本发明涉及天然药物化学技术领域，具体涉及一种抗菌组合物及含有该组合物的伤口敷料。
背景技术：
伤口敷料，是包扎伤口的用品，用以覆盖疮、伤口或其他损害的材料。传统敷料主要是干纱布和油纱布。干纱布可以起到监督覆盖伤口的作用，但其不能用于感染性伤口，对伤口愈合没有促进作用。同时其渗液管理能力有限，使用过程中会造成粘连伤口，会导致新生上皮组织再损伤和出血，加重了病人更换敷料的疼痛。油纱布是指含有凡士林或者甘油三酯，可以起到不粘连伤口的作用；但其对伤口的整个愈合过程同样没有促进作用；对感染伤口也无效。
伤口感染是病原微生物通过伤口侵入机体后，在体内生长、繁殖，致机体的正常功能、代谢、组织结构受到破坏，引起组织损伤性病变的病理反应。尤其是手术后的伤口如果处理不好，经常会造成感染，导致伤口不愈合、疼痛、腐烂等情况发生。其中绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌、大肠杆菌为常见的伤口感染细菌。除了上述细菌感染外，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(mrsa)是临床上常见的毒性较强的细菌；mrsa从发现至今感染几乎遍及全球，已成为院内和社区感染的重要病原菌之一；mrsa除对甲氧西林耐药外，对其它所有与甲氧西林相同结构的β-内酰胺类和头孢类抗生素均耐药，对氨基糖苷类、大环内酯类、四环素类、氟喹喏酮类、磺胺类、利福平均产生不同程度的耐药。
因此，开发一种具有抗菌作用的伤口敷料，尤其是开发一种能抗mrsa的伤口敷料对防止伤口感染加快伤口愈合具有重要的意义。
技术实现要素：
本发明首先要解决的技术问题是，提供一种抗菌组合物。所述的抗菌组合物具有很好的抗菌作用，尤其具有优异的抗mrsa效果。
本发明所要解决的技术问题，通过以下技术方案予以实现：
一种抗菌组合物，其包含木姜子提取物以及白芨提取物；所述的木姜子提取物与白芨提取物的重量用量比为3～5:2。
优选地，所述的木姜子提取物通过如下方法制备得到：
将中药木姜子用乙醇进行提取，得木姜子乙醇提取物；然后将木姜子乙醇提取物进行硅胶柱层析，即得所述的木姜子提取物。
进一步优选地，所述的乙醇为体积分数为95％的乙醇；所述的提取为加热回流提取，提取次数为1～3次，提取时间为40～90min。
进一步优选地，所述硅胶柱层析的具体方法为：将干燥后的木姜子乙醇提取物上硅胶柱，先用有机溶剂a洗脱除杂；然后再用有机溶剂b进行洗脱，收集用有机溶剂b洗脱的馏分，浓缩干燥即得所述的木姜子提取物；
所述的有机溶剂a由体积比为99:1～96:4的氯仿和甲醇组成；所述的有机溶剂b由体积比为93:7～90:10的氯仿和甲醇组成。
最优选地，所述的有机溶剂a由体积比为97:3的氯仿和甲醇组成；所述的有机溶剂b由体积比为91:9的氯仿和甲醇组成。
优选地，所述的白芨提取物通过如下方法制备得到：
将中药白芨用乙醇进行提取，得白芨乙醇提取物；然后将白芨乙醇提取物进行ods柱层析，即得所述的白芨提取物。
进一步优选地，所述的乙醇为体积分数为60％的乙醇；所述的提取为加热回流提取，提取次数为1～3次，提取时间为40～90min。
进一步优选地，所述硅胶柱层析的具体方法为：将干燥后的白芨乙醇提取物上ods柱，先用有机溶剂c洗脱除杂；然后再用有机溶剂d进行洗脱，收集用有机溶剂d洗脱的馏分，浓缩干燥即得所述的白芨提取物；
所述的有机溶剂c为体积分数为15％～20％的甲醇水溶液；所述的有机溶剂d为体积分数为25％～35％的甲醇水溶液。
最优选地，所述的有机溶剂c为体积分数为18％的甲醇水溶液；所述的有机溶剂d为体积分数为28％的甲醇水溶液。
本发明还提供一种伤口敷料，其通过如下方法制备得到：取凡士林、石蜡油以及上述抗菌组合物加热熔化得混合液；然后将纱布放入混合液中浸泡；最后将浸泡有混合液的纱布放入干热灭菌其中进行灭菌即得所述的伤口敷料；所述的凡士林、石蜡油以及上述抗菌组合物的重量比为100:5～10:1～3；所述的纱布与凡士林的重量比为1:1.5～2.5。
优选地，所述的凡士林、石蜡油以及上述抗菌组合物的重量比为100:5:2；所述的纱布与凡士林的重量比为1:2。
有益效果：本发明提供了一种包含木姜子提取物以及白芨提取物的全新组成的抗菌组合物；通过本发明所述方法制备得到的木姜子提取物和白芨提取物富集了大量的抗菌成分，二者相互配合后具有协同的抗菌效果；尤其是二者配合后对mrsa的协同抗菌效果最为明显。此外，对比例还表明，采用其它硅胶条件或ods条件得到的木姜子提取物和白芨提取物其抗菌效果并不理想，这说明在其它硅胶条件或ods条件下富集得到的成分并不具有很好的抗菌效果或协同抗菌效果，尤其是不具备很好的抗mrsa的效果。综上所述，将本发明所述的抗菌组合物应用于伤口敷料中可以有效防止伤口细菌感染，尤其是可以防止超级细菌耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(mrsa)的感染。
具体实施方式
以下结合具体实施例来进一步解释本发明，但实施例对本发明不做任何形式的限定。
实施例1抗菌组合物的制备
本实施例提供一种抗菌组合物，所述的抗菌组合物包含取木姜子提取物以及白芨提取物；所述的木姜子提取物与白芨提取物的重量用量比为5:2。
所述木姜子提取物通过如下方法制备得到：
(1)将中药木姜子用体积分数为95％的乙醇进行加热回流提取2次，每次60min，将2次的提取液合并，浓缩干燥后得木姜子乙醇提取物；所述中药木姜子与乙醇的用量比为1g：8ml；
(2)将干燥后的木姜子乙醇提取物上硅胶柱，先用3倍柱体积的有机溶剂a洗脱除杂；然后再用5倍柱体积的有机溶剂b进行洗脱，收集用有机溶剂b洗脱的馏分，浓缩干燥即得所述的木姜子提取物；所述硅胶柱中的硅胶重量用量为干燥后的木姜子乙醇提取物重量的30倍；所述的有机溶剂a由体积比为97:3的氯仿和甲醇组成；所述的有机溶剂b由体积比为91:9的氯仿和甲醇组成。
所述白芨提取物通过如下方法制备得到：
(1)将中药白芨用体积分数为60％的乙醇进行加热回流提取2次，每次60min，将2次的提取液合并，浓缩干燥后得白芨乙醇提取物；所述中药白芨与乙醇的用量比为1g：10ml；
(2)将干燥后的白芨乙醇提取物上ods柱，先用2倍柱体积的有机溶剂c洗脱除杂；然后再用5倍柱体积的有机溶剂d进行洗脱，收集用有机溶剂d洗脱的馏分，浓缩干燥即得所述的白芨提取物；所述ods柱中的ods重量用量为干燥后的白芨乙醇提取物重量的20倍；所述的有机溶剂c为体积分数为18％的甲醇水溶液；所述的有机溶剂d为体积分数为28％的甲醇水溶液。
实施例2抗菌组合物的制备
本实施例提供一种抗菌组合物，所述的抗菌组合物包含取木姜子提取物以及白芨提取物；所述的木姜子提取物与白芨提取物的重量用量比为3:2。
所述木姜子提取物通过如下方法制备得到：
(1)将中药木姜子用体积分数为70％的乙醇进行加热回流提取2次，每次40min，将2次的提取液合并，浓缩干燥后得木姜子乙醇提取物；所述中药木姜子与乙醇的用量比为1g：10ml；
(2)将干燥后的木姜子乙醇提取物上硅胶柱，先用2倍柱体积的有机溶剂a洗脱除杂；然后再用6倍柱体积的有机溶剂b进行洗脱，收集用有机溶剂b洗脱的馏分，浓缩干燥即得所述的木姜子提取物；所述硅胶柱中的硅胶重量用量为干燥后的木姜子乙醇提取物重量的30倍；所述的有机溶剂a由体积比为96:4的氯仿和甲醇组成；所述的有机溶剂b由体积比为90:10的氯仿和甲醇组成。
所述白芨提取物通过如下方法制备得到：
(1)将中药白芨用体积分数为60％的乙醇进行加热回流提取2次，每次60min，将2次的提取液合并，浓缩干燥后得白芨乙醇提取物；所述中药白芨与乙醇的用量比为1g：10ml；
(2)将干燥后的白芨乙醇提取物上ods柱，先用2倍柱体积的有机溶剂c洗脱除杂；然后再用5倍柱体积的有机溶剂d进行洗脱，收集用有机溶剂d洗脱的馏分，浓缩干燥即得所述的白芨提取物；所述ods柱中的ods重量用量为干燥后的白芨乙醇提取物重量的20倍；所述的有机溶剂c为体积分数为15％的甲醇水溶液；所述的有机溶剂d为体积分数为25％的甲醇水溶液。
实施例3抗菌组合物的制备
本实施例提供一种抗菌组合物，所述的抗菌组合物包含取木姜子提取物以及白芨提取物；所述的木姜子提取物与白芨提取物的重量用量比为4:2。
所述木姜子提取物通过如下方法制备得到：
(1)将中药木姜子用体积分数为80％的乙醇进行加热回流提取2次，每次80min，将2次的提取液合并，浓缩干燥后得木姜子乙醇提取物；所述中药木姜子与乙醇的用量比为1g：10ml；
(2)将干燥后的木姜子乙醇提取物上硅胶柱，先用3倍柱体积的有机溶剂a洗脱除杂；然后再用5倍柱体积的有机溶剂b进行洗脱，收集用有机溶剂b洗脱的馏分，浓缩干燥即得所述的木姜子提取物；所述硅胶柱中的硅胶重量用量为干燥后的木姜子乙醇提取物重量的30倍；所述的有机溶剂a由体积比为99:1的氯仿和甲醇组成；所述的有机溶剂b由体积比为93:7的氯仿和甲醇组成。
所述白芨提取物通过如下方法制备得到：
(1)将中药白芨用体积分数为50％的乙醇进行加热回流提取2次，每次80min，将2次的提取液合并，浓缩干燥后得白芨乙醇提取物；所述中药白芨与乙醇的用量比为1g：8ml；
(2)将干燥后的白芨乙醇提取物上ods柱，先用2倍柱体积的有机溶剂c洗脱除杂；然后再用6倍柱体积的有机溶剂d进行洗脱，收集用有机溶剂d洗脱的馏分，浓缩干燥即得所述的白芨提取物；所述ods柱中的ods重量用量为干燥后的白芨乙醇提取物重量的20倍；所述的有机溶剂c为体积分数为20％的甲醇水溶液；所述的有机溶剂d为体积分数为35％的甲醇水溶液。
对比例1抗菌组合物的制备
本实施例提供一种抗菌组合物，所述的抗菌组合物包含取木姜子提取物以及白芨提取物；所述的木姜子提取物与白芨提取物的重量用量比为5:2。
所述木姜子提取物通过如下方法制备得到：
(1)将中药木姜子用体积分数为95％的乙醇进行加热回流提取2次，每次60min，将2次的提取液合并，浓缩干燥后得木姜子乙醇提取物；所述中药木姜子与乙醇的用量比为1g：8ml；
(2)将干燥后的木姜子乙醇提取物上硅胶柱，先用3倍柱体积的有机溶剂a洗脱除杂；然后再用5倍柱体积的有机溶剂b进行洗脱，收集用有机溶剂b洗脱的馏分，浓缩干燥即得所述的木姜子提取物；所述硅胶柱中的硅胶重量用量为干燥后的木姜子乙醇提取物重量的30倍；所述的有机溶剂a由体积比为90:10的氯仿和甲醇组成；所述的有机溶剂b由体积比为85:15的氯仿和甲醇组成。
所述白芨提取物通过如下方法制备得到：
(1)将中药白芨用体积分数为60％的乙醇进行加热回流提取2次，每次60min，将2次的提取液合并，浓缩干燥后得白芨乙醇提取物；所述中药白芨与乙醇的用量比为1g：10ml；
(2)将干燥后的白芨乙醇提取物上ods柱，先用2倍柱体积的有机溶剂c洗脱除杂；然后再用5倍柱体积的有机溶剂d进行洗脱，收集用有机溶剂d洗脱的馏分，浓缩干燥即得所述的白芨提取物；所述ods柱中的ods重量用量为干燥后的白芨乙醇提取物重量的20倍；所述的有机溶剂c为体积分数为5％的甲醇水溶液；所述的有机溶剂d为体积分数为15％的甲醇水溶液。
对比例1和实施例1的区别在于，对比例1木姜子提取物中硅胶的洗脱条件以及白芨提取物中ods的洗脱条件与实施例1不同；其它步骤和参数与实施例1均相同。
对比例2抗菌组合物的制备
本实施例提供一种抗菌组合物，所述的抗菌组合物包含取木姜子提取物以及白芨提取物；所述的木姜子提取物与白芨提取物的重量用量比为5:2。
所述木姜子提取物通过如下方法制备得到：
(1)将中药木姜子用体积分数为95％的乙醇进行加热回流提取2次，每次60min，将2次的提取液合并，浓缩干燥后得木姜子乙醇提取物；所述中药木姜子与乙醇的用量比为1g：8ml；
(2)将干燥后的木姜子乙醇提取物上硅胶柱，先用3倍柱体积的有机溶剂a洗脱除杂；然后再用5倍柱体积的有机溶剂b进行洗脱，收集用有机溶剂b洗脱的馏分，浓缩干燥即得所述的木姜子提取物；所述硅胶柱中的硅胶重量用量为干燥后的木姜子乙醇提取物重量的30倍；所述的有机溶剂a由体积比为90:10的氯仿和甲醇组成；所述的有机溶剂b由体积比为85:15的氯仿和甲醇组成。
所述白芨提取物通过如下方法制备得到：
(1)将中药白芨用体积分数为60％的乙醇进行加热回流提取2次，每次60min，将2次的提取液合并，浓缩干燥后得白芨乙醇提取物；所述中药白芨与乙醇的用量比为1g：10ml；
(2)将干燥后的白芨乙醇提取物上ods柱，先用2倍柱体积的有机溶剂c洗脱除杂；然后再用5倍柱体积的有机溶剂d进行洗脱，收集用有机溶剂d洗脱的馏分，浓缩干燥即得所述的白芨提取物；所述ods柱中的ods重量用量为干燥后的白芨乙醇提取物重量的20倍；所述的有机溶剂c为体积分数为18％的甲醇水溶液；所述的有机溶剂d为体积分数为28％的甲醇水溶液。
对比例2和实施例1的区别在于，对比例2木姜子提取物中硅胶的洗脱条件与实施例1不同；其它步骤和参数与实施例1均相同。
对比例3抗菌组合物的制备
本实施例提供一种抗菌组合物，所述的抗菌组合物包含取木姜子提取物以及白芨提取物；所述的木姜子提取物与白芨提取物的重量用量比为5:2。
所述木姜子提取物通过如下方法制备得到：
(1)将中药木姜子用体积分数为95％的乙醇进行加热回流提取2次，每次60min，将2次的提取液合并，浓缩干燥后得木姜子乙醇提取物；所述中药木姜子与乙醇的用量比为1g：8ml；
(2)将干燥后的木姜子乙醇提取物上硅胶柱，先用3倍柱体积的有机溶剂a洗脱除杂；然后再用5倍柱体积的有机溶剂b进行洗脱，收集用有机溶剂b洗脱的馏分，浓缩干燥即得所述的木姜子提取物；所述硅胶柱中的硅胶重量用量为干燥后的木姜子乙醇提取物重量的30倍；所述的有机溶剂a由体积比为97:3的氯仿和甲醇组成；所述的有机溶剂b由体积比为91:9的氯仿和甲醇组成。
所述白芨提取物通过如下方法制备得到：
(1)将中药白芨用体积分数为60％的乙醇进行加热回流提取2次，每次60min，将2次的提取液合并，浓缩干燥后得白芨乙醇提取物；所述中药白芨与乙醇的用量比为1g：10ml；
(2)将干燥后的白芨乙醇提取物上ods柱，先用2倍柱体积的有机溶剂c洗脱除杂；然后再用5倍柱体积的有机溶剂d进行洗脱，收集用有机溶剂d洗脱的馏分，浓缩干燥即得所述的白芨提取物；所述ods柱中的ods重量用量为干燥后的白芨乙醇提取物重量的20倍；所述的有机溶剂c为体积分数为5％的甲醇水溶液；所述的有机溶剂d为体积分数为15％的甲醇水溶液。
对比例3和实施例1的区别在于，对比例3白芨提取物中ods的洗脱条件与实施例1不同；其它步骤和参数与实施例1均相同。
实验例1
最低抑菌浓度的测试方法：采用二倍稀释法将待测的药物分别稀释成640mg/ml、320mg/ml、160mg/ml、80mg/ml、40mg/ml、20mg/ml、10mg/ml、5mg/ml、2.5mg/ml、1.25mg/ml、0.625mg/ml的药液。在培养皿内加入各梯度的药液1ml和熔化的固体培养基(牛肉膏蛋白胨培养基)19ml，混合均匀。待培养基冷却凝固后，采用影印法，用毛细管的一段将待测菌株分别影印在含不同浓度药物的培养皿中，并在37℃恒温箱中培养24h，然后观察菌株生长情况，将菌株不生长的浓度记录为最低抑菌浓度；具体实验结果见表1。
所述待测的药物为：实施例1～3制备得到的抗菌组合物、对比例1～3制备得到的抗菌组合物。
所述的待测菌株为绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌、大肠杆菌以及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(mrsa)；实验前，将各菌株制成含菌浓度为1×107的菌液。
表1.本发明抗菌组合物的最低抑菌浓度(mg/ml)
从表1可以看出，本发明实施例1～3所述的抗菌组合物其对绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌以及大肠杆菌的最低抑菌浓度均很小，这说明本发明实施例1～3所述的抗菌组合物具有优异的抗菌效果。此外，本发明施例1～3所述的抗菌组合物同样对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(mrsa)具有优异的抑制效果。本发明所述的抗菌组合物克服了现有技术对超级细菌耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(mrsa)抑菌的难题。因此，将本发明所述的抗菌组合物应用于伤口敷料中可以有效防止伤口细菌感染，尤其是可以防止超级细菌耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(mrsa)的感染。
从实施例1与对比1对各个菌株的抑菌效果可以看出，实施例1的抑菌效果远远高于对比例1，对比例1木姜子提取物中硅胶的洗脱条件以及白芨提取物中ods的洗脱条件与实施例1不同。这说明木姜子提取物不按本发明所述的硅胶洗脱条件进行制备，白芨提取物不按本发明所述的ods洗脱条件进行制备，富集不到抗菌成分，得不到具有优异抗菌效果的抗菌组合物。尤其是，按对比例1方法所述的硅胶洗脱条件和ods洗脱条件制备得到的木姜子提取物和白芨提取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(mrsa)并不具备抑制作用。
从实施例1与对比2对各个菌株的抑菌效果可以看出，实施例1的抑菌效果远远高于对比例2，对比例2所述的抗菌组合物中虽然白芨提取物的制备方法相同，但木姜子提取物中硅胶的洗脱条件与实施例1不同；这说明木姜子提取物并未按本发明所述的硅胶洗脱条件进行制备，其富集不到抗菌有效成分，不能与白芨提取物协同产生抗菌效果。
从实施例1与对比3对各个菌株的抑菌效果可以看出，实施例1的抑菌效果远远高于对比例3，对比例3所述的抗菌组合物中虽然木姜子提取物的制备方法相同，但白芨提取物中ods的洗脱条件与实施例1不同；这说明白芨提取物并未按本发明所述的ods洗脱条件进行制备，其富集不到抗菌有效成分，不能与木姜子提取物协同产生抗菌效果。
实施例4伤口敷料的制备
取凡士林、石蜡油以及实施例1制备得到的抗菌组合物加热熔化得混合液；然后将纱布放入混合液中浸泡；最后将浸泡有混合液的纱布放入干热灭菌其中进行灭菌即得所述的伤口敷料；所述的凡士林、石蜡油以及上述抗菌组合物的重量比为100:5:2；所述的纱布与凡士林的重量比为1:2。
实施例5伤口敷料的制备
取凡士林、石蜡油以及实施例2制备得到的抗菌组合物加热熔化得混合液；然后将纱布放入混合液中浸泡；最后将浸泡有混合液的纱布放入干热灭菌其中进行灭菌即得所述的伤口敷料；所述的凡士林、石蜡油以及上述抗菌组合物的重量比为100:8:3；所述的纱布与凡士林的重量比为1:2。
实施例6伤口敷料的制备
取凡士林、石蜡油以及实施例3制备得到的抗菌组合物加热熔化得混合液；然后将纱布放入混合液中浸泡；最后将浸泡有混合液的纱布放入干热灭菌其中进行灭菌即得所述的伤口敷料；所述的凡士林、石蜡油以及上述抗菌组合物的重量比为100:5:3；所述的纱布与凡士林的重量比为1:2.5。