1.用于皮肤修复的干细胞活性因子面膜贴敷料,其是通过将水性的面膜液浸渍于医药可接受的无纺布上,再进行冷冻干燥制得的;进一步地,所述面膜液中包含细胞因子以及海藻糖和普鲁兰多糖。
2.根据权利要求1的干细胞活性因子面膜贴敷料,其中:
所述面膜液包含如下组分:低级醇2-10重量份,精氨酸/赖氨酸多肽1-5重量份,细胞因子液2-40重量份,海藻糖1-8重量份,海藻酸钠0.1-1.5重量份,peg-75牛油树脂甘油酯类1-8重量份,玫瑰花水1-10重量份,普鲁兰多糖0.1-2重量份,透明质酸钠0.1-1.5重量份,水适量至100重量份;
或者,所述面膜液包含如下组分:低级醇3-7重量份,精氨酸/赖氨酸多肽2-4重量份,细胞因子液10-30重量份,海藻糖2-5重量份,海藻酸钠0.25-1重量份,peg-75牛油树脂甘油酯类1-5重量份,玫瑰花水1-5重量份,普鲁兰多糖0.25-1重量份,透明质酸钠0.25-1重量份,水适量至100重量份;
或者,所述面膜液包含如下组分:低级醇4-6重量份,精氨酸/赖氨酸多肽2-3重量份,细胞因子液10-20重量份,海藻糖3-5重量份,海藻酸钠0.5-1重量份,peg-75牛油树脂甘油酯类1-3重量份,玫瑰花水1-3重量份,普鲁兰多糖0.5-1重量份,透明质酸钠0.5-1重量份,水适量至100重量份;
或者,所述面膜液包含如下组分:低级醇5重量份,精氨酸/赖氨酸多肽2.5重量份,细胞因子液15重量份,海藻糖4重量份,海藻酸钠0.75重量份,peg-75牛油树脂甘油酯类2重量份,玫瑰花水2重量份,普鲁兰多糖0.75重量份,透明质酸钠0.75重量份,水适量至100重量份。
3.根据权利要求1的干细胞活性因子面膜贴敷料,其中所述低级醇选自甘油、丙二醇、丁二醇;优选的,所述低级醇选自甘油、丙二醇。
4.根据权利要求1的干细胞活性因子面膜贴敷料,其是通过包括如下步骤的方法制备得到的:
(a)将透明质酸钠、海藻酸钠和低级醇混合均匀,加入约为透明质酸钠10倍重量的70~80℃热水,搅拌使溶解,降温至30~35℃;
(b)向上一步骤所得液体中添加海藻糖、玫瑰花水、精氨酸/赖氨酸多肽、peg-75牛油树脂甘油酯类、细胞因子液、普鲁兰多糖,搅拌使溶解,得面膜液;
(c)使面膜液浸润于无纺布上,再将浸润面膜液的无纺布置冷冻干燥机中,进行冷冻干燥以除去水分(例如,至水分含量小于8%,优选小于5%);
(d)使冷冻干燥的面膜折叠,并密封包装(例如包装于密封袋、密封玻璃瓶、密封塑料瓶中),即得。
5.根据权利要求1的干细胞活性因子面膜贴敷料,其中步骤(3)使面膜液浸润于无纺布上时,每500平方厘米面积的无纺布上浸润所述面膜液2~20g,例如是2~15g,例如是3~10g。
6.根据权利要求1的干细胞活性因子面膜贴敷料,其中步骤(c)照如下程序进行冷冻干燥:(i)预冷冻:在-30℃至-40℃下将面膜冷冻,维持3~5小时;(ii)主干燥:预抽真空至18pa,搁板升温至-15℃至-20℃保持10~20小时;(iii)主干燥:继续升温至-2℃至4℃保持2~4小时进一步干燥;(iv)解析干燥:缓慢升温至30℃至35℃,再保持2~5小时使水分达到要求。
7.根据权利要求1的干细胞活性因子面膜贴敷料,其中所述细胞因子液中包含20~200pg/ml的egf,例如包含30~150pg/ml的egf,例如包含40~100pg/ml的egf。
8.根据权利要求1的干细胞活性因子面膜贴敷料,其中所述细胞因子液中还任选的包含fgf、vegf、il-6之一或者多种;或者,所述面膜液中还包含丝氨酸和氯化钠。
9.根据权利要求1的干细胞活性因子面膜贴敷料,其中所述细胞因子液是从脐带源间充质干细胞制备获得的。
10.根据权利要求1的干细胞活性因子面膜贴敷料,其中所述细胞因子液是照包括如下步骤的方法制备得到的:
(1)脐带源间充质干细胞获取:取健康足月剖宫产孕妇脐带,通过分离华通氏胶(wharton'sjelly)法,使用华通氏胶悬浮法制备;将华通氏胶放于t75培养瓶,加入适量间充质干细胞(msc)无血清培养基,置于37℃,5%的co2培养箱内培养,培养7天以后出现细胞集落;约10-13天细胞达到饱和,可进行传代;细胞呈长梭形,是典型的成纤维细胞样形态;
(2)细胞扩增:当细胞融合度达70-80%时,用生理盐水轻轻冲洗培养瓶细胞1-2次,添加3-5ml消化液,室温放置1-2分钟,镜下观察细胞接近球形,轻轻拍打瓶壁,中止消化,转移至离心管混匀,取样计数,按照8000个细胞/cm2进行传代,2-3天细胞密度达70-80%时,反复以上操作,以获得足够量的msc,一般采用p3-p5代细胞制备;
(3)细胞鉴定检测:细胞活率达90%以上时,流式检测标志物合格;
(4)干细胞活性因子的制备:
4i)细胞培养至最旺盛时,收集上清至离心管,0.22μm滤膜过滤上清除菌;
4ii)用生理盐水清洗2-3次培养瓶,弃去,然后采用细胞饥饿法加入10ml生理盐水/t225培养瓶继续培养12-24小时,待细胞变圆,吹打混匀后移至离心管,采用超声破碎仪破碎细胞后离心1400rpm,离心5min,收集的上清,经0.22μm滤膜过滤除菌;
4iii)将步骤4i)和4ii)的上清混合,采用截留分子量为10kd的纯化超滤系统浓缩,即得干细胞活性因子浓缩液。