合成的汗液组合物、汗液气味试剂盒和使用方法与流程

相关申请的交叉引用

本申请要求2019年2月8日在美国专利商标局提交的美国非临时专利申请号16/271,335的优先权，该申请要求2018年2月13日在美国专利商标局提交的美国临时专利申请号62/630,007的优先权。其公开内容通过引用以其整体并入本文。

本发明涉及合成的汗液组合物、汗液气味试剂盒和使用方法。

背景技术：

人造或合成的汗液组合物用于人类健康的生物学研究、用于纺织品气味减轻的工业研究和用于个人护理产品的工业研究。许多这样的组合物用于确定对出汗的色牢度，例如aatcc15人造汗液测试方法(aatcc测试方法15-2007，"colorfastnesstoperspiration(对出汗的色牢度)")。虽然这些人造汗液组合物确实含有许多人类外分泌汗液的组分，但是它们忽略了引起人类恶臭的顶质分泌汗液和正常皮肤微生物群落的组分。一些最近的人造汗液制剂已试图纠正这种遗漏。这些组合物主要打算用于化妆品和除臭剂工业。然而，这些组合物极其复杂，并且一些含有直接的人副产物，例如从抽脂术和腋窝拭子获得的脂肪(harvey，c.j.等人(2010)formulationandstabilityofanovelartificialhumansweatunderconditionsofstorageanduse.toxicol.invitro24,1790-1796；callewaert,c.等人(2014)artificialsweatcompositiontogrowandsustainamixedhumanaxillarymicrobiome.journalofmicrobiologicalmethods103,6-8)。

虽然这些组合物与实际的人类汗液最接近类似，但是它们太复杂并且由于涉及人体废物而具有潜在的危险。

没有专门评价由模拟"使用"条件的织物中微生物产生的气味的测试。可以使用穿着试验来评价纺织品上累积的气味，但是它们昂贵、耗时并且由于参与者的个体气味特征而遭受变化。

因此，需要快速、简单但还更全面的人造汗液，其将允许与人类恶臭相关的细菌存活，并且将促进它们产生特征性人类恶臭的正常代谢过程。

技术实现要素：

本发明涉及合成的汗液组合物、汗液气味试剂盒和使用方法。

在本发明的实施方案中，合成的汗液组合物通常包含外分泌汗液的气味前体和顶质分泌汗液的气味前体。

在本发明的实施方案中，合成的汗液组合物通常包含盐、弱酸、缓冲系统、氨基酸、富含蛋白质的培养基、丰富的营养物来源、尿素和甾体汗液化合物。

在本发明的实施方案中，提供了汗液气味试剂盒。本发明的汗液气味试剂盒包含具有顶质分泌汗液典型的营养物和代谢物的合成的汗液组合物，以及与引起身体气味的人皮肤微生物群落相关的细菌或微生物的混合物(也称为混杂物)。该试剂盒提供由相关细菌产生的气味，以评价例如用抗微生物剂或气味捕获技术处理的纺织品上的气味减轻。

在本发明的实施方案中，所述汗液气味试剂盒包含：(a)合成的汗液组合物，所述组合物包含：盐、弱酸、缓冲系统、氨基酸、富含蛋白质的培养基、丰富的营养物来源、尿素和甾体汗液化合物；以及(b)引起气味的微生物的混合物。

在本发明的实施方案中，所述汗液气味试剂盒包含：(a)汗液气味组合物，所述组合物包含nacl、乳酸、na2hpo4、l-组氨酸单盐酸盐(c6h9n3o2·hcl·h2o)、富含蛋白质的培养基、丰富的营养物来源、尿素和甾体汗液化合物；以及(b)引起气味的微生物或细菌的混合物，所述微生物或细菌选自杰氏棒杆菌(corynebacteriumjeikeium)、纹带棒杆菌(corynebacteriumstriatum)、干燥棒杆菌(corynebacteriumxerosis)、表皮葡萄球菌(staphylococcusepidermidis)、bhib培养基、藤黄微球菌(micrococcusluteus)、丙酸杆菌属(propionibacterium)、腐生葡萄球菌(staphylococcussaprophyticus)、普通变形杆菌(proteusvulgaris)、金黄色葡萄球菌(staphylococcusaureus)及其组合。

在本发明的实施方案中，提供了使用所述合成的汗液组合物和/或合成的汗液试剂盒的气味评价的方法。所述方法通常包括将合成的汗液组合物与引起身体气味的微生物或细菌的混合物组合，将所述组合施加到纺织品上，温育所述纺织品，和建立气味测量(包括但不限于气味小组、gc-顶空分析或备选的分析技术)以评级每种纺织品的气味。

本发明的其它应用领域将从下文提供的详细描述中变得显而易见。应当理解，详细描述和具体实例虽然指示了本发明的优选实施方案，但仅意图用于说明的目的，而不意图限制本发明的范围。

附图说明

从详细描述和附图中，将更充分地理解本发明，附图不一定按比例绘制，其中：

图1是聚酯织物合成汗液气味强度小组评级的图示。

具体实施方式

本发明的实施方案的以下描述本质上仅是示例性的，并且决不意图限制本发明、其应用或用途。本发明具有广泛的潜在应用和效用，其预期可适用于广泛的行业。本文中仅通过实例的方式提供以下描述，用于提供本发明的能够实现的公开内容的目的，但不限制本发明的范围或实质。

合成的汗液组合物

在本发明的实施方案中，合成的汗液组合物包含外分泌汗液的气味前体和顶质分泌汗液的气味前体。

在本发明的实施方案中，合成的汗液气味组合物通常包含盐(包括但不限于nacl、cacl2和mgcl2)、与汗液分泌物相关的弱酸(包括但不限于乳酸和乙酸)、缓冲系统(包括但不限于磷酸盐或tris缓冲液)、氨基酸(包括但不限于组氨酸、半胱氨酸和苯丙氨酸)、丰富的营养物来源(包括但不限于脑心浸液肉汤(bhib)、胰蛋白酶大豆肉汤(tsb))、富含蛋白质的培养基(包括但不限于牛血清白蛋白(bsa)、胎牛血清(fbs))、尿素和甾体汗液化合物。

在本发明的实施方案中，合成的汗液气味组合物包含：0.5%-10%(重量/重量)的盐、0.05%-5%(重量/重量)的与汗液分泌物相关的弱酸、0.05%-5%的缓冲系统、0.01%-2%的个别氨基酸、0.001%-0.1%的富含蛋白质的培养基(如牛血清白蛋白或胎牛血清)、0.05%-2%的尿素、0.0005%-0.01%的甾体汗液化合物(如5,16-雄甾二烯-3β-醇)和1%-5%的丰富的营养物来源(脑心浸液肉汤、胰蛋白酶大豆肉汤等)。

在本发明的实施方案中，合成的汗液组合物包含：0.5%-10%(重量/重量)的nacl、0.05%-5%(重量/重量)的乳酸、0.05%-5%的na2hpo4、0.01%-2%(重量/重量)的l-组氨酸、0.001%-0.1%的牛血清白蛋白、0.05%-2%的尿素、0.0005%-0.01%的5,16-雄甾二烯-3β-醇和1%-5%的脑心浸液肉汤。

本发明的合成的汗液气味组合物优选ph在4-5范围内。

汗液气味试剂盒

在本发明的实施方案中，提供了汗液气味试剂盒。本发明的汗液气味试剂盒包含：具有顶质分泌汗液典型的营养物和代谢物的合成的汗液组合物，以及与引起身体气味的人皮肤微生物群落相关的细菌的混合物(也称为混杂物)。

根据本发明的实施方案，微生物的混杂物对于在人皮肤上发现的那些是典型的。这样的引起气味的微生物的非限制性实例选自杰氏棒杆菌、纹带棒杆菌、干燥棒杆菌、表皮葡萄球菌、bhib培养基、藤黄微球菌、丙酸杆菌属、腐生葡萄球菌、普通变形杆菌、金黄色葡萄球菌及其组合。微生物混杂物可以在10⁴-10⁷cfu/ml范围内存在。

根据本发明的实施方案，汗液气味试剂盒包含：(a)汗液气味组合物，所述组合物包含nacl、乳酸、na2hpo4、l-组氨酸单盐酸盐(c6h9n3o2·hcl·h2o)、富含蛋白质的培养基、丰富的营养物来源、尿素和甾体汗液化合物；以及(b)引起气味的微生物或细菌的混合物，所述微生物或细菌选自杰氏棒杆菌、纹带棒杆菌、干燥棒杆菌、表皮葡萄球菌、bhib培养基、藤黄微球菌、丙酸杆菌属、腐生葡萄球菌、普通变形杆菌、金黄色葡萄球菌及其组合。

试剂盒提供由相关的微生物产生的气味，以评价例如用抗微生物剂或气味捕获技术处理的纺织品上的气味减轻。

气味评价方法

在本发明的实施方案中，提供了气味评价方法，以测试人造汗液允许细菌存活和通过正常代谢过程而产生气味的能力。所述方法通常包括将汗液组合物与微生物引入到测试织物上，以评价温育周期后存在的气味。利用本发明的合成的汗液气味组合物和微生物混杂物，有可能使用本发明的方法来鉴定可为穿着者提供在使用后其织物中较少的气味的纺织品处理。

在本发明的实施方案中，提供了用于气味评价的方法。所述方法通常包括将合成的汗液组合物与引起身体气味的微生物或细菌的混合物组合，将所述组合施加到纺织品上，温育所述纺织品，和建立气味测量(包括但不限于气味小组、gc-顶空分析或备选的分析技术)以评级每种纺织品的气味。

本发明的方法和合成的汗液气味试剂盒可用于在实验室控制的环境中快速且廉价地评价纺织品处理，以显示由在人皮肤上发现的微生物引起的气味减少。

在本发明的方法和试剂盒的优点中的是它们提供了快速、一致和廉价的穿着研究的替代方案，以评价纺织品上的防臭处理。合成的汗液组合物模拟人类汗液的许多组分，包括在皮肤上(特别是腋窝区域上)发现的微生物。利用本发明的试剂盒提供评价和评分在温育周期期间由暴露于合成的汗液气味的织物所释放的气味的方法。通过利用本发明的方法代替穿着试验，可以节省时间和金钱。由于人类独特的身体化学和气味特征，需要大群的穿着者来实现实验室评价可以提供的一致结果。

实施例1

本发明的合成的汗液气味组合物如下制备。

在测试前制备了下列化合物的预混合物("aatcc15汗液")，并高压灭菌(121℃/15psi/20分钟)。以等分试样取出aatcc15汗液，以制备用于评价的本发明的合成的汗液气味组合物。将aatcc15汗液的等分试样加入到无菌管中。向每个等分试样中加入：1mg/ml牛血清白蛋白(来自100mg/ml储存液)；0.1%尿素(来自10%储存液)；100μg/ml的5,16-雄甾二烯-3β-醇的dmso溶液(来自25mg/ml储存液)；含有汗液微生物混杂物(参见下文微生物制备)的脑心浸液肉汤，至浓度为最终汗液气味混杂物的2%。该汗液混杂物模拟在人体(如死皮细胞)上发现的营养物。

微生物混杂物制备：通过用一个充满适当的储用培养物的接种环接种含有胰蛋白酶大豆琼脂的单独的板，制备测试生物体，并在37℃±2℃下温育至少24小时，直到菌落可见。可以将板在4℃±2℃下储存1个月。

温育后，如下制备用于研究的接种物。在每一种汗液生物体(杰氏棒杆菌、纹带棒杆菌(2个菌株)、干燥棒杆菌和表皮葡萄球菌)的接种环上取个体cfu并加入到具有9ml的bhib的管中。将这些生物体加入到人造汗液组合物中，以实现2%浓度的营养物。最终的合成的汗液组合物中的生物体的总数经检验在10⁵-10⁶cfu/ml范围内。

气味评价程序：

为了气味评价的目的，将合成的汗液直接移液到具有气味处理的织物上。将织物固定在封闭容器中，并在36℃下将样品温育48-72小时，或直到在未经处理的或对照织物样品中可辨别出汗液样气味。

在激发时间(通常48-72小时)之后，建立气味小组，以按0-10的等级来评级小瓶中的每种织物的气味，其中0是没有气味，且10是强烈的、令人不愉快的气味。气味小组包括至少5个与测试不相关的个体。

在气味小组评价织物的气味之后。

本发明的汗液试剂盒已经用于在各种织物和处理上评价防臭处理。已经表明细菌群体以正关系对应于气味小组评分。

实施例2

1.汗液气味组合物：

汗液气味利用外分泌型汗液的基础(例如aatcc15中的酸性出汗，参见以下制剂)。在测试前制备该外分泌汗液气味制剂并高压灭菌(121℃/15psi/20分钟)。

每1l去离子水的外分泌基础汗液制剂：

10g氯化钠

1g乳酸

1gna2hpo4

0.25gl-组氨酸单盐酸盐(c6h9n3o2·hcl·h2o)

ph应为4.3℃±0.2

以等分试样取出外分泌基础汗液，以制备用于评价的全部合成的汗液气味混杂物。将外分泌基础汗液的等分试样加入到无菌管中。向每个等分试样中加入：

·1mg/ml(0.01%)牛血清白蛋白(来自100mg/ml储存液)

·0.1%尿素(来自10%储存液)

·100μg/ml(0.001%)5,16-雄甾二烯-3β-醇的dmso溶液(来自25mg/ml储存液)

·含有汗液微生物混杂物(见下文微生物制备)的脑心浸液肉汤，至浓度为最终汗液气味混杂物的2%。这模拟在人体(如死皮细胞)上发现的营养物。

2.微生物混杂物制备：

通过用一个充满适当的储用培养物的接种环接种含有胰蛋白酶大豆琼脂的单独的板，制备测试生物体混杂物，并在37℃±2℃下温育至少24小时，直到菌落可见。将板在4℃±2℃下储存1个月。温育后，如下制备接种物用于研究：在每一种汗液生物体(杰氏棒杆菌、干燥棒杆菌、纹带棒杆菌(2个菌株)和表皮葡萄球菌)的接种环上取个体cfu并加入到具有9ml的bhib的管中。将这些生物体加入到人造汗液混合物(以上详述)中，以实现2%浓度的营养物。最终的汗液气味混杂物中的生物体的总数在10⁵-10⁶cfu/ml范围内。

3.气味评价程序：

a.将合成的汗液直接移液到具有气味处理的织物上。将织物固定在封闭容器中，并在36℃下将样品温育48-72小时，或直到在未经处理的或对照织物样品中可辨别出汗液样气味。

b.在激发时间(通常48-72小时)之后，建立气味小组，以按0-10的等级来评级小瓶中的每种织物的气味，其中0是没有气味，且10是强烈的、令人不愉快的气味。气味小组包括至少5个与测试不相关的个体。

c.在气味小组评价织物的气味之后，如果期望生物体计数，其以优选方式进行。

实施例3

为了检测汗液气味制剂是否起作用，用各种浓度的各种气味控制制剂处理聚酯织物，并用实施例2所提及的汗液配方和程序测试织物。气味强度评级示于图1中。气味强度用0-10的10点等级评级，其中0为无气味，且10为极强气味。图1清楚地表明，由织物评级的气味强度在织物之间不同，这取决于气味控制制剂。还发现，在大多数重复中，气味强度一致，表明该测试是用于织物气味控制性能评价的可靠且可重复的测试。

因此，本领域技术人员将容易理解，本发明容许广泛的效用和应用。在不脱离本发明的实质或范围的情况下，除了本文描述的那些之外，本发明的许多实施方案和修改以及许多变化、改变和等效布置将从本发明及其前述描述中显而易见或合理地暗示。因此，尽管本文已经关于其优选实施方案详细描述了本发明，但是应当理解，本公开内容仅仅是本发明的说明性和示例性的，并且仅仅是为了提供本发明的完整和能够实现的公开内容的目的而做出的。前述公开内容不意图或不被解释为限制本发明或以其它方式排除任何这样的其它实施方案、修改、变化、改变和等效布置。