用于皮肤修复的干细胞活性因子面膜贴敷料及制法的制作方法

文档序号:19147949发布日期:2019-11-15 23:44阅读:来源:国知局

技术特征:

1.用于皮肤修复的干细胞活性因子面膜贴敷料,其是通过将水性的面膜液浸渍于医药可接受的无纺布上,再进行冷冻干燥制得的;进一步地,所述面膜液中包含细胞因子以及海藻糖和普鲁兰多糖。

2.根据权利要求1的干细胞活性因子面膜贴敷料,其中:

所述面膜液包含如下组分:低级醇2-10重量份,精氨酸/赖氨酸多肽1-5重量份,细胞因子液2-40重量份,海藻糖1-8重量份,海藻酸钠0.1-1.5重量份,peg-75牛油树脂甘油酯类1-8重量份,玫瑰花水1-10重量份,普鲁兰多糖0.1-2重量份,透明质酸钠0.1-1.5重量份,水适量至100重量份;

或者,所述面膜液包含如下组分:低级醇3-7重量份,精氨酸/赖氨酸多肽2-4重量份,细胞因子液10-30重量份,海藻糖2-5重量份,海藻酸钠0.25-1重量份,peg-75牛油树脂甘油酯类1-5重量份,玫瑰花水1-5重量份,普鲁兰多糖0.25-1重量份,透明质酸钠0.25-1重量份,水适量至100重量份;

或者,所述面膜液包含如下组分:低级醇4-6重量份,精氨酸/赖氨酸多肽2-3重量份,细胞因子液10-20重量份,海藻糖3-5重量份,海藻酸钠0.5-1重量份,peg-75牛油树脂甘油酯类1-3重量份,玫瑰花水1-3重量份,普鲁兰多糖0.5-1重量份,透明质酸钠0.5-1重量份,水适量至100重量份;

或者,所述面膜液包含如下组分:低级醇5重量份,精氨酸/赖氨酸多肽2.5重量份,细胞因子液15重量份,海藻糖4重量份,海藻酸钠0.75重量份,peg-75牛油树脂甘油酯类2重量份,玫瑰花水2重量份,普鲁兰多糖0.75重量份,透明质酸钠0.75重量份,水适量至100重量份。

3.根据权利要求1的干细胞活性因子面膜贴敷料,其中所述低级醇选自甘油、丙二醇、丁二醇;优选的,所述低级醇选自甘油、丙二醇。

4.根据权利要求1的干细胞活性因子面膜贴敷料,其是通过包括如下步骤的方法制备得到的:

(a)将透明质酸钠、海藻酸钠和低级醇混合均匀,加入约为透明质酸钠10倍重量的70~80℃热水,搅拌使溶解,降温至30~35℃;

(b)向上一步骤所得液体中添加海藻糖、玫瑰花水、精氨酸/赖氨酸多肽、peg-75牛油树脂甘油酯类、细胞因子液、普鲁兰多糖,搅拌使溶解,得面膜液;

(c)使面膜液浸润于无纺布上,再将浸润面膜液的无纺布置冷冻干燥机中,进行冷冻干燥以除去水分(例如,至水分含量小于8%,优选小于5%);

(d)使冷冻干燥的面膜折叠,并密封包装(例如包装于密封袋、密封玻璃瓶、密封塑料瓶中),即得。

5.根据权利要求1的干细胞活性因子面膜贴敷料,其中步骤(3)使面膜液浸润于无纺布上时,每500平方厘米面积的无纺布上浸润所述面膜液2~20g,例如是2~15g,例如是3~10g。

6.根据权利要求1的干细胞活性因子面膜贴敷料,其中步骤(c)照如下程序进行冷冻干燥:(i)预冷冻:在-30℃至-40℃下将面膜冷冻,维持3~5小时;(ii)主干燥:预抽真空至18pa,搁板升温至-15℃至-20℃保持10~20小时;(iii)主干燥:继续升温至-2℃至4℃保持2~4小时进一步干燥;(iv)解析干燥:缓慢升温至30℃至35℃,再保持2~5小时使水分达到要求。

7.根据权利要求1的干细胞活性因子面膜贴敷料,其中所述细胞因子液中包含20~200pg/ml的egf,例如包含30~150pg/ml的egf,例如包含40~100pg/ml的egf。

8.根据权利要求1的干细胞活性因子面膜贴敷料,其中所述细胞因子液中还任选的包含fgf、vegf、il-6之一或者多种;或者,所述面膜液中还包含丝氨酸和氯化钠。

9.根据权利要求1的干细胞活性因子面膜贴敷料,其中所述细胞因子液是从脐带源间充质干细胞制备获得的。

10.根据权利要求1的干细胞活性因子面膜贴敷料,其中所述细胞因子液是照包括如下步骤的方法制备得到的:

(1)脐带源间充质干细胞获取:取健康足月剖宫产孕妇脐带,通过分离华通氏胶(wharton'sjelly)法,使用华通氏胶悬浮法制备;将华通氏胶放于t75培养瓶,加入适量间充质干细胞(msc)无血清培养基,置于37℃,5%的co2培养箱内培养,培养7天以后出现细胞集落;约10-13天细胞达到饱和,可进行传代;细胞呈长梭形,是典型的成纤维细胞样形态;

(2)细胞扩增:当细胞融合度达70-80%时,用生理盐水轻轻冲洗培养瓶细胞1-2次,添加3-5ml消化液,室温放置1-2分钟,镜下观察细胞接近球形,轻轻拍打瓶壁,中止消化,转移至离心管混匀,取样计数,按照8000个细胞/cm2进行传代,2-3天细胞密度达70-80%时,反复以上操作,以获得足够量的msc,一般采用p3-p5代细胞制备;

(3)细胞鉴定检测:细胞活率达90%以上时,流式检测标志物合格;

(4)干细胞活性因子的制备:

4i)细胞培养至最旺盛时,收集上清至离心管,0.22μm滤膜过滤上清除菌;

4ii)用生理盐水清洗2-3次培养瓶,弃去,然后采用细胞饥饿法加入10ml生理盐水/t225培养瓶继续培养12-24小时,待细胞变圆,吹打混匀后移至离心管,采用超声破碎仪破碎细胞后离心1400rpm,离心5min,收集的上清,经0.22μm滤膜过滤除菌;

4iii)将步骤4i)和4ii)的上清混合,采用截留分子量为10kd的纯化超滤系统浓缩,即得干细胞活性因子浓缩液。


技术总结
本发明涉及用于皮肤修复的干细胞活性因子面膜贴敷料及制法。本发明用于皮肤修复的干细胞活性因子面膜贴敷料是通过将水性的面膜液浸渍于医药可接受的无纺布上,再进行冷冻干燥制得的;所述面膜液中包含细胞因子以及海藻糖和普鲁兰多糖等,本发明面膜具有优良的即时保湿、增强皮肤屏障、增加皮肤弹性等功能,并且具有优良的成膜性能。

技术研发人员:冯迹;李观燕
受保护的技术使用者:英科博雅集团有限公司
技术研发日:2019.08.30
技术公布日:2019.11.15
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