并用药物的制作方法

1.本发明涉及：可用于癌症的治疗或预防的药物、组合、药物组合物、或制剂、和用于治疗或预防癌症的方法、以及产品等，所述药物是将具有ret激酶抑制活性的化合物与细胞周期蛋白依赖性激酶4和/或细胞周期蛋白依赖性激酶6 (cdk4/6)抑制剂组合而成的。


背景技术：

2.转染期间重排(rearranged during transfection：ret，转染重排)是于1985年鉴定的受体型酪氨酸激酶的原癌基因(非专利文献1)。
3.迄今为止，有人报道了：ret的基因异常(点突变或易位)的结果会引起异常激酶的生成，并参与癌化(非专利文献2)。例如，据报道，在肺癌中，ret通过染色体的易位与驱动蛋白家族蛋白kif5b或含卷曲螺旋结构域蛋白6 (coiled-coil domain contining 6，ccdc6)结合，生成具有活性型酪氨酸激酶活性的kif5b-ret或ccdc6-ret，获得癌化能力(非专利文献3、4)。另外，在甲状腺癌中也报道了由ret的第634位的半胱氨酸等的点突变或与h4基因等的易位引起的异常激酶的生成(非专利文献5、6)。有报道称：具有ret激酶抑制活性的化合物对这些具有基因异常的癌症有效(非专利文献7、8)。
4.alecensa (通用名称：盐酸阿来替尼、alectinib)作为alk抑制剂在日本和海外获批，但有报道称其还具有ret激酶抑制活性，通过非临床研究显示：其对ccdc6-ret融合基因阳性的肺癌细胞显示抗肿瘤效果(非专利文献9、10)。
5.细胞周期蛋白依赖性激酶4和/或6 (cyclin dependent kinase 4/6：cdk4/6)是细胞周期促成因子，参与各种恶性肿瘤的发生和发展。已知cdk4/6抑制剂通过抑制控制细胞周期的视网膜母细胞瘤蛋白(rb)的磷酸化来诱导g1期停滞，并抑制癌细胞的增殖(非专利文献11～13)。
6.作为在日本和海外获批的cdk4/6抑制剂，可列举：ibrance (通用名称：palbociclib (帕博西尼))、kisqali (通用名称：ribociclib (瑞博西尼))、verzenio (通用名称：abemaciclib (阿贝西尼))。
7.对于激素受体阳性、her2阴性的无法手术或复发性乳腺癌，帕博西尼以与内分泌治疗剂的并用(联合使用)作为使用方法在日本已获批，但目前在与分子靶向药的并用上还未获批。然而，在非临床研究中，关于cdk4/6抑制剂与其他分子靶向治疗药的并用效果，有一些报道(专利文献1)。例如，在移植了her2阳性乳腺癌细胞的pdx模型中显示：通过与egfr家族激酶抑制剂的并用，强烈抑制rb和s6rp，发挥高的抗肿瘤效果(非专利文献14)。另外，有报道称：通过与alk抑制剂的并用，强烈诱导细胞周期停滞或半胱天冬酶非依赖性的细胞死亡，从而在移植了具有alk基因异常的成神经细胞瘤细胞的scid小鼠中，抑制了肿瘤增殖(专利文献2、非专利文献15)。
8.然而，还没有关于cdk4/6抑制剂与具有ret激酶抑制活性的化合物的并用的报道。
9.现有技术文献专利文献
专利文献1：日本专利5832647；专利文献2：日本专利6479812；非专利文献非专利文献1：cell. 1985 sep; 42(2): 581-588非专利文献2：j biol chem. 1997 apr 4; 272(14): 9043-9047；非专利文献3：genome res. 2012 mar; 22(3): 436-445；非专利文献4：nat med. 2012 feb 12; 18(3): 378-381；非专利文献5：crit rev clin lab sci. 2016 aug; 53(4): 217-227；非专利文献6：plos one. 2016 nov 1; 11(11): e0165596；非专利文献7：cancer. 2016 dec 15; 122(24): 3856-3864；非专利文献8：lancet respir med. 2017 jan; 5(1): 42-50；非专利文献9：mol cancer ther. 2014; 13: 2910-2918；非专利文献10：2016 nov; 11(11): 2027-2032；非专利文献11：mol cancer ther. 2004 nov; 3(11): 1427-1438；非专利文献12：oncotarget. 2017 jul 4; 8(27): 43678-43691非专利文献13：clin cancer res. 2014 jul 15; 20(14): 3763-3774；非专利文献14：cancer cell. 2016 march 14; 29(3): 255-269；非专利文献15：clin cancer res. 2017 jun 1; 23(11): 2856-2868。


技术实现要素：

10.如上所述，希望开发可用于各种癌症的预防/治疗、并且具有优于现有的癌症的预防/治疗药的药效的药物。
11.为了用于各种癌症的治疗/预防或延长无进展生存期(progression free survival，pfs)，本发明的目的在于提供：将多种药物组合而成的新型药物、组合、药物组合物、或制剂、以及使用了它们的癌症的治疗方法或产品等。
12.本发明人将具有ret激酶抑制活性的化合物与cdk4/6抑制剂组合使用，结果意外地发现：这些药剂的并用可取得优于单剂给药的肿瘤缩小效果，从而完成了本发明。
13.即，本发明涉及以下的发明。
14.《1a》 用于治疗或预防癌症的药物，该药物是将具有ret激酶抑制活性的化合物与细胞周期蛋白依赖性激酶4和/或细胞周期蛋白依赖性激酶6 (cdk4/6)抑制剂组合而成的。
15.《1b》 用于治疗或预防癌症的药物，该药物是将具有ret激酶抑制活性的化合物与细胞周期蛋白依赖性激酶4和/或细胞周期蛋白依赖性激酶6 (cdk4/6)抑制剂分别或一起组合而成的。
16.《1c》 具有ret激酶抑制活性的化合物与细胞周期蛋白依赖性激酶4和/或细胞周期蛋白依赖性激酶6 (cdk4/6)抑制剂的组合，该组合用于治疗或预防癌症。
17.《1d》 具有ret激酶抑制活性的化合物与细胞周期蛋白依赖性激酶4和/或细胞周期蛋白依赖性激酶6 (cdk4/6)抑制剂的组合，该组合分开或同时给药，用于治疗或预防癌症。
18.《1e》 用于治疗或预防癌症的药物组合物，该药物组合物是将具有ret激酶抑制活
性的化合物与细胞周期蛋白依赖性激酶4和/或细胞周期蛋白依赖性激酶6 (cdk4/6)抑制剂组合而成的。
19.《1f》 用于治疗或预防癌症的药物制剂，该药物制剂是将具有ret激酶抑制活性的化合物与细胞周期蛋白依赖性激酶4和/或细胞周期蛋白依赖性激酶6 (cdk4/6)抑制剂组合而成的。
20.《1-2》 《1a》～《1e》所述的药物、组合、药物组合物或制剂，其为配合剂的形态。
21.《1-3》 《1a》～《1-2》所述的药物、组合或制剂，其中，上述具有ret激酶抑制活性的化合物与上述cdk4/6抑制剂分开给药。
22.《1-4》 《1a》～《1-2》所述的药物、组合或制剂，其中，上述具有ret激酶抑制活性的化合物与上述cdk4/6抑制剂同时或依次给药。
23.《2》 药物或药物组合物，该药物或药物组合物包含具有ret激酶抑制活性的化合物作为有效成分，用于与cdk4/6抑制剂并用以治疗或预防癌症。
24.《2-2》 《2》所述的药物或药物组合物，其中，上述具有ret激酶抑制活性的化合物与上述cdk4/6抑制剂同时给药。
25.《2-3》 《2》～《2-2》所述的药物或药物组合物，其中，上述具有ret激酶抑制活性的化合物在上述cdk4/6抑制剂的给药前或给药后进行给药。
26.《3》 药物或药物组合物，该药物或药物组合物包含cdk4/6抑制剂作为有效成分，用于与具有ret激酶抑制活性的化合物并用以治疗或预防癌症。
27.《3-2》 《3》所述的药物或药物组合物，其中，上述cdk4/6抑制剂与上述具有ret激酶抑制活性的化合物同时给药。
28.《3-3》 《3》～《3-2》所述的药物或药物组合物，其中，上述cdk4/6抑制剂在上述具有ret激酶抑制活性的化合物的给药前或给药后进行给药。
29.《4》 《1a》～《3-3》中任一项所述的药物、组合、药物组合物或药物制剂，其中，上述具有ret激酶抑制活性的化合物为选自阿来替尼(alectinib)、凡德他尼(vandetanib)、卡博替尼(cabozantinib)、索拉非尼(sorafenib)和塞尔帕替尼(selpercatinib)的化合物、或其盐、或其水合物。
30.《4-2》 《1a》～《3-3》中任一项所述的药物、组合、药物组合物或药物制剂，其中，上述具有ret激酶抑制活性的化合物为选自阿来替尼、凡德他尼、卡博替尼和塞尔帕替尼的化合物、或其盐、或其水合物。
31.《4-3》 《1a》～《3-3》中任一项所述的药物、组合、药物组合物或药物制剂，其中，上述具有ret激酶抑制活性的化合物为阿来替尼或塞尔帕替尼、或其盐。
32.《4-4》 《1a》～《3-3》中任一项所述的药物、组合、药物组合物或药物制剂，其中，上述具有ret激酶抑制活性的化合物为阿来替尼或其盐。
33.《4-5》 《1a》～《3-3》中任一项所述的药物、组合、药物组合物或药物制剂，其中，上述具有ret激酶抑制活性的化合物为选自阿来替尼、普拉替尼(pralsetinib)、凡德他尼、卡博替尼、索拉非尼和塞尔帕替尼的化合物、或其盐、或其水合物。
34.《4-6》 《1a》～《3-3》中任一项所述的药物、组合、药物组合物或药物制剂，其中，上述具有ret激酶抑制活性的化合物为选自阿来替尼、普拉替尼、凡德他尼、卡博替尼和塞尔帕替尼的化合物、或其盐、或其水合物。
35.《4-7》 《1a》～《3-3》中任一项所述的药物、组合、药物组合物或药物制剂，其中，上述具有ret激酶抑制活性的化合物为阿来替尼、普拉替尼、凡德他尼或塞尔帕替尼、或其盐。
36.《4-8》 《1a》～《3-3》中任一项所述的药物、组合、药物组合物或药物制剂，其中，上述具有ret激酶抑制活性的化合物为阿来替尼、普拉替尼或凡德他尼、或其盐。
37.《4-9》 《1a》～《3-3》中任一项所述的药物、组合、药物组合物或药物制剂，其中，上述具有ret激酶抑制活性的化合物为盐酸阿来替尼。
38.需要说明的是，例如《1a》～《3-n》 (n为分支号的整数)是指包含《1a》～《1f》、《2》、《2-2》～《2-n》、《3》、《3-2》～《3-n》。下同。
39.《5》 《1a-e》、《1-2》～《4-9》所述的药物、组合、药物组合物或药物制剂，其中，上述阿来替尼或其盐是以1天2次、每次以游离体换算计为20mg、40mg、60mg、80mg、120mg、160mg、220mg、240mg、300mg、460mg、600mg、760mg或900mg进行给药。
40.《5-2》 《1a》～《4-9》所述的制剂，其中，上述制剂的每单位剂型包含以游离体换算计为20mg、40mg或150mg的阿来替尼或其盐。
41.《6》 《1a》～《5-2》中任一项所述的药物、组合、药物组合物或制剂，其中，上述cdk4/6抑制剂选自帕博西尼、阿贝西尼、瑞博西尼、凡德他尼和2-羟基-1-[2-[[9-(4-甲基环己基)吡啶并[4,5]吡咯并[1,2-d]嘧啶-2-基]氨基]-7,8-二氢-5h-1,6-萘啶-6-基]乙烯酮。
[0042]
《6-2》 《1a》～《5-2》中任一项所述的药物、组合、药物组合物或制剂，其中，上述cdk4/6抑制剂为帕博西尼或阿贝西尼。
[0043]
《7》 《1a》～《6-2》中任一项所述的药物、组合、药物组合物或制剂，其中，上述癌症具有ret基因与其他基因的融合基因和/或ret蛋白与其他蛋白的融合蛋白。
[0044]
《7-2》 《7》所述的药物、组合、药物组合物或制剂，其中，上述其他基因和蛋白为kif5b、ccdc6、ncoa4或trim33。
[0045]
《7-3》 《7》所述的药物、组合、药物组合物或制剂，其中，上述ret基因与其他基因的融合基因和ret蛋白与其他蛋白的融合蛋白包含：ret基因或蛋白的酪氨酸激酶结构域；以及其他基因或蛋白的卷曲螺旋结构域。
[0046]
《8》 《1a》～《7-3》中任一项所述的药物、组合、药物组合物或制剂，其中，上述癌症在ret中具有突变。
[0047]
《8-2》 《8》所述的药物、组合、药物组合物或制剂，其中，上述ret中的突变是引起ret酪氨酸激酶的活化的突变。
[0048]
《9》 《1a》～《8-2》中任一项所述的药物、组合、药物组合物或制剂，其中，上述癌症选自急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性淋巴性白血病、慢性淋巴性白血病、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、脑瘤(脑肿瘤)、成神经细胞瘤、神经胶质瘤、甲状腺癌、骨髓增生异常综合征、头颈部癌、食道癌、胃癌、大肠癌、结肠直肠癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、胰腺癌、肝癌、胆囊癌、皮肤癌、恶性黑色素瘤、肾癌、肾盂/输尿管癌、膀胱癌、子宫癌、睾丸癌、前列腺癌、和由该肿瘤转移的肿瘤。
[0049]
《9-2》 《1a》～《8-2》中任一项所述的药物、组合、药物组合物或制剂，其中，上述癌症选自甲状腺癌、肺癌、大肠癌、恶性黑色素瘤和慢性骨髓性白血病。
[0050]
《9-3》 《1a》～《8-2》中任一项所述的药物、组合、药物组合物或制剂，其中，上述癌
症选自甲状腺髓样癌、非小细胞肺癌、大肠癌、spitz痣样增生和慢性骨髓单核细胞性白血病。
[0051]
《10》 《1a》～《9-3》中任一项所述的药物、组合、药物组合物或制剂，其中，上述癌症选自甲状腺髓样癌、非小细胞肺癌和spitz痣样增生。
[0052]
《10-2》 《1a》～《9-3》中任一项所述的药物、组合、药物组合物或制剂，其中，上述癌症为甲状腺髓样癌或非小细胞肺癌。
[0053]
《10-3》 《1a》～《9-3》中任一项所述的药物、组合、药物组合物或制剂，其中，上述癌症为非小细胞肺癌。
[0054]
《11》 治疗或预防癌症的方法，该方法包括：将有效量的具有ret激酶抑制活性的化合物和有效量的cdk4/6抑制剂组合给予至对象。
[0055]
《11-2》 《11》所述的方法，其中，上述具有ret激酶抑制活性的化合物与上述cdk4/6抑制剂分开给药。
[0056]
《11-3》 《11》所述的方法，其中，上述具有ret激酶抑制活性的化合物与上述cdk4/6抑制剂同时或依次给药。
[0057]
《12》 增强具有ret激酶抑制活性的化合物对癌症的治疗效果的方法，该方法包括：向对象给予有效量的cdk4/6抑制剂。
[0058]
《12-2》 《12》所述的方法，其中，上述cdk4/6抑制剂与上述具有ret激酶抑制活性的化合物同时给药。
[0059]
《12-3》 《12》所述的方法，其中，上述cdk4/6抑制剂在上述具有ret激酶抑制活性的化合物的给药前或给药后进行给药。
[0060]
《13》 延长肿瘤的无进展生存期的方法，该方法包括：将有效量的具有ret激酶抑制活性的化合物和有效量的cdk4/6抑制剂组合给予至对象。
[0061]
《13-2》 《13》所述的方法，其中，上述具有ret激酶抑制活性的化合物与上述cdk4/6抑制剂分开给药。
[0062]
《13-3》 《13》所述的方法，其中，上述具有ret激酶抑制活性的化合物与上述cdk4/6抑制剂同时或依次给药。
[0063]
《14》 《12》～《13-3》中任一项所述的方法，其中，上述癌症具有ret基因与其他基因的融合基因和/或ret蛋白与其他蛋白的融合蛋白。
[0064]
《14-2》 《14》所述的方法，其中，上述其他基因和蛋白为kif5b、ccdc6、ncoa4或trim33。
[0065]
《14-3》 《14》所述的方法，其中，上述ret基因与其他基因的融合基因和上述ret蛋白与其他蛋白的融合蛋白包含：ret基因或蛋白的酪氨酸激酶结构域；以及其他基因或蛋白的卷曲螺旋结构域。
[0066]
《15》 《12》～《13-3》中任一项所述的方法，其中，上述癌症在ret中具有突变。
[0067]
《15-2》 《15》所述的方法，其中，上述ret中的突变是引起ret酪氨酸激酶的活化的突变。
[0068]
《16》 《12》～《15-2》中任一项所述的方法，其中，上述癌症选自急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性淋巴性白血病、慢性淋巴性白血病、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、脑瘤、成神经细胞瘤、神经胶质瘤、甲状腺癌、骨髓增生异常综合征、头颈部癌、食道
癌、胃癌、大肠癌、结肠直肠癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、胰腺癌、肝癌、胆囊癌、皮肤癌、恶性黑色素瘤、肾癌、肾盂/输尿管癌、膀胱癌、子宫癌、睾丸癌、前列腺癌、和由该肿瘤转移的肿瘤。
[0069]
《16-2》 《12》～《15-2》中任一项所述的方法，其中，上述癌症为甲状腺癌、大肠癌或肺癌。
[0070]
《16-3》 《12》～《15-2》中任一项所述的方法，其中，上述癌症为甲状腺髓样癌或非小细胞肺癌。
[0071]
《17》 《12》～《16-3》中任一项所述的方法，其中，上述癌症为非小细胞肺癌。
[0072]
《18》 用于抑制肿瘤增殖的方法，该方法包括：将有效量的具有ret激酶抑制活性的化合物和有效量的cdk4/6抑制剂组合给予至对象。
[0073]
《18-2》 《18》所述的方法，其中，上述具有ret激酶抑制活性的化合物与上述cdk4/6抑制剂分开给药。
[0074]
《18-3》 《18》所述的方法，其中，上述具有ret激酶抑制活性的化合物与上述cdk4/6抑制剂同时或依次给药。
[0075]
《19》 《18》～《18-3》中任一项所述的方法，其中，上述癌症具有ret基因与其他基因的融合基因和/或ret蛋白与其他蛋白的融合蛋白。
[0076]
《19-1》 《19》所述的方法，其中，上述其他基因和蛋白为kif5b、ccdc6、ncoa4或trim33。
[0077]
《19-2》 《19》所述的方法，其中，上述ret基因与其他基因的融合基因和ret蛋白与其他蛋白的融合蛋白包含：ret基因或蛋白的酪氨酸激酶结构域；以及其他基因或蛋白的卷曲螺旋结构域。
[0078]
《19-3》 《18》～《18-3》中任一项所述的方法，其中，上述癌症在ret中具有突变。
[0079]
《19-4》 《19-3》中任一项所述的方法，其中，上述ret中的突变是引起ret酪氨酸激酶的活化的突变。
[0080]
《19-5》 《18》～《18-3》中任一项所述的方法，其中，上述癌症选自急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性淋巴性白血病、慢性淋巴性白血病、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、脑瘤、成神经细胞瘤、神经胶质瘤、甲状腺癌、骨髓增生异常综合征、头颈部癌、食道癌、胃癌、大肠癌、结肠直肠癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、胰腺癌、肝癌、胆囊癌、皮肤癌、恶性黑色素瘤、肾癌、肾盂/输尿管癌、膀胱癌、子宫癌、睾丸癌、前列腺癌、和由该肿瘤转移的肿瘤。
[0081]
《19-6》 《18》～《18-3》中任一项所述的方法，其中，上述癌症为甲状腺癌、大肠癌或肺癌。
[0082]
《19-7》 《18》～《18-3》中任一项所述的方法，其中，上述癌症为甲状腺髓样癌或非小细胞肺癌。
[0083]
《19-8》 《18》～《18-3》中任一项所述的方法，其中，上述癌症为非小细胞肺癌。
[0084]
《20》 《18》～《19-8》中任一项所述的方法，其中，上述具有ret激酶抑制活性的化合物为选自阿来替尼、凡德他尼、卡博替尼、索拉非尼和塞尔帕替尼的化合物、或其盐、或其水合物。
[0085]
《20-2》 《18》～《19-8》中任一项所述的方法，其中，上述具有ret激酶抑制活性的化合物为选自阿来替尼、凡德他尼、卡博替尼、索拉非尼和塞尔帕替尼的化合物、或其盐、或其水合物。
[0086]
《20-3》 《18》～《19-8》中任一项所述的方法，其中，上述具有ret激酶抑制活性的化合物为选自阿来替尼和塞尔帕替尼的化合物、或其盐。
[0087]
《20-4》 《18》～《19-8》中任一项所述的方法，其中，具有ret激酶抑制活性的化合物为阿来替尼或其盐。
[0088]
《20-5》 《18》～《19-8》中任一项所述的方法，其中，上述具有ret激酶抑制活性的化合物为选自阿来替尼、普拉替尼、凡德他尼、卡博替尼、索拉非尼和塞尔帕替尼的化合物、或其盐、或其水合物。
[0089]
《20-6》 《18》～《19-8》中任一项所述的方法，其中，上述具有ret激酶抑制活性的化合物为选自阿来替尼、普拉替尼、凡德他尼、卡博替尼、索拉非尼和塞尔帕替尼的化合物、或其盐、或其水合物。
[0090]
《20-7》 《18》～《19-8》中任一项所述的方法，其中，上述具有ret激酶抑制活性的化合物为选自阿来替尼、普拉替尼、凡德他尼和塞尔帕替尼的化合物、或其盐。
[0091]
《20-8》 《18》～《19-8》中任一项所述的方法，其中，具有ret激酶抑制活性的化合物为选自阿来替尼、普拉替尼和凡德他尼的化合物、或其盐。
[0092]
《20-9》 《18》～《19-8》中任一项所述的方法，其中，具有ret激酶抑制活性的化合物为盐酸阿来替尼。
[0093]
《21》 《18》～《19-8》中任一项所述的方法，其中，上述阿来替尼或其盐是以1天2次、每次以游离体换算计为20mg、40mg、60mg、80mg、120mg、160mg、220mg、240mg、300mg、460mg、600mg、760mg或900mg进行给药。
[0094]
《22》 《18》～《21》中任一项所述的方法，其中，上述cdk4/6抑制剂选自帕博西尼、阿贝西尼、瑞博西尼和2-羟基-1-[2-[[9-(4-甲基环己基)吡啶并[4,5]吡咯并[1,2-d]嘧啶-2-基]氨基]-7,8-二氢-5h-1,6-萘啶-6-基]乙烯酮。
[0095]
《22-2》 《18》～《21》中任一项所述的方法，其中，上述cdk4/6抑制剂为帕博西尼或阿贝西尼。
[0096]
《23》 产品，该产品包括：(1)含有具有ret激酶抑制活性的化合物的制剂、(2)容器和(3)指示书(产品说明书)或标签，该指示书或标签显示：为了治疗癌症而将上述具有ret激酶抑制活性的化合物和至少一种cdk4/6抑制剂组合给予至对象。
[0097]
《23-2》 产品，该产品包括：(1)含有cdk4/6抑制剂的制剂、(2)容器和(3)指示书或标签，该指示书或标签显示：为了治疗癌症而将上述cdk4/6抑制剂和至少一种具有ret激酶抑制活性的化合物组合给予至对象。
附图说明
[0098]
[图1]显示对于人ret融合基因阳性非小细胞肺癌株lc-2/ad细胞，通过阿来替尼与培美曲塞、紫杉醇、卡铂、长春瑞滨、吉西他滨、伊立替康、帕博西尼、saha、bkm120、gedatolisib、依维莫司或luminespib的单独和并用而产生的50%细胞增殖抑制浓度的曲线图。
[0099]
[图2]显示对于在小鼠原b细胞株ba/f3中导入kif5b-ret融合基因而得的ba/f3-kif5b-ret细胞，通过阿来替尼和帕博西尼或阿贝西尼的单独和并用而产生的50%细胞增殖抑制浓度的曲线图。
[0100]
[图3]显示对于移植了ba/f3-kif5b-ret细胞的balb/c-nu (裸)小鼠，通过阿来替尼(20mg/kg、1天1次、口服给药15天)与帕博西尼(75mg/kg、1天1次、口服给药15天)的并用给药而产生的各给药组的肿瘤体积(平均值+标准偏差)和体重的变化率的曲线图。
[0101]
[图4]显示对于lc-2/ad细胞和ba/f3-kif5b-ret细胞，通过阿来替尼和帕博西尼的单独和并用而产生的膜联蛋白v结合量的变化的曲线图。
[0102]
[图5]显示对于lc-2/ad细胞和ba/f3-kif5b-ret细胞，通过阿来替尼和帕博西尼的单独和并用而产生的ret、s6、rb和各自的磷酸化蛋白的表达量的图。使用肌动蛋白(actb)作为上样对照(loading control)。
[0103]
[图6]显示对于lc-2/ad细胞和ba/f3-kif5b-ret细胞，通过blu-667或凡德他尼和帕博西尼的单独和并用而产生的50%细胞增殖抑制浓度的曲线图。
具体实施方式
[0104]
本发明涉及：用于治疗或预防癌症的药物、组合、药物组合物、制剂、治疗或预防癌症的方法、或用于抑制肿瘤增殖的方法，所述药物是将对癌症治疗有效的、具有ret激酶抑制活性的化合物和cdk4/6抑制剂组合而成的。
[0105]
具有ret激酶抑制活性的化合物“具有ret激酶抑制活性的化合物”也称为ret抑制剂，是指抑制ret激酶的活性的药剂，优选为与ret激酶结合、并具有抑制该活性的作用的药剂。
[0106]
作为具体例子，可列举选自下述的化合物等：
・
阿来替尼(化合物名称：9-乙基-6,6-二甲基-8-[4-(吗啉-4-基)-哌啶-1-基]-11-氧代-6,11-二氢-5h-苯并[b]咔唑-3-甲腈)或其盐、优选为盐酸阿来替尼；
・
凡德他尼(化合物名称：n(-4-溴-2-氟苯基)-6-甲氧基-7-[(1-甲基哌啶-4-基)甲氧基]喹唑啉-4-胺)或其盐；
・
blu-667 (普拉替尼；化合物名称：顺式-n-{(1s)-1-[6-(4-氟-1h-吡唑-1-基)吡啶-3-基]乙基}-1-甲氧基-4-{4-甲基-6-[(5-甲基-1h-吡唑-3-基)嘧啶-2-环己甲酰胺(
カロイミド
)]或其盐；
・
卡博替尼(化学名称：n-(4-(6,7-二甲氧基喹啉-4-基氧基)苯基)-n
’‑
(4-氟苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺)或其盐、优选为卡博替尼(2s)-羟基丁二酸盐；
・
索拉非尼(化合物名称：4-{4-[3-(4-氯-3-三氟甲基苯基)脲基]苯氧基}-n
2-甲基吡啶-2-甲酰胺单(4-甲基苯磺酸酯))或其盐；以及
・
塞尔帕替尼(化合物名称：6-(2-羟基-2-甲基丙氧基)-4-(6-(6-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲基)-3,6-二氮杂二环(3.1.1)庚烷-3-基)吡啶-3-基)吡唑并(1,5-a)吡啶-3-甲腈)或其盐。
[0107]
优选为盐酸阿来替尼、普拉替尼、凡德他尼、卡博替尼(2s)-羟基丁二酸盐、索拉非尼或塞尔帕替尼。
[0108]
进一步优选为盐酸阿来替尼、凡德他尼、卡博替尼(2s)-羟基丁二酸盐、索拉非尼或塞尔帕替尼。
[0109]
除上述化合物以外，已知下述化合物也具有ret激酶抑制活性(oncology review 2018, 第12卷: 352)，因此可用于本技术发明。
[0110]
[化学式1]这些化合物或其盐能以药品制剂的形式制造并销售、或者能以研究用试剂的形式获取，或者可通过已知的方法或常规方法进行制造。这些化合物或其盐还包括水合物、制药学上可接受的各种溶剂合物或多晶型物等。
[0111]
关于本发明中使用的具有ret激酶抑制活性的化合物的给药途径，口服或胃肠外的给药途径均适合使用，但优选适合使用口服给药。作为用于口服给药的剂型，例如可从液体制剂、散剂、颗粒剂、片剂、肠溶制剂和胶囊剂等任意剂型中适当选择。按照本领域技术人员所已知的方法将具有ret激酶抑制活性的化合物制成这种剂型的制剂。例如，与制药学上可接受的载体或介质、具体而言如灭菌水或生理盐水、植物油、乳化剂、悬浮剂、表面活性剂、稳定剂、香味剂、赋形剂、溶剂(vehicle)、防腐剂、粘合剂等适当组合，以通常被公认的制药实施所要求的单位剂量形态进行混合后，通过冷冻干燥、压片成型等制剂化操作制成制剂。
[0112]
具有ret激酶抑制活性的化合物也可作为与水或除水以外的制药学上可接受的液体的无菌性溶液或悬浮液剂等注射剂的形式进行胃肠外使用。这些制剂中的有效成分量以可给予所指示的范围的适当剂量的方式适当选择。用于注射的无菌组合物可使用注射用蒸馏水这样的溶剂(vehicle)按照通常的制剂实施进行配方。作为注射用水溶液，例如可示例：生理盐水、含有葡萄糖或其他辅药的等渗液、例如d-山梨糖醇、d-甘露糖、d-甘露糖醇、氯化钠，可与适当的助溶剂、例如醇、具体而言如乙醇、多元醇、例如丙二醇、聚乙二醇、非离子性表面活性剂、例如聚山梨醇酯80 (tm)、hco-50适当并用。作为油性液，可示例：芝麻油、大豆油，可与作为助溶剂的苯甲酸苄酯、苄醇并用。另外，可与缓冲剂、例如磷酸盐缓冲液、乙酸钠缓冲液、无痛剂、例如盐酸普鲁卡因、稳定剂、例如苄醇、苯酚、抗氧化剂适当配合。
[0113]
作为本发明所涉及的具有ret激酶抑制活性的化合物的给药量，例如可在每次给
药为0.0001mg～1000mg/1kg体重的范围内选择给药量。或者，例如可在每位患者为0.001mg～100000mg/body的范围内选择给药量。然而，本发明的具有ret激酶抑制活性的化合物的给药量并不受这些给药量的限制。
[0114]
例如，作为上述阿来替尼、其盐、或它们的水合物的更具体的给药量，可列举：1天2次，每次以游离体换算计为20mg、40mg、60mg、80mg、120mg、160mg、220mg、240mg、300mg、460mg、600mg、760mg或900mg。
[0115]
另外，普拉替尼、其盐、或它们的水合物的更具体的给药量为1天1次、以游离体换算计为300mg～800mg、优选为400mg。凡德他尼、其盐、或它们的水合物的更具体的给药量为1天1次、以游离体换算计为100mg～600mg、优选为300mg。
[0116]
本发明的具有ret激酶抑制活性的化合物的给药期间根据症状或副作用的程度适当确定，可在癌症得到治疗或达到所期望的治疗效果为止的期间进行给药。
[0117]
cdk4/6抑制剂本发明中使用的cdk4/6抑制剂是指可直接或间接地中和、阻断、抑制、降低或妨碍细胞周期蛋白依赖性激酶4(cdk4)或细胞周期蛋白依赖性激酶6(cdk6)的活性的物质。上述物质包括：低分子化合物、抗体、反义、转录抑制剂、低分子干扰rna(sirna)等。
[0118]
cdk4和/或cdk6是细胞周期蛋白依赖性激酶(cdk)的家族蛋白，调节哺乳动物的细胞周期的开始、进展和结束。对增殖而言较为重要，在乳腺癌中经常观察到该经路的失调。cdk4/6在细胞周期的早期被细胞周期蛋白d1和其他的d型细胞周期蛋白活化，促进通过g1限制点(r点)的细胞周期的进展。已活化的细胞周期蛋白-cdk复合物通过磷酸化使作为抑癌因子的rb失活，诱导转录活化因子e2f的释放，呈现细胞增殖的异常。
[0119]
因此，已知cdk4/6抑制剂被用于癌细胞的增殖抑制，例如在临床中使用下述的化合物等：
・
帕博西尼(化合物名称：6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-2-{[5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基]氨基}吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8h)-酮)或其盐；
・
瑞博西尼(化合物名称：7-环戊基-n,n-二甲基-2-((5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)氨基)-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶)或其盐；
・
阿贝西尼(化合物名称：n{-5[-(4-乙基哌嗪-1-基)甲基]吡啶-2-基}-5-氟-4-[4-氟-2-甲基-1-(1-甲基乙基)-1h-苯并咪唑-6-基]嘧啶-2-胺)或其盐；
・
凡德他尼(化合物名称：n-(4-溴-2-氟苯基)-6-甲氧基-7-[(1-甲基哌啶-4-基)甲氧基]喹唑啉-4-胺)或其盐；
・
甲苯磺酸索拉非尼(4-{4-[3-(4-氯-3-三氟甲基苯基)脲基]苯氧基}-n2-甲基吡啶-2-甲酰胺单(4-甲基苯磺酸酯))或其盐、优选甲苯磺酸索拉非尼盐酸盐；
・
amg-925(化合物名称：2-羟基-1-[2-[[9-(4-甲基环己基)吡啶并[4,5]吡咯并[1,2-d]嘧啶-2-基]氨基]-7,8-二氢-5h-1,6-萘啶-6-基]乙烯酮)或其盐；
・
fascaplysine(化合物名称：12,13-二氢-13-氧代-吡啶并[1,2-a：3,4-b’]二吲哚-5-鎓)或其盐。
[0120]
优选为帕博西尼、阿贝西尼、瑞博西尼和amg-925或其盐。
[0121]
这些化合物或其盐能以药物制剂的形式制造并销售、或能以研究用试剂的形式获取，或者可通过常规方法进行制造。这些化合物或其盐还包括：水合物、制药学上可接受的
各种溶剂合物或多晶型物等。
[0122]
cdk4/6抑制剂可按照常规方法制成制剂(例如，remington's pharmaceutical science, 最新版, mack publishing company, easton, u.s.a)，可同时包含制药学上可接受的载体或添加剂。例如可列举：表面活性剂、赋形剂、着色剂、香味剂、防腐剂、稳定剂、缓冲剂、悬浮剂、等渗剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、流动性促进剂、矫味剂等，但不限于这些，可适当使用其他常用的载体。具体而言，可适合列举：海藻糖、轻质硅酸酐、乳糖、结晶纤维素、甘露糖醇、淀粉、羧甲纤维素钙、羧甲纤维素钠、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯醇缩乙醛二乙基氨基乙酸酯、聚乙烯吡咯烷酮、明胶、中链脂肪酸甘油三酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油60、蔗糖、羧甲基纤维素、玉米淀粉、无机盐类、聚山梨醇酯等。
[0123]
在本发明中，cdk4/6抑制剂的给药方法可通过口服、胃肠外给药的任一种途径实施。特别优选为基于口服给药的给药方法，作为所涉及的给药方法，具体而言，可适合示例：通过液体制剂、散剂、颗粒剂、片剂、肠溶制剂和胶囊剂等进行的给药等。作为注射给药的例子，例如可通过静脉内注射、肌肉内注射、腹腔内注射、皮下注射等进行全身或局部给药，用于本发明的治疗。另外，给药方法可根据患者的年龄、症状适当选择。作为给药量，例如，在口服制剂的情况下，每1次给药可在0.1mg/kg～100mg/kg、优选1mg/kg～10mg/kg的范围内选择给药量。例如，每位患者可在50mg～500mg的范围内选择给药量。然而，本发明中使用的cdk4/6抑制剂的给药量并不限于这些给药量。
[0124]
根据疾病的类型和严重程度，例如帕博西尼的优选剂量为1～5mg/kg的范围，但没有限定，可根据症状或副作用的程度阶段性地减量。给药频率通常为1天给药1次，以规定期间(例如3周)给药为1个循环(周期)，设置规定的停药期间(例如1周)，重复该循环。循环次数根据疾病的类型和严重程度而变化。治疗按照该领域已知的方法进行测定，维持到癌症得到治疗或达到所期望的治疗效果。作为一例，帕博西尼为125mg、一天一次、持续给药3周，在发现有副作用等出现的情况下，以一次减量减少至100mg、二次减量减少至75mg进行给药。然而，其他剂量方案也可有效。
[0125]
cdk4/6抑制剂以上述每3周的给药为1个循环，可在直到癌症得到治疗或达到所期望的治疗效果的期间进行给药。具体而言，可在1～36个循环内进行给药。
[0126]
另外，例如阿贝西尼为150mg、一天一次进行给药，在发现有副作用等出现的情况下，以一次减量减少至100mg、二次减量减少至50mg进行给药。
[0127]
药物、组合、药物组合物和治疗/预防方法本发明的1个方案为：将具有ret激酶抑制活性的化合物和cdk4/6抑制剂组合而成的、用于治疗或预防癌症的药物。
[0128]
上述方案中的“将具有ret激酶抑制活性的化合物和cdk4/6抑制剂组合而成的、用于治疗或预防癌症的药物”是指为了在癌症的治疗或预防中将具有ret激酶抑制活性的化合物和cdk4/6抑制剂同时、分开或依次给药而组合的药物。本发明的药物也能以同时含有具有ret激酶抑制活性的化合物和cdk4/6抑制剂的配合剂的形式提供。另外，可分别提供含有具有ret激酶抑制活性的化合物的制剂和含有cdk4/6抑制剂的制剂，这些制剂可同时或依次使用。
[0129]
在本发明中，同时给药是指可将具有ret激酶抑制活性的化合物和cdk4/6抑制剂在同一时间给药而进行使用，可作为配合剂进行给药，也可在给药时作为使用当时调整的
混合物进行给药，还可在同一时期给予不同形态的制剂。在同时给药进行使用的情况下，可由各自的路径进行给药，也可由同一路径进行给药，给药剂型可相同也可分别不同。
[0130]
本发明中，在将具有ret激酶抑制活性的化合物和cdk4/6抑制剂分开给药的情况下，具有ret激酶抑制活性的化合物和cdk4/6抑制剂的给药顺序可以是在cdk4/6抑制剂的给药后给予具有ret激酶抑制活性的化合物，也可以是具有ret激酶抑制活性的化合物和cdk4/6抑制剂同时给药，还可以是在具有ret激酶抑制活性的化合物的给药后给予cdk4/6抑制剂。
[0131]
本发明所涉及的具有ret激酶抑制活性的化合物和cdk4/6抑制剂依次给药是指在一种药剂的给药后给予另一种药剂，对具有ret激酶抑制活性的化合物和cdk4/6抑制剂的给药间隔没有特别限定，可考虑给药途径或剂型等因素进行设定。例如，具有ret激酶抑制活性的化合物与cdk4/6抑制剂的给药间隔为0小时～168小时、优选为0小时～72小时、还优选为0～24小时、进一步优选为0小时～12小时。另外，除给药途径或剂型等因素以外，还可斟酌本发明所涉及的具有ret激酶抑制活性的化合物和cdk4/6抑制剂各自在对象中的残余浓度。即，在于cdk4/6抑制剂的给药前给予具有ret激酶抑制活性的化合物的情况下，可在如获得cdk4/6抑制剂的所期望的效果的、检测到对象中的该具有ret激酶抑制活性的化合物的残余浓度的时间点给予cdk4/6抑制剂。可使用各种色谱仪等分离装置分离由对象采集的样品，按照本领域技术人员所已知的分析方法进行分析，根据所得结果确定该浓度。
[0132]
反之，在于具有ret激酶抑制活性的化合物的给药前给予cdk4/6抑制剂的情况下，可在如获得具有ret激酶抑制活性的化合物的所期望的效果的、检测到对象中的cdk4/6抑制剂的残余浓度的时间点给予具有ret激酶抑制活性的化合物。可通过本领域技术人员所已知的elisa等免疫测定法分析由对象采集的样品，根据所得结果确定该浓度。
[0133]
在上述药物中，在具有ret激酶抑制活性的化合物和cdk4/6抑制剂包含于各自的制剂中进行提供的情况下，这些制剂的剂型可以是相同的剂型也可以是不同的剂型。例如，双方可以是选自口服制剂、胃肠外制剂、注射剂、点滴剂、静脉内点滴剂的彼此不同的剂型，双方也可以是选自口服制剂、胃肠外制剂、注射剂、点滴剂、静脉内点滴剂的同种剂型。优选双方的剂型均为口服制剂。另外，在上述药物中可进一步组合一种以上的不同制剂。
[0134]
需要说明的是，在本发明中，药物组合物包含本发明的用于治疗和/或预防的具有ret激酶抑制活性的化合物和/或cdk4/6抑制剂，可进一步包含制药学上可接受的载体。
[0135]
在本发明中，“制药学上可接受的载体”的术语是指如之前所示例的一种以上的适合性的固体或液体的赋形稀释剂或胶囊化材料，适合对哺乳类进行给药。
[0136]
在本发明中，“组合”是指可将具有ret激酶抑制活性的化合物和作为cdk4/6抑制剂的化合物分开用于同一对象的形态、或者是将这些化合物不经混合而各自制成制剂并组合的形态。
[0137]
在本发明中，将具有ret激酶抑制活性的化合物和cdk4/6抑制剂组合而成的“药物制剂”包括：将这些活性成分分开进行制剂化而得的制剂、或者是包含于同一制剂中的片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、丸剂等固体制剂、水性和非水性的口服用溶液和悬浮液、以及填充在适应于细分成单个给药量的容器中的胃肠外用溶液等液体制剂、可在使用当时溶解并使用的冷冻干燥剂、或将这些中的任一种剂型组合而成的制剂。该药物制剂的每单位剂型含有以游离体换算计为150mg～800mg、优选150mg～400mg、特别优选150mg～300mg的阿来
替尼或其盐。将阿来替尼或其盐分开进行制剂化而得的制剂具体而言有150mg胶囊制剂、150mg、300mg、600mg片剂等。
[0138]
在另一观点中，本发明提供：含有具有ret激酶抑制活性的化合物作为有效成分的、用于与cdk4/6抑制剂并用以治疗或预防癌症的药物。“包含具有ret激酶抑制活性的化合物作为有效成分的、用于与cdk4/6抑制剂并用以治疗或预防癌症的药物”是指，以与cdk4/6抑制剂并用为条件用于治疗或预防癌症的、包含具有ret激酶抑制活性的化合物作为有效成分的药物。在包含具有ret激酶抑制活性的化合物作为有效成分的本发明的药物与cdk4/6抑制剂并用时，可与cdk4/6抑制剂同时给药，也可在cdk4/6抑制剂的给药前或给药后进行给药。在于cdk4/6抑制剂的给药前或给药后给予具有ret激酶抑制活性的化合物的情况下，通过测定对象中的该cdk4/6抑制剂的残余浓度，可将其给药时期最优化。可根据本领域技术人员所已知的后述的elisa等免疫测定法确定由对象采集的样品的该浓度。
[0139]
在又一观点中，本发明提供：包含cdk4/6抑制剂作为有效成分的、用于与具有ret激酶抑制活性的化合物并用以治疗或预防癌症的药物。本发明中的“包含cdk4/6抑制剂作为有效成分的、用于与具有ret激酶抑制活性的化合物并用以治疗或预防癌症的药物”是指，以与具有ret激酶抑制活性的化合物并用为条件用于治疗或预防癌症的、包含cdk4/6抑制剂作为有效成分的药物。在包含cdk4/6抑制剂作为有效成分的药物与具有ret激酶抑制活性的化合物并用时，可与具有ret激酶抑制活性的化合物同时给药，也可在具有ret激酶抑制活性的化合物的给药前或给药后进行给药。在于具有ret激酶抑制活性的化合物的给药前或给药后给予cdk4/6抑制剂的情况下，通过测定对象中的该具有ret激酶抑制活性的化合物的残余浓度，可将其给药时期最优化。可使用各种色谱仪等分离装置分离由对象采集的样品，根据本领域技术人员已知的分析方法确定该浓度。
[0140]
上述发明是指将具有ret激酶抑制活性的化合物和cdk4/6抑制剂一同给药或使用(以下，简称为“给药”)，不要解释为限定给药顺序或给药间隔等。另外，本发明还能以具有ret激酶抑制活性的化合物与cdk4/6抑制剂组合而成的产品的形式使用。而且，按照本发明，在具有ret激酶抑制活性的化合物与cdk4/6抑制剂并用的情况下，与任一方单独使用的给药量相比，可根据需要各自以较少的给药量进行给药。
[0141]
癌种类本发明的药物可用于预防或治疗急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性淋巴性白血病、慢性淋巴性白血病、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、脑瘤、成神经细胞瘤、神经胶质瘤、甲状腺癌(例如，甲状腺髓样癌)、骨髓增生异常综合征、头颈部癌、食道癌、胃癌、大肠癌、结肠直肠癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌(例如，非小细胞肺癌等)、胰腺癌、肝癌、胆囊癌、皮肤癌(例如，spitz痣样增生等)、恶性黑色素瘤、肾癌、肾盂/输尿管癌、膀胱癌、子宫癌、睾丸癌、前列腺癌、由该肿瘤转移的肿瘤等各种癌症等的疾病。而且，本发明的化合物还可用于预防或治疗上述癌症的浸润/转移。
[0142]
另外，本发明的药物还可用于预防或治疗ret基因与其他基因的融合基因和/或ret蛋白与其他蛋白的融合蛋白的癌症。作为“其他基因”和“其他蛋白”，可列举：kif5b、ccdc6、ncoa4、trim33、clip1和erc1等。优选为kif5b、ccdc6、ncoa4和trim33。
[0143]
本发明中，ret基因或蛋白的酪氨酸激酶结构域是指负责将atp的γ位的磷酸基转移到蛋白的酪氨酸残基上的反应的催化剂结构域。
[0144]
本发明中，“其他的基因或蛋白的卷曲螺旋结构域”是指由fppfppp (f：疏水性、p：极性氨基酸残基)的7个残基构成的α螺旋的疏水性部位发生相互作用的蛋白间相互作用结构域。
[0145]
特别是，本发明的药物可用于预防或治疗由在ret中具有突变的肿瘤引起的癌症、和/或ret融合基因阳性的癌症。作为ret融合基因阳性的癌症的例子，可列举：甲状腺癌、非小细胞肺癌等，但并不限于这些。
[0146]
本发明中，在ret中具有突变的肿瘤包括：在ret基因和/或ret蛋白中产生引起ret酪氨酸激酶的活化的突变；以及使ret酪氨酸激酶活化，产生诱发癌化(例如甲状腺癌、肺癌)的突变。ret酪氨酸激酶的活化可通过利用抗磷酸化ret抗体的免疫染色等检测肿瘤组织中的磷酸化ret来进行确认。
[0147]
在本发明中，ret酪氨酸激酶的活化是指ret酪氨酸激酶中所含的氨基酸残基、例如酪氨酸残基发生磷酸化，包括受试者(例如由受试者采集的样品)中的磷酸化ret酪氨酸激酶蛋白的量(例如与健康人相比)增加。还包括通过ret酪氨酸激酶的磷酸化使ret酪氨酸激酶所靶向的蛋白(以下，称为靶向蛋白)发生磷酸化。“ret酪氨酸激酶的活化”包括：除磷酸化ret酪氨酸激酶蛋白以外，已磷酸化的上述靶向蛋白的量也增加。
[0148]
作为引起ret酪氨酸激酶的活化的突变，报道了：(1) ret的富半胱氨酸结构域中的突变、(2) ret的酪氨酸激酶结构域中的突变、(3) ret基因与其他基因的融合基因或ret蛋白与其他蛋白的融合蛋白的形成(trends in genetics, 2006年, 22卷, 第627-636页)。人的ret基因位于10号染色体(10q11.2)上，由21个外显子构成。“ret的富半胱氨酸结构域”是指ret酪氨酸激酶中的富含半胱氨酸的区域，编码该结构域的多核苷酸位于外显子10和11上。“ret的酪氨酸激酶结构域”是指ret酪氨酸激酶中的具有酪氨酸激酶活性的区域，编码该结构域的多核苷酸位于外显子12～18上(trends in genetics, 2006年, 22卷, 第627-636页)。
[0149]
在本发明中，ret融合基因阳性是指，利用已知的方法、例如逆转录pcr法与桑格测序法组合而成的方法或原位杂交技术等检测到ret与其他基因、例如kif5b、ccdc6、ncoa4、trim33、clip1和erc1等的融合基因的肿瘤。ret融合基因阳性的癌症的具体例子可列举：wo2014/050781中记载的癌症，但并不限于这些。
[0150]
在本发明的另一方案中提供：在利用具有ret激酶抑制活性的化合物对癌症患者进行治疗时，通过使用cdk4/6抑制剂，使该具有ret激酶抑制活性的化合物的治疗效果增强的方法。这里，治疗效果的增强是指下述的任一种情况：治疗的成功率提高；降低为了治疗而给予的具有ret激酶抑制活性的化合物的量；对更严重的病例显示出治疗效果；对早期治疗无效的病例或恶化的病例显示出治疗效果；由于癌症的消失等，利用具有ret激酶抑制活性的化合物进行的治疗期间比单独给药时预测的治疗期间、或通过并用给药进行的治疗开始前预定的治疗期间缩短；或者，通过抑制病情进展，使包括具有ret激酶抑制活性的化合物和/或其他维持疗法的治疗期间延长。另外，在本发明的又一方案中，提供在对象中延长无进展生存期的方法，该方法包括：将有效量的具有ret激酶抑制活性的化合物和有效量的cdk4/6抑制剂组合进行给药。另外，在本发明的又一方案中，提供用于制造药物组合物的具有ret激酶抑制活性的化合物、或cdk4/6抑制剂的使用方法，该药物组合物用于治疗或预防癌症，包含具有ret激酶抑制活性的化合物和cdk4/6抑制剂作为有效成分。
[0151]
在本发明中，包含具有ret激酶抑制活性的化合物和/或cdk4/6抑制剂作为有效成分是指包含具有ret激酶抑制活性的化合物和/或cdk4/6抑制剂作为主要活性成分，并不限定具有ret激酶抑制活性的化合物和/或cdk4/6抑制剂的含量。另外，“治疗”的术语是指下述的任一种情况：通过将本发明所涉及的药物给予至对象，癌细胞死亡或其细胞数减少；癌细胞的增殖得到抑制；抑制癌细胞的转移；由癌症引起的各种症状得到改善。另外，“预防”的术语是指下述的任一种情况：防止由已减少的癌细胞再次增殖引起的其数量的增加；防止增殖已得到抑制的癌细胞再增殖。
[0152]
在本发明中，“有效量”是指在将具有ret激酶抑制活性的化合物和cdk4/6抑制剂组合进行给药的情况下，关于各自的抑制剂的每日给药量。本发明中的给药量可以是与各自的抑制剂单独使用的情况下的给药量相同，也可以是较单独使用的情况下的给药量低的给药量。或者，本发明中的有效量可以是：一种为与单独使用的情况下的给药量相同、而另一种为较单独使用的情况下的给药量低的给药量。
[0153]
在本发明中，“无进展生存期(pfs)”是指从治疗(或随机化)到最初的疾病进展或死亡的时间。在本发明的一个方案中，pfs可根据实体瘤的治疗效果判定标准(response evaluation criteria in solid tumour，recist)进行评价。在本发明的一个方案中，pfs可根据作为进展的决定因素的ca-125水平进行评价。
[0154]
在本发明中，作为“延长无进展生存期”的具体例子，可列举：与将具有ret激酶抑制活性的化合物或cdk4/6抑制剂以单剂按照与并用时采用的给药量相同的剂量进行给药时的pfs相比，在具有ret激酶抑制活性的化合物与cdk4/6抑制剂抑制剂的并用下pfs延长。
[0155]
在本发明中，“对象”没有限定，是指成为本发明的药物的给药对象的、或需要给予本发明的药物的人或非人哺乳动物、例如包括牛、马、狗、羊或猫在内的哺乳动物。优选对象为人。对象包括患者(包括人和非人哺乳动物)。具体而言，是指患有急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性淋巴性白血病、慢性淋巴性白血病、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、脑瘤、成神经细胞瘤、神经胶质瘤、甲状腺癌(例如，甲状腺髓样癌)、骨髓增生异常综合征、头颈部癌、食道癌、胃癌、大肠癌、结肠直肠癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌(例如，非小细胞肺癌等)、胰腺癌、肝癌、胆囊癌、皮肤癌(例如，spitz痣样增生等)、恶性黑色素瘤、肾癌、肾盂/输尿管癌、膀胱癌、子宫癌、睾丸癌、前列腺癌、由该肿瘤转移的肿瘤等各种癌症的患者、或患病的可能性高的人或非人哺乳动物。
[0156]
产品作为本发明的又一方案，提供产品。在一个实施方案中，产品是为了治疗或预防对象中的癌症而提供的，包括：(a) (1)含有cdk4/6抑制剂的制剂、(2)容器、(3)指示书或标签，该指示书或标签显示为了治疗对象中的癌症而将上述cdk4/6抑制剂和至少一种具有ret激酶抑制活性的化合物组合给予至对象；或(b) (1)含有具有ret激酶抑制活性的化合物的制剂、(2)容器、(3)指示书或标签，该指示书或标签显示为了治疗对象中的癌症而将上述具有ret激酶抑制活性的化合物和至少一种cdk4/6抑制剂组合给予至对象。
[0157]
产品包括：包含制剂的容器，该制剂含有cdk4/6抑制剂或具有ret激酶抑制活性的化合物。
[0158]
产品还可包括：容器上或容器中附带的标签或指示书。
[0159]
在本发明中，“指示书”是指在制剂的商业用包装中通常所含的文件，包含关于与
制剂的使用相关的适应症、用法、给药量、给药、禁忌症和/或警告的信息。“标签”是指包括含有cdk4/6抑制剂或具有ret激酶抑制活性的化合物的制剂的产品名称、剂量、剂型、适应症等标示的片状物品，直接贴在容器上。
[0160]
标签或指示书显示制剂的适应症、即用于癌症等的治疗。在一个实施方案中，标签或指示书显示制剂可用于治疗癌症。标签或指示书还可显示制剂可用于治疗其他障碍。
[0161]
适当的容器例如可列举：ptp、瓶、小瓶、注射器、泡罩包装等。容器可由玻璃或塑料等各种材料形成。这些容器还可捆包在印刷有上述标签的内容等的纸制外箱中。
[0162]
通过具有ret激酶抑制活性的化合物与cdk4/6抑制剂的并用，可期待降低由单独给药产生的药剂的副作用。这里，“副作用”是指在接受疾病治疗的患者中观察到和/或测定到的临床、医学、物理、生理学和/或生物化学的影响，其并不是所预期的治疗结果的一部分的影响。通常，由于上述影响会降低接受治疗的患者的健康状态和/或舒适度、降低对于接受治疗的患者而言的健康风险、和/或降低对接受治疗的患者的治疗耐受性，需要停药或减量等恰当的处置，因此难以继续进行治疗。作为副作用的具体例子，可列举：骨髓抑制(嗜中性粒细胞减少、白细胞减少、贫血、血小板减少、发热性嗜中性粒细胞减少、淋巴细胞减少)、间质性肺炎、肝功能障碍(alt升高、ast升高、al-p升高、胆红素升高)、消化道症状(腹泻、恶心、呕吐、口腔炎、脂肪酶升高、食欲不振、淀粉酶升高、便秘、消化不良、吞咽障碍、腹痛、消化道穿孔)、皮肤症状(手足综合征、剥落性皮炎、脱毛症、皮疹、皮肤脱屑、瘙痒、皮肤干燥、潮红、痤疮、过敏性反应)、呼吸道症状(咳嗽、呼吸困难、肺炎、肺部感染、气胸)、精神神经系统症状(味觉异常、不动性眩晕)、循环系统症状(高血压)、疲劳、关节痛、肌肉痛、感染症(上呼吸道感染、尿路感染)、临床检验值异常(血中肌酸酐增加、低钾血症)、血栓塞栓症、发烧(
ほてり
)、重症肌无力(肌肉力量下降)、流泪增加、头痛、倦怠感、浮肿、外周性浮肿、体重减少、发热、流感样疾病或四肢痛等。通过将并用的情况下观察到的副作用的频率和等级等与单剂给药的情况下的频率和等级等进行比较，可确认在并用的情况下副作用是否降低。
实施例
[0163]
本说明书中明确引用的所有专利和参考文献的内容全部作为参照纳入本说明书中。
[0164]
以下，通过实施例的记载来具体地说明本发明，但本发明并不解释为受该记载的限定。
[0165]
实施例1将人ret融合基因阳性非小细胞肺癌株lc-2/ad细胞(riken,jthoraconcol.2012dec,7(12),1872-6)的每1
×
104个细胞接种于96孔板，将阿来替尼(由公司内部合成)与选自用于治疗非小细胞肺癌或者进行了临床开发的药剂中的下述12种化合物的抗癌药并用。化合物为叶酸代谢拮抗剂培美曲塞(富士胶片和光纯药)、微小管抑制剂紫杉醇(富士胶片和光纯药)、烷基化剂卡铂(富士胶片和光纯药)、微小管抑制剂长春瑞滨(富士胶片和光纯药)、代谢拮抗剂吉西他滨(富士胶片和光纯药)、拓扑异构酶i抑制剂伊立替康(富士胶片和光纯药)、cdk4/6抑制剂帕博西尼(sigma-aldrich)、hdac抑制剂saha(东京化成工业)、pi3k抑制剂bkm120(adooqbioscience)、pi3k和mtor抑制剂gedatolisib(selleckchemicalsllc)、mtor抑制剂依维莫司(adooqbioscience)、hsp90抑制剂luminespib
(aktpharm,inc.)。以各单剂和并用，处理4天，实施了细胞增殖试验。药剂处理浓度见表1。通过ic50等效线图法(isobologram)(pharmacolresperspect.2015jun；3(3)：e00149)分析了并用效果，结果见图1。需要说明的是，在图1中，横轴/纵轴分别表示阿来替尼/并用配对化合物的浓度。这里，各轴上的点表示各药剂单剂的50%细胞增殖抑制浓度，连接轴上的两点而得的虚线表示相加效果(相加效应)。在框内的点位于虚线的内侧/线上/虚线的外侧的情况下，两种药剂分别显示协同/相加/拮抗效果。
[0166]
其结果，阿来替尼与培美曲塞、紫杉醇、卡铂、长春瑞滨、伊立替康或luminespib的并用显示出拮抗效果。与吉西他滨、saha、gedatolisib或依维莫司的并用显示出相加程度的效果。与bkm120的并用在一部分浓度下显示出协同效果。与帕博西尼并用时，框内的所有点均位于虚线的内侧，显示出协同效果。
[0167]
实施例2将在小鼠原b细胞株ba/f3中导入kif5b-ret融合基因而得的ba/f3-kif5b-ret细胞(molcancerther.2014;13:2910-2918)的每5
×
103个细胞接种于96孔板，将阿来替尼和cdk4/6抑制剂帕博西尼或cdk4/6抑制剂阿贝西尼(selleckchemicalsllc)，以并用和单剂，处理4天，实施了细胞增殖试验。药剂处理浓度见表1。通过等效线图法分析了并用效果，所得结果见图2。
[0168]
需要说明的是，在图2中，横轴/纵轴分别表示阿来替尼/帕博西尼或阿贝西尼的浓度。
[0169]
其结果，阿来替尼和帕博西尼在ba/f3-kif5b-ret细胞中也显示出协同效果。而且，与其他的cdk4/6抑制剂即阿贝西尼的并用也显示出协同效果。根据这些结果，认为阿来替尼与cdk4/6抑制剂的并用不依赖于cdk4/6抑制剂的种类，均具有协同效果。
[0170]
[表1]
实施例3对于每1只移植了5
×
106个ba/f3-kif5b-ret细胞的balb/c-nu (裸)小鼠(日本charles river)，在细胞移植后第11天，并用了阿来替尼(20mg/kg、1天1次、口服给药15天)和帕博西尼(75mg/kg、1天1次、口服给药15天)。各给药组的肿瘤体积(平均值+标准偏差)和体重的变化率(平均值+标准偏差)见图3。
[0171]
需要说明的是，在图3中，横轴表示以药剂给药的第1天为1时的经过天数，纵轴表示肿瘤体积(tumor volume)和体重的变化率(相对体重)，vehicle表示溶剂给药对照组，alc表示阿来替尼单剂给药组，pd表示帕博西尼单剂给药组，alc+pd表示阿来替尼和帕博西尼并用给药组。
[0172]
其结果，与阿来替尼单剂给药组和帕博西尼单剂给药组相比，并用给药组显示出较高的抗肿瘤效果。在药剂给药后第11天，与各单剂给药组和溶剂给药对照组相比，并用给药组在统计学上显示出显著高的抗肿瘤效果。与溶剂给药组相比，在所有组中均未见体重减少。
[0173]
实施例4将lc-2/ad细胞和ba/f3-kif5b-ret细胞分别以每2
×
104个细胞或1
×
104个细胞接种于96孔板，并添加了100nm的阿来替尼和100nm的帕博西尼。3天后，使用实时glo膜联蛋白
v细胞凋亡和坏死测定(realtime glo annexin v apoptosis and necrosis assay) (promega)试剂盒内的膜联蛋白v检测用试剂，观察了膜联蛋白v的结合。各药剂处理组与对照的荧光强度之比见图4。
[0174]
需要说明的是，在图4中，control表示溶剂对照组，alc表示阿来替尼单剂处理组，pd表示帕博西尼单剂处理组，alc+pd表示阿来替尼与帕博西尼并用处理组。
[0175]
其结果，与各单剂组和溶剂对照组相比，并用处理组显示出显著高的膜联蛋白v的结合。由该结果暗示：两者的并用增强了细胞凋亡。
[0176]
实施例5将lc-2/ad细胞和ba/f3-kif5b-ret细胞用100nm的阿来替尼和100nm的帕博西尼进行处理，24小时后，由各细胞中纯化了蛋白。使用毛细管电泳蛋白分析系统sally sue (proteinsimple)观察了各蛋白的表达量，所得结果见图5。
[0177]
需要说明的是，在图5中，alc表示阿来替尼，pd表示帕博西尼，-和+分别表示药剂未处理、处理。
[0178]
其结果确认到：与单剂相比，通过两种药剂的并用，抑制了促进基因转录的蛋白即s6的磷酸化，该基因编码参与细胞周期进展的蛋白。另外，还确认到：与单剂相比，通过两种药剂的并用，抑制了参与细胞周期进展的rb的磷酸化。
[0179]
实施例6将lc-2/ad细胞的每1
×
104个细胞、ba/f3-kif5b-ret细胞的每5
×
103个细胞接种于96孔板，将帕博西尼与具有ret激酶抑制活性的化合物即blu-667 (普拉替尼；sellck chemicals llc)或凡德他尼(cellagen technology)，以并用和单剂，处理4天，实施了细胞增殖试验。药剂处理浓度见表2。通过等效线图法分析了并用效果，所得结果见图6。
[0180]
[表2]需要说明的是，在图6中，横轴/纵轴分别表示blu-667或凡德他尼/帕博西尼的浓度。
[0181]
其结果，在两种细胞中，具有ret激酶抑制活性的化合物与帕博西尼的并用均显示出协同效果。根据这些结果，认为具有ret激酶抑制活性的化合物与cdk4/6抑制剂的并用不依赖于具有ret激酶抑制活性的化合物的种类，均具有协同效果。
[0182]
产业实用性
本技术发明的并用药物对于ret融合基因阳性的各种肿瘤细胞和移植了该细胞的小鼠在细胞增殖抑制或肿瘤体积的减少上具有协同效果，因此可用于预防或治疗在ret中具有突变的各种癌症。