喜来芝提取物的用途和美白水分露及其制备方法与流程

本发明涉及一种喜来芝提取物的用途和美白水分露及其制备方法，属于化妆品领域。

背景技术：

黑色素(melanin)主要由人体皮肤表皮基底层的黑色素细胞(melanocyte)产生，它能减小紫外线对皮肤的伤害。黑色素的含量及分布决定了皮肤的颜色。然而，黑色素在基底层的异常蓄积会造成色素沉着过度引起黑斑病、雀斑、老年斑等，影响人们的生活质量。随着对黑色素生物合成研究的不断深入，研究者发现酪氨酸酶在黑色素生物合成中扮演重要角色，它是酪氨酸和多巴向黑色素转变过程中的主要限速酶，它的过量表达是导致色素沉着过度的主要原因。因此，抑制酪氨酸酶的活性可以阻断黑色素的生物合成反应链，减少黑色素的生成，实现美白的效果。

针对黑色素生成的途径和影响因素，皮肤美白和皮肤护理的主要途径包括以下几个方面：(1)通过抑制皮肤黑色素细胞增殖，减少黑色素细胞生成的数量；(2)通过抑制皮肤黑色素生成的关键酶-酪氨酸酶的催化活性，降低黑色素的生物合成，达到美白的目的；(3)通过防晒，防止阳光中紫外线对皮肤的伤害(晒黑和晒伤)，减缓皮肤老化；(4)是通过使用抗氧剂去除皮肤中的氧自由基，减缓黑色素生成和减缓皮肤老化。

现有技术中，为了防止皮肤变黑、斑点、雀斑等，保持皮肤本来的洁白，人们提出了混合有氢醌、曲酸、熊果苷等各种美白剂的美白水分露。可是，如果大量混合这些物质，有时在使用感和安全性上产生问题。如氢醌对皮肤的刺激性非常大；曲酸易变色且对皮肤也有一定的刺激性；熊果苷作用单一和效果不佳等等。

随着人们对皮肤健康关注度的增高，开发具有安全稳定、效果明显且性价比高的天然美白剂，已成为当前医药和化妆品行业的主要研究方向之一，具有非常好的发展前景。

技术实现要素：

发明要解决的问题

鉴于现有技术中，氢醌对皮肤的刺激性非常大；曲酸易变色且对皮肤也有一定的刺激性；熊果苷作用单一和效果不佳等问题，本发明首先提供了喜来芝提取物用于抑制酪氨酸酶活性的用途。

本发明还提供一种美白水分露，能够减少黑色素生成，美白效果优异。另外，美白水分露还具有优异的保湿效果，且对人体无副作用。

进一步地，本发明还提供一种操作简单，原料易于获取的美白水分露的制备方法。

用于解决问题的方案

本发明提供喜来芝提取物用于抑制酪氨酸酶活性的用途。

根据本发明的用途，所述喜来芝提取物用于制备抑制酪氨酸酶活性的化妆品和/或护肤品的用途。

根据本发明的用途，所述喜来芝提取物的制备方法包括：将喜来芝原料粉碎后，利用水和醇进行提取的步骤；优选地，

所述喜来芝原料、水以及醇的质量比为1：0.05-5：0.05-5；和/或

所述提取的温度为80-100℃；和/或

所述提取的次数为1-5次；和/或

所述提取的时间为1-5小时。

本发明还提供一种美白水分露，其包括根据本发明的喜来芝提取物，以所述美白水分露的总质量计，所述喜来芝提取物的加入量为0.01-12％，优选为0.1-8％。

根据本发明的美白水分露，其中，所述美白水分露还包括保湿剂、增稠剂、ph调节剂、乳化剂、油脂、皮肤调理剂、抗氧化剂、螯合剂、防腐剂、芳香剂中的一种或两种以上的组合；其中，

以所述美白水分露的总质量计，所述保湿剂的加入量为0.01-20％；所述增稠剂的加入量为0.02-1.8％；所述ph调节剂的加入量为0.01-1％；所述乳化剂的加入量为0.01-2％；所述油脂的加入量为1-8％；所述皮肤调理剂的加入量为0.01-10％；所述抗氧化剂的加入量为0.01-2％；所述螯合剂的加入量为0.01-1％；所述防腐剂的加入量为0.01-1.5％；所述芳香剂的加入量为0.005-0.5％。

根据本发明的美白水分露，其中，所述保湿剂包括甘油、双丙甘醇、甘油聚醚-26、透明质酸钠、泛醇、peg/ppg-17/6共聚物、丁二醇、木糖醇、甜菜碱、甘油聚丙烯酸酯、丙二醇、甘露糖、海藻糖中的一种或两种以上的组合；和/或

所述油脂包括环五聚二甲基硅氧烷、环聚二甲基硅氧烷、聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷醇的复合物、油醇芥酸酯、牛油果树果脂、棕榈酸乙基己酯、氢化聚癸烯、环己硅氧烷、氢化聚异丁烯、c20-24烷基聚二甲基硅氧烷、c13-14异链烷烃、c12-15醇苯甲酸酯中的一种或两种以上的组合。

根据本发明的美白水分露，其中，所述增稠剂包括卡波姆、黄原胶、小核菌胶、山嵛醇、丙烯酰二甲基牛磺酸铵/vp共聚物、丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物、丙烯酸(酯)类/c10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物、丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物和异十六烷和聚山梨醇酯-60的复合物中的一种或两种以上的组合；和/或

所述ph调节剂包括氨甲基丙醇、精氨酸、柠檬酸、柠檬酸钠、氢氧化钠中的一种或两种以上的组合。

根据本发明的美白水分露，其中，所述乳化剂包括peg-20甲基葡糖倍半硬脂酸酯、山梨坦异硬脂酸酯、聚甘油-3甲基葡糖二硬脂酸酯、月桂醇聚醚-7、异硬脂醇聚醚-20中的一种或两种以上的组合；和/或

所述抗氧化剂包括维生素e、生育酚乙酸酯、丁羟甲苯、番茄红素、抗坏血酸乙基醚等中的一种或两种以上的组合。

根据本发明的美白水分露，其中，所述皮肤调理剂包括水解胶原蛋白、燕麦肽、神经酰胺3、墨角藻提取物、小球藻发酵产物、绿藻提取物、褐藻提取物、北美金缕梅水、红没药醇、尿囊素、白果槲寄生叶提取物、白茅根提取物、丝氨酸、巨藻提取物、β-葡聚糖、仙人掌提取物中的一种或两种以上的组合。

本发明还提供一种根据本发明的美白水分露的制备方法，其包括将所述美白水分露的各组分混合的步骤。

发明的效果

本发明的喜来芝提取物用于抑制酪氨酸酶活性的效果优异；

进一步地，本发明的美白水分露，能够减少黑色素生成，美白效果优异。另外，美白水分露还具有优异的保湿效果，且对人体无副作用。

另外，本发明美白水分露的制备方法的操作简单，原料易于获取。

附图说明

图1示出了喜来芝提取物的样品浓度-酪氨酸酶抑制率的关系图，其中样品浓度为喜来芝提取物的质量浓度；

图2示出了喜来芝提取物对酪氨酸酶活性的抑制机理测定的结果示意图；

图3示出了喜来芝提取物对酪氨酸酶活性的抑制类型测定的结果示意图；

图4示出了本发明应用实施例1-5以及应用对比例1-5的黑色素变化率的对比图。

具体实施方式

以下将详细说明本发明的各种示例性实施例、特征和方面。在这里专用的词“示例性”意为“用作例子、实施例或说明性”。这里作为“示例性”所说明的任何实施例不必解释为优于或好于其它实施例。

另外，为了更好地说明本发明，在下文的具体实施方式中给出了众多的具体细节。本领域技术人员应当理解，没有某些具体细节，本发明同样可以实施。在另外一些实例中，对于本领域技术人员熟知的方法、手段、器材和步骤未作详细描述，以便于凸显本发明的主旨。

第一实施方式

本发明的第一实施方式提供了喜来芝提取物用于抑制酪氨酸酶活性的用途。喜来芝提取物能够很好的抑制酪氨酸酶的活性，在化妆品中使用时，特别是在美白水分露中使用时，具有优异的美白效果。

喜来芝是一种长期通过微生物分解特定植物而形成的自然物质，主要存在于喜马拉雅山地区。它是一种有效且安全的膳食补充剂，恢复能量平衡并且可以预防某些疾病。喜来芝主要由腐植物质组成，包括黄腐酸，约占总营养化合物以及抗老化性质硒在内的微量元素的60％～80％。考虑到喜来芝作为独特的植物复合物，并且富含黄腐酸，以它具有的特性，如抗氧化剂，抗炎和记忆力增强而被熟知。

本发明的发明人发现，喜来芝提取物对酪氨酸酶的活性具有优异的抑制作用。酪氨酸酶抑制率会随着喜来芝提取物的质量浓度的增加而逐渐变大，达到一定程度时会趋于平衡。

在本发明中，喜来芝提取物的制备方法可以包括：将喜来芝原料粉碎后，利用水和醇进行提取的步骤，从而可以获得喜来芝提取液；优选地，

所述喜来芝原料、水以及醇的质量比为1：0.05-5：0.05-5，优选为1：0.1-4：0.1-4，更优选为1：0.2-2：0.2-2。当喜来芝原料、水以及醇的比例在1：0.05-5：0.05-5的范围内时，所获得的喜来芝提取物的有效成分较高，能够进一步有效抑制酪氨酸酶的活性。

在本发明中，所述提取的温度为80-100℃，优选90-100℃。所述提取的次数为1-5次，优选2-4次。所述提取的时间为1-5小时，优选2-4小时。一般而言，所述醇可以是甲醇、乙醇、丁二醇等。

进一步地，将获得的喜来芝提取液过滤并存放于储存罐，让储存罐中的滤液缓慢流入外循环罐和沉降罐进行浓缩，获得液体成分和沉淀物，将液体成分进行喷雾干燥，将沉淀物进行烘干后过80-100目筛，获得粒径合适的喜来芝提取物。

采用本发明的制备方法，制备获得的喜来芝提取物为棕色粉末，以质量计，灰分含量在10％以下，水分含量在5％以下，重金属含量在10ppm以下，铅含量在2ppm以下，砷含量在3ppm以下，细菌总数在1000cfu/g以下；霉菌和酵母菌的总数在100cfu/g以下，无沙氏门菌和大肠杆菌等细菌。

使用本发明的方法制备得到的喜来芝提取物，可以有效抑制酪氨酸酶的活性。

第二实施方式

本发明的第二实施方式提供一种包含第一实施方式的喜来芝提取物的美白水分露。以所述美白水分露的总质量计，所述喜来芝提取物的加入量为0.01-12％，优选为0.1-8％，例如：喜来芝提取物的加入量可以是1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、9％等。喜来芝提取物的加入量在0.01-12％之间时，使用美白水分露的皮肤中黑色素含量降低。当喜来芝提取物的加入量小于0.01％时，黑色素的含量降低少，不能起到美白的作用；当喜来芝提取物的加入量大于12％时，喜来芝提取物的含量过高，成本过高，且不能进一步增加美白的作用。

在本发明中，所述美白水分露还包括保湿剂、增稠剂、ph调节剂、乳化剂、油脂、皮肤调理剂、抗氧化剂、螯合剂、防腐剂、芳香剂中的一种或两种以上的组合；本发明的美白水分露的配方组成温和，可以使本发明的喜来芝提取物的功效得到充分发挥。具体而言：

以所述美白水分露的总质量计，所述保湿剂的加入量为0.01-20％，能够起到保湿补水的作用。为了使保湿剂的功效能够进一步发挥，本发明的保湿剂的加入量可以是1-18％，可以是2-16％，可以是3-14％，可以是4-15％，可以是5-14％，可以是6-13％，可以是7-12％。当保湿剂的含量低于0.01％时，保湿作用不明显；当保湿剂的含量高于20％时，会使美白水分露有黏腻感。

在本发明中，所述保湿剂包括甘油、双丙甘醇、甘油聚醚-26、透明质酸钠、泛醇、peg/ppg-17/6共聚物、丁二醇、木糖醇、甜菜碱、甘油聚丙烯酸酯、丙二醇、甘露糖、海藻糖中的一种或两种以上的组合。使用多种保湿剂的组合，能够使本发明的美白水分露具有更优异的保湿补水功效。

以所述美白水分露的总质量计，所述增稠剂的加入量为0.02-1.8％，例如所述增稠剂的加入量可以是0.1％、0.2％、0.4％、0.5％、0.6％、0.8％、1.0％、1.2％、1.5％等。当增稠剂的加入量在0.02-1.8％之间时，具有低粘稠感及优异的使用感，分散性好，吸收快。当增稠剂的加入量小于0.02％时，美白水分露的质地较稀，无任何粘稠感；当增稠剂的加入量大于1.8％时，美白水分露过于厚重，会增加皮肤的负担。

所述增稠剂包括卡波姆、黄原胶、小核菌胶、山嵛醇、丙烯酰二甲基牛磺酸铵/vp共聚物、丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物、丙烯酸(酯)类/c10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物、丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物和异十六烷和聚山梨醇酯-60的复合物中的一种或两种以上的组合。

本发明使用丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物和异十六烷和聚山梨醇酯-60的复合物等复合物增稠剂，可以改善美白水分露的稳定性。

以所述美白水分露的总质量计，所述ph调节剂的加入量为0.01-1％。通过添加ph调节剂，使美白水分露的ph值更适宜人体皮肤。作为优选，本发明的ph调节剂的加入量可以是0.03-0.8％，可以是0.06-0.5％，可以是0.1-0.3％等。当ph调节剂的加入量大于1％或者小于0.01％时，均不能获得ph值合适的美白水分露。所述ph调节剂包括氨甲基丙醇、精氨酸、柠檬酸、柠檬酸钠、氢氧化钠中的一种或两种以上的组合。

在本发明中，以所述美白水分露的总质量计，所述乳化剂的加入量为0.01-2％，例如：可以是0.1-1.5％，可以是0.5-1.2％等。本申请的乳化剂用量小于0.01％时，导致乳化不充分使得体系不稳定；乳化剂用量大于2％时，会对产品的稳定性也会造成一定的影响。

在本发明中，所述乳化剂包括peg-20甲基葡糖倍半硬脂酸酯、山梨坦异硬脂酸酯、聚甘油-3甲基葡糖二硬脂酸酯、月桂醇聚醚-7、异硬脂醇聚醚-20中的一种或两种以上的组合。

在本发明中，以所述美白水分露的总质量计，所述油脂的加入量为1-8％。例如所述油脂的加入量可以是1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％、6％、7％等。通过在美白水分露中添加油脂，可以减少皮肤表面水分的蒸发，防止皮肤干裂。另外，通过添加油脂，可以在皮肤表面形成疏水性薄膜，防止外部有害物质的侵入。当油脂的含量小于1％时，不能减少皮肤表面水分的蒸发，且不能有效防止有害物质的侵入；当油脂的含量大于8％时，使美白水分露过于油腻，使用感会有所下降。

在本发明中，所述油脂包括环五聚二甲基硅氧烷、环聚二甲基硅氧烷、聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷醇的复合物、油醇芥酸酯、牛油果树果脂、棕榈酸乙基己酯、氢化聚癸烯、环己硅氧烷、氢化聚异丁烯、c20-24烷基聚二甲基硅氧烷、c13-14异链烷烃、c12-15醇苯甲酸酯中的一种或两种以上的组合。

为了进一步提高本申请的美白水分露的功效，本发明的美白水分露还包含有所述皮肤调理剂。通过添加皮肤调理剂，可以镇定皮肤，从而对脸部肌肤受伤红肿有一定舒缓作用，且可以减少皱纹的产生。另外，本发明的美白水分露还可以改善肌肤出油状况，质地不油腻，可以调节水油平衡。

以所述美白水分露的总质量计，所述皮肤调理剂的加入量为0.01-10％。作为优选，所述皮肤调理剂的加入量可以是0.1-8％，可以是0.3-5％，可以是0.5-4％等。当皮肤调理剂的加入量小于0.01％时，无法起到相应的功效。

在本发明中，所述皮肤调理剂包括水解胶原蛋白、燕麦肽、神经酰胺3、墨角藻提取物、小球藻发酵产物、绿藻提取物、褐藻提取物、北美金缕梅水、红没药醇、尿囊素、白果槲寄生叶提取物、白茅根提取物、丝氨酸、巨藻提取物、β-葡聚糖、仙人掌提取物中的一种或两种以上的组合。

其中，燕麦肽是燕麦蛋白的片段和燕麦蛋白的组成部分。燕麦蛋白的功能独特，它的氨基酸种类均衡远胜其它谷物。燕麦蛋白分解后会产生质量较高的小分子肽，极易被皮肤吸收。燕麦肽具有抗氧化、增加肌肤活性、延缓肌肤衰老、保湿、减少皱纹、抗过敏等功效。

其中，神经酰胺3是一种脂质物质，它和构成皮肤角质层的物质结构相近，能很快渗透进皮肤，帮助皮肤天然保护层的更新，能促进自然水合作用的平衡，和角质层中的水结合，形成一种网状结构，锁住水分。

其中，β-葡聚糖为天然植物胶聚糖，本发明中，该成分也有一定抗敏抗炎等作用。β-葡聚糖能与大多数原料有较好配伍性，无过敏反应，还能提高皮肤保湿能力。另外，在本发明中β-葡聚糖还能起到抗氧化和保护皮肤免受紫外线伤害的作用，能够减少皮肤皱纹，提高皮肤抵御外界伤害的能力。

其中，尿囊素可以降低角质层细胞的粘着力，加速表皮细胞更新，增强皮肤的修复能力，并且其安全度高。

其中，巨藻提取物源自于巨藻，巨藻通过巨藻细胞的大量繁殖，使得巨藻提取物含有高含量的天然植物蛋白。因此，巨藻提取物具有补充细胞营养的功效，有效保湿的作用。

以所述美白水分露的总质量计，所述抗氧化剂的加入量为0.01-2％。本发明通过使用抗氧化剂，可以防止化妆品的油脂、蜡、烃类等油性成分接触空气中的氧，发生氧化作用，产生过氧化物、醛、酸等，使化妆品变色、酸败、质量下降等。所述抗氧化剂包括维生素e、生育酚乙酸酯、丁羟甲苯、番茄红素、抗坏血酸乙基醚等中的一种或两种以上的组合。

本发明的美白水分露还可以适当添加螯合剂。以所述美白水分露的总质量计，所述螯合剂的加入量为0.01-1％。所述螯合剂可以是edta二钠和/或edta四钠等。

另外，本发明的美白水分露中还含有防腐剂和芳香剂。以所述美白水分露的总质量计，本发明的美白水分露中的防腐剂的加入量为0.01-1.5％，所述芳香剂的加入量为0.005-0.5％。所述防腐剂可以包括苯氧乙醇、羟苯甲酯、羟苯丙酯、苯甲酸及其盐中的一种或两种以上的组合。所述芳香剂可以是香精等。

本发明的美白水分露不仅能够起到美白的作用，还具有保湿锁水，能够阻挡水分流失，为肌肤营造保湿屏障。同时，本发明的美白水分露对肌肤产生修护作用，活化肌肤的机能。

第三实施方式

本发明的第三实施方式提供了一种第二实施方式的美白水分露的制备方法，包括将所述美白水分露的各组分混合的步骤。

具体而言，所述的美白水分露的制备方法包括以下步骤：

1、将水、螯合剂、部分皮肤调理剂、保湿剂、部分增稠剂、乳化剂加入搅拌锅，搅拌并加热至80-85℃；

2、冷却至55-65℃，加入油脂、ph调节剂、剩余的增稠剂、抗氧化剂、部分防腐剂搅拌均匀；

3、冷却至40-50℃，加入喜来芝提取物、剩余的皮肤调理剂、剩余的防腐剂、芳香剂并搅拌均匀；

4、冷却至30-40℃，检验合格后出料，静置12-24小时；

5、检验合格后，分装、包装，再检验，成品入库。

实施例

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

在实施例中，喜来芝提取物的制备方法为：

将喜来芝原料粉碎后，加入到提取罐内，在100℃的温度下加入水和乙醇，其中，喜来芝原料、水和乙醇的质量比为4:3:3，煮提取3次，每次2.5小时，获得喜来芝提取液。之后将获得的喜来芝提取液过滤并存放于储存罐，让储存罐中的滤液缓慢流入外循环罐和沉降罐进行浓缩，获得液体成分和沉淀物，将液体成分进行喷雾干燥，将沉淀物进行烘干后过80-100目筛，获得喜来芝提取物，然后对喜来芝提取物进行检测，灰分含量为7％，水分含量为4％。

实施例1-5

将喜来芝提取物溶于5个不同体积的ph为6.8的磷酸缓冲液中，得到5个不同浓度的测试溶液。进行抑制酪氨酸酶活性测试时，喜来芝提取物的质量浓度如下表1所示。

抑制酪氨酸酶活性测试

酪氨酸酶活性以催化l-多巴生成多巴醌的酪氨酸酶活力来衡量。具体为：

取1支试管，加入底物l-多巴溶液0.4ml(1.0mg/ml)，并添加ph为6.8的磷酸缓冲液2.4ml，30℃水浴保温10min后，然后加入酪氨酸酶的量为0.2ml(250u/ml)，得到反应液1。

取1支试管，加入酪氨酸酶的量为0.2ml(250u/ml)，并添加ph为6.8的磷酸缓冲液2.8ml，得到反应液2。

分别在5支试管中加入底物l-多巴溶液0.4ml(1.0mg/ml)，然后分别加入2.4ml实施例1-5的测试溶液，30℃水浴保温10min后，然后加入酪氨酸酶的量为0.2ml(250u/ml)，得到反应液3。

分别在5支试管中加入2.4ml实施例1-5的测试溶液，并添加ph为6.8的磷酸缓冲液0.4ml，30℃水浴保温10min后，然后加入酪氨酸酶的量为0.2ml(250u/ml)，得到反应液4。

酶促反应将l-多巴转化为红色产物多巴醌，在475nm处有最大吸收。读取从混匀开始1min时在475nm处的吸光度a475，酶促反应的速度用每分钟a475的增加值来表示。测定上述反应液在反应开始1min时在475nm处的吸光度a，并按如下公式计算酪氨酸酶活性的抑制率，结果如表1和图1所示。其中，表中喜来芝提取物的质量浓度均为喜来芝提取物在测试体系中的终质量浓度。

抑制率＝[1-(a3-a4)/(a1-a2)]×100％

式中：a1为不添加喜来芝提取物，仅含有底物时的吸光度；

a2为不添加喜来芝提取物，且不添加底物时的吸光度；

a3为含有喜来芝提取物与底物时的吸光度；

a4为含有喜来芝提取物，且不添加底物时的吸光度。

表1

由表1和图1可以看出，喜来芝提取物对酪氨酸酶的活性具有优异的抑制作用。并且对酪氨酸酶的抑制率会随着喜来芝提取物的质量浓度的增加而逐渐变大，在喜来芝提取物的质量浓度大于2mg/ml时，会逐渐趋于平衡。

对比例1

取5个不同体积的ph为6.8的磷酸缓冲液作为对比例1的测试溶液。其中，进行抑制酪氨酸酶活性的抑制机理测定时，喜来芝提取物的质量浓度为0mg/l(表2所示)。

实施例6-9

将4份喜来芝提取物分别溶于5个与对比例1对应体积的ph为6.8的磷酸缓冲液中，得到4组与对比例1对应的不同浓度的测试溶液。进行抑制酪氨酸酶活性的抑制机理测定时，喜来芝提取物的质量浓度如下表2所示。

喜来芝提取物抑制酪氨酸酶活性的抑制机理测定

分别在25支试管中加入底物l-多巴溶液0.4ml(1.0mg/ml)，然后加入2.4ml对比例1和实施例6-9的测试溶液，30℃水浴保温10min后，分别添加0.2ml、0.16ml、0.12ml、0.08ml、0.04ml酪氨酸酶(250u/ml)，并全部添加ph为6.8的磷酸缓冲液至终体积3.0ml，得到反应液m。

分别在25支试管中加入2.4ml对比例1和实施例6-9的测试溶液，30℃水浴保温10min后，分别添加0.2ml、0.16ml、0.12ml、0.08ml、0.04ml酪氨酸酶(250u/ml)，并全部添加ph为6.8的磷酸缓冲液至终体积3.0ml，得到反应液n。其中，表中喜来芝提取物的质量浓度、酪氨酸酶的浓度均为喜来芝提取物在测试体系中的终质量浓度。

测定上述反应液m和反应液n在反应开始1min时的475nm处的吸光度a，按下述公式计算得到δ1a475，具体结果如下表2所示：

δ1a475＝am-an

其中，am为含有喜来芝提取物与底物时的吸光度；

an为含有喜来芝提取物，且不添加底物时的吸光度。

然后，以酪氨酸酶的浓度(u/ml)为横坐标，酶初反应速度(吸光度的变化率δ1a475)为纵坐标，作出对比例1和实施例6-9的酪氨酸酶的浓度-吸光度的变化率曲线，结果如图2所示。

具体地，如果实施例6-9的酪氨酸酶的浓度-吸光度的变化率曲线与对比例1的酪氨酸酶的浓度-吸光度的变化率曲线相交于原点处，判定为可逆性抑制；如果实施例6-9的酪氨酸酶的浓度-吸光度的变化率曲线与对比例1的酪氨酸酶的浓度-吸光度的变化率曲线平行且不经过原点，判定为不可逆抑制。

表2

由表2和图2可以看出，喜来芝提取物在抑制酪氨酸酶活性时具有可逆性。

对比例2

取5个不同体积的ph为6.8的磷酸缓冲液作为对比例2的测试溶液。其中，进行对酪氨酸酶的抑制类型测定时，喜来芝提取物的质量浓度为0mg/l(表3所示)。

实施例10-13

将4份喜来芝提取物分别溶于5个与对比例2对应体积的ph为6.8的磷酸缓冲液中，得到4组与对比例2对应的不同浓度的测试溶液。进行对酪氨酸酶的抑制类型测定时，喜来芝提取物的质量浓度如下表3所示。

喜来芝提取物对酪氨酸酶的抑制类型测定

分别在25支试管中加入0.4ml、0.32ml、0.24ml、0.16ml、0.08ml的底物l-多巴溶液(1.0mg/ml)，然后分别加入2.4ml对比例2和实施例10-13的测试溶液，并添加ph为6.8的磷酸缓冲液至终体积2.8ml，30℃水浴保温10min后，然后加入酪氨酸酶的量为0.2ml(250u/ml)，得到反应液m。

分别在25支试管中加入2.4ml对比例2和实施例10-13的测试溶液，并添加ph为6.8的磷酸缓冲液0.4ml，30℃水浴保温10min后，然后加入酪氨酸酶的量为0.2ml(250u/ml)，得到反应液n。其中，表中喜来芝提取物的质量浓度、底物l-多巴的摩尔浓度均为喜来芝提取物在测试体系中的终质量浓度。

测定上述反应液m和反应液n在反应开始1min时的475nm处的吸光度am和an，按下述公式计算得到δ2a475，具体结果如下表3所示：

δ2a475＝am-an

其中，am为含有喜来芝提取物与底物时的吸光度；

an为含有喜来芝提取物，且不添加底物时的吸光度。

以底物浓度的倒数为横坐标，酶初反应速度(吸光度的变化率δ2a475)的倒数为纵坐标作底物浓度的倒数-吸光度的变化率的倒数的双倒数曲线。

具体地，如果实施例10-13的双倒数曲线与对比例1的双倒数曲线相交于纵坐标轴上，并且横坐标的截距随着喜来芝提取物浓度的增加而变小时，说明该抑制作用，并不影响酶促反应的最大速度，可以判定为竞争性抑制。

如果实施例10-13的双倒数曲线与对比例1的双倒数曲线相交于横坐标处，并且纵坐标的截距，随着喜来芝提取物的浓度的增加而变大，可以判定为非竞争性抑制。

如果实施例10-13的双倒数曲线与对比例1的双倒数曲线相交于第二象限处(非坐标轴上)，并且与纵坐标的截距，随着喜来芝提取物浓度的增加而变大，可以判定为混合型抑制。

表3

由表3和图3可以看出，喜来芝提取物对酪氨酸酶活性的抑制兼具竞争性和非竞争性的特点，为混合型抑制。

应用实施例1-5

根据下表4-5中的应用实施例1-5的美白水分露配方中各组分的含量(质量百分比)，并按照下述生产工艺步骤制备得到美白水分露。生产工艺步骤如下：

1、将a相加入搅拌锅，搅拌并加热至82-85℃；

2、冷却至60℃，加入b、c相搅拌均匀；

3、冷却至42℃，加入d相并搅拌均匀；

4、冷却至37℃，检验合格后出料，静置24小时；

5、检验合格后，分装、包装，再检验，成品入库。

注：工艺中的a、b、c、d相分别为

a相：水、edta二钠、尿囊素、甘露糖、丁二醇、甘油、透明质酸钠、黄原胶、丙烯酸(酯)类/c10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物、泛醇、甜菜碱、peg-20甲基葡糖倍半硬脂酸酯；

b相：聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷醇的复合物、氢化聚异丁烯、环聚二甲基硅氧烷、环己硅氧烷、生育酚乙酸酯、丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物和异十六烷和聚山梨醇酯-60的复合物、羟苯甲酯；

c相：氨甲基丙醇；

d相：喜来芝提取物、燕麦肽、丝氨酸、神经酰胺3、β-葡聚糖、巨藻提取物、苯氧乙醇、香精。

配方中，甘露糖、丁二醇、甘油、透明质酸钠、泛醇、甜菜碱是保湿剂；

黄原胶、丙烯酸(酯)类/c10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物、丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物和异十六烷和聚山梨醇酯-60的复合物是增稠剂；

聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷醇的复合物、氢化聚异丁烯、环聚二甲基硅氧烷、环己硅氧烷是油脂；

peg-20甲基葡糖倍半硬脂酸酯是乳化剂；氨甲基丙醇是ph调节剂。

燕麦肽、丝氨酸、神经酰胺3、β-葡聚糖、巨藻提取物、尿囊素是皮肤调理剂；

edta二钠是螯合剂；生育酚乙酸酯是抗氧化剂；

苯氧乙醇、羟苯甲酯是防腐剂；香精是芳香剂。

本发明中，丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物和异十六烷和聚山梨醇酯-60的复合物，生产厂家：赛比克公司，牌号：simugelfl。

聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷醇的复合物，生产厂家：美国道康宁公司，牌号：pmx-1403硅油。

表4应用实施例1-5

应用对比例1-5

根据下表5中的应用对比例1-5的水分露配方中各组分的含量(质量百分比)，并按照与应用实施例1-5相同的方法，制备得到水分露。

表5应用对比例1-5

美白功效测试

皮肤黑色素变化率的测试方法：通过测定特定波长的光照在人体皮肤上后的反射量来确定皮肤中黑色素的含量。探头的发射器发出波长分别为568nm、660nm、和880nm三种波长的光照射在皮肤表面，接受器测得皮肤反射的光，并测定被皮肤吸收的光的量，从而可以得出皮肤黑色素的变化率。

皮肤黑色素变化率的测试采用德国ck公司的色素检测仪进行测试，其中，皮肤黑色素的测试探头mx18由光源发射器和接收器组成，另有弹簧以保持检测时对皮肤的压力恒定。探头的测量范围是0-999，测量数值越高，可以说明皮肤中黑色素的含量越高。

受试者人数为33人，试验周期为4周，试验选取应用实施例1-5的美白水分露以及应用对比例1-5的水分露，每天早晚涂抹于前臂内侧的不同区域，分别测定实验前(day1)和使用28天时(day28)的受试区域的皮肤在特定波长的光照后的反射量以确定皮肤中黑色素的含量，进而表征黑色素的变化率，具体黑色素的变化率的结果如图4所示。

由图4可以看出，本申请的应用实施例1-5的黑色素的变化率较大，即黑色素含量降低，因此，使用喜来芝提取物能够有效美白皮肤。

本申请的应用对比例1-5中，在不使用喜来芝提取物时，其黑色素含量变化率小，黑色素含量降低少，甚至有所增长，因此，应用对比例1-5的美白效果较差。

本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。