(5R)-5-羟基雷公藤内酯醇在制备脓毒症治疗药物中的用途的制作方法

本发明属于医药技术领域，涉及(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇在制备脓毒症治疗药物中的用途，具体涉及(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇在制备用于治疗脓毒症、降低脓毒症死亡率和/或治疗脓毒症相关病症的药物中的用途。

背景技术：

脓毒症(sepsis)是由感染引起的全身炎症反应综合征(systemicinflammatoryresponsesyndrome，sirs)，临床表现主要包括重症肺部感染、腹腔感染、泌尿系统感染、血流感染、皮肤软组织感染等。严重脓毒症会伴随器官功能障碍、组织灌注不足或低血压等并发症，引发多器官功能障碍综合征(multipleorgandysfunctionsyndrome，mods)，甚至是脓毒性休克，是临床危重患者最主要的死亡原因之一。据报道，全球每年有近3150万脓毒症患者，死亡人数高达530万例，我国每年脓毒症患病人数估计在500万以上，外科icu及综合icu的严重脓毒症患病率高达30-70％，给各国政府造成了严重的医疗负担。

目前，临床上仍然缺乏特效的治疗措施，通过液体复苏、血管活性药物、抗感染药物和糖皮质激素等“集束化”治疗方案进行治疗，但脓毒症的死亡率仍居高不下。

此外，脓毒症的发生发展过程中机体内炎症介质的失控性释放和炎症反应紊乱是其重要的机制之一。然而免疫调节药物的虽然能够一定程度上通过调节免疫、抗炎作用等抑制患者的炎症程度，但对于器官功能衰竭的治疗效果不大，甚至多种药物被证实会导致mods，抗内毒素抗体、拮抗单一炎症介质、抗tlr等尝试均以失败告终。因此，寻找预防和治疗脓毒症的新靶点和新治疗措施迫在眉睫。

技术实现要素：

为了探索脓毒症的治疗和预防手段和途径，发明人尝试了使用(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇对脓毒症引发的多器官损伤进行治疗，意外地发现该化合物具有明显的治疗效果。因此，本发明的目的是提供(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇在制备用于治疗脓毒症、降低脓毒症死亡率及治疗脓毒症相关病症的药物中的用途。

上述药物中，(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇是有效成分之一或者唯一有效成分。

上述脓毒症相关病症包括但不限于脓毒症引起的多器官功能障碍综合征、脓毒性休克、全身炎性反应综合征。

上述多器官功能障碍综合征包括但不限于：肝脏损伤、肺脏损伤、肾脏损伤、脾脏损伤、肠道损伤、神经系统损伤、循环系统损伤、或血液系统损伤。

在另一实施方式中，所述血液系统损伤包括凝血功能障碍。

在另一实施方式中，所述的肝脏损伤包括肝酶升高、胆红素升高、白蛋白降低。

在另一实施方式中，所述的肺脏损伤包括急性肺损伤、急性呼吸窘迫综合征。

在另一实施方式中，所述的肾脏损伤包括尿量减少、血清肌酐高于正常标准。

在另一实施方式中，所述的脾脏损伤包括脾脏影像学异常如坏死。

在另一实施方式中，所述肠道损伤包括肠麻痹、肠胀气、呕吐和/或腹泻。

在另一实施方式中，所述神经系统损伤包括急性意识障碍。

在另一实施方式中，所述循环系统损伤包括休克、心肌损伤标志物(肌酸激酶、肌钙蛋白等)升高、心肌收缩和/或舒张功能障碍。

在另一实施方式中，所述凝血功能障碍包括血小板下降、凝血功能指标异常和/或出血。

在另一实施方式中，上述药物可用于减轻脓毒症引起的多脏器器质性损伤和/或异常炎性反应。

在一种实施方式中，上述药物含有安全有效量的(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇。

根据动物实验，当施药于脓毒症小鼠时，(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇的给药剂量为0.125-0.5mg/kg，优选给药剂量大约为0.25mg/kg。

在另一实施方式中，所述药物按雷腾舒片剂计，给药剂量为0.25mg-1g/天。

在另一实施方式中，所述药物为单元剂型。

在另一实施方式中，所述单元剂型中含有活性成分(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇。

在另一实施方式中，所述单元剂型中含有日剂量的单元剂型。

在另一实施方式中，上述药物可以是药物组合物，含有(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇和药学上可接受的载体。

上述药学上可接受的载体包括佐剂、赋形剂、防腐剂、吸收延迟剂、填充剂、粘合剂、吸附剂、ph缓冲剂、崩解剂、增溶剂、香味剂或其组合。

在一种实施方式中，上述药物组合物除了药物活性成分(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇外，还可以包含至少一种辅助治疗剂、或与至少一种辅助治疗剂联合施用，以便与(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇联合使用。

在另一实施方式中，所述联合施用包括共同施用、或序贯施用。

在另一实施方式中，所述序贯施用包含间隔一定时间后的先后施用。

上述辅助治疗剂包括选自抗感染药物、血管活性药物、抗凝药物、免疫调节剂、和血制品中的一种多种。在另一实施方式中，所述抗感染药物可以选自抗细菌、抗真菌和抗病毒药物中的一种或两种以上组合。

在另一实施方式中，所述血管活性药物可以选自多巴胺、去甲肾上腺素、血管加压素等临床常用的血管活性药物中的一种或两种以上组合。

在另一实施方式中，所述免疫调节剂包括糖皮质激素、蛋白酶抑制剂、干扰素和胸腺肽等。

在另一实施方式中，所述的血制品包括血浆、白蛋白、免疫球蛋白、凝血因子、单采红细胞、单采血小板、全血等。

(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇毒性较低，可以制成多种类型的制剂，通过多渠道给药，从而为脓毒症相关疾病提供了新的治疗手段和途径。

在另一实施方式中，可以包括口服剂、注射剂、静脉注射剂、栓剂、吸入剂、或外用剂。

在另一实施方式中，所述口服剂包括片剂、胶囊、糖浆、口崩剂、或膜剂。

在另一实施方式中，所述口服剂包括缓释剂、或控释剂。

在另一实施方式中，所述注射剂包括静脉注射剂、腹腔注射剂、腔内注射剂、灌洗剂、或冲洗剂。

在另一实施方式中，所述吸入剂包括气雾剂、粉剂、或鼻喷剂。

在另一实施方式中，述所外用剂包括贴剂、膏剂、或凝胶剂。

在另一实施方式中，药物剂型为片剂。

在另一实施方式中，本发明还提供了一种治疗脓毒症、降低脓毒症死亡率和/或治疗脓毒症相关病症的方法，包括步骤：

向需要的对象施用安全有效量的药物，其中，所述药物含有安全有效量的(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇。

在另一优选例中，本发明还提供了一种药物，用于治疗脓毒症、降低脓毒症死亡率和/或治疗脓毒症相关病症的用途，其中，所述药物含有安全有效量的(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇。

在另一实施方式中，所述需要的对象为确诊脓毒症或存在一种或多种脓毒症临床表现的对象。

在另一实施方式中，所述需要的对象为哺乳动物，例如人、鼠、兔、猫、犬、猴等。

附图说明

图1是对脓毒症小鼠模型给予不同剂量(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇后使用r语言中的survminer包、survival包及ggplot2包绘制的生存曲线。其中a为正常小鼠(空白对照，n＝10)；b组为未给药的脓毒症小鼠模型组(n＝10)；c组为低剂量(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇(0.125mg/kg)给药的脓毒症小鼠模型组(n＝10)；d组为中剂量(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇(0.25mg/kg)给药的脓毒症小鼠模型组(n＝10)；e组为高剂量(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇(0.5mg/kg)给药的脓毒症小鼠模型组(n＝10)。

图2是小鼠肺脏组织切片经he染色病理检测的显微照片。其中a为正常小鼠(空白对照)；b为未给药的脓毒症小鼠模型；c为中剂量(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇(0.25mg/kg)给药的脓毒症小鼠(n＝10)。

图3是小鼠肾脏组织切片经he染色病理检测的显微照片。其中a为正常小鼠(空白对照)；b为未给药的脓毒症小鼠模型；c为中剂量(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇(0.25mg/kg)给药的脓毒症小鼠(n＝10)。

图4是小鼠脾脏组织切片经he染色病理检测的显微照片。其中a为正常小鼠(空白对照)；b为未给药的脓毒症小鼠模型；c为中剂量(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇(0.25mg/kg)给药的脓毒症小鼠(n＝10)。

图5是小鼠肠道组织切片经he染色病理检测的显微照片。其中a为正常小鼠(空白对照)；b为未给药的脓毒症小鼠模型；c为中剂量(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇(0.25mg/kg)给药的脓毒症小鼠(n＝10)。

图6是显示小鼠外周血血常规中淋巴细胞检测结果的柱形图。其中a为正常小鼠(空白对照)；b为未给药的脓毒症小鼠模型；c为中剂量(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇(0.25mg/kg)给药的脓毒症小鼠(n＝10)。*：p<0.05；**：p<0.01。

图7是显示小鼠外周血血常规中中性粒细胞检测结果的柱形图。其中a为正常小鼠(空白对照)；b为未给药的脓毒症小鼠模型；c为中剂量(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇(0.25mg/kg)给药的脓毒症小鼠(n＝10)。*：p<0.05；**：p<0.01。

图8是显示小鼠外周血中炎症因子tnf-α的elisa检测结果的柱形图。其中a为正常小鼠(空白对照)；b为未给药的脓毒症小鼠模型；c为中剂量(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇(0.25mg/kg)给药的脓毒症小鼠(n＝10)。*：p<0.05；**：p<0.01。

具体实施方式

经过广泛而深入的研究，本发明人意外地发现了(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇对脓毒症引发的器官损伤具有优异的治疗作用。实验证明，在脓毒症发生时，给予(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇可减轻小鼠肺脏、脾脏、肾脏、肠道组织等器官损伤作用，减轻炎症反应，并明显降低脓毒症导致的小鼠死亡率，并且未产生明显的毒副作用，具有较高的临床应用前景。

术语

脓毒症

如本文所述，脓毒症是指由感染引起的全身器官功能障碍性疾病。脓毒症的具体机制未明，但在脓毒症的发生发展过程中，通常由于感染原及其毒素的持续存在以及后续机体内炎症介质的失控性释放而造成难以逆转的多器官衰竭。然而，无论是应用抗感染药物还是已知的免疫调节剂，均不能有效改善各脏器功能，甚至会直接导致或加重mods的发生，例如，活化蛋白c(apc)、抗内毒素抗体、炎症因子拮抗剂、抗tlr等已被证实会加重脓毒症患者死亡率。

其中，术语“感染”指的是指细菌、病毒、真菌、寄生虫等病原体侵入人体所引起的局部组织和全身性炎症反应。通常，感染情况下伴随着感染毒素的存在，并且造成进一步的组织器官损害。

多器官功能障碍综合征(multipleorgandysfunctionsyndrome，mods)

是指机体在遭受严重创伤、休克、感染及外科大手术等急性疾病过程中，有两个或两个以上的器官或者系统同时或者序贯发生功能障碍，以至不能维持内环境稳定的临床综合征。

在脓毒症的临床表现中，除了有明确的感染灶，还可伴有一种或多种全身系统或多个器官的功能障碍。所述的全身系统或多个器官功能障碍包括肝脏、呼吸系统、肾脏、脾脏、胃肠道、神经系统、循环系统、血液系统等多种功能障碍。具体地，典型的临床可以表现包括一下表现的一种或多种，例如出现发热或低体温、高血糖、炎症指标增高或不增高、难以纠正的低血压、低氧合状态、急性少尿、血肌酐增高、心肌损伤标志物升高、凝血功能障碍等。

全身炎症反应综合征(systemicinflammatoryresponsesyndrome，sirs)

是机体对感染、创伤、烧伤、手术以及缺血-再灌注等感染性或非感染性因素的严重损伤所产生的全身性的非特异性炎症反应，最终导致机体对炎症反应失控所表现的一组临床症状，内毒素往往是全身性炎症反应的触发剂。

脓毒性休克(septicshock)：

脓毒性休克指由于脓毒症引起的休克，其定义是患者组织灌注不足，即容量试验后持续低血压状态或血乳酸浓度≥4mmol/l。

(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇

如本文所用，“本发明化合物”、“活性成分”、“本发明雷公藤衍生物”、“雷腾舒”、“t-8”“lldt-8”均可互换使用，指的是化学结构式如下的(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇：

此外，本发明化合物还包括将本发明化合物进行修饰、改造、或取代并具有与本发明化合物相同或基本相同活性的衍生物或等同物。

本发明证实，本发明化合物不仅具有良好的脓毒症治疗效果，有效地降低了脓毒症的死亡率，并且本发明化合物cc50为256.6±73.8nm，毒性极低，具有很好的临床应用前景。

药物及给药剂量

如本文所用，术语“药物”指的是含有本发明活性成分作为主要活性成分，并对脓毒症及其相关病症具有治疗、改善、减轻作用，或对脓毒症死亡率具有减少作用的物质。其中，所述药物中至少含有10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、或95％重量份的本发明活性成分。

在另一实施方式中，所述药物还含有药学上可接受的载体。在另一实施方式中，所述药物还含有一种或多种辅助治疗剂或可与一种或多种辅助治疗剂联合施用。常见的辅助治疗剂包括抗感染药物、血管活性药物、抗凝药物、免疫调节剂、和血制品中的一种多种。给药的剂量可以是“有效给药量”或“安全有效量”，术语“有效给药量”、“安全有效量”可以互换使用，指的是施用后可以在施用对象体内(如全身、血液内或靶器官内)出现目标所需的治疗、缓解、改善、减轻病症的效果，且不会出现施用对象不可耐受的不良反应的量。在本发明中，(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇的安全有效量可与通过常规方式获得，并且可以采取单剂量或多剂量的形式。例如，根据小鼠实验，安全有效量可以为0.125-0.5mg/kg、0.15-0.4mg/kg、0.17-0.35mg/kg、0.18-0.32mg/kg或者0.2-0.3mg/kg。优选给药剂量大约为0.25-0.5mg/kg左右。

通常以能够提供药物的治疗有效日剂量的数量来向脓毒症患者给予(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇。已知对于药物的有效给药剂量可以表述为每天的有效给药剂量或日剂量。

本文中，术语“日剂量”是指每天给予的(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇数量，与给药频率无关。例如，如果患者接受每天两次的10mg的单位剂量，则日剂量是20mg。应该理解，术语“日剂量”的使用并不意味着必须每天给予一次该具体剂量数量。然而，在一个具体实施方案中，给药频率可以是每天一次(q.d.)，并且日剂量和单位剂量在该实施方案中是相同的意思。

具体地，本发明药物的给药剂量以活性成分计，可施用的剂量为0.01mg-100mg/天，例如0.05-20mg/天，优选为0.1mg-10mg/天，0.2mg-5mg/天。本发明药物的给药剂量以市售可得的商品雷腾舒计，可施用的剂量为0.25mg-4mg/天，例如0.5mg-2mg/天，1mg-1.5mg/天。在熟练的医师指导下，可以根据病情及患者特征、有效性、不良反应等情况进行计量的调整。

施用方式

以(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇为有效成分的脓毒症及脓毒症相关病症的治疗药物在施药于患者时，可以通过口服给药、或者通过注射方式给药，也可以通过其他途径给药。例如，本发明活性成分或药物可以通过静脉给药、吸入给药、腹腔给药、颅内给药、眼内给药、蛛网膜下腔给药、经直肠给药，用于治疗全身或局部的器官功能障碍。

本发明活性成分或本发明药物的给药方式取决于药物剂型、给药个体的体质、体重、年龄、病灶部位、病况进程、给药部位、给药量等治疗因素，药物中活性成分(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇的有效给药剂量可做灵活调整。

本发明活性成分或本发明药物可以在脓毒症的任意阶段或脓毒症任意分级状态下施用，例如出现一个或多个器官功能障碍时，或出现一个或多个上述临床症状时，或在轻度、中度、重度或危重度患者中施用。给药时间可以根据临床症状的改善由临床医师决定，例如1-10天、20天、30天等。

此外，当本发明药物中含有除本发明活性成分以外的第二活性成分作为辅助治疗剂施用时，需理解两种活性成分之间不会产生加重病情的药物相互作用；当本发明药物可与辅助治疗剂联合施用时，也需注意本发明药物与辅助治疗剂之间的药物相互作用。药物相互作用可由本领域技术人员经常规药效、药代动力学测定方法确定获得。根据药物相互作用的结果，可确定第二活性成分，或选择将本发明活性成分与辅助治疗剂共同施用或序贯施用，例如在施用辅助治疗剂前/后，间隔一定时间，例如15、20、30、60分钟或更长间隔，如2小时、4小时、6小时、8小时、10小时、12小时后施用本发明药物。

剂型

本发明的药物可以制成本领域技术人员公知的常规剂型，选择的制备方法取决于预期的给药途径。例如，作为口服给药药物，可以呈片剂、胶囊、微胶囊、丸剂、微丸剂、粉剂、缓释调配物、溶液、悬浮液形式；作为无菌溶液、悬浮液或乳液用于非经肠注射；作为贴剂、软膏或乳霜用于局部(如皮肤)投予或作为栓剂用于直肠投予；本发明剂型还包括眼内用药剂型，如凝胶剂、膏剂；本发明剂型还包括适用于静脉给药、腹腔给药、局部冲洗或灌洗、或颅内给药形式的液体制剂(包括预充针)、粉剂等。在另外一些实施方式中，药物呈适于单次投予准确剂量的单位剂型。

当本发明的脓毒症治疗药物为固体药物组合物时，该药物组合物可以包括药学上可接受的载体。其中可接受的载体包括有佐剂、赋形剂、防腐剂、吸收延迟剂、填充剂、粘合剂、吸附剂、ph缓冲剂、崩解剂、增溶剂、香味剂、其它载剂、其它惰性成份、或其组合。这些药学上可接受的载体的具体种类和用量可以由技术人员根据本领域公知常识来筛选、或者通过简单实验来确定。这些药学上可接受的载体不应当影响(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇的药理活性或者导致药物不良反应。

当药物剂型是为注射剂时，其可以制备成注射用溶液或者冻干粉针剂。当制备成冻干粉针剂时，可以加入冻干保护剂，该冻干保护剂可以选自麦芽糖、海藻糖、蔗糖、甘露醇、乳糖、葡萄糖、山梨醇、木糖醇、赤藓糖醇、苏氨酸、或者它们两种以上的混合物。

本发明还可以提供含有作为活性成分的本发明化合物的控释/缓释药物制剂，其中控制和调节活性成分的释放的节律和速度以允许较少频率给药或改善给定活性成分的药代动力学或毒性特征。

本发明药物通常为单一剂量单位，即单元剂量，而在其他实施方案中可以存在多个单位剂量，例如特定方案或临床情况下所需的剂量单位的数量。

以下结合具体实施例及附图，对本发明作进一步说明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明的实施例中，如果对于实验操作温度没有做出具体说明，则该温度通常指室温(10-30℃)。

本文中涉及到多种物质的添加量、含量及浓度，其中所述的百分含量，除特别说明外，皆指重量百分含量。

本文中在表述数值特征时，术语“约”或者“大约”是指所表示的本数可以有±10％、±9％、±8％、±7％、±6％或±5％的误差范围或浮动范围。

除非另行定义，本发明所出现的数词范围包含该数词以及该范围中的任意数。

下列实施例中未注明具体条件的实施方法，按照常规方法和条件，或者按照商品说明书选择。本发明主要运用了组织病理学分析检测方法来检测脓毒症小鼠多个器官损伤指标。

实施例1小鼠脓毒症模型的制备

运用单次腹腔注射脂多糖(lipopolysaccharide，lps)的方法，制备脓毒症小鼠模型，具体方法步骤如下：

1、小鼠分组：8-12周龄的雌性c57小鼠(体重在22-25g左右，复旦大学附属中山医院动物实验中心提供)，于spf级动物房中适应性喂养一周后，根据小鼠体重进行随机分组，保证每组小鼠平均体重值无统计学差异，每组数量为10只。

2、腹腔注射脂多糖制备脓毒症小鼠模型：用磷酸盐缓冲液(pbs)(购自sigma)溶解脂多糖(购自sigma公司)粉末后，按6毫克/千克(mg/kg)体重的比例腹腔注射给小鼠，得到脓毒症小鼠模型，对照组腹腔注射等体积的pbs作为对照。

实施例2脓毒症小鼠给药(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇后的死亡率考察

采用经口灌胃的单次给药方式，对脓毒症小鼠进行(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇(经化合物筛选，(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇的脓毒症治疗作用最优且对细胞毒性最小，cc50为256.6±73.8nm，而多种雷公藤其他衍生物则<10nm，其中雷公藤内酯的cc50为2.1±0.2nm，因此选用(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇作为活性成分)给药，具体步骤如下：

1、小鼠分组：8-12周龄的雌性c57小鼠(体重在22-25g左右)，于spf级动物房中适应性喂养一周后，根据小鼠体重进行随机分为5组，分别为正常小鼠(空白对照，a)脓毒症小鼠模型组(b)、脓毒症小鼠加(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇低剂量(0.125mg/kg)组(c)、脓毒症小鼠加(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇中剂量(0.25mg/kg)组(d)、脓毒症小鼠加(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇高剂量(0.5mg/kg)组(e)，每组数量为10只。

2、配制(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇溶液：取(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇粉末溶于含0.2％二甲基亚砜(dmso)的pbs中配制成1mg/ml的贮存液，并于-20°中保存。使用前用pbs将贮存液10倍稀释为0.1mg/ml的母液，分别按照0.125mg/kg、0.25mg/kg、0.5mg/kg的给药剂量，用适量的pbs进行稀释(每只小鼠的给药体积为0.1毫升每10克体重)，例如对于10只体重为25克的小鼠，按给药剂量为0.5mg/kg的(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇时，应将1.25毫升的(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇母液稀释于1.25毫升pbs中。

3、经口灌胃给药(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇：对于脓毒症小鼠加(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇低剂量(0.125mg/kg)组、脓毒症小鼠加(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇中剂量(0.25mg/kg)组、脓毒症小鼠加(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇高剂量(0.5mg/kg)组，经口灌胃的方式单次给予相应剂量的(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇，空白对照组(正常小鼠)和脓毒症小鼠模型组给予等体积的pbs。

4、腹腔注射脂多糖(lps)：30min后，按照实施例1的操作方法，分别对脓毒症小鼠加(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇低剂量(0.125mg/kg)组、脓毒症小鼠加(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇中剂量(0.25mg/kg)组、脓毒症小鼠加(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇高剂量(0.5mg/kg)组和脓毒症小鼠模型组，按6毫克/千克(mg/kg)体重的比例腹腔注射lps，空白对照组腹腔注射等体积的pbs作为对照。

5、随后一周的时间内，持续观察观察小鼠的生存状态，并绘制生存曲线，结果见图1。实验结果表明，给予各剂量的(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇后脓毒症小鼠的生存率均得到了明显的改善，(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇有效地改善了脓毒症小鼠的预后。其中0.25mg/kg的保护效果尤为优异。

实施例3采用(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇治疗脓毒症小鼠多器官损伤

采用经口灌胃的给药方式，对脓毒症小鼠进行(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇中剂量(0.25mg/kg)给药，解剖正常小鼠和脓毒症小鼠，取其特定组织器官，进行he染色病理检测，具体步骤如下：

1、小鼠分组：8-12周龄的雌性c57小鼠(体重在22-25g左右)，于spf级动物房中适应性喂养一周后，根据小鼠体重进行随机分为3组，分别为空白对照(正常小鼠)组、脓毒症小鼠模型组、脓毒症小鼠加(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇中剂量(0.25mg/kg)组，每组数量为10只。

2、配制(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇溶液：取(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇粉末溶于含0.2％二甲基亚砜(dmso)的pbs中配制成1mg/ml的贮存液，并于-20°中保存。使用前用pbs将贮存液10倍稀释为0.1mg/ml的母液，按照0.25mg/kg的给药剂量用适量的pbs进行稀释(每只小鼠的给药体积为0.1毫升每10克体重)，例如对于10只体重为25克的小鼠，应将0.625毫升的(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇母液稀释于1.875毫升pbs中。

3、经口灌胃给药(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇：对于脓毒症小鼠加(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇中剂量(0.25mg/kg)组，经口灌胃的方式单次给予相应剂量(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇，空白对照组和脓毒症小鼠模型组给予等体积的pbs。

4、腹腔注射脂多糖(lps)：30min后，按照实施例1的操作方法，分别对脓毒症小鼠加(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇中剂量(0.25mg/kg)组和脓毒症小鼠模型组，按6毫克/千克(mg/kg)体重的比例腹腔注射lps，空白对照组腹腔注射等体积的pbs作为对照。

5、持续观察小鼠的生存状态，24小时后，对小鼠实施安乐死，采集肺右叶、右肾、脾脏、肝中叶、肠道空肠段，分别加入10倍体积的4％的多聚甲醛组织固定液，室温静置固定24小时后，经过梯度浓度酒精脱水、石蜡包埋成组织块，用石蜡切片机切取0.5mm厚度的石蜡切片，经脱蜡、水化、染色、洗去多余杂色、封片等步骤，最后在显微镜下观察肠道组织的病理学改变，结果见图2-5。

图2显示了肺脏组织的he染色病理检测结果，脓毒症小鼠肺脏组织正常形态受到明显破坏，肺泡破裂，明显出现肺泡壁增厚、细胞核聚集等炎症反应以及肺充血水肿等病理改变，(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇有效地减轻了脓毒症造成的肺脏组织损伤。

图3显示了肾脏组织的he染色病理检测结果，脓毒症小鼠肾脏组织中出现大量点状、颗粒状炎性细胞浸润，肾小管上皮细胞空泡变性形成明显增多，(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇有效地减轻了脓毒症造成的肾脏组织损伤。

图4显示了脾脏组织的he染色病理检测结果，与空白对照组小鼠比较，脓毒症小鼠脾脏组织白髓数量增多，生发中心多见，(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇有效地减轻了脓毒症造成的脾脏组织损伤。

图5显示了肠道组织的he染色病理检测结果；脓毒症小鼠肠道组织内绒毛遭到严重破坏，而给予(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇有效地减轻了脓毒症造成的肠道组织损伤。

以上实验结果表明，(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇可改善脓毒症小鼠的肺脏、肾脏、脾脏、肠道组织的病理状况，用于治疗和/或预防保护脓毒症小鼠多器官的损伤。

实施例4采用(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇改善脓毒症小鼠异常炎症反应

采用经口灌胃的给药方式，对脓毒症小鼠进行(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇中剂量(0.25mg/kg)给药，取外周血进行血常规血细胞水平(包括淋巴细胞、中性粒细胞等)检测，并利用elisa法测定小鼠外周血中炎症因子细胞坏死因子(tnf-α)的水平，具体步骤如下：

1、小鼠分组：8-12周龄的雌性c57小鼠(体重在22-25g左右)，于spf级动物房中适应性喂养一周后，根据小鼠体重进行随机分为3组，分别为空白对照(正常小鼠)组、脓毒症小鼠模型组、脓毒症小鼠加(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇中剂量(0.25mg/kg)组，每组数量为10只。

2、配制(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇溶液：取(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇粉末溶于含0.2％二甲基亚砜(dmso)的pbs中配制成1mg/ml的贮存液，并于-20°中保存。使用前用pbs将贮存液10倍稀释为0.1mg/ml的母液，按照0.25mg/kg的给药剂量用适量的pbs进行稀释(每只小鼠的给药体积为0.1毫升每10克体重)，例如对于10只体重为25克的小鼠，应将0.625毫升的(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇母液稀释于1.875毫升pbs中。

3、经口灌胃给药(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇：对于脓毒症小鼠加(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇中剂量(0.25mg/kg)组，经口灌胃的方式单次给予相应剂量(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇，空白对照组和脓毒症小鼠模型组给予等体积的pbs。

4、腹腔注射脂多糖(lps)：30min后，按照实施例1的操作方法，分别对脓毒症小鼠加(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇中剂量(0.25mg/kg)组和脓毒症小鼠模型组，按6毫克/千克(mg/kg)体重的比例腹腔注射lps，空白对照组腹腔注射等体积的pbs作为对照。

5、持续观察小鼠的生存状态：24小时后，眼球摘除法采集小鼠外周血，立即取10微升全血，利用全自动血液细胞分析仪检测血常规。本发明使用的分析仪器为v-53兽用全自动血液细胞分析仪器，试剂使用该仪器的配套试剂包，均购自深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司。结果见图6-7。

6、使用含有少量液体的肝素抗凝管收集外周血，将得到的全血与抗凝剂充分混匀，经过3000rpm离心力10分钟获得上层血浆样本，使用tnf-αelisa试剂盒(货号1217202，达优)，按操作说明书进行检测血浆中tnf-α的水平。结果见图8。

图6显示了外周血血常规中淋巴细胞水平的检测结果。与空白对照组相比，脓毒症小鼠淋巴细胞比例明显下降；而给予(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇有效地提高了淋巴细胞的水平，表明减轻了脓毒症引起的炎症反应。

图7显示了外周血血常规中中性粒细胞水平的检测结果。与空白对照组相比，脓毒症小鼠中性粒比例明显升高；而给予(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇有效地降低了中性粒细胞的水平，表明减轻了脓毒症引起的炎症反应。

图8显示了血浆中炎症因子tnf-α的检测结果。与空白对照组相比，脓毒症小鼠tnf-α的表达量明显上升；而给予(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇有效地降低了tnf-α的水平，表明减轻了脓毒症引起的炎症反应。

以上实验结果表明，(5r)-5-羟基雷公藤内酯醇可减轻脓毒症引起的异常炎症反应。此外，在以上实验中，并未观察到严重的药物相关性不良反应。