一种抑菌天然组合物及其制备方法与流程

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[0001]
本发明属于医药、日化、植物和微生物领域，具体涉及一种抑制细菌生长的天然组合物及其制备方法。


背景技术：
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[0002]
咽喉炎是咽部黏膜、黏膜下及淋巴组织的慢性炎症，主要由其分泌物及肥大的淋巴滤泡刺激所致。多因反复发作或治疗不彻底，与病毒、细菌、食物、粉尘及有害气体刺激对患者咽喉部黏膜产生刺激密切相关，以咽喉干燥，咽喉部瘙痒灼热为主要表现，咽内异物感或干咳少痰为主要特征症状，常伴咳嗽、恶心，咽部检查见黏膜弥漫充血、血管扩张、色暗红，附有少量粘稠分泌物。咽喉炎病位特殊，病因复杂，症状顽固，而现代医学多采用抗生素类药物治疗，如庆大霉素、青霉素、地塞米松及罗红霉素片和复方硼砂溶液等，难以根治，且易于反复。也常采取局部辅助治疗，如复方硼砂溶液、呋喃西林溶液、2％硼酸液含漱，或含服喉片如复方碘甘油、13％硝酸银溶液或10％弱蛋白银溶液涂抹咽部，有收敛及消炎作用。但治疗咽喉炎的抗生素类药物副作用较大，同时会抑制口腔及咽喉内正常菌群的生长，造成菌群失调，长期使用抗生素还容易引起耐药性。
[0003]
紫花地丁：叶片下部较小，呈截形或宽楔形，又名犁头草，开淡紫色或紫色花，习称紫花地丁，多年生草本，无地上茎，常长在石头缝或田野里。主根粗，有数条细根。花期3～4月，果期5～9月。药理作用：清热解毒、消肿、消炎。属清热药下属分类的清热解毒药。体外试验对痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎球菌、皮肤真菌有抑制作用。临床应用：为治疗疮疖常用药，尤其适用于头面部和背部的疖肿。
[0004]
蛤蟆草：二年生草本，高10～100cm，多分枝，多根，叶丛生，有柄，叶片长圆形或披针形，边缘有圆齿，叶面皱折有毛。蛤蟆草提取物主要含黄酮类、萜类、酚类、挥发油类、植物甾醇类等多种类型的化合物，其提取物及所含的化学成分具有止咳平喘、抗炎镇痛、抗氧化、抑菌等多种药理作用。


技术实现要素：
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[0005]
本发明的第一个目的是提供一种抑菌天然组合物，其能够治疗咽喉炎、肺燥干咳、阴虚咳嗽、咽喉肿痛等，为非激素的口服饮剂，对咽喉炎的治疗有明显效果，早期使用可预防复发，有利于直达病灶、标本兼治，消除临床表现，最终达到治愈目的，且治疗效果好。或用于外敷治疗痈肿、痈疖疮疡、脚癣、湿疹等，也可用于食品保鲜防腐剂或日化产品抗菌剂中。
[0006]
本发明的抑菌天然组合物，包括紫花地丁水提取物与蛤蟆草水提取物，所述的紫花地丁水提取物与蛤蟆草水提取物的质量比为(1～2):(1～2)。
[0007]
所述的抑菌天然组合物中紫花地丁水提取物与蛤蟆草水提取物总的含量为0.25～1.0g/ml。
[0008]
所述的紫花地丁水提取物为紫花地丁水煎提取物。
[0009]
所述的蛤蟆草水提取物为蛤蟆草水煎提取物。
[0010]
所述的紫花地丁水煎提取物的制备方法为：将紫花地丁整株干品洗净，烘干粉碎，加水煎煮，过滤，得水煎液，将水煎液浓缩至每1ml相当于原药材1g，灭菌，得到紫花地丁水煎提取物。
[0011]
所述的蛤蟆草水煎提取物的制备方法为：将蛤蟆草整株干品洗净，烘干粉碎，加水煎煮，过滤，得水煎液，将水煎液浓缩至每1ml相当于原药材1g，灭菌，得到蛤蟆草水煎提取物。
[0012]
优选，所述的抑菌天然组合物为抑制肺炎克雷伯氏菌或枯草芽孢杆菌的制剂。
[0013]
本发明的第二个目的是提供一种上述的抑菌天然组合物的制备方法，包括以下步骤：
[0014]
s1：将紫花地丁整株干品洗净，烘干粉碎，加水煎煮，过滤，得水煎液，将水煎液浓缩至每1ml相当于原药材1g，灭菌，得到紫花地丁水煎提取物；
[0015]
s2：将蛤蟆草整株干品洗净，烘干粉碎，加水煎煮，过滤，得水煎液，将水煎液浓缩至每1ml相当于原药材1g，灭菌，得到蛤蟆草水煎提取物；
[0016]
s3：将紫花地丁水煎提取物与蛤蟆草水煎提取物按质量比为(1～2):(1～2)混合，即得到抑菌天然组合物。
[0017]
通过本发明的试验研究表明，将紫花地丁水煎提取物与蛤蟆草水煎提取物稀释后按质量比1:1复配联用，即便稀释至0.25g/ml，对肺炎克雷伯氏菌3h、5h、24h的抑制率都分别为70.25％、75.65％、85.20％，对枯草芽孢杆菌3h、5h、24h的抑制率都分别为65.22％、73.25％、82.65％，抑菌效果优异。
[0018]
本发明的抑菌天然组合物的原材料源于植物，天然环保，抑菌效果显著，有益于人体健康，可应用于制备治疗咽喉炎、肺燥干咳、阴虚咳嗽、咽喉肿痛等的中药饮剂，外敷治疗痈肿、痈疖疮疡、脚癣、湿疹等，也可用于食品保鲜防腐剂或日化产品抗菌剂中，应用范围和前景广阔。
具体实施方式
[0019]
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整的描述，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
[0020]
称取紫花地丁整株干品100g，置于1000ml蒸馏水，室温下浸泡30min后煮沸30min，煎煮，稍冷却后过滤得到水煎液，剩渣中加入500ml蒸馏水煮沸30min，过滤得到水煎液，合并两次水煎液，将水煎液浓缩(如减压浓缩)至每1ml相当于原药材1g，经121℃灭菌20min后，得到1g/ml紫花地丁水煎提取物a，于4℃冰箱内保存备用。
[0021]
称取100g蛤蟆草整株干品，置于1000ml蒸馏水，室温下浸泡30min后煮沸30min，煎煮，稍冷却后过滤得到水煎液，剩渣中加入500ml蒸馏水煮沸30min，过滤得到水煎液，合并两次水煎液，将水煎液浓缩(如减压浓缩)至每1ml相当于原药材1g，经121℃灭菌20min后，得到1g/ml蛤蟆草水煎提取物b，于4℃冰箱内保存备用。
[0022]
中药材提取液的浓度表示法，按每毫升提取液相当于多少克中药材来表示：例如用100g中药材经提取后，配成100ml提取液，即lml提取液相当于1g中药材，其浓度表示为
1g/ml。
[0023]
以下实施例中的测试菌株为肺炎克雷伯氏菌或枯草芽孢杆菌时，测试方法为：用该实施例中营养琼脂培养基(na)斜面培养基将测试菌株于37℃培养1d。然后用pbs清洗菌泥，稀释到od
600
＝1.0配制成菌悬液工作液。将紫花地丁水煎提取物a、蛤蟆草水煎提取物b、或紫花地丁水煎提取物a和蛤蟆草水煎提取物b的混合物(可用蒸馏水稀释)，作为测试药液，同时以无菌蒸馏水作为空白对照。量取稀释后的各药液或空白对照9ml于各无菌试管内，置20℃
±
1℃水浴中5min后，分别加入1ml菌悬液，轻轻摇动混匀，于37℃条件培养，进行抑菌测试，作用至试验预定时间3h、5h、24h，分别对各试管内肺炎克雷伯氏菌或枯草芽孢杆菌进行活菌培养计数，每次与相应时间的空白对照中肺炎克雷伯氏菌或枯草芽孢杆菌含量进行对比，计算其抑菌率。
[0024]
抑菌率计算公式：
[0025][0026]
每个处理3个平行。
[0027]
在本说明书中使用以下缩写：atcc是美国模式培养物集存库(american type culture collection)的简写，pbs是磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffer saline)，温度的单位是摄氏度(℃)，h＝小时，min＝分钟，ml＝毫升，mg＝毫克，g＝克，od
600
指的是溶液在600nm波长处的吸光值。
[0028]
实施例1：
[0029]
称取紫花地丁整株干品(购自广州采芝灵药店，购入日期：2020.5.8)100g置于1000ml蒸馏水室温下浸泡30min后煮沸30min，煎煮，稍冷却后过滤得到水煎液，剩渣中加入500ml蒸馏水煮沸30min，过滤得到水煎液，合并两次水煎液，将水煎液浓缩至每1ml相当于原药材1g，经121℃灭菌20min后，得到1g/ml紫花地丁水煎提取物a(100g)，于4℃冰箱内保存备用。
[0030]
称取100g蛤蟆草整株干品(采摘于重庆山区，采摘日期：2020.4.20)置于1000ml蒸馏水室温下浸泡30min后煮沸30min，煎煮，稍冷却后过滤得到水煎液，剩渣中加入500ml蒸馏水煮沸30min，过滤得到水煎液，合并两次水煎液，将水煎液浓缩至每1ml相当于原药材1g，经121℃灭菌20min后，得到1g/ml蛤蟆草水煎提取物b(100g)，于4℃冰箱内保存备用。
[0031]
将1g/ml紫花地丁水煎提取物a和1g/ml蛤蟆草水煎提取物b按照质量比1:1混合，使得紫花地丁水煎提取物a和蛤蟆草水煎提取物b的终浓度分别为0.5g/ml、0.5g/ml，由此得到0.5g/ml a+0.5g/ml b的抑菌天然组合物。
[0032]
用肺炎克雷伯氏菌或枯草芽孢杆菌作为测试菌株，按照上述测试方法范例中的方法进行测试3h，0.5g/ml a+0.5g/ml b的抑菌天然组合物对肺炎克雷伯氏菌的抑菌率为90.20％，对枯草芽孢杆菌的抑菌率为90.15％。进行测试5h，0.5g/ml a+0.5g/ml b的抑菌天然组合物对肺炎克雷伯氏菌的抑菌率为95.25％，对枯草芽孢杆菌的抑菌率为95.50％。按照上述测试方法范例中的方法进行测试24h，0.5g/ml a+0.5g/ml b的抑菌天然组合物对肺炎克雷伯氏菌的抑菌率为>99.99％，对枯草芽孢杆菌的抑菌率为>99.99％。
[0033]
0.5g/ml a+0.5g/ml b的抑菌天然组合物对肺炎克雷伯氏菌或枯草芽孢杆菌测试3h、5h、24h都有优异的抑菌效果。
[0034]
实施例2：
[0035]
按照实施例1的方法制备紫花地丁水煎提取物a和蛤蟆草水煎提取物b。
[0036]
用蒸馏水把紫花地丁水煎提取物a稀释至0.5g/ml a和用蒸馏水把蛤蟆草水煎提取物b稀释至0.5g/ml b，稀释后的二者按质量比1:1混合得到的0.25g/ml a+0.25g/ml b的抑菌天然组合物。
[0037]
用肺炎克雷伯氏菌或枯草芽孢杆菌作为测试菌株，按照上述测试方法范例中的方法进行测试3h，0.25g/mla+0.25g/ml b的抑菌天然组合物对肺炎克雷伯氏菌的抑菌率为70.25％，对枯草芽孢杆菌的抑菌率为65.22％。进行测试5h，0.25g/mla+0.25g/ml b的抑菌天然组合物对肺炎克雷伯氏菌的抑菌率为75.65％，对枯草芽孢杆菌的抑菌率为73.25％。按照上述测试方法范例中的方法进行测试24h，0.25g/ml a+0.25g/ml b的抑菌天然组合物对肺炎克雷伯氏菌的抑菌率为85.20％，对枯草芽孢杆菌的抑菌率为82.65％。
[0038]
0.25g/ml a+0.25g/ml b的抑菌天然组合物对肺炎克雷伯氏菌或枯草芽孢杆菌测试3h、5h、24h有较好的抑菌效果。
[0039]
实施例3：
[0040]
按照实施例1的方法制备紫花地丁水煎提取物a和蛤蟆草水煎提取物b。
[0041]
将1g/ml紫花地丁水煎提取物a和1g/ml蛤蟆草水煎提取物b按照质量比1:2的比例混合，使得紫花地丁水煎提取物a和蛤蟆草水煎提取物b的终浓度分别为0.33g/ml、0.67g/ml，由此得到0.33g/ml a+0.67g/ml b的抑菌天然组合物。
[0042]
用肺炎克雷伯氏菌或枯草芽孢杆菌作为测试菌株，按照上述测试方法范例中的方法进行测试3h，0.33g/ml a+0.67g/ml b的抑菌组合物对肺炎克雷伯氏菌的抑菌率为76.25％，对枯草芽孢杆菌的抑菌率为92.55％。进行测试5h，0.33g/ml a+0.67g/ml b的抑菌组合物对肺炎克雷伯氏菌的抑菌率为80.33％，对枯草芽孢杆菌的抑菌率为95.67％。按照上述测试方法范例中的方法进行测试24h，0.33g/ml a+0.67g/ml b的抑菌组合物对肺炎克雷伯氏菌的抑菌率为90.56％，对枯草芽孢杆菌的抑菌率为>99.99％。
[0043]
0.33g/ml a+0.67g/ml b的抑菌组合物对枯草芽孢杆菌比对肺炎克雷伯氏菌测试3h、5h、24h的抑菌效果更好。
[0044]
实施例4：
[0045]
按照实施例1的方法制备紫花地丁水煎提取物a和蛤蟆草水煎提取物b。
[0046]
将1g/ml紫花地丁水煎提取物a和1g/ml蛤蟆草水煎提取物b按照质量比2:1的比例混合，使得紫花地丁水煎提取物a和蛤蟆草水煎提取物b的终浓度分别为0.67g/ml、0.33g/ml，由此得到0.67g/ml a+0.33g/ml b的抑菌天然组合物。
[0047]
用肺炎克雷伯氏菌或枯草芽孢杆菌作为测试菌株，按照上述测试方法范例中的方法进行测试3h，0.67g/ml a+0.33g/ml b的抑菌天然组合物对炎克雷伯氏菌的抑菌率为92.15％，对枯草芽孢杆菌的抑菌率为70.33％。进行测试5h，0.67g/ml a+0.33g/ml b的抑菌天然组合物对肺炎克雷伯氏菌的抑菌率为96.25％，对枯草芽孢杆菌的抑菌率为85.26％。按照上述测试方法范例中的方法进行测试24h，0.67g/ml a+0.33g/ml b的抑菌天然组合物对肺炎克雷伯氏菌的抑菌率为>99.99％，对枯草芽孢杆菌的抑菌率为90.35％。
[0048]
0.67g/ml a+0.33g/ml b的抑菌天然组合物对肺炎克雷伯氏菌比对枯草芽孢杆菌测试3h、5h、24h的抑菌效果更好。
[0049]
对比例：
[0050]
按照实施例1的方法制备紫花地丁水煎提取物a和蛤蟆草水煎提取物b。
[0051]
将1g/ml紫花地丁水煎提取物a和1g/ml蛤蟆草水煎提取物b作为测试药液。
[0052]
用肺炎克雷伯氏菌或枯草芽孢杆菌作为测试菌株，按照上述测试方法范例中的方法进行测试1g/ml a的紫花地丁水煎提取物a药液和1g/ml b的蛤蟆草水煎提取物b药液的抑菌效果，具体如表1所示。
[0053]
测试3、5、24小时，紫花地丁水煎提取物a药液对肺炎克雷伯氏菌的抑菌率为90.15％、95％、>99.99％，对枯草芽孢杆菌的抑菌率为70.33％、75.25％、80.25％。
[0054]
测试3、5、24小时，蛤蟆草水煎提取物b药液对肺炎克雷伯氏菌的抑菌率为70.65％、75.25％、>80.33％，对枯草芽孢杆菌的抑菌率为90.15％、95.35％、>99.99％。
[0055]
实施例1-4和对比例的紫花地丁与蛤蟆草提取物对肺炎克雷伯氏菌或枯草芽孢杆菌的抑菌效果见表1。
[0056]
表1紫花地丁与蛤蟆草提取物对肺炎克雷伯氏菌或枯草芽孢杆菌的抑菌实验结果
[0057][0058]
由上表1可知，0.5g/ml a+0.5g/ml b与0.25g/ml a+0.25g/ml b比较，紫花地丁水煎提取物和蛤蟆草水煎提取物对肺炎克雷伯氏菌或枯草芽孢杆菌的抑菌率随浓度降低而明显降低，随着作用时间延长，对肺炎克雷伯氏菌或枯草芽孢杆菌的抑菌率明显上升。0.33g/ml a+0.67g/ml b与0.67g/ml a+0.33g/ml b比较，紫花地丁水煎提取物含量高时，对肺炎克雷伯氏菌的抑菌效果明显好于对枯草芽孢杆菌的抑菌效果，蛤蟆草水煎提取物含量高时，对枯草芽孢杆菌的抑菌效果明显好于对肺炎克雷伯氏菌的抑菌效果。
[0059]
单独的紫花地丁水煎提取物1.0g/ml对肺炎克雷伯氏菌3h、5h、24h的抑菌率分别
为：90.15％、95.00％、>99.99％，对枯草芽孢杆菌3h、5h、24h的抑菌率分别为：70.33％、75.25％、80.25％。单独的紫花地丁水煎提取物1.0g/ml对肺炎克雷伯氏菌的抑菌效果优于对枯草芽孢杆菌的抑菌效果。单独的蛤蟆草水煎提取物1.0g/ml对肺炎克雷伯氏菌3h、5h、24h的抑菌率分别为：70.65％、75.25％、80.33％，对枯草芽孢杆菌3h、5h、24h的抑菌率分别为：90.15％、95.35％、>99.99％。单独的蛤蟆草水煎提取物1.0g/ml对枯草芽孢杆菌的抑菌效果优于对肺炎克雷伯氏菌的抑菌效果。二者联用，0.5g/ml a+0.5g/ml b肺炎克雷伯氏菌3h、5h、24h的抑菌率分别为：90.20％、95.25％、>99.99％，对枯草芽孢杆菌3h、5h、24h的抑菌率分别为：90.15％、95.50％、>99.99％。二者联用比任何一个单独药物对肺炎克雷伯氏菌、枯草芽孢杆菌的抑菌效果要好。
[0060]
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。