瑞德西韦在制备治疗肿瘤或抗肿瘤转移药物中的应用的制作方法

1.本发明涉及生物医药领域，具体而言，涉及瑞德西韦在制备治疗肿瘤或抗肿瘤转移药物中的应用。


背景技术：

2.remdesivir(rdv，gs-5734)是吉利德科学公司(gild)开发的一款通过抑制病毒核酸合成起作用的核苷类似物抗病毒药。
3.专利wo2009132123a1中首次提出瑞德西韦(remdesivir)化合物结构的通式，用于治疗丙型肝炎病毒感染、登革热等黄病毒科病毒感染疾病。专利wo2012012776a1提出瑞德西韦治疗副黏病毒科病毒感染的疾病的作用。在后续专利中还提出rdv可作为抗丝状病毒、抗沙粒病毒及抗冠状病毒药物。根据文献信息，瑞德西韦的抗肿瘤作用目前未有国内外文献公开。
4.根据世卫组织的2015年统计数据，在包括欧美发达国家的48个国家中，癌症为70岁前死亡的首要原因，中国在内的43个国家中，癌症为第二大死亡原因，在另外22个国家的死亡原因中排名第三或第四。
5.据2018年全球癌症统计报告数据，全球预计2018年新增超过1800万癌症患者，因癌症死亡病例960万。报告中显示在男女两性中，肺癌是最常见的癌症类型(11.6％)，同时也是癌症死亡的主要原因(占癌症死亡总数的18.4％)，紧随其后发生率较高的是女性乳腺癌(11.6％)，前列腺癌(7.1％)和结直肠癌(6.1％)，死亡率较高的包括大肠癌(9.2％)，胃癌(8.2％)和肝癌(8.2％)。肺癌是男性中最常见的癌症，也是癌症死亡的主要原因，其次是前列腺癌和结肠直肠癌(针对发病率)以及肝癌和胃癌(针对死亡率)。在女性中，乳腺癌是最常被诊断的癌症，也是癌症死亡的主要原因，其次是大肠癌和肺癌。《2019年美国癌症统计报告》中显示，美国近十年肝癌、胰腺癌、黑色素瘤、子宫癌等癌症死亡率上升，其中胰腺癌的5年生存率仅9％，预后极差。
6.癌症是目前全球导致人类死亡的严重疾病之一，近几十年肿瘤发病率也呈现迅猛增长态势。新的肿瘤治疗方法和治疗药物将对全球癌症患者的治疗具有重大积极意义，其中的商业潜力也十分巨大。


技术实现要素：

7.本发明目的在于提供瑞德西韦药物一类新的适应症。瑞德西韦作为抗肿瘤药物有效抑制癌症组织的生长和转移，为癌症治疗提供了一种新的备选药物。
8.为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
9.本发明中发明人利用自主计算机程序预测了瑞德西韦对癌症生长和转移的抑制作用。
10.本发明首先提供了瑞德西韦在制备治疗肿瘤或抗肿瘤转移药物中的应用，所述瑞德西韦对肿瘤生长或转移起到抑制作用。
11.本发明中抗癌作用除针对肝癌、胰腺癌外，还包括其他癌症，如肺癌、肝癌、淋巴癌、胰腺癌、胃癌、食道癌、宫颈癌、乳腺癌、前列腺癌、结直肠癌、大肠癌。因此，除对肝癌、胰腺癌、淋巴癌的治疗作用外，瑞德西韦作为抗癌药物治疗其他癌症的应用也在本发明的保护范围之内。
12.进一步地，所述药物包含瑞德西韦，所述瑞德西韦以游离形式或药学上可接受的化合物的形式存在。
13.在本发明的上述应用中，所述药物含有有效剂量的瑞德西韦。有效剂量为单位给药剂量形式(如一片、一针、一丸或一剂的药物中的含量)或治疗的患者的单位剂量(如单位体重剂量)。在本发明中，药物治疗对象范围为哺乳动物类，包括人、犬科、啮齿类动物等。不同动物有效剂量换算可根据本领域实验动物与人的等效剂量换算关系(通常可参见fda、sfda等药品管理机构的指导意见，也可参见“黄继汉等.药理试验中动物间和动物与人体间的等效剂量换算。中国临床药理学与治疗学，2004sep；9(9)：1069-1072”)，即可从实验动物的剂量推导出人的单位体重剂量。例如，对于常用的实验动物小鼠而言，根据上述文献，其与成人的换算关系约为12:1。
14.在本发明中，8周龄的c57bl小鼠中，明显抑制肿瘤生长的有效剂量(以含量计)为2.5～100mg/kg，优选为20～80mg/kg。
15.优选的，根据小鼠与成人有效剂量换算关系，将成人体重标准设置为60kg，则成人有效剂量为每天12.5～500mg，优选为100mg～400mg。
16.优选的，所述药物还包含其他抗癌药物。
17.优选的，所述药物还含有药学上可接受的载体。
18.本发明所述的载体为药学上可以接受的载体，其指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质。它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组分能和本发明的活性成分以及它们之间相互掺和，而不明显降低活性成分的药效。
19.优选的，所述载体包括但不限于：稀释剂、缓冲剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、包囊剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、喷雾剂、透皮吸收剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、着色剂、矫味剂或吸附载体。
20.上述药物可以按照需要制作成医学上任何可用的剂型，优选的，所述药物的剂型适于口服或注射；优选的，所述剂型包括口服液、注射液、片剂、胶囊等。
21.有益效果：
22.本发明证实了瑞德西韦作为广谱抗癌药物的重大潜力，首次公开了瑞德西韦对抑制肿瘤生长转移的良好疗效，为癌症治疗提供了有效的新型潜在备选药物，扩展了瑞德西韦的适应证，极大的提高了瑞德西韦的应用潜力及市场前景。
附图说明
23.图1口服不同剂量瑞德西韦11天后的肝癌皮下移植瘤肿瘤组织，n＝8。
24.图2瑞德西韦处理后，小鼠体内移植的肝癌细胞生成肿瘤组织重量统计结果，n＝8。
25.图3口服不同剂量瑞德西韦17天后的pan02胰腺癌肿瘤组织，n＝7。
26.图4瑞德西韦处理后，小鼠体内移植胰腺癌细胞pan02生成的肿瘤组织重量统计结果，n＝7。
27.图5口服不同剂量瑞德西韦17天后的el-4淋巴癌移植瘤肿瘤组织，n＝8。
28.图6瑞德西韦处理后，小鼠体内移植的el-4淋巴瘤肿瘤组织重量统计结果，n＝8。
具体实施方式
29.以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用的试剂可以商业购买得到。
30.实施例1在小鼠皮下移植瘤模型中评价瑞德西韦对肝癌h22的体内抗肿瘤药效研究
31.一、实验材料
32.1.瑞德西韦：购买于上海陶素生化科技有限公司，避光、密封、干燥4℃保存。
33.2.阳性药：注射用环磷酰胺，安道生公司生产。
34.3.实验动物：昆明小鼠，8周龄，spf级，雄性，由北京华阜康动物实验有限公司提供。
35.4.h22细胞系：由中国医学科学院药物研究所提供。
36.5.溶剂：0.5％羧甲基纤维素钠(cmc)。
37.二、实验方法
38.1.步骤
39.无菌条件下将1.5
×
106个h22细胞种到昆明小鼠腋下。10天后，无菌条件下获取肿瘤组织，匀浆用生理盐水稀释后计数制成浓度为7.5
×
106个/ml肿瘤细胞悬液，于小鼠右侧腋下接种0.2ml/只，若接种部位出现肿瘤包块，则判断接种成功。
40.接种后次日(24小时后)动物随机分组，称重后给药，待测化合物每天1次，连续口服灌胃给药11次。环磷酰胺(ctx)腹腔给药，在接种后第一天给药1次，ctx对移植瘤的抑制率一般可达90％以上，因此我们将ctx作为动物实验的阳性对照，但2017年世界卫生组织国际癌症研究机构公布致癌清单中，环磷酰胺被标记为一类致癌物，其临床应用过程中副作用十分明显。
41.给药第11天称量体重，处死动物，剥取肿瘤组织，称重并进行拍照，体重如表1所示。最后计算肿瘤抑制率，以肿瘤抑制率评价抗肿瘤作用强度。
42.2.分组
43.空白对照组，阳性药对照组(环磷酰胺ctx)(100mg/kg，ip)，瑞德西韦(20mg/kg,po)，瑞德西韦(40mg/kg,po)，瑞德西韦(80mg/kg,po)组。
44.3.药物配制
45.(1)环磷酰胺：精确称取50mg环磷酰胺，加入10ml无菌生理盐水至5mg/ml，每只动物按体重腹腔给予0.4ml/20g。
46.(2)待测化合物
47.瑞德西韦：取适量，溶于0.5％羧甲基纤维素钠中，配成8mg/ml(相对于80mg/kg)。将8mg/ml溶液依次倍比稀释。每只动物按体重口服灌胃给予0.2ml/20g。现用现配。
48.4.计算方法
49.相对肿瘤增殖率t/c(％)：t/c％＝t/c
×
100％。(t：治疗组肿瘤重量；c：阴性对照组肿瘤重量)。
50.肿瘤增殖抑制率tgi(％)：tgi＝(1-t/c)
×
100。(t：治疗组肿瘤重量；c：阴性对照组肿瘤重量)。
51.评价标准：t/c(％)>40％为无效；t/c(％)≤40％，并经统计学处理p<0.05为有效。
52.三、实验结果与结论
53.所有对照control组小鼠接种肿瘤细胞约1周后,可以明显观察到右腋背部出现包块，直径为2～3mm,成瘤率为100％。
54.如图1所示，为小鼠的口服不同剂量瑞德西韦11天后的皮下肝癌移植瘤肿瘤组织，由图1、2可知，瑞德西韦对小鼠皮下肝癌移植瘤模型中肿瘤生长具有明显抑制作用。在小鼠肝癌h22移植瘤模型中，口服瑞德西韦(20mg/kg,po)，瑞德西韦(40mg/kg,po)，瑞德西韦(80mg/kg,po)均对肝癌h22生长具有显著抑制作用。表1为瑞德西韦对肝癌抑制作用的药效统计表，表中的数据也可以看出，与对照组相比，肿瘤重量差异具有统计学意义**p<0.01，***p<0.001。并且从表中数据可知，瑞德西韦(20mg/kg,po)剂量时具有最好的抑癌效果，但不排除剂量<20mg/kg/d剂量(如：2.5～20mg/kg)对肿瘤的抑制作用，也不排除>80mg/kg/d的剂量如81～100mg/kg对肿瘤具有抑制作用。
55.表1为瑞德西韦对肝癌抑制作用的药效统计表
[0056][0057]
实施例2在小鼠皮下移植瘤模型中评价瑞德西韦对pan02胰腺癌的体内抗肿瘤药效研究
[0058]
一、实验材料
[0059]
1.实验动物：c57小鼠，体重18-20g，spf级，雄性，由北京华阜康动物实验有限公司提供。
[0060]
2.其他实验材料同实施例1。
[0061]
二、实验方法
[0062]
1.步骤
[0063]
无菌条件下将1.5
×
106个pan02细胞(中国医学科学院药物研究所提供)接种到c57小鼠腋下。10天后，无菌条件下获取肿瘤组织，匀浆用生理盐水稀释后计数制成浓度为7.5
×
106个/ml肿瘤细胞悬液，于小鼠右侧腋下接种0.2ml/只。若接种部位出现肿瘤包块，则判断接种成功。
[0064]
接种后次日(24小时后)动物随机分组，称重后给药，待测化合物每天1次，连续口服灌胃给药17次。环磷酰胺腹腔给药，给药1次。ctx对移植瘤的抑制率一般可达90％以上，因此我们将ctx作为动物实验的阳性对照，但2017年世界卫生组织国际癌症研究机构公布致癌清单中，环磷酰胺被标记为一类致癌物，其临床应用过程中副作用十分明显。
[0065]
第17天称量体重，处死动物，剥取肿瘤组织，称重并进行拍照。最后计算肿瘤抑制率，以肿瘤抑制率评价抗肿瘤作用强度，具体数据如表2所示。
[0066]
2.分组
[0067]
空白对照组，阳性药对照组(环磷酰胺ctx)(100mg/kg，ip)，瑞德西韦(20mg/kg,po)，瑞德西韦(40mg/kg,po)，瑞德西韦(80mg/kg,po)组。
[0068]
3.药物配制及计算方法
[0069]
同实施例1
[0070]
三、实验结果与结论
[0071]
所有control组小鼠接种肿瘤细胞约1周后,可以明显观察到右腋背部出现包块，直径为2～3mm,成瘤率为100％。
[0072]
如图3所示，为小鼠的口服不同剂量瑞德西韦17天后的皮下胰腺癌移植瘤肿瘤组织，由图3、4可知，在小鼠胰腺癌pan02移植瘤模型中，口服瑞德西韦剂量20mg/kg对胰腺癌生长具有抑制作用，口服瑞德西韦计量40mg/kg～80mg/kg,对胰腺癌生长具有显著抑制作用。但不排除<20mg/kg/d或>80mg/kg/d的剂量也为对肿瘤抑制起作用。
[0073]
表2为瑞德西韦对肝癌抑制作用的药效统计表，表中的数据也可以看出，与对照组相比，肿瘤重量差异具有统计学意义**p<0.01，***p<0.001。并且从表中数据可知，瑞德西韦(40mg/kg,po)剂量时具有最好的抑癌效果。
[0074]
表2为瑞德西韦对胰腺癌的体内的药效统计表
[0075][0076]
实施例3在小鼠皮下移植瘤模型中评价瑞德西韦对el-4淋巴瘤的体内抗肿瘤药效研究
[0077]
一、实验材料
[0078]
1.瑞德西韦：购买于上海陶素生化科技有限公司，避光、密封、干燥4℃保存。
[0079]
2.阳性药：注射用环磷酰胺，安道生公司生产。
[0080]
3.实验动物：c57小鼠，体重18-20g，spf级，雄性，由北京华阜康动物实验有限公司提供。
[0081]
4.el-4细胞系：由中国医学科学院药物研究所提供。
[0082]
5.溶剂：0.5％羧甲基纤维素钠(cmc)。
[0083]
二、实验方法
[0084]
1.步骤
[0085]
无菌条件下将1.5
×
106个el-4细胞种到昆明小鼠腋下。10天后，无菌条件下获取肿瘤组织，匀浆用生理盐水稀释后计数制成浓度为7.5
×
106个/ml肿瘤细胞悬液，于小鼠右侧腋下接种0.2ml/只，若接种部位出现肿瘤包块，则判断接种成功。
[0086]
接种后次日(24小时后)动物随机分组，称重后给药，瑞德西韦每天1次，连续口服灌胃给药17次。环磷酰胺(ctx)腹腔给药，在接种后第一天给药1次，ctx对移植瘤的抑制率一般可达90％以上，因此我们将ctx作为动物实验的阳性对照，但2017年世界卫生组织国际癌症研究机构公布致癌清单中，环磷酰胺被标记为一类致癌物，其临床应用过程中副作用十分明显。
[0087]
给药第11天称量体重，处死动物，剥取肿瘤组织，称重并进行拍照，体重如表1所示。最后计算肿瘤抑制率，以肿瘤抑制率评价抗肿瘤作用强度。
[0088]
2.分组
[0089]
空白对照组，阳性药对照组(环磷酰胺ctx)(100mg/kg，ip)，瑞德西韦(20mg/kg,po)，瑞德西韦(40mg/kg,po)，瑞德西韦(80mg/kg,po)组。
[0090]
3.药物配制
[0091]
同实施例1。
[0092]
4.计算方法
[0093]
同实施例1。
[0094]
三、实验结果与结论
[0095]
所有对照control组小鼠接种肿瘤细胞约1周后,可以明显观察到右腋背部出现包块，直径为2～3mm,成瘤率为100％。
[0096]
如图5所示，为小鼠的口服不同剂量瑞德西韦17天后的淋巴瘤移植瘤肿瘤组织，由图5、6可知，瑞德西韦对小鼠皮下淋巴癌移植瘤模型中肿瘤生长具显著抑制作用。在小鼠淋巴癌el-4移植瘤模型中，口服瑞德西韦(20mg/kg,po)，瑞德西韦(40mg/kg,po)，瑞德西韦(80mg/kg,po)均对淋巴癌el-4生长具有显著抑制作用。表3为瑞德西韦对淋巴癌抑制作用的药效统计表，从表中数据可知，与对照组相比，瑞德西韦在20mg/kg～80mg/kg的剂量时均具有较好的抑癌效果，且肿瘤重量差异均具有统计学意义**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001。同时不排除剂量<20mg/kg/d剂量(如：2.5～20mg/kg)对肿瘤的抑制作用，也不排除>80mg/kg/d的剂量如81～100mg/kg对肿瘤具有抑制作用。
[0097]
表3为瑞德西韦对淋巴癌的体内的药效统计表
[0098][0099]
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。