药物递送组合物及其用途的制作方法

药物递送组合物及其用途
1.相关申请
2.本技术根据35 u.s.c.119(e)要求美国申请申请日为2019年1月10日，题为“药物递送组合物及其用途(drug delivery compositions and uses thereof)”的临时申请序列号62/791,005的优先权，其全部内容通过引用并入本文。


背景技术：

3.用于受损组织例如皮肤或粘膜的治疗通常包括与伤口敷料和机械或酶促清创组合的治疗剂(例如，抗菌药物)的局部或全身给药。虽然这些治疗通常足以促进小切口和感染的愈合，但是更严重受损的组织(例如慢性伤口、感染的皮肤等)经常不能通过这些方式来充分处理。当前方法的主要挑战是提供一个既不利于微生物生长又能创造促进组织再生和愈合的分子条件的组织微环境。


技术实现要素：

4.本公开的方面涉及可用于治疗受损皮肤的组合物和方法。本公开部分地基于药物递送组合物(系统)，其包括以下各者中的一者或多者：表面活性剂(例如，表面活性剂)、水合剂(例如，吸湿剂)和将组合物的ph维持在约ph 7.5与ph 9.5之间的基于碳酸盐的缓冲剂。不希望受任何特定理论的束缚，当施用于受试对象(例如，人类受试者)的受损组织(例如，皮肤、粘膜组织等)时，本公开所述的组合物通过同时提供以下各项而提供促进组织愈合和再生的微环境：1)分子清创；2)充分水合；和3)抗炎和抗微生物活性(例如，支架外多聚糖结构破坏导致细菌生物膜的去除)。在一些实施方案中，鉴于当前可用的伤口愈合组合物，本发明描述的组合物的性质和/或活性令人惊讶，这些组合物通常具有中性(例如，约ph 7.0)至酸性(例如，约ph 5.0
‑
6.0)范围的ph值。
5.因此，在一些方面，本公开提供了包括药物递送系统的组合物，该药物递送系统包括碳酸盐缓冲液、至少两种不同的生物表面活性剂、至少一种吸湿剂和至少一种抗氧化剂；和至少一种生物活性剂，其中组合物的ph范围为约7.5至约9.5。
6.在一些实施方案中，碳酸盐缓冲溶液包括以下离子中的一种：钠、钾、钙和镁。在一些实施方案中，碳酸盐缓冲液是碳酸氢钠缓冲液。
7.在一些实施方案中，组合物的生物表面活性剂选自糖脂、脂肽和聚合生物表面活性剂。
8.在一些实施方案中，糖脂选自鼠李糖脂、槐糖脂、海藻糖脂、纤维二糖脂(cellobiolipid)、甘露糖赤藓糖醇脂及其任何组合。在一些实施方案中，生物表面活性剂包括至少一种鼠李糖脂和至少一种槐糖脂。
9.在一些实施方案中，脂肽选自表面活性素、大侧柏素(plipastatin)、芽孢菌霉素、丰原素(fengycin)、枯草杆菌蛋白酶、短杆菌肽、多粘菌素类及其任意组合。
10.在一些实施方案中，聚合生物表面活性剂选自乳化剂(emulsan)、生物分散剂(biodispersan)、脂乳化剂(liposan)、甘露聚糖
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脂质
‑
蛋白复合物、碳水化合物
‑
脂质
‑
蛋
白复合物及其任何组合。
11.在一些实施方案中，组合物中生物表面活性剂的总量在约1.5％(w/w)至约10％(w/w)的范围内。在一些实施方案中，组合物中鼠李糖脂与槐糖脂的比率在约1:9(例如，1％(w/w)至99％(w/w))至约9:1(例如，99％(w/w)至约1％(w/w))的范围内。在一些实施方案中，该比率为约50％至50％(例如，1:1)。
12.在一些实施方案中，吸湿剂包括选自乙二醇聚合物、糖胺聚糖和纤维素聚合物的试剂。在一些实施方案中，乙二醇聚合物包括聚乙二醇聚合物，任选地其中聚乙二醇聚合物包括2个聚合物亚单位和约50,000个聚合物亚单位。在一些实施方案中，糖胺聚糖是透明质酸。在一些实施方案中，纤维素聚合物包括羧甲基纤维素或羟乙基纤维素。在一些实施方案中，组合物中吸湿剂的量为约1％(w/w)至约10％(w/w)。
13.在一些实施方案中，组合物的至少一种抗氧化剂是亲脂性抗氧化剂。在一些实施方案中，亲脂性抗氧化剂是丁基化羟基甲苯(bht)、丁基化羟基苯甲醚(bha)、和/或生育酚。在一些实施方案中，生育酚是α
‑
生育酚。
14.在一些实施方案中，组合物包括至少一种生物活性剂。在一些实施方案中，生物活性剂是小分子、蛋白、核酸或生物活性提取物。
15.在一些实施方案中，从一种或多种类型的蜂胶(例如，蜂胶混合物)获得(例如，提取)生物活性提取物。在一些实施方案中，蜂胶(例如，蜂胶混合物)包括绿色蜂胶、褐色蜂胶、红色蜂胶或其组合(例如，绿色和褐色蜂胶，红色、绿色和褐色蜂胶等)。在一些实施方案中，天然生物活性提取物(例如，蜂胶提取物)包括以下中的一种或多种：黄酮、阿替匹林c、三萜系化合物、异黄酮和芳香酸。在一些实施方案中，组合物中绿色蜂胶与褐色蜂胶的比率在约1:9至约9:1的范围内。在一些实施方案中，组合物中蜂胶生物活性提取物的总量在约5％(w/w)至约20％(w/w)的范围内。
16.在一些实施方案中，生物活性天然提取物从一种或多种类型的海藻(例如，海藻混合物)获得(例如，提取)。在一些实施方案中，一种或多种类型的海藻选自浒苔属(enteromorpha)、石莼(ulva)、礁膜属(monostroma)、松藻属(codium)、蕨藻属(caulerpa)、羽藻属(bryopsis)、紫菜属(porphyra)和海带属(laminaria)。在一些实施方案中，生物活性天然提取物(例如，海藻提取物)包括一种或多种硫酸化多糖。在一些实施方案中，一种或多种硫酸化多糖选自角叉菜胶、半乳聚糖、石莼胶聚糖和岩藻依聚糖(fucoidan)。在一些实施方案中，生物活性提取物还包括库拉索芦荟提取物。在一些实施方案中，组合物中海藻生物活性提取物的总量在约5％(w/w)至约20％(w/w)之间。
17.在一些实施方案中，生物活性天然提取物包括一种或多种类胡萝卜素和/或维生素a(或其衍生物)。在一些实施方案中，包括类胡萝卜素的生物活性提取物是从胡萝卜油获得的(例如，提取的)。在一些实施方案中，胡萝卜油生物活性天然提取物包括一种或多种维生素b复合物。在一些实施方案中，一种或多种维生素b复合物是泛酸衍生物或其衍生物或类似物。在一些实施方案中，维生素b复合物包括右泛醇。在一些实施方案中，组合物中胡萝卜油生物活性天然提取物的总量在约1％(w/w)至约5％(w/w)的范围内。
18.在一些实施方案中，组合物还包括一种或多种蛋白(例如，动物蛋白、细胞外基质蛋白等)。在一些实施方案中，所述蛋白包括胶原、白蛋白或其组合。
19.在一些实施方案中，从植物获得(例如，提取)生物活性天然提取物。在一些实施方
案中，生物活性天然提取物得自(例如，提取自)蜜蜂花(melissa officinalis)。在一些实施方案中，蜜蜂花生物活性天然提取物包括一种或多种维生素b复合物。在一些实施方案中，一种或多种维生素b复合物包括甲基钴胺素和/或氰基钴胺素。在一些实施方案中，一种或多种维生素b复合物是泛酸衍生物或其衍生物或类似物，任选地，其中维生素b复合物包括右泛醇。在一些实施方案中，组合物中的蜜蜂花生物活性天然提取物的总量在约1％(w/w)至约5％(w/w)范围内。
20.在一些实施方案中，将本公开所述的组合物配制为固体(例如粉末，如冻干粉末)、液体、凝胶(例如水凝胶)或泡沫。在一些实施方案中，液体是漱口剂。在一些实施方案中，凝胶或泡沫被配制成气雾化喷雾剂或水凝胶。在一些实施方案中，如本公开所述的组合物存在于固体基底上或固体基底中。在一些实施方案中，固体基底包括棉纤维。在一些实施方案中，固体基底是绷带或棉膜。
21.在一些实施方案中，本公开提供包括如本文所述的组合物的固体基底。在一些实施方案中，试剂盒还包括一种或多种弹性绷带。在一些实施方案中，组合物配制为泡沫、凝胶或液体。
22.在一些实施方案中，固体基底包括棉纤维。在一些实施方案中，固体基底是绷带(例如，非粘附性绷带)或面罩(例如，棉膜)。
23.在一些方面，本公开提供试剂盒，其包括如本文所述的组合物；以及，非粘附性伤口敷料。在一些实施方案中，非粘附性伤口敷料包括棉纤维。
24.在一些方面，本公开提供试剂盒，其包括如本文所述的组合物；和有效治疗单纯疱疹病毒的一种或多种抗病毒剂。
25.在一些实施方案中，一种或多种抗病毒剂选自阿昔洛韦、伐昔洛韦和泛昔洛韦。在一些实施方案中，单纯疱疹病毒是单纯性疱疹唇炎(herpes simplex labialis，hsl)。在一些实施方案中，组合物、抗病毒剂或其组合被配制用于局部给药。
26.在一些方面，本公开提供一种用于治疗受试对象(例如人受试对象)中的口腔损伤的方法，该方法包括向具有一个或多个口腔损伤的受试对象施用如本文所述的组合物。
27.在一些实施方案中，受试对象患有或怀疑患有粘膜炎。在一些实施方案中，受试对象先前已经接受过化疗、放疗或化疗和放疗的组合。在一些实施方案中，受试对象已经经历口腔颌面外科手术。
28.在一些实施方案中，将组合物直接施用至受试对象的口腔。在一些实施方案中，通过口服喷雾或漱口剂给药。在一些实施方案中，对受试对象施用组合物每天多于一次(例如，每天2、3、4或更多次)。在一些实施方案中，组合物在餐前、餐后或餐前和餐后施用给受试对象。在一些实施方案中，组合物的给药抑制细菌生物膜形成和/或生长。
29.在一些方面，本公开提供一种方法，该方法包括向有需要的受试对象的皮肤施用如本文所述的组合物。
30.在一些实施方案中，受试对象的皮肤已经经历整形手术。在一些实施方案中，整形手术是激光脱皮。
31.在一些实施方案中，受试对象的皮肤受损。在一些实施方案中，受损的皮肤是伤口(例如，手术切口等)、溃疡或水疱。
32.在一些实施方案中，施用包括使受试对象的皮肤与包括组合物的固体基底接触。
在一些实施方案中，固体基底是非粘附性绷带或棉膜。
33.在一些实施方案中，局部施用组合物。在一些实施方案中，每天进行至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10次给药。在一些实施方案中，每周进行至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10次给药。
34.在一些实施方案中，受试对象患有或怀疑患有糖尿病(例如，i型糖尿病或ii型糖尿病)。在一些实施方案中，受试对象具有由糖尿病引起的慢性伤口或由血流不足引起的受损皮肤，例如静脉曲张或褥疮。在一些实施方案中，受试对象患有或怀疑患有糖尿病性溃疡，例如糖尿病足溃疡。
35.在一些实施方案中，受试对象已经感染单纯疱疹病毒或者怀疑被感染了单纯疱疹病毒。在一些实施方案中，病毒是单纯性疱疹唇炎。
36.在一些方面，本公开提供了在有需要的受试对象中再生外周神经末端的方法，该方法包括向受试对象施用：包括蜜蜂花生物活性提取物的第一组合物；和包括甲基钴胺素和/或氰基钴胺素的第二组合物。
37.在一些实施方案中，第一组合物和第二组合物作为单一组合物施用。在一些实施方案中，局部施用第一和/或第二组合物。
38.在一些实施方案中，受试对象的皮肤受损。在一些实施方案中，受损皮肤是伤口、溃疡或水疱。在一些实施方案中，受试对象已经感染单纯疱疹病毒或者怀疑被感染了单纯疱疹病毒。在一些实施方案中，单纯疱疹病毒是单纯性疱疹唇炎。
附图说明
39.图1显示针对3天龄金黄色葡萄球菌mrsa生物膜的组织修复制剂的效力的代表性数据。评价每日和单次应用。注意，数据以微生物存活者呈现。ex＝赋形剂。
40.图2显示针对3天龄铜绿假单胞菌生物膜的组织修复制剂的效力的代表性数据。评价每日和单次应用。注意，数据以微生物存活者呈现。ex＝赋形剂。
41.图3显示针对3天龄白色念珠菌生物膜的组织修复制剂的效力的代表性数据。评价每日和单次应用。注意，数据以微生物存活者呈现。ex＝赋形剂。
42.图4显示了描绘对于每次处理随机选择的猪背部区域上的伤口部位的示意图。
43.图5a
‑
5h是描绘不同处理和对照的猪皮上的全厚度切除伤口的愈合过程的照片。图5a示出了制剂a的数据。图5b示出了制剂b的数据。图5c示出了制剂c的数据。图5d示出了制剂d的数据。图5e显示了生理盐水对照(sal)的数据。图5f示出了plurogel的数据。图5g示出了medihoney的数据。图5h示出了amerigel的数据。
44.图6示出了伤口愈合组合物处理和生理盐水对照的伤口面积缩小百分比。a，制剂a；b，制剂b；c，制剂c；d，制剂d；pg，plurogel；mh，medihoney；amg；amerigel；sal，生理盐水对照。
具体实施方式
45.慢性伤口不能通过正常的伤口愈合模式进展，而是处于慢性炎症状态，通常是富含蛋白酶和促氧化剂的不利的微环境。这种微环境通常促进生长因子的降解和活性氧物质(ros)的过度产生，导致更多的组织损伤和延迟更久的组织修复。存在于伤口中的微生物也有助于受损的组织修复。
46.本公开涉及用于促进伤口愈合和组织产生的药物递送系统和药物组合物。本公开部分地基于药物递送组合物(系统)，其包括以下各者中的一者或多者：表面活性剂(例如，表面活性剂)、水合剂(例如，吸湿剂)和将组合物的ph维持在约ph 8.0与ph 9.5之间的基于碳酸盐的缓冲剂。在一些实施方案中，组合物还包括一种或多种至少一种生物活性剂。
47.不希望受任何特定理论的束缚，当施用于受试对象的受损组织(例如，皮肤、粘膜组织等)时，本公开所述的组合物通过同时提供以下各项而提供促进组织愈合和再生的微环境：1)分子清创；2)充分水合；和3)抗炎和抗微生物活性。例如，在一些实施方案中，本公开描述的组合物由于支架外聚合多糖结构的破坏而促进细菌生物膜的去除。在一些实施方案中，鉴于当前可用的伤口愈合组合物，本发明描述的组合物的性质和/或活性令人惊讶，这些组合物通常具有中性(例如，约ph 7)至酸性(例如，约ph 5.0
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6.0)范围的ph值。
48.因此，在一些方面，本公开提供了包括药物递送系统的组合物，该药物递送系统包括碳酸盐缓冲液、至少两种不同的生物表面活性剂、至少一种吸湿剂和至少一种抗氧化剂；和至少一种生物活性剂，其中组合物的ph范围为约8.0至约9.5。
49.表面张力调节剂
50.本公开部分地涉及包括一种或多种表面张力调节剂的组合物。在一些实施方案中，表面张力调节剂是表面活性剂。
51.通常，本文所述的组合物可包括一种或多种表面活性剂(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或多于10种表面活性剂)。在一些实施方案中，组合物的每种表面活性剂选自生物表面活性剂、阴离子表面活性剂、两性离子表面活性剂和非离子表面活性剂。在一些实施方案中，本文所述的组合物缺乏(例如，不包括)表面活性剂。
52.在一些实施方案中，至少一种表面活性剂是生物表面活性剂。如本文所用，“生物表面活性剂”是指由降低细胞表面张力(例如，细胞膜如哺乳动物细胞膜的表面张力)的微生物(例如，某些细菌细胞)产生的表面活性生物分子。
53.生物表面活性剂的实例包括但不限于糖脂(例如，鼠李糖脂，槐糖脂，海藻糖脂，纤维二糖脂，甘露糖赤藓糖醇脂等)，脂肽(例如，表面活性素、大侧柏素(plipastatin)、芽孢菌霉素、丰原素(fengycin)、枯草杆菌蛋白酶、短杆菌肽、多粘菌素类等)，聚合生物表面活性剂(例如，乳化剂(emulsan)、生物分散剂(biodispersan)、脂乳化剂(liposan)、甘露聚糖
‑
脂质
‑
蛋白、碳水化合物
‑
脂质
‑
蛋白等)。在一些实施方案中，生物表面活性剂选自糖脂、脂肽和聚合生物表面活性剂。
54.在一些实施方案中，本公开中的生物表面活性剂是选自糖脂的一种或多种生物表面活性剂。糖脂是通过酯基与长链脂肪酸或羟基脂肪酸连接的碳水化合物。糖脂的实例包括但不限于鼠李糖脂、海藻糖脂和槐糖脂。在一些实施方案中，糖脂由铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa)细菌细胞产生。
55.如本文所用，“鼠李糖脂”是指其中一个或两个鼠李糖分子与一个或两个羟基癸酸分子连接的糖脂。在一些实施方案中，鼠李糖脂为3
‑
[3
‑
[(2r,3r,4r,5r,6s)
‑
3,4,5
‑
三羟基
‑6‑
甲基氧杂
‑2‑
基]氧癸酰氧基]癸酸，在本文中也称为“鼠李糖脂ri”。
[0056]
如本文所用，“槐糖脂”是指由酵母产生并且由通过糖苷键连接至长链羟基脂肪酸的二聚碳水化合物槐糖组成的糖脂。槐糖脂可包括至少6至9种不同疏水性槐糖脂的混合物。在一些实施方案中，槐糖脂是槐糖脂的内酯形式。在一些实施方案中，槐糖脂是(e)
‑
17
‑
[(2r,3r,4s,5s,6r)
‑6‑
(乙酰氧基甲基)
‑3‑
[(2s,3r,4s,5s,6r)
‑6‑
(乙酰氧基甲基)
‑
3,4,5
‑
三羟基氧杂
‑2‑
基]氧基
‑
4,5
‑
二羟基氧杂
‑2‑
基]氧十八癸
‑9‑
烯酸。
[0057]
在一些实施方案中，组合物包括表面活性剂的组合，例如鼠李糖脂和槐糖脂(例如，至少一种鼠李糖脂和至少一种槐糖脂)。组合物中表面活性剂(例如，鼠李糖脂和槐糖脂)的相对量(例如，比率)可以变化。在一些实施方案中，鼠李糖脂与槐糖脂的比率在约1:9至约9:1的范围内(例如，1:9与9:1之间的任何比率，例如1:1、2:8、8:2、7:3、3:7、6:4、4:6等)。
[0058]
组合物中生物表面活性剂的比率或量(例如，鼠李糖脂与槐糖脂的比率)可以例如通过相对于总组合物的重量％(w/w)，体积％(v/v)，摩尔浓度等来测量。
[0059]
组合物中生物表面活性剂的总量可以变化。在一些实施方案中，组合物中生物表面活性剂的总量在约0.1％(w/w)至约8％(w/w)的范围内。在一些实施方案中，生物表面活性剂在组合物中的总量为约0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1.0％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％、2.0％、2.1％、2.2％、2.3％、2.4％、2.5％、2.6％、2.7％、2.8％、2.9％、3.0％、3.1％、3.2％、3.3％、3.4％、3.5％、3.6％、3.7％、3.8％、3.9％、4.0％、4.1％、4.2％、4.3％、4.4％、4.5％、4.6％、4.7％、4.8％、4.9％、5.0％、5.1％、5.2％、5.3％、5.4％、5.5％、5.6％、5.7％、5.8％、5.9％、6.0％、6.1％、6.2％、6.3％、6.4％、6.5％、6.6％、6.7％、6.8％、6.9％、7.0％、7.1％、7.2％、7.3％、7.4％、7.5％、7.6％、7.7％、7.8％、7.9％或约8.0％。在一些实施方案中，本文所述的组合物不含生物表面活性剂。
[0060]
在溶液中，取决于浓度和温度，表面活性剂在结构上形成称为'单聚体'的球形胶束。胶束结构随时间变化，塌缩和膨胀形成多聚体。在一些实施方案中，单聚体构造成连续地捕获伤口碎屑，产生清洗动作。当表面活性剂降低创面与清洗液之间的表面张力时，清洗液与创面紧密接触。这促进了松散的，不能存活的组织和微生物颗粒从能存活的创面上分离，其抑制(例如，防止)生物膜形成并且帮助根除较老的、更难以控制的生物膜。在一些实施方案中，表面活性剂破坏并防止在清创后生物膜的重新形成。在一些实施方案中，在本文所述的组合物中存在高张力生物分子(例如鼠李糖脂和槐糖脂生物表面活性剂)促进生化微清创，生化微清创引起细菌生物膜的多糖基质中的有效破坏和由细胞损伤引起的失活和坏死组织的去除。
[0061]
在一些实施方案中，本公开所描述的组合物包括一种或多种阴离子表面活性剂。阴离子表面活性剂的实例包括皂、烷基苯磺酸盐、烷基磺酸盐、烷基磺酸盐、烷基硫酸盐、氟化脂肪酸的盐、硅酮、脂肪醇硫酸盐、聚氧乙烯脂肪醇醚硫酸盐、α
‑
烯烃磺酸盐、聚氧乙烯脂肪醇磷酸盐醚、烷基醇酰胺、烷基磺酸乙酰胺、琥珀酸烷基酯磺酸盐、氨基醇烷基苯磺酸盐、环烷酸盐、烷基酚磺酸盐和聚氧乙烯单月桂酸盐。
[0062]
组合物中阴离子表面活性剂的总量可以变化。在一些实施方案中，组合物中阴离子表面活性剂的总量在约0.1％(w/w)至约8％(w/w)范围内。在一些实施方案中，生物表面活性剂在组合物中的总量为约0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1.0％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％、2.0％、2.1％、2.2％、2.3％、2.4％、2.5％、2.6％、2.7％、2.8％、2.9％、3.0％、3.1％、3.2％、3.3％、3.4％、3.5％、3.6％、3.7％、3.8％、3.9％、4.0％、4.1％、4.2％、4.3％、4.4％、
4.5％、4.6％、4.7％、4.8％、4.9％、5.0％、5.1％、5.2％、5.3％、5.4％、5.5％、5.6％、5.7％、5.8％、5.9％、6.0％、6.1％、6.2％、6.3％、6.4％、6.5％、6.6％、6.7％、6.8％、6.9％、7.0％、7.1％、7.2％、7.3％、7.4％、7.5％、7.6％、7.7％、7.8％、7.9％或约8.0％。在一些实施方案中，本文所述的组合物缺乏(例如，不包括)阴离子表面活性剂。
[0063]
在一些实施方案中，本公开所描述的组合物包括一种或多种非离子表面活性剂。非离子表面活性剂的实例包括聚乙二醇烷基醚(brij)、八甘醇单十二烷基醚、五甘醇单十二烷基醚、聚丙二醇烷基醚、葡糖苷烷基醚、癸基葡糖苷、月桂基葡糖苷、辛基葡糖苷、聚乙二醇辛基苯基醚、聚乙二醇烷基苯基醚、甘油烷基酯、月桂酸甘油酯、聚乙二醇山梨聚糖烷基酯、山梨聚糖烷基酯、椰油酰胺mea、椰油酰胺dea、聚乙二醇和聚丙二醇的嵌段共聚物：泊洛沙姆、乙氧化(牛脂烷基)胺(poea)。
[0064]
组合物中的非离子表面活性剂的总量可以变化。在一些实施方案中，组合物中的非离子表面活性剂的总量在约0.1％(w/w)至约8％(w/w)的范围内。在一些实施方案中，非离子表面活性剂在组合物中的总量为约0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1.0％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％、2.0％、2.1％、2.2％、2.3％、2.4％、2.5％、2.6％、2.7％、2.8％、2.9％、3.0％、3.1％、3.2％、3.3％、3.4％、3.5％、3.6％、3.7％、3.8％、3.9％、4.0％、4.1％、4.2％、4.3％、4.4％、4.5％、4.6％、4.7％、4.8％、4.9％、5.0％、5.1％、5.2％、5.3％、5.4％、5.5％、5.6％、5.7％、5.8％、5.9％、6.0％、6.1％、6.2％、6.3％、6.4％、6.5％、6.6％、6.7％、6.8％、6.9％、7.0％、7.1％、7.2％、7.3％、7.4％、7.5％、7.6％、7.7％、7.8％、7.9％或约8.0％。在一些实施方案中，本文所述的组合物缺乏(例如，不包括)非离子表面活性剂。
[0065]
组合物还可以包括一种或多种两性离子表面活性剂。两性离子表面活性剂的实例包括但不限于合成的两性离子表面活性剂(例如，一种或多种羟基磺基甜菜碱)和/或天然存在的两性离子表面活性剂(例如，一种或多种甜菜碱、磷脂酰胆碱和/或卵磷脂组分)。在一些实施方案中，两性离子表面活性剂是椰油酰胺基丙基甜菜碱。
[0066]
组合物中两性离子表面活性剂的总量可以变化。在一些实施方案中，组合物中两性离子表面活性剂的总量在约0.1％(w/w)至约8％(w/w)范围内。在一些实施方案中，两性离子表面活性剂在组合物中的总量为约0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1.0％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％、2.0％、2.1％、2.2％、2.3％、2.4％、2.5％、2.6％、2.7％、2.8％、2.9％、3.0％、3.1％、3.2％、3.3％、3.4％、3.5％、3.6％、3.7％、3.8％、3.9％、4.0％、4.1％、4.2％、4.3％、4.4％、4.5％、4.6％、4.7％、4.8％、4.9％、5.0％、5.1％、5.2％、5.3％、5.4％、5.5％、5.6％、5.7％、5.8％、5.9％、6.0％、6.1％、6.2％、6.3％、6.4％、6.5％、6.6％、6.7％、6.8％、6.9％、7.0％、7.1％、7.2％、7.3％、7.4％、7.5％、7.6％、7.7％、7.8％、7.9％或约8.0％。在一些实施方案中，本文所述的组合物缺乏(例如，不包括)两性离子表面活性剂。
[0067]
ph/缓冲体系
[0068]
目前使用的护肤组合物通常具有接近人皮肤的天然ph(例如，ph 6.8
‑
7.0)的ph，或者具有比人皮肤的ph(例如，ph 5.0
‑
7.0)稍高的酸性。本公开部分地基于具有大于7的ph(例如，高于中性，更碱性或碱性)的组合物，其提供促进组织愈合和再生的微环境。在一些实施方案中，考虑到与典型的伤口护理产品相比组合物更碱性的ph，由本公开描述的组合
物的愈合和/或再生活性是令人惊讶的。
[0069]
如本公开所描述的组合物的ph范围为约7.5至约10.0。在一些实施方案中，本公开描述的组合物的ph范围为约8.0至约9.5。在一些实施方案中，本公开描述的组合物的ph为约7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0)。测量组合物的ph的方法是已知的，例如通过ph计，基于电极的测量(例如，玻璃电极、参比电极、组合电极等)，比色测量等。典型地，在室温下(例如，在18℃与24℃之间)测量ph。然而，应当认识到，ph可以在其他温度(例如，低于10℃，高于25℃等)下测量。
[0070]
组合物的ph可以通过缓冲体系维持。缓冲体系的实例包括但不限于碳酸盐缓冲体系、磷酸盐缓冲体系、蛋白缓冲体系等。组合物可包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多的缓冲体系。
[0071]
本公开部分地基于包括碳酸盐缓冲体系的组合物。通常，“碳酸根缓冲体系”是指包括弱酸(例如，碳酸)及其共轭碱(例如，碳酸氢根阴离子)的溶液，其缓冲溶液的ph变化。共轭碱(例如，碳酸氢根阴离子)可以由任何碳酸的共轭盐提供，例如碳酸氢钠(nahco)、碳酸氢钾(khco3)、碳酸氢铯(cshco)、碳酸氢镁(mg(hco3)2)、碳酸氢钙(ca(hco3)2)和碳酸氢铵(nh5co3)。在一些实施方案中，碳酸盐缓冲体系包括碳酸氢钠(nahco)。在一些实施方案中，碳酸盐缓冲体系包括碳酸氢铵(nh5co3)。
[0072]
除了ph缓冲之外，某些缓冲体系(例如，基于na和基于nh4的缓冲体系)增加组合物中或当组合物接触受损组织(例如，伤口、水疱、溃疡等)时产生的微环境中的na
+
或nh
4+
离子的浓度。不希望受任何特定理论的束缚，大离子(例如，钠离子)结合哺乳动物细胞表面上的某些分子，例如硫酸肝素(hs)，并且防止病原体进入细胞，例如如rabenstein等人(2002)nat.prod.rep.19:312
‑
331所述。在一些实施方案中，大离子与细胞膜的结合也影响生长因子例如fgf和egf的信号转导，其对于皮肤再生是重要的。
[0073]
在一些实施方案中，本公开描述的组合物在伤口微环境中含有(或提供)足以破坏微生物(例如细菌和病毒)与靶细胞表面上的蛋白聚糖(例如hs等)的结合的量的离子(例如，na
+
或nh
4+
离子)。
[0074]
在一些实施方案中，本公开描述的组合物包括约0.5％(w/w)至约10％(w/w)的碳酸氢盐(例如，碳酸氢钠)。在一些实施方案中，组合物包括约2％至约5％(w/w)的碳酸氢盐(例如，碳酸氢钠)，例如，约2％、2.1％、2.2％、2.3％、2.4％、2.5％、2.6％、2.7％、2.8％、2.9％、3.0％、3.1％、3.2％、3.3％、3.4％、3.5％、3.6％、3.7％、3.8％、3.9％、4.0、4.1％、4.2％、4.3％、4.4％、4.5％、4.6％、4.7％、4.8％、4.9％或5％(w/w)碳酸氢钠。在一些实施方案中，本文所述的组合物缺乏(例如，不包括)碳酸盐缓冲体系。
[0075]
水合剂
[0076]
本公开的组合物可包括一种或多种(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多种)水合剂。“水合剂”或“吸湿剂”通常是指通过吸收或吸附从周围环境吸引和/或保持水分子的一个或多个分子。吸湿剂的实例包括聚合物，例如纤维素聚合物、乙二醇聚合物、糖胺聚糖、粘多糖等。
[0077]
在一些实施方案中，吸湿剂不是潮解剂(例如，从其周围环境吸收足够的水从而形成水溶液的分子)。潮解剂的实例包括盐(例如，氯化钙、氯化镁、氯化锌、氯化铁、光卤石、碳
酸钾、磷酸钾、柠檬酸铁铵、硝酸铵、氢氧化钾和氢氧化钠)。
[0078]
在一些实施方案中，组合物包括一种或多种纤维素聚合物，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多种纤维素聚合物。在一些实施方案中，组合物缺乏(例如，不包括)水合剂。通常，纤维素聚合物包括葡萄糖的两个或更多个重复亚单位(例如，聚合物亚单位)。纤维素聚合物的实例包括甲基纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基纤维素(hpc)、羟丙基甲基纤维素(hpmc)、羟乙基纤维素和羧甲基纤维素(cmc)。在一些实施方案中，至少一种纤维素聚合物为羟乙基纤维素或羧甲基纤维素。
[0079]
组合物中一种或多种纤维素聚合物的量可以变化。在一些实施方案中，组合物包括约0.1％(w/w)至约5％(w/w)的纤维素聚合物。在一些实施方案中，组合物包括约0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1.0％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％、2.0％、2.1％、2.2％、2.3％、2.4％、2.5％、2.6％、2.7％、2.8％、2.9％、3.0％、3.1％、3.2％、3.3％、3.4％、3.5％、3.6％、3.7％、3.8％、3.9％、4.0％、4.1％、4.2％、4.3％、4.4％、4.5％、4.6％、4.7％、4.8％、4.9％或5.0％(w/w)纤维素聚合物。
[0080]
在一些实施方案中，组合物包括一种或多种乙二醇聚合物，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多种乙二醇聚合物。通常乙二醇聚合物包括两个或更多个聚醚如环氧乙烷的重复亚单位(例如，聚合物亚单位)。在一些实施方案中，乙二醇聚合物是聚乙二醇(peg，也称为peg和poe)。乙二醇聚合物的另外的实例包括甲氧基聚(乙二醇)和聚丙二醇(ppg)。在一些实施方案中，至少一种乙二醇聚合物是peg。
[0081]
乙二醇聚合物(例如，peg)中的聚合物亚单位的数目可以变化。在一些实施方案中，乙二醇聚合物(例如，peg)包括约2至10,000,000个聚合物亚单位(例如，2至10,000,000之间的任何整数，包括2和10,000,000在内)。在一些实施方案中，乙二醇聚合物(例如，peg)包括超过10,000,000个聚合物亚单位。
[0082]
在一些实施方案中，乙二醇聚合物，例如peg聚合物，通过其分子量(例如，以g/mol计)描述。在一些实施方案中，乙二醇聚合物是peg 400(例如，平均分子量为400道尔顿的peg聚合物)、peg 500(例如，平均分子量为500道尔顿的peg聚合物)、peg 1000(例如，具有1000道尔顿的平均分子量的peg聚合物)、peg 3500(例如，具有3500道尔顿的平均分子量的peg聚合物)、peg 4000(例如，具有4000道尔顿的平均分子量为peg聚合物)、peg 10,000(例如，具有10,000道尔顿的平均分子量的peg聚合物)、peg 50,000(例如，具有50,000道尔顿的平均分子量的peg聚合物)、peg 100,000(例如，具有100,000道尔顿的平均分子量的peg聚合物)、或peg 1,000,000(例如，具有1,000,000道尔顿的平均分子量的peg聚合物)。
[0083]
诸如peg的乙二醇聚合物的几何结构(例如，结构)可以变化。在一些实施方案中，乙二醇聚合物是线性聚合物(例如，线性peg)。在一些实施方案中，乙二醇聚合物是支化聚合物(例如，未支化的peg，例如“星形peg”)。在一些实施方案中，乙二醇聚合物是梳形peg(例如，未接枝到聚合物骨架上的多个peg链)。
[0084]
组合物中一种或多种乙二醇聚合物(例如，peg)的量可以变化。在一些实施方案中，组合物包括约0.1％(w/w)至约15％(w/w)的乙二醇聚合物。在一些实施方案中，组合物包括约0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1.0％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％、2.0％、2.1％、2.2％、2.3％、
2.4％、2.5％、2.6％、2.7％、2.8％、2.9％、3.0％、3.1％、3.2％、3.3％、3.4％、3.5％、3.6％、3.7％、3.8％、3.9％、4.0％、4.1％、4.2％、4.3％、4.4％、4.5％、4.6％、4.7％、4.8％、4.9％或5.0％(w/w)乙二醇聚合物。在一些实施方案中，组合物包括约10％、11％、12％、13％、14％或15％(w/w)的乙二醇聚合物。在一些实施方案中，组合物包括不超过15％
‑
20％(w/w)(例如，不超过15％、16％、17％、18％、19％或20％(w/w))的乙二醇聚合物。
[0085]
在一些实施方案中，组合物包括一种或多种糖胺聚糖，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多种糖胺聚糖。通常，糖胺聚糖是长的无支链多糖，其包括两个或更多个重复二糖亚单位(例如，多聚体亚单位)，例如氨基糖和糖醛酸糖(例如，葡糖醛酸、艾杜糖醛酸)或半乳糖。糖胺聚糖的实例包括肝素(hep)/硫酸肝素盐(hs)，硫酸软骨素(cs)/硫酸皮肤素(ds)和透明质酸(ha)等。在一些实施方案中，至少一种糖胺聚糖是透明质酸(ha)。
[0086]
聚合物亚单位的数目，以及因此透明质酸(ha)的分子量(例如，重均分子量)可以变化。在一些实施方案中，透明质酸(ha)包括约5,000至20,000,000道尔顿的分子量。在一些实施方案中，ha中二糖聚合物亚单位的数目在约2个聚合物亚单位至约50,000个聚合物亚单位的范围内(例如，2和50,000在内的任何整数,包括2和50,000在内)。
[0087]
组合物中一种或多种糖胺聚糖的量可以变化。在一些实施方案中，组合物包括约0.1％(w/w)至约5％(w/w)糖胺聚糖。在一些实施方案中，组合物包括约0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1.0％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％、2.0％、2.1％、2.2％、2.3％、2.4％、2.5％、2.6％、2.7％、2.8％、2.9％、3.0％、3.1％、3.2％、3.3％、3.4％、3.5％、3.6％、3.7％、3.8％、3.9％、4.0％、4.1％、4.2％、4.3％、4.4％、4.5％、4.6％、4.7％、4.8％、4.9％或5.0％(w/w)糖胺聚糖。
[0088]
在一些实施方案中，本公开描述的药物递送组合物包括水。组合物中水的量可以变化。在一些实施方案中，组合物包括至少1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或99％(w/w)的水。
[0089]
生物活性剂
[0090]
本公开描述的组合物可包括一种或多种生物活性剂。生物活性剂的实例包括抗微生物剂(例如抗菌剂、抗病毒剂、抗寄生虫剂等)、细胞毒性剂、抗癌剂、自由基清除剂、抗氧化剂、受体配体(例如，诱导或抑制细胞信号传导的分子等)。生物活性剂可以是小分子(例如，化学分子)、肽、蛋白、多肽、核酸(例如，dna、rna等)或生物活性提取物。在一些实施方案中，组合物包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20种生物活性剂。在一些实施方案中，组合物包括超过20种生物活性剂。
[0091]
在一些实施方案中，生物活性剂是抗微生物剂，例如抗菌剂、抗病毒剂或抗寄生虫剂。通常，抗微生物剂可以是小分子(例如，化学分子)、肽、蛋白、多肽、核酸(例如，dna、rna等)。抗微生物剂的实例包括但不限于衍生自细菌和真菌的小分子(例如，阿莫西林、强力霉素、头孢氨苄、环丙沙星、甲硝唑等)、衍生自植物的小分子(例如，单宁、黄酮、酚类、生物碱等)、抗微生物肽(例如，maxamin、皮西丁蛋白(dermicidin)、果蝇抗菌肽(mecropin)、安卓等)。在一些实施方案中，生物活性剂是植物衍生的抗微生物剂，例如黄芩苷(例如，从黄芩(scutellaria baicalensis)或侧花黄芩(scutellaria lateriflora)中提取的)或穿心莲内酯(例如，从穿心莲(andrographispaniculata)中提取的)。在一些实施方案中，如本文所
述的组合物缺乏化学或元素抗微生物剂，例如银(例如，银基化合物，诸如磺胺嘧啶银)或锌(例如，锌基化合物，诸如氧化锌)。
[0092]
在一些实施方案中，生物活性剂是细胞毒性剂。细胞毒性剂的实例包括但不限于烷基化剂(例如，环磷酰胺、亚硝基脲等)、蒽环类抗生素(例如，多柔比星、柔红霉素等)、紫杉烷(例如，他克唑、紫杉醇等)、hd ac抑制剂、核苷酸类似物(例如，吉西他滨等)、基于铂的化合物(例如，顺铂等)以及长春花生物碱类(例如，长春碱等)。
[0093]
在一些实施方案中，生物活性剂是抗氧化剂或自由基清除剂。抗氧化剂和自由基清除剂的实例包括但不限于某些酶(例如超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、葡萄糖氧化酶
‑
过氧化氢酶等)、类胡萝卜素(例如，虾青素、β
‑
胡萝卜素、生育酚等)、酚类化合物(例如，植物衍生的多酚)，例如花青素、黄烷
‑3‑
醇(儿茶酚)、黄酮醇(例如，槲皮素和芦丁)、肉桂酸酯(例如，s
‑
谷胱甘酰单咖啡酰酒石酸、咖啡酸苯乙酯(cape)、查尔酮(chaicones)，异黄酮(isoflavonoid)、7
‑
o
‑
甲基
‑
驴食草酚(7
‑
o
‑
methylvestitol)、美迪紫檀素和3,4,2',3'
‑
四氢查尔酮(3,4,2',3'
‑
tetrahydrochalcone))等。
[0094]
在一些实施方案中，生物活性剂是细胞信号转导分子，例如受体配体。细胞信号转导分子的实例包括但不限于神经递质(例如gaba、谷氨酸盐、乙酰胆碱、5
‑
羟色胺、多巴胺等)、细胞因子(例如il
‑
4、il
‑
15、tnfα、ifnγ等)、激素(例如雌激素、雌激素等)、小分子(例如一氧化氮等)、某些肽(例如神经肽、生长因子等)等。
[0095]
如本文所用，“生物活性提取物”是指包含一种或多种已经从有机来源提取(例如分离)的生物活性剂的组合物，所述有机来源例如一种或多种植物或植物产品、动物或动物产品、昆虫或昆虫产品、微生物或微生物产品等。通常，生物活性提取物可以通过任何合适的方法产生，例如基于溶剂的提取方法(例如醇提取、烃提取等)、浸渍提取方法、超声提取(例如超声处理)、微波辅助提取(mae)等。然而，本领域技术人员将理解，合适的提取方法将取决于寻求分离生物活性剂的材料的类型，并将相应地选择提取方法。
[0096]
组合物中生物活性剂或提取物的量可以变化。在一些实施方案中，组合物中生物活性剂或生物活性提取物的浓度为组合物的总重量的约0％w/w(不存在)至约20％w/w(例如，约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或20％)。重量。
[0097]
蜂胶生物活性提取物
[0098]
在一些实施方案中，组合物包括从蜂胶获得的生物活性提取物。“蜂胶”通常是指由蜜蜂(例如蜜蜂属(apis)和其他物种)产生的树脂材料，其包括多种化学品和分子，包括蜡、脂肪酸、花粉、芳香油和某些生物活性分子(例如黄酮、异黄酮、查尔酮、紫檀素类等)。蜂胶可以在世界各地找到，包括北美和中美洲(例如，美国、加拿大、墨西哥、古巴等)、南美洲(例如，巴西、哥伦比亚、智利等)、亚洲(例如，中国)和新西兰。在一些实施方案中，蜂胶生物活性提取物获自包括至少一种巴西蜂胶品种的共混物(例如，混合物)。蜂胶生物活性提取物可以通过任何合适的提取方法生产，例如乙醇/乙二醇提取或超临界co2提取。
[0099]
蜂胶源的特征可以变化。例如，最初根据地理来源和/或物理化学性质对巴西蜂胶进行分类，并且鉴定出至少12个蜂胶来源，包括但不限于在南巴西组中的5个(第3组)，在东南巴西组中的1个(第12组)，以及在东北巴西组中的6个(第6组)。然而，当根据植物来源分类时，对于相同的蜂胶品种，鉴定了三种来源的巴西蜂胶：杨树(例如，杨属，populus sp.)，
酒神菊(例如，酒神菊属，baccharis sp.，如baccharis dracunculifolia等)，和山香(例如，山香属，hyptis sp.，如hyptis divaricata’)。另外的蜂胶源是已知的，例如由park等人，(2002)《农业食品化学杂志》(j agric food chem)50:2502
‑
2506和dezmirean等人，(2017)《养蜂研究杂志》(j.apicultural res)56(5):588
‑
597描述的。在一些实施方案中，蜂胶以其颜色为特征，例如红色蜂胶、绿色蜂胶、褐色蜂胶等。
[0100]“红蜂胶”是指植物来源的蜂胶，如黄檀属(dalbergia ecastophyllum，d.ecastophyllum)(l)taub.(豆科)，在巴西被普遍称为'rabo
‑
de
‑
bugio'。在一些实施方案中，红色蜂胶从选自巴西、古巴、墨西哥、中国和尼日利亚的区域获得。例如，在corbellini rufatto等人(2017)《亚太热带生物医学杂志》(asian pacific journal of tropical biomedicine)kty.591
‑
598描述了红蜂胶的来源。
[0101]“绿色蜂胶”是指在植物来源的蜂胶，例如baccharis dracunculifolia dc(菊科)，例如如lopes machado等人，(2012)《循证补充与替代医学》(evid based complement alternat med.)2012:157652所述。在一些实施方案中，绿色蜂胶获自巴西(例如，巴巴西东南部，例如巴伊亚州、米纳斯吉拉斯州、圣保罗州或巴拉那州)。
[0102]“褐色蜂胶”是指植物来源的蜂胶，例如杨属物种(p.alba，p.nigra，p.tremula)或clusia物种。在一些实施方案中，褐色蜂胶从选自巴西、委内瑞拉、古巴和欧洲的区域获得。
[0103]
在生产蜂胶生物活性提取物的混合物中每种类型的蜂胶的比例可以变化。例如，在一些实施方案中，蜂胶混合物包括比例范围为约9:1至约1:9的绿色和褐色蜂胶(例如，1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、2:1、2:3、2:4、2:5、2:6、2:7、2:8、2:9、3:1、3:2、3:4、3:5、3:6、3:7、3:8、3:9、4:1、4:2、4:3、4:5、4:6、4:7、4:8、4:9、5:1、5:2、5:3、5:4、5:6、5:7、5:8、5:9、6:1、6:2、6:3、6:4、6:5、6:7、6:8、6:9、7:1、7:2、7:3、7:4、7:5、7:6、7:8、7:9、8:1、8:2、8:3、8:4、8:5、8:6、8:7、8:9、9:8、9:7、9:6、9:5、9:4、9:3、9:2、9:1等)。在一些实施方案中，蜂胶混合物包括比例范围为约9:1至约1:9的绿色和红色蜂胶(例如，1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、2:1、2:3、2:4、2:5、2:6、2:7、2:8、2:9、3:1、3:2、3:4、3:5、3:6、3:7、3:8、3:9、4:1、4:2、4:3、4:5、4:6、4:7、4:8、4:9、5:1、5:2、5:3、5:4、5:6、5:7、5:8、5:9、6:1、6:2、6:3、6:4、6:5、6:7、6:8、6:9、7:1、7:2、7:3、7:4、7:5、7:6、7:8、7:9、8:1、8:2、8:3、8:4、8:5、8:6、8:7、8:9、9:8、9:7、9:6、9:5、9:4、9:3、9:2、9:1等)。在一些实施方案中，蜂胶混合物包括比例范围为约9:1至约1:9的褐色和红色蜂胶(例如，1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、2:1、2:3、2:4、2:5、2:6、2:7、2:8、2:9、3:1、3:2、3:4、3:5、3:6、3:7、3:8、3:9、4:1、4:2、4:3、4:5、4:6、4:7、4:8、4:9、5:1、5:2、5:3、5:4、5:6、5:7、5:8、5:9、6:1、6:2、6:3、6:4、6:5、6:7、6:8、6:9、7:1、7:2、7:3、7:4、7:5、7:6、7:8、7:9、8:1、8:2、8:3、8:4、8:5、8:6、8:7、8:9、9:8、9:7、9:6、9:5、9:4、9:3、9:2、9:1等)。在一些实施方案中，蜂胶混合物包括比例范围为约9:1:1至约1:9:1至约1:1:9(例如，1:1:1、1:2:1、2:1:1、1:1:2等)的绿色、褐色和红色蜂胶。
[0104]
本公开的组合物中蜂胶生物活性提取物的量可以变化。在一些实施方案中，本文所述的组合物(例如，药物递送组合物)包括约0.1％w/w至约20％w/w的蜂胶生物活性提取物。在一些实施方案中，组合物包括约0.1％w/w至约4％w/w的蜂胶生物活性提取物。在一些实施方案中，组合物包括约1％至约5％w/w的蜂胶生物活性提取物。在一些实施方案中，组合物包括约3％至约7％w/w的蜂胶生物活性提取物。在一些实施方案中，组合物包括约5％
至约20％w/w的蜂胶生物活性提取物。
[0105]
从蜂胶获得的提取物(例如，一种或多种蜂胶类型，例如褐色蜂胶、绿色蜂胶、红色蜂胶的共混物，或其任何组合)可以包括多种生物活性剂。在一些实施方案中，从蜂胶获得的生物活性提取物包括以下中的至少一种：脂肪酸和酚酸及其酯、取代的酚酯、黄酮(例如，黄酮、黄烷酮、黄酮醇、二氢黄酮醇、查尔酮等)、单萜、倍半萜、二萜、和三萜、类固醇、芳族醛和醇、萘和茋类化合物、咖啡酰奎宁酸衍生物、木脂素、香豆素、异戊二烯化和香豆素衍生物。从蜂胶获得的生物活性分子是本领域已知的，例如由schindler machado等人，(2016)《循证补充与替代医学》(evid based complement alternat med.)2016:6057650和trusheva等人，(2006)《循证补充与替代医学》(evid based complement alternat med.)3(2):249
‑
254和huang等人，(2014)《分子》(molecules)19:19610
‑
19632描述的。
[0106]
本公开部分地基于蜂胶生物活性提取物，其包括一种或多种(例如1、2、3、4、5、6等)抗氧化剂。在一些实施方案中，一种或多种抗氧化剂是黄酮(例如，异黄酮等)。在一些实施方案中，蜂胶生物活性提取物中的黄酮生物活性物促进由经受辐射的细胞元件的dna损伤产生的活性氧物质(ros)的隔离，引起口腔粘膜细胞外基质降解的减少。在一些实施方案中，存在于蜂胶生物活性提取物中的黄酮的浓度范围按重量分析测量，为约100μg/ml至约500μg/ml(例如，约100μg/ml、约150μg/ml、约200μg/ml、约250μg/ml、约300μg/ml、约350μg/ml、约400μg/ml、约450μg/ml等)。在一些实施方案中，存在于蜂胶生物活性提取物中的黄酮的浓度范围按重量分析测量为约100μg/ml至约200μg/ml。在一些实施方案中，存在于蜂胶生物活性提取物中的黄酮的浓度范围按重量分析测量为约150μg/ml至约300μg/ml。在一些实施方案中，存在于蜂胶生物活性提取物中的黄酮的浓度范围按重量分析测量为约250μg/ml至约400μg/ml。
[0107]
在一些实施方案中，蜂胶生物活性提取物包括一种或多种脂质、一种或多种蜡、或一种或多种脂质和一种或多种蜡的组合。在一些实施方案中，蜂胶生物活性提取物的总脂质和蜡浓度范围按重量分析测量为约25μg/ml至约750μg/ml(例如，约25μg/ml、50μg/ml、75μg/ml、100μg/ml、150μg/ml、200μg/ml、300μg/ml、350μg/ml、500μg/ml、650μg/ml等)。在一些实施方案中，蜂胶生物活性提取物的总脂质和蜡浓度范围按重量分析测量为约25μg/ml至约100μg/ml。在一些实施方案中，蜂胶生物活性提取物的总脂质和蜡浓度范围按重量分析测量为约75μg/ml至约250μg/ml。在一些实施方案中，蜂胶生物活性提取物的总脂质和蜡浓度范围按重量分析测量为约300μg/ml至约550μg/ml。
[0108]
海藻生物活性提取物
[0109]
在一些实施方案中，组合物包括得自海藻的生物活性提取物。在一些实施方案中，生物活性提取物是通过干燥和磨碎海藻产生的粉末。例如由costa等人(2010)《生物医学和药理学》(biomedicine and pharmacology)64:21
‑
28描述的生产海藻提取物(例如，粉未)的方法是已知的。
[0110]
海藻一般分为四科：红藻科(rhodonphyceae，红藻)、褐藻科(phaeophyceae，褐藻)、蓝绿藻科(cyanophaeceae，蓝绿藻)和绿藻科(chlorophyceae，绿藻)。例如通过藻库(algaebase)(guiry,m.d.&guiry,g.m.2018.algaebase.全球电子出版物，爱尔兰国立大学，戈尔韦；www.algaebase.org)，描述了海藻的鉴定和分类。
[0111]
在一些实施方案中，海藻生物活性提取物包括一种或多种类型的红藻。红藻的实
例包括但不限于红藻属(rhodophyta)物种(例如禾红藻(rhodophyta graciliara caudata等)、紫菜属(porphyra)物种(例如坛紫菜(porphyra haitanensis)等)、翼枝菜属(pterocladiella)物种(pterocladiella capillacea等)、osmundaria物种(例如osmundaria obtusiloba等)、石花菜属(gelidium)物种(例如gelidium cartilagenium等)、浪花藻属(chondrococcus)物种(例如chondrococcus hornemannii等)以及沙菜属(hypnea)物种(例如hypnea musciformi等)。在一些实施方案中，海藻生物活性提取物包括坛紫菜(porphyra haitanensis)。
[0112]
在一些实施方案中，海藻生物活性提取物包括一种或多种类型的褐藻。褐藻的实例包括但不限于海带属(laminaria)物种(例如海带属(laminariajaponica)等)、马尾藻属(sargassum)物种(例如围氏马尾藻(sargassum wightii)、悬疣马尾藻(sargassumfilipendula)等)、褐舌藻属(spatoglossum)物种(spatoglossum schroderi等)、扇藻属(padina)物种(padina tetrastromatica等)、网地藻动物(dictyota cervicornis、dictyota menstrualis、dictyota myrtensii等)、网翼藻属(dictyopteris)物种(dictyopteris delicatula等)。在一些实施方案中，海藻生物活性提取物包括海带(laminariajaponica)。
[0113]
在一些实施方案中，海藻生物活性提取物包括一种或多种类型的绿藻。绿藻的实例包括但不限于石莼属物种(例如石莼(ulva latuca)、ulva arasakii、ulva armoricana、ulva clathrata、ulva conglobate、ulvafasciata、ulva pertusa、ulva reticulate、ulva rigida、ulva rotundata等)、浒苔属(enteromorpha)物种(例如缘管浒苔(enteromorpha linza)、enteromorpha clathrata、enteromorpha compressa、enteromorpha intestinalis、enteromorphaprolifera等)、礁膜属(monostroma)物种(例如monostroma latissimum、monostroma nitidum、monostroma angicava等)、松藻属(codium)物种(例如，)、蕨藻属(caulerpa)物种(例如caulerpa brachyous、caulerpa cupressoides、caulerpa lentillifera、caulerpaprolifera、caulerpa racemosa、caulerpa sertularioides等)、羽藻属(bryopsis)物种(例如bryopsisplumose等)、elalimeda物种(例如elalimeda monile等)、盒管藻属(capsosiphon)物种(例如黄褐盒管藻(capsosiphon fulvescens)等)和硬毛藻属(chaetomorpha)物种(例如chaetomorpha antennenina等)。在一些实施方案中，海藻生物活性提取物包括石莼(ulva latuca)。在一些实施方案中，海藻生物活性提取物包括缘管浒苔(enteromorpha linza)。在一些实施方案中，海藻生物活性提取物包括石莼(ulva latuca)和缘管浒苔(enteromorpha linza)。
[0114]
在一些实施方案中，海藻生物活性提取物包括一种或多种类型的蓝绿藻。蓝绿藻的实例包括但不限于微囊藻(microcystis)物种(例如铜绿微囊藻(microcystis aeruginosa)等)、念珠藻属(nostoc)物种(例如林氏念珠藻(nostoc linckia)、海绵状念珠藻(nostoc spongiaeform)等)、林氏藻属(lyngbya)物种(例如大鞘丝藻(lyngbya majuscule)、lyngbya bouillonii、lyngbya sordida)、束藻属(symploca)物种、眉藻属(calothrix)物种等。
[0115]
生物活性提取物可以包含海藻物种的组合，例如至少一种绿藻物种(例如，2、3、4、5种或更多种绿藻物种)、至少一种红藻物种(例如，2、3、4、5或更多种红藻物种)和/或至少一种褐藻物种(例如，2、3、4、5或更多种褐藻物种)。例如，海藻生物活性提取物可以包括以
下物种：缘管浒苔(enteromorpha linza)、石莼(ulva lactula)、坛紫菜(porphyra haitanensis)和海带(laminaria japonica)。在一些实施方案中，海藻提取物不包括(例如，缺乏一种或多种类型的海藻物种，例如红藻、绿藻、褐藻和蓝绿藻)。在一些实施方案中，海藻提取物缺乏蓝绿藻。
[0116]
产生海藻生物活性提取物的混合物中每种类型海藻物种的比例可以变化。例如，在一些实施方案中，混合物包括比率在约5:1至约1:5范围内(例如1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、2:1、2:3、2:4、2:5、3:1、3:2、3:4、3:5、4:1、4:2、4:3、4:5、5:1、5:2、5:3、5:4等)的绿藻和褐藻。在一些实施方案中，混合物包括比率在约5:1至约1:5范围内(例如1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、2:1、2:3、2:4、2:5、3:1、3:2、3:4、3:5、4:1、4:2、4:3、4:5、5:1、5:2、5:3、5:4等)的绿藻和红藻。在一些实施方案中，混合物包括比率在约5:1至约1:5范围内(例如1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、2:1、2:3、2:4、2:5、3:1、3:2、3:4、3:5、4:1、4:2、4:3、4:5、5:1、5:2、5:3、5:4等)的褐藻和红藻。在一些实施方案中，蜂胶混合物包括比例范围为约5:1:1至约1:5:1至约1:1:5(例如，1:1:1、1:2:1、2:1:1、1:1:2等)的绿藻、褐藻和红藻。
[0117]
本公开的组合物中海藻生物活性提取物的量可以变化。在一些实施方案中，本文所述的组合物(例如，药物递送组合物)包括约0.1％w/w至约20％w/w的海藻生物活性提取物。海藻提取物的量可以表示为组合物中每种海藻物种提取物的重量百分比，或者表示为组合物中海藻生物活性提取物的总量。例如，组合物可以包括20％w/w的总海藻生物活性提取物，其中四种不同类型的海藻物种提取物贡献5％w/w。
[0118]
在一些实施方案中，组合物包括约0.1％w/w至约5％w/w的海藻生物活性提取物。在一些实施方案中，组合物包括约1％，约2％，约3％，约4％或约5％w/w的海藻生物活性提取物。在一些实施方案中，组合物包括约3％至约7％w/w的海藻生物活性提取物。在一些实施方案中，组合物包括约5％至约20％w/w的海藻生物活性提取物。
[0119]
从海藻获得的提取物(例如，一种或多种海藻物种，例如两种、三种、四种或更多种海藻物种的共混物)可以包括多种生物活性剂。在一些实施方案中，海藻生物活性提取物包括以下的一种或多种：硫酸化多糖、海藻多酚(phlorotannins)、花黄素(例如褐藻黄素、虾青素等)，间苯三酚，多酚，类胡萝卜素和倍半萜。
[0120]
本公开部分地基于包括硫酸化多糖的海藻生物活性提取物(例如，非动物硫酸化多糖)。硫酸化多糖是阴离子碳水化合物聚合物，其通常基于从中获得它们的海藻的类(例如，褐藻、绿藻、红藻)别进行分类。典型地，褐色海藻(例如，褐藻科)产生岩藻多糖硫酸酯或岩藻依聚糖(fucoidan)，其可以包括岩藻糖、木糖、尿酸和/或半乳糖糖。红色海藻(例如，红藻科)通常产生半乳聚糖和角叉菜胶，其可以包括硫酸化半乳糖和3,6
‑
脱水半乳糖。绿色海藻产生石莼胶聚糖，其包括与葡糖醛酸，艾杜糖醛酸或木糖连接的硫酸化鼠李糖。海藻硫酸化多糖的分类是已知的，例如pater(2012)3 biotech 2(3):171
‑
185描述的。
[0121]
硫酸化多糖的生物活性特征可能不同。在一些实施方案中，海藻生物活性提取物包括一种或多种具有抗氧化活性的硫酸化多糖。抗氧化剂硫酸化多糖的实例包括但不限于从codia，石莼(ulva)和浒苔属(enteromorpha)提取的石莼胶聚糖，从蕨藻属(caulerpa)提取的半乳聚糖，从海带(laminaria japonicum)提取的岩藻多糖和岩藻依聚糖(fucoidan)，以及来自坛紫菜(porphyra haitanensis)的半乳聚糖和角叉菜胶。在一些实施方案中，海藻生物活性提取物包括一种或多种具有选自抗凝活性、免疫调节活性、抗肿瘤活性、抗病毒
活性和抗伤害感受活性的生物活性的硫酸化多糖。海藻硫酸化多糖的提取和功能特征化的方法是已知的，例如costa等人，(2010)《生物医学和药物治疗》biomedicine and pharmacotherapy 64:21
‑
28；zhang等人，(2010)《碳水化合物的聚合物》(carbohydrate polymers)(2010)82:118
‑
121；和wang等人，(2014)《海洋药物》(mar.drugs)12:4984
‑
5020描述的，其各自的全部内容通过引用并入本文。
[0122]
在一些实施方案中，海藻生物活性提取物包括一种或多种硫酸化多糖，其选自石莼胶聚糖、角叉菜胶和岩藻多糖，或前述的组合。在一些实施方案中，生物活性提取物包括一种或多种石莼胶聚糖，例如从石莼(ulva latuca)和/或缘管浒苔(enteromorpha linza)获得的石莼胶聚糖。在一些实施方案中，生物活性提取物包括一种或多种半乳聚糖和/或一种或多种角叉菜胶，例如从坛紫菜(porphyra haitanensis)获得的半乳聚糖和/或角叉菜胶。在一些实施方案中，生物活性提取物包括一种或多种岩藻多糖和/或岩藻依聚糖(fucoidan)，例如从海带(laminaria japonicum)获得的一种或多种岩藻多糖和/或岩藻依聚糖(fucoidan)。
[0123]
胡萝卜的生物活性提取物
[0124]
在一些实施方案中，本公开涉及生物活性提取物，其包括可用于促进组织再生的分子的组合(例如，组织再生生物活性提取物)。在一些实施方案中，组织再生生物活性提取物包括从胡萝卜获得的一种或多种生物活性分子(例如，类胡萝卜素等)、一种或多种维生素a衍生物、一种或多种支架分子、或前述任一种的组合。
[0125]
在一些实施方案中，一种或多种生物活性剂从胡萝卜(例如胡萝卜属(dacus carota)，或其栽培品种或变体)获得(例如提取)。通常，胡萝卜包括多种生物活性分子，例如类胡萝卜素和酚类化合物。可从胡萝卜中提取的类胡萝卜素的实例包括但不限于α
‑
胡萝卜素和β
‑
胡萝卜素。可从胡萝卜中提取的酚类化合物的实例包括绿原酸，羟基肉桂酸衍生物，阿魏酸，二咖啡酰奎宁酸和花青素。在一些实施方案中，一种或多种生物活性分子以“胡萝卜油”的形式从胡萝卜中提取，其通常通过基于溶剂或基于压力的提取方法产生，例如来自胡萝卜种子和/或主根的冷榨脂质和生物分子；从胡萝卜种子和/或主根中提取化合物的中性油(例如，矿物油；从胡萝卜种子和/或主根中基于醇提取生物分子；例如美国专利7,141,083号，美国公开2008
‑
0233238号和日本专利jph0676591号也描述了超临界二氧化碳提取方法等，提取生物活性分子的方法。
[0126]
在一些实施方案中，组织再生生物活性提取物包括一种或多种维生素b复合物(例如，维生素b复合物的一种或多种成员)。b族维生素复合物通常是指包括除维生素c之外的所有必需的水溶性维生素的复合物。在一些实施方案中，b族维生素复合物包含硫胺素(维生素b1)、核黄素(维生素b2)、烟酸(维生素b3)、泛酸(维生素b5)、吡哆醇(维生素b6)、生物素、叶酸和钴胺素(维生素b12)。在一些实施方案中，组织再生生物活性提取物包括泛酸或其衍生物、类似物或盐。泛酸衍生物和类似物的实例包括泛醇和右泛醇。在一些实施方案中，一种或多种维生素b复合物是泛酸衍生物或其衍生物或类似物。在一些实施方案中，维生素b复合物包括右泛醇。
[0127]
组合物中衍生自胡萝卜的生物活性提取物的总量可以变化。在一些实施方案中，从胡萝卜获得的生物活性提取物(例如，胡萝卜油提取物)的量在约1％(w/w)和约5％(w/w)的范围内，例如约1％、约2％、约3％、约4％或约5％w/w。在一些实施方案中，组织再生生物
活性提取物不包括(例如，缺少)衍生自胡萝卜的生物活性提取物。在一些实施方案中，组织再生生物活性提取物还包括库拉索芦荟(aloe vera)，例如库拉索芦荟(aloe vera)提取物。
[0128]
本公开部分基于包括一种或多种支架分子的组织再生生物活性提取物。如本文所用，“支架分子”是提供细胞(例如，干细胞、诸如间充质干细胞)可粘附并且促进细胞附着、生长和分化的基底的分子，诸如蛋白或聚合物。在一些实施方案中，一种或多种支架分子是蛋白(例如，动物蛋白、细胞外基质(ecm)蛋白等)。在一些实施方案中，所述蛋白包括胶原、白蛋白或其组合。在一些实施方案中，蛋白包括一种或多种血清蛋白，例如白蛋白(例如，牛血清白蛋白)、鱼血清蛋白、猪血清蛋白等。在一些实施方案中，组合物包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多种支架分子。
[0129]
在一些实施方案中，支架分子是聚合物，例如多糖聚合物，例如透明质酸、壳聚糖或藻酸盐。在一些实施方案中，多糖聚合物是透明质酸。透明质酸是包括葡糖醛酸和n
‑
乙酰基
‑
d
‑
葡糖胺的重复亚单位的糖胺聚糖聚合物。通常，透明质酸根据其分子量分类。低分子量透明质酸(mwha)通常具有小于100kda的分子量。中mwha一般具有100
‑
300kda的分子量。高mwha通常具有高于300kda的分子量。在一些实施方案中，支架分子包括中mwha。
[0130]
组合物中支架分子的总量可以变化。在一些实施方案中，支架分子的量的范围为约0.1％(w/w)至约10％(w/w)，例如约0.1％、约0.5％、约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％、约10％、约11％、约12％、约13％、约14％、约15％、约16％、约17％、约18％、约19％或约20％w/w。
[0131]
组织再生生物活性提取物中生物活性分子与支架分子的比例可以变化。例如，在一些实施方案中，组合物包括比例为约10:1至约1:10的生物活性分子和支架分子(例如，1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、2:1、2:3、2:4、2:5、2:6、2:7、2:8、2:9、3:1、3:2、3:4、3:5、3:6、3:7、3:8、3:9、4:1、4:2、4:3、4:5、4:6、4:7、4:8、4:9、5:1、5:2、5:3、5:4、5:6、5:7、5:8、5:9、6:1、6:2、6:3、6:4、6:5、6:7、6:8、6:9、7:1、7:2、7:3、7:4、7:5、7:6、7:8、7:9、8:1、8:2、8:3、8:4、8:5、8:6、8:7、8:9、9:8、9:7、9:6、9:5、9:4、9:3、9:2、9:1、10:1等)。
[0132]
柠檬香蜂草的生物活性提取物
[0133]
在某些方面，本公开涉及获自蜜蜂花(melissa officinalis)的生物活性提取物，也称为柠檬香蜂草。柠檬香蜂草是薄荷科(lamiaceae)的植物成员。柠檬香蜂草原产于欧洲和中亚，但通常可以在世界范围内栽培。蜜蜂花的栽培品种可药用的包括m.officinalis citronella、m.officinalis lemonella、m.officinalis quedlinburger、m.officinalis lime、m.officinalis variegata、m.officinalis aurea和m.officinalis quedlinburger niederliegende。
[0134]
由柠檬香蜂草产生的生物活性分子包括但不限于多酚化合物、丁香酚、单宁类和萜烯(例如单萜烯、三萜烯、萜类化合物类等)、例如(+)
‑
香茅醛、1
‑
辛烯
‑3‑
醇、10
‑
α
‑
癸醇、3
‑
辛醇、3
‑
辛酮、α
‑
枯烯(a
‑
cubebene)、α
‑
蛇麻烯(α
‑
humulene)、β
‑
波旁烯(β
‑
bourbonene)、咖啡酸、石竹烯、石竹烯氧化物、儿茶素、绿原酸、顺式
‑3‑
己烯醇、顺式罗勒烯、柠檬醛a、柠檬醛b、古巴烯(copaene)、杜松萜烯(6
‑
cadinene)、乙酸丁香酚酯、γ
‑
杜松烯(γ
‑
cadinene)、香叶醛、香叶醇、乙酸香叶酯、大根香叶烯、异香叶醛、芳樟醇、木犀草素
‑7‑
葡糖苷、甲基庚烯酮、橙花醛、橙花醇、苯甲酸辛酯、齐墩果酸、坡模醇酸((1r)
‑
羟基熊果酸)、原
儿茶酸、鼠李金、迷迭香酸、水苏糖、琥珀酸、百里香酚、反式罗勒烯、熊果酸和哈尔碱。
[0135]
在一些实施方案中，在柠檬香蜂草的叶和茎中产生生物活性分子。典型地，生物活性分子以“精油”(也称为“挥发油”)的形式从柠檬香蜂草叶中分离(例如，提取)。从柠檬香蜂草中提取生物活性化合物的方法是本领域已知的，例如通过水性提取(例如，如nolkemper等人，(2006)《药用植物》(planta med.)72(15):1378
‑
1382所描述的)或通过加压提取(例如，如dastmalchi等人，(2008)《lwt
‑
食物科学及技术》(lwt
‑
food science and technology)，41(3):391
‑
400所描述的)。
[0136]
在一些实施方案中，得自蜜蜂花(melissa officinalis)的生物活性提取物包括一种或多种单萜或单萜类化合物，例如香茅醛、橙花醛和/或香叶醛。在一些实施方案中，得自蜜蜂花(melissa officinalis)的生物活性提取物包括迷迭香酸。在一些实施方案中，存在于蜜蜂花(melissa officinalis)的生物活性提取物中的萜烯和迷迭香酸具有抗病毒(例如抗逆转录病毒，如抗疱疹或抗hiv)活性。从蜜蜂花(melissa officinalis)获得的生物活性提取物的抗病毒活性例如由allahverdiyev等人，(2004)phytomedicine 11(7
‑
8):657
‑
61和geuenich等人，(2008)retrovirology 5:27描述。
[0137]
在一些实施方案中，本公开所述的组合物包括得自蜜蜂花(melissa officinalis)的生物活性提取物和一种或多种抗病毒剂，例如阿昔洛韦、伐昔洛韦、喷昔洛韦、泛昔洛韦、二十二醇、阿瓦卡维(avacavir)、西多福韦、依法韦仑、恩替卡韦、咪喹莫特、洛匹那韦、恩曲他滨、拉米夫定、替诺福韦、齐多夫定、多拉维林、伊曲文(etravine)、奈韦拉平、利匹韦林、阿扎那韦、地瑞那韦、膦沙那韦、沙奎那韦(sasquinavir)、替拉那韦(tipranivir)、恩夫韦地(efuviritide)、马拉韦罗、雷替拉韦(ralteravir)、伊巴珠单抗(ibalzumab)、可比司他或其任何组合。
[0138]
在一些实施方案中，包括得自蜜蜂花(melissa officinalis)的生物活性提取物的组合物还包括一种或多种维生素b复合物(例如，维生素b复合物的一个或多个成员)。在一些实施方案中，维生素b复合物的一个或多个成员是钴胺素(例如，维生素b12)。在一些实施方案中，钴胺素是甲基化的(例如甲基钴胺素)或氰化的(例如氰基钴胺素)。在一些实施方案中，组合物包括甲基钴胺素和氰基钴胺素的组合。不希望受任何特定理论的束缚，钴胺素在一些实施方案中可用于促进外周神经修复和减少神经性疼痛。
[0139]
组合物中钴胺素(例如甲基钴胺素和/或氰基钴胺素)的量可以变化。在一些实施方案中，组合物中甲基钴胺素的量的范围为约0.1％(w/w)至约0.5％(w/w)，例如约0.1％、约0.2％、约0.3％、约0.4％或约0.5％w/w。在一些实施方案中，组合物中氰基钴胺素的量为约0.1％(w/w)至约2％(w/w)，例如约0.1％、约0.2％、约0.3％、约0.4％、约0.5％、约0.6％、约0.7％、约0.8％、约0.9％、约1.0％、约1.1％、约1.2％、约1.3％、约1.4％、约1.5％、约1.6％、约1.7％、约1.8％、约1.9％或约2.0％w/w。
[0140]
组合物中甲基钴胺素与氰基钴胺素的比例可以变化。例如，在一些实施方案中，组合物包括比率为约10:1至约1:10的甲基钴胺素与氰基钴胺素(例如，1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、2:1、2:3、2:4、2:5、2:6、2:7、2:8、2:9、3:1、3:2、3:4、3:5、3:6、3:7、3:8、3:9、4:1、4:2、4:3、4:5、4:6、4:7、4:8、4:9、5:1、5:2、5:3、5:4、5:6、5:7、5:8、5:9、6:1、6:2、6:3、6:4、6:5、6:7、6:8、6:9、7:1、7:2、7:3、7:4、7:5、7:6、7:8、7:9、8:1、8:2、8:3、8:4、8:5、8:6、8:7、8:9、9:8、9:7、9:6、9:5、9:4、9:3、9:2、9:1、10:1等)。
[0141]
治疗方法
[0142]
在一些方面，本公开涉及用于将组合物(例如，治疗组合物)递送至细胞或受试对象的方法。在一些实施方案中，施用本公开描述的组合物的方法可用于治疗与受损组织或受损皮肤(例如，受损皮肤或细胞)相关的某些疾病和病症，例如粘膜炎、溃疡、创伤(例如，手术切口等)、烧伤以及由于病毒感染引起的组织损伤(例如，由疱疹病毒1(hsv
‑
1)感染引起的周围神经损伤、或由疱疹病毒2(hsv
‑
2)感染引起的水疱、水痘感染等)。
[0143]
术语“治疗(treatment)”、“治疗(treat)”和“治疗(treating)”是指逆转，减轻，延迟本文所述的“病理状况”(例如，疾病、病症或病况，或其一种或多种体征或症状)的发作或抑制其进展。在一些实施方案中，治疗可以在已经发展或已经观察到一种或多种体征或症状之后进行。在其它实施方案中，治疗可以在没有疾病或病症的体征或症状的情况下进行。例如，可在症状发作之前(例如，根据症状史和/或根据遗传或其它易感因素)对易感个体进行治疗。还可以在症状已经缓解之后继续治疗，例如延迟或预防疱疹病毒的复发感染。
[0144]
如本文所公开的，组合物可以通过任何合适的途径施用。例如，有效量的组合物和/或其它治疗剂可以通过将药剂递送至所需组织(例如，皮肤、粘膜组织、神经系统组织、肌肉组织等)的任何方式施用至受试对象。在一些实施方案中，组合物局部施用。其它合适的给药途径包括但不限于口服、胃肠外、静脉内、腹膜内、鼻内、肌内、舌下、气管内、吸入、皮下、眼部、阴道和直肠给药。全身途径包括口服和胃肠外。
[0145]
对于口服给药，组合物可以以片剂、丸剂、糖衣丸、胶囊剂、液体剂、漱口剂、凝胶剂、糖浆剂、浆剂、混悬剂等形式施用。在一些实施方案中，本公开提供含药漱口剂，喷雾剂，凝胶，乳膏剂，软膏剂或洁齿剂形式的组合物，其在一些实施方案中消除引起感染和牙周病的细菌生物膜，并且促进口腔粘膜的伤口愈合作用，从而提供受损组织的更快恢复。在一些实施方案中，用于口服递送的组合物包括蜂胶生物活性提取物和一种或多种表面活性剂(例如，一种或多种生物表面活性剂)的组合。
[0146]
在一些实施方案中，配制用于口服递送的组合物与自体移植技术的使用相容，例如生物材料如富血小板纤维蛋白(prf)。在一些实施方案中，本公开的组合物不与移植组织和相关联的凝块发生化学作用，使得组合物适合已经历牙科手术(例如，牙齿组织移植等)的受试对象使用。
[0147]
因此，在一些实施方案中，本文所述的组合物可用于治疗粘膜炎(例如，由放疗引起的口腔损伤等)。粘膜炎是口腔中粘膜组织的炎症和溃疡，其通常由癌症化疗和/或放疗引起。
[0148]
在一些实施方案中，本公开提供用于治疗受试对象(例如，患有粘膜炎的受试对象)中的口腔损伤的方法，该方法包括向患有一个或多个口腔损伤的受试对象施用如本公开所述的组合物(例如，口服组合物)。在一些实施方案中，口服组合物包括从蜂胶获得的生物活性提取物。在一些实施方案中，口服组合物以漱口剂或水性口服溶液的形式施用。
[0149]
在一些实施方案中，已经对患有或怀疑患有粘膜炎的受试对象进行化疗(例如，施用一个或多个剂量的化疗剂)和/或放疗(例如，施用一个或多个剂量的治疗性放射治疗，例如头和颈部放疗)。在一些实施方案中，受试对象先前已经接受过化疗、放疗或化疗和放疗的组合。在一些实施方案中，患有或怀疑患有粘膜炎的受试对象在接受造血干细胞移植之前已经接受全身照射。
[0150]
在一些实施方案中，本公开描述的组合物(例如，口服组合物)可用于治疗机械受损的组织。在一些实施方案中，有机械受损的口腔组织的受试对象已经经历口腔颌面外科手术，例如牙植入程序。在一些实施方案中，包括从蜂胶获得的生物活性提取物的口服组合物与口腔外科手术中通常使用的生物材料(例如富含血小板的纤维蛋白等)相容，并且与使用基于酒精的组合物(例如抗菌漱口剂)相比，还可以降低牙科植入物被受试对象免疫系统排斥的可能性。
[0151]
在一些实施方案中，本文所述的口服组合物的给药抑制受试对象中的细菌生物膜形成和/或生长(例如，受试对象的粘膜组织上和/或口腔中的生物膜形成)。在一些实施方案中，清除溃疡粘膜的细菌生物膜导致渗入的多形核细胞减少，并随后减少了促炎介质，如tnf
‑
α、il
‑
1β、il
‑
6和介导痛觉过敏的主要前列腺素的释放。
[0152]
在一些方面，本公开涉及用于局部施用本文所述的组合物的方法。用于局部给药的药物制剂包括透皮贴剂、软膏剂、洗剂、乳膏剂、凝胶剂、滴剂、喷雾剂、栓剂、液体和散剂。此外，常规的药物载体、水性、粉末或油性基底或增稠剂可以用于局部给药的药物制剂中。在一些实施方案中，配制用于局部给药的本公开的组合物可用于治疗受损组织如皮肤。在一些实施方案中，制剂是水凝胶。通常，“水凝胶”是指亲水性的并且形成水作为分散介质的胶体凝胶的聚合物链的网络。在一些实施方案中，水凝胶包括至少10％w/w的水(例如，约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或99％的水)。
[0153]“受损组织”(例如，受损的皮肤)是指已经被化学或机械损伤的组织。受损组织的实例包括伤口(例如，割伤、擦伤、刺伤、外科切口、神经性(糖尿病)伤口等)、烧伤(例如，化学烧伤、晒伤、热暴露烧伤等)、水泡、溃疡、肌肉和肌腱撕裂以及变性的神经组织。
[0154]
在一些方面，本公开提供用于治疗受试对象的受损组织的方法，该方法包括向有需要的受试对象局部施用如本文所述的组合物。在一些实施方案中，受试对象有溃疡(例如，糖尿病性溃疡)。在一些实施方案中，受试对象有烧伤，例如化学烧伤(例如，为皮肤科或美容手术的结果，例如化学焕肤)。
[0155]
在一些实施方案中，组合物以喷雾剂、泡沫、凝胶或水溶液的形式局部施用于受试对象。在一些实施方案中，将组合物施用至受试对象作为装置或设备(例如，医疗装置)一部分，例如用组合物浸渍或涂覆有组合物的固体基底的。可以用组合物浸渍或涂覆的固体衬底的例子包括但不限于纤维(例如，天然棉纤维、诸如尼龙等的合成纤维等)、绷带、垫、覆盖物(例如，面膜)、塑料、金属(例如，不锈钢、钛等)等。
[0156]
在其它实施方案中，本公开所述的组合物被施用多次。在一些情况下，组合物可以每天、每两周、每周、每两周、每三周、每月、每两个月、每三个月、每四个月、每五个月、每六个月或比每六个月更低的频率施用。在一些情况下，组合物每天、每周、每月和/或每年施用多次。例如，组合物可以大约每小时，2小时，3小时，4小时，5小时，6小时，7小时，8小时，9小时，10小时，12小时或超过12小时施用。在一些实施方案中，组合物每天施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或超过10次。
[0157]
可以调整剂量方案以提供最佳治疗反应。例如，寡核苷酸可以重复给药，例如，可以每天给药几个剂量，或者剂量可以根据治疗情况的紧急情况按比例减少。本领域的普通技术人员将容易地能够确定主题组合物的适当剂量和给药时间表，无论该组合物是施用至细胞还是施用至受试对象。
[0158]
本公开的方面涉及用于受试对象(例如，哺乳动物)的方法。在一些实施方案中，哺乳动物受试对象是人或非人灵长类。非人灵长类受试对象的非限制性实例包括猕猴(例如，猕猴或恒河猴)、绒猴、绢毛猴、蜘蛛猿、枭猴、草原猴、松鼠猴、狒狒、大猩猩、黑猩猩和猩猩。在一些实施方案中，受试对象是人类受试对象。受试对象的其它实例包括驯养动物如狗和猫；家畜如马、牛、猪、绵羊、山羊和鸡；和其它动物，例如小鼠、大鼠、豚鼠和仓鼠。
[0159]
实施例
[0160]
实施例1：药物递送组合物
[0161]
本实施例描述了本公开的药物递送组合物的若干实施方案。通常，本文所述的药物递送组合物包括以下组分：碳酸盐缓冲液、至少两种不同的生物表面活性剂、至少一种吸湿剂、至少一种抗氧化剂和至少一种生物活性剂。
[0162]
碳酸盐缓冲体系的ph为7.5至约9.5，优选为8.0至9.0。当施用于受试对象的受损组织时，本公开描述的药物递送组合物提供促进组织愈合和再生的微环境。存在于缓冲液中的某些离子增加组合物中或当组合物接触受损组织时产生的微环境中的大na
+
或nh
4+
离子的浓度。大离子与哺乳动物细胞表面的某些分子如硫酸肝素(hs)结合，并通过破坏微生物如细菌和病毒与靶细胞表面hs的结合来防止病原体进入细胞。考虑到目前可获得的伤口愈合组合物，由本公开描述的组合物在该ph下提供这样的环境的能力是令人惊讶的，其通常具有在中性至酸性范围内的ph值。
[0163]
在本文所述的组合物中两种生物表面活性剂的组合用于若干目的。在一些实施方案中，生物表面活性剂破坏细胞的表面张力，例如细菌细胞和受损组织的细胞，从而促进分子清创。另外，表面活性剂有助于组合物的生物活性分子深入渗透至受损组织中。
[0164]
吸湿剂在创面中提供水分并且在组织愈合时促进组织的充分水合。在一些实施方案中，吸湿剂还提供可用作组织再生中细胞粘附和分化的支架的基质。
[0165]
存在于组合物中的抗氧化剂清除自由基并减少活性氧物质(ros)，这对于在愈合过程发生时减少受损组织中的炎症是重要的。抗氧化剂也可用作组合物中的防腐剂。
[0166]
组合物还包括一种或多种生物活性剂，其通过组合物递送。如以下实施例所述，生物活性剂可被取代或改变以包括实现所需治疗结果的生物活性分子。下表1中提供了本公开所述的药物递送组合物制剂的一个实施方案。
[0167]
表1
[0168][0169][0170]
总之，本说明书描述的药物递送组合物通过同时提供以下各项来提供促进组织愈合和再生的微环境：1)分子清创，2)充分的水合，以及3)抗炎和抗微生物活性，例如作为支架粘多糖结构破坏的结果去除细菌生物膜或抑制病原体结合至受试对象的靶细胞。
[0171]
实施例2：组织修复组合物
[0172]
目前认为减少riom的症状和并发症(例如通过营养支持、疼痛控制、预防和/或治疗继发感染)是处理riom的主要基础。
[0173]
牙科再生疗法涉及替换和/或再生由于疾病或损伤而改变的口腔组织。使这种努力复杂化的报道方面之一是在口腔中发现的组织的复杂性质。这些包括矿化组织例如牙骨质、牙槽骨和牙本质，以及通过韧带(牙周韧带)连接的软组织，每个包括来自各种组织来源(外胚层和中胚层)的不同细胞群。
[0174]
富含血小板的纤维蛋白(prf)仅通过离心患者的外周血而不用抗凝血剂获得，因此是严格自体的。纤维蛋白基质含血小板和白细胞以及多种生长因子和细胞因子，包括转化生长因子β1(tgf
‑
β1)、血小板衍生生长因子(pdgf)、血管内皮生长因子(vegf)、白介素(il)
‑
1β、il
‑
4和il
‑
6。此外，在凝血级联的最后阶段形成的纤维蛋白与由血小板分泌的细胞因子结合，使得prf成为高度生物相容性的基质，特别是在纤维蛋白网还充当组织生长因子的储存器的受损部位。几个对照随机试验(rct)已经证明自体prf对于口腔组织的再生比市场上可获得的任何生物材料更有效。然而，传统的漱口剂被设计为对口腔进行消毒，帮助去除菌斑和防止龋齿形成，并且其特征在于高浓度的变性剂和抗微生物剂的活性化合物。
使用含乙醇、三氯生和氯己定的漱口剂不推荐用于prf术后移植的冲洗，因为它们可能溶解凝块并崩解纤维蛋白膜，从而影响愈合过程。
[0175]
本实施例描述了可用于预防和治愈riom溃疡期的组织修复液，并作为牙植入手术中的佐剂。典型地，在餐前和餐后每天3次将漱口剂作为喷雾溶液直接施用到口腔损伤处。组织修复液的实例描述于下表2中。
[0176]
表2
[0177][0178][0179]
组合物包括如实施例1中所述的药物递送组合物并且包括来自高质量蜂胶提取物的平衡共混物的生物活性物。在一些实施方案中，组合物同时促进对粘膜的组织修复重要的生物学作用，例如抗炎、抗氧化、免疫诱导、抗菌和抗真菌作用。与prf的情况一样，组合物与自体移植技术的使用完全相容，因为它不会化学攻击凝块和移植组织。
[0180]
蜂胶生物活性复合物包括多组黄酮、异黄酮、查尔酮和紫檀素类，其具有对于伤口愈合和从粘膜和粘膜下层中的损伤床去除细菌生物膜重要的抗菌、抗真菌和抗氧化作用。异黄酮类生物活性物的高抗氧化作用还促进由经受辐射的细胞元件的dna损伤产生的活性氧物质(ros)的隔离，从而导致口腔粘膜细胞外基质降解的减少。
[0181]
在一些实施方案中，清除溃疡粘膜的细菌生物膜导致渗入的多形核细胞减少，并随后减少了促炎介质，如tnf
‑
α、il
‑
1β、il
‑
6和介导痛觉过敏的主要前列腺素的释放。
[0182]
药物递送系统的高张力生物分子(例如鼠李糖脂和槐糖脂生物表面活性剂)的存在促进生物化学微清创，其引起细菌生物膜的多糖基质中的有效破坏和由细胞损伤引起的失活和坏死组织的去除。
[0183]
所有这些协同作用一起促进受损粘膜的快速和有效的组织修复。
[0184]
实施例3：伤口愈合组合物
[0185]
慢性伤口不能通过伤口修复的正常模式进展，而是保持以大量外周单核(pmn)和巨噬细胞(mf)细胞浸润为主要特征的慢性炎症状态。持续的炎性细胞在促炎性细胞因子(例如，il
‑
1，tnf
‑
α，il
‑
6)和富含蛋白酶和促氧化剂的不利微环境的产生中起主要作用。增加的蛋白水解活性(例如，嗜中性粒细胞弹性蛋白酶、mmp
‑
8和明胶酶)导致对于修复至关重要的细胞外基质的生长因子和结构蛋白的降解。增加的ros(h2o2，o2’)可导致细胞或胞外基质分子的直接损伤，或导致基质金属蛋白酶(mmp)的表达增加，如(mmp
‑
1、
‑
2、
‑
3、
‑
9和13)。细菌生物膜如下影响慢性非愈合伤口：1)可能未鉴定出含有生物膜的伤口；2)生物膜处理无效可延缓愈合；3)清创是抗生物膜最重要的治疗策略之一，但不能去除所有生物膜，因此不能单独使用；4)生物膜迅速改造；单独反复清创不太可能阻止生物膜再生长；然而，在该时间依赖性窗口内有效的局部抗菌剂施用可以抑制生物膜再形成；和5)生物膜存在于大多数慢性伤口中，并且可能位于表面和更深的伤口层中。生物膜成分(例如，细胞外粘附蛋白(eap)，甲酰甲硫氨酰肽，n
‑
乙酰胞壁酰
‑
l
‑
丙氨酰
‑
d
‑
异谷氨酰胺)可通过干扰细胞
‑
基质相互作用或促进炎症应答而促进宿主的受损修复机制。
[0186]
以下实施例描述了细胞活化流体泡沫形式的药物递送组合物，其包括生物活性提取物和水凝胶，生物活性提取物包括来自海藻的硫酸化多糖，具有润肤和愈合作用，以促进肉芽组织的生长，水凝胶包括细菌生物膜抑制剂，例如蜂胶、黄芩苷和穿心莲内酯，以促进清创和去除坏死组织和碎片，保持有利于伤口愈合的潮湿环境。细胞活化流体泡沫的一个实施方案描述在表3a中，并且细菌生物膜缓解水凝胶的一个实施方案描述在下表3b中。
[0187]
表3a
[0188]
[0189][0190]
表3b
[0191]
成分成分类别最小(％w/w)最大(％w/w)
ꢀꢀꢀꢀ
蜂胶抗生物膜生物活性0.1020.00黄芩苷抗生物膜生物活性0.1010.00穿心莲内酯抗生物膜生物活性0.3010.00泊洛沙姆非离子表面活性剂0.1020.00丁基羟基甲苯(bht)亲脂性抗氧化剂0.012.92鼠李糖脂生物表面活性剂0.016.50槐糖脂生物表面活性剂0.016.50碳酸氢钠碳酸盐0.015.00癸基葡糖苷非离子表面活性剂0.4215.00peg吸湿性乙二醇聚合物1.020.00聚氧乙烯月桂基醚非离子表面活性剂0.2010.00纯化水溶剂10.0099.00
[0192]
组合物中存在的生物活性成分在慢性伤口愈合过程中的不同点的协同作用。例如，存在于库拉索芦荟植物复合物中的皂甙(saponosidic)化合物与细菌脂质表面活性剂组合，通过破坏细菌生物膜的粘多糖基质来促进细菌生物膜的去除，从而减少创面上的感染和炎症反应。
[0193]
存在于细胞活化流体泡沫的海藻硫酸化多糖是一种重要的抗氧化剂和自由基清除剂，如羟基和超氧自由基(h2o2，o2)等，降低了促氧化剂和蛋白水解活性，阻止了免疫细胞、生长因子和细胞外基质的破坏。此外，它们可以通过控制巨噬细胞活性来刺激免疫系统。硫酸化多糖如角叉菜胶、石莼胶聚糖和岩藻依聚糖(fucoidan)可改变巨噬细胞的活性，增加定殖伤口中的细菌结合和杀灭活性。硫酸化多糖的抗凝血和抗血栓活性也有助于该产物的这种协同作用，防止微血栓形成并因此促进新生组织中的血管生成。
[0194]
实施例4：美容皮肤修复组合物
[0195]
本实施例描述了用组合物浸渍的治疗性面部皮肤修复面膜，组合物在焕肤手术后用作化妆品，例如脉冲光、化学和点阵激光焕肤。该组合物还可用于皮肤科小手术后的再生治疗，以去除体征、斑点、囊肿和雀斑。
[0196]
组合物包括用药物递送组合物浸渍或涂布的可生物降解的天然纤维面膜，药物递送组合物包括生物活性物质如β
‑
胡萝卜素(例如衍生自胡萝卜油的)、α
‑
生育酚和皮肤再生过程中的其它重要组分。将生物活性物掺入透明质酸
‑
右泛醇的流体基质中，其在例如激光烧伤后保留的营养组织中起关键作用。
[0197]
透明质酸(ha)还在表皮中起作用以维持细胞外间隙并提供开放的、以及水合的结构用于营养物的通过。生物活性物和营养物如视黄酸(维生素a)，α
‑
生育酚(维生素e)和维生素b5(右泛醇)可广泛地通过ha基质运输至修复中的组织。此外，ha可能在细胞和基质事件的介导中发挥多方面的作用，随后是创伤、炎症、肉芽组织形成、再上皮化和重塑。该实施例中描述的药物递送组合物的一个实例提供于下表4中。
[0198]
表4
[0199][0200]
实施例5：疱疹感染的治疗组合物
[0201]
病毒hsv
‑
1存在于嘴唇皮肤，导致单纯性疱疹唇炎(hsl)。单纯性疱疹唇炎(hsl，也称为感冒疮或热疮)影响数百万美国人。据估计仅在美国每年就有98,000,000例hsl。
[0202]
病毒的最初感染是通过粘膜或唇或嘴的磨损皮肤与患有活动性原发性或复发性感染的人的唾液或其它分泌物之间的直接接触。原发性hsv感染通常发生在儿童早期，通常没有症状，但也可表现为疱疹性龈口炎，其特征为口腔和口周小泡(微小水疱)和溃疡。hsl之前有被称为“前驱症状”的警告信号；这些症状是后续水泡发育部位的疼痛、灼热、瘙痒或刺痛感。在前驱期也可能发生头痛。在前驱症状的24小时内，出现多个成组的水泡，然后渗出，直到它们最终形成痂皮。这样的痂皮通常很容易出血，由于血液干燥而形成难看的黑色痂皮，当皮肤伸展时，例如吃东西和微笑时，会再次出血。这些通常在5至15天内愈合而不会留下疤痕。单纯性疱疹唇炎可能由于美容缺陷引起疼痛、不适、不便以及一定程度的心理和社会痛苦。
[0203]
初次感染后，病毒以潜伏形式存在于感觉神经节(神经末梢)。再活化后，hsv从这
些感觉神经节迁移到嘴唇或口腔的皮肤外层，引起复发性hsl。病毒在神经元中复制，导致反复发作。发作通常是由于暴露在紫外线(阳光和/或逍遥椅)、压力、免疫抑制、感冒、疲劳、发烧(因此被称为“唇疱疹”或“热疮”)、过度暴露在风中、温度过高、月经期间、怀孕、牙科治疗或嘴唇外伤引起的。口周激光换肤术或口周肉毒杆菌毒素或填充物注射可刺激发作。目前还没有治愈hsl的方法，所以理论上说，一旦感染，会终身存在。
[0204]
本实施例描述了用于治疗单纯性疱疹唇炎(hsl)和生殖器疱疹的含有天然抗病毒生物活性提取物与外周神经修复因子结合的药物溶液。组合物包括用于治疗唇疱疹和生殖器疱疹的局部制剂。目前市场上没有解决减少病毒感染和恢复受损神经组织的局部产品。局部组合物的一个实施方案描述于下表5中。
[0205]
表5
[0206][0207][0208]
所述蜜蜂花的生物活性提取物包括对hsv
‑
1和hsv
‑
2具有协同抗病毒作用的单萜类化合物，例如香叶醛、α
‑
红没药醇、β
‑
石竹烯、芳樟醇、橙花醛、香茅醛、α
‑
杜松醇、β
‑
杜松烯等。除了类单萜生物活性物之外，蜜蜂花的生物活性提取物还包括多酚化合物，例如对唇疱疹(hsv
‑
1)和生殖器疱疹(hsv
‑
2)均显示抗病毒活性的迷迭香酸。在一些实施方案中，组合物还包括(或与之共同施用)一种或多种目前用于治疗hsv感染的抗病毒剂(例如，阿昔洛韦等)。
[0209]
已观察到甲基化维生素b12和甲基钴胺素与退化和受损的外周神经的修复机制以及减少神经性疼痛和促进神经生长有关。
[0210]
在一些实施方案中，组合物中存在的生物表面活性剂和离子(经由缓冲体系)可以通过干扰hs在细胞表面上的结合来阻断病毒进入靶细胞。
[0211]
实施例6：在具有生物膜形成的离体猪真皮模型中评估组织修复水凝胶制剂
[0212]
该实施例描述了研究四种不同伤口处理(制剂a、b、c和d)在猪真皮外植体模型中的效力的实验。简单地说，用凝胶制剂处理3天大的成熟外植体24小时或72小时，然后回收微生物存活物。本研究使用3种代表性的微生物种类：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(革兰氏阳性菌)、铜绿假单胞菌(革兰氏阴性菌)和白色念珠菌(酵母菌)。
[0213]
总之，所测试的组织愈合制剂在72小时治疗时间表现良好，显示相对于24小时时间显著更高水平的治疗效力，其中所评价的跨所有物种的微生物负荷为1.5log。重要的是在此注意到没有再施加处理，相反原始处理保留在外植体上72小时的处理时间。
[0214]
材料和方法
[0215]
测试制剂：测试五种不同的含有蜂胶的组织愈合制剂(制剂a、b、c和d)。每个制剂是含有不同浓度的活性剂(例如，蜂胶)的水凝胶。测试一种不含活性剂的水凝胶作为阴性对照(赋形剂)。对于每个水凝胶制剂，在研究中对每个外植体施加约2ml。
[0216]
测试生物体：测试对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌以及真菌物种的效力。物种和相关的atcc编号列于表6中。
[0217]
表6
[0218][0219][0220]
生物膜建立
[0221]
用于外植体的猪组织从usda许可的机构获得，该机构使用精密调平技术制备具有大约2mm的特定厚度的猪真皮。使用穿刺活组织检查，将组织切成直径大约12mm的圆形外植体，并使用dremel工具人工创伤以产生直径大约2mm且具有1.5mm深腔的伤口。然后用氯气充分洗涤并灭菌。在接种和施用测试制剂之前，将外植体放置在37℃的培养箱中的0.5％琼脂上大约2h以平衡。然后外植体接种15
‑
20μl的特定细菌的对数期培养物或白色念珠菌的48h培养物，每个外植体约105cfu，并允许在0.5％琼脂上孵育3天，每天转移到新鲜琼脂平板。
[0222]
处理
[0223]
将3天大的外植体在2ml无菌pbs中洗涤2min，然后用测试组合物处理。将制剂a、b、c和d装入10ml注射器中，以允许用大约2ml制剂对外植体进行受控给药。洗涤后，将外植体转移到24孔板的各个孔中，然后加入测试制剂。然后将板置于温育箱中24h。在第二轮筛选中，将处理时间延长至72h，以评价是否有延长处理时间的益处。所有四种制剂和载体对照处理相同。在指定处理时间后，从所有外植体回收存活的生物负载，并通过连续稀释和平板接种计数。
[0224]
回收存活的细菌
[0225]
培养24h或72h后，从组织中回收存活的细菌和酵母并计数。首先，通过翻转外植体轻轻从外植体上除去剩余的制剂，然后在2ml无菌pbs中洗涤两次(每次2min)以除去任何剩余的材料。然后将经洗涤的外植体置于含有2ml的dey/engley肉汤(通用中和剂)的15ml离
心管中。将外植体涡旋10s并进行一系列5个超声处理清创步骤：90s超声处理/60s间歇。将样本再次涡旋以确保均匀性，连续稀释，并点式平板接种(10μl样本/点，一式三份)直至稀释至
‑
6，并在必要时展开平板接种(200μl未稀释的回收溶液)。
[0226]
效力数据
[0227]
数据汇总于表7和图1
‑
3中。
[0228]
表7
[0229][0230][0231]
组织修复制剂对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌3天龄生物膜的效力总结在图1中。总之，与未处理对照的约7.5log相比，制剂a
‑
d显示出与处理24h后的约5log存活率相当的效力。延长的处理时间使存活率显著降低至制剂a
‑
c的1log以下和制剂d的约1.5log以下的水平。有趣的是，赋形剂也显示在24h处理标记的微生物负荷减少，几乎是减少2log，但延长处理时间只减少了另外大约1log金黄色葡萄球菌的存活率，而测试的制剂显示明显更高的效力。
[0232]
组织修复制剂对铜绿假单胞菌3天龄生物膜的效力总结在图2中。类似于金黄色葡萄球菌，延长的处理时间增加了所有制剂的效力。制剂a
‑
d均显示在24h内减少超过5log和在72h后小于1log的存活率。在24h处理时间点，与金黄色葡萄球菌相比，这些制剂似乎对铜绿假单胞菌具有更好的效力；然而，单用赋形剂对铜绿假单胞菌生物被膜也显示出时间依赖性的增强效力，72h的处理时间导致2log存活率。
[0233]
组织修复制剂对白色念珠菌3天龄生物膜的效力总结在图3中。对白色念珠菌的总体效力曲线类似于对革兰氏阳性金黄色葡萄球菌所观察到的，其中所有制剂显示效力随延长的处理时间(72h相对于24h处理时间)增加，并且在72h处理时间点的效力显著高于单独的赋形剂的效力。
[0234]
总之，在该研究中评价的所有制剂对来自评价的所有三种代表性微生物物种(革兰氏阳性金黄色葡萄球菌、革兰氏阴性铜绿假单胞菌和酵母菌白色念珠菌)的生物膜显示出非常高的效力。72h的延长处理时间导致所有制剂效力的总体增加，导致所有物种中<1.5log的活细菌。单独的赋形剂还显示出微生物负荷降低，对于金黄色葡萄球菌和白色念珠菌在24h和72h处理时间后约减少2
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3log，对于铜绿假单胞菌24h时减少3log，72h时减少7log。
[0235]
这里需要注意的一些重要事项可能与解释所观察到的赋形剂效力有关：
[0236]
·
本研究中列举了总微生物负荷，生物膜+浮游细菌。这可能解释了赋形剂的部分效力，特别是对于24h处理。作为参考，如果将具有生物膜的3天龄的外植体在浓度>200
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mic值的抗生素或抗真菌剂的溶液中处理24小时，通常我们看到微生物负荷降低<2log。
[0237]
·
铜绿假单胞菌产生的生物膜具有比其他物种多得多的生物质。如果赋形剂的组分干扰铜绿假单胞菌生物膜。这可导致观察到的效力增加，尽管其可能不是由于杀死微生物，而是由于生物膜从组织的物理去除。
[0238]
实施例7：用含有抗生物膜抑制剂的水凝胶制剂评估全厚度切除猪模型中的伤口愈合
[0239]
本实施例描述了在猪全厚度切除伤口愈合真皮模型中评价含有不同浓度的蜂胶、黄芩苷和穿心莲内酯的四种组织愈合水凝胶制剂。
[0240]
在猪模型中研究了组织修复水凝胶(例如，包括蜂胶的水凝胶)和关于全厚度皮肤伤口的三种对比物的愈合性质。使1只体重约39.5kg的雄性猪(大白猪)在手术前适应3天并禁食12小时。动物肌肉注射氯胺酮(5mg/kg)、咪达唑仑(0.5mg/kg)、乙酰丙嗪(0.05mg/kg)。镇静后，异氟醚吸入后耳静脉注射丙泊酚(5mg/kg)维持镇静。切口处用2％利多卡因麻醉。术前用2％氯己定对背部进行剃毛消毒。用头皮针n.11和剪刀在猪背部用不锈钢模板对称制作了16个直径2cm的全厚切口，共4排。
[0241]
8种组织愈合治疗药物一式两份在伤口处进行了测试：innovacorium敷料水凝胶(iwd)
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制剂a、b、c和d，(pg
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medline，northfield，il)，(mh
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derma sciences，toronto，canada)，(amg
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amerx，clearwater，fl)和生理盐水对照组(sal)。根据图4随机选择每个处理的部位。制剂a、b、c和d中所选组分的量示于下表8中。
[0242]
表8
[0243]
制剂蜂胶(％w/w)黄芩苷(％w/w)穿心莲内酯(％w/w)a3.0％1％1％b1.5％0.5％0.5％c0.75％0.25％0.25％d6％0.5％0.5％
[0244]
在研究的22天期间，每24小时在创面上施用0.5g的每种产品。最初用无菌盐水冲洗伤口以除去来自先前施用的产物残余物。然后用无菌纱布擦拭伤口周围区域以更好地固定新敷料覆盖物。为减轻换药过程中的应激和疼痛，第一周给予氯胺酮(10mg/kg)和咪达唑仑(0.5mg/kg)肌注镇静。伤口部位用curatec透明膜(urgo medical，france)覆盖，并用3m
tm micropore
tm
手术胶带(3m，maplewood，mn)覆盖。在覆盖了伤口后，动物穿上干净的棉质衣服，以获得更好的舒适度和保护自己免受偶尔的创伤。
[0245]
为了评估治疗伤口愈合效力，每周对伤口拍照以使用image j软件(nih，usa)以已知的圆形面积模板作为参考来估计面积。在第15天(重复1次)和第22天(重复2次)从创面收集进行活组织检查，以评估伤口的组织学愈合阶段。用3微米切片制备组织学载玻片，然后在75℃烘箱中放置30min以排出石蜡。使用苏木精/伊红和马松三色(masson's trichrome)染色。简单地说，将样本在3个二甲苯大桶中每个脱蜡5min，然后在降低的乙醇，100％、90％、80％、70％和水中水合10次。用harrys苏木精染色3min，然后用自来水冲洗1min。在
scoth溶液中进行10次苏木精平铺，在自来水中再清洗2min。细胞质经曙红染色3min。最后，在合成介质中通过增加醇类进行脱水，并且在每一个中通过3个二甲苯大桶10个通道进行澄清以组装。通过在3个二甲苯大桶中各5min脱蜡并用苏木精染色3min进行马松三色染色(massom trychomic staining)。将样本在scoth溶液中平铺10遍。样本置于briebrich scarlat溶液
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15min，磷钨酸/磷钼酸(phosphomolybdic)
‑
10min，苯胺蓝
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5min，乙酸1％
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2min处理。增醇脱水，在合成培养基中澄清和组装。
[0246]
图5a
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5h是描绘不同处理和对照的猪皮上的全厚度切除伤口的愈合过程的照片。产生切除伤口的手术24h后，伤口干净，没有出血、感染、水肿和红斑的迹象。处理7天后，所有组织修复制剂处理的伤口，不管制剂a、b、c或d，都显示创面上产品的轻微浸渍。在伤口周围区域，存在难以用盐水冲洗的产品的轻微浸渍。这些浸渍在具有最高浓度的蜂胶的制剂中更显著(图5a和5d)。用不同的预测和对照盐水处理的伤口也有浸渍，但没有含蜂胶制剂中的黑和厚。治疗14天后，无创面产物积聚与损害处。在制剂中，制剂c呈现与最低伤口缩小率百分比相关的肉芽组织的最大面积(图5c)。在整个研究期间，mh治疗的伤口之一呈现过度肉芽形成和水肿，但在任何伤口中均未观察到感染、渗出物和红斑(图5g)。数据显示在处理的第一周，与盐水对照相比，在任何处理中损害面积没有显著缩小。然而，在处理的第二周，各制剂比盐水对照表现更好。表9显示了观察期间各处理和对照的伤口面积。在研究结束时，与盐水对照(93.3％)相比，制剂a显示出最高的伤口缩小百分比(98.6％)，如图6所示。在本研究期间，mh处理未导致伤口愈合。
[0247]
表9
[0248][0249][0250]
评价了完整猪皮和用不同产品处理的所有伤口的组织学特征。从未受损的完整组织中采集的活组织检查显示，猪外皮的皮肤结构很有特征性，未经修饰的致密结缔组织中有胶原纤维束，没有异型和/或炎性细胞浸润，真皮乳头很少。通常，观察到的片段用薄的未压缩角蛋白层完全上皮化。取自伤口的活组织检查的组织学切片显示表皮结构不是如完整皮肤那样组织的，并且主要特征在于存在炎性浸润和松散的结缔组织沉积，其具有较稀疏和较不致密的纤维。从伤口收集的活组织检查显示，通常，制剂a和d在15天内具有更大的组织转化，伴随有内陷的表皮形成和层状角化细胞的角蛋白沉积。制剂c到达该阶段的时间最长。在预测中，amg是重建表皮和真皮结构最快的。另一方面，mh产品修复表层的时间最长。21天后，来自组织修复组合物处理的伤口的活组织检查的组织学切片显示表皮结构的完全
组织和分层，区别于表皮的不同层，甚至区别于在用制剂c处理的损伤中。另一方面，在21天治疗结束时，用mh和sal治疗的伤口具有不完全的表皮形成。
[0251]
上述数据表明，与盐水处理的损伤相比，所有组织愈合制剂(例如，a、b、c和d)在猪全厚度切除伤口中显示出愈合有效性。pg和amg产品也已证明在测试中的愈合有效性。制剂a和amg表现最好，在21天内达到98％以上的伤口缩小百分比。对在不同处理和对照之间的猪切除伤口的愈合阶段的不同进行组织学追踪，以确认在皮肤修复过程中的组织重组。再次，制剂a、制剂d和amg在处理的第15天后显示出晚期表皮层重构。
[0252]
等同物
[0253]
已经如此描述了本发明的至少一个实施方案的若干方面，应当理解，本领域的技术人员将容易想到各种改变、修改和改进。这样的改变、修改和改进旨在是本公开的一部分，并且旨在本发明的精神和范围内。因此，前面的描述和附图仅作为示例。
[0254]
虽然在此已经描述和说明了本发明的若干实施方案，但是本领域的普通技术人员将容易想到用于执行本文描述的功能和/或获得结果和/或一个或多个优点的多种其他手段和/或结构，并且这些变化和/或修改中的每一个都被认为是在本发明的范围内。更一般地，本领域的技术人员将容易理解，本文描述的所有参数、尺寸、材料和构型旨在是示例性的，并且实际参数、尺寸、材料和/或构型将取决于使用本发明的教导的一个或多个具体应用。仅使用常规实验，本领域技术人员将认识到或能够确定本文描述的本发明的具体实施方案的许多等同物。因此，应当理解，上述实施方案仅以示例的方式提出，并且在所附权利要求及其等同物的范围内，本发明可以不同于具体描述和权利要求的方式实施。本发明涉及本文所述的每个单独的特征、系统、制品、材料和/或方法。另外，两个或更多个这样的特征、系统、物品、材料和/或方法的任何组合，如果这样的特征、系统、物品、材料和/或方法不相互不一致，则包括在本发明的范围内。
[0255]
如本文所用，在说明书和权利要求书中的不定冠词“一(a)”和“一(an)”应理解为意指“至少一个”，除非清楚地相反指示。
[0256]
如本文所用，说明书和权利要求书中的短语“和/或”应理解为是指如此结合的要素中的“一个或两个”，即在某些情况下结合存在而在其他情况下不结合存在的要素。除了由“和/或”子句具体指明的要素之外，其他要素可任选地存在，无论与具体指明的那些要素相关还是不相关，除非清楚地相反指明。因此，作为非限制性实例，当与开放性语言如“包括”结合使用时，对“a和/或b”的提及在一个实施方案中可指没有b的a(任选地包括除b以外的要素)；在另一个实施方案中指没有a的b(任选地包括除a以外的要素)；在又一个实施方案中，指a和b两者(任选地包括其他要素)；等。
[0257]
如本文所用，在说明书和权利要求书中，“或”应理解为具有与上文定义的“和/或”相同的含义。例如，当分隔列表中的项目时，“或”或“和/或”应被解释为包括性的，即，包括多个元素或元素列表中的至少一个，但也包括多于一个，以及任选地，另外的未列出的项目。仅有清楚地相反指示的术语，例如“仅一个”或“恰好一个”或，当在权利要求中使用时，“由
…
组成”将指的是包括多个要素或要素列表中的恰好一个要素。通常，如本文所用的术语“或”之前有排他性术语，例如“中的任一个”、“中的一个”、“中的仅一个”或“中的恰好一个”时，应当仅解释为指示排他的替换物(即“一个或另一个但不是两个”)。当在权利要求中使用时，“基本上由”包括应当具有其在专利法领域中使用的普通含义。
[0258]
如本文所用，在说明书和权利要求书中，关于一个或多个要素的列表的短语“至少一个”应理解为意指选自要素列表中的任何一个或多个要素的至少一个要素，但不必包括在要素列表内具体列出的每个要素和每个要素中的至少一个，并且不排除在要素列表中的要素的任何组合。该定义还允许除了短语“至少一个”所涉及的要素列表中具体指明的要素之外的要素可任选地存在，无论与具体指明的那些要素相关还是不相关。因此，作为非限制性实例，“a和b中的至少一个”(或，等效地，“a或b中的至少一个”或，等效地“a和/或b中的至少一个”)在一个实施方案中可以是指至少一个，可任选地包括多于一个，a，其中不存在b(并且可任选地包括除b以外的元素)；在另一个实施方案中，至少一个，任选地包括多于一个b，不存在a(并且任选地包括除a以外的元素)；在又一个实施方案中，至少一个，任选地包括多于一个，a，和至少一个，任选地包括多于一个，b(和任选地包括其他要素)；等。
[0259]
在权利要求书以及上述说明书中，所有过渡性短语，如“包括(comprising)”、“包括(including)”、“携带(carrying)”、“具有(having)”、“含有(containing)”、“涉及(involving)”、“持有(holding)”等被理解为是开放式的，即意味着包括但不限于。仅过渡性短语“由
…
组成”和“基本上由
…
组成”分别为美国专利局专利审查程序手册第2111.03节所述的封闭式或半封闭式过渡性短语。
[0260]
在权利要求中使用诸如“第一”、“第二”、“第三”等序数术语来修改权利要求要素本身并不意味着一个权利要求要素相对于另一权利要求要素的任何优先权、优先或顺序，也不意味着执行某种方法行为的时间顺序，而只是用作标签，以将具有特定名称的一个权利要求要素与具有相同名称的另一个要素(但用于序数术语)区分开来以区分权利要求要素。
[0261]
还应当理解，除非清楚地相反指示，否则在本文要求保护的包括多于一个步骤或动作的任何方法中，该方法的步骤或动作的顺序不一定限于叙述该方法的步骤或动作的顺序。