1.本发明涉及中药领域，具体涉及一种注射用银翘提取物及其制备 方法和其应用。
背景技术：
2.金银花为忍冬科忍冬属植物忍冬lonicera japonica thunb.、 华南忍冬lonicera confusa(sweet)dc.、菰腺忍冬lonicerahypoglauca miq.、黄褐毛忍冬lonicera fulvotomentosa hsu et s. c.cheng的花蕾。“金银花”始见于李时珍《本草纲目》并载入《中 国药典》，尚有“银花”、“双花”、“二花”、“二宝花”、“双宝花”等 别称。连翘(拉丁学名：forsythia suspensa)为双子叶植物纲、捩 花目、木樨科、连翘属落叶灌木。连翘果实可以入药。
3.金银花、连翘具有清热解毒、辛凉解表等功效，有效抑制多种细 菌及病毒的生长，并具有良好的抗炎、抗变态反应及提高机体免疫力 等作用，而成为众多中成药组方(如双黄连、银翘散等)的有效组份。 绿原酸为银翘提取物中的主要药效成分，并成为检验银翘提取物质量 的关键指标。银翘提取物的制备方法包括水提法、水醇提取法、醇水 提取法、超声波强化浸出法等。
4.cn101390956a公开了一种银翘提取物的制备方法，先将金银花 在60-85℃条件下温浸0.5-2小时，获得金银花温浸液，再用煎煮方 法提取连翘中的有效成分，制得连翘煎煮液，收集并合并金银花温浸 液和连翘煎煮液，浓缩、醇沉，制得银翘提取物。该方法所得银翘提 取物中的绿原酸含量及其收率均有待提高。为此，急需开发高绿原酸 含量的银翘提取物及其制备方法，提高药品质量和疗效并提高资源利 用率。
技术实现要素：
5.本发明的目的在于提供一种注射用银翘提取物，所述提取物由金 银花和连翘制备得到，其中，金银花和连翘的重量比为1:2-4:1，所 述银翘提取物中绿原酸含量不低于18％。
6.本发明的优选技术方案中，所述金银花和连翘的重量比为 1:2-2:1。
7.本发明的优选技术方案中，所述银翘提取物中绿原酸含量不低于 20％。
8.本发明的另一目的在于提供一种注射用银翘提取物的制备方法， 所述银翘提取物由金银花和连翘制备得到，提取物中绿原酸含量不低 于18％，其中，金银花和连翘的重量比为1:2-4:1，所述提取物的制 备包括下述步骤：
9.1)称取所需量的金银花、连翘，混合，加入浓度为60％-80％的 乙醇溶液，所述乙醇溶液的加入量为药材总重量的1-15倍(v/w)， 加热回流提取1-5次，每次回流提取0.5-5小时，过滤，收集乙醇提 取液后，调节滤液ph5.5-8.5，静置，过滤，滤液浓缩，制得浓缩液 一；
10.2)将浓缩液一冷却，加入乙醇使其含醇量为70％-95％(v/v)，调 节溶液ph5.5-8.5，静置，过滤，滤液浓缩，制得浓缩液二；
11.3)将浓缩液二冷却，过滤，滤液经氯仿萃取并分离去除氯仿萃 取液后，干燥，即得。
12.本发明的优选技术方案中，所述金银花和连翘的重量比为 1:2-2:1。
13.本发明的优选技术方案中，步骤1)中，称取所需量金银花、连 翘，混合后粉碎或粉碎后混合用于提取。
14.本发明的优选技术方案中，步骤1)中，在加热回流提取前，药 材中加入乙醇溶液浸泡，优选浸泡1-12h，更优选浸泡2-10h。
15.本发明的优选技术方案中，步骤1)中，所述乙醇溶液的浓度为 65％-75％，优选为70％。
16.本发明的优选技术方案中，步骤1)中，乙醇溶液加入量为药材 总重量的3-10倍(v/w)，优选为4-8倍(v/w)。
17.本发明的优选技术方案中，步骤1)中，加热回流提取次数为2-4 次。
18.本发明的优选技术方案中，步骤1)中，加热回流提取时间为1-4h， 优选为1.5-3h。
19.本发明的优选技术方案中，步骤1)或步骤2)中，调节滤液 ph6.0-8.0，优选ph6.5-7.5。
20.本发明的优选技术方案中，步骤1)或2)中调节滤液ph的酸碱 物质选自氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢 钾、磷酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸钾、磷酸氢二钾、磷酸 二氢钾、三乙胺、盐酸、硫酸、醋酸、硝酸、磷酸、磺酸、苹果酸、 富马酸、枸橼酸、羟基酸、酮酸、草酸、柠檬酸、琥珀酸、甲酸、乙 酸、丙酸、丁酸、丙二酸、丁二酸、丙酮酸、谷氨酸、酒石酸、乳酸、 衣康酸、抗坏血酸、延胡索酸、α-酮戊二酸、果酸的任一种或其组 合。
21.本发明的优选技术方案中，步骤1)或2)中调节滤液ph的酸碱 物质溶液的浓度为0.5-8mol/l，优选为0.8-6mol/l，更优选为 1-5mol/l。
22.本发明的优选技术方案中，步骤1)或2)中的滤液调节ph后静 置2-50h，优选为5-40h。
23.本发明的优选技术方案中，步骤1)或步骤2)中的滤液浓缩至 无醇味。
24.本发明的优选技术方案中，步骤1)或步骤2)中的浓缩液一或 浓缩液二的相对密度为1.05-1.4(60℃测定)，优选为1.10-1.35(60℃ 测定)。
25.本发明的优选技术方案中，步骤1)或2)所述的浓缩选自减压 浓缩、薄膜浓缩、真空浓缩、常压浓缩的任一种或其组合。
26.本发明的优选技术方案中，步骤2)中的含醇量为75％-90％(v/v), 优选为75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、 90％的任一种。
27.本发明的优选技术方案，步骤2)或步骤3)中将浓缩液一或浓 缩液二冷却至4-35℃,优选为10-25℃。
28.本发明的优选技术方案中，步骤3)中氯仿用量为药材重量的 0.05-0.5倍(v/w)，优选为0.1-0.4倍(v/w)。
29.本发明的优选技术方案，步骤3)中氯仿用量为药材重量(v/w) 的0.1倍、0.11倍、0.12倍、0.13倍、0.14倍、0.15倍、0.16倍、 0.17倍、0.18倍、0.19倍、0.2倍、0.25倍、0.3倍、0.35倍、0.4 倍0.45倍、0.5倍的任一种。
30.本发明的优选技术方案中，所述干燥选自减压干燥、真空干燥、 喷雾干燥、常压干燥、沸腾干燥的任一种或其组合。
31.本发明的优选技术方案中，将步骤3)制得的干燥浸膏粉碎，优 选粉碎方法选自气流粉碎法、流体研磨法、胶体研磨法、喷射研磨法、 共同研磨法、球磨法的任一种或其组合。
32.本发明的优选技术方案中，所述银翘提取物中绿原酸含量不低于 20％。
33.本发明的另一目的在于提供一种注射用银翘提取物的制备方法， 所述银翘提取物由金银花和连翘制备得到，其中，金银花和连翘的重 量比为1:2-4:1，提取物中绿原酸含量不低于18％，所述提取物的制 备包括下述步骤：
34.1)称取所需量的金银花、连翘，混合，加入浓度为60％-80％的 酸化乙醇溶液，所述酸化乙醇溶液的加入量为药材总重量的1-15倍 (v/w)，加热回流提取1-5次，每次回流提取0.5-5小时，过滤，收 集乙醇提取液后，调节滤液ph5.5-8.5，静置，过滤，滤液浓缩，制 得浓缩液一；
35.2)将浓缩液一冷却，加入乙醇使其含醇量为70％-95％(v/v)，调 节溶液ph5.5-8.5，静置，过滤，滤液浓缩，制得浓缩液二；
36.3)将浓缩液二冷却，过滤，滤液经氯仿萃取并分离去除氯仿萃 取液后，干燥，即得。
37.本发明的优选技术方案中，所述金银花和连翘的重量比为 1:2-2:1。
38.本发明的优选技术方案中，步骤1)中，称取所需量金银花、连 翘，混合后粉碎或粉碎后混合用于提取。
39.本发明的优选技术方案中，步骤1)中，在加热回流提取前，药 材中加入酸化乙醇溶液浸泡，优选浸泡1-12h，更优选浸泡2-10h。
40.本发明的优选技术方案中，步骤1)中，所述酸化乙醇溶液的浓 度为65％-75％，优选为70％(v/v)。
41.本发明的优选技术方案中，所述酸化乙醇溶液的ph为3-6，优 选酸化乙醇溶液的ph为4-5。
42.本发明的优选技术方案中，调节酸化乙醇溶液ph的酸选自盐酸、 硫酸、氯酸、硝酸、氢溴酸、氢氟酸、磷酸、磺酸、苹果酸、富马酸、 枸橼酸、羧酸、羟基酸、酮酸、冰醋酸、草酸、柠檬酸、琥珀酸、甲 酸、乙酸、丙酸、丁酸、丙二酸、丁二酸、丙酮酸、谷氨酸、酒石酸、 乳酸、衣康酸、抗坏血酸、延胡索酸、α-酮戊二酸、果酸的任一种 或其组合。
43.本发明的优选方案中，调节酸化乙醇溶液ph的酸浓度为 0.5-8mol/l，优选为0.8-6mol/l，更优选为1-5mol/l。
44.本发明的优选技术方案中，步骤1)中，所述酸化乙醇溶液加入 量为药材总重量的3-10倍(v/w)，优选为4-8倍(v/w)。
45.本发明的优选技术方案中，步骤1)中，加热回流提取次数为2-4 次。
46.本发明的优选技术方案中，步骤1)中，加热回流提取时间为1-4h， 优选为1.5-3h。
47.本发明的优选技术方案中，步骤1)或步骤2)中，调节滤液 ph6.0-8.0，优选ph6.5-7.5。
48.本发明的优选技术方案中，步骤1)或2)中调节滤液ph的酸碱 物质选自氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢 钾、磷酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸
钾、磷酸氢二钾、磷酸 二氢钾、三乙胺、盐酸、硫酸、醋酸、硝酸、磷酸、磺酸、苹果酸、 富马酸、枸橼酸、羟基酸、酮酸、草酸、柠檬酸、琥珀酸、甲酸、乙 酸、丙酸、丁酸、丙二酸、丁二酸、丙酮酸、谷氨酸、酒石酸、乳酸、 衣康酸、抗坏血酸、延胡索酸、α-酮戊二酸、果酸的任一种或其组 合。
49.本发明的优选技术方案中，步骤1)或2)中调节滤液ph的酸碱 物质溶液的浓度为0.5-8mol/l，优选为0.8-6mol/l，更优选为 1-5mol/l。
50.本发明的优选技术方案中，步骤1)或2)中的滤液调节ph后静 置2-50h，优选为5-40h。
51.本发明的优选技术方案中，步骤1)或步骤2)中的滤液浓缩至 无醇味。
52.本发明的优选技术方案中，步骤1)或步骤2)中的浓缩液一或 浓缩液二的相对密度为1.05-1.4(60℃测定)，优选为1.10-1.35(60℃ 测定)。
53.本发明的优选技术方案中，步骤1)或2)所述的浓缩选自减压 浓缩、薄膜浓缩、真空浓缩、常压浓缩的任一种或其组合。
54.本发明的优选技术方案中，步骤2)中的含醇量为75％-90％(v/v), 优选为75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、 90％的任一种。
55.本发明的优选技术方案，步骤2)或步骤3)中将浓缩液一或浓 缩液二冷却至4-35℃,优选为10-25℃。
56.本发明的优选技术方案中，步骤3)中氯仿用量为药材重量的 0.05-0.5倍(v/w)，优选0.1-0.4倍(v/w)。
57.本发明的优选技术方案，步骤3)中氯仿用量为药材重量(v/w) 的0.1倍、0.11倍、0.12倍、0.13倍、0.14倍、0.15倍、0.16倍、 0.17倍、0.18倍、0.19倍、0.2倍、0.25倍、0.3倍、0.35倍、0.4 倍0.45倍、0.5倍的任一种。
58.本发明的优选技术方案中，所述干燥选自减压干燥、真空干燥、 喷雾干燥、常压干燥、沸腾干燥的任一种或其组合。
59.本发明的优选技术方案中，将步骤3)制得的干燥浸膏粉碎，优 选粉碎方法选自气流粉碎法、流体研磨法、胶体研磨法、喷射研磨法、 共同研磨法、球磨法的任一种或其组合。
60.本发明的优选技术方案中，制得的银翘提取物中绿原酸含量不低 于20％。
61.本发明的另一目的在于提供一种药物组合物，所述药物组合物包 含本发明的银翘提取物和药学上可接受的载体。
62.本发明的药物组合物可为本领域熟知的各种剂型，并可采用本领 域常规的制剂技术制备得到。
63.本发明的优选技术方案中，本发明的制剂选自注射剂、口服制剂 或外用制剂的任一种。
64.本发明的优选技术方案中，所述的注射制剂选自注射液、注射用 冻干粉针的任一种。
65.本发明的优选技术方案中，所述的口服制剂选自口服液体制剂、 片剂、胶囊剂、颗粒剂、糖浆剂、散剂、露剂、泡腾剂、喷雾剂、混 悬液、丸剂、滴丸、合剂、糊剂、乳剂、茶剂的任一种。
66.本发明的优选技术方案中，所述的外用制剂选自凝胶剂、膏剂、 贴膏剂、霜剂、软
膏剂、搽剂、洗剂、栓剂、涂抹剂、凝膏剂、软膏 剂、雾化剂的任一种。
67.本发明所述的注射剂、口服制剂或外用制剂常用的赋形剂或辅料 包括但不仅限于溶剂、助溶剂、等渗调节剂、ph调节剂、吸附剂、 络合剂、填充剂(又称稀释剂)、润滑剂(又称助流剂或抗粘着剂)、 分散剂、湿润剂、粘合剂、崩解剂、调节剂、增溶剂、抗氧剂、抑菌 剂、乳化剂、矫味剂、赋香剂等。溶剂包括注射用水和非水溶剂，非 水溶剂包括乙醇、丙二醇、植物油(大豆油、红花油、芝麻油、棉子 油、鱼油等)；助溶剂包括有机酸及其钠盐和酰胺与胺类，如苹果酸、 蛋氨酸、精氨酸、苯甲酸钠、水杨酸钠、对氨基苯甲酸钠、乌拉坦、 尿素、烟酰胺、葡萄糖、葡甲胺、维生素b6等；等渗调节剂，例如 氯化钠、葡萄糖、甘露醇、果糖、甘油、山梨醇、木糖醇、氯化镁、 磷酸盐、枸橼酸钠等；ph调节剂，盐酸、硫酸、乳酸、苹果酸、醋 酸、枸橼酸、氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化钠、氢氧化钾、 枸橼酸钠、枸橼酸钾、柠檬酸钠、柠檬酸钾、苹果酸钠、苹果酸钾、 磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、碳酸钾、碳酸 氢钾等；粘合剂，例如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、黄芪胶、纤 维素或其衍生物、明胶浆、淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮等，所述纤维素 衍生物选自微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、乙基纤维素、羟丙甲基纤 维素的任一种或其组合，所述淀粉衍生物选自羧甲基淀粉钠、淀粉乙 醇酸钠、预胶化淀粉、改良淀粉、羟丙基淀粉、玉米淀粉的任一种或 其组合；填充剂，例如乳糖、糖粉、糊精、淀粉或其衍生物、纤维素 或其衍生物、无机钙盐、山梨醇、甘氨酸等，优选无机钙盐选自氯化 钙、硫酸钙、磷酸钙、磷酸氢钙、沉降碳酸钙等，优选纤维素衍生物 选自微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、乙基纤维素、羟丙甲基纤维素的 任一种，优选淀粉衍生物选自羧甲基淀粉钠、淀粉乙醇酸钠、预胶化 淀粉、改良淀粉、羟丙基淀粉、玉米淀粉的任一种或其组合；润滑剂， 例如微粉硅胶、硬脂酸镁、滑石粉、胶态二氧化硅、氢氧化铝、硼酸、 氢化植物油、聚乙二醇等；崩解剂，例如淀粉或其衍生物、聚乙烯吡 咯烷酮、交联聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素等，优选淀粉衍生物选自 羧甲基淀粉钠、淀粉乙醇酸钠、预胶化淀粉、改良淀粉、羟丙基淀粉、 玉米淀粉的任一种或其组合；湿润剂，例如十二烷基硫酸钠、水或醇 等。抗氧剂，例如l-半胱氨酸盐酸盐、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦 亚硫酸钠、没食子酸丙酯、谷胱甘肽、硫代硫酸钠、硫脲、巯基乙酸、 焦亚硫酸钠、焦亚硫酸钾、二丁基苯酸、维生素e等；抑菌剂(杀菌 剂)，例如0.5％苯酚、0.3％甲酚、0.5％三氯叔丁醇等；乳化剂，例如 聚山梨酯-80、没酸山梨坦、普流罗尼克f-68，卵磷酯、豆磷脂、泊 洛沙姆、胆固醇、甘油单油酸酯等；增溶剂，例如泊洛沙姆、吐温-80、 胆汁、甘油等；调味剂，例如蜂蜜、糖浆等。
68.本发明的优选技术方案中，将本发明的银翘提取物与药学上可接 受的缓释制剂载体或控释制剂载体按其制备要求加以混合，再按照本 领域熟知的缓释制剂或控释制剂的制备方法，如加入阻滞剂包衣或将 本发明的金银花提取物微囊化后，将其制成微丸，如缓释微丸或控释 微丸等。本发明所述的缓释制剂载体或控释制剂载体包括但不仅限于 油脂性掺入剂、亲水胶体或包衣阻滞剂等，所述的油脂性掺入剂选自 单硬脂酸甘油酯、氢化蓖麻油、矿油、聚硅氧烷或二甲基硅氧烷等； 所述的亲水胶体选自羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤 维素、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)、阿拉伯胶、西黄耆胶或卡波普的任一 种或其组合；所述的包衣阻滞剂选自乙基纤维素(ec)、羟丙甲基纤维 素(hmpc)、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)、邻苯二甲酸醋酸纤维素(cap)、 丙烯酸类树脂等。
69.本发明的优选技术方案中，所述药物组合物中的药学上可接受载 体的用量或其种类根据药物组合物中有效成分的理化性质和含量、制 剂类型、制剂的溶出及生物利用度
等因素而定。
70.本发明的优选技术方案中，所述药物组合物还包括其他药物活性 成分。
71.本发明的另一目的在于提供本发明的银翘提取物或药物组合物 用于制备药物中的应用，其中，所述的药物具有解表、泻下、清热、 凉血、止痢、祛暑、祛痰、补益、解毒、祛湿、冶痈、治风、抗菌、 抗炎、抗病毒和/或增强免疫力的任一种或其组合功效。
72.本发明的优选技术方案中，所述药物选自双黄连粉针剂、双黄连 注射液、银翘散、双黄连口服液、银翘片、维c银翘片、银翘解毒片、 清营汤、新加香薷饮、羚羊感冒胶囊、连花清瘟胶囊、银翘解毒丸、 银翘散及其加减方、金银花连翘汤、银翘马勃散、清热解毒合剂、透 疹凉解汤、清咽利膈汤、银花解毒汤、疏风清热汤、清暑汤、桔梗杏 仁煎、连翘败毒散、八仙聚会丹、拔毒膏、白防活命饮、白虎解毒养 阴汤、百解散、败毒散、败毒汤、薄荷连翘方、薄荷连翘汤、薄荷汤、 遍身生疮药酒、苍耳散、柴胡清肝汤、肠痈汤、抽脓散、除湿解毒汤、 除痔丸、萃象方、大补汤、当归连翘汤、当归饮子、滴虫汤、疔毒复 生汤、二活散、二十四味风流饮、防风必效散、防风当归汤、肺脓疡 汤、附子败毒汤、复方红藤煎、复方消肿通络汤、复元通气散、复正 散、感冒汤1号、攻邪遏流汤、还阴解毒汤、何首乌汤、呼脓长肉比 天膏、呼脓长肉膏、胡麻饮、化毒消肿托里散、化毒饮子、换肌消毒 散、黄疸汤、黄金化毒汤、黄连解毒加味汤、黄连救苦汤、黄耆散阴 汤、回乳方、活命饮、急白汤、加减散肿溃坚汤、加减升葛汤、加减 消毒散、加减竹叶石膏汤、加减追疔夺命汤、加减滋阴清肺汤、加味 清毒化斑汤、加味清热利湿汤、加味清咽利膈汤、加味托里消毒散、 家传西圣膏、煎膏药方丹、解毒防风汤、解毒合白虎汤、解毒济阴汤、 解毒内托散、解毒内消汤、解毒歧良汤、解毒清营汤、解毒天浆散、 解热化毒汤、金贝煎、金钱鼠粘汤、金生丸、金丝万应膏、金银地丁 散、金银五香汤、荆防解毒汤、荆防牛蒡汤、荆防泻白散、荆芥贩毒 散、九味解毒散、九味解毒汤、九味流气饮、开郁顺气解毒汤、抗毒 丸、昆花汤、栝楼牛蒡汤、阑尾炎合剂、阑尾炎汤、连翘败毒膏、连 翘败毒丸、连翘归尾煎、连翘黄耆汤、连翘解毒汤、连翘解毒丸、连 翘金贝煎、连翘橘叶汤、连翘生地黄汤、连翘托里散、连翘野菊散、 凉血省风药酒、瘰疬疏肝丸、内托消毒散、内消沃雪汤、千金内托散、 千金消毒散、清喉消毒散、清阑液、清热解毒汤、清热解毒消肿汤、 清热消毒散、清胃败毒散、清咽利膈散、清咽利膈汤、驱风散、桑青 汤、神授卫生汤、升麻消毒饮、舒肝解毒汤、托毒饮、托里金银地丁 散、托里排脓汤、完善丸、仙遗粮汤、消毒散、消风败毒散、消乳岩 丸、消痈汤、辛凉清解饮、银花解毒汤、银甲汤的任一种。
73.本发明的另一目的在于提供本发明的银翘提取物或药物组合物 用于制备保健品、食品、化妆品、特殊医疗用食品的任一种的应用， 其中，所述的保健品、食品、化妆品、特殊医疗用食品的任一种具有 解表、泻下、清热、凉血、止痢、祛暑、祛痰、补益、解毒、祛湿、 冶痈、治风、抗菌、抗炎、抗病毒和/或增强免疫力的任一种或其组 合功效。
74.本发明所述的“75％乙醇溶液”指体积分数为75％的乙醇水溶液。 其他浓度乙醇亦指的是体积分数。
75.本发明热原、溶血与凝聚、绿原酸含量等检测项目参照“双黄连 粉针剂(冻干)”新药转正标准【ws3—054(z-011)—99(z)】进行检测。
76.除非另有说明，本发明涉及液体与液体之间的百分比时，所述的 百分比为体积/体积百分比；本发明涉及液体与固体之间的百分比时， 所述百分比为体积/重量百分比；本发明涉及固体与液体之间的百分 比时，所述百分比为重量/体积百分比；其余为重量/重量
百分比。
77.与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
78.1、本发明的银翘提取物中的绿原酸含量高，且为松散的粉末状 或干膏经粉碎后呈松散的粉末状，含水量低且不易吸湿，引湿性显著 低于同类产品，易于溶解且复溶所得液体澄清透明，热源检测合格且 质量可控，实验动物无溶血、凝聚现象，满足注射用药更高的质量要 求，尤其适用于注射制剂(如注射液、冻干粉针等)的制备，显著提 高药品质量和疗效，保障了药品的有效性和用药安全性。
79.2、本发明优化了工艺参数和条件，显著提高了绿原酸的含量和 提取率；创造性的采用酸化乙醇提取和氯仿萃取，显著提高了绿原酸 的含量和提取率；采用高纯度乙醇进行醇沉处理，显著提高产品质量， 使其满足注射用药要求，将其拓宽应用于制备药品、保健品、食品、 化妆品、特殊医疗用食品等，保障了制品的有效性和安全性。
80.3、本发明银翘提取物的制备方法具有操作简便、提取收率高、 资源利用率高、成本更优、绿色环保、适用于工业化大生产。
具体实施方式
81.以下将结合实施例具体说明本发明。本发明的实施例仅用于说明 本发明的技术方案，并非限定本发明的实质。
82.实施例1银翘提取物的制备
83.银翘提取物的制备包括下述步骤：
84.1)称取金银花50g、连翘100g，粉碎，过12mm筛，加入药材重 量8倍量的65％乙醇溶液(v/w)，静置浸泡4h，回流提取1.5h，过 滤，收集滤液；滤渣中加入药材重量6倍量的65％乙醇溶液(v/w)， 回流提取1.5h，过滤，收集滤液；合并两次收集滤液，在滤液中加 入4mol/l氢氧化钠溶液调ph6.5，冷至室温，静置10h，过滤，滤液 浓缩回收乙醇至无醇味，得浓缩液一；
85.2)将浓缩液一冷却至室温，过滤，收集滤液；向滤液中缓慢加 入93％乙醇使其含醇量达85％，静置12-24小时，在滤液中加入4mol/l 氢氧化钠溶液调ph7.0，静置2h，过滤；滤液浓缩回收乙醇至无醇味， 得浓缩液二；
86.3)将浓缩液二冷却至室温，过滤，向滤液中加入30ml氯仿萃取， 静置分层，去除氯仿萃取液后，90℃以下烘干，干膏粉碎后，得绿原 酸含量为20.66％的银翘提取物棕色粉末，收率10.67％，含水量3.27％。
87.实施例2银翘提取物的制备
88.银翘提取物的制备包括下述步骤：
89.1)称取金银花50g、连翘100g，粉碎，过12mm筛，加入药材重 量6倍量的70％乙醇溶液(v/w)，静置浸泡5h，回流提取2h，过滤， 收集滤液；滤渣中加入药材重量5倍量的70％乙醇溶液(v/w)，回流 提取1.5h，过滤，收集滤液；合并两次收集滤液，在滤液中加入4mol/l 氢氧化钠溶液调ph7.0，冷至室温，静置12h，过滤，滤液浓缩回收 乙醇至无醇味，得浓缩液一；
90.2)将浓缩液一冷却至室温，过滤，收集滤液；向滤液中缓慢加 入95％乙醇使其含醇量达85％，静置12-24小时，在滤液中加入4mol/l 氢氧化钠溶液调ph7.0，静置2h，过滤；
滤液浓缩回收乙醇至无醇味， 得浓缩液二；
91.3)将浓缩液二冷却至室温，过滤，向滤液中加入30ml氯仿萃取， 静置分层，浓缩，90℃以下烘干，干膏粉碎后，制得绿原酸含量为 22.57％的银翘提取物棕色粉末，收率12.0％，含水量2.84％。
92.实施例3银翘提取物的制备
93.银翘提取物的制备包括下述步骤：
94.1)称取金银花50g、连翘100g，粉碎，过12mm筛，加入药材重 量8倍量的75％乙醇溶液(v/w)，静置浸泡2h，回流提取3h，过滤， 收集滤液；滤渣中加入药材重量5倍量的75％乙醇溶液(v/w)，回流 提取1h，过滤，收集滤液；合并收集滤液，在滤液中加入5mol/l氢 氧化钠溶液调ph7.0，冷至室温，静置6h，过滤，滤液浓缩回收乙醇 至无醇味，得浓缩液一；
95.2)将浓缩液一冷却至室温，过滤，收集滤液；向滤液中缓慢加 入98％乙醇使其含醇量达80％，静置12小时，在滤液中加入5mol/l 氢氧化钠溶液调ph7.0，静置2h，过滤；滤液浓缩回收乙醇至无醇味， 得浓缩液二；
96.3)将浓缩液二冷却至室温，过滤，向滤液中加入43ml氯仿萃取， 静置分层，浓缩，90℃以下烘干，干膏粉碎后，制得绿原酸含量为 21.04％的银翘提取物棕色粉末，收率13.33％，含水量2.43％。
97.实施例4银翘提取物的制备
98.银翘提取物的制备包括下述步骤：
99.1)称取金银花50g、连翘100g，粉碎，过12mm筛，加入药材重 量7倍量的80％乙醇溶液(v/w)，静置浸泡8h，回流提取2h，过滤， 收集滤液；滤渣中加入药材重量5倍量的80％乙醇溶液(v/w)，回流 提取1.5h，过滤，收集滤液；合并收集滤液，在滤液中加入5mol/l 三乙胺调ph7.0，冷至室温，静置10h，过滤，滤液浓缩回收乙醇至 无醇味，得浓缩液一；
100.2)将浓缩液一冷却至室温，过滤，收集滤液；向滤液中缓慢加 入98％乙醇使其含醇量达85％，静置5小时，在滤液中加入5mol/l三 乙胺调ph7.0，静置2h，过滤；滤液浓缩回收乙醇至无醇味，得浓缩 液二；
101.3)将浓缩液二冷却至室温，过滤，向滤液中加入27ml氯仿萃取， 静置分层，浓缩，90℃以下烘干，干膏粉碎后，制得绿原酸含量为 20.76％的银翘提取物棕色粉末，收率12.28％，含水量4.40％。
102.实施例5银翘提取物的制备
103.银翘提取物的制备包括下述步骤：
104.1)称取金银花50g、连翘100g，粉碎，过12mm筛，加入药材重 量6倍量的70％乙醇溶液(v/w)，静置浸泡10h，回流提取2h，过滤， 收集滤液；滤渣中加入药材重量5倍量的70％乙醇溶液(v/w)，回流 提取1.5h，过滤，收集滤液；合并收集滤液，在滤液中加入5mol/l 三乙胺调ph7.0，冷至室温，静置8h，过滤，滤液浓缩回收乙醇至无 醇味，得浓缩液一；
105.2)将浓缩液一冷却至室温，过滤，收集滤液；向滤液中缓慢加 入95％乙醇使其含醇量达85％，静置5小时，在滤液中加入5mol/l三 乙胺调ph7.0，静置2h，过滤；滤液浓缩回收乙醇至无醇味，得浓缩 液二；
106.3)将浓缩液二冷却至室温，过滤，向滤液中加入35ml氯仿萃取， 静置分层，浓缩，90℃以下烘干，干膏粉碎后，制得绿原酸含量为 21.24％的银翘提取物棕色粉末，收率
12.28％，含水量2.87％。
107.实施例6银翘提取物的制备
108.银翘提取物的制备包括下述步骤：
109.1)称取金银花50g、连翘100g，粉碎，过12mm筛，加入药材重 量6倍量的70％乙醇溶液(v/w)(5mol/l醋酸调节ph5)，静置浸泡 10h，回流提取2h，过滤，收集滤液；滤渣中加入药材重量5倍量的 70％乙醇溶液(v/w)(含0.6％冰醋酸，v/v)，回流提取1.5h，过滤， 收集滤液；合并收集滤液，在滤液中加入5mol/l三乙胺调ph7.0， 冷至室温，静置8h，过滤，滤液浓缩回收乙醇至无醇味，得浓缩液 一；
110.2)将浓缩液一冷却至室温，过滤，收集滤液；向滤液中缓慢加 入95％乙醇使其含醇量达85％，静置5小时，在滤液中加入5mol/l三 乙胺调ph7.0，静置2h，过滤；滤液浓缩回收乙醇至无醇味，得浓缩 液二；
111.3)将浓缩液二冷却至室温，过滤，向滤液中加入35ml氯仿萃取， 静置分层，浓缩，90℃以下烘干，干膏粉碎后，制得绿原酸含量为 20.25％的银翘提取物棕色粉末，收率19.38％，含水量2.89％。
112.实施例1-6制备的银翘提取物干膏粉碎后为棕色粉末，自然环境 下放置无吸潮现象，加水复溶后溶液澄清，无不溶物或絮状物，透光 率高。
113.试验例1本发明提取物的热原试验研究
114.参照“双黄连粉针剂(冻干)”新药转正标准 【ws3—054(z-011)—99(z)】检测实施例1-3银翘提取物中的热原， 结果见表1。
115.表1
116.提取物来源家兔1升温值家兔2升温值家兔3升温值实施例10.160.260.21实施例20.070.370.18实施例30.310.250.20
117.试验例2本发明提取物的溶血与凝集试验研究
118.参照“双黄连粉针剂(冻干)”新药转正标准 【ws3—054(z-011)—99(z)】检测实施例1-6制得的银翘提取物中的 溶血与凝聚现象。
119.结果显示：实施例1-6制得的银翘提取物均未出现溶血与凝聚现 象。
120.对比例1(药典方法)
121.金银花50g、连翘100g加水温浸30分钟后，煎煮二次，每次1.5 小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.20～1.25(70～ 80℃)的清膏，冷至40℃时缓缓加入乙醇，使含醇量达75％，充分搅 拌，静置12小时，滤取上清液，残渣加75％乙醇适量，搅匀，静置 12小时，滤过，合并乙醇液，回收乙醇至无醇味，干燥干膏，测绿 原酸含量8.49％，收率10.08％。
122.对比例2(石灰乳硫酸法)
123.金银花100g，连翘200g，粉碎，过12mm筛，将粉碎好的金银花、 连翘用布装好，加入6倍70％乙醇(v/w)，静置浸泡4h，回流提取 1h(沸腾后开始计时)，过滤得滤液；滤渣加5倍体积的70％乙醇回 流提取1h，过滤，滤渣榨干后弃掉；合并两次滤液，加碱液调 ph7.0-7.5，静置1h，过滤，滤液浓缩回收乙醇至无醇味得浓缩液， 浓缩液加入25％石灰乳调ph11，
静置14h过滤，滤液加50％硫酸调ph7， 静置36h，过滤，滤液浓缩至150ml，静置10h，过滤，90℃以下烘 干，得烘干品31g，绿原酸含量4.44％。