ALB基因及其激动剂在制备治疗肝癌药物中的用途的制作方法

本发明涉及一种alb基因激动剂在制备治疗肝癌药物中的用途，尤其是alb基因低表达型肝癌。

背景技术：

恶性肿瘤是威胁人民健康的最大危险因素之一，我国每年仅肿瘤死亡人数近200万人，恶性肿瘤造成的经济损失高达1400多亿元人民币。在中国，肝癌在恶性肿瘤里，发病率排第三，仅次于肺癌和胃癌，但死亡例数排第二，仅次于肺癌。目前肝癌的治疗方法可分四大块，第一是外科手术(包括肝切除术和肝移植术)，第二是血管介入，第三是局部消融治疗(包括射频、微波、冷冻、无水酒精注射等等)，最后是放化疗和分子靶向治疗、生物治疗等。但在我国，80％以上的肝癌都是晚期才能发现，病人往往已经失去手术机会。而目前很多临床药物的靶点也面临快速耐药性。

化疗是治疗恶性肿瘤最重要的手段之一，然而，肿瘤细胞对化疗药物产生耐药常常最终导致化疗失败。耐药性是指是指病原体及肿瘤细胞等对化学治疗药物敏感性降低。当药物不能杀死或抑制病原时，抗药性一词等于药物剂量失败或药物耐受。靶点耐药是肿瘤治疗的主要难题。肿瘤细胞耐药性分为内在性(未接触药物时已存在的)和获得性(接触药物后产生的)两大类。一般来说，对一种抗肿瘤药物产生耐药性，可能会对结构和功能相似的药物产生交叉耐药性，但对其他非同类型的药物仍敏感。近年来发现在培养液中接触某种化疗药物而产生耐药的细胞株，对其他结构上无关、作用机制不同的药物也产生耐药，这种广谱耐药现象称为多药耐药性。

alb(白蛋白)alb蛋白在人血液里广泛存在，ncbiid：213，其主要功能是调节血浆胶体渗透压，也是很多内源因子诸如：激素，脂肪酸，其它代谢物，以及外源药物的载体蛋白。

关于alb表达量低与肝癌瘤株对brd4抑制剂之间的尚未报道。

技术实现要素：

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种alb基因激动剂在制备治疗肝癌药物中的用途，尤其是alb基因低表达型肝癌，用于解决现有技术中alb基因低表达型肝癌治疗效果不佳的问题。

基于研究发明人发现通过检测肝癌样株中alb的表达水平，可以识别出alb低表达的肝癌株，并可进一步预测出该类肝癌株能用alb激动剂进行治疗。为实现上述目的及其他相关目的，发明人提供了以下方案：

本发明提供一种alb基因激动剂在制备或者筛选治疗肝癌药物中的用途。

进一步地，所述肝癌为alb基因低表达型肝癌。

上述alb基因低表是与肝癌瘤株的其它亚型比较，表达量差一个数量级以上(10倍为一个数据级)，具体数据参考测序数据的得结果tpm<1000(tpm值指每百万细胞中的转录本数)。

上述治疗药物至少具有以下功能之一：抑制肿瘤细胞的增值、血管增生、抑制肿瘤形成、血管形成。

上述alb基因激动剂可以上调alb基因的表达。

所述药物必然包括alb基因激动剂，并以alb基因激动剂作为前述功用的有效成分。

所述药物中，发挥前述功用的有效成分可仅为alb基因激动剂，亦可包含其他可起到类似功用的分子。

亦即，alb基因激动剂为所述药物的唯一有效成分或有效成分之一。

所述药物可以为单成分物质，亦可为多成分物质。

所述药物的形式无特殊限制，可以为固体、液体、凝胶、半流质、气雾等各种物质形式。

所述药物主要针对的对象为哺乳动物，如啮齿类动物、灵长类动物等。

本发明的另外一个方面提供了一种治疗alb基因低表达型肝癌的药物，所述药物中包含有效治疗量的alb基因激动剂。

所述药物必然包括alb基因激动剂，并以alb基因激动剂作为前述功用的有效成分。

所述药物中，发挥前述功用的有效成分可仅为alb基因激动剂，亦可包含其他可起到类似功用的分子。

亦即，alb基因激动剂为所述药物的唯一有效成分或有效成分之一。

所述药物可以为单成分物质，亦可为多成分物质。

所述药物的形式无特殊限制，可以为固体、液体、凝胶、半流质、气雾等各种物质形式。

所述药物主要针对的对象为哺乳动物，如啮齿类动物、灵长类动物等。

本发明的另外一个方面提供了一种治疗肝癌的方法，为向对象施用alb基因激动剂。

所述的对象可以为哺乳动物或哺乳动物的肝癌细胞。所述哺乳动物优选为啮齿目动物、偶蹄目动物、奇蹄目动物、兔形目动物、灵长目动物等。所述灵长目动物优选为猴、猿或人。

所述对象可以是罹患肝癌的患者或者期待治疗肝癌的个体。或者所述对象为肝癌患者或者期待治疗肝癌的个体的离体肝癌细胞。

所述alb基因激动剂可以在接受肝癌治疗前、中、后向对象施用。

本发明的另外一方面，提供一种肝癌联合治疗药物组合，包括治疗有效量的dhrs2抑制和至少一种其他肝癌治疗药物。

所述联合治疗药物组合可以是以下形式中的任意一种：

一)将alb基因激动剂和其他肝癌治疗药物分别制成独立的制剂，制剂的剂型可相同或不同，给药途径亦可相同或不同。

当其他肝癌治疗药物为抗体时，一般采用胃肠外给药型。当其他肝癌治疗药物为化学药物时，给药形式可以比较丰富，可以是胃肠道给药亦可以是非胃肠道给药。一般推荐针对各化学药物的已知给药途径给药。

二)将alb基因激动剂和其他肝癌治疗药物配置成复方制剂，在将alb基因激动剂和其他肝癌治疗药物采用相同给药途径给药并同时施加时，可采用将两者配置成复方制剂的形式。

本发明的另外一方面，提供一种治疗肝癌的方法，为向对象施用有效量的alb基因激动剂以及向对象施用有效量的其他肝癌治疗药物和/或向对象实施其他肝癌治疗手段。

可以同步地或顺序地给予有效量的alb基因激动剂和至少一种有效量的其他肝癌治疗药物。

基于alb为本发明首次发现的肝癌治疗靶点，在与alb基因激动剂以外的其他肝癌治疗药物联合用药中，至少可以起到疗效相加的效果，进一步增强对于肝癌的治疗作用。

其他的肝癌治疗药物包括但不限制于：抗体药物、化学药物或靶向型药物等。

所述alb基因激动剂可以是胃肠道给药或者胃肠外给药。所述其他肝癌治疗药物可以是胃肠道给药或者胃肠外给药。对于抗体药物，一般采用胃肠外给药。

本发明另外一个方面，提供alb基因激动剂在制备具有以下任一项或多项作用的药物中的用途：抑制肝癌细胞的增殖速率、改变肝癌细胞周期分布、促进肝癌细胞凋亡，抑制肝癌组织生长。

本发明的另外一个方面提供了alb在制备或者筛选肝癌诊断试剂中的用途。

进一步地，所述肝癌为alb低表达型肝癌。

进一步地，所述alb为生物标志物。例如，血清生物标志物。

上述内容包括两方面，其一：alb用于制备alb基因低表达型肝癌诊断试剂，是指将alb作为alb基因低表达型肝癌诊断指标应用于alb基因低表达型肝癌诊断试剂的制备，可将alb作为标准品或者阳性对照，用于血清中alb的检测；其二：alb用于筛选alb基因低表达型肝癌是指将alb作为alb基因低表达型肝癌识别靶标筛选特异性识别alb的试剂，从而作为alb基因低表达型肝癌诊断试剂，来检测alb基因低表达型肝癌。

本发明的另外一个方面提供了alb的特异性识别剂在诊断肝癌中的用途。alb可以作为一种生物标志物。

进一步地，所述肝癌为alb低表达型肝癌。

本发明的另外一个方面提供了alb特异性识别剂在制备诊断肝癌的诊断试剂中的用途。

进一步地，所述肝癌为alb低表达型肝癌。

alb特异性识别剂是指能够特异性结合alb的抗体或者配体。进一步地，所述抗体是单克隆抗体或者多克隆抗体。

本发明的另外一个方面提供了一种alb基因低表达型肝癌的诊断试剂，所述试剂盒中含有特异性识别alb的试剂。

如上所述，本发明的alb基因激动剂在制备治疗alb基因低表达型肝癌药物中的用途，具有以下有益效果：

通过研究发现，alb低表达型肝癌样株使用激动剂激活alb，能有效抑制肝癌生长，其有效率达到50％以上。

附图说明

图1显示为实施例一中alb低表达型瘤株中alb激活后以及未激活后肝癌细胞增殖情况。

图2显示人类蛋白数据库中alb表达的组织示意图。

具体实施方式

以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。须知，下列实施例中未具体注明的工艺设备或装置均采用本领域内的常规设备或装置。

在进一步描述本发明具体实施方式之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围；在本发明说明书和权利要求书中，除非文中另外明确指出，单数形式“一个”、“一”和“这个”包括复数形式。

当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。

alb，白蛋白，其序列可参考ncbi.id：213

研究发现：alb在正常组织中的rna数据显示其仅在肝组织中有表达，alb在不同的肝癌亚型的表达值的差异，该发明可特异地针对alb低表达的瘤株类型。实验发现，针对alb基因低表达型肝癌进行内源性激活可以使得alb基因低表达型肝癌细胞的增值得到显著的抑制，因此对alb基因低表达型肝癌治疗具有显著的治疗意义。

alb基因激动剂

alb基因激动剂具有上调alb基因表达的功能的物质。可对于alb基因具有激动作用包括但是不限于：提高alb基因的转录或者表达。

利用alb基因的激动剂为主要活性成份或者主要活性成份之一制备的肿瘤治疗药物。通常，药物中除了有效成份，根据不同剂型的需要，还会包括一种或者多种药学上可接受的载体或者辅料。

“药学上可接受的”是指当分子本体和组合物适当的给予动物或者人时，他们不会产生不利的、过敏的或者其他不良反应。

“药学上可接受的辅料”是指应当与alb激动剂相容，即能与其共混而不会在通常情况下大幅度降低药物组合物的效果。可作为药学上可接受的载体或辅料的一些物质的具体例子是糖类，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和土豆淀粉；纤维素及其衍生物，如甲基纤维素钠、乙基纤维素和甲基纤维素；西黄蓍胶粉末；麦芽；明胶；滑石；固体润滑剂，如硬脂酸和硬脂酸镁；硫酸钙；植物油，如花生油、棉籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油和可可油；多元醇，如丙二醉、甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；海藻酸；乳化剂，如tween；润湿剂，如月桂基硫酸钠；着色剂；调味剂；压片剂、稳定剂；抗氧化剂；防腐剂；无热原水等，渗盐溶液；和磷酸盐缓冲液等。这些物质根据需要用于帮助配方的稳定性或有助于提高活性或它的生物有效性或在口服的情况下产生可接受的口感或气味。

联合治疗药物组合和施用方法：

所述联合治疗药物组合可以是以下形式中的任意一种：

一)将alb基因激动剂和其他肝癌治疗药物分别制成独立的制剂，制剂的剂型可相同或不同，给药途径亦可相同或不同。使用时，可几种药同时使用，也可几种药先后使用。先后给药时，应当在先用药物仍对机体有效的期间内向机体施加其他药物。

二)将alb基因激动剂和其他肝癌治疗药物配置成复方制剂，在alb基因激动剂和其他肝癌治疗药物采用相同给药途径给药并同时施加时，可采用将两者配置成复方制剂的形式。

可以同步地或顺序地给予有效量的alb基因激动剂和至少一种有效量的其他肝癌治疗药物。

使用时，可将有效量的alb基因激动剂和有效量的其他肝癌治疗药物同时使用，也可将有效量的alb基因激动剂和有效量的其他肝癌治疗药物先后使用。先后给药时，应当在先用药物仍对生物体有效的期间内向生物体施加其他药物。

实施例一alb低表达型瘤株中alb激活后肝癌细胞增殖受到抑制

操作方法：对alb低表达的hepg2(细胞购自中国科学院细胞典藏中心)瘤株，使用crispr-sam的方法(该系统购自addgene)，引入带alb基因的sgrna的慢病毒载体(载体为：lenti-sg(ms2)-puro,购自addgene)，将sgrna包装慢病毒后导入hepg2细胞，将hepg2进行alb内源源活，sgrna序列为：seqidno.1：acaactttaatacattgaca。导入sgrna一周后，使用trizol方法提取rna(试剂盒购自：takara公司)；使用荧光定量pcr进行对alb含量进行检测(食品为：appliedbiosystemtm,steponeplusreal-timepcrsystemwithtower,cat：4376599)。确认alb含量升高后使用ctg(购自promega)方法检测细胞存活情况，检测细胞生长情况。

结果如图1所示，结果表明alb低表达型瘤株中alb激活后肝癌细胞增殖受到显著的抑制。

实施例二alb基因激动剂对alb低表达型瘤株治疗的特异性

图2显示为人类蛋白数据库中alb表达的组织示意图。(数据来源于人类蛋白数据库：humanproteinaltas)

由图2可见，alb在正常组织中的rna数据仅在肝组织中有表达，故该项发明可特异地针对肝癌病人。

以上的实施例是为了说明本发明公开的实施方案，并不能理解为对本发明的限制。此外，本文所列出的各种修改以及发明中方法、组合物的变化，在不脱离本发明的范围和精神的前提下对本领域内的技术人员来说是显而易见的。虽然已结合本发明的多种具体优选实施例对本发明进行了具体的描述，但应当理解，本发明不应仅限于这些具体实施例。事实上，各种如上所述的对本领域内的技术人员来说显而易见的修改来获取发明都应包括在本发明的范围内。

序列表

<110>中国科学院上海高等研究院

中国科学院大学

<120>alb基因及其激动剂在制备治疗肝癌药物中的用途

<160>1

<170>siposequencelisting1.0

<210>1

<211>20

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>1

acaactttaatacattgaca20