本发明涉及一种通过gd:cus矿化流感病毒(flu@gd:cus)的策略仿生模拟成功合成可视化引导的
背景技术:
目前,肿瘤是世界上对人类威胁最大的疾病之一。免疫治疗通过激活人体免疫系统,依靠自身免疫机能杀灭癌细胞和肿瘤组织,从而达到治疗癌症的作用。因此,免疫治疗是治疗肿瘤最有效的方法之一。鉴于流感病毒结构复杂,含有包膜、血凝素、神经氨酸酶、基质蛋白、核蛋白和ss-rna等成分,所以其作为异物在体内可以激发全身免疫系统产生细胞因子风暴(如干扰素、肿瘤坏死因子和各种白细胞介素等),并使在抗肿瘤治疗过程中具有重要作用的树突状细胞(dc细胞,提呈肿瘤抗原),巨噬细胞(
光热治疗(photothermaltherapy,ptt)是一种新型肿瘤治疗方法,在外部近红外光的照射下,肿瘤部位的光热剂吸收近红外光并将其转化为热,使肿瘤部位温度迅速升高到48℃以上,几分钟内可杀死癌细胞。光热治疗过程产生的副作用较小,全身系统毒性低,不会对正常组织造成损伤,具有很大的临床应用潜力。如果将光热治疗与肿瘤免疫治疗相结合,将极大地增强肿瘤治疗的效果,使肿瘤治疗更加彻底。
鉴于单模式成像技术存在的不足,近年来兴起了多模态成像技术,可以将集中方式结合起来,实现功能互补,从而对肿瘤全方位精准诊断。而且目前关于多模式成像的纳米颗粒也在不断的被发现、制备和应用。
蛋白仿生合成作为近几年兴起的一种制备纳米颗粒的有效策略,该方法有以下几大优点:1)反应条件温和,全程无有机溶剂参与,可以称为绿色合成2)产物性质可以精准调控。3)生物相性好。4)原料来源广泛,成本相对较低,重复性好。解决了传统合成方法过程过于繁琐,环境要求苛刻,而且具有一定的污染性的问题。
技术实现要素:
本发明涉及一种通过gd:cus矿化流感病毒(flu@gd:cus)的策略仿生模拟成功合成肿瘤联合治疗纳米制剂的方法。
本发明的gd:cus矿化流感病毒(flu@gd:cus)的肿瘤联合治疗纳米制剂的合成方法,步骤如下:
1)准确称取8.5mg的二水合氯化铜(cucl2·2h2o)粉末,加入5ml超纯水后超声溶解,得到浓度为0.01m的cucl2·2h2o水溶液。
2)准确称取9.3mg的氯化钆六水合物粉末(gdcl3·6h2o),加入1ml超纯水后超声溶解,得到浓度为0.025m的gdcl3·6h2o水溶液。
3)利用一锅法合成flu@gd:cus纳米颗粒的方法如下:
(1)将5ml浓度为0.01mg/ml流感病毒溶液的单口瓶置于37℃的水浴磁力搅拌器上,随后在搅拌条件下,用一次性滴管滴加上述配置的cucl2·2h2o和gdcl3·6h2o溶液,滴加完毕继续搅拌三分钟;
(2)配置好浓度为1m的氢氧化钠(naoh)溶液,取0.5ml加入上述反应体系中,调节溶液的最终ph值为8-10,此时溶液变为澄清透明的深蓝色;
(3)配置浓度为242.16mg/ml的硫化钠九水合物(na2s·9h2o)溶液,并取0.4ml加入到反应体系中,此时溶液变为棕色;
(4)在37℃水浴环境下,搅拌反应4h后,取出反应液倒入截留分子量为8000-14000的透析袋中,在超纯水中透析24h,以除去未反应的离子;
(5)将透析完后的溶液至于-80℃冰箱过夜后,转移至冷冻干燥机中进行冻干,得到浅绿色棉絮状的flu@gd:cus纳米颗粒。
本发明的优势在于:1)产品具有显著的t1加权磁共振/光声双模式成像能力。2)产品在近红外激光照射下光热转换效率较高。3)产品可以高效的引导后续的肿瘤光热治疗。4)产品具有优异的生物相容性,无副作用产生。
附图说明
图1:gd:cus矿化的流感病毒纳米颗粒(flu@gd:cus)刺激干扰素产生;
图2:gd:cus矿化的流感病毒纳米颗粒(flu@gd:cus)的光热转化性能。
具体实施方式
实施例1:
flu@gd:cus肿瘤联合免疫治疗纳米制剂的合成方法,具体步骤如下:
(1)称取4.25mg的二水合氯化铜(cucl2·2h2o)粉末,加入5ml超纯水后超声溶解,得到浓度为0.005m的cucl2·2h2o水溶液。
(2)称取9.3mg的氯化钆六水合物粉末(gdcl3·6h2o),加入1ml超纯水后超声溶解,得到浓度为0.025m的gdcl3·6h2o水溶液。
(3)利用一锅法合成flu@gd:cus纳米颗粒的方法:将将盛有2.5ml浓度为0.005mg/ml流感病毒溶液的单口瓶置于37℃的水浴磁力搅拌器上,随后在搅拌条件下,用一次性滴管滴加上述配置的cucl2·2h2o和gdcl3·6h2o溶液,滴加完毕继续搅拌三分钟;
(4)配置好浓度为1m的氢氧化钠(naoh)溶液,取0.25ml加入上述反应体系中,调节溶液的最终ph值为8,此时溶液变为澄清透明的深蓝色;配置浓度为242.16mg/ml的硫化钠九水合物(na2s·9h2o)溶液,并取0.4ml加入到反应体系中,此时溶液变为棕色;
(5)在37℃水浴环境下,搅拌反应2h后,取出反应液倒入截留分子量为8000-14000的透析袋中,在超纯水中透析24h,以除去未反应的离子;
(6)将透析完后的溶液至于-80℃冰箱过夜后,转移至冷冻干燥机中进行冻干,得到浅绿色棉絮状的flu@gd:cus纳米颗粒。
实施例2:
flu@gd:cus肿瘤联合免疫治疗纳米制剂的合成方法,具体步骤如下:
(1)称取8.5mg的二水合氯化铜(cucl2·2h2o)粉末,加入5ml超纯水后超声溶解,得到浓度为0.01m的cucl2·2h2o水溶液。
(2)称取18.6mg的氯化钆六水合物粉末(gdcl3·6h2o),加入1ml超纯水后超声溶解,得到浓度为0.05m的gdcl3·6h2o水溶液。
(3)利用一锅法合成flu@gd:cus纳米颗粒的方法:将将盛有5ml浓度为0.01mg/ml流感病毒溶液的单口瓶置于37℃的水浴磁力搅拌器上,随后在搅拌条件下,用一次性滴管滴加上述配置的cucl2·2h2o和gdcl3·6h2o溶液,滴加完毕继续搅拌三分钟;
(4)配置好浓度为1m的氢氧化钠(naoh)溶液,取0.5ml加入上述反应体系中,调节溶液的最终ph值为9,此时溶液变为澄清透明的深蓝色;配置浓度为242.16mg/ml的硫化钠九水合物(na2s·9h2o)溶液,并取0.4ml加入到反应体系中,此时溶液变为棕色;
(5)在37℃水浴环境下,搅拌反应4h后,取出反应液倒入截留分子量为8000-14000的透析袋中,在超纯水中透析24h,以除去未反应的离子;
(6)将透析完后的溶液至于-80℃冰箱过夜后,转移至冷冻干燥机中进行冻干,得到浅绿色棉絮状的flu@gd:cus纳米颗粒。
实施例3:
flu@gd:cus纳米诊疗剂的合成方法,具体步骤如下:
(1)称取17mg的二水合氯化铜(cucl2·2h2o)粉末,加入5ml超纯水后超声溶解,得到浓度为0.02m的cucl2·2h2o水溶液。
(2)称取37.2mg的氯化钆六水合物粉末(gdcl3·6h2o),加入1ml超纯水后超声溶解,得到浓度为0.1m的gdcl3·6h2o水溶液。
(3)利用一锅法合成flu@gd:cus纳米颗粒的方法:将将盛有10ml浓度为0.02mg/ml流感病毒溶液的单口瓶置于37℃的水浴磁力搅拌器上,随后在搅拌条件下,用一次性滴管滴加上述配置的cucl2·2h2o和gdcl3·6h2o溶液,滴加完毕继续搅拌三分钟;
(4)配置好浓度为1m的氢氧化钠(naoh)溶液,取1ml加入上述反应体系中,调节溶液的最终ph值为10,此时溶液变为澄清透明的深蓝色;配置浓度为484.32mg/ml的硫化钠九水合物(na2s·9h2o)溶液,并取0.4ml加入到反应体系中,此时溶液变为棕色;
(5)在37℃水浴环境下,搅拌反应8h后,取出反应液倒入截留分子量为8000-14000的透析袋中,在超纯水中透析24h,以除去未反应的离子;
(6)将透析完后的溶液至于-80℃冰箱过夜后,转移至冷冻干燥机中进行冻干,得到浅绿色棉絮状的flu@gd:cus纳米颗粒。