氧化苦参碱在促进瘢痕修复中的应用的制作方法

本发明涉及医药技术领域，尤其涉及氧化苦参碱在促进瘢痕修复中的应用。

背景技术：

瘢痕是烧伤及创伤后常见的并发症，给患者造成巨大的精神创伤、肉体痛苦及沉重的经济负担。据统计每年全世界约有1000万烧伤病人,而烧伤后瘢痕的发生率是91.4%。瘢痕带给病人昂贵的医疗负担,每年瘢痕的治疗费用预计至少为40亿美元。此外，许多并发症,诸如，瘙痒、疼痛、失眠、焦虑、功能丧失、组织运动受限，最可怕的是瘢痕组织可发生恶性转变为瘢痕癌。现行瘢痕疗法不尽如人意，或副作用大，或使用周期长且费用昂贵，理想疗法还需不断探索。

中医药是中华民族传承下来的瑰宝，历经几千年的实践积累，应用于瘢痕修复，具有独特疗效。然而中草药成分复杂、药效物质不明，并且缺乏系统的现代科学理论体系支持，难以在国际上推广应用。oxymatrine（氧化苦参碱）是从苦参中提取的有效成分，被证实具有多种生物活性。临床和药理研究发现，氧化苦参碱具有抗炎、抗纤维化、免疫调节和抗肿瘤等作用。

技术实现要素：

有必要提出氧化苦参碱在促进瘢痕修复中的应用。

还有必要提出氧化苦参碱在促进增生性瘢痕修复中的应用。

还有必要提出氧化苦参碱在瘢痕治疗药物中的应用，所述药物中的有效成分为氧化苦参碱。

还有必要提出氧化苦参碱在增生性瘢痕治疗药物中的应用，所述药物中的成分包括氧化苦参碱和辅料，有效成分为氧化苦参碱。

还有必要提出氧化苦参碱在抑制瘢痕成纤维细胞自噬中的应用。

还有必要提出氧化苦参碱抑制瘢痕成纤维细胞自噬的信号通路为ampk/mtor/p62/lc3-ii。

附图说明

图1为猪全层烧伤瘢痕模型。

图2、3为三组试验的瘢痕变化图及评分图。

图4为三组试验组的模型瘢痕的表皮厚度、真皮厚度、胶原蛋白变化图。

图5-1为三组试验组的模型瘢痕角质细胞分化变化图。

图5-2为三组试验组的模型瘢痕角质细胞增殖变化图。

图5-3为三组试验组的模型瘢痕中促纤维化相关转化生长因子tgf-β1变化图。

图5-4为三组试验组的模型瘢痕中α-平滑肌肌动蛋白α-sma变化图。

图5-5为三组试验组的模型瘢痕的i型胶原蛋白collageni变化图。

图6为成功分离、培养人增生性瘢痕成纤维细胞加入oxymatrine后染色图。

图7为oxymatrine抑制人增生性瘢痕成纤维细胞活性的柱状图。

图8为oxymatrine抑制人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的柱状图。

图9、10为oxymatrine减少人增生性瘢痕成纤维细胞胶原蛋白合成量的染色图和柱状图。

图11、12为oxymatrine诱导人增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的染色图和柱状图。

图13为oxymatrine抑制人瘢痕成纤维细胞自噬的荧光图。

图14-17通过westernblot显示oxymatrine下调自噬相关蛋白lc3-ii、p-ampk表达，上调p-mtor、p62的表达。

具体实施方式

为了更清楚地说明本发明的技术效果，以下将从测试oxymatrine（氧化苦参碱）是否具有修复瘢痕的作用和揭示oxymatrine修复增生性瘢痕的机理两个方面对本发明进行说明。

1.测试oxymatrine（氧化苦参碱）是否具有修复瘢痕的作用。

（1）构建猪烧伤增生性瘢痕模型；图1为猪全层烧伤瘢痕模型。

a、巴马小型实验猪，b、烧伤模具，c、加热水箱，d、制造烧伤创面，e、弹力防护外衣，f、烧伤3周创面，g、创面清创，h、清创后2周创面，i、清创后3周创面，j、清创后4周创面，k、清创后5周增生性瘢痕形成。

（2）临床瘢痕评估检测oxymatrine促进增生性瘢痕修复。

（3）苏木精—伊红（h/e）染色检测oxymatrine促进增生性瘢痕修复；

（4）免疫组化检测oxymatrine促进增生性瘢痕修复。

通过前期猪烧伤瘢痕模型实验显示oxymatrine促进增生性瘢痕修复的情况，具体表现为瘢痕面积变化，表皮厚度变化，胶原蛋白含量变化。

参见图2、3，硅酮凝胶为阳性对照试验组，盐水为阴性对照试验组，oxymatrine（omt）为本发明试验组，图2中对三组试验的瘢痕评分，由图可知，使用omt后能够降低瘢痕评分；由图3可见，使用omt后能够减少瘢痕面积。

参见图4，第一列h/e显示三组试验组的模型瘢痕的表皮厚度明显减少、真皮厚度明显减少，a、b、c、d分别为0、1、4、8周的变化图片，由第二列至六列可见，ck10、p63、tgf-β1、α-sma、collageni的数量明显减少，可见omt能够抑制ck10、p63、tgf-β1、α-sma、collageni的表达。

参见图5-1、图5-2、图5-3、图5-4、图5-5，由图可知，使用omt能够抑制ck10、p63、tgf-β1、α-sma、collageni的表达。

2.揭示oxymatrine修复瘢痕的机理。

（1）成功分离、培养人增生性瘢痕成纤维细胞。参见图6。该图中，omt分别采用4.5mg/ml，1.5mg/ml，0.5mg/ml三个浓度来做对比试验。

（2）检测oxymatrine抑制人增生性瘢痕成纤维细胞活性；（alamarblue法）；参见图7。该图中，可见oxymatrine能够明显抑制人增生性瘢痕成纤维细胞活性。

（3）检测oxymatrine抑制人增生性瘢痕成纤维细胞增殖；（brdu法）；参见图8。该图中，可见oxymatrine抑制人增生性瘢痕成纤维细胞增殖。

（4）检测oxymatrine减少人增生性瘢痕成纤维细胞胶原蛋白合成量；（siriusred法）；参见图9、10，图9为胶原蛋白的染色图，图10显示4.5mg/ml的omt明显减少胶原蛋白合成。

（5）检测oxymatrine诱导人增生性瘢痕成纤维细胞凋亡；（tunel法）；参见图11、12。图11为凋亡的染色图，图12显示4.5mg/ml的omt能够明显诱导细胞的凋亡。

（6）检测oxymatrine抑制人瘢痕成纤维细胞自噬(免疫荧光，westernblot)；参见图13、14。图13通过免疫荧光细胞学实验显示oxymatrine抑制人瘢痕成纤维细胞自噬。图14a显示oxymatrine下调自噬相关蛋白lc3-ii的表达的条带图，14b为条带图对应的柱状图；图15a显示oxymatrine下调自噬相关蛋白p-ampk的表达的条带图，15b为条带图对应的柱状图；图16a显示oxymatrine上调自噬相关蛋白p-mtor的表达的条带图，16b为条带图对应的柱状图，图17a显示oxymatrine上调自噬相关蛋白p62的表达的条带图，17b为条带图对应的柱状图。

由以上试验可以得到，氧化苦参碱（oxymatrine）在促进瘢痕修复中具有显著的作用，能够应用于制备治疗瘢痕的药物中，且氧化苦参碱（oxymatrine）促进瘢痕修复是通过抑制瘢痕成纤维细胞自噬而发挥作用的，抑制自噬通路为ampk/mtor/p62/lc3-ii。

本发明实施例装置中的模块或单元可以根据实际需要进行合并、划分和删减。

以上所揭露的仅为本发明较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，本领域普通技术人员可以理解实现上述实施例的全部或部分流程，并依本发明权利要求所作的等同变化，仍属于发明所涵盖的范围。