一种四氯化碳食蟹猴急性肝损伤动物模型的构建方法与流程

本发明属于动物模型的构建方法，具体涉及到一种四氯化碳食蟹猴急性肝损伤动物模型的构建方法。

背景技术：

四氯化碳是主要侵犯肝脏毒物之一，易使肝脏发生脂肪变性和干细胞坏死，引起肝功能异常及中枢性麻痹症状，肾损害等表现。

四氯化碳是经典的实验性肝损伤动物模型所用外源性化合物，是使用最早、应用最广泛的肝纤维化诱导剂。四氯化碳在肝内代谢刺激产生脂质过氧化反应，引起活性自由基的形成，从而导致干细胞坏死、脂肪变性、炎症反应发生。低剂量长期应用四氯化碳可导致肝脏纤维化，这一过程与人类肝硬化的形成非常相似。

因此，建立一种更接近人类四氯化碳肝病的动物模型，尤其是构建具有四氯化碳肝脏病变进程的动物模型，利用该动物模型研究其发生机制，进而发现新的治疗靶点和药物，是具有非常重要的医学基础理论和临床应用价值。

公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种四氯化碳食蟹猴急性肝损伤动物模型的构建方法。

本发明所提供的技术方案是：

一种四氯化碳食蟹猴急性肝损伤动物模型的构建方法，包括以下步骤：

(1)选取健康成年3-5kg食蟹猴作为研究对象，随机分组，分别为空白组、模型组、阳性组(联苯双酯192mg/kg)、狗蚁草高、中、低剂量组(20、10、5g生药/kg)；空白组、模型组给予蒸馏水灌胃，其余各组给予相应的药物灌胃，5ml/kg，1次/d，连续10d，末次给药禁食不禁水，12h后除空白组，其余各组均腹腔注射0.2-1.5％ccl4花生油溶液，0.5-3.0ml/kg，12-20h后静脉取血，分离血清，测定alt、ast的含量；

(2)用穿刺枪对食蟹猴肝脏进行穿刺，将肝组织用4％多聚甲醛固定，he染色，观察其病理学改变。

作为优选，步骤(1)中所述的药物为联苯双酯或狗蚁草。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

本发明的食蟹猴急性肝损伤动物模型的构建方法时间短，成功率高，可以用于研究食蟹猴急性肝损伤的发生机理，便于筛选治疗食蟹猴急性肝损伤的药物以及评价药物对该食蟹猴急性肝损伤的药效，具有良好的应用前景。

附图说明

图1为不同浓度cci4对食蟹猴alt影响；

图2为不同浓度cci4对食蟹猴ast影响；

图3为狗蚁草乙酸乙酯提取物对食蟹猴急性肝损伤肝组织病变的影响(he，40×)；

其中，a-空白组；b-模型组；c-阳性组；d-狗蚁草乙酸乙酯高剂量组；e-狗蚁草乙酸乙酯中剂量组；f-狗蚁草乙酸乙酯低剂量组。

具体实施方式

下面结合具体例对本发明作进一步详细的说明。

实施例1：食蟹猴急性肝损伤模型的建立

1.1实验方法

取成年雄性食蟹猴12只，体重4kg左右。按体重随机分为空白对照组、四氯化碳高、中、低剂量组(ccl4浓度分别为1.04％、0.52％、0.26％)，每组3只。实验前禁食不禁水，12h后空白对照组腹腔注射生理盐水，模型组分别腹腔注射的相应浓度的四氯化碳花生油溶液，注射体积2ml/kg，给药完后的10h、12h、14h、16h、18h五个时间点静脉采血，分离血清，测定血清alt、ast的含量。通过数据分析比较，确定造模最佳剂量和取血时间点。

1.2实验结果

表1不同浓度cci4对食蟹猴血清alt含量影响

注：与空白组比较，*表示p<0.05，**表示p<0.01。

由表1、图1可知，1.04％浓度的ccl4可明显升高食蟹猴血清alt含量，当在造模后16h达到峰值，与空白组比较有显著差异。0.52％、0.26％浓度的ccl4对食蟹猴血清alt含量无影响。

表2不同浓度cci4对食蟹猴血清ast含量影响

注：与空白组比较，*表示p<0.05，**表示p<0.01。

由表2、图2可知，1.04％浓度的ccl4可明显升高食蟹猴血清ast含量，当在造模18h后达到峰值；0.52％、0.26％浓度的ccl4对食蟹猴血清ast含量无影响。

综上可得，16h是最佳的取血时间点；1.04％浓度的ccl4是引起食蟹猴急性肝损伤的最佳剂量。

实施例2：狗蚁草乙酸乙酯提取物对食蟹猴ccl4急性肝损伤血清alt、ast含量的影响

2.1实验方法

取健康食蟹猴(3.0-5.0kg、6-7岁)18只随机分组，分别为空白组、模型组、阳性组(联苯双酯192mg/kg)、狗蚁草高、中、低剂量组(20、10、5g生药/kg)，每组3只。空白组、模型组给予蒸馏水灌胃，其余各组给予相应的药物灌胃，5ml/kg，1次/d，连续10d，末次给药禁食不禁水，12h后除空白组，其余各组均腹腔注射1.04％ccl4花生油溶液，2ml/kg，16h后静脉取血，分离血清，测定alt、ast活性。用穿刺枪对食蟹猴肝脏进行穿刺，将肝组织用4％多聚甲醛固定，he染色，观察其病理学改变。

狗蚁草乙酸乙酯提取物的制备参照申请号201410667241.1的《一种狗蚁草乙酸乙酯提取物的制备方法》中的方法。

2.2实验结果

表3狗蚁草乙酸乙酯提取物对食蟹猴急性肝损伤alt、ast含量的影响

注：模型组与空白组比较，^△表示p<0.05；给药组与模型组比较，*表示p<0.05。

由表3可知，狗蚁草乙酸乙酯提取物高、中剂量组可显著降低急性肝损伤食蟹猴血清alt的含量，与模型组比较有显著差异；狗蚁草乙酸乙酯提取物高剂量可显著降低急性肝损伤食蟹猴血清ast的含量，与模型组比较有显著差异。结果有提示，狗蚁草乙酸乙酯提取物具有一定保肝降酶作用。

由图3可知，空白组中食蟹猴肝组织细胞排列整齐，形态完整，未见坏死、凋亡、脂肪变性等病理改变。模型组肝组织明显损伤，汇管区炎症细胞浸润严重，并伴有水肿、脂肪变性及胞浆凝聚等病理改变。狗蚁草乙酸乙酯与模型组比较，对肝组织损伤均有不同程度的改善，缩小细胞水肿和脂肪变性的范围，减轻炎症细胞浸润。

前述对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本发明限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。