本发明涉及一种赤芍和杜仲叶提取物组合物协同增效抑菌作用及其在制备防治妇科炎症性疾病中药制剂产品中的用途。
背景技术：
：妇科炎症是女性的常见疾病，主要是指女性生殖器官的炎症(外阴炎、阴道炎、宫颈炎、子宫炎、盆腔炎、附件炎、性传播疾病等)，炎症不及时治疗，除可能导致炎症在各生理部位相互蔓延和交叉感染外，会带来许多并发症，对免疫功能、新陈代谢以及内分泌系统都会产生不良影响，甚至导致某些部位的恶性病变如宫颈癌风险增加、还有hpv和hiv易感、不良妊娠等。女性的生殖器官通常发生的不同急性和慢性炎症，是受到各种致病菌侵袭感染后发生的，常见病原主要包括细菌、真菌、病毒、原虫和支原体，如：金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、大肠杆菌、变形杆菌、白色念珠菌等，也偶见寄生虫和沙眼衣原体感染。金黄色葡萄球菌常是毛囊炎的主要致病菌；体质不好时，阴道自净能力下降，阴道附近的大肠杆菌、链球菌等会引起细菌性阴道炎的发生；滴虫性阴道炎的大部分病原菌为白色念珠菌，其它假丝酵母如光滑假丝酵母、热带假丝酵母的感染被检出较少。由于造成妇科感染的病原体多种多样，使用广谱抗生素能取得良好的效果。然而广谱抗生素的过度使用造成了许多问题，由于阴道微环境处于动态平衡的状态，使用广谱抗生素对乳酸菌等益生菌也能产生抑制作用，益生菌对病原体抑制作用会减弱，妇科感染变得容易复发。另一方面，长期使用抗生素类药物治疗会加速自身阴道微环境里的耐药菌产生。因此抗生素在妇科治疗导致的耐药、二重感染等问题都不可忽视。近代研究发现许多中药具有良好的抗菌作用，并且其抗菌机制与抗生素有所不同。有些中药不仅具有直接杀死或抑制菌体细胞活性的效果，还可通过复杂的综合效应发挥更好的治疗作用。一方面许多中药具有逆转细菌耐药性的功能，例如通过消除耐药质粒和抑制β-内酰胺酶增强抗菌效果；另一方面，中药还具有调节免疫的作用，可通过增强免疫机能加速人体对外来病原体的清除；有些中药还可能通过调节人体微生态菌群从而调控人体生理功能，因此筛选出抑菌活性的中药提取物或其组合物非常重要，可应用于妇科炎症外用制剂中以避免抗生素的滥用。杜仲叶，微辛、温，归肝、肾经，具有补肝肾、强筋骨、降血压的功效，主治肝肾不足，腰膝酸软，筋骨痿弱等症。杜仲叶的活性成分包括黄酮类、环烯醚萜类、苯丙素类、木脂素类、多糖类等。主要药理作用为降血压、降血脂、降血糖、抗炎、抗病毒、抗疲劳、强筋健骨、抗衰老等。赤芍，为毛茛科植物赤芍或川赤芍的干燥根。苦，微寒。归肝经。有清热凉血，活血祛瘀的功效。用于热人营血，温毒发斑，吐血衄血，目赤肿痛，肝郁胁痛，经闭痛经，瘾瘕腹痛，跌扑损伤，痈肿疮疡。赤芍中主要的化学成分有芍药苷、芍药内脂苷、羟基芍药苷、苯甲酰芍药苷等单萜苷类化合物。赤芍提取物具有抗血栓、抗血小板聚集、降血脂、抗动脉硬化、抗肿瘤和保肝作用等。临床上为了减少耐药情况的发生、降低药物毒副作用或获得抗菌药物的协同作用，常常采用联合用药。抗菌药联合使用时临床治疗混合性细菌感染、多重耐药菌感染及重症感染的重要手段之一，也是应用细菌耐药突变选择窗理论减少细菌耐药产生的一种用药策略，但不合理的联合用药反而会减弱抗菌作用甚至产生严重的毒副反应、二重感染。抗菌药联合应用有协同、拮抗、无关、相加四种效果。抗菌药联合应用的效果高于任一成分单用时的药效之和,称为协同作用，联用效果低于任一成分单用的药效,称为拮抗作用，联用效果等于活性最强的成分单用时的药效,称为无关作用，联用效果等于药物单用时的药效之和,称为相加作用。评价抗菌药物联用的体外药效,如棋盘法、时间-杀菌曲线法、e-test法、双纸片扩散法等，比较常用的为棋盘法。赤芍提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠球菌都有不同程度的抑制作用，据报道，杜仲叶也有抑菌作用，然而两者配伍后的抑菌作用是否具有协同增效作用并未见有研究，也未见有报道将两者配伍应用于制备预防和治疗妇科炎症性疾病的中药制剂产品中。技术实现要素：本发明的目的在于研究赤芍和杜仲叶提取物联用抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠球菌活性的作用，提供一种预防和治疗妇科炎症性疾病的中药组合物，及采用该中药组合物制成的中药制剂产品等，实现两种中药的抑菌活性作用的互补，产生协同增效作用，为制备预防和治疗妇科炎症性疾病产品奠定基础。技术方案：为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为：赤芍和杜仲叶提取物的组合物在制备预防和治疗妇科炎症性疾病中药制剂产品中的应用。本发明的第一个方面是提供一种中药组合物，其组分包括赤芍提取物和杜仲叶提取物，两种中药提取物联用可协同抑制金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的作用。所述赤芍提取物和杜仲叶提取物的组合物中赤芍提取物和杜仲叶提取物的重量比为1～32∶32～1。优选地，所述赤芍提取物和杜仲叶提取物的组合物中赤芍提取物和杜仲叶提取物的重量比为1～4∶4～1。进一步优选地，所述赤芍提取物和杜仲叶提取物中两者的重量比为1∶0.25、1∶0.5、1∶1、1∶2或1∶4。本发明的第二个方面是提供一种预防和治疗妇科炎症性疾病的中药组合物的制备方法，其特征在于所述的赤芍提取物和杜仲叶提取物的组合物中赤芍提取物是通过水提取得到的水提物干燥后的固体粉末，提取方法可以为煎煮法，回流提取法等。所述的组合物中杜仲叶提取物通过乙醇提取得到的醇提物，提取方法可以为煎煮法，回流提取法等；优选浓度为75％的乙醇提取得到的醇提物，提取方法可以为煎煮法，回流提取法等。本发明的第三个方面是提供一种预防和治疗妇科炎症性疾病的中药组合物的产品制剂，所述产品制剂的活性成分包括本发明第一个方面提供的中药组合物，或者包括采用本发明第二个方面提供的制备方法制得的中药活性成分。本发明中，所述产品制剂可以根据实际需要为凝胶、片剂、乳膏剂、栓剂、液体制剂、软胶囊、喷雾剂、精油、泡腾片剂或泡沫剂等剂型；根据具体剂型的需要，所述药物制剂还可以包括药学上可接受的辅料。本发明应用的赤芍提取物和杜仲叶提取物的组合物作为活性成分和其他抗炎抑菌中药提取物以及常用辅料配制成预防和治疗妇科炎症性疾病外用制剂上允许的任意一种剂型。所用的辅料可以采用所述剂型常用辅料，复配所用的其他中药提取物（水提物或醇提物），如白蔹提取物，积雪草提取物，芦荟提取物，红藤提取物，紫草提取物，白花蛇舌草提取物，黄柏提取物，艾叶油、月见草油，玫瑰精油，沙棘油等。本发明的第四个方面是提供如本发明的第一个方面提供的中药组合物、采用本发明的第二个方面提供的制备方法制得的中药活性成分、或本发明的第三个方面提供的药物制剂在制备预防和治疗妇科炎症性疾病外用制剂产品中的应用。有益效果：本发明提供的赤芍和杜仲叶提取物的组合物在制备预防和治疗妇科炎症性疾病产品中的应用具有以下优点：本发明根据妇科炎症和病原菌致病的发病机制，充分利用中药资源，通过大量药理实验，开发出赤芍和杜仲叶药对在预防和治疗妇科炎症性疾病中的新用途，并且本发明通过棋盘法研究赤芍和杜仲叶提取物的组合物联用抑菌效果，与赤芍、杜仲叶提取物单独使用相比，赤芍提取物与杜仲叶提取物配伍抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的活性更强，二者产生协同增效作用，两者配伍作为活性成分制备的治疗妇科炎症性疾病的产品，具有疗效好、副作用小、服用方便等优点。为使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。具体实施方式以下通过具体实施方式对本发明效果做进一步说明：实施例1：制备赤芍提取物取干燥的赤芍药材粉碎过筛，加入8-10倍量的水浸泡，再热回流提取2个小时，得到的提取液减压浓缩得到的固体干燥后的固体粉末即为赤芍提取物。实施例2：制备杜仲叶提取物取干燥的杜仲叶药材粉碎过筛，加入8-10倍量的75%乙醇浸泡，再热回流提取2个小时，得到的提取液减压浓缩得到的固体干燥后的固体粉末即为杜仲叶提取物。实施例3：1mic的测定采用微量肉汤二倍稀释法，分别检测金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠球菌对赤芍提取物和杜仲叶提取物的敏感性。1.将实施例1-2中制备的样品进行抑菌剂效力检查，阳性对照药物：醋酸氯已定。2.试验材料与仪器实验仪器：电子天平（十万分之一）、洁净工作台、移液枪10-100μl、移液枪200-1000μl、96孔酶标板、高压蒸汽灭菌锅、紫外分光光度计、恒温培养箱、振荡培养箱、超声波清洗机。实验试剂及部分药品：无水葡萄糖ar、氯化钠ar、氢氧化钠ar、mtt（噻唑蓝）、蛋白胨、牛肉膏、琼脂粉、pbs缓冲液（自配）实验菌株：金黄色葡萄球菌atcc6538、大肠杆菌atcc8739、白色念珠菌atcc10231由中国药科大学生化实验室提供，本实验室保存。3.最小抑菌浓度（mic）测定mic测定是将待测菌与系列稀释的药物共同孵育16～24h，观察能抑制细菌生长的最低浓度。实验操作及结果判断标准参照抗微生物药物敏感性试验执行标准clsi标准。试验重复三次。结果见表1.结论：赤芍提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌的最低抑菌浓度为12.5mg/ml；杜仲叶提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌的最低抑菌浓度分别为6.25、12.5、12.5mg/ml。联合药敏fic测定联合药敏试验使用棋盘法，将赤芍提取物沿96孔平板的一个方向设置对倍稀释系列,杜仲叶提取物在平板的另一方向进行对倍稀释，最高浓度都为两倍mic，设置六个梯度。这一方法是将两药mic的对倍稀释系列在同一平板上进行交叉配合,包含了两药多种浓度组合。在制作完毕的药板各孔中加入一定浓度的待测菌,另设只加菌不加药物的生长对照组，各自条件下培养16～24小时后进行结果判读,将加药组与对照组菌生长情况进行比较。其它操作与mic测定相同，观察结果。fic计算公式：fic=联合用药mica联合/单独用药mica+联合用药micb联合/单独用药micb，fic指数为≤0.5、>0.5～1、>1～2、>2时分别表示协同、相加、无关、拮抗作用。上述实验步骤重复3次，取平均值作为最终结果。96孔板中质控菌株的mic应在clsi规定范围内，空白对照应为澄清。每批试验均由另一实验人员复读实验结果，以确保结果的准确性。实验结果取平均值。实验结果见表2。表2赤芍提取物与杜仲叶提取物联合用药fic金黄色葡萄球菌fic大肠杆菌fic白色念珠菌fic0.3750.5000.563结果显示：赤芍提取物和杜仲叶提取物具有协同抑制金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的作用，两者配伍抑制白色念珠球菌的作用具有相加性。实施例5：赤芍提取物和杜仲叶提取物的组合物凝胶赤芍提取物5g，杜仲叶提取物5g，peg400450g，己二醇80g，吐温8020g，卡波姆30g，乙醇胺6ml，苯甲醇10g，蒸馏水加至1000g。实施例6：赤芍提取物和杜仲叶提取物的组合物乳膏赤芍提取物5g，杜仲叶提取物5g，硬脂酸100g，十六醇20g，单硬脂酸甘油酯10g，液体石腊10g，羟苯甲酯0.8g，羟苯丁酯0.2g，甘油140g，氢氧化钾5g，乙醇10g，蒸馏水加至1000g。实施例7：赤芍提取物和杜仲叶提取物的组合物片赤芍提取物1000g，杜仲叶提取物500g，乳糖55g，可压性淀粉15g，羟丙纤维素10g，硬脂酸镁5g，70％乙醇适量，制成1000片(每片含赤芍提取物1000mg，杜仲叶提取物500mg)。实施例8：赤芍提取物和杜仲叶提取物的组合物栓剂水溶性基质甘油明胶、聚乙二醇类、聚氧乙烯-40硬脂酸酯适量(比例为1∶2∶5)，混匀，加热至熔融，基质熔融后，待温度降至55℃，加入赤芍提取物和杜仲叶提取物（1∶1）细粉，边加边搅拌，直至混合均匀，备用；药物粉末与基质的比例为1∶2，将上述熔化含药基质倾入栓模中，液面稍溢出模口平面2‐3mm，待自然冷却至凝固，削平，开启栓模，即得栓剂。实施例9：赤芍提取物和杜仲叶提取物的组合物凝胶栓剂卡波姆4份、氢氧化钠16份、吐温80为8份、单硬脂酸甘油酯12份、海藻酸钠4份、蒸馏水20份。将卡波姆溶胀于适量水中，待充分溶胀，再加入其他成分，混合并加热使溶解，加入6份赤芍提取物和杜仲叶提取物（1∶1）细粉。与空白凝胶混合均匀，倾入涂有液体石蜡的模具中，先冷冻，再通过冷冻干燥器真空干燥，即得水凝胶栓，放入干燥器即得。实施例10：赤芍提取物和杜仲叶提取物的组合物泡沫剂赤芍提取物5g，杜仲叶提取物5g，按照常规刚刚加入适量十二烷基硫酸钠和聚山梨酯等，加水调节ph至5，蒸馏水加至1000g，即得泡沫剂。实施例11：赤芍提取物和杜仲叶提取物的组合物软胶囊赤芍提取物25g，杜仲叶提取物50g，大豆油10g，明胶5g，甘油5g，蒸馏水7g，制成1000粒(每粒含赤芍提取物25mg，杜仲叶提取物50mg)。实施例12：赤芍提取物和杜仲叶提取物的组合物与其他中药配制成凝胶赤芍提取物4g，杜仲叶提取物2g，白蔹醇提取物2g，积雪草醇提取物2g，醋酸氯已定0.5g，天然芦荟凝胶2g，peg400450g，己二醇80g，吐温8020g，卡波姆30g，乙醇胺6ml，苯甲醇10g，蒸馏水加至1000g。实施例13：赤芍提取物和杜仲叶提取物的组合物与其他中药配制成精油赤芍提取物2g，杜仲叶提取物2g，红藤提取物2g，积雪草提取物2g，艾叶油、月见草油，玫瑰精油，沙棘油等其他精油1000g制成精油。实施例14：赤芍提取物和杜仲叶提取物的组合物与其他中药配制成凝胶赤芍提取物1g，杜仲叶提取物1g，紫草醇提取物4g，白花蛇舌草水提取物2g，黄柏水提取物2g，peg400450g，己二醇80g，吐温8020g，卡波姆30g，乙醇胺6ml，苯甲醇10g，蒸馏水加至1000g。以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。当前第1页12