、抗炎、抑制5α-还原酶能力的综合结果比较好的是a1b1c3d2。因此，四黄复配的最优组合是由50mg/ml的黄连、50mg/ml的黄柏、100mg/ml的黄芩、75mg/ml的大黄等体积混合复配出的混合液，其在溶液中含量分别为：黄连12.5mg/ml、黄柏12.5mg/ml、黄芩25mg/ml、大黄18.8mg/ml，它在祛痘的四个阶段均能发挥较好的作用。
在四黄最佳复方的基础上，通过去除大黄、添加连翘及桑黄水提物，得到五组复配中草药见表6。分别准确称取表6中的中草药组合f1至f5(桑黄水提物除外)，混匀后装入无纺布袋中，置于烧杯并加入100ml水作为提取溶剂，沸水浴1h，将水提液倒出后，中药包继续加入100ml水，沸水浴1h后取出，合并两次水提液，并将水提液浓缩至80g，制得5组复配中草药水提液(注：表中桑黄水提物为提取后在祛痘凝胶制备过程中加入)，并按上述方法制备出5组祛痘凝胶各100g。
表6复配中草药
制得的5组祛痘凝胶为f-1至f-5，按祛痘凝胶的性能测试方法分别测定dpph·自由基清除率、透明质酸酶抑制率、睾酮转化率及金黄色葡萄球菌抑菌实验，对实验数据进行整理得到表7。
“+”表示有菌生长，不抑菌；“-”表示无菌生长，有抑菌作用。
表7祛痘凝胶功效测试结果
由表7中祛痘凝胶的测试结果可以发现，5种祛痘凝胶对金黄色葡萄球菌都具有抑制作用。其中f-1是在四黄最佳复方f-2的基础上去除了大黄，将f-1与f-2的测试结果比较后可以发现，f-2抗氧化、抗炎、抑制5α-还原酶的效果都比f-1好；f-3增加了桑黄水提物，其对dpph·清除率和透明质酸酶抑制率均比f-2有大幅提升；f-4添加了对5α-还原酶有较好抑制作用的连翘，其睾酮转化率明显低于f-2；f-5是在四黄最佳复方f-2的基础上同时添加桑黄水提物与连翘，其对dpph·清除率和透明质酸酶抑制率明显提高，睾酮转化率显著降低。
综合以上分析可以发现，f-5即本发明产品在祛痘的四个方面均有较好的效果。
最终产品测试结果：
对dpph·清除率p为76.3％，透明质酸酶抑制率i为88.5％，睾酮转化率t为32.4％(小于1.5mg/ml爱普列特对应的转化率36.9％)，且培养基上无菌生长，有很好的抑菌效果。
祛痘凝胶的稳定性测试结果如表8：
表8感官及高低温实验
综合以上的分析可以发现，本发明的祛痘凝胶性能稳定，有显著的抗氧化、抗炎和抑菌作用，能较好抑制5α-还原酶的活性，降低睾酮转化率。
祛痘凝胶的试用反馈
问卷调查反馈：
通过对试用者的调查研究，整理了20位试用者试用40天后从产品的使用舒适感、消炎能力、祛痘效果、祛痘显效时间等方面对祛痘凝胶进行客观评价，具体结果如表9所示。
表9志愿者试用调查
皮肤测试结果：
通过皮肤测试仪对受试者在使用祛痘凝胶后的21天内皮肤的水分、油脂、色素的含量进行连续的测试，对测试结果进行统计后得到表10。表中的结果表明试用者皮肤中的水分含量由3％增加到7％；油份含量由19％降至15％；色素含量由45％降低至39％。即该产品的使用可以增加皮肤含水量、降低皮肤中的油分及色素含量。
表10皮肤测试结果。