一种治疗腰肌劳损的杜仲提取物及其制备方法与流程

本发明属于中药提取
技术领域：
，具体涉及一种治疗腰肌劳损的杜仲提取物及其制备方法。
背景技术：
：随着人们生活水平的不断提高，脑力劳动的时间大大增加，腰肌劳损等一些文明病悄然而至，严重影响了人们的正常生活、工作和学习。日常生活中，长期的固定体位或不良姿势，很容易造成腰肌劳损。腰肌劳损主要是腰部软组织堆积性慢性损伤所致，轻者引起肌纤维变性，重者可逐渐撕裂，出现水肿、出血，继之发生纤维化，局部触诊时可扣及条索状或近圆形硬结，腰肌劳损如果不及时治疗，会反复发作，容易加速腰椎的退变，继而引发强直性脊柱炎，引发或加重较为严重的腰椎间盘突出、腰椎管狭窄、腰椎滑脱等凶症，加重痛苦，增加治疗难度。由于腰肌劳损本身病理特点和治疗方法所限，使得本病容易复发，治疗棘手。西医常规给予消炎镇痛药，但存在消化道副反应甚至出血等副作用，而且治疗作用不持久。单纯的按摩、理疗也存在作用时间短暂、容易反复等问题。中医认为，慢性腰肌劳损属“痹症”范畴，多因劳累过度，感受寒湿，久病年衰所致肾精亏损、筋脉失养、寒湿凝络而发。人体正气不足，卫外不固，是“痹症”发生的内在基础，感受外邪是“痹症”发生的外在条件。目前，针对腰肌劳损的方法种类众多，日前尚无特效疗法。针刺是最传统也是最常用的一种方法，但是需要取穴，有的病人难以接受。电针可以镇痛但仅仅是治标之法。穴位注射、小针刀要求很好地掌握进针的深度,穴位注射和小针刀进针太深会对患者造成伤害，对医生技术要求比较高，而单一疗法往往效果欠佳，中药的内服和外敷虽然治疗时间较长，但是有一定的疗效。杜仲(eucommiaulmoidesoliv.)为杜仲科杜仲属多年生落叶乔木，我国特有的药用植物，杜仲作为名贵滋补药材，性味甘微辛，温，入肝、肾经。杜仲入药已有2000多年的历史，能够益肝补肾，治疗各种慢性腰部病症，对于腰肌劳损、腰部骨质增生、软组织挫伤均有缓解治疗作用，改善腰酸腰痛。如中国专利申请201811018441.9中公开了一种治疗腰肌劳损的胶囊药物的制备方法，具体方法如下：(1)称取原料；(2)将猪腰子、鲜仙人掌和鲜枸杞混合打浆，加入青盐混合搅拌，发酵，取出，得发酵浆；(3)将杜仲粉碎，炒制，加入小茴香继续炒制，投入水中大火煮沸，加入发酵浆、玉米花粉和粉碎后的陈皮搅拌均匀，文火煮沸，加入青盐搅拌均匀，继续文火熬煮，得熬煮浆；(4)将熬煮浆磁化处理，超声处理，过滤，取滤液，喷雾干燥，加入荸荠提取物和紫藤花提取物搅拌均匀，装入胶囊中；对于治疗腰肌劳损具有见效快、治愈率高、无毒副作用、安全方便的优点。该胶囊药物中添加了杜仲，但是其使用原生药作为药物组分，治疗时间长，且容易复发。又如中国专利申请201310250407.5中公开了一种治疗肌肉劳损的药物组合物，它是由如下重量配比的原料药制备而成的制剂：桑寄生26～34g，续断12～18g，独活12～18g，杜仲12～18g，狗脊12～18g，白芍40～50g，淮牛膝15～20g，威灵仙15～18g，五加皮7～13g，防风7～13g，葛根15～20g，木瓜15～20g，鸡血藤24～30g，延胡索10～15g，蒲黄3～7g，乳香7～13g，没药7～13g，香附10～15g，甘草10～12g。该药物组合物同样使用原生药作为药物组分，治疗时间长，且容易复发。技术实现要素：针对现有技术中存在的问题，本发明旨在一种治疗腰肌劳损的杜仲提取物及其制备方法。一方面，本发明提供了一种杜仲提取物，所述的杜仲提取物，按重量分数计包括：杜仲绿原酸10-20份、杜仲黄酮15-40份和杜仲多糖20-50份。优选地，所述的杜仲提取物，按重量分数计包括：杜仲绿原酸12-18份、杜仲黄酮20-35份和杜仲多糖30-45份。再优选地，所述的杜仲提取物，按重量分数计包括：杜仲绿原酸14-16份、杜仲黄酮25-30份和杜仲多糖35-40份。在一些优选实施方案中，所述的杜仲绿原酸与杜仲多糖的重量分数之比为1：1-5；优选为1：1.8-3.75；再优选为1：2.2-2.8；进一步优选为1：2.5。另一方面，本发明还提供了所述的提取物的制备方法，包括以下步骤：杜仲绿原酸的提取方法s1-1、将杜仲叶干燥后粉碎加石油醚超声提取，重复操作1-2次，过滤分离滤液和滤渣；s1-2、将步骤s1-1中的滤渣加乙醇浸泡，回流提取，过滤，滤液减压蒸馏，得杜仲粗提物；s1-3、将s1-2中得到的杜仲粗提物加乙醇溶解，搅拌后取上清液，将上清液减压浓缩得浸膏，所得浸膏加水溶解后过大孔树脂，用甲醇洗脱，得洗脱液，洗脱液经喷雾干燥，即得杜仲绿原酸。上述步骤s1-1中超声温度为40-45℃、100-120hz，超声时间1-2小时。上述步骤s1-2中乙醇的体积分数为80-90％，优选为90％，回流温度为70-90℃，优选为80℃；回流时间为1-2小时。上述s1-3中所使用的大孔树脂为s-8树脂，ph为2-3，甲醇的体积分数为70-80％，优选为70％。杜仲黄酮的提取方法：s2-1、将杜仲叶干燥后粉碎加乙醇回流提取1-3次，合并提取液；s2-2、将步骤s2-1得到的提取液减压浓缩，得浓缩液，将浓缩液过大孔树脂，用乙醇洗脱，得杜仲黄酮提取物。上述步骤s2-1中所述的己醇的体积分数为70-80％，优选为80％；回流温度为70-80℃，优选为80℃，回流时间为2-3小时。上述步骤s2-2中使用的大孔树脂为体积比为1：1的xda-1和x-5树脂，所使用的乙醇的体积分数为70-80％，优选为75％。杜仲多糖的提取方法：s3-1、将杜仲叶干燥后粉碎加乙醇浸泡后回流提取1-3次，合并提取液；s3-2、将步骤s3-1得到的提取液减压浓缩，得浓缩液，将浓缩液过大孔树脂，用乙醇洗脱，得杜仲多糖提取物。上述步骤s3-1中所述的己醇的体积分数为60-70％，优选为70％；回流温度为80-90℃，优选为90℃，回流时间为2-3小时。上述步骤s3-2中使用的大孔树脂为体积比为1：1的xda-1和x-5树脂，所使用的乙醇的体积分数为30-40％，优选为40％。另一方面，本发明还提供了上述的杜仲提取物在制备用于治疗和预防腰肌劳损的药物组合物中的应用。所述的药物组合物，包含本发明所述的杜仲提取物以及一种或多种可药用的稀释剂或载体。本发明所述的杜仲提取物可以单独使用或以药物组合物的形式使用。所述的药物组合物可以制成治疗和预防腰肌劳损原料及常规的药用剂型，如片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、注射剂或者其它在药剂学上可接受的任何剂型；还可以作为添加剂，添加到各种饮料和食品中，制成治疗和预防腰肌劳损的饮品、食品或者保健品。与现有技术相比，本发明的有益效果在于：(1)本发明通过控制提取方法对杜仲中有效成分绿原酸、黄酮以及多糖进行分别提取，通过控制绿原酸多糖的重量分数之比为1：1-5，制备得到一种药物组合物，该组合物能够有效的治疗腰肌劳损，治疗效果好；(2)本发明通过控制通过分别提取杜仲中的有效成分，可以更大程度的是药物有效成分进行释放，减少中药浪费，从而在一定程度上解决了中药成分利用度不高的问题；(3)本发明提取后的中药成分会通过后续处理继续进行二次利用，从而实现了中药成分的多重利用，避免药物浪费。具体实施方式以下通过具体实施例对本发明作进一步说明，应该理解的是，这些实施例仅用于说明本发明，并不限制本发明的范围。本发明在实验过程中所使用的试剂均为分析纯，所使用的中药均在药店购买。实施例1-4一种治疗腰肌劳损的杜仲提取物实例杜仲绿原酸杜仲黄酮杜仲多糖实施例110份15份20份实施例218份35份45份实施例316份30份40份实施例420份40份50份所述的提取物的制备方法，包括以下步骤：杜仲绿原酸的提取方法s1-1、将杜仲叶干燥后粉碎加石油醚，40℃、100hz条件下超声提取，重复操作2次，过滤分离滤液和滤渣；s1-2、将步骤s1-1中的滤渣加80％乙醇浸泡，70℃回流2小时，过滤，滤液减压蒸馏，得杜仲粗提物；s1-3、将s1-2中得到的杜仲粗提物加80％乙醇溶解，搅拌后取上清液，将上清液减压浓缩得浸膏，所得浸膏加水溶解后过s-8大孔树脂，ph为2，用70％甲醇洗脱，得洗脱液，洗脱液经喷雾干燥，即得杜仲绿原酸。杜仲黄酮的提取方法：s2-1、将杜仲叶干燥后粉碎加70％乙醇70℃下回流3小时，回流提取3次，合并提取液；s2-2、将步骤s2-1得到的提取液减压浓缩，得浓缩液，将浓缩液过1：1的xda-1和x-5大孔树脂，用70％乙醇洗脱，得杜仲黄酮提取物。杜仲多糖的提取方法：s3-1、将杜仲叶干燥后粉碎加60％乙醇浸泡后，80℃下回流2小时，回流提取3次，合并提取液；s3-2、将步骤s3-1得到的提取液减压浓缩，得浓缩液，将浓缩液过1：1的xda-1和x-5大孔树脂，用30％乙醇洗脱，得杜仲多糖提取物。药物组合物的制备方法：将制备得到的绿原酸、黄酮和多糖提取物按照实施例1-4的含量进行混合得到的药物组合物a-d。实施例5-8一种治疗腰肌劳损的杜仲提取物实例杜仲绿原酸杜仲黄酮杜仲多糖实施例520份30份20份实施例610份20份50份实施例715份35份27份实施例818份40份45份所述的提取物的制备方法，包括以下步骤：杜仲绿原酸的提取方法s1-1、将杜仲叶干燥后粉碎加石油醚，45℃、120hz条件下超声提取，重复操作2次，过滤分离滤液和滤渣；s1-2、将步骤s1-1中的滤渣加90％乙醇浸泡，80℃回流2小时，过滤，滤液减压蒸馏，得杜仲粗提物；s1-3、将s1-2中得到的杜仲粗提物加90％乙醇溶解，搅拌后取上清液，将上清液减压浓缩得浸膏，所得浸膏加水溶解后过s-8大孔树脂，ph为2，用70％甲醇洗脱，得洗脱液，洗脱液经喷雾干燥，即得杜仲绿原酸。杜仲黄酮的提取方法：s2-1、将杜仲叶干燥后粉碎加80％乙醇80℃下回流3小时，回流提取3次，合并提取液；s2-2、将步骤s2-1得到的提取液减压浓缩，得浓缩液，将浓缩液过1：1的xda-1和x-5大孔树脂，用75％乙醇洗脱，得杜仲黄酮提取物。杜仲多糖的提取方法：s3-1、将杜仲叶干燥后粉碎加70％乙醇浸泡后，90℃下回流2小时，回流提取3次，合并提取液；s3-2、将步骤s3-1得到的提取液减压浓缩，得浓缩液，将浓缩液过1：1的xda-1和x-5大孔树脂，用40％乙醇洗脱，得杜仲多糖提取物。药物组合物的制备方法：将制备得到的绿原酸、黄酮和多糖提取物按照实施例5-8的含量进行混合得到的药物组合物e-h。对比例1-5一种治疗腰肌劳损的杜仲提取物实例杜仲绿原酸杜仲黄酮杜仲多糖对比例1-40份45份对比例218份-45份对比例318份40份-对比例452.5份40份10.5份对比例57份40份56份对比例1-5中所述的提取物的制备方法与实施例5-8中记载的相同。对比例6与实施例7的区别在于：步骤s2-2和s3-2中，将浓缩液过xda-1大孔树脂，其他操作与实施例7相同。对比例7与实施例7的区别在于：步骤s2-2和s3-2中，将浓缩液3：1的xda-1和x-5大孔树脂，其他操作与实施例7相同。对比例8与实施例7的区别在于：步骤s2-2和s3-2中，将浓缩液1：3的xda-1和x-5大孔树脂，其他操作与实施例7相同。药物组合物的制备方法：将制备得到的绿原酸、黄酮和多糖提取物按照对比例1-8的含量进行混合得到的药物组合物i-p。动物实验一、毒性试验1、急性毒性试验实验动物：昆明种小鼠，体重22-25g，雌雄各半，本发明实施例和对比例制备的药物提取物，用蒸馏水配成所需的供试药液；实验条件：温度26-28℃，湿度为42％-46％；实验方法：动物分组：每个实施例和对比例均设两个剂量组，每组10只小鼠，雌雄各半；剂量和给予方式：实验设150mg/kg和350mg/kg两个剂量组，采用经口灌胃方式给药,每天灌胃3次,连续观察10天，实验结果如表1：表1小鼠毒性实验结果由表1可知，观察期内未见实验小鼠出现中毒症状和死亡情况，本发明治疗腰肌劳损的杜仲提取物对小鼠无毒害作用，其急性毒性属于实际无毒类。2、长期毒性试验将本发明实施例5-8制备的药物组合物e-h对小鼠连续用药16周(300mg/kg体重，每天2次)及停药4周后，结果表明：本发明中药组合物对小鼠的毛发、行为、大小便、体重、脏器重量、血象、肝肾功能、血糖、血脂等指标均无明显影响，脏器肉眼没有发现异样变化和组织学检查结果表明，用药16周及停药4周后，小鼠各脏器均无明显改变。说明本发明药物组合物对小鼠长期用药后毒性小，停药后也没有异样反应，应用安全。3、大鼠腰多裂肌损伤修复过程中对自噬相关蛋白beclin1的影响实验动物：雄性sd大鼠300只，体重280-310g，大鼠随机分笼饲养，明暗周期为12小时，自由摄取饮食，室温24℃，湿度为40％-50％，适应性饲养7天。动物分组：采用随机的方法将216只大鼠进行分组，分为空白组、模型组、实施例1-8组和对比例1-8组，每组12只，每组大鼠1、3、5、7天相同时间点(上午8点)各取4只大鼠。动物造模：10％水合氯醛(350mg/kg)腹部注射麻醉，背部备皮，选择脊柱第4、5腰椎水平两旁的4个点，抽取0.5％布比卡因肌肉注射第4、5腰椎水平两旁已经选好的4个点，每点注射100μl，并保证针头到达多裂肌，完整造模。空白组不做任何处理。处理方法：空白组：与其余组大鼠同样条件下共同喂养，不做造模处理和药物喂养，与其他大鼠在造模后第1、3、5、7天相同时间点(上午8点)同步取材。模型组：不做任何治疗，与其他大鼠在造模后第1、3、5、7天相同时间点(上午8点)同步取材。实施例1-8组：从造模后的第2天开始服用药物组合物a-h，每天3次，每次300mg/kg,在治疗后第1、3、5、7天相同时间点(上午8点)取材。对比例1-5组：从造模后的第2天开始服用药物组合物i-m，每天3次，每次300mg/kg,在治疗后第1、3、5、7天相同时间点(上午8点)取材。采用spss20.0软件进行统计学分析，用平均数±标准差表示统计数据。表2各组大鼠不同时段多裂肌beclin1表达的mod值比较(光密度值，平均数±标准差)注：与空白组相比，ap≤0.01；与模型组相比，bp≤0.01根据上表2的检测数据可以看出，空白组没有做任何处理，beclin1表达含量较低，治疗1天后与空白组相比，模型组、实施例1-8组和对比例1-8组中beclin1表达含量增加(p≤0.01)，与模型组相比，实施例1-8组中beclin1表达含量稍有增加，对比例1-8组中beclin1表达含量与模型组相当，不具有统计学意义；治疗3天后与空白组相比，模型组和实施例1-8组中beclin1表达含量增加(p≤0.01)，对比例1-8组中beclin1表达含量增加量较实施例1-8组小，与模型组相比，实施例1-8组中beclin1表达含量增加(p≤0.01)，对比例1-8组中beclin1表达含量增加量较实施例1-8组小；治疗5天后与空白组相比，模型组和实施例1-8组中beclin1表达含量增加(p≤0.01)，对比例1-8组中beclin1表达含量增加量较实施例1-8组小，与模型组相比，实施例1-8组中beclin1表达含量增加(p≤0.01)，对比例1-8组中beclin1表达含量增加量较实施例1-8组小；治疗7天后与空白组相比，模型组和实施例1-8组中beclin1表达含量增加(p≤0.01)，对比例1-5组中beclin1表达含量增加量较实施例1-8组小，与模型组相比，实施例1-8组中beclin1表达含量增加(p≤0.01)，对比例1-8组中beclin1表达含量增加量较实施例1-8组小，说明实施例1-8组制备的药物组合物能够更好的修复大鼠腰多裂肌损伤。4、临床试验随机选取390例患者，其中女性200例，男性220例。实验之前10天，对该人群进行连续观察，记录症状及变化，随机分为13组，实施例5-8组、对比例1-8组和对照组，实施例5-8组服用药物组合物e-h，对比例1-8组服用药物组合物i-p，对照组服用腰痛宁胶囊。服用方法：每天口服3次，于早、中、晚各服用一次，每次15g，10天一个疗程。疗效情况判定标准：治愈：服用本品一个疗程，患者腰部活动自如，腰部刺痛完全消失，不适症状消失；有效：服用本品一个疗程，不适症状减轻或部分消失，疼痛减轻；无效：服用本品一个疗程，不适症状无变化。结果如表2所示。表3服用药物组合物后的效果验证由上表3可以看出，本发明提供的药物组合物的治疗效果明显高于对照组，本发明实施例8中得到的药物组合物h的总有效率高达96.7％，对比例1-3中减少某种组分会明显使药效降低，治愈率明显降低，对比例4-5改变药物组分的质量也会对药效产生一定程度的影响，但是治疗效果不如实施例5-8制备的药物组合物，对比例6-8改变制备过程中柱子的种类，也会影响药物提取物的成分，对药效产生一定程度的影响。最后应说明的是，实施例只是本发明最优的具体实施方式而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。当前第1页12