液体敷料组合物及其兽医用途的制作方法

1.本发明涉及液体敷料组合物(liquid dressing composition)及其兽医医学用途，特别是用于预防和/或治疗伤口和/或感染。
2.本发明还涉及用于递送或施加液体敷料组合物的装置。


背景技术：

3.在用于治疗非人动物的兽医环境中，对易于施加、有效的、保持无菌的以及保护病变和其他伤口免受外部感染剂(infective agent)影响的液体敷料的需求尚未得到满足。此外，在需要对病变表面施加抗生素(或其他物质)的情况下，这样的液体敷料应理想地将这些材料与其环境“锁定(lock-in)”并防止外部损失，并因此提高治疗效率。
4.趾皮炎(digital dermtitis，dd)是影响多至40％乳牛的蹄部感染。其由乳牛的室内饲养导致，所述室内饲养由于对高性能挤乳牛的饮食需求提高而是需要的。其特征在于疼痛的溃疡性或增殖性病变并导致跛行、降低牛乳产量和提高死亡率，以及相关的经济效率低下和动物福祉问题。趾皮炎的治疗是具有挑战性的问题，因为与之相关的伤口通常会长期感染多种厌氧菌物种，尤其是螺旋体。由于动物蹄经常与粪浆(faecal slurry)持续接触，这也使疾病在畜群中牛之间传播，并再感染先前经治疗的动物。
5.趾皮炎的现有治疗包括将表面抗生素或基于金属的抗微生物剂施加至病变。然而，所有这些治疗仅是适度有效的，因为蹄持续与粪浆接触，导致抗微生物剂或抗生素迅速流失至外部环境中。在施加抗生素或类似治疗之后每次用绷带包扎以试图防止其从动物的施加区域流失到外部环境中是不切实际的。这样的绷带无论如何都必须在数天之后移除，否则它们可能消极地成为感染的先兆。除了经济损失之外，这些感染和抗生素施加的反复循环促进了抗生素抗性细菌的发展，这是严重的公共卫生挑战。
6.除了传统的抗生素，其他抗微生物治疗包括使用福尔马林或离子铜足浴(footbath)或施加铜和锌edta凝胶。用足浴治疗严重感染的畜群可以帮助控制感染的传播，但不能治疗被感染的动物。它还具有产生大量对环境有毒的废物的缺点，以安全方式处置所述废物是昂贵的。福尔马林也是致癌性的。铜和锌edta凝胶的抗微生物活性有限，并且像抗生素一样需要多次施加，在严重感染情况下也需要包扎。一些铜和锌edta凝胶制剂是厚的，并且需要用刷施加，在所治疗动物之间具有交叉感染的相关风险。除了依赖黏度之外，这些产品没有持久的品质，因此在这样的具有挑战性的环境中，它们在伤口上的使用期(lifetime)将是有限的。鉴于这些缺点，以有效的方式治疗趾皮炎仍是本领域的问题。
7.antic et al.(meat science，88：498-502，2011)描述了将紫胶施加至牛皮(cattle hide)以在剥皮操作期间限制牛畜体肉的微生物交叉污染。
8.发明概述
9.概括地说，本发明提供了这样的液体敷料组合物：当其表面施加至对象时能够形成自支持屏障，特别地用于兽医用途，例如预防和/或治疗伤口和/或感染，包括与趾皮炎相关的伤口和/或感染部位或病变。在一些情况下，敷料将是抗感染性的，并因此抵抗来自环
境或者甚至来自伤口本身的生物膜形成。有利地，屏障可以是疏水性的。此外，在一些情况下，敷料可以以与伤口本身的抗微生物活性相容的浓度将其抗微生物离子释放至伤口中。或者，本发明的液体敷料组合物本身可以基本上不具有微生物驱避活性，但通过对于感染提供物理屏障来帮助预防伤口的微生物定植。一般而言，液体敷料组合物包含在挥发性溶剂例如乙醇中的紫胶和基于金属的活性物质，并且在作为液体表面施加至对象之后能够形成自支持固体疏水性屏障。基于金属的活性组分可以改善屏障功能，并且任选地另外提供对环境病原体的固有驱避特性。由于不包含基于金属的活性物质的紫胶组合物在碱性条件(ph＞7)下是可溶的，因此出人意料的是本发明的组合物能够形成可以抵抗高ph的屏障，例如如在碱性环境(例如粪浆中)发现的。
10.在一些情况下，基于金属的活性物质可以赋予本发明液体敷料组合物抗感染特性。作为替代或补充，金属活性物质可以有助于改善液体敷料组合物的一种或更多种特性，例如改善组合物的屏障特性和/或物理化学特性，例如组合物的黏度。
11.作为替代或补充，根据本发明的方法使用的液体敷料组合物提供了黏性的、快速固定的化学屏障，所述化学屏障能够例如在伤口、病变或感染的位置处锁定对对象预先施加的治疗。因此，本发明的组合物可以与其他药剂例如抗生素、抗感染剂或病变愈合促进剂或对宿主有潜在益处的其他物质组合使用。通过所述组合物形成的屏障还可以保护病变(例如由趾皮炎引起的那些)免受环境影响，同时提供承受极端条件例如碱性浆料的临时屏障，但仍然能够随着时间自降解。由本发明组合物形成的屏障可以具有的另外的优点是不需要另外形式的绷带包扎或敷料来物理地支持屏障功能或效力。在优选应用中，抗微生物组合物的组分和由它们形成的屏障是食物链(food-chain)相容的。
12.因此，本发明不仅旨在增强动物福祉，帮助确保最佳牛乳生产并降低抗微生物剂损失至环境和食物链中，而且还在下面进一步陈述的其他情况下的预防和治疗伤口和/或感染中得到应用。本发明的组合物也是生物相容的并且其ph可以是受控的使得其保持高于ph 3，优选高于ph 4，并且最优选高于ph 4.5，以实现安全、生物相容的表面使用。
13.因此，在一个方面中，本发明提供了用于治疗或预防感染和/或伤口的液体敷料组合物，其中所述组合物包含紫胶、金属活性物质和溶剂，其中所述组合物在表面施加至对象时能够形成屏障，其中所述组合物用于兽医施用。
14.虽然这些组合物被特别开发以对特别是发生在牛中的趾皮炎提供治疗，但本文中所述的组合物和兽医医学用途在治疗非人动物对象和治疗其他类型的伤口和/或感染和表面需求中具有应用。
15.在另一方面，本发明提供了用于治疗或预防趾皮炎的液体敷料组合物，其中所述组合物包含紫胶、金属活性物质和溶剂，其中所述组合物在表面施加至对象时能够形成屏障。
16.在另一方面，本发明提供了液体敷料组合物在制备用于治疗或预防感染和/或伤口的药物中的用途，其中所述组合物包含紫胶、金属活性物质和溶剂，其中所述组合物在表面施加至对象时能够形成屏障，其中所述组合物用于兽医施用。
17.在另一方面，本发明提供了液体敷料组合物在制备用于治疗或预防趾皮炎的药物中的用途，其中所述组合物包含紫胶、金属活性物质和溶剂，其中所述组合物在表面施加至对象时能够形成屏障，其中所述组合物用于兽医施用。
18.在另一方面，本发明提供了用于治疗或预防感染和/或伤口的方法，该方法包括(a)将液体敷料组合物表面施加至对象，其中所述组合物包含紫胶、抗感染金属活性物质和溶剂，其中所述组合物在表面施加至对象时能够形成屏障，以及(b)使溶剂蒸发使得所述组合物形成屏障，其中所述组合物用于兽医施用。
19.在另一方面，本发明提供了用于治疗或预防趾皮炎的方法，所述方法包括(a)将液体敷料组合物表面施加至对象，其中所述组合物包含紫胶、抗感染金属活性物质和溶剂，其中所述组合物在表面施加至对象时能够形成屏障，以及(b)使溶剂蒸发使得所述组合物形成屏障。
20.在另一方面，本发明提供了用于在对象中治疗或预防表面感染的方法，所述方法包括(a)将液体敷料组合物表面施加至对象，其中所述组合物包含紫胶、金属活性物质和溶剂，其中所述组合物在表面施加至对象时能够形成屏障，以及(b)使溶剂蒸发使得所述组合物形成屏障，其中所述组合物用于兽医施用。
21.在本文中所述的兽医医学用途和方法中，由本发明组合物产生的表面沉积的屏障可以与常规治疗结合使用，例如通过在对象的已经预施加促进愈合的抗生素或其他抗感染剂、治疗剂或其他治疗剂的部位或位置上使用屏障组合物。这意味着屏障提供了将预施加的治疗剂保持锁定在内的保护层。实际上，将软膏或其他物质预施加至皮肤或伤口可能是有利的，其用于防止本发明液体敷料组合物在表面施加时的“溶剂刺痛(solvent sting)”。
22.通常，本发明中使用的组合物具有以下优点：它们易于作为液体或凝胶施加；快速凝固以形成不溶的、抗水性的(疏水性)屏障和/或足够稳健以提供对机械损伤和严酷的环境压力的抗性。这些优点特别地可用于本发明的其中需要易于施加但坚固的屏障的兽医应用，例如用于烧伤和其他创伤情况，包括手术。所述组合物的能够形成自支持屏障并因此不需要与绷带或其他敷料结合使用的特性，对于在恶劣环境中的使用特别有利。这是因为由所述组合物形成的屏障通常具有一定程度的物理强度以承受物理损伤(例如撞击(knock))并且是防水的并且可以作为简单的液体形式方便地携带和施加。
23.用于本发明的组合物的屏障形成特性也使它们适合于快速的伤口或病变或瑕疵(blemish)覆盖。这可用于在节省时间的情况下例如手术干预，或者进入对象身体上难以到达的部位，有助于避免重复包扎的需要，尤其是在以其他方式难以包扎的解剖区域中，从而提高非人动物对象的依从性。手术伤口、糖尿病伤口和溃疡、擦伤(intertrigo)或皮肤皱襞皮炎(skin fold dermatitis)、皮肤病症、创伤性病变、脓肿和轻微划伤或病变(例如来自动物争斗)是其中简单但有效的化学屏障可能优于其他治疗选择的实例。
24.在另一方面，当用于兽医应用时，本发明同样特别可用于手术伤口、皮肤病症、溃疡、割伤、擦伤和其他创伤性伤口。例如，它可能被兽医或农民或宠物主人或动物园和类似机构使用。多功能性和易于施加使得能够快速使用并进入身体的病变、伤口或瑕疵上的尤其是如果不治疗，可能发展为感染的困难区域。可以根据本发明来治疗的兽医病症的一些实例包括毛囊炎、脓疱病、癣、rain scald、腐蹄病(foot rot)、口蹄疫(foot and mouth disease)、蓝舌病(bluetongue)、家畜疥(mange)和/或虱病(pediculosis)。
25.在另一方面，可以将具有难闻味道(unpleasant taste)的化合物添加到旨在兽医用途的组合物以阻止动物在屏障部位咬和咀嚼。
26.优选地，用于本发明的组合物还提供能够在现有伤口、病变或瑕疵的部位或存在
这样的风险的区域抑制进一步感染侵入的屏障。可以根据本发明治疗的另一些类型的伤口包括脓疱、水疱、糜烂、开裂(fissure)和浸软(maceration)。
27.本文中使用的伤口的治疗包括慢性伤口、急性伤口、病变和/或瑕疵，例如疮、咬伤、溃疡、皮疹、烧伤、脓肿、贯穿、切口、划伤、撕裂、肿块、皮肤开裂、水疱、疣、和/或结痂。
28.可能与伤口相关或导致伤口并因此可以通过本文中描述的本发明治疗或预防的表面病痛和/或损伤的一些实例包括皮炎、昆虫叮咬、其他动物叮咬、创伤性伤口、手术后伤口、自身造成的伤口、皮肤癌、热烧伤、电烧伤、化学烧伤、辐射烧伤、冰烧伤、痘病、斑疹、丘疹、脓疱、斑块、瘘管、粉刺(comedone)、糜烂、鼻窦炎、大疱、鳞屑、疤痕、荨麻疹、鳞屑皮肤(scaly skin)、丘疹、囊泡、瘀点、病毒感染、细菌感染、真菌感染、酵母菌感染、痤疮、皮脂溢、家畜疥、昆虫过敏、变应性湿疹、非变应性湿疹和/或色素沉着过度。
29.可以通过本文中公开的组合物治疗或预防后续伤口的另一些皮肤病和/或损伤包括撕裂伤、撕脱伤、刺伤或擦伤、一度烧伤、二度烧伤、三度烧伤、冻伤、坏死性皮炎、皮肤红斑狼疮、蜱叮咬、跳蚤叮咬(flea bite)、疥疮(scabies)、耳斑(aural plaque)、乳头瘤病、布鲁里溃疡(buruli ulcer)、贝诺虫病(besnoitiosis)、荨麻疹、蝇蛆病、角癌(horn cancer)、疙瘩皮肤病(lumpy skin disease)、传染性脓疱性皮炎、趾皮炎、光敏化、绵羊痘(sheep pox)、山羊痘(goat pox)、牛痘、禽痘(fowl pox)、猪痘(swine pox)、肉瘤、蠕虫结节病(worm nodule disease)、犬脓皮病(canine pyoderma)、嗜皮菌病、毛囊炎、脓疱病、癣、rain scald、腐蹄病、口蹄疫、蓝舌病、绵羊疥癣、和/或虱病、牛皮疽(bovine farcy)、猫痤疮(feline acne)、马拉色菌皮炎(malassezia dermatitis)、痈(carbuncles)、疖(boil)、嗜酸性肉芽肿伴胶原变性、皮肤炎症、红腿综合征(red leg syndrome)、黑素瘤、非黑素瘤皮肤癌、疮口(sore mouth)、皮肤或鳃吸虫、鳞片或鳃感染、冬季溃疡病、甲壳类寄生物(crustacean parasite)、拔羽症(feather plucking)、面鳞癣(scaly face)、腿螨(leg mite)、羽螨(feather mite)、喙和羽毛病(beak and feather disease)、羽脱落(feather loss)、羽损伤(feather damage)、皮肤肿瘤、虱、蝇、蚋(gnat)、蜱(tick)、禽掌炎(bumblefoot)、split keel、翼尖水肿、鱼鳞病、蝇蛆病、壳破裂(shell fracture)、蜕皮病(dysecdysis)、鳞片腐烂(scale rot)、水疱病、红斑、瘀点、瘀斑、水蛭、牙龈病、糖尿病溃疡、肢端舔舐性皮炎(acral 1ick dermatitis)、天疱疮或皮肤。
30.可以通过本发明治疗或预防的病变可以有不同的外观和构造，例如线形、环形、硬币形(nummular)、靶形、蛇纹形、疱疹形和/或带状疱疹形。
31.在一些情况下，浅表皮肤病症在不治疗时可能导致更严重的伤口发展，例如皮疹可能会由于对象的抓、咬、啄、摩擦或其他身体动作而导致自己造成的皮肤穿孔(skin perforation)。因此，本发明可以用于这样的浅表皮肤病症。
32.在一些情况下，本发明中的组合物可以帮助维持皮肤健康并因此预防兽医学对象的病变。因此，本发明组合物的护肤作用的一些实例包括但不限于清洁、保湿、润湿、精制、平滑化、去角质、软化、修复、疏通、防晒、日晒防护、热保护、水分保护、吸收、脱敏、活肤(rejuvenating)、清除杂质、降低皮肤刺激、舒缓、清爽(refreshing)、毛皮保养和/或消毒。
33.为避免疑问，感染和/或伤口的皮肤护理、治疗或预防包括但不限于活的兽医学对象中皮肤、黏膜、毛发、毛皮、指甲、骨、爪、蹄、壳、鳞片、角、羽毛、象牙、鹿角或牙齿的预防性或纠正性措施或治疗。
34.优选地，本发明的组合物由安全的(例如符合gras)生物相容性组分(例如已经存在于食物链中的组分)制成。对于兽医用途，这对于进入人食物链的农场动物来源食品(牛乳、乳酪、肉等)是重要的。这也意味着使用本发明组合物产生的屏障可以逐渐自我降解，避免兽医或农民在治疗方案结束时将其移除的需要。也具有施加安全性固有性和使用者对使用的更大兴趣。
35.在一些用途中，本发明组合物凭借制备它们的组分，或者通过在组合物中包含染料或其他颜料而是有色的。有利地，这可以用于在施加组合物时允许颜色跟踪(例如，使得可以确定施加到对象身体的程度)和/或允许跟踪屏障的生物降解，例如以确定何时需要再施加组合物。可以根据本发明使用的染料的一些实例包括合成染料，例如专利蓝v(patent blue v)、或亮蓝fcf(brilliant blue fcf)、或亮黑bn(brilliant black bn)、或日落黄fcf(sunset yellow fcf)、或喹啉黄(quinoline yellow)、或丽春红4r(ponceau 4r)、或靛蓝胭脂红(indigo carmine)；天然来源的染料，例如叶黄素、或核黄素、或焦糖色、或叶绿素、或胡萝卜素、或甜菜碱、或花青素；和/或矿物染料，例如氧化钛、或铁氧化物和氢氧化物。
36.如实施例中所表明的，用于产生本发明组合物的原材料相对便宜并且组合物不需要复杂的合成，因为制备通过以下来进行：将多种组分溶解并混合在乙醇或类似溶剂中，随后进行包装，准备使用。
37.在使用中，使用本发明组合物的治疗将通常需要任选地将预施用的治疗剂(例如抗生素化合物)施加到对象上的治疗部位，并且在此之后将屏障组合物施加到该同一部位，使得通过挥发性溶剂的蒸发形成疏水性屏障。在治疗牛趾皮炎的情况下，或者实际上对于其他情况，该方法可以包括清洗治疗部位(即具有趾皮炎的动物的蹄或腿)的初始步骤。
38.现在将参照附图以实例而非限制的方式描述本发明的实施方案。然而，鉴于本公开内容，本发明的多个另外的方面和实施方案对于本领域技术人员将是明显的。
39.本文中使用的“和/或”应被视为具体公开了在具有或不具有另一个的情况下的两个指出的特征或组件中的每一个。例如“a和/或b”被认为具体公开了以下每一者：(i)a、(ii)b、以及(iii)a和b，就如同每一者在本文中单独陈述一样。
40.除非上下文中另外指示，否则对上文列出特征的描述和限定不限于本发明的任何具体方面或实施方案，并且同等地适用于所描述的所有方面和实施方案。
41.附图简述
42.图1.在存在或不存在保护屏障的情况下，抗生素喷雾对于模拟浆料的离体损失。
43.图2.自屏障金属释放(zn和cu)。在lb(细菌培养基)中在30℃下温和搅拌下24小时之后，从接触杀伤测定直接收集样品。上图是指绝对浓度(ppm)，而下图是指相对释放。
44.图3.接触杀伤结果。在lb中用大肠杆菌(e.coli)k12孵育24小时之后的log cfu/ml。由仅紫胶组合物组成的f0与对照实验(无紫胶)具有相同的细菌生长。注意：1.7log cfu/ml为检测限，并因此对于具有此结果的材料(f4、f6、f8、f11、f13、f14、f26、f27和f30，见表7)，没有形成细菌菌落。
45.图4.在处理之后第0天与第7天之间的运动性评分的体内改善(n＝7)。通过单尾wilcoxon匹配对检验进行统计学分析。
46.发明详述
47.本发明的组合物
48.在本发明的组合物中，可以使用紫胶或紫胶衍生物，本文中提及的“紫胶”包括紫胶和紫胶衍生物二者。这可以包括无蜡紫胶、脱蜡紫胶、脱蜡漂白紫胶、脱蜡且脱色紫胶、紫胶酯或打蜡紫胶(waxed shellac)。此外，使用的紫胶可以为粉末、片(flake)、块(lump)，或者在某些情况下可以作为溶液供应。紫胶是树上雌性紫胶虫(lac bug)分泌的树脂，并且一般产于印度和泰国。它经过加工，通常作为干片出售，或者其可以溶解在溶剂(例如醇)中以制成液体紫胶。紫胶容易从供应商如sigma或af suter&co.商购。优选地，本发明的屏障组合物包含10％w/w至70％w/w紫胶，更优选20％w/w至70％w/w紫胶，更优选30％至70％紫胶，更优选35％至70％紫胶，更优选35％至60％紫胶，并且最优选40％至60％紫胶，其中紫胶的量是指组合物中在其施加之前的％w/w量。在一些实施方案中，优选地，所使用紫胶类型为被批准作为食品添加剂的紫胶类型。
49.有利地，本发明组合物的ph可以例如通过使用具有缓冲特性的组分来控制。通常这样做使得使组合物具有适合于表面施加至非人动物对象的ph。高于ph 3、优选高于ph 4、并且最优选高于ph 4.5的ph适用于安全、生物相容的表面使用。作为ph的上限，优选地，根据本发明使用的组合物的ph低于9.0，更优选低于ph 8.5，更优选低于ph 8.0，更优选低于ph 7.4，并且最优选低于ph 6.5。
50.本发明人发现使用紫胶或紫胶衍生物优于使用其他树脂，其中一些树脂具有不期望的特性，例如具有变态反应问题的松香(rosin)。
51.通常，用于本发明的组合物可以通过将组分在挥发性溶剂中混合以产生均匀混合物而获得。通常有利的是将金属活性物质溶解在挥发性溶剂中，随后添加任意添加剂，最后添加紫胶。此顺序允许在添加添加剂(例如peg、tec和甘油)之前使金属化合物适当溶解，并有助于避免所得混合物异质，例如由于紫胶块引起。所述步骤顺序还意味着添加剂在添加紫胶之前是充分分散的，因为一些添加剂在较高浓度下在分散在组合物中之前可能导致紫胶沉淀。在一些情况下，金属活性物质将是抗感染金属活性物质。
52.在大多数情况下，在将添加剂添加到本文中所述组合物的情况下，以质量基准记录值。因此，浓度可以称为mmolal(mmol/kg)而不是mm(mmol/l)。此外，在使用％的情况下，它是指质量w/w％。
53.在本发明中，使用本发明组合物产生的疏水性屏障是“自支持的”，即它们在机械上是稳健的并且不需要用结构基质例如织造或非织造基质例如现有技术中使用的绷带或纱布进行稳定。然而，在一些情况下，可能期望提供具有提高的机械强度的屏障，并且在这些情况下，屏障组合物还可以包含纤维。纤维组分的一些实例包括但不限于纤维素，优选1.0至15wt％，并且更优选2.5至5.0wt％。
54.优选地，用于产生本发明组合物的挥发性溶剂为乙醇、丙酮-水混合物、异丙醇、丙醇或丁醇、及其组合。出于生物相容性的原因，可以优选使用乙醇、丙酮-水混合物、丙醇和丁醇以及异丙醇。在其中使用醇作为溶剂的情况下，其可以为伯醇、仲醇或叔醇。
55.可以用于本发明的另一些挥发性溶剂(例如沸点低于100℃的那些)的一些实例包括醚例如二乙醚、或四氢呋喃；酮例如甲基乙基酮；伯醇例如甲醇或乙醇、或苄醇；仲醇例如异丙醇；叔醇例如叔丁醇；丙酮-水混合物；乙酸乙酯-乙醇混合物；和/或具有上述溶剂中的任意者的二醇混合物。另一些可以的溶剂包括醛例如苯甲醛；羧酸例如乙酸、或乳酸、或丙
酸；醚例如二乙二醇丁基醚、或二乙二醇乙基醚、或二乙二醇甲基醚、或乙二醇丁基醚、或乙二醇乙醚、或乙二醇甲醚、或二氧六环；酮例如环己酮；伯醇例如戊醇；仲醇例如仲丁醇、或异丁基甲醇；叔醇例如双丙酮醇；萜类化合物例如香茅醇和/或具有与以上中任意者的二醇混合物。
56.在一些情况下，金属活性物质可以为抗感染金属活性物质，而在另一些情况下，可以出于其他目的添加金属活性物质例如以调节组合物的黏度。金属活性物质赋予的抗感染特性的程度也可以取决于组合物中金属活性物质的浓度。抗感染元素可以具有任何化学形态并且包括其组合，例如ag、cu、zn、fe、se、al、cr、mo、ga、co、bi、sb、li、ge、ti、和/或ce，更优选cu、zn、ag、fe和/或mo，最优选cu或zn。更一般的金属活性物质列表包括ag、cu、zn、fe、se、al、cr、mo、ga、co、bi、sb、li、ge、ti、ce、na、k、rb、be、mg、ca、sr、sc、ti、zr、hf、v、nb、w、mn、re、ru、ir、pd、pt、in、la、pr、nd、sm、eu、gd、tb、dy、ho和/或er，更优选cu、zn、fe、mg、ca、sr、ti、mn、ce、mo、ga、zr、gd、la、sm、gd、er、w和/或al，更优选cu、zn、fe、mg、ca、sr、ti、al和/或mn，并且最优选cu、zn、mg、ca和/或fe。用于产生本发明抗感染组合物的抗感染金属活性物质的一些实例包括铜、锌、银、铋和/或钴化合物，并且可以包括硒。金属活性物质包括羧酸铜配合物或羧酸锌配合物。合适的抗感染金属活性化合物的一些实例为氯化铜、乙酸铜、氧化铜、铜的氧代氢氧化物、氢氧化铜、氯化锌、乙酸锌、纳米氧化锌、普通氧化锌、氯化铁、氯化铝、乙酸钼、或高岭土。在一些情况下，可以使用抗感染金属活性物质的组合，例如铜和锌的组合，其任选地还可以包括硒。在另一些情况下，一种或更多种基于抗感染的金属活性物质可以与一种或更多种基于金属的赋形剂组合，而后者可以具有或可以不具有一些抗感染特性。如实施例所示，示出了这些物质中使用的抗感染金属可以导致或可以不导致最终的抗感染组合物。这将取决于精确的配方，包括但不限于金属的浓度和选择以及其化学形态。在不期望这些组合物具有抗感染特性的情况下，可以使用其他金属来调节最终组合物的物理特性。
57.优选地，金属活性物质或赋形剂以以下浓度存在于组合物中：5mmolal至3.5molal，更优选25mmolal至3.5molal，更优选50mmolal至3.5molal，更优选75mmolal至3.5molal，更优选100mmolal至3.5molal，更优选100mmolal至2molal，更优选100mmolal至1.5molal，更优选100mmolal至1molal，更优选100mmolal至750mmolal，更优选100mmolal至500mmolal，更优选150mmolal至500mmolal，最优选150mmolal至350mmolal。在一些情况下，相对于省略了金属活性物质的相应组合物(即包含单独紫胶的组合物)，金属活性物质或抗感染金属活性物质具有提高组合物黏度和/或提高屏障厚度的优点。
58.铜金属活性物质的一些具体实例包括铜edta、酒石酸铜、柠檬酸铜、己二酸铜、苯甲酸铜、马来酸铜、丙二酸铜、葡萄糖酸铜、阿司匹林铜、柠康酸铜、富马酸铜、戊二酸铜、氯碘羟喹铜、水杨醛苯甲酰腙铜、吡啶甲酸铜、丙氨酸铜、精氨酸铜、天冬氨酸铜、葡萄糖酸铜、甘氨酸铜、组氨酸铜、异亮氨酸铜、亮氨酸铜、赖氨酸铜、甲硫氨酸铜、苯丙氨酸铜、脯氨酸铜、丝氨酸铜、苏氨酸铜、酪氨酸铜、缬氨酸铜、甲酸铜、丙酸铜、异戊酸铜、新戊酸铜、苯乙酸铜、氰乙酸铜、氯乙酸铜、羟基乙酸铜、2-羟基丙酸铜、2-羟基丁酸铜、奎尼酸铜、丙酮酸铜、乙氧基乙酸铜、硫酸铜、硫氰酸铜、硫化铜、溴化铜、氟化铜、硝酸铜、碳酸铜、铜碳酸盐氢氧化物、亚硒酸铜、过氧化铜、四氨合铜硫酸盐、磷酸铜、或元素铜。
59.锌金属活性物质的一些具体实例包括锌edta、酒石酸锌、柠檬酸锌、己二酸锌、苯
甲酸锌、马来酸锌、丙二酸锌、葡萄糖酸锌、阿司匹林锌、柠康酸锌、富马酸锌、戊二酸锌、氯碘羟喹锌、水杨醛苯甲酰腙锌、吡啶甲酸锌、丙氨酸锌、精氨酸锌、天冬氨酸锌、葡萄糖酸锌、甘氨酸锌、组氨酸锌、异亮氨酸锌、亮氨酸锌、赖氨酸锌、甲硫氨酸锌、苯丙氨酸锌、脯氨酸锌、丝氨酸锌、苏氨酸锌、酪氨酸锌、缬氨酸锌、甲酸锌、丙酸锌、异戊酸锌、新戊酸锌、羟基乙酸锌、硫酸锌、磷酸锌、或者元素锌。
60.通常，本领域技术人员已知以其他方式对不溶的金属活性物质进行研磨可以有助于均质物质的配制。
61.发现根据本发明使用的组合物具有适合于表面施加至对象的黏度，接着形成保护性疏水性屏障。合适的黏度的一些实例包括大于50cp，更优选大于75cp，更优选大于100cp，更优选大于200，更优选大于500，更优选大于750，更优选大于1000cp，更优选大于2500cp，更优选大于5000cp，最优选大于10000cp。一般而言，对于作为喷雾施加的组合物，黏度可以为10cp至3000cp。在其中组合物作为涂料(paint)施加的情况下，可以使用例如具有大于1000cp，并且更优选大于2000cp的黏度的更黏稠的组合物。黏度测量可以在室温即25℃下进行。在一些实施方案中，金属活性物质的添加用于提高组合物的黏度例如提高至少50％，更优选提高至少100％，甚至更优选提高至少200％，并且最优选提高至少500％，如与在25℃下测量的不包含金属活性物质的相应组合物相比。
62.在使用中，本发明的组合物可以与其他治疗剂或非治疗剂例如一种或更多种抗生素和/或治疗剂组合使用或共施用。在一些实例中，另外的活性剂可以为抗生素剂、抗微生物剂(例如土霉素或氯己定)和/或止血活性物质。在一些实施方案中，组合物可以施加在其中已经施加一种或更多种抗生素或其他抗感染剂或治疗剂、消毒剂或其他药剂的部位上，从而在用治疗剂治疗的部位上提供保护性屏障，帮助防止治疗剂的损失，例如通过与环境接触而洗掉(washing off)的损失。作为替代或补充，本发明的组合物可以配制为使得其包含一种或更多种抗生素。批准用于动物用途的抗生素化合物的一些实例包括多种天然化合物的半合成修饰，例如β-内酰胺抗生素，包括青霉素(由青霉菌属(penicillium)中的真菌产生)、头孢菌素和碳青霉烯。仍然从活生物体中分离的抗生素包括氨基糖苷，而其他抗生素，例如磺胺类、喹诺酮类和唑烷酮类，仅通过化学合成产生。许多抗微生物化合物基于化学/生物合成来源分类为天然的、半合成的和合成的。安沙霉素类是一类抗生素，包括利福霉素、利福平(rifampin)利福平(rifampicin)、利福布丁(rifabutin)、利福喷丁(rifapentine)、利福拉齐(rifalazil)、abi-1657、及其类似物，其抑制细菌rna聚合酶并对革兰氏阳性菌和选择性革兰氏阴性菌具有优异效力。β内酰胺，例如青霉素(例如penzylpenicillin、阿莫西林(amoxicillin))、碳青霉烯(例如美罗培南(meropenem)、亚胺培南(imipenem))、头孢菌素(例如头孢氨苄(cephalexin)、头孢呋辛(cefuroxime))。天然存在的氨基糖苷例如链霉素(streptomycin)、新霉素(neomycin)、妥布霉素(tobramycin)、庆大霉素(gentamicin)、或半合成衍生物例如阿米卡星(amikacin)、奈替米星(netilmicin)。氟喹诺酮(例如环丙沙星(ciprofloxacin)、诺氟沙星(norfloxacin))、大环内酯类(例如红霉素(erythromycin)、克拉霉素(clarithromycin))、酮内酯类(例如泰利霉素(telithromycin))。四环素类例如四环素(tetracycline)、土霉素(oxytetracycline)、金霉素(chlortetracycline)、或多西环素(doxycycline)。糖肽类(例如万古霉素(vancomycin)、替考拉宁(teicoplanin))、林可酰胺(lincosamide)(例如林可霉素
(lincomycin)、匹利霉素(pirlimycin))、酰胺醇类(例如甲砜霉素(thiamphenico1)、氯霉素(chloramphenicol))、链霉素类(例如普那霉素(pristinamycin))、唑烷酮类(例如利奈唑胺(linezolid)、环丝氨酸)、截短侧耳素类(pleuromutilin)(例如泰妙菌素(tiamulin)、瑞他帕林(retapamulin))。莫匹罗星(mupirocin)、夫西地酸(fusidic acid)、多黏菌素b或杆菌肽经常表面使用并且也可以与本文中所述的本发明组合使用。优选的抗生素，例如表面使用用于蹄部和浅表伤口感染(例如趾皮炎)的那些，包括金霉素、土霉素和甲砜霉素。
63.在一些情况下，本文中所述的组合物可以与基于金属的治疗剂组合使用，所述基于金属的治疗剂例如硫酸铜(ii)、铜edta、锌edta、吡啶硫酮锌、银、硝酸银、磺胺嘧啶银和这些基于金属的治疗剂的混合物。在这种情况下，用于本发明的组合物可以在施加基于金属的治疗剂之后施加。
64.在一些情况下，可以使用表面抗细菌剂(非抗生素)。例如，对羟基苯甲酸酯、双胍类如氯己定、二胺、过氧化氢、酚例如三氯生、卤代酚例如氯二甲酚、碘、或者苯甲酸盐/酯如苯甲酸。
65.在一些情况下，也可以使用抗真菌剂。抗真菌剂的一些实例包括多烯类(例如两性霉素b、制霉菌素)、唑类例如氟康唑、酮康唑、克霉唑、咪康唑、特康唑、布康唑、克霉唑、益康唑、奥昔康唑、噻康唑、或硫康唑、烯丙胺和相关化合物例如特比萘芬(terbinafine)、托萘酯、布替萘芬(butenafine)、或萘替芬(naftifine)、吗啉相关化合物，例如阿莫罗芬(amorolfine)、以及环吡酮、龙胆紫(gentian violet)、硫化硒、锌吡啶硫酮十一碳烯酸盐和吡罗克酮乙醇胺。
66.在一些情况下，也可以使用抗原生动物剂(antiprotozoal)。例如，甲硝唑(同样为抗生素)或硝唑尼特(nitazoxanide)(也具有抗病毒活性)。
67.在一些情况下，上述抗生素或其他治疗剂的组合也可用于提高效力，例如新霉素、多黏菌素和杆菌肽。
68.在一些情况下，优选地，抗微生物组合物还包含一种或更多种亲水性添加剂，其在所述组合物施加至对象或个体的治疗部位之后用作增塑剂或加速屏障形成或二者。亲水性添加剂的一些实例包括tec(其中组合物优选地包含2％至30％，更优选3％至20％，最优选5％至15％)、聚亚烷基二醇例如peg，包括peg-400(其中组合物优选地包含2％至30％，更优选3％至20％，最优选5％至15％)、甘油(其中组合物优选地包含1％至20％，更优选2％至15％，最优选3％至10％)、己二醇(其中组合物优选地包含1％至20％，更优选2％至15％，最优选3％至10％)和三醋精(其中组合物优选地包含1％至20％，更优选2％至15％，最优选3％至10％)。
69.本发明人观察到，在一些情况下，可以在施加时将针对紫胶的非溶剂(即其中紫胶不溶解的溶液)与含紫胶的溶液混合以诱导立即形成固体屏障。例如，当紫胶的乙醇溶液与足量的甘油接触时，立即形成屏障。此外，可以使用其中一个室携带紫胶溶液，另一个室携带非溶剂(参见实施例2.1)(例如peg或甘油)的双组分筒(dual component cartridge)实现原位混合。本发明人还观察到，该过程需要更高量的非溶剂，与其上述作为亲水性添加剂的用途相比。例如，在混合两种组分时，所得的peg浓度应为30％至75％，最优选为33％至66％。作为一个另外的实例，所得甘油浓度应为20％至75％，最优选为25％至50％。
70.在一些情况下，优选地，抗感染组合物还包含一种或更多种疏水性屏障增强剂，例如以增强在将抗感染组合物施加至对象或个体并且至少一部分挥发性溶剂蒸发时所形成的屏障层的抗水性。疏水性屏障增强剂的一些实例包括癸酸(其中组合物优选地包含2％至30％，更优选3％至20％，最优选4％至10％)、辛酸(其中组合物优选地包含2％至20％，更优选3％至15％，最优选5％至12％)，油酸(其中组合物优选地包含2％至20％，更优选3％至15％，最优选5％至12％)、或月桂酸(其中组合物优选地包含2％至20％，更优选3％至15％，最优选5％至12％)。
71.在一些情况下，优选地，所述组合物还包含一种或更多种缓冲剂以抑制屏障降解，否则屏障降解可能过快。这在趾皮炎中是特别有利的，因为与碱性粪浆接触的屏障降解更快，并且通过包含另外的缓冲剂可以减慢屏障降解。这是因为紫胶在碱性条件下可变成水溶性的，并且粪浆的ph为约ph 8并且具有约100mm的缓冲能力，其由于紫胶的溶解将有助于屏障随时间降解。出于这个原因，期望的是根据本发明使用的组合物具有高于4.0的ph以使其适合于表面，但在使用中可尽可能长地将其保持低于ph 6.0或6.5以避免这样的损失。对这个问题的一个巧妙的解决方案是在组合物中包含缓冲剂，并且优选pka为4.0至6.5的缓冲剂。合适的缓冲剂组分的一些实例包括羧酸，包括单羧酸，例如苯甲酸、月桂酸、乙醇酸、乙酰丙酸(levinulic acid)、乳酸、丙酮酸、或甘油酸；二羧酸，例如己二酸(优选0.5％至5％)、壬二酸(优选0.5％至5％)、琥珀酸、庚二酸或癸酸；或三羧酸例如柠檬酸。本领域技术人员将已知不同种类的分子，包括但不限于氨基酸、脂肪酸、和α羟基酸，可以包含羧酸根侧基。这样的分子也可以适合作为本发明中的缓冲剂。
72.在一些情况下，优选地，组合物还包含抗炎剂或络合剂以增强金属活性物质的负载或溶解度。合适的抗炎剂或络合剂的一些实例为水杨酸、水杨酸钠和丙酸，或其化学衍生物。
73.在一些情况下，优选地，组合物还包含止血剂。例如，高岭土、硫酸铝、或沸石可以包含在其中伤口治疗包括血液凝固的应用中，例如在急性伤口的治疗中，例如在手术伤口或者在运动例如骑马期间或由役用动物例如农场犬导致的持续的伤害。止血剂(例如高岭土)的合适浓度的一些实例包括1％至40％，更优选2％至35％，更优选3％至30％，最优选5％至30％。
74.在一些情况下，所述组合物还包含止痛剂，例如乙酰水杨酸、水杨酸、三乙醇胺水杨酸、水杨酸镁和/或烟酸甲酯。也可以添加天然止痛剂，例如辣椒素。
75.在一些情况下，所述组合物还包含抗炎剂，例如布洛芬(ibuprofen)、双氯芬酸(diclofenac)、联苯乙酸(felbinac)、酮洛芬(ketoprofen)和/或吡罗昔康(piroxicam)。
76.在一些情况下，所述组合物还包含舒缓剂(soothing agent)，例如薄荷醇、桉树油、肉桂油和/或樟脑。
77.在一些情况下，所述组合物还包含止痒剂(anti-itching agent)，例如氢化可的松(hydrocortisone)。
78.优选地，所述组合物的所有组分均是批准的食品或饲料添加剂和/或取得了gras(“一般认可为安全(generally recognised as safe)”)试剂的资格。
79.制剂和用途
80.根据本发明使用的组合物可以用于预防或治疗感染和/或伤口。当它们用于治疗
或预防感染时，感染可以为细菌感染、真菌感染、寄生物感染或病毒感染。一般而言，所述组合物特别适合于治疗或预防细菌感染，即所述组合物为抗微生物组合物。通常，根据本发明使用的在挥发性溶剂中包含紫胶和金属活性物质或抗感染金属活性物质的组合物在表面施加至非人动物(例如哺乳动物)对象时能够形成疏水性屏障。在对对象进行表面施加时，本发明的组合物通常形成固体界面使得在数分钟内(例如在1、2、3、5或10分钟内)形成屏障。然而，这不是必需的，因为与环境水分接触，或在治疗农场动物(例如牛)的情况下，粪浆将导致立即形成疏水性屏障，使得本发明很好地适用于具有挑战性的环境，例如趾皮炎(例如牛趾皮炎)和乳房感染，例如乳房溃疡、乳房皮炎或乳房病变。另一些兽医用途包括使用液体敷料组合物用于乳头密封(teat sealing)或角去除(horn removal)。
81.根据本发明用于兽医用途的抗感染组合物可以用于一般伤口管理，尤其是在感染为潜在负担的情况下。这些包括慢性溃疡和急性伤口，包括创伤性伤口或手术后伤口。其中可用本发明组合物的伤口的一些实例包括开放性伤口(撕裂伤、撕脱伤、刺伤或擦伤伤口)、或慢性溃疡，例如糖尿病溃疡、布鲁里溃疡或另一些类型的伤口，例如烧伤、手术伤口或用于辅助治疗腐蹄病、创伤性病变、脓肿和轻微划伤或病变。根据本发明使用的组合物也有利于通过提供保护性环境和防止再感染来辅助治疗已经经历了愈合的闭合伤口。因此，所述组合物可以用于预防伤口。在一些实施方案中，液体敷料料组合物将以非处方(otc)组合物的形式提供。可根据本发明治疗的另一些兽医病症包括毛囊炎、脓疱病、癣、rain scald、腐蹄病、口蹄疫、蓝舌病、家畜疥和/或虱病。
82.根据本发明的抗感染组合物非常适合于其中动物的伤口管理可能特别具有挑战性的兽医应用。这些挑战包括周围环境中的高微生物负荷(致病性和非致病性)，以及频繁伤口清洁和再施加抗微生物剂通常不可行或不经济的事实。通常不鼓励使用标准敷料，因为这些敷料积聚粪便物质或其他腐屑。与需要隔离动物以施加和去除敷料来使用敷料相反，本发明中使用的组合物可以用于形成足够稳健以保护伤口，并且任选地还锁定预施加的抗生素或抗微生物剂，但随着时间降解的稳健的自支持疏水性屏障。这降低了频繁再施加抗生素或抗微生物剂的需要，并且不需要随后去除屏障。本发明还可以允许降低所使用的抗生素剂量。通常，由本发明组合物形成的疏水性屏障需要1至20天来降解，更优选2至10天，最优选3至7天。当屏障与粪浆接触时，降解速率通常更高。
83.在一些情况下，用于本发明的组合物基本上不包含二氧化硅(silicon dioxide)(硅石(silica))，即组合物。
84.作为替代或补充，用于本发明的组合物基本上不包含增韧剂，例如油，例如非干性或半干性油。增韧剂的一些实例为例如动物、植物、矿物或合成来源的甘油三酯油。合适的非干性或半干性油的一些实例包括松树油、桉树油、茶树油、玫瑰果油、大豆油、椰子油、蓖麻油、橄榄油、红花油和向日葵。
85.在本技术中，“基本上不包括”意指本发明的组合物不包括所述组分，或者仅包括最小量或痕量的所讨论组分，例如小于1.0％w/w，更优选小于0.5％w/w，还更优选小于0.1％w/w。
86.在一些情况下，本发明的组合物由所述组分组成或基本上由所述组分组成。
87.本发明组合物的一个优点是屏障对于水是非多孔的。在其中组合物形成具有孔的屏障的情况下，它们通常是小尺寸的孔，例如具有直径为1μm或更小的平均直径。
sp.)，例如铜绿假单胞菌(p.aeruginosa)；弧菌属(vibrio sp.)，如费氏弧菌(v.fisheri)；链球菌属(streptococcus sp.)，例如兽疫链球菌(s.zooepidemicus)、马链球菌(s.equi)、猪链球菌(s.suis)、乳房链球菌(s.uberis)、化脓性链球菌(s.pyogenes)和肺炎链球菌(s.pneumoniae)；克雷伯菌属(klebsiella sp.)，例如肺炎克雷伯菌(kpneumoniae)；微球菌属(micrococcus sp.)，例如藤黄微球菌(m.luteus)；梭菌属(clostridium sp.)，例如艰难梭菌(c.difficile)或产气荚膜梭菌(c.perfringens)；不动杆菌属(acinetobacter sp.)，例如鲍曼不动杆菌(a.baumannii)；分枝杆菌属(mycobacterium sp.)，例如结核分枝杆菌(m.tuberculosis)和牛分枝杆菌(m.bovis)；沙门氏菌属(salmonella sp)；丹毒丝菌属(erysipelothrix sp.)，例如红斑丹毒丝菌(e.rhusiopathiae)或猪丹毒杆菌(e.insidiosa)；棒状杆菌属(corynebacterium sp.)，例如微细棒状杆菌(c minutissimum)；钩端螺旋体属(leptospira sp.)，例如问号钩端螺旋体(l.interrogans)；丙酸菌属(cutibacterium sp.)，例如痤疮丙酸杆菌(c.acnes)；弯曲杆菌属(campylobacter sp.)例如胎儿弯曲杆菌(c.fetus)；克雷伯菌属(klebsiella sp.)，例如肺炎克雷伯菌(k.pneumoniae)、鼻硬化克雷伯菌(k.rhinoscleromatis)；二氧化碳嗜纤维菌属(capnocytophaga sp.)，例如犬咬二氧化碳嗜纤维菌(c.canimorsus)；弧菌属(珩brio sp.)，例如创伤弧菌(v.vulnificus)；巴氏杆菌属(pasteurella sp.)，例如多杀性巴斯德杆菌(p.multocida)；气单胞菌属(aeromonas sp.)，例如嗜水气单胞菌(a.hydrophila)；艾肯菌属(eikenella sp.)，例如侵蚀艾肯杆菌(e.corrodens)；支原体属(mycoplasma sp.)，例如肺炎支原体(m.pneumoniae)；鞘杆菌属(calymmatobacterium sp.)，例如肉芽肿头孢霉(c.granulomatis)；李斯特菌属(listeria sp.)，例如单核细胞增生李斯特菌(上.monocytogenes)；密螺旋体属(treponema)，例如品他密螺旋体(t.carateum)或奋森密螺旋体(t.vincentii)或嗜麦芽糖密螺旋体(t.maltophilum)或t.lecithinolyticum；巴尔通体属(bartonella sp.)，例如韩瑟勒巴通氏菌(b.henselae)；诺卡氏菌属(nocardia sp.)，例如巴西诺卡菌(n.brasiliensis)；耶尔森氏菌属(yersinia sp.)，例如鼠疫耶尔森菌(y.pestis)；沙雷氏菌属(serratia sp.)，例如黏质沙门氏菌(s.marcescens)；伯克霍尔德菌属(burkholderia sp.)，例如假鼻疽伯克霍尔德菌(b.pseudomallei)；放线菌属(actinomyces sp.)例如衣氏放线菌(a.israelii)；疏螺旋体属(borrelia sp.)，例如伯氏疏螺旋体(b.burgdorferi)；肠球菌属(enterococcus sp.)，例如粪肠球菌(e.faecalis)，或者真菌，包括念珠菌属(candida sp.)，例如白色念珠菌(c.albicans)；马拉色菌属(malassezia sp)，例如糠秕马拉色菌(mfurfur)和厚皮马拉色菌(mpachydermatis)；毛癣菌属(trycophyton sp.)，例如红色毛癣菌(t.rubrum)或指间毛癣菌(t.interdigitale)；小孢子菌属(microsporum sp.)例如犬小孢子菌(m.canis)、马小孢子菌(m.equinum)、奥杜盎小孢子菌(maudouinii)、石膏样小孢子菌(m.gypseum)、或猪小孢子菌(m.nahum)；表皮癣菌属(epidermophyton sp.)例如絮状表皮癣菌(e.floccosum)；镰刀菌属(fusarium sp)例如腐皮镰孢(f.solani)、小孢根霉(rhizopus microspores)；多变根毛霉属(rhizomucor sp.)例如微小根毛霉(r.pusillis)；毛霉属(mucor sp.)例如印度毛霉菌(m.indicus)；共头霉属(syncephalastrum sp.)例如总状共头霉(s.racemosumm)；小克银汉霉属(cunninghamella sp.)例如灰色小克银汉霉(c.bertholletiae)；鳞质霉属(apophysomyces sp.)例如a.elegans、横梗霉属(lichtheimia)例如伞状毛霉菌
(l.corymbifera)；瓶霉属(saksenaea sp.)例如s.erythrospora；曲霉属(aspergillus sp.)例如灰绿曲霉(a.glaucus)；芽生菌属(blastomyces sp.)例如皮炎芽生菌(b.dermatitidis)；球孢子菌属(coccidioides sp.)例如孢子菌(c.immitis)；隐球菌属(cryptococcus sp.)例如新生隐球菌(c.neoforman)；组织胞浆菌属(histoplasma sp.)例如荚膜组织胞浆菌(h.capsulatum)；旋孢腔菌属(cochliobolus sp)例如月状旋孢腔菌(c.lunatus)；cladophialophora sp.例如斑替支孢瓶霉(c.bantiana)；外瓶霉属(exophiala sp.)例如甄氏外瓶霉(e.jeanselmei)；棘壳孢菌属(pyrenochaeta sp.)例如p.romeroi；肺孢子菌属(pneumocystis sp.)例如耶氏肺孢子菌(p.jirovecii)；副球孢子菌属(paracoccidioides sp.)例如巴西副球孢子菌(p.brasiliensis)；孢子丝菌属(sporothrix sp.)例如申克侧孢(s.schenckii)；篮状菌属(talaromyces sp.)例如马尔尼菲蓝状菌(t.marneffei)，或寄生物例如疥螨属(sarcoptes sp.)例如人疥螨(s.scabiei)；利什曼原虫属(leishmania sp)例如杜氏利什曼虫(l.donovani)、巴西利什曼虫(l.braziliensis)、巴拿马利什曼原虫(l.panamensis)；钩口科(ancylostomatidae)例如钩虫属(ancylostoma sp.)或板口线虫属(necator sp.)；类圆线虫属(strongyloides sp.)例如粪类圆线虫(s.stercoralis)；盘尾属(onchocerca sp.)例如旋盘尾丝虫(o.volvulus)、双翅目幼体(dipterous larvae)，例如丝光绿蝇(lucilia sericata)、新陆原伏蝇(protophormia terraenovae)、嗜人锥蝇(cochliomyia hominivorax)、嗜人瘤蝇蛆(cordylobia anthropophaga)或麻蝇属(sarcophaga bercaea)；巴拉姆阿米巴属(balamuthia sp)例如狒狒巴拉姆希阿米巴(b.mandrillaris)，或棘阿米巴属(acanthamoebasp.)，或病毒例如乳头瘤病毒(papillomavirus)，肠病毒例如柯萨奇病毒(coxsackievirus)，软疣痘病毒属(molluscipoxvirus sp.)例如接触传染性软疣(molluscum contagiosum)、水痘病毒属(varicellovirus)或疱疹病毒(herpesvirus)。本文中使用的术语“抗微生物剂”理解为适用于这样的物质，包括抑制微生物附着于表面、杀伤微生物和/或抑制微生物繁殖，尤其是防止微生物从环境进入宿主或微生物对敷料的生物膜形成或定植的那些。术语“微生物”理解为包括所有微生物，包括上述细菌，以及真菌例如酵母菌、古生菌和原生生物和病毒。应相应地解释术语“微生物的”和“抗微生物的”。
100.在一些实施方案中，本发明的液体敷料组合物可以用于治疗或预防感染和/或伤口，其中感染是由病毒引起。
101.可以感染对象并且可以使用本发明的组合物治疗或预防的病毒的一些实例包括呼吸道病毒、胃肠病毒和皮肤病毒。
102.呼吸道病毒：鼻病毒、犬腺病毒(cav1和cav2)、犬副流感病毒(5型)、牛副流感病毒3型、流感病毒(例如流感病毒a-h3n2、h1n1、h2n2、h5n1、h1n2、h9n2、h7n9)、呼吸道合胞病毒(牛rsv，小鼠肺炎病毒)、天然循环的α-和β-冠状病毒(例如犬cov、猫cov、牛cov)、eb病毒(epstein-barr virus)、巨细胞病毒(cytomegalovirus)、1型牛疱疹病毒、水痘-带状疱疹病毒。
103.胃肠病毒：轮状病毒(例如禽和牛)、牛腺病毒()、牛病毒性腹泻病毒、杯状病毒和星状病毒。
104.皮肤病毒：犬细小病毒、eb病毒、巨细胞病毒、登革病毒、寨卡病毒、猴痘病毒、牛痘病毒、牛乳头瘤病毒1和2、口蹄疫病毒。
105.病毒组包括呼吸道病毒、胃肠病毒和皮肤病毒。因此，液体敷料组合物用于治疗或预防感染和/或伤口，其中感染由以下引起：腺病毒科(adenoviridae family)中的病毒例如犬腺病毒1、或者杯状病毒科(caliciviridae)病毒例如诺如病毒、或猫杯状病毒、或札幌病毒；或者冠状病毒科(coronaviridae family)中的病毒，例如犬cov、或猫cov、或牛cov，或猪流行性腹泻病毒；或者黄病毒科(flaviviridae family)中的病毒，例如登革病毒、或日本脑炎(japanese encephalitis)、或黄热病病毒(yellow fever virus)、或丙型肝炎病毒、或寨卡病毒、或西尼罗病毒(west nile virus)、或瘟病毒c；或者疱疹病毒科(herpesviridae family)中的病毒，例如马立克病病毒(marek’s disease virus)、猪疱疹病毒-1、马疱疹病毒-1或水痘-带状疱疹病毒、或eb病毒、或巨细胞病毒；或者正黏病毒科(orthomyxoviridae family)中的病毒，例如流感病毒a h3n2、或流感病毒a h1n1、或流感病毒a h2n2、或者乳头瘤病毒科(papillomaviridae family)中的病毒，例如牛乳头瘤病毒1型或2型；或者副黏病毒科(paramyxoviridae family)中的病毒，例如牛副流感病毒3型、或禽orthovulavirus 1、或小反刍动物麻疹病毒属病毒(small ruminant morbillivirus virus)；或者细小病毒科(parvoviridae family)中的病毒，例如犬细小病毒、或猪细小病毒；或者痘病毒科(poxviridae family)中的病毒，例如疙瘩皮肤病病毒、绵羊痘病毒、山羊痘病毒、猴痘病毒、或牛痘病毒；或者呼肠孤病毒科(reoviridae)病毒，例如蓝舌病毒、非洲马病病毒(african horse sickness virus)、轮状病毒a或轮状病毒b、或轮状病毒c；或者苯纽病毒科(phenuiviridae family)中的病毒，例如裂谷热病毒(riff valley fever virus)。
106.本发明在兽医领域具有应用，例如用于治疗非人动物，并且更特别地治疗非人哺乳动物，例如伴侣动物例如狗、猫和马，以及家畜物种，例如牛、山羊和绵羊。稀有/次要物种(例如m.u.m.s.，次要使用的次要物种)，包括用于农业的动物，例如羊驼或美洲驼、稀有宠物(exotic pet)、动物园动物和野生动物园中的动物以及类似动物也是这些新物质的潜在受益者。在一种特定应用中，本发明的抗微生物组合物用于治疗牛趾皮炎，并且更特别地用于治疗乳牛。在另一些应用中，本发明的抗微生物组合物用于乳牛中的乳房皮炎和截除术(amputation)后(包括爪截除术(claw amputation))；羊中腐蹄病；马中泥土热。本发明的组合物也可以用于对伤口和缝合，包括对狗、猫和马以及绵羊、猪和牛的绝育操作的术后保护。可使用本发明治疗的物种的一些实例包括牛(cow)、水牛(buffalo)、牦牛(yak)、猪、马、绵羊、山羊、美洲驼、羊驼、鹿、驴、瘤牛(zebus)、斑马(zebras)、大象、猩猩(orangutan)、黑猩猩(chimpanzee)、大猩猩(gorillas)、狐猴(lemur)、长臂猿(gibbon)、狒狒(baboon)、鸡、火鸡、鸭、鸸鹋(emu)、鹅、鸵鸟、猫、狗、雪貂(ferret)、沙鼠(gerbil)、仓鼠(hamster)、毛丝鼠(chinchilla)、大鼠、兔、爬行动物、两栖动物、鹦鹉、金丝雀(canary)、鸡形目(galliformes)、雁形目(anseriformes)和雀形目(passeriformes)。
107.对于其中动物可能咀嚼、咬或啄由本发明组合物形成的屏障的一些兽医应用，可能期望包含味道阻碍剂(taste deterrent)，例如将味苦组分添加到组合物以阻止这样的行为并延长屏障的寿命或消除对再施加的需要。
108.在其中组合物旨在施用于对象例如在治疗伤口或皮肤感染的实施方案中，载体或其他组分的精确性质可与施用组合物的方式或途径(通常通过表面路径)有关。
109.在一个实施方案中，本发明的组合物可以被配制成用于可用于治疗伤口、溃疡或
治疗或预防细菌感染的表面施用。本发明与表面产品的施加有助于伤口愈合的治疗用途。
110.在一些情况下，有效量的本文中的抗微生物组合物可以被配制成用于表面施加至动物皮肤、兽皮(hide)、毛皮(fur)、羽毛(feather)或垂肉(wattle)。一般而言，根据本发明的“表面施用”不包括施加于对象的齿。
111.在一些情况下，例如在组合物用于治疗或预防呼吸道病毒感染的情况下，组合物可以经鼻施用，例如使用在鼻道内衬或伸到鼻外的加载拭子(loaded swab)。
实施例
112.提供以下实施例以举例说明本发明的优选方面并且不旨在限制本发明的范围。
113.实施例1：初级制剂(primary formulation)
114.实施例1.1.s1b1
115.在乙醇中的30％脱蜡紫胶、100mmolal乙酸铜、100mmolal氯化锌。将乙酸铜和氯化锌称重到50ml falcon管中，并随后添加乙醇。将混合物人工均质化并使其混合约1小时。接着将紫胶添加到塑料瓶中并再次将混合物混合直至均质。
116.实施例1.2.s1b2
117.在乙醇中的40％脱蜡紫胶、100mmolal乙酸铜、100mmolal氯化锌。根据实施例1.1.，除了紫胶浓度为40％而不是30％。
118.实施例1.3.s1b3
119.在乙醇中的50％脱蜡紫胶、80mmolal乙酸铜、20mmolal氯化铜、100mmolal氯化锌。将乙酸铜、氯化铜和氯化锌称重到500ml塑料瓶中，并随后添加乙醇。将混合物人工均质化并使其混合约1小时。接着将紫胶添加到塑料瓶中并将混合物再次混合直至完全均质。
120.实施例1.4.s1b4
121.在乙醇中的60％脱蜡紫胶、50mmolal乙酸铜、50mmolal氯化铜、100mmolal氯化锌。将乙酸铜、氯化铜和氯化锌称重到500ml塑料瓶中，并随后添加乙醇。将混合物人工均质化并将其混合约1小时。接着将紫胶添加到塑料瓶中并将混合物再次混合直至完全均质。
122.实施例1.5.s1b5
123.在乙醇中的40％脱蜡紫胶(共混)、12％peg-400、5％甘油、100mmolal乙酸铜、100mmolal氯化锌。根据实施例1.2.，不同之处在于将peg-400和甘油添加至乙醇金属溶液并充分混合，然后添加紫胶。
124.实施例1.6.s1b6
125.在乙醇中的40％脱蜡紫胶(共混)、8％柠檬酸三乙酯(tec)、1％zno、100mmolal乙酸铜、100mmolal氯化锌。根据实施例1.2.，不同之处在于将tec和zno添加到乙醇金属溶液并充分混合，然后添加紫胶。
126.实施例1.7.s1b7
127.在乙醇中的50％脱蜡紫胶(共混)、10％柠檬酸三乙酯(tec)、5％癸酸、100mmolal乙酸铜、100mmolal氯化锌。根据实施例1.2的制剂，不同之处在于紫胶的浓度是50％而不是60％并且还将tec和癸酸混合，然后添加紫胶。
128.实施例1.8.s1b8
129.根据实施例1.5的制剂，但具有更高的金属浓度(190mmolal氯化锌，126mmolal乙
酸铜)并具有109mmolal水杨酸。将1.204g乙酸铜、1.236g氯化锌和0.7147g水杨酸添加到17.38g乙醇并充分混合。随后添加甘油(2.1236g)、peg-400(5.1359g)和紫胶(19.75g)并将浆料混合直至均质。
130.实施例1.9.s1b9
131.43％紫胶、174mmolal乙酸铜、174mmolal氯化锌、101mmolal水杨酸、8％甘油、10.5％peg 400、4.3％壬二酸、2.2％癸酸、1.8％己二酸。将1.2093g乙酸铜、0.8273g氯化锌和0.4843g水杨酸添加到7.82g乙醇并充分混合。随后添加壬二酸(1.5053g)、癸酸(0.756g)、己二酸(0.642g)、甘油(2.802g)、peg-400(3.6421g)和紫胶(15.1195g)，并将浆料混合直至均质。
132.实施例1.10：高金属盐
133.500mmolal氯化铜、450mmolal氯化锌、50mmolal氧化锌、40％紫胶。
134.实施例1.11：紫胶加金属氢氧化物
135.500mmolal氯化铜和500mmolal氯化锌(根据最终浓度)，用koh中和至ph 4，然后添加紫胶至40％w/w。
136.实施例1.12：高岭土-紫胶制剂
137.将3.92g高岭土添加至在乙醇中的15.65g 50％(w/w)酯化紫胶并充分混合。高岭土已被用作抗微生物铝的来源和用作止血剂。
138.实施例1.13：具有高岭土的s1b5
139.在乙醇中的40％脱蜡紫胶(共混)、12％peg-400、5％甘油、100mmolal乙酸铜、100mmolal氯化锌。将乙酸铜和氯化锌称重到50ml falcon管中，并随后添加乙醇。将混合物人工均质化并使其混合约1小时。将peg-400和甘油添加至乙醇金属溶液并充分混合，然后添加紫胶。在紫胶完全分散之后，以11％(w/w)添加高岭土。
140.实施例2.双组分制剂
141.实施例2.1
142.将实施例1.4中产生的材料装载到双组分筒的一个室中，另一个室包含甘油，并将其用手动敷料器枪(manual applicator gun)施加到活性趾皮炎病变。在两种组分混合后，立即形成胶状屏障。这表明使用敷料器枪装置递送本发明组合物的可行性。
143.组合物汇编表
144.关键来源和紫胶类型：
145.s-来自sigma的无蜡紫胶
146.afd-来自af suter&co的脱蜡(＜0.5％)紫胶
147.afw-来自af suter&co的打蜡紫胶
148.afe-来自af suter&co的预酯化紫胶(紫胶酯)
149.f-从供应商获得的所用的紫胶，即片(flake)(从供应商获得)
150.b-将所述片共混成粉末之后所用的紫胶
151.关键金属来源：
152.cuac-乙酸铜水合物(cu(ch3coo)2.
×
h2o)
153.fecl-氯化铁六水合物(fecl3.6h2o)
154.cucl-氯化铜(cucl2.2h2o)
155.zncl-氯化锌(zncl2)
156.zn ac-乙酸锌二水合物(zn(ch3coo)2.2h2o)
157.alcl-氯化铝(alcl3.6h2o)
158.moac-乙酸钼(mo2(ch3coo)4)
159.表1.包含紫胶和抗微生物金属的组合物的一些实例。除非另有说明，否则乙醇用作主体溶剂(bulk solvent)。
160.161.162.163.164.165.166.167.168.[0169][0170]a在使用丙酮：水混合物作为溶剂的制剂中没有添加乙醇。
[0171]
实施例3.浓度对相容性的影响
[0172]
实施例3.1
[0173]
制备70％紫胶在乙醇中的溶液，得到澄清的琥珀色黏稠溶液。在乙醇中稀释5倍后，获得自由流动的澄清黄色溶液，没有可见沉淀物。
[0174]
实施例3.2
[0175]
将200mmolal乙酸铜溶解在乙醇中，产生深蓝色/绿色溶液。将其在乙醇中以1：10稀释，产生澄清的淡蓝色溶液。然而，如果将其在17％紫胶溶液中以1：10稀释，则产生具有大量沉淀物的浑浊绿色溶液。
[0176]
实施例3.3
[0177]
固体紫胶可以添加至乙醇乙酸铜溶液(100mmolal)，以实现包含40％紫胶的不具有可见沉淀物的均质溶液。紫胶的浓缩乙醇溶液可以容易地在乙醇中稀释。然而，紫胶加上乙酸铜的乙醇溶液在稀释时形成紫胶沉淀物。这是出人意料的，因为高浓度材料是稳定的，而低浓度则不是。此外，这是有利的，因为：(1)这些溶液可以以高浓度产生，使得可以形成厚屏障；以及(2)因为稀释后(这将发生在施加时)，材料可以原位沉淀，从而更快地形成屏障。
[0178]
实施例4.在具有金属和不具有金属的情况下松香vs紫胶的保持测试
[0179]
材料
[0180]
将乙酸铜和氯化锌称重到falcon管中并使其溶解在乙醇中。接着，还添加紫胶或松香，并在使其在辊式混合器(roller mixer)上溶解过夜。通过使用辊式混合器将紫胶(40％和60％)或松香(40％)简单地溶解在乙醇中过夜来制备不具有乙酸铜和锌的等同材料。表2列出了制备的材料及其组成。
[0181]
表2.用于测试而制备的材料
[0182][0183][0184]
保持测试
[0185]
设置
[0186]
将具有第二沥青背衬(即底面；详述于下表中)的润湿毯方形物(carpet square)(5.5cm
×
5.5cm)用作润湿的牛蹄遇到的环境的近似。简而言之，将方形物浸入具有自来水的烧杯(beaker)中持续5秒至10秒，并随后将其使用夹具以27
°
的垂直角以底面(即沥青背衬(bitumen backing))向上固定在架(stand)上。
[0187]
表3.用于保持测试的表面的详情
[0188]
制造商vitrex产品代码ct503纱线100％聚丙烯第二背衬(secondary backing)聚酯最后背衬(final backing)聚酯绒头高度(pile height)3.5mm
±
0.5mm
[0189]
应用
[0190]
每次测试使用新的毯表面。用塑料注射器(5ml)将组合物始终施加在同一区域上。
施加量和随后损失的级分(即未附着至毯的级分)通过重量分析确定(表4)。
[0191]
表4.保持结果
[0192][0193][0194]
观察结果
[0195]
具有40％紫胶与cuac和zncl的组合物形成了最好的屏障。次优的为60％紫胶。其他材料不是很黏稠并且形成了薄且脆弱的屏障。
[0196]
结论
[0197]
出人意料的是，添加抗微生物金属使得能够在实现提高的黏度和改进的保持的同时使用较少量的紫胶。这些实验的结果表明，只有包含金属活性物质和紫胶的组合物才具有用于形成具有黏附特性的自支持疏水性屏障所需的黏度和黏附特性。相比之下，向松香添加金属活性物质未能提供实用的屏障。
[0198]
实施例5.黏度增强
[0199]
本发明人发现金属也可以用诱导紫胶组合物的黏度提高。下表(摘自主汇编表)提供了通过添加金属具有增强黏度的组合物的一些实例。为了避免疑问，此表仅用于举例说明目的，因为黏度增强可以用不同的金属组合和/或浓度来实现。
[0200]
表5.黏度增强材料的一些实例(来自表1)
[0201]
[0202][0203]
实施例6.对碱降解的抗性
[0204]
紫胶组合物在碱性条件(ph＞7)下是可溶的。这限制了其用于表面屏障的有效性，因为生理流体一般高于ph 7.0。此外，外部环境特别是在兽医应用中通常是碱性的。在趾皮炎的情况下，屏障必须承受与通常为碱性的粪浆接触(高至ph 9.0；参见salazar et al.characterization of dairy slurry in southern chile farms.agricultura tecnica，67(2)，155，2007；fordham&schwertmann，composition and reactions of liquid manure(g
ü
lle)，特别是参考phosphate：iii.ph-buffering capacity and organic components 1.journal of environmental quality，6(2)，140-144，1977；以及uc manuretechnical guide series；dairy manure nutrient content and forms)。与这样的溶液接触将导致紫胶屏障完整性迅速丧失。
[0205]
本发明人已发现金属的添加显著提高了屏障对模拟浆料(simulated slurry，ss)的抗性。出人意料的是，本文中所述的组合物大大优于包含更高含量紫胶的无金属屏障(表6)。本发明的这个特征在经济上是有利的，因为可以使用低得多的紫胶含量，从而导致更低的制备成本。
[0206]
此外，本发明人发现来自本发明组合物的湿屏障(即在溶剂蒸发之前)具有非常高的ss抗性。相比之下，未允许干燥24小时的仅紫胶的屏障表现很差。湿屏障对碱的抗性在农场环境中是特别有利的，因为在施加屏障之后蹄将很快接触湿浆。
[0207]
表6.暴露于模拟浆料(ss)的组合物的屏障存活(baarrier survival)。将ss未施加至湿屏障(如所制备的)或干屏障(使其在室温下干燥24小时)并确定质量回收。
[0208][0209][0210]
方法
[0211]
ss由75mmolal碳酸铵(ph8.9)组成，因为之前已表明这在养牛场的粪浆的化学范
639nm处的吸光度)用于产生测定样品的损失数据。在不存在屏障保护的情况下，93％所施加的专利蓝损失至测定流体；当使用屏障制剂时，损失降低大于5倍，达到18％。
[0220]
实施例8.通过屏障的接触杀伤和金属释放
[0221]
本文中公开的许多组合物在与流体接触时释放非常低水平的金属。尽管如此，这些组合物在接触时具有杀菌活性。相比之下，发现仅紫胶屏障没有可测量的接触杀伤活性。
[0222]
接触杀伤/金属释放方法
[0223]
将1ml的各材料转移到12孔板上的孔中并使其静置过夜。次日，将1ml的在lb中的大肠杆菌培养物(约106cfu/ml至107cfu/m1)添加到各个材料上方并在30℃下在温和搅拌(100rpm)下孵育24小时。在24小时之后，收集来自细菌培养基的样品以量化细菌浓度(琼脂板计数)和金属释放(icp-oes)。
[0224]
接触杀伤和金属释放中受试的材料
[0225]
表7.测定中受试的材料
[0226][0227]
金属释放结果
[0228]
在30℃下在温和搅拌下于lb(细菌培养基)中24小时之后从接触杀伤测定中直接收集样品。图2示出了zn和cu从屏障的释放。上图是指绝对浓度(ppm)，而下图是指相对释放。
[0229]
接触杀伤结果
[0230]
图3示出了在lb中与大肠杆菌k12孵育24小时之后的接触杀伤结果log cfu/ml。由
仅紫胶组合物组成的f0与对照实验(无紫胶)具有相同的细菌生长。1.7log cfu/ml为检测限，并因此对于具有此结果的材料(f4、f6、f8、f11、f13、f14、f26、f27和f30)，没有形成细菌菌落。
[0231]
实施例9.在具有趾皮炎的乳牛中的应用
[0232]
将s1b2施加至患有趾皮炎的乳牛的八蹄。简而言之，将蹄固定并用水冲洗以去除浆料和其他碎屑。施加金霉素(可喷洒制剂)并使其干燥数秒钟。随后，施加5g至10g的s1b2使得完全覆盖趾皮炎病变。在一分钟之后，将乳牛释放并使其返回院子(yard)，在那里蹄与浆料接触，以及每天数次将蹄浸在甲醛浴中(在乳牛被机器人挤乳之后)。在施加之后两天，评估了六只蹄的屏障完整性，这些中的四只蹄具有几乎完全的伤口覆盖，一只具有一些屏障残余，一只不具有可见的屏障。相比之下，到第七天，评估的七只蹄中的仅一只蹄具有一些残余物-其他六只完全不具有可见的屏障。
[0233]
实施例10.施加策略
[0234]
将数种制剂(表8)施加在患有趾皮炎的乳牛的蹄上。使用多种施加策略，根据实施例9施加产品。
[0235]
表8.
[0236][0237][0238]
实施例11.对癣病变的应用
[0239]
将s1b2施加在乳牛的两个癣病变上。将5g至10g s1b2直接施加在各伤口上(即不施加抗生素)。在7天之后，一个病变(在大腿区域)完全不存在屏障，但在另一个病变(在牛的背部)中观察到部分覆盖(约50％的病变区域)。
[0240]
实施例12.在乳房感染中的用途
[0241]
用s1b2治疗在其乳房中表现出广泛溃疡的牛。首先用0.5％氯己定对病变进行清洗和消毒。施加金霉素喷雾，并随后使用刷利用s1b2覆盖病变。在施加期间没有观察到明显的产品损失。
[0242]
实施例13.在乳房感染中的用途
[0243]
使用s1b1组合物代替s1b2重复实施例12中所述的实验。
[0244]
实施例14.在乳房感染中的用途
[0245]
重复实施例12中所述的实验，前提是仅用纸巾擦拭病变，并随后施加金霉素喷雾(即不使用氯己定)。在3天之后，约75％的病变区域仍被屏障覆盖，并且病变显示出可见的改善。
[0246]
实施例15.经治疗牛在运动性方面的临床改善
[0247]
对患有趾皮炎的牛用金霉素喷雾进行治疗，并随后根据实施例9添加s1b2屏障。它们的运动性(跛行)由兽医使用描述于表9中的标准运动评分系统(griffiths et al，2018)在处理当天(第0天)和7天之后进行评估。结果示于图4中。在该系统中，评分越低表示运动性越好；在第0天，运动性评分从1(不完美)至3(严重受损)之间变化。到第7天，运动性评分在统计上显著改善，其归一化为0(良好的运动性)或1。
[0248]
表9.运动性评分系统的描述(griffiths et al，2018)。
[0249][0250]
运动性工作的方法说明
[0251]
动物运动性通过兽医使用表9中描述的标准评分系统进行评估。使用单尾wilcoxon匹配对符号秩检验来测试统计学显著性。p＜0.05的值被认为是统计学上显著的。运动性评分在griffiths，b.e.，grove white，d.&oikonomou，g.a cross-sectional study into the prevalence of dairy cattle lameness and associated herd-level risk factors in england and wales.front.vet.sci.5，65(2018)中描述。
[0252]
本文中引用的所有文献均出于所有目的通过引用整体明确地并入。