玛咖提取物在制备药物或食品中的用途的制作方法

1.本发明涉及玛咖的食药应用技术领域，尤其涉及一种玛咖提取物的食药应用技术领域。


背景技术：

2.玛咖属于十字花科独行菜属一年或两年生草本植物，原产于秘鲁海3500m-4500m的南美安第斯山区。玛咖因其可媲美人参的功效，在南美被称为“秘鲁人参”，是药食兼用的植物。玛咖地下膨大多汁的储藏根形似萝卜，是具有商业价值的主要食用部分。在过去的20年当中，世界各地对玛咖的了解越来越深，关注日益增多。我国西部部分地区的自然条件适合玛咖的生长，现在我国云南、新疆、吉林和西藏等省(区)都实现了引种，并且经济和社会效益很好。研究表明玛咖具有提高人畜生育能力、改善性功能、抑制前列腺增大、抗疲劳、抗抑郁、改善骨质酥松、提高记忆力等作用。
3.但是现有文献中从未报道过玛咖提取物中具有水溶性还氧化物水解酶抑制剂。水溶性环氧化物水解酶(seh)是一种能代谢环氧脂肪酸的酶,它在哺乳动物中广泛存在,能将内源性环氧二十碳三烯酸(eets)转化为二羟基二十碳三烯酸(dhets)。内源性eets是由花生四烯酸(aa)经某些细胞色素p450单氧化酶氧化而来，它是生物体内重要的信号分子,具有调节离子转运和基因表达、血管扩张等作用。在动物体内，有很多种途径可以降解eets,其中seh将eets代谢为dhets是最主要的代谢途径,使eets的浓度降低，生理活性下降，可导致血压升高，并进一步影响肾脏,心脏等功能。直接从功能上说，水溶性还氧化物水解酶抑制剂具有降血压、降血糖、保护心血管、肾脏和神经系统等多种功效，现美国多家公司已经或正在进行临床实验运用seh，但是都是实验室合成的小分子化合物，天然来源的高效水溶性还氧化物水解酶抑制剂非常罕见。
4.因此，本领域的技术人员致力于开发一种天然来源的高效水溶性还氧化物水解酶抑制剂，以及以水溶性环氧化物水解酶为作用靶点的相关药物、相关功能性食品。


技术实现要素：

5.有鉴于现有技术的上述缺陷，本发明所要解决的技术问题是:获得一种天然来源的高效水溶性还氧化物水解酶抑制剂，并围绕该抑制剂的功效开发一系列药品和功能性食品，以克服水溶性还氧化物水解酶抑制剂人工合成成本高、数量少、分子小的问题。
6.为实现上述目的，本发明提供了一种玛咖提取物在制备药物或食品中的用途，所述提取物为玛咖酰胺。
7.进一步地，所述玛咖酰胺是一种水溶性环氧化物水解酶抑制剂。
8.进一步地，所述玛咖酰胺为
9.n-苄基亚油酰胺；
10.n-苄基亚麻酰胺；
11.n-苄基花生四烯酰胺；
12.n-苄基二十碳-5z,8z,11z,14z,17z-五烯酰胺；
13.n-3-甲氧基苄基亚油酰胺；
14.n-3-甲氧基苄基亚麻酰胺；
15.n-3-甲氧基苄基花生四烯酰胺；
16.n-3-甲氧基苄基二十碳-5z,8z,11z,14z,17z-五烯酰胺；
17.n-3,4-二甲氧基苄基亚麻酰胺；
18.n-(2-苯乙基)亚油酰胺；
19.n-(2-苯乙基)亚麻酰胺；
20.中任意一种或任意两种及两种以上的组合。
21.进一步地，所述药物或食品为止痛和或抗炎产品。
22.进一步地，所述药物或食品为止痛和或抗炎产品。
23.进一步地，所述药物或食品的功能是一个或任意几个的组合：
24.保护心血管；保护肾脏；保护神经系统。
25.进一步地，所述药物或食品的功能是一个或任意几个的组合：
26.保护心血管；保护肾脏；保护神经系统。
27.技术效果
28.本项目首次阐明了玛咖提取物玛咖酰胺中一类化合物具有抑制水溶性还氧化物水解酶的活性，并证实其具有止痛功能，据次可开发多种以抑制水溶性环氧化合物水解酶为靶点的一系列药物、天然药物、和食品。
29.以下将结合附图对本发明的构思、具体结构及产生的技术效果作进一步说明，以充分地了解本发明的目的、特征和效果。
附图说明
30.图1是n-苄基棕榈酰胺的化合物结构图；
31.图2是n-苄基硬脂酰胺的化合物结构图；
32.图3是n-苄基油酰胺的化合物结构图；
33.图4是n-苄基亚油酰胺的化合物结构图
34.图5是n-苄基亚麻酰胺的化合物结构图
35.图6是n-苄基花生四烯酰胺的化合物结构图
36.图7是n-苄基二十碳-5z,8z,11z,14z,17z-五烯酰胺的化合物结构图
37.图8是n-3-甲氧苄基棕榈酰胺的化合物结构图
38.图9是n-3-甲氧基苄基硬脂酰胺的化合物结构图
39.图10是n-3-甲氧基苄基油酰胺的化合物结构图
40.图11是n-3-甲氧基苄基亚油酰胺的化合物结构图
41.图12是n-3-甲氧基苄基亚麻酰胺的化合物结构图
42.图13是n-3-甲氧基苄基花生四烯酰胺的化合物结构图
43.图14是n-3-甲氧基苄基二十碳-5z,8z,11z,14z,17z-五烯酰胺的化合物结构图
44.图15是n-3,4-二甲氧基苄基棕榈酰胺的化合物结构图
45.图16是n-3,4-二甲氧基苄基亚油酰胺的化合物结构图
46.图17是n-3,4-二甲氧基苄基亚麻酰胺的化合物结构图
47.图18是n-(2-苯乙基)亚油酰胺的化合物结构图
48.图19是n-(2-苯乙基)亚麻酰胺的化合物结构图
49.图20是验证玛卡酰胺的抗炎止痛作用实验数据图
具体实施方式
50.专业术语定义：
51.①
ic
50
(half maximal inhibitory concentration)是指被测量的拮抗剂的半抑制浓度。它能指示某一药物或者物质(抑制剂)在抑制某些生物程序(或者是包含在此程序中的某些物质，比如酶，细胞受体或是微生物)的半量。ic
50
值可以用来衡量药物抑制酶的能力，即抑制能力越强，该数值越低。
52.②
cas号(cas registry number或称cas number,cas rn,cas#)，又称cas登录号，是某种物质(化合物、高分子材料、生物序列(biological sequences)、混合物或合金)的唯一的数字识别号码。美国化学会的下设组织化学文摘服务社(chemical abstracts service,cas)负责为每一种出现在文献中的物质分配一个cas号，其目的是为了避免化学物质有多种名称的麻烦，使数据库的检索更为方便。如今几乎所有的化学数据库都允许用cas号检索。
53.③
nm代表的单位是nmol/l，读作：纳摩尔每升；
54.n即“纳”，常见单位为nm，1m＝10^9nm。m即“mol/l”读作：摩尔每升。
55.④
seh指代水溶性环氧化物水解酶，水溶性环氧化物水解酶(soluble epoxide hydrolase,seh)。
56.实施例1
57.玛咖可以提取出一种玛咖酰胺，该玛咖酰胺是一种水溶性环氧化物水解酶抑制剂，具体为n-苄基棕榈酰胺，图1显示了n-苄基棕榈酰胺的化合物结构图，n-苄基棕榈酰胺的cas号为74058-71-2。发明人测试了n-苄基棕榈酰胺对人、大鼠和小鼠水溶性环氧化物水解酶的抑制作用，其中对人的seh的ic
50
(nm)为524，对大鼠的seh的ic
50
(nm)为370，对小鼠的seh的ic
50
(nm)为422。所述n-苄基棕榈酰胺可用于制备药品或食品，所述药品或所述食品具备以下功能中的一种或几种：止痛、抗炎、保护心血管、保护肾脏、保护神经系统。
58.实施例2
59.玛咖可以提取出一种玛咖酰胺，该玛咖酰胺是一种水溶性环氧化物水解酶抑制剂，具体为n-苄基硬脂酰胺，图2显示了n-苄基硬脂酰胺的化合物结构图，n-苄基硬脂酰胺的cas号为5327-45-7。发明人测试了n-苄基硬脂酰胺对人、大鼠和小鼠水溶性环氧化物水解酶的抑制作用，其中对人的seh的ic
50
(nm)超过100000，对大鼠的seh的ic
50
(nm)为35755，对小鼠的seh的ic
50
(nm)为59564。所述n-苄基硬脂酰胺可用于制备药品或食品，所述药品或所述食品具备以下功能中的一种或几种：止痛、抗炎、保护心血管、保护肾脏、保护神经系统。
60.实施例3
61.玛咖可以提取出一种玛咖酰胺，该玛咖酰胺是一种水溶性环氧化物水解酶抑制剂，具体为n-苄基油酰胺，图3显示了n-苄基油酰胺的化合物结构图，n-苄基油酰胺的cas号
为101762-87-2。发明人测试了n-苄基油酰胺对人、大鼠和小鼠水溶性环氧化物水解酶的抑制作用，其中对人的seh的ic
50
(nm)为893，对大鼠的seh的ic
50
(nm)为198，对小鼠的seh的ic
50
(nm)为265。所述n-苄基油酰胺可用于制备药品或食品，所述药品或所述食品具备以下功能中的一种或几种：止痛、抗炎、保护心血管、保护肾脏、保护神经系统。
62.实施例4
63.玛咖可以提取出一种玛咖酰胺，该玛咖酰胺是一种水溶性环氧化物水解酶抑制剂，具体为n-苄基亚油酰胺，图4显示了n-苄基亚油酰胺的化合物结构图，n-苄基亚油酰胺的cas号为18286-71-0。发明人测试了n-苄基亚油酰胺对人、大鼠和小鼠水溶性环氧化物水解酶的抑制作用，其中对人的seh的ic
50
(nm)为155，对大鼠的seh的ic
50
(nm)为41，对小鼠的seh的ic
50
(nm)为44。所述n-苄基亚油酰胺可用于制备药品或食品，所述药品或所述食品具备以下功能中的一种或几种：止痛、抗炎、保护心血管、保护肾脏、保护神经系统。
64.n-苄基亚油酰胺在大鼠模型上的药代动力学参数如下：
65.大鼠口服n-苄基亚油酰胺(剂量100mg/kg大鼠体重)3小时(tmax＝3h)后血液中n-苄基亚油酰胺浓度达到峰值520nm(cmax＝520nm),是其ic
50
的11.8倍，其半衰期为9小时(t1/2＝9h)。利用lps诱导的大鼠炎症性疼痛模型，本发明人研究了具有较强seh抑制作用的n-苄基亚油酰胺的抗炎止痛作用，结果如图20所示，口服n-苄基亚油酰胺(剂量100mg/kg大鼠体重)具有显著的抗炎止痛作用。
66.lps可诱导大鼠爪子发生炎症性疼痛，数据表现为图20中大鼠爪子对疼痛刺激更加敏感，对疼痛耐受性下降到lps处理前的60％左右(黑色填充圆点)，而口服n-苄基亚油酰胺(剂量100mg/kg大鼠体重)减轻了lps诱导的大鼠炎症性疼痛，数据表现为与lps处理的模型组相比，用药组(灰色填充三角)对疼痛的耐受比lps处理组高，表明n-苄基亚油酰胺具有抗炎止痛功效。数据为均值
±
标准误(n＝4),lps和药物处理前大鼠对疼痛的耐受值定义为100％。
67.实施例5
68.玛咖可以提取出一种玛咖酰胺，该玛咖酰胺是一种水溶性环氧化物水解酶抑制剂，具体为n-苄基亚麻酰胺，图5显示了n-苄基亚麻酰胺的化合物结构图，n-苄基亚麻酰胺的cas号为883715-18-2。发明人测试了n-苄基亚麻酰胺对人、大鼠和小鼠水溶性环氧化物水解酶的抑制作用，其中对人的seh的ic
50
(nm)为134，对大鼠的seh的ic
50
(nm)为23，对小鼠的seh的ic
50
(nm)为28。所述n-苄基亚麻酰胺可用于制备药品或食品，所述药品或所述食品具备以下功能中的一种或几种：止痛、抗炎、保护心血管、保护肾脏、保护神经系统。
69.实施例6
70.玛咖可以提取出一种玛咖酰胺，该玛咖酰胺是一种水溶性环氧化物水解酶抑制剂，具体为n-苄基花生四烯酰胺，图6显示了n-苄基花生四烯酰胺的化合物结构图。发明人测试了n-苄基花生四烯酰胺对人、大鼠和小鼠水溶性环氧化物水解酶的抑制作用，其中对人的seh的ic
50
(nm)为123，对大鼠的seh的ic
50
(nm)为40，对小鼠的seh的ic
50
(nm)为50。所述n-苄基花生四烯酰胺可用于制备药品或食品，所述药品或所述食品具备以下功能中的一种或几种：止痛、抗炎、保护心血管、保护肾脏、保护神经系统。
71.实施例7
72.玛咖可以提取出一种玛咖酰胺，该玛咖酰胺是一种水溶性环氧化物水解酶抑制
剂，具体为n-苄基二十碳-5z,8z,11z,14z,17z-五烯酰胺，图7显示了n-苄基二十碳-5z,8z,11z,14z,17z-五烯酰胺的化合物结构图。发明人测试了n-苄基二十碳-5z,8z,11z,14z,17z-五烯酰胺对人、大鼠和小鼠水溶性环氧化物水解酶的抑制作用，其中对人的seh的ic
50
(nm)为111，对大鼠的seh的ic
50
(nm)为29，对小鼠的seh的ic
50
(nm)为43。所述n-苄基二十碳-5z,8z,11z,14z,17z-五烯酰胺可用于制备药品或食品，所述药品或所述食品具备以下功能中的一种或几种：止痛、抗炎、保护心血管、保护肾脏、保护神经系统。
73.实施例8
74.玛咖可以提取出一种玛咖酰胺，该玛咖酰胺是一种水溶性环氧化物水解酶抑制剂，具体为n-3-甲氧苄基棕榈酰胺，图8显示了n-3-甲氧苄基棕榈酰胺的化合物结构图，n-3-甲氧苄基棕榈酰胺的cas号为5327-45-7。发明人测试了n-3-甲氧苄基棕榈酰胺对人、大鼠和小鼠水溶性环氧化物水解酶的抑制作用，其中对人的seh的ic
50
(nm)为16077，对大鼠的seh的ic
50
(nm)为28676，对小鼠的seh的ic
50
(nm)为89850。所述n-3-甲氧苄基棕榈酰胺可用于制备药品或食品，所述药品或所述食品具备以下功能中的一种或几种：止痛、抗炎、保护心血管、保护肾脏、保护神经系统。
75.实施例9
76.玛咖可以提取出一种玛咖酰胺，该玛咖酰胺是一种水溶性环氧化物水解酶抑制剂，具体为n-3-甲氧基苄基硬脂酰胺，图9显示了n-3-甲氧基苄基硬脂酰胺的化合物结构图，n-3-甲氧基苄基硬脂酰胺的cas号为883715-21-7。发明人测试了n-3-甲氧基苄基硬脂酰胺对人、大鼠和小鼠水溶性环氧化物水解酶的抑制作用，其中对人的seh的ic50(nm)为241，对大鼠的seh的ic
50
(nm)为84，对小鼠的seh的ic
50
(nm)为126。所述n-3-甲氧基苄基硬脂酰胺可用于制备药品或食品，所述药品或所述食品具备以下功能中的一种或几种：止痛、抗炎、保护心血管、保护肾脏、保护神经系统。
77.实施例10
78.玛咖可以提取出一种玛咖酰胺，该玛咖酰胺是一种水溶性环氧化物水解酶抑制剂，具体为n-3-甲氧基苄基油酰胺，图10显示了n-3-甲氧基苄基油酰胺的化合物结构图，n-3-甲氧基苄基油酰胺的cas号为74058-71-2。发明人测试了n-3-甲氧基苄基油酰胺对人、大鼠和小鼠水溶性环氧化物水解酶的抑制作用，其中对人的seh的ic
50
(nm)为241，对大鼠的seh的ic
50
(nm)为84，对小鼠的seh的ic
50
(nm)为126。所述n-3-甲氧基苄基油酰胺可用于制备药品或食品，所述药品或所述食品具备以下功能中的一种或几种：止痛、抗炎、保护心血管、保护肾脏、保护神经系统。
79.实施例11
80.玛咖可以提取出一种玛咖酰胺，该玛咖酰胺是一种水溶性环氧化物水解酶抑制剂，具体为n-3-甲氧基苄基亚油酰胺，图11显示了n-3-甲氧基苄基亚油酰胺的化合物结构图。发明人测试了n-3-甲氧基苄基亚油酰胺对人、大鼠和小鼠水溶性环氧化物水解酶的抑制作用，其中对人的seh的ic
50
(nm)为92，对大鼠的seh的ic
50
(nm)为43，对小鼠的seh的ic
50
(nm)为38。所述n-3-甲氧基苄基亚油酰胺可用于制备药品或食品，所述药品或所述食品具备以下功能中的一种或几种：止痛、抗炎、保护心血管、保护肾脏、保护神经系统。
81.实施例12
82.玛咖可以提取出一种玛咖酰胺，该玛咖酰胺是一种水溶性环氧化物水解酶抑制
剂，具体为n-3-甲氧基苄基亚麻酰胺，图12显示了n-3-甲氧基苄基亚麻酰胺的化合物结构图。发明人测试了n-3-甲氧基苄基亚麻酰胺对人、大鼠和小鼠水溶性环氧化物水解酶的抑制作用，其中对人的seh的ic
50
(nm)为76，对大鼠的seh的ic
50
(nm)为9.3，对小鼠的seh的ic
50
(nm)为27。所述n-3-甲氧基苄基亚麻酰胺可用于制备药品或食品，所述药品或所述食品具备以下功能中的一种或几种：止痛、抗炎、保护心血管、保护肾脏、保护神经系统。
83.实施例13
84.玛咖可以提取出一种玛咖酰胺，该玛咖酰胺是一种水溶性环氧化物水解酶抑制剂，具体为n-3-甲氧基苄基花生四烯酰胺，图13显示了n-3-甲氧基苄基花生四烯酰胺的化合物结构图。发明人测试了n-3-甲氧基苄基花生四烯酰胺对人、大鼠和小鼠水溶性环氧化物水解酶的抑制作用，其中对人的seh的ic
50
(nm)为55，对大鼠的seh的ic
50
(nm)为22，对小鼠的seh的ic
50
(nm)为73。所述n-3-甲氧基苄基花生四烯酰胺可用于制备药品或食品，所述药品或所述食品具备以下功能中的一种或几种：止痛、抗炎、保护心血管、保护肾脏、保护神经系统。
85.实施例14
86.玛咖可以提取出一种玛咖酰胺，该玛咖酰胺是一种水溶性环氧化物水解酶抑制剂，具体为n-3-甲氧基苄基二十碳-5z,8z,11z,14z,17z-五烯酰胺，图14显示了n-3-甲氧基苄基二十碳-5z,8z,11z,14z,17z-五烯酰胺的化合物结构图。发明人测试了n-3-甲氧基苄基二十碳-5z,8z,11z,14z,17z-五烯酰胺对人、大鼠和小鼠水溶性环氧化物水解酶的抑制作用，其中对人的seh的ic
50
(nm)为63，对大鼠的seh的ic
50
(nm)为18.6，对小鼠的seh的ic
50
(nm)为49。所述n-3-甲氧基苄基二十碳-5z,8z,11z,14z,17z-五烯酰胺可用于制备药品或食品，所述药品或所述食品具备以下功能中的一种或几种：止痛、抗炎、保护心血管、保护肾脏、保护神经系统。
87.实施例15
88.玛咖可以提取出一种玛咖酰胺，该玛咖酰胺是一种水溶性环氧化物水解酶抑制剂，具体为n-3,4-二甲氧基苄基棕榈酰胺，图15显示了n-3,4-二甲氧基苄基棕榈酰胺的化合物结构图，n-3,4-二甲氧基苄基棕榈酰胺的cas号为74058-71-2。发明人测试了n-3,4-二甲氧基苄基棕榈酰胺对人、大鼠和小鼠水溶性环氧化物水解酶的抑制作用，其中对人的seh的ic
50
(nm)为7059，对大鼠的seh的ic
50
(nm)为15910，对小鼠的seh的ic
50
(nm)超过100000。所述n-3,4-二甲氧基苄基棕榈酰胺可用于制备药品或食品，所述药品或所述食品具备以下功能中的一种或几种：止痛、抗炎、保护心血管、保护肾脏、保护神经系统。
89.实施例16
90.玛咖可以提取出一种玛咖酰胺，该玛咖酰胺是一种水溶性环氧化物水解酶抑制剂，具体为n-3,4-二甲氧基苄基亚油酰胺，图16显示了n-3,4-二甲氧基苄基亚油酰胺的化合物结构图，n-3,4-二甲氧基苄基亚油酰胺的cas号为74058-71-2。发明人测试了n-3,4-二甲氧基苄基亚油酰胺对人、大鼠和小鼠水溶性环氧化物水解酶的抑制作用，其中对人的seh的ic
50
(nm)为104，对大鼠的seh的ic
50
(nm)为111，对小鼠的seh的ic
50
(nm)为148。所述n-3,4-二甲氧基苄基亚油酰胺可用于制备药品或食品，所述药品或所述食品具备以下功能中的一种或几种：止痛、抗炎、保护心血管、保护肾脏、保护神经系统。
91.实施例17
92.玛咖可以提取出一种玛咖酰胺，该玛咖酰胺是一种水溶性环氧化物水解酶抑制剂，具体为n-3,4-二甲氧基苄基亚麻酰胺，图17显示了n-3,4-二甲氧基苄基亚麻酰胺的化合物结构图。发明人测试了n-3,4-二甲氧基苄基亚麻酰胺对人、大鼠和小鼠水溶性环氧化物水解酶的抑制作用，其中对人的seh的ic
50
(nm)为84，对大鼠的seh的ic
50
(nm)为90，对小鼠的seh的ic
50
(nm)为122。所述n-3,4-二甲氧基苄基亚麻酰胺可用于制备药品或食品，所述药品或所述食品具备以下功能中的一种或几种：止痛、抗炎、保护心血管、保护肾脏、保护神经系统。
93.实施例18
94.玛咖可以提取出一种玛咖酰胺，该玛咖酰胺是一种水溶性环氧化物水解酶抑制剂，具体为n-(2-苯乙基)亚油酰胺，图18显示了n-(2-苯乙基)亚油酰胺的化合物结构图。发明人测试了n-(2-苯乙基)亚油酰胺对人、大鼠和小鼠水溶性环氧化物水解酶的抑制作用，其中对人的seh的ic
50
(nm)为28，对大鼠的seh的ic
50
(nm)为33，对小鼠的seh的ic
50
(nm)为91。所述n-(2-苯乙基)亚油酰胺可用于制备药品或食品，所述药品或所述食品具备以下功能中的一种或几种：止痛、抗炎、保护心血管、保护肾脏、保护神经系统。
95.实施例19
96.玛咖可以提取出一种玛咖酰胺，该玛咖酰胺是一种水溶性环氧化物水解酶抑制剂，具体为n-(2-苯乙基)亚麻酰胺，图19显示了n-(2-苯乙基)亚麻酰胺的化合物结构图，n-(2-苯乙基)亚麻酰胺的cas号为74058-71-2。发明人测试了n-(2-苯乙基)亚麻酰胺对人、大鼠和小鼠水溶性环氧化物水解酶的抑制作用，其中对人的seh的ic
50
(nm)为524，对大鼠的seh的ic
50
(nm)为370，对小鼠的seh的ic
50
(nm)为422。所述n-(2-苯乙基)亚麻酰胺可用于制备药品或食品，所述药品或所述食品具备以下功能中的一种或几种：止痛、抗炎、保护心血管、保护肾脏、保护神经系统。
97.实施例20
98.玛咖可以提取出玛咖酰胺，所述玛咖酰胺可用于制备药品或食品，所述药品或所述食品具备以下功能中的一种或几种：止痛、抗炎、保护心血管、保护肾脏、保护神经系统。
99.实施例21
100.玛卡可以提取出一种水溶性环氧化物水解酶抑制剂，所述水溶性环氧化物水解酶抑制剂可用于制备药品或食品，所述药品或所述食品具备以下功能中的一种或几种：止痛、抗炎、保护心血管、保护肾脏、保护神经系统。
101.以上详细描述了本发明的较佳具体实施例。应当理解，本领域的普通技术无需创造性劳动就可以根据本发明的构思作出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域中技术人员依本发明的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案，皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。