基于烟酰胺衍生物的局部组合物的制作方法

文档序号:22256102发布日期:2020-09-18 13:42阅读:75来源:国知局
发明领域本发明涉及局部组合物,更特别是涉及用于抗微生物益处的局部组合物。发明背景人们通常努力照顾好自己以享受健康的生活方式。通常,这包括照顾他们的外表面,如皮肤、头皮、毛发和口腔。人们努力照顾他们的外表面的一种方式是通过使用递送各种各样益处的局部组合物,如例如无头皮屑的头皮,粗壮浓厚的毛发,没有龋齿、恶臭的口腔,和抗微生物益处,即保持外表面没有微生物,如细菌和一些真菌。人们面临的许多(如果不是全部)问题都与暴露于微生物如细菌和一些真菌有关。例如,头皮屑与真菌微生物有关。同时,龋齿和恶臭也通常与细菌在口腔中的存在有关。另外,存在常见于人类皮肤的表面上的细菌,如例如大肠杆菌(e.coli)和金黄色葡萄球菌(s.aureus)。虽然这些细菌当存在于皮肤上时不是致病性的,然而如果它们经由摄入进入人体,它们可变成致病性的。因此,人们通常想要摆脱或至少最少化暴露于有害或可变得有害的微生物。人们努力获得这一点的一种方式是通过在感染已经来临之后施用抗微生物化合物。而另一种方式是将很小量的诱导生成抗微生物肽(amp)(如例如来自皮肤的牛皮癣素)的化合物留在外表面上,如例如皮肤上。amp构成皮肤的自身防御系统的不可或缺的部分。amp最初是在昆虫和动物中发现的,并且从其最初被发现时开始amp就被认为是有前景的抗微生物剂。amp在自然界中无处不在,并且其通常表现出广谱的对抗侵入性细菌、真菌、包膜病毒和寄生虫的活性(braff和gallo,2006)。amp通常是短肽,并且据报道在人类中存在约90种不同的amp。描述用于生成amp的化合物如烟酰胺的一些参考文献见于现有技术中。wo2015/172801(unilever,2015)公开了烟酰胺用于触发在皮肤上产生amp的新用途。这具有在改善皮肤、头皮和口腔对抗微生物的攻击的免疫力方面的应用。尽管存在技术,但是人们通常展望将通过生成amp来递送改善的抗微生物益处,从而改善皮肤、头皮和口腔的免疫力的新技术。因此,需要提供新技术,如例如通过amp生成而提供改善的抗微生物益处的化合物和包含这样的化合物的局部组合物。因此,本发明的一个目的是提供包含当施用到人类皮肤上时通过amp生成而提供改善的抗微生物益处的化合物的局部组合物。已经发现式i的化合物当施用到人类皮肤时通过amp生成提供抗微生物益处,由此满足上述目的中的一个或多个。技术实现要素:在第一方面,本发明涉及一种局部组合物,其包含0.001至10重量%的式i的化合物,其中r为环烷基中的碳原子总数在4至6范围内的环烷基。在第二方面,本发明涉及一种消毒表面的方法,其包括将第一方面的组合物施用到所述表面上的步骤,其中所述表面为人体的外表面。在第三方面,本发明涉及第一方面的组合物用于当施用到人体的外表面上时获得抗微生物益处的用途。在第四方面,本发明涉及第一方面的组合物用于当施用到人体的外表面上时诱导amp生成的用途。在第五方面,本发明涉及式i的化合物用于当施用到人体的外表面上时获得抗微生物益处的用途,其中r为环烷基中的碳原子总数在4至6范围内的环烷基。本发明的一个方面的任何特征可用于本发明的任何其它方面。词语“包含”旨在表示“包括”,但不一定是“由...组成”或“由...构成”。换句话说,所列步骤或选项不需要是穷举性的。除非是在操作和比较实施例中,或在另外明确指出的情况下,否则本说明书中指示材料的量或反应条件、材料的物理特性和/或用途的所有数字均应理解为由词语“约”修饰。以“x至y”格式表示的数字范围应理解为包括x和y。当针对特定特征以“x至y”格式描述多个优选范围时,应当理解还预期组合不同端点的所有范围。具体实施方式在第一方面,本发明涉及一种局部组合物,其包含式i的化合物:其中r为环烷基中的碳原子总数在4至6范围内的环烷基。式i的化合物的实例包括其中环烷基中的碳原子总数为下述的化合物:-4,即n-环丁基尼克酰胺,-5,即n-环戊基尼克酰胺;和-6,即n-环己基尼克酰胺。优选的式i的化合物为上述提及的三种化合物中的任一种。更优选的式i的化合物为其中环烷基中的碳原子数为5的,即n-环戊基尼克酰胺。组合物包含按重量计0.001至10%、优选0.002至8%、更优选0.005至8%、甚至更优选0.01至6%、仍然更优选0.05至5%,还更优选0.1至4%,进一步更优选0.5至3%,最优选1至1.5%的式i的化合物。优选地,组合物进一步包含选自烟酰胺、吡啶酰胺和异尼克酰胺的至少一种成分。优选地,所述成分是烟酰胺。烟酰胺,也称为尼克酰胺,是烟酸的酰胺形式。其是见于食品中的维生素。其也用作食品补充剂。烟酰胺具有以下化学结构:吡啶酰胺和异烟酰胺是烟酰胺的异构体,具有以下结构:当存在时,组合物包含0.001至10%,优选0.005至8%,更优选0.01至6%,甚至更优选0.05至5%,进一步更优选0.1至4%,还更优选0.5至3%和仍然更优选1至1.5%的烟酰胺或吡啶酰胺或异尼克酰胺。如果同时存在这三种化合物中的多于一种,则组合物中可以包含的这些化合物的总量按重量计在0.001至10%,优选0.005至8%,更优选0.01至6%,甚至更优选0.05至5%,进一步更优选0.1至4%,还更优选0.5至3%和仍然更优选1至1.5%的范围内。用于合成式i的化合物的优选方案:首先,在无水二氯甲烷(dcm)中制备烟酸溶液。在惰性气氛下,在0℃下,将丙基膦酸酐(t3p,在乙醇中)、三乙醇胺(tea)和环烷胺加入该溶液中。所述环烷胺可选自环丁胺、环戊胺和环己胺。最优选的是环戊胺。然后在约25℃下搅拌该反应混合物6至24小时,更优选8至20小时,最优选10至14小时。在如优选地通过薄层色谱法(tlc)监测反应完成之后,将反应物质优选地分配在dcm和水之间。然后分离各层,并再次在10%甲醇和/或dcm中萃取水层。然后用水、盐水溶液洗涤合并的萃取物,并经na2so4干燥。然后将溶剂蒸发到干燥。最后纯化粗产物以获得纯的式1的化合物。组合物优选进一步包含化妆品可接受的基质。所述化妆品可接受的基质优选为乳霜、洗液、凝胶或乳液的形式。可以使用不同的化妆品可接受的乳化或非乳化基质制备组合物。一种高度合适的基质是乳霜。雪花膏(vanishingcream)是特别优选的。雪花膏基质通常包含脂肪酸和皂的混合物。雪花膏基质赋予皮肤高度受关注的哑光感(mattyfeel)。在雪花膏基质中,c12至c20脂肪酸是特别优选的,进一步更优选的是c14至c18脂肪酸。最优选地,脂肪酸为硬脂酸或棕榈酸或其混合物。脂肪酸通常为hystricacid,其基本上为(通常90至95重量%)45%硬脂酸和55%棕榈酸的混合物。因此,包含hystricacid及其皂以制备本发明的组合物是在本发明的范围内。组合物中的脂肪酸按组合物的重量计优选以5至20%,更优选6至19%和甚至更优选7至17%的量存在。雪花膏基质中的皂包括脂肪酸的碱金属盐,如钠盐或钾盐,最优选的是硬脂酸钾。雪花膏基质中的皂通常以组合物的0.1至10重量%,更优选0.1至3重量%的量存在。通常,雪花膏基质局部组合物通过取期望量的总脂肪物质并与期望量的氢氧化钾混合来制备。皂通常在混合过程中原位形成。特别合适的化妆品可接受的基质是包含油包水乳液的基质,所述油包水乳液包含硅油作为连续相。油包水乳液优选包含交联的硅酮弹性体共混物。将硅酮弹性体共混物包含在油包水乳液中可以用作制备本发明组合物的化妆品可接受的基质。虽然可以使用硅酮流体,但是特别优选交联的硅酮弹性体。与硅酮流体聚合物相比,弹性体的物理性质通常取决于交联的数量,而不是分子量。硅酮弹性体溶胀的能力使其成为油相的理想增稠剂。当施用于皮肤或毛发时,弹性体具有非常光滑和柔软的感觉。它们还可以用作化妆品组合物中的香味剂、维生素和其他添加剂的递送剂。可商购且适合包含在本发明的组合物中且发现提供增强的稳定性的合适的硅酮弹性体共混物或凝胶是:dowel-8051in硅酮有机弹性体共混物[inci名:新戊酸异癸酯(和)二甲聚硅氧烷/双异丁基ppg-20交联聚合物];el-8050[inci名:异十二烷(和)二甲聚硅氧烷/双异丁基ppg20交联聚合物];dc9040,dc9041,dc9045(二甲聚硅氧烷交联聚合物);dc9506,dc9509(二甲聚硅氧烷乙烯基二甲聚硅氧烷交联聚合物);和shin-etsuksg-15,ksg-16,ksg-17(二甲聚硅氧烷乙烯基二甲聚硅氧烷交联聚合物)。进一步优选的是,组合物包含5至50重量%的硅酮弹性体。也可以使用水和/或醇作为化妆品可接受的基质。醇可以是一元醇或多元醇。一元醇通常是短链,其意味着它们含有至多6个碳,实际上,最常见是乙醇或有时是异丙醇。多元醇通常包括乙二醇或丙二醇,或者可以使用同系物如二甘醇。化妆品可接受的基质通常按组合物的重量计为10至99.9%,优选50至99%。优选地,组合物进一步包含亮肤剂。在组合物中可以使用的亮肤剂的实例包括12-羟基硬脂酸、芦荟提取物、乳酸铵、熊果苷、壬二酸、曲酸、丁基羟基茴香醚、丁基羟基甲苯、柠檬酸酯、3-二苯基丙烷衍生物、2,5-二羟基苯甲酸及其衍生物、鞣花酸、茴香提取物、吡喃葡糖基-1-抗坏血酸、葡萄糖酸、乙醇酸、绿茶提取物、氢醌、4-羟基茴香醚及其衍生物、4-羟基苯甲酸衍生物、羟基辛酸、柠檬提取物、亚油酸、磷酸抗坏血酸酯镁、桑树根提取物、2,4-间苯二酚衍生物、3,5-间苯二酚衍生物、水杨酸、维生素(如维生素b6、维生素b12、维生素c、维生素a)、二羧酸、间苯二酚衍生物、羟基羧酸(如乳酸)及其盐(如乳酸钠)、及其混合物。优选地,组合物进一步包含一种或多种防晒剂。可以加入可以适合地与基质一起使用的任何防晒剂。可以优选地加入uva和uvb防晒剂两者。本发明的组合物可以优选地包含uv-a防晒剂,其是二苯甲酰甲烷或其衍生物。优选的二苯甲酰甲烷衍生物选自4-叔丁基-4'-甲氧基二苯甲酰甲烷、2-甲基二苯甲酰甲烷、4-甲基-二苯甲酰甲烷、4-异丙基二苯甲酰甲烷、4-叔丁基二苯甲酰甲烷、2,4-二甲基二苯甲酰甲烷、2,5-二甲基二苯甲酰甲烷、4,4'-二异丙基-二苯甲酰甲烷、2-甲基-5-异丙基-4'-甲氧基二苯甲酰甲烷、2-甲基-5-叔丁基-4'-甲氧基-二苯甲酰甲烷、2,4-二甲基-4'-甲氧基二苯甲酰甲烷或2,6-二甲基-4-叔丁基-4'-甲氧基-二苯甲酰甲烷。最优选的二苯甲酰甲烷衍生物是4-叔丁基-4'-甲氧基二苯甲酰甲烷。本发明的组合物优选地包含基于组合物的总重量0.1至10重量%,更优选0.2至5重量%,还更优选0.4至3重量%的二苯甲酰甲烷或其衍生物,并且包括其中包括的所有范围。组合物也可以优选地包含选自肉桂酸、水杨酸、二苯基丙烯酸及其衍生物的种类的uv-b有机防晒剂。可商购且可用于包含在本发明的组合物中的uv-b防晒剂的说明性非限制性实例是奥替柳酯tm、胡莫柳酯tm、neohelipantm、奥克立林tm、氧苯酮tm或parsolmcxtm。uv-b防晒剂最优选是2-乙基-己基-4-甲氧基肉桂酸酯,其可作为parsolmcxtm商购。uv-b有机防晒剂优选地以组合物的0.1至10重量%,更优选0.1至7重量%包含在组合物中。已经观察到有机uv-b防晒剂如2-乙基-己基-4-甲氧基肉桂酸酯的存在导致在紫外线辐射存在下uv-a二苯甲酰甲烷防晒剂进一步快速降解。发现迷迭香酸酯化合物的存在即使在存在uv-b防晒剂时也在使组合物稳定化方面非常有效。可用的无机防晒霜(sun-block)也优选地用于本发明中。这些包括例如氧化锌、氧化铁、二氧化硅(如热解二氧化硅)和二氧化钛。组合物可以进一步包含防腐剂以使免于潜在有害微生物的生长。适用于本发明的组合物的传统防腐剂是对羟基苯甲酸的烷基酯。最近已经开始使用的其他防腐剂包括乙内酰脲衍生物、丙酸盐和各种季铵化合物。特别优选的防腐剂是苯氧乙醇、尼泊金甲酯、尼泊金丙酯、咪唑烷基脲、脱氢乙酸钠、苄醇、烷二醇,最优选1,2-辛二醇和苯氧乙醇。应当考虑组合物的用途和防腐剂与其他成分之间可能的不相容性而选择防腐剂。防腐剂优选地以组合物的0.01重量%至2重量%的量使用。可以将各种其他任选材料配制到组合物中。这些可以包括:抗微生物剂,如2-羟基-4,2',4'-三氯二苯醚(三氯生)、2,6-二甲基-4-羟基氯苯、和3,4,4'-三氯碳酸替苯胺;磨砂和去角质颗粒,如聚乙烯和二氧化硅或氧化铝;清凉剂,如薄荷醇;皮肤舒缓剂,如芦荟;和着色剂。此外,组合物可以还包含0至10重量%的遮光剂和珠光剂,如二硬脂酸乙二醇酯、二氧化钛或621(苯乙烯/丙烯酸酯共聚物);其均可用于增强产品的外观或性质。组合物中可以使用的除水以外的稀释剂可以包括液体或固体润肤剂、溶剂、湿润剂、增稠剂和粉剂。这些类型的载体各自的实例,其可以单独或者作为一种或多种载体的混合物使用,如下:优选地,组合物包含润肤剂。可以存在的润肤剂的实例包括硬脂醇、单蓖麻油酸甘油酯、貂油、鲸蜡醇、异硬脂酸异丙酯、硬脂酸、棕榈酸异丁酯、硬脂酸异鲸蜡酯、油醇、月桂酸异丙酯、月桂酸己酯、油酸癸酯、十八烷-2-醇、异鲸蜡醇、二十烷醇、山嵛醇、棕榈酸鲸蜡酯、硅油(如二甲基聚硅氧烷)、癸二酸二正丁酯、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸异丙酯、硬脂酸丁酯、聚乙二醇、三甘醇、羊毛脂、可可脂、玉米油、棉籽油、橄榄油、棕榈仁油、菜籽油、红花籽油、月见草油、豆油、葵花籽油、鳄梨油、芝麻籽油、椰子油、花生油、蓖麻油、乙酰化羊毛脂醇、凡士林、矿物油、肉豆蔻酸丁酯、异硬脂酸、棕榈酸、亚油酸异丙酯、乳酸月桂酯、乳酸肉豆蔻酯、油酸癸酯、肉豆蔻酸肉豆蔻酯。优选地,组合物包含溶剂,如乙醇、异丙醇、丙酮、乙二醇单乙醚、二甘醇单丁醚、二甘醇单乙醚及其混合物。有利地,组合物可以优选地包含成分如杀细菌剂、维生素、抗痤疮活性物质;抗皱、抗皮肤萎缩和皮肤修复活性物质、皮肤屏障修复活性物质、非甾体化妆品舒缓活性物质、人工晒黑剂和加速剂、皮脂刺激剂、皮脂抑制剂、抗氧化剂、蛋白酶抑制剂、紧肤剂、止痒成分、毛发生长抑制剂、5-α还原酶抑制剂、脱皮酶增强剂、抗糖化剂、及其混合物。组合物可以优选地包含粉末,如例如白垩、滑石、漂白土、高岭土、淀粉、树胶、胶体二氧化硅、聚丙烯酸钠、四烷基和/或三烷基芳基铵蒙脱石、化学改性的硅酸镁铝、有机改性的蒙脱石粘土、水合硅酸铝、热解二氧化硅、羧乙烯基聚合物、羧甲基纤维素钠、单硬脂酸乙二醇酯、及其混合物。本发明的组合物可以包含宽范围的其他任选组分。ctfa个人护理成分手册(ctfapersonalcareingredienthandbook,第2版,1992),其全部内容通过引入并入本文,描述了在皮肤护理工业中常用的各种各样的非限制性的个人护理和药物成分,其适于在本发明的组合物中使用。实例包括:抗氧化剂、粘合剂、生物添加剂、缓冲剂、着色剂、增稠剂、聚合物、收敛剂、香味剂、湿润剂、遮光剂、调理剂、ph调节剂、天然提取物、精油、皮肤感觉剂、皮肤舒缓剂和皮肤愈合剂。组合物也可包含以下成分中的一种或多种:例如苄索氯铵(bec)、苯扎氯铵(bkc)、氯二甲苯酚、吡啶硫酮锌(zpt)、肌酸和肌酸酐。组合物优选为洗去型或免洗型组合物的形式,优选免洗型组合物。洗去型组合物优选是指旨在/需要在施用组合物如例如洗手组合物和洗脸组合物之后,通过用溶剂(优选水)洗涤而从身体除去的组合物。免洗组合物优选是指不需要在施用组合物如例如护肤霜、润肤液、手消毒剂(handsanitizer)和除臭剂之后从人体除去的组合物。当组合物为免洗型组合物的形式时,该组合物可以为除臭剂、手消毒剂、洗剂、乳霜和身体喷雾剂的形式。本发明的组合物可以优选包含常规除臭剂基质作为化妆品可接受的载体。除臭剂是指可以用于个人除臭益处(例如,在腋下区域施用)的在棒状的、滚抹的或推进剂介质中的产品,其可以含有或可以不含有止汗剂活性物质。除臭剂组合物通常可以是硬固体、软固体、凝胶、霜剂和液体的形式,并且使用适于组合物的物理特性的施用器分配。通过滚抹递送的除臭剂组合物通常包含液体载体。这样的液体载体可以是疏水性的或者包含亲水性和疏水性液体两者的混合物。它们可以是乳液或微乳液的形式。液体载体或载体混合物通常构成组合物的30至95重量%,并且在很多情况下40至80重量%。疏水性液体载体通常可以包含选自以下化学类别中的一种或多种材料:具有不超过25℃的熔点和至少100℃的沸点的硅氧烷、烃、支链脂族醇、酯和醚。可用于本文的组合物中的亲水性载体液体通常包括水和/或一元或多元醇或水可混溶同系物。一元醇通常是短链,这意味着其含有至多6个碳,并且实践中最常见是乙醇或有时是异丙醇。多元醇通常包括乙二醇或丙二醇,或可使用同系物如二甘醇。除此之外,可以加入适用于除臭剂组合物的其他载体和组分。当组合物是手消毒剂的形式时,化妆品可接受的基质可以包括醇和水。最优选的醇是乙醇和异丙醇。甚至两种或更多种醇的混合物也可优选地用于手消毒剂组合物中。醇的量优选为手消毒剂组合物的50至95重量%,更优选60至80重量%,最优选65至80重量%。在第二方面,本发明还提供了清洁或消毒表面的方法,其在免洗型组合物的情况下包括施用第一方面的组合物的步骤,其中所述表面是人体的外表面。如果组合物是洗去型组合物的形式,则该方法任选地包括从表面至少部分地除去组合物的另外的步骤。优选地,至少部分除去组合物的步骤在将组合物施用到人体的外表面上的步骤之后的不到5分钟内进行。优选地,方法是非治疗性的。在第三方面,本发明进一步提供第一方面的组合物用于在施用到人体的外表面上时获得抗微生物益处的用途。抗微生物益处优选是指杀死或至少引起常见致病性微生物大量减少的能力。常见致病性革兰氏阳性生物包括葡萄球菌属(staphylococcusspp.)、链球菌属(streptococcusspp.)和肠球菌属(enterococcusspp.)。常见致病性革兰氏阴性生物中的一些包括大肠杆菌、沙门氏菌属、克雷伯氏菌属和志贺氏菌属。大肠杆菌和沙门氏菌属可引起严重的胃肠疾病。本发明的组合物提供在施用到人体的外表面上时改善的抗微生物益处。本发明的组合物提供长期/持久的抗微生物益处。在第四方面,本发明还提供第一方面的组合物用于当施用到人体的外表面上时诱导生成amp的用途。在第五方面,本发明还提供式i的化合物用于当施用到人体的外表面上时获得抗微生物益处的用途,其中r为环烷基中的碳原子总数在4至6范围内的环烷基。人体的外表面包括皮肤、头皮、毛发和口腔。已经发现通过本发明,式i的化合物激活角化细胞(其是皮肤表皮中的主要细胞)以提供本发明的益处,即诱导分泌amp。这导致增强了对抗微生物的保护屏障。因此包含式i的化合物的组合物通过增强身体自身的防御而为身体提供了对抗感染的保护。换句话说,式i的化合物使身体表面准备好微生物保护。这个的优势是使得其提供了对抗微生物的持久保护(例如,至多24小时的保护)。本发明的组合物的用途可以优选地是用于手部卫生。组合物的预期用途可以用于治疗性或非治疗性目的。然而,本发明的组合物的优选预期用途是非治疗性的和/或美容性的。本发明还提供了式i的化合物与选自烟酰胺、吡啶酰胺和异尼克酰胺的至少一种化合物的组合用于诱导生成amp的用途。有关本发明的组合物的优选项同样适用于根据本发明的用途。现将通过以下非限制性实施例示范本发明。实施例实施例1:其中环烷基中的碳原子总数为5的式i的化合物(即,n-环戊基尼克酰胺)的合成材料:烟酸(sigma目录号c115002),丙基膦酸酐(t3p;aldrich,目录号87801),二氯甲烷无水物(dcm;sigma,目录号270997),三乙醇胺,乙酸乙酯,甲醇,硫酸钠无水物()。实验程序:在惰性气氛下,在0℃下,向烟酸(1g,8.12mmol,1当量)在无水dcm(10vol)中的搅拌溶液中加入丙基膦酸酐(t3p)(3.87g,在etoac中的50%溶液,12.18mmol,1.5当量)、tea(2.46g,24.3mmol,3当量)和环戊胺(0.76g,8.93mmol,1.1当量)。然后在约25℃下搅拌反应混合物约12小时。在如通过薄层色谱法(tlc)监测反应完成之后,将反应物质分配在dcm和水之间。分离层,并再次在10%meoh/dcm中萃取水层。将合并的提取物用水、盐水溶液洗涤,并干燥(na2so4)。将溶剂蒸发到干燥;通过用在石油醚(petether)中的50%乙酸乙酯进行biotageisolera洗脱来纯化粗产物以提供作为无色粘稠液体(1.15g,产率75%)的最终化合物,纯度为97.72%。展示在存在或不存在烟酰胺的情况下,用n-环戊基尼克酰胺,即式i的化合物处理之后,人角质形成细胞生成牛皮癣素(一种抗微生物肽)的体外实验:使用以下方案进行该实验:步骤1:人新生儿原代皮肤角质形成细胞(nhek)细胞获自使用传代3至4次的上述细胞进行该实验。然后将细胞接种(35,000个细胞/孔)在含有获自的角质形成细胞生长培养基(kgm)的24孔板中。随后将板在37±2℃下,在co2培养箱中培养48小时。步骤2:培养48小时之后,通过将培养基更换为补充有2mm氯化钙溶液的新鲜kgm,而诱导细胞分化。接着,在37±2℃下,在co2培养箱中培养48小时。步骤3:随后,采用补充有2mm氯化钙溶液的角质形成细胞生长培养基,用不同浓度(如下表1所列)的n-环戊基尼克酰胺处理细胞。表1:步骤4:在上述处理之后,将细胞再次在37±2℃下,在co2培养箱中培养72小时。步骤5:在培养72小时之后,将来自每个孔的细胞培养物上清液收集在无菌管中。然后,将样品储存在-80℃下,直至用于使用获自的牛皮癣素elisa试剂盒(编号:cy-8073),通过标准elisa技术测试牛皮癣素分泌。在目前的实验中,将牛皮癣素用作amp的标记物。步骤6:通过使用来自每个样品的100μl细胞培养物上清液,实施elisa方法。数据按照超过对照(没有处理:实施例a)的倍数变化表示。将在对照(实施例a)的情况下牛皮癣素水平的倍数变化当作等于1倍。在所有其它实施例中列出的由于处理而获得的牛皮癣素的任何倍数变化都超过且高于从对照获得的1倍变化。例如,实施例c显示倍数变化为1.4倍,其是指0.4倍超过且高于从对照获得的1倍。同样,实施例5显示倍数变化为2.84,其是指1.84倍超过且高于从对照获得的1倍。结果总结在下表2中:表2:实施例倍数变化a1b0.9c1.412.0622.84从上表明显的是,当与对照相比时,n-环戊基尼克酰胺在牛皮癣素生成方面提供好得多的倍数变化。当以相同浓度,即200μg/ml使用时,n-环戊基尼克酰胺(实施例1)提供与烟酰胺(实施例b)相比好得多的牛皮癣素的倍数变化。当n-环戊基尼克酰胺以一定浓度,即400μg/ml使用时(实施例2),其提供高达2.84的牛皮癣素的倍数变化。另一方面,更高浓度的烟酰胺,即500μg/ml(实施例c)显示等于仅1.4的倍数变化。因此,n-环戊基尼克酰胺提供改善的amp生成,由此提供改善的抗微生物益处。总之,在与对照(没有处理)相比和与已知化合物如例如烟酰胺对amp的生成相比时,式i的化合物在施用到人类皮肤时通过amp生成提供改善的抗微生物益处。并且,式i的化合物与选自烟酰胺、吡啶酰胺、异尼克酰胺及其混合物的化合物的组合提供amp的协同生成。当前第1页12
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