本发明属于医疗用品技术领域，具体涉及到了一种含小蓟提取物的止血、抗菌敷料及其制备方法。
背景技术：
当皮肤的形状和功能被内部或外部因素破坏时，被破坏的地方就是伤口。伤口的愈合是一个动态的过程，一般可以分为炎症、增殖、肉芽形成和组织重塑四个阶段。在不同的阶段,伤口分泌出不同的生长因子来促进伤口的愈合，同时不同阶段伤口的形态也不同，这就需要不同的护理方式。1972年，roveeti通过研究认识到湿润的创面环境能使上皮细胞的移行速度加快，促进创面的愈合，由此提出“湿性创面愈合”理论。目前临床上使用最多的还是纱布和绷带等干性敷料，其自身的优势使其在短时间内无法被完全取代，但是干性敷料吸收能力有限；需要频繁进行更换，造成伤口愈合时间延长；如不及时更换，未吸收的渗出液会对破损处皮肤产生浸泡作用，使伤口和伤口周围的皮肤发白、变软导致细菌的继发感染从而加剧伤口的恶化的缺点也使人们在不断开发其他材料的敷料以用来替代干性敷料。理想的伤口敷料应有助于维持适当的温度以促进血液流向伤口床，并且必须无菌，无毒且无过敏。
小蓟（学名：cirsiumsetosum），别称刺儿菜，菊科蓟属植物，是一种药食两用的植物资源，广泛分布于我国大部分地区。除我国外，在东欧、中欧、俄罗斯东部、日本和朝鲜等地区亦有分布，资源极其丰富。小蓟具有凉血止血、祛瘀消肿的功能，可用于治疗衄血、吐血、尿血、便血、崩漏下血、外伤出血、痈肿疮毒等，为历代中医临床的常用药之一。小蓟的记载首见于《名医别录》，《本草经集注》、《新修本草》、《日华子本草》、《本草图经》、《本草衍义》、《滇南本草》、《本草蒙筌》、《本草纲目》、《本草汇言》、《神农本草经疏》、《本草通会》和《本草备要》等中国历代本草都对小蓟有所记载。现代药理学和药效学研究发现，小蓟主要含黄酮类、萜类、苯丙素类、苯乙醇苷类、生物碱类、植物甾醇类等多种化学成分，具有止血、凝血、对心血管系统的作用、抗菌、抗炎、抗氧化、抗癌、抗病毒、降血糖等多种药理活性，普遍应用于保健食品、生物医药、环保、化妆品等领域。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种以中药材小蓟的提取物作为潜在原料制备的止血、抗菌的液体敷料，为临床敷料的使用提供一种新的选择；同时，本发明的目的还在于提供上述含有小蓟提取物的止血、抗菌敷料的制备方法。
为了实现上述目的，本发明的含小蓟提取物的止血、抗菌敷料的技术方案为：所述含小蓟提取物的止血、抗菌敷料由以下质量百分含量的成分组成：小蓟提取物0.5~3%、壳聚糖季铵盐5~10%、生长因子0.05~0.1%、防腐剂0~0.5%、增稠剂0.5~1%、保湿剂1~1.5%和超纯水83.9%~92.95%。
本发明所述的含小蓟提取物的止、抗菌敷料，以质量百分含量计，其由小蓟提取物3%、壳聚糖季铵盐6%、生长因子0.05%、透明质酸1%、防腐剂0.2%、增稠剂1%、保湿剂1.5%和超纯水87.25%组成。
一种含小蓟提取物的止血、抗菌敷料，其制备方法的操作步骤如下：
(1)准确称量干燥的小蓟药材若干，向其中加入适量的超纯水，在超声波振荡器里面振
荡180~240min，然后在60~100℃的水浴锅中以50~100r/min的速度搅拌240~360min，趁热过滤，获得滤液。将上述步骤重复两次，合并这三次的滤液，将获得的滤液旋蒸浓缩、50%~80%的乙醇醇沉，旋蒸浓缩，真空冷冻干燥，获得小蓟提取物a；
(2)将提取后的小蓟残渣放入30%~80%的乙醇中，浸泡240min~360min。过滤，收集
滤液，重复上述步骤三次，将所获滤液合并，旋蒸浓缩，真空冷冻干燥，获得小蓟
提取物b；
(3)将步骤（1）的小蓟提取物a和步骤（2）的小蓟提取物b，均匀混合，获得小蓟提
取物；
(4)在称量实验室通过分析天平准确称量所需的小蓟提取物、壳聚糖季铵盐、生长因子、
防腐剂、增稠剂和保湿剂，精确到小数点后两位；
(5)通过量筒和移液管准确量取制备所需的超纯水；
(6)向浓配灌中加入配制总量1⁄2的超纯水，然后加入称量的小蓟提取物，在常温下，
以100~150r/min的速度搅拌，搅拌至小蓟提取物完全溶解，获得溶液a;
(7)向溶液a中加入称量的壳聚糖季铵盐，在常温下，以100~150r/min的速度搅拌，
搅拌至小蓟提取物完全溶解，获得溶液b；
(8)向溶液b中依次加入称量的生长因子、防腐剂、保湿剂，在常温下，以30~100r/min
的速度搅拌30min~60min，使其混合均匀，获得溶液c；
(9)向溶液c中加入称量的增稠剂，在常温下，以100~150r/min的速度搅拌，搅拌至
增稠剂完全溶解，获得溶液d；
(10)将溶液d通过0.22μm的薄膜过滤并经紫外线灭菌，从而获得的液体敷料；
(11)将灭菌好的液体敷料进行取样检测，检测标准：液体无菌敷料溶液澄清且无异物，
细菌含量和重金属含量均符合要求；
(12)将合格后的样品进行灌装，即可获得最终的液体敷料产品。
步骤（3）中所用小蓟提取物是从中药材小蓟中经过多步提取并冷冻干燥获得的提取物。该提取物的主要成分为蒙花苷、芦丁、黄芩苷、刺槐素等黄酮类，绿原酸、咖啡酸等有机酸类，生物碱类，萜类和植物甾醇类；所用壳聚糖季铵盐是壳聚糖经过化学改性修饰而制备的白色或类白色粉末状固体，分子量在1000~100万之间；所用生长因子为表皮生长因子（egf）、角质细胞生长因子（kgf）、成纤维细胞生长因子（fgf）、血小板源生长因子（pdgf）、血管内皮生长因子（vegf）、转化生长因子（tgfα和tgfβ）；所用防腐剂为山梨酸、三氯叔丁醇、苯甲酸、苯甲酸钠；所用增稠剂为黄原胶、卡拉胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、明胶、海藻酸钠、羟乙基纤维素、瓜尔胶；所用保湿剂为透明质酸、透明质酸钠、丙三醇（甘油）、丙二醇、山梨醇、聚乙二醇、乳酸钠、吡咯烷酮羧酸钠；所用超纯水为符合中国药典2015版注射用水项下规定的水，即蒸馏水或去离子水经过二次蒸馏所得的水。
本发明采用中药材小蓟的提取物作为潜在原料制备敷料，具有止血、抗菌和促进伤口愈合等良好的效果。有望作为一种医护用品，用于外科、烧伤科、日常损伤等情况出现的急性出血或撕裂等现象。相对于传统的医用纱布和绷带，无论是伤口的愈合速度，还是伤口的止血时间，该敷料都有较大优势。
具体实施方式
本发明揭示了一种含小蓟提取物的止血、抗菌敷料，其制备方法的操作步骤如下：
(1)准确称量干燥的小蓟药材若干，向其中加入适量的超纯水，在超声波振荡器里面振荡180~240min，然后在60~100℃的水浴锅中以50~100r/min的速度搅拌240~360min，趁热过滤，获得滤液。将上述步骤重复两次，合并这三次的滤液，将获得的滤液旋蒸浓缩、50%~80%的乙醇醇沉，旋蒸浓缩，真空冷冻干燥，获得小蓟提取物a；
(2)将提取后的小蓟残渣放入30%~80%的乙醇中，浸泡240min~360min。过滤，收集滤液，重复上述步骤三次，将所获滤液合并，旋蒸浓缩，真空冷冻干燥，获得小蓟提取物b；
(3)将步骤（1）的小蓟提取物a和步骤（2）的小蓟提取物b，均匀混合，获得小蓟提取物；
(4)在称量实验室通过分析天平准确称量所需的小蓟提取物、壳聚糖季铵盐、生长因子、防腐剂、增稠剂和保湿剂，精确到小数点后两位；
(5)通过量筒和移液管准确量取制备所需的超纯水；
(6)向浓配灌中加入配制总量1⁄2的超纯水，然后加入称量的小蓟提取物，在常温下，以100~150r/min的速度搅拌，搅拌至小蓟提取物完全溶解，获得溶液a;
(7)向溶液a中加入称量的壳聚糖季铵盐，在常温下，以100~150r/min的速度搅拌，搅拌至小蓟提取物完全溶解，获得溶液b；
(8)向溶液b中依次加入称量的生长因子、防腐剂、保湿剂，在常温下，以30~100r/min的速度搅拌30min~60min，使其混合均匀，获得溶液c；
(9)向溶液c中加入称量的增稠剂，在常温下，以100~150r/min的速度搅拌，搅拌至增稠剂完全溶解，获得溶液d；
(10)将溶液d通过0.22μm的薄膜过滤并经紫外线灭菌，从而获得的液体敷料；
(11)将灭菌好的液体敷料进行取样检测，检测标准：液体无菌敷料溶液澄清且无异物，细菌含量和重金属含量均符合要求；
(12)将合格后的样品进行灌装，即可获得最终的液体敷料产品。
实施例1
(1)准确称量干燥的小蓟药材100g，向其中加入200ml超纯水，在超声波振荡器里面振荡240min，然后在90℃的水浴锅中以100r/min的速度搅拌360min，趁热过滤，获得滤液。将上述步骤重复两次，合并这三次的滤液，将获得的滤液旋蒸浓缩、三倍体积的无水乙醇醇沉，旋蒸浓缩，真空冷冻干燥，获得小蓟提取物a；
(2)将提取后的小蓟残渣放入200ml70%的乙醇中，浸泡360min。过滤，收集滤液，重复上述步骤三次，将所获滤液合并，旋蒸浓缩，真空冷冻干燥，获得小蓟提取物b；
(3)将步骤（1）的小蓟提取物a和步骤（2）的小蓟提取物b，均匀混合，获得小蓟提取物；
(4)在称量实验室通过分析天平准确称量所需的小蓟提取物2.500g、壳聚糖季铵盐5.00g、生长因子0.07g、苯甲酸钠0.10g、黄原胶0.50g和甘油1.00g，精确到小数点后两位；
(5)通过量筒和移液管准确量取制备所需的超纯水90.83ml；
(6)向浓配灌中加入45ml的超纯水，然后加入称量的小蓟提取物，在常温下，以100~150r/min的速度搅拌，搅拌至小蓟提取物完全溶解，获得溶液a;
(7)向溶液a中加入称量的壳聚糖季铵盐，在常温下，以150r/min的速度搅拌，搅拌至小蓟提取物完全溶解，获得溶液b；
(8)向溶液b中依次加入称量的生长因子、苯甲酸钠、甘油，在常温下，以50r/min的速度搅拌30min，使其混合均匀，获得溶液c；
(9)向溶液c中加入称量的黄原胶，在常温下，以150r/min的速度搅拌，搅拌至黄原胶完全溶解，获得溶液d；
(10)将溶液d通过0.22μm的薄膜过滤并经紫外线灭菌，从而获得的液体敷料；
(11)将灭菌好的液体敷料进行取样检测，检测标准：液体无菌敷料溶液澄清且无异物，细菌含量和重金属含量均符合要求；
(12)将合格后的样品进行灌装，即可获得最终的液体敷料产品。
实施例2
(1)准确称量干燥的小蓟药材100g，向其中加入200ml超纯水，在超声波振荡器里面振荡240min，然后在90℃的水浴锅中以100r/min的速度搅拌360min，趁热过滤，获得滤液。将上述步骤重复两次，合并这三次的滤液，将获得的滤液旋蒸浓缩、三倍体积的无水乙醇醇沉，旋蒸浓缩，真空冷冻干燥，获得小蓟提取物a；
(2)将提取后的小蓟残渣放入200ml70%的乙醇中，浸泡360min。过滤，收集滤液，重复上述步骤三次，将所获滤液合并，旋蒸浓缩，真空冷冻干燥，获得小蓟提取物b；
(3)将步骤（1）的小蓟提取物a和步骤（2）的小蓟提取物b，均匀混合，获得小蓟提取物；
(4)在称量实验室通过分析天平准确称量所需的小蓟提取物2.50g、壳聚糖季铵盐8.00g、生长因子0.08g、苯甲酸钠0.30g、黄原胶1.00g和甘油1.50g，精确到小数点后两位；
(5)通过量筒和移液管准确量取制备所需的超纯水86.62ml；
(6)向浓配灌中加入配制总量40ml的超纯水，然后加入称量的小蓟提取物，在常温下，以120r/min的速度搅拌，搅拌至小蓟提取物完全溶解，获得溶液a;
(7)向溶液a中加入称量的壳聚糖季铵盐，在常温下，以120r/min的速度搅拌，搅拌至小蓟提取物完全溶解，获得溶液b；
(8)向溶液b中依次加入称量的生长因子、苯甲酸钠、甘油，在常温下，以60r/min的速度搅拌60min，使其混合均匀，获得溶液c；
(9)向溶液c中加入称量的黄原胶，在常温下，以150r/min的速度搅拌，搅拌至黄原胶完全溶解，获得溶液d；
(10)将溶液d通过0.22μm的薄膜过滤并经紫外线灭菌，从而获得的液体敷料；
(11)将灭菌好的液体敷料进行取样检测，检测标准：液体无菌敷料溶液澄清且无异物，细菌含量和重金属含量均符合要求；
(12)将合格后的样品进行灌装，即可获得最终的液体敷料产品。
实施例3
(1)准确称量干燥的小蓟药材200g，向其中加入400ml的超纯水，在超声波振荡器里面振荡240min，然后在90℃的水浴锅中以100r/min的速度搅拌360min，趁热过滤，获得滤液。将上述步骤重复两次，合并这三次的滤液，将获得的滤液旋蒸浓缩、三倍体积的乙醇醇沉，旋蒸浓缩，真空冷冻干燥，获得小蓟提取物a；
(2)将提取后的小蓟残渣放入400ml的80%的乙醇中，浸泡360min。过滤，收集滤液，重复上述步骤三次，将所获滤液合并，旋蒸浓缩，真空冷冻干燥，获得小蓟提取物b；
(3)将步骤（1）的小蓟提取物a和步骤（2）的小蓟提取物b，均匀混合，获得小蓟提取物；
(4)在称量实验室通过分析天平准确称量所需的小蓟提取物3.00g、壳聚糖季铵盐10.00g、生长因子0.10g、苯甲酸钠0.30g、黄原胶1.00g和甘油1.50g，精确到小数点后两位；
(5)通过量筒和移液管准确量取制备所需的超纯水84.1ml；
(6)向浓配灌中加入配制总量40ml的超纯水，然后加入称量的小蓟提取物，在常温下，以130r/min的速度搅拌，搅拌至小蓟提取物完全溶解，获得溶液a;
(7)向溶液a中加入称量的壳聚糖季铵盐，在常温下，以130r/min的速度搅拌，搅拌至小蓟提取物完全溶解，获得溶液b；
(8)向溶液b中依次加入称量的生长因子、苯甲酸钠、甘油，在常温下，以40r/min的速度搅拌40min，使其混合均匀，获得溶液c；
(9)向溶液c中加入称量的黄原胶，在常温下，以130r/min的速度搅拌，搅拌至黄原胶完全溶解，获得溶液d；
(10)将溶液d通过0.22μm的薄膜过滤并经紫外线灭菌，从而获得的液体敷料；
(11)将灭菌好的液体敷料进行取样检测，检测标准：液体无菌敷料溶液澄清且无异物，细菌含量和重金属含量均符合要求；
(12)将合格后的样品进行灌装，即可获得最终的液体敷料产品。
实施例4
(1)准确称量干燥的小蓟药材100g，向其中加入20ml的超纯水，在超声波振荡器里面振荡120min，然后在90℃的水浴锅中以70r/min的速度搅拌360min，趁热过滤，获得滤液。将上述步骤重复两次，合并这三次的滤液，将获得的滤液旋蒸浓缩、三倍体积的无水乙醇醇沉，旋蒸浓缩，真空冷冻干燥，获得小蓟提取物a；
(2)将提取后的小蓟残渣放入200m70%的乙醇中，浸泡360min。过滤，收集滤液，重复上述步骤三次，将所获滤液合并，旋蒸浓缩，真空冷冻干燥，获得小蓟提取物b；
(3)将步骤（1）的小蓟提取物a和步骤（2）的小蓟提取物b，均匀混合，获得小蓟提取物；
(4)在称量实验室通过分析天平准确称量所需的小蓟提取物2.00g、壳聚糖季铵盐7.00g、生长因子0.02g、苯甲酸钠0.00g、黄原胶0.50g和甘油1.50g，精确到小数点后两位；
(5)通过量筒和移液管准确量取制备所需的超纯水88.98ml；
(6)向浓配灌中加入配制总量40ml的超纯水，然后加入称量的小蓟提取物，在常温下，以140r/min的速度搅拌，搅拌至小蓟提取物完全溶解，获得溶液a;
(7)向溶液a中加入称量的壳聚糖季铵盐，在常温下，以140r/min的速度搅拌，搅拌至小蓟提取物完全溶解，获得溶液b；
(8)向溶液b中依次加入称量的生长因子、苯甲酸钠、甘油，在常温下，以60r/min的速度搅拌50min，使其混合均匀，获得溶液c；
(9)向溶液c中加入称量的黄原胶，在常温下，以140r/min的速度搅拌，搅拌至黄原胶完全溶解，获得溶液d；
(10)将溶液d通过0.22μm的薄膜过滤并经紫外线灭菌，从而获得的液体敷料；
(11)将灭菌好的液体敷料进行取样检测，检测标准：液体无菌敷料溶液澄清且无异物，细菌含量和重金属含量均符合要求；
(12)将合格后的样品进行灌装，即可获得最终的液体敷料产品。
敷料性质检测
我们对实施例1至实施例4所制备的敷料分别进行杀菌性质实验（依据gb/t15979-2002附录c的检测方法）、细胞毒性实验（依据gb/t142332-2005第八章的检测方法）、刺激性和致敏性实验（依据gb/t16886.10-2017的检测方法）、皮内反应（依据gb/t16886.10-2017的检测方法）、全身急性毒性实验（依据gb/t16886.11-2011的检测方法）、重金属含量检测（依据中国药典2015版0821重金属检查法的检测方法）。检测结果如表1和表2所示。
表1敷料杀菌性质实验结果
表2液体敷料生物性质检测实验结果
本发明实施例1至实施例4提供的敷料杀菌率均在90%以上，符合gb15979-2002的标准评价，说明本发明所制备的敷料具有杀菌作用且本发明实施例1至实施例4所提供的液体敷料杀菌率均在95%以上，进一步说明本发明提供的液体敷料有明显的杀菌作用，同时相关实验结果还表明该敷料无细胞毒性、生物相容性好、对人体无害，符合医疗卫生用品的检测标准。敷料杀菌作用主要与敷料含有的小蓟提取物和壳聚糖季铵盐有关。
敷料愈合实验
愈合实验应该使用健康、初成年的白化兔，雌雄不限，同一品系，体重不低于2kg，应使动物适应饲养环境并按照iso10993-2的规定饲养。对于实施例1至4的液体敷料进行愈合实验，具体实验步骤如下：取16只符合标准的白化兔，随机分成四组，雌雄各半，适应性喂养3到5天后，进行实验。用5%水合氯醛按照6ml/kg的剂量进行耳缘静脉注射麻醉，麻醉后去除每组兔子背部的毛发，在裸露的皮肤表面划出一道6cm的创口，划至真皮层下，使伤口出血，然后立马给每组涂上实施例1至4的液体敷料，盖上纱布。每天更换一次液体敷料，创面不流血后，直接喷涂液体敷料即可，无需覆盖纱布，观察并记录创面红肿、结痂和脱痂的情况。实验结果如表3所示。
表3液体敷料愈合实验观察结果
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，并非对本发明的技术范围作任何限制，对于本领域的普通技术人员来说，依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行细微修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换而这些修改或替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。