包括噻吩中心环的SREBP抑制剂的制作方法

包括噻吩中心环的srebp抑制剂
1.相关申请的交叉引用
2.本技术要求2019年11月13日提交的美国临时申请62/935,028；2020年1月27日提交的美国临时申请62/966,356；以及2020年7月24日提交的美国临时申请63/056,408的权益，其公开内容通过引用整体并入本文。
技术领域
3.本公开涉及化合物(3-氯-4-(4-(2-(2-羟基丙-2-基)吡啶-4-基)噻吩-2-基)苯基)(4-羟基哌啶-1-基)甲酮，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素、或其异构体，其用于抑制甾醇调节元件结合蛋白(srebp)途径的组分如srebp或srebp裂解激活蛋白(scap)的用途，以及其在治疗病症的治疗方法中的用途。


背景技术：

4.srebp是膜结合转录因子，其调节胆固醇、脂肪酸和甘油三酯的生物合成以及脂质摄取。脂肪酸和脂质是能量的来源和许多生物结构(如细胞的脂质膜)的重要组分。胆固醇是生物过程和结构的重要组分。在哺乳动物中，存在三种已知的srebp同种型：srebp-1a、srebp-1c和srebp-2。srebp-1a控制着参与脂肪酸、甘油三酯、磷脂和胆固醇的产生的广泛的靶基因。srebp-1c主要激活控制脂肪酸和甘油三酯合成的基因。srebp-2激活参与胆固醇代谢调节剂合成的基因，这已在小鼠、人类和果蝇研究中得到证实。srebp的活性由srebp裂解激活蛋白(scap)调节，所述scap将srebp从内质网转运到高尔基体(golgi apparatus)，在所述高尔基体中srebp被蛋白水解裂解，从而释放转录因子结构域。
5.由srebp和scap调节的途径与代谢紊乱有关，如高血压、血脂异常、肥胖症、2型糖尿病、胰岛素抵抗、脂肪肝和非酒精性脂肪性肝炎(nash)。例如，nash是由于脂肪在肝脏中堆积而引起的肝脏炎症和肝细胞气球样变，所述肝脏炎症和肝细胞气球样变会导致肝损伤，如肝硬化。nash也可能与其它代谢紊乱相关，如胰岛素抵抗和代谢综合征。
6.脂肪酸、胆固醇和甘油三酯的代谢也可能与如癌症等过度增殖性病症有关。癌细胞致癌性转化的一个特性是代谢从分解代谢过程转变为合成代谢过程。许多癌症需要脂肪酸和其它脂质(如胆固醇)以及类固醇(如雄激素)的合成。因此，srebp途径的组分可能在过度增殖性病症(如前列腺癌)中起作用。srebp-1c是脂肪酸生物合成的主要转录调节剂，此转录因子的表达可以被前列腺癌细胞中的雄激素和表皮生长因子刺激。srebp-1c的过表达可能会驱动前列腺癌细胞的致瘤性和侵袭性。除了调节雄激素合成外，srebp-2本身也在雄激素产生的直接反馈回路中由雄激素调节。然而，前列腺癌细胞的胆固醇稳态失调，导致胆固醇积聚和增殖增加。胆固醇水平的这种增加已被证明是由srebp-2活性增加的调节驱动的。srebp-2表达在疾病进展期间增加，并且在去势后与之前相比显著更高。
7.调节srebp途径的组分(如scap或srebp)是治疗如代谢疾病和癌症等病症的重要治疗方法。因此，需要能够抑制srebp途径的组分(如srebp和scap)的化合物。


技术实现要素：

8.在一些实施方案中，本文提供的是(3-氯-4-(4-(2-(2-羟基丙-2-基)吡啶-4-基)噻吩-2-基)苯基)(4-羟基哌啶-1-基)甲酮：
[0009][0010]
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体。
[0011]
在其他实施方案中，本文提供的是药物组合物，其包含化合物1，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体，以及药学上可接受的赋形剂。
[0012]
在又其他实施方案中，本文提供了一种抑制甾醇调节元件结合蛋白(srebp)的方法，其是通过使srebp或使srebp裂解激活蛋白(scap)与化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体；或包含上述任一种和药学上可接受的赋形剂的药物组合物接触。在一些实施方案中，srebp在有需要的受试者中被抑制。
[0013]
在某些实施方案中，本文提供了一种抑制甾醇调节元件结合蛋白(srebp)的蛋白水解激活的方法，其是通过使srebp裂解激活蛋白(scap)与化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体接触来；或包含上述任一种和药学上可接受的赋形剂的药物组合物接触。在一些实施方案中，蛋白水解激活在有需要的受试者中被抑制。
[0014]
在其它实施方案中，本文提供了一种治疗有需要的受试者的病症的方法，其中所述病症由甾醇调节元件结合蛋白(srebp)介导，所述方法是通过向受试者施用有效量的化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体；或包含上述任一种和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
[0015]
在其它实施方案中，本文提供了一种治疗有需要的受试者的病症的方法，其是通过向受试者施用有效量的化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体；或包含上述任一种和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
[0016]
在某些实施方案中，本文提供的是化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体在制备用于在有需要的受试者中抑制甾醇调节元件结合蛋白(srebp)的药物中的用途。
[0017]
在一些实施方案中，本文提供的是化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体在制备用于在有需要的受试者中抑制甾醇调节元件结合蛋白(srebp)的蛋白水解激活的药物中的用途。
[0018]
在一些实施方案中，本文提供了一种抑制甾醇调节元件结合蛋白(srebp)的蛋白水解激活的方法，其是通过向受试者施用治疗有效量的化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体，或包含上述任一种和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
[0019]
在一些实施方案中，本文提供的是化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体用于在有需要的受试者中抑制甾醇调节元件结合蛋白(srebp)的蛋白水解激活的用途。
[0020]
在某些实施方案中，本文提供了化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变
异构体、同位素或异构体在制造用于治疗有需要的受试者的病症的药物中的用途，其中所述病症由甾醇调节元件结合蛋白(srebp)介导。
[0021]
在其它实施方案中，本文提供了化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体在制造用于治疗有需要的受试者的病症的药物中的用途。
[0022]
在其他实施方案中，本文提供了化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体用于抑制甾醇调节元件结合蛋白(srebp)的用途。在一些实施方案中，srebp在有需要的受试者中被抑制。
[0023]
在某些实施方案中，本文提供的是化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体用于抑制甾醇调节元件结合蛋白(srebp)的蛋白水解激活的用途。在一些实施方案中，蛋白水解激活在有需要的受试者中被抑制。
[0024]
在一些实施方案中，本文提供了化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体用于治疗有需要的受试者的病症的用途，其中所述病症由甾醇调节元件结合蛋白(srebp)介导。
[0025]
在一些实施方案中，本文提供了化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体用于治疗有需要的受试者的病症的用途。
[0026]
在本文描述的实施方案的一些变型中，srebp是srebp-1。在某些变型中，srebp是srebp-1a。在其他变型中，srebp是srebp-1c。在仍进一步实施方案中，srebp是srebp-2。在一些变型中，所述病症是代谢综合征、2型糖尿病、肥胖症、脂肪肝病、胰岛素抵抗、脂肪病变或血脂异常。在其他变型中，所述病症是过度增殖性病症，例如癌症。在更进一步的变型中，所述病症是内毒素休克、全身性炎症或动脉粥样硬化。
[0027]
在其它实施方案中，本文提供了一种治疗有需要的受试者的脂肪肝病的方法，其是通过向受试者施用有效量的化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体；或包含上述任一种和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
[0028]
在更进一步的实施方案中，本文提供了化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体；或包含前述任一项和药学上可接受的赋形剂的药物组合物用于治疗有需要的受试者的脂肪肝疾病的用途。
[0029]
在其他实施方案中，本文提供了化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体；或包含前述任一种和药学上可接受的赋形剂的药物组合物在制备用于治疗有需要的受试者的脂肪肝疾病的药物中的用途。
[0030]
在一些实施方案中，本文提供了一种在有需要的受试者中治疗非酒精性脂肪性肝炎(nash)的方法，其是通过向受试者施用有效量的化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体；或包含上述任一种和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
[0031]
在其他实施方案中，本文提供的是化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体；或包含前述任一种和药学上可接受的赋形剂的药物组合物用于治疗有需要的受试者的非酒精性脂肪性肝炎(nash)的用途。
[0032]
在某些实施方案中，本文提供的是化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体；或包含前述任一种和药学上可接受的赋形剂的药物组合物在制备用于治疗有需要的受试者的非酒精性脂肪性肝炎(nash)的药物中的用途。
[0033]
在一些实施方案中，本文提供了一种在有需要的受试者中治疗过度增殖性疾病的方法，其是通过向受试者施用有效量的化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体；或包含上述任一种和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
[0034]
在其他实施方案中，本文提供的是化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体；或包含前述任一种和药学上可接受的赋形剂的药物组合物用于治疗有需要的受试者的过度增殖性疾病的用途。
[0035]
在某些实施方案中，本文提供的是化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体；或包含上述任一种和药学上可接受的赋形剂的药物组合物在制备用于治疗有需要的受试者的过度增殖性疾病的药物中的用途。
附图说明
[0036]
本技术可以通过结合附图参考以下描述来理解。
[0037]
图1是在以2mg/kg静脉内施用至雄性c57 bl/6小鼠后化合物1的平均(
±
sd)血浆浓度对时间曲线的图。
[0038]
图2是在以10mg/kg口服施用至雄性c57 bl/6小鼠后化合物1的平均(
±
sd)血浆浓度对时间曲线的图。
[0039]
图3是在以2mg/kg静脉内施用至雄性c57 bl/6小鼠后化合物2的平均(
±
sd)血浆浓度对时间曲线的图。
[0040]
图4是在以10mg/kg口服施用至雄性c57 bl/6小鼠后化合物2的平均(
±
sd)血浆浓度对时间曲线的图。
[0041]
图5是在具有c33a子宫内膜细胞系的模型中施用化合物1和载体后化合物1的肿瘤体积对时间曲线的图。
[0042]
图6是在具有a1780卵巢癌细胞系的模型中施用化合物1和载体后化合物1的肿瘤体积对时间曲线的图。
具体实施方式
[0043]
i.化合物1
[0044]
本发明提供化合物(3-氯-4-(4-(2-(2-羟基丙-2-基)吡啶-4-基)噻吩-2-基)苯基)(4-羟基哌啶-1-基)甲酮：
[0045][0046]
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体。
[0047]
在一些实施方案中，提供了化合物1的药学上可接受的盐，或其溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体。“药学上可接受的盐”包含通常是安全的、无毒的并且不是生物学上或其它方面不合需要的盐，并且包含对于兽医用途以及人类药物用途是可接受的盐。此类盐可以包含酸加成盐和碱加成盐。酸加成盐可以由无机酸或有机酸形成，所述无机酸如但不限于盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等；所述有机酸如但不限于乙酸、2,2-二氯乙酸、己二
酸、海藻酸、抗坏血酸、天冬氨酸、苯磺酸、苯甲酸、4-乙酰氨基苯甲酸、樟脑酸、樟脑-10-磺酸、癸酸、己酸、辛酸、碳酸、肉桂酸、柠檬酸、环拉酸、十二烷基硫酸、乙烷-1,2-二磺酸、乙磺酸、2-羟基乙磺酸、甲酸、富马酸、半乳糖二酸、龙胆酸、葡庚糖酸、葡糖酸、葡糖醛酸、谷氨酸、戊二酸、2-氧代基-戊二酸、甘油磷酸、乙醇酸、马尿酸、异丁酸、乳酸、乳糖酸、月桂酸、马来酸、苹果酸、丙二酸、扁桃酸、甲磺酸、粘液酸、萘-1,5-二磺酸、萘-2-磺酸、1-羟基-2-萘甲酸、烟酸、油酸、乳清酸、草酸、棕榈酸、双羟萘酸、丙酸、焦谷氨酸、丙酮酸、水杨酸、4-氨基水杨酸、癸二酸、硬脂酸、丁二酸、酒石酸、硫氰酸、对甲苯磺酸、三氟乙酸或十一碳烯酸。衍生自无机碱的盐可以包含但不限于钠盐、钾盐、锂盐、铵盐、钙盐、镁盐、铁盐、锌盐、铜盐、锰盐和铝盐。衍生自有机碱的盐可以包含但不限于伯胺盐、仲胺盐或叔胺盐；经取代的胺，包含天然存在的经取代的胺；环胺；氨、异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、二乙醇胺、乙醇胺、丹醇、2-二甲基氨基乙醇、2-二乙基氨基乙醇、二环己胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因(procaine)、海巴明(hydrabamine)、胆碱、甜菜碱、苯乙苄胺(benethamine)、苄星(benzathine)、乙二胺、葡糖胺、甲基葡糖胺、可可碱、三乙醇胺、氨丁三醇、嘌呤、哌嗪、哌啶或n-乙基哌啶。
[0048]
在一些实施方案中，提供了化合物1的溶剂化物，或其药学上可接受的盐、互变异构体、同位素或异构体。在某些实施方案中，溶剂化物是水合物。因此，本文提供的是化合物1的水合物。
[0049]
在一些实施方案中，提供了化合物1的同位素，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体或异构体。因此，在一些实施方案中，本文提供的是包含一个或多个同位素富集原子的化合物1。化合物1可以在构成化合物1的一个或多个原子上含有非天然比例的原子同位素。在一些实施方案中，化合物是同位素标记的，如同位素标记的化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体或异构体，其中一个或多个原子的一部分被相同元素的同位素替换。可以并入到化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体或异构体中的示例性同位素包含氢、碳、氮、氧、磷、硫和氯的同位素，如2h、3h、
11
c、
13
c、
14
c、
13
n、
15
o、
17
o、
35
s、
18
f和
36
cl。某些同位素标记的化合物(例如，3h和
14
c)可以用于化合物或底物组织分布研究。在一些实施方案中，如氘(2h)等较重同位素的并入可以提供由于更大的代谢稳定性(例如，体内半衰期增加或剂量需求减少)而产生的某些治疗优势。
[0050]
本文还提供的是药物组合物，其包含化合物1，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体，以及药学上可接受的赋形剂。药学上可接受的赋形剂可包括例如佐剂、载剂、助滑剂、甜味剂、稀释剂、防腐剂、染料/着色剂、增香剂、表面活性剂、湿润剂、分散剂、悬浮剂、稳定剂、等张剂、溶剂或乳化剂，其已由美国食品药物管理局(the united states food and drug administration)批准为对于人类为可接受的。药学上可接受的赋形剂可以包括但不限于水、nacl、生理盐水、乳酸林格溶液、正蔗糖、正葡萄糖、粘合剂、填充剂、崩解剂、润滑剂、包衣剂、甜味剂、调味剂、盐溶液(例如林格溶液)、醇类、油类、明胶、碳水化合物(如乳糖、直链淀粉或淀粉)、脂肪酸酯、羟甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷和色素。
[0051]
如本文通常所用，“药学上可接受”指那些化合物、材料、组合物和/或剂型在合理医学判断的范围内，适用于与人类及动物的组织、器官和/或体液接触而无过度毒性、刺激、过敏反应或其它问题或并发症，且与合理益处/风险比率相匹配。
[0052]
ii.使用化合物1和包含化合物1的药物组合物的方法
[0053]
本文提供了使用化合物1，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体，或包含上述任一种和药学上可接受的赋形剂的药物组合物的方法。这些包含抑制srebp途径的组分(如srebp或scap)的方法；以及治疗有需要的受试者的病症的方法。在一些实施方案中，病症由srebp或scap介导。
[0054]
术语“治疗(treat、treating或treatment)”是指成功改善病症(如损伤、疾病病理或病状)的任何指标，包含任何客观或主观参数，如减轻；缓解；症状消失或使得损伤、疾病、病症、病理或病况对受试者而言更易忍受；减缓或终止退化、衰退或发展的速度；减缓病症(例如损伤、疾病、病理或病况)的进展；使退化的终点不那么衰弱；改善受试者的身体或心理健康；或缓解或导致病症(例如损伤、疾病、病理或病况)消退。症状的治疗，包含症状的改善，可以基于客观或主观参数，所述客观或主观参数可以包含身体检查、神经精神病检查和/或精神病评估的结果。本文提供了治疗过度增殖性病症的方法。在某些实施方案中，过度增殖性病症是癌症。本文所公开的某些方法可以通过例如降低癌症发生率、使癌症的缓解、减缓癌细胞的生长速度、减缓癌细胞的扩散速度、减少转移或减少转移性肿瘤的生长、减小一个或多个肿瘤的大小、减少一个或多个肿瘤的数量或其任何组合来治疗癌症。
[0055]
本文所述的治疗方法的实施方案也应被认为适用于化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体用于治疗疾病(例如损伤、疾病、病理或病况)的用途；以及化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体用于抑制srebp或抑制srebp的蛋白水解激活的用途；以及如本文所述，化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体的其他用途；以及化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体在制备药物中的用途。
[0056]
a.抑制srebp或scap
[0057]
本文提供了抑制srebp途径的组分(如srebp或scap)的用途和方法。在一些实施方案中，srebp和scap的组合被抑制。此类方法可以包含使srebp与化合物1，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体，或包括前述任一种和药学上可接受的赋形剂的药物组合物接触。此类方法还可以包含使scap与化合物1，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体，或包括前述任一种和药学上可接受的赋形剂的药物组合物接触。
[0058]
在某些实施方案中，将化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体施用于有需要的受试者以抑制srebp途径的组分。在其它实施方案中，向有需要的受试者施用包括药学上可接受的赋形剂和化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体的药物组合物。在某些实施方案中，相对于受试者的体重，化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体的量在约0.01mg/kg到约100mg/kg之间。在某些实施方案中，向有需要的受试者施用约0.7mg到约7g每天、或约7mg到约350mg每天、或约350mg到约1.75g每天、或约1.75到约7g每天的化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体，以抑制srebp途径的组分。在某些实施方案中，化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体作为药物组合物施用，如本文所描述的。
[0059]
被本文所述的方法和用途抑制的srebp途径的组分可以是srebp或scap。在一些实
施方案中，srebp被抑制。srebp可以是例如srebp-1(如srebp-1a或srebp-1c)或srebp-2。在某些变型中，srebp-1a、srebp-1c和srebp-2中的两个或三个被抑制。在一些实施方案中，组分是srebp-1。在其它实施方案中，srebp是srebp-1a。在某些实施方案中，组分是srebp-1c。在仍其它实施方案中，srebp是srebp-2。在其它实施方案中，srebp途径的组分是scap。在一些实施方案中，srebp和scap两者都被抑制。在某些实施方案中，srebp-1a、srebp-1c和srebp-2中的两个或三个被抑制，并且scap被抑制。
[0060]
抑制srebp途径的组分(如srebp或scap)可以包含部分抑制或完全抑制。部分抑制可以包含将srebp途径的组分的活性降低到仍可检测到的水平。完全抑制可以包含终止srebp途径的组分的所有活性(如终止srebp或scap的活性)，或将srebp途径的组分的活性降低到低于检测的水平。可以使用本领域已知的任何方法直接或间接测量对srebp途径的组分的抑制。
[0061]
在一些实施方案中，例如通过测量由srebp途径组分催化的反应的产物直接测量对srebp途径的组分的抑制。在一些实施方案中，(例如，通过抑制scap)抑制srebp激活可以通过蛋白质印迹和定量评估来自细胞系(如肝细胞系)或原代细胞(如小鼠、大鼠或人源的原代肝细胞)的全长和裂解srebp-1和/或srebp-2蛋白的水平来证明。
[0062]
在一些实施方案中，例如通过测量一种或多种由srebp调节的基因的表达水平间接测量对srebp途径的组分的抑制。对srebp途径的组分如srebp或scap的抑制可以降低一种或多种由srebp调节的基因(例如srebp-1(如srebp-1a或srebp-1c)或srebp-2)的表达。scap在激活srebp中起作用，因此抑制scap的活性可以降低一种或多种由srebp调控的基因的表达。srebp途径抑制还可以通过评估srebp-1和/或srebp-2的一种或多种靶基因的基因转录水平来确定，所述靶基因如acss2、aldoc、cyp51a1、dhcr7、elovl6、fasn、fdft1、fdps、hmgcs1、hsd17b7、idi1、insig1、ldlr、lss、me1、pcsk9、pmvk、rdh11、sc5dl、sqle、stard4、tm7sf2、pnpla3、srebf1、srebf2、hmgcr、mvd、mvk、acly、msmo1、acaca或acacb中的一种或多种。转录水平可以例如通过转录组学分析(包含但不限于q-pcr)来评估。这些基因中的一个、两个、三个、四个、五个或更多个基因的减少可以指示对srebp激活的抑制。可以在细胞系(如肝细胞系)或原代细胞(如小鼠、大鼠或人源的原代肝细胞)中评价对内源性srebp基因表达的这种评估。在一些实施方案中，对pcsk9或pnpla3或其组合的基因转录水平进行评估。
[0063]
因此，本文提供了降低一种或多种选自由以下组成的组的基因的表达的用途和方法：acss2、aldoc、cyp51a1、dhcr7、elovl6、fasn、fdft1、fdps、hmgcs1、hsd17b7、idi1、insig1、ldlr、lss、me1、pcsk9、pmvk、rdh11、sc5dl、sqle、stard4、tm7sf2、pnpla3、srebf1、srebf2、hmgcr、mvd、mvk、acly、msmo1、acaca和acacb，包括使srebp或scap与化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体接触。在一些实施方案中，pcsk9的表达有所降低。在其它实施方案中，pnpla3的表达有所降低。在仍另外的实施方案中，pcsk9和pnpla3两者的表达均降低。在某些实施方案中，接触一种或多种srebp，例如srebp-1(如srebp-1a或srebp-1c)或srebp-2或其任何组合。在其它实施方案中，接触scap。在仍另外的实施方案中，接触srebp-1a、srebp-1c、srebp-2和scap中的一种或多种。在某些实施方案中，对srebp途径的组分的抑制可以治疗由srebp介导的病症，如本文所述的病症。因此，在某些实施方案中，有需要的受试者的如上所述的一种或多种基因的表达有所降低。
[0064]
间接检测srebp途径抑制的另一种方法可以包含：在lss启动子的控制下使表达荧光素酶的肝细胞系(hepg2)血清饥饿以诱导srebp激活和增加的荧光素酶表达。然后可以用化合物如化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体处理细胞。治疗后，荧光素酶活性的降低反映了对srebp激活的抑制，并且可以通过ldh释放来评估化合物的非细胞毒性。
[0065]
b.治疗病症
[0066]
本文提供了在有需要的受试者中治疗病症的用途和方法，包括向受试者施用化合物1，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体。在一些实施方案中，本文提供了在有需要的受试者中治疗病症的用途和方法，包括向受试者施用药物组合物，该药物组合物包含化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体和药学上可接受的赋形剂。在一些实施方案中，病症由srebp介导。
[0067]
本文所述的治疗用途和方法可以使用化合物1，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体；或药物组合物，该药物组合物包含化合物1或药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体以及药学上可接受的赋形剂。
[0068]
1.代谢紊乱
[0069]
在一些实施方案中，病症是代谢紊乱，如影响脂质代谢、胆固醇代谢或胰岛素代谢的病症。在某些实施方案中，病症与脂质代谢、胆固醇代谢或胰岛素代谢有关，例如，由于脂肪在肝脏中堆积而引起的肝病或心血管疾病。
[0070]
在一些实施方案中，病症是肝病，如慢性肝病。在一些实施方案中，肝病由srebp途径的组分(如srebp或scap)介导。在一些实施方案中，肝病由srebp介导。在某些实施方案中，肝病由srebp的下游基因靶(如pnpla-3)介导。在其它实施方案中，肝病由scap介导。因此，在一些实施方案中，本文提供了在有需要的受试者中治疗肝脏疾病的用途和方法，包括向受试者施用化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体和包含前述任一种和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。慢性肝病可以是例如原发性酒精性肝病、非酒精性脂肪性肝病(nafld)或非酒精性脂肪性肝炎(nash)。在一些实施方案中，肝病是肝脏脂肪、肝脏炎症或肝纤维化或其组合。
[0071]
在某些实施方案中，肝病是非酒精性脂肪性肝病(nafld)。nafld是与肝脏中的脂肪堆积有关的一组病状。非酒精性脂肪性肝炎(nash)是nafld的一种形式，其包含肝脏炎症。在nash中，肝脏炎症可能导致肝损伤和瘢痕形成，这是不可逆的，并且还可能发展为肝硬化和肝功能衰竭。nafld和nash与代谢紊乱相关，如肥胖症、血脂异常、胰岛素抵抗和2型糖尿病。与nafld和nash相关的其它病症包含腹部脂肪增加和高血压。在一些实施方案中，nash由srebp途径的组分(如srebp或scap)介导。
[0072]
在一些实施方案中，本文提供了在有需要的受试者中治疗nash的用途和方法，包括向受试者施用化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体和包含前述任一种和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。nash的治疗可以包含平均肝脏脂肪含量的减少，这可以通过例如磁共振成像(mri)、磁共振弹性成像(mre)、超声或计算机化断层显象(ct)来评估；肝酶丙氨酸转氨酶(alt)的减少；肝酶天冬氨酸转氨酶(alt)的减少；通过肝活检的组织学评分评估的肝脏炎症的减少；通过肝活检的组织学评分评估的肝纤维化的减少；通过肝活检的组织学评分评估的肝脏脂肪含量的减少；或其任何组合。nash
的治疗可以使用以下来评估：nafld活性评分(nas)；或脂肪变性、活性和纤维化评分(saf)；或其它nash诊断和/或评分指标(如fib4或elf)。
[0073]
本文还提供了在有需要的受试者中治疗病症的用途和方法，其中所述病症是与nash相关的肝纤维化，包括向受试者施用化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体和包含前述任一种和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。在一些实施方案中，肝纤维化由srebp介导。肝纤维化的治疗可以例如通过以下来评估：磁共振成像(mri)、磁共振弹性成像(mre)、超声或计算机化断层显象(ct)；肝酶丙氨酸转氨酶(alt)的减少；肝酶天冬氨酸转氨酶(alt)的减少；通过肝活检的组织学评分评估的肝脏炎症和/或纤维化的减少；或其任何组合。
[0074]
本文还提供了在有需要的受试者中治疗病症的用途和方法，其中所述病症是脂肪性肝病，包括向受试者施用化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体和包含前述任一种和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。在一些实施方案中，脂肪性肝病由srebp介导。在某些实施方案中，当受试者肝脏的脂肪含量为5％或更大时，受试者可能患有脂肪性肝病。在一些实施方案中，患有脂肪性肝病的受试者患有nash或与nash相关的肝纤维化。在某些实施方案中，患有脂肪性肝病的受试者被诊断为未患nash或与nash相关的肝纤维化。脂肪性肝病的治疗可以例如通过以下来评估：磁共振成像(mri)、磁共振弹性成像(mre)、超声或计算机化断层显象(ct)；肝酶丙氨酸转氨酶(alt)的减少；肝酶天冬氨酸转氨酶(alt)的减少；通过肝活检的组织学评分评估的肝脏炎症的减少；通过肝活检的组织学评分评估的肝纤维化的减少；通过肝活检的组织学评分评估的肝脏脂肪含量的减少；或其任何组合。
[0075]
在本文提供的治疗肝病的用途和方法(如治疗肝纤维化、脂肪性肝病或nash的方法)的一些实施方案中，相对于受试者的体重，向受试者施用约0.01mg/kg到约100mg/kg之间的化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体。在某些实施方案中，向有需要的受试者施用约0.7mg到约7g每天、或约7mg到约350mg每天、或约350mg到约1.75g每天、或约1.75到约7g每天的化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体。在某些实施方案中，化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体作为药物组合物施用，如本文所描述的。
[0076]
可以用本文所述的化合物或药物组合物治疗的其它代谢紊乱可以包含例如胰岛素抵抗、高血糖、糖尿病、血脂异常、脂肪病变、肥胖症和代谢综合征。在一些实施方案中，代谢紊乱由遗传因素介导。在其它实施方案中，代谢紊乱由一种或多种环境因素介导，如富含脂肪的饮食或富含糖的饮食或其组合。在一些实施方案中，代谢紊乱由srebp介导。在一些实施方案中，糖尿病是i型糖尿病。在某些实施方案中，糖尿病是ii型糖尿病。
[0077]
本文提供了在有需要的受试者中治疗糖尿病的用途和方法，包括向受试者施用化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体和包含前述任一种和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。糖尿病(diabetes，也称为diabetes mellitus)是指通常以葡萄糖的产生和利用中的代谢缺陷为特征的疾病或病状，其导致体内无法维持适当的血糖水平。在一些实施方案中，糖尿病是ii型糖尿病，其特征在于胰岛素抵抗，其中胰岛素失去其在宽浓度范围内发挥其生物学效应的能力。在一些实施方案中，糖尿病由srebp途径的组分(如srebp或scap)介导。
[0078]
本文还提供了在有需要的受试者中治疗胰岛素抵抗的用途和方法，包括向受试者施用化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体和包含前述任一种和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。胰岛素抵抗已被假设为统一高血压、葡萄糖耐受不良、高胰岛素血症、甘油三酯水平升高、hdl胆固醇降低以及中枢性和整体肥胖症的聚集。“代谢综合征”是指一组类似的病状，其可以包含腹部肥胖症、高血压、高血糖、高血清甘油三酯(如空腹血清甘油三酯升高)和低hdl水平，并且与发展为心血管疾病和/或ii型糖尿病的风险相关。本文还提供了在有需要的受试者中治疗代谢综合征的用途和方法，包括向受试者施用化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体和包含前述任一种和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。在一些实施方案中，代谢综合征或胰岛素抵抗由srebp途径的组分(如srebp或scap)介导。
[0079]
在本文提供的治疗胰岛素抵抗、高血糖、糖尿病、肥胖症或代谢综合征的用途和方法的一些实施方案中，相对于受试者的体重，向受试者施用约0.01mg/kg到约100mg/kg之间的化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体。在某些实施方案中，向有需要的受试者施用约0.7mg到约7g每天、或约7mg到约350mg每天、或约350mg到约1.75g每天、或约1.75到约7g每天的化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体。在某些实施方案中，化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体作为药物组合物施用，如本文所描述的。
[0080]
在其它实施方案中，代谢紊乱是血脂异常。因此，在其他实施方案中，本文提供了在有需要的受试者中治疗血脂异常的用途和方法，包括向受试者施用化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体和包含前述任一种和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。血脂异常是指一种或多种脂质或一种或多种脂蛋白或其任何组合的异常血浆水平。血脂异常可以包含一种或多种脂质和/或一种或多种脂蛋白的水平降低或水平升高，或水平降低和升高的组合(例如，一种脂质的水平升高而另一种脂质和/或脂蛋白的水平降低)。血脂异常可以包含但不限于低密度脂蛋白胆固醇(ldl)升高、载脂蛋白b升高、甘油三酯(tg)升高、脂蛋白(a)升高、载脂蛋白a升高、高密度脂蛋白胆固醇(hdl)降低或载脂蛋白a1降低，或其任何组合。血脂异常(如胆固醇异常或tg水平异常)与血管疾病(如心脏病发作或中风)、动脉粥样硬化和冠状动脉疾病的风险增加相关。在本文提供的方法的一些实施方案中，血脂异常是高脂血症。高脂血症是指血液中脂质水平异常升高，并且可以包含(1)高胆固醇血症(胆固醇水平升高)；(2)高甘油三酯血症(甘油三酯水平升高)；以及(3)混合型合高脂血症(高胆固醇血症和高甘油三酯血症的组合)。血脂异常可能由遗传倾向和饮食共同引起，并且可能与超重、糖尿病或代谢综合征相关。某些药物(如用于器官或组织移植患者的抗排斥方案的药物)也可能导致血脂异常。在一些实施方案中，血脂异常(如高脂血症)是由srebp途径的组分(如srebp或scap)介导的。因此，在一些实施方案中，本文提供了在有需要的受试者中降低胆固醇水平、调节胆固醇代谢、调节胆固醇分解代谢、调节膳食胆固醇的吸收、逆转胆固醇转运或降低甘油三酯的用途和方法，所述方法包括向有需要的受试者施用化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体；或包括前述各项中的任一项以及药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
[0081]
在本文提供的治疗血脂异常的用途和方法的一些实施方案中，如本文提供的在有需要的受试者中降低胆固醇水平、调节胆固醇代谢、调节胆固醇分解代谢、调节膳食胆固醇
的吸收、逆转胆固醇转运或降低甘油三酯，相对于受试者的体重，向受试者施用约0.01mg/kg到约100mg/kg之间的化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体。在某些实施方案中，向有需要的受试者施用约0.7mg到约7g每天、或约7mg到约350mg每天、或约350mg到约1.75g每天、或约1.75到约7g每天的化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体。在某些实施方案中，化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体作为药物组合物施用，如本文所描述的。
[0082]
在仍其他实施方案中，本文提供了治疗有需要的受试者的脂肪病变的方法，包括向受试者施用化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体；或包含上述任一种和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。在一些实施方案中，脂肪病变与代谢综合征相关。在一些实施方案中，脂肪病变由srebp途径的组分(如srebp或scap)介导。
[0083]
在某些实施方案中，本文提供了在有需要的受试者中治疗胆结石的用途和方法，包括向受试者施用化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体和包含前述任一种和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。胆结石可能与胆囊炎症、胰腺炎症或肝脏炎症相关。在某些实施方案中，胆结石是胆固醇胆结石，其可能在胆汁含有高浓度的胆固醇且胆汁盐不足时形成。在一些实施方案中，可能包含胆固醇结石病的胆结石由srebp途径的组分(如srebp或scap)介导。
[0084]
在其它实施方案中，病症是胰腺炎。在又其它实施方案中，病症是内毒素休克、全身炎症或黄瘤。在仍另外的实施方案中，病症是动脉粥样硬化、冠状动脉疾病、心绞痛、颈动脉疾病、中风或脑动脉硬化。在某些实施方案中，前述病症中的任一病症由srebp途径的组分(如srebp或scap)介导。
[0085]
在本文提供的治疗胆结石、胰腺炎、内毒素休克、全身炎症、黄瘤、动脉粥样硬化、冠状动脉疾病、心绞痛、颈动脉疾病、中风或脑动脉硬化的用途和方法的一些实施方案中，相对于受试者的体重，向受试者施用约0.01mg/kg到约100mg/kg之间的化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体。在某些实施方案中，向有需要的受试者施用约0.7mg到约7g每天、或约7mg到约350mg每天、或约350mg到约1.75g每天、或约1.75到约7g每天的化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体。在某些实施方案中，化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体作为药物组合物施用，如本文所描述的。
[0086]
在以上实施方案中的任一个的一些实施方案中，受试者超重、肥胖、具有胰岛素抵抗、处于糖尿病前期或患有ii型糖尿病。在前述实施方案中的任一实施方案的某些实施方案中，受试者患有nash。
[0087]
2.过度增殖性病症
[0088]
在另一个实施方案中，病症是过度增殖性病症。因此，在一些实施方案中，本文提供了在有需要的受试者中治疗过度增殖性病症的用途和方法，包括向受试者施用化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体和包含前述任一种和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
[0089]
如上所述，脂肪酸、胆固醇和甘油三酯的代谢可能在过度增殖性病症(如癌症)中起作用。通常，在非癌性细胞向癌细胞的转化期间，细胞代谢从分解代谢转变为合成代谢过程。根据肿瘤的类型，肿瘤细胞可以合成高达95％的饱和和单不饱和脂肪酸。一些癌症表现
出脂肪酸和其它脂质(如胆固醇)以及类固醇(如雄激素)的合成增加。脂肪酸合成酶(fas)表达升高可以诱导癌细胞进展到s期，而对fas表达的抑制可以减少细胞生长并且可以诱导细胞凋亡。因此，srebp途径的组分可能在过度增殖性病症中起作用。
[0090]
过度增殖性病症作为与某种程度的异常细胞增殖相关的病症可以是良性的或恶性的。良性过度增殖性病症可以包含癌前病症。
[0091]
在本文提供的用途和方法的一些实施方案中，病症是良性过度增殖性病症。在一些实施方案中，良性过度增殖性病症由srebp途径的组分(如srebp或scap)介导。在其它实施方案中，病症是恶性过度增殖性病症。在一些实施方案中，恶性过度增殖性病症由srebp途径的组分(如srebp或scap)介导。
[0092]
在一些实施方案中，过度增殖性病症是乳腺癌、肝癌、卵巢癌、胰腺癌或前列腺癌。
[0093]
在一些实施方案中，过度增殖性病症是软组织肉瘤、膀胱癌、子宫内膜癌、皮肤癌、结肠癌、血液系统癌症、胎盘癌、脑癌、肾癌、肺癌或骨癌。肉瘤可以包含从骨骼和软组织开始的癌症。肉瘤包含例如结缔组织癌，如肌肉癌。
[0094]
在如本文所述的治疗有需要的受试者的过度增殖性病症的用途和方法的一些实施方案中，在约0.01mg/kg到约100mg/kg之间。在一些实施方案中，相对于受试者的体重，向有需要的受试者施用约0.7mg到约7g每天、或约7mg到约350mg每天、或约350mg到约1.75g每天、或约1.75到约7g每天的化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体。在某些实施方案中，化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体作为药物组合物施用，如本文所描述的。
[0095]
iii.施用的剂量和方法
[0096]
根据所公开方法和用途中任一种向有需要的受试者施用的化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体的剂量可以根据以下而有所不同：化合物1或其特定的药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体；施用方法；被治疗的特定病症；以及受试者的特性(如体重、性别和/或年龄)。在一些实施方案中，化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体的量是治疗有效量。
[0097]
在一些实施方案中，相对于受试者的体重，化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体的有效量可以在约0.01mg/kg到约100mg/kg之间。在某些实施方案中，向有需要的受试者施用约0.7mg到约7g每天、或约7mg到约350mg每天、或约350mg到约1.75g每天、或约1.75到约7g每天的化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体。在某些实施方案中，化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体作为药物组合物施用，如本文所描述的。
[0098]
本文提供的用途和方法中的任一种可以包括向有需要的受试者施用包括有效量的化合物1或其相应量的药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体以及药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
[0099]
可以通过任何合适的路径(包含例如，静脉内、肌肉内、皮下、口服或经皮路径)向受试者施用如本文提供的化合物1，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体，或如本文提供的包括这些和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
[0100]
在某些实施方案中，本文提供了通过在肠胃外向受试者施用有效量的如本文提供的化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体或如本文提供
的包括有效量的前述的任一种和药学上可接受的赋形剂的药物组合物来治疗有需要的受试者的病症的用途和方法。在一些实施方案中，病症是过度增殖性病症。在某些实施方案中，过度增殖性病症是癌症。在其它实施方案中，病症是脂肪性肝病。在某些实施方案中，病症是nash。在一些实施方案中，施用路径是静脉内、动脉内、肌肉内或皮下。在一些实施方案中，施用路径是经皮。
[0101]
在某些实施方案中，本文提供了药物组合物，其包含化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体，以及药学上可接受的赋形剂，用于治疗本文所述的病症。在一些实施方案中，病症得到预防，或发病延迟，或发展延迟。在一些实施方案中，病症是过度增殖性病症。在某些实施方案中，过度增殖性病症是癌症。在一些实施方案中，病症是脂肪性肝病。在某些实施方案中，病症是nash。在某些实施方案中，组合物包括药物制剂，其以一种或多种单位剂型存在，例如一种、两种、三种、四种或更多种单位剂型。
[0102]
iv.试剂盒
[0103]
还提供了制品，所述制品包括化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体或包含其的药物组合物或包含这些中的任一种的单位剂量，所述制品如本文所描述的呈合适的包装以用于本文所述的方法中。合适的包装可以包含例如小瓶、器皿、安瓿、瓶子、广口瓶、软包装等。制品可以进一步消毒和/或是密封试剂盒。
[0104]
本文进一步提供了试剂盒，其包括化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体，或包含其和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。试剂盒可以在本文所述的方法中的任一种中使用。在一些实施方案中，试剂盒进一步包括说明书。试剂盒可以用于本文所述的用途中的任何一种或多种用途，并且因此可以含有用于治疗过度增殖性疾病(如癌症)、脂肪性肝病或nash的说明。试剂盒可以包括一个或多个容器。每种组分(如果有多于一种组分)可以包装在单独的容器中，或者在交叉反应和保质期允许的情况下，一些组分可以组合在一个容器中。
[0105]
试剂盒可以呈单位剂型、散装包装(例如，多剂量包装)或亚单位剂量。例如，可以提供含有足够剂量的如本文所公开的化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体和/或用于本文详述的病症的第二药学活性化合物的试剂盒，以在延长的时间段内提供对受试者的有效治疗，所述延长的时间段如一周、2周、3周、4周、6周、8周、3个月、4个月、5个月、7个月、8个月、9个月或更长时间。试剂盒还可以包括多个单位剂量的化合物1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体，以及使用说明书，并以足以在药房(例如，医院药房或复合药房)中储存和使用的量进行包装。
[0106]
试剂盒可以任选地包含一组关于本文所述的方法的组分用途的说明书，通常是书面说明书，但是含有说明书的电子存储介质(例如，磁盘或光盘)也是可接受的。试剂盒中包含的说明书可以包含关于组分和其向个体施用的信息。
[0107]
本说明书阐述大量示范性配置、方法、参数及其类似者。然而，应认识到，此类描述并不打算作为本发明的范围的限制，而是替代地作为示范性实施方案的描述而提供。
[0108]
所列举的实施方案
[0109]
实施方案i-1.化合物(3-氯-4-(4-(2-(2-羟基丙-2-基)吡啶-4-基)噻吩-2-基)苯基)(4-羟基哌啶-1-基)甲酮：
[0110][0111]
或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体。
[0112]
实施方案i-2.一种药物组合物，其包括化合物实施方案i-1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体以及药学上可接受的赋形剂。
[0113]
实施方案i-3.一种抑制甾醇调节元件结合蛋白(srebp)的方法，所述方法包括使所述srebp或srebp裂解激活蛋白(scap)与化合物实施方案i-1或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体或根据实施方案i-2所述的药物组合物接触。
[0114]
实施方案i-4.一种抑制甾醇调节元件结合蛋白(srebp)的蛋白水解激活的方法，所述方法包括使srebp裂解激活蛋白(scap)与实施方案i-1的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体或根据实施方案i-2所述的药物组合物接触。
[0115]
实施方案i-5.一种治疗有需要的受试者的病症的方法，其中所述病症由甾醇调节元件结合蛋白(srebp)介导，所述方法包括向所述受试者施用有效量的实施方案i-1的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体或根据实施方案i-2所述的药物组合物。
[0116]
实施方案i-6.一种治疗有需要的受试者的病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的实施方案i-1的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体或根据实施方案i-2所述的药物组合物。
[0117]
实施方案i-7.根据实施方案i-3至i-5中任一项所述的方法，其中所述srebp是srebp-1。
[0118]
实施方案i-8.根据实施方案i-7所述的方法，其中所述srebp-1是srebp-1a。
[0119]
实施方案i-9.根据实施方案i-7所述的方法，其中所述srebp-1是srebp-1c。
[0120]
实施方案i-10.根据实施方案i-3至i-5中任一项所述的方法，其中所述srebp是srebp-2。
[0121]
实施方案i-11.根据实施方案i-3到i-10中任一项所述的方法，其中srebp在有需要的受试者体内得到抑制。
[0122]
实施方案i-12.根据实施方案i-3到i-11中任一项所述的方法，其中scap在有需要的受试者体内得到抑制。
[0123]
实施方案i-13.根据实施方案i-3到i-12中任一项所述的方法，包括使srebp或scap与所述化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体或所述药物组合物接触，其中在使所述srebp或scap与所述化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体或所述药物组合物接触之后，一个或多个选自以下的基因的表达降低：acss2、aldoc、cyp51a1、dhcr7、elovl6、fasn、fdft1、fdps、hmgcs1、hsd17b7、idi1、insig1、ldlr、lss、me1、pcsk9、pmvk、rdh11、sc5dl、sqle、stard4、tm7sf2、pnpla3、srebf1、srebf2、hmgcr、mvd、mvk、acly、msmo1、acaca和acacb。
[0124]
实施方案i-14.根据实施方案i-5或i-6所述的方法，其中所述病症是代谢综合征、2型糖尿病、肥胖症、肝病、胰岛素抵抗、脂肪病变或血脂异常。
[0125]
实施方案i-15.根据实施方案i-14所述的方法，其中所述血脂异常是高甘油三酯血症或胆固醇水平升高。
[0126]
实施方案i-16.根据实施方案i-14所述的方法，其中所述肝病是非酒精性脂肪性肝炎、肝纤维化或肝脏炎症，或其组合。
[0127]
实施方案i-17.根据实施方案i-5或i-6所述的方法，其中所述病症是过度增殖性病症。
[0128]
实施方案i-18.根据实施方案i-17所述的方法，其中所述过度增殖性病症是癌症。
[0129]
实施方案i-19.根据实施方案i-18所述的方法，其中所述癌症是乳腺癌、肝癌、卵巢癌、胰腺癌或前列腺癌。
[0130]
实施方案i-19-a.根据实施方案i-18所述的方法，其中所述癌症是乳腺癌、肝癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、软组织肉瘤、膀胱癌、子宫内膜癌、皮肤癌、结肠癌、血液系统癌症、胎盘癌、脑癌、肾癌、肺癌或骨癌。
[0131]
实施方案i-20.根据实施方案i-5或i-6所述的方法，其中所述病症是内毒素休克、全身炎症或动脉粥样硬化。
[0132]
实施方案i-21.根据实施方案i-1所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体在用于制造用于在有需要的受试者中抑制甾醇调节元件结合蛋白(srebp)的药物中的用途。
[0133]
实施方案i-22.根据实施方案i-21所述的用途，其中所述抑制包括使srebp接触或使srebp裂解激活蛋白(scap)接触所述化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体。
[0134]
实施方案i-23.根据实施方案i-1所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体在用于制造用于在有需要的受试者中抑制甾醇调节元件结合蛋白(srebp)的蛋白水解激活的药物中的用途。
[0135]
实施方案i-24.根据实施方案i-23所述的用途，其中所述抑制包括使srebp裂解激活蛋白(scap)接触所述化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体。实施方案i-25.根据实施方案i-1所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体的用途在用于制造用于治疗有需要的受试者的病症的药物中的用途，其中所述病症由甾醇调节元件结合蛋白(srebp)介导。
[0136]
实施方案i-26.根据实施方案i-1所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体的用途在用于制造用于治疗有需要的受试者的病症的药物中的用途。
[0137]
实施方案i-27.根据实施方案i-21至i-25中任一项所述的用途，其中所述srebp是srebp-1。
[0138]
实施方案i-28.根据实施方案i-27所述的用途，其中所述srebp-1是srebp-1a。
[0139]
实施方案i-29.根据实施方案i-27所述的用途，其中所述srebp-1是srebp-1c。
[0140]
实施方案i-30.根据实施方案i-21至i-25中任一项所述的用途，其中所述srebp是srebp-2。
[0141]
实施方案i-31.根据实施方案i-21到i-30中任一项所述的用途，其中srebp在有需要的受试者体内得到抑制。
[0142]
实施方案i-32.根据实施方案i-21到i-31中任一项所述的用途，其中scap在有需要的受试者体内得到抑制。
[0143]
实施方案i-33.根据实施方案i-21到i-32中任一项所述的用途，其中使srebp或scap与所述化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体接触，并且在使所述srebp或scap与所述化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体接触之后，一个或多个选自以下的基因的表达降低：acss2、aldoc、cyp51a1、dhcr7、elovl6、fasn、fdft1、fdps、hmgcs1、hsd17b7、idi1、insig1、ldlr、lss、me1、pcsk9、pmvk、rdh11、sc5dl、sqle、stard4、tm7sf2、pnpla3、srebf1、srebf2、hmgcr、mvd、mvk、acly、msmo1、acaca和acacb。
[0144]
实施方案i-34.根据实施方案i-25或i-26所述的用途，其中所述病症是代谢综合征、2型糖尿病、肥胖症、肝病、胰岛素抵抗、脂肪病变或血脂异常。
[0145]
实施方案i-35.根据实施方案i-34所述的用途，其中所述血脂异常是高甘油三酯血症或胆固醇水平升高。
[0146]
实施方案i-36.根据实施方案i-34所述的用途，其中所述肝病是非酒精性脂肪性肝炎、肝纤维化或肝脏炎症，或其组合。
[0147]
实施方案i-37.根据实施方案i-25或i-26所述的用途，其中所述病症是过度增殖性病症。
[0148]
实施方案i-38.根据实施方案i-37所述的用途，其中过度增殖性病症是癌症。
[0149]
实施方案i-39.根据实施方案i-38所述的用途，其中所述癌症是乳腺癌、肝癌、卵巢癌、胰腺癌或前列腺癌。
[0150]
实施方案i-39-a.根据实施方案i-38所述的用途，其中所述癌症是乳腺癌、肝癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、软组织肉瘤、膀胱癌、子宫内膜癌、皮肤癌、结肠癌、血液系统癌症、胎盘癌、脑癌、肾癌、肺癌或骨癌。
[0151]
实施方案i-40.根据实施方案i-25或i-26所述的用途，其中所述病症是内毒素休克、全身炎症或动脉粥样硬化。
[0152]
实施方案i-41.根据实施方案i-1的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体或实施方案i-2的药物组合物用于抑制甾醇调节元件结合蛋白(srebp)的用途。
[0153]
实施方案i-42.根据实施方案i-41所述的用途，其中所述抑制包括使srebp接触或使srebp裂解激活蛋白(scap)接触所述化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体。
[0154]
实施方案i-43.根据实施方案i-1的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体或实施方案i-2的药物组合物用于抑制甾醇调节元件结合蛋白(srebp)的蛋白水解激活的用途。
[0155]
实施方案i-44.根据实施方案i-43所述的用途，其中所述抑制包括使srebp裂解激活蛋白(scap)接触所述化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体。实施方案i-45.根据实施方案i-1所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体或实施方案i-2所述的药物组合物用于治疗有需要的受试者的病症的用途，其中所述病症由甾醇调节元件结合蛋白(srebp)介导。
[0156]
实施方案i-46.根据实施方案i-1所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体或实施方案i-2所述的药物组合物用于治疗有需要的受试者的病症的用途。
[0157]
实施方案i-47.根据实施方案i-41至i-45中任一项所述的用途，其中所述srebp是srebp-1。
[0158]
实施方案i-48.根据实施方案i-47所述的用途，其中所述srebp-1是srebp-1a。
[0159]
实施方案i-49.根据实施方案i-47所述的用途，其中所述srebp-1是srebp-1c。
[0160]
实施方案i-50.根据实施方案i-41至i-45中任一项所述的用途，其中所述srebp是srebp-2。
[0161]
实施方案i-51.根据实施方案i-41到i-50中任一项所述的用途，其中srebp在有需要的受试者体内得到抑制。
[0162]
实施方案i-52.根据实施方案i-41到i-51中任一项所述的用途，其中scap在有需要的受试者体内得到抑制。
[0163]
实施方案i-53.根据实施方案i-41到i-52中任一项所述的用途，其中使srebp或scap与所述化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体或所述药物组合物接触，并且在使所述srebp或scap与所述化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体或所述药物组合物接触之后，一个或多个选自以下的基因的表达降低：acss2、aldoc、cyp51a1、dhcr7、elovl6、fasn、fdft1、fdps、hmgcs1、hsd17b7、idi1、insig1、ldlr、lss、me1、pcsk9、pmvk、rdh11、sc5dl、sqle、stard4、tm7sf2、pnpla3、srebf1、srebf2、hmgcr、mvd、mvk、acly、msmo1、acaca和acacb。
[0164]
实施方案i-54.根据实施方案i-45或i-46所述的用途，其中所述病症是代谢综合征、2型糖尿病、肥胖症、肝病、胰岛素抵抗、脂肪病变或血脂异常。
[0165]
实施方案i-55.根据实施方案i-54所述的用途，其中所述血脂异常是高甘油三酯血症或胆固醇水平升高。
[0166]
实施方案i-56.根据实施方案i-55所述的用途，其中所述肝病是非酒精性脂肪性肝炎、肝纤维化或肝脏炎症，或其组合。
[0167]
实施方案i-57.根据实施方案i-45或i-46所述的用途，其中所述病症是过度增殖性病症。
[0168]
实施方案i-58.根据实施方案i-57所述的用途，其中过度增殖性病症是癌症。
[0169]
实施方案i-59.根据实施方案i-58所述的用途，其中所述癌症是乳腺癌、肝癌、卵巢癌、胰腺癌或前列腺癌。
[0170]
实施方案i-59-a.根据实施方案i-58所述的用途，其中所述癌症是乳腺癌、肝癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、软组织肉瘤、膀胱癌、子宫内膜癌、皮肤癌、结肠癌、血液系统癌症、胎盘癌、脑癌、肾癌、肺癌或骨癌。
[0171]
实施方案i-60.根据实施方案i-45或i-46所述的用途，其中所述病症是内毒素休克、全身炎症或动脉粥样硬化。
[0172]
实施方案i-61.一种治疗有需要的受试者的非酒精性脂肪性肝炎(nash)的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的实施方案i-1的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体或根据实施方案i-2所述的药物组合物。
[0173]
实施方案i-62.根据实施方案i-1所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体或实施方案i-2所述的药物组合物用于治疗有需要的受试者的非酒精性脂肪性肝炎(nash)的用途。
[0174]
实施方案i-63.根据实施方案i-1所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体或实施方案i-2所述的药物组合物在制造用于治疗有需要的受试者的非酒精性脂肪性肝炎(nash)的药物中的用途。
[0175]
实施方案i-64.一种治疗有需要的受试者的过度增殖性病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的实施方案i-1的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体或根据实施方案i-2所述的药物组合物。
[0176]
实施方案i-65.根据实施方案i-1所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体或实施方案i-2所述的药物组合物用于治疗有需要的受试者的过度增殖性病症的用途。
[0177]
实施方案i-66.根据实施方案i-1所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体或实施方案i-2所述的药物组合物在制造用于治疗有需要的受试者的过度增殖性病症的药物中的用途。
[0178]
实施方案i-67.根据实施方案i-1所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体，其用于抑制甾醇调节元件结合蛋白(srebp)。
[0179]
实施方案i-68.根据实施方案i-1所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体，其用于抑制甾醇调节元件结合蛋白(srebp)的蛋白水解激活。
[0180]
实施方案i-69.根据实施方案i-1所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体，其用于治疗有需要的受试者的病症，其中所述病症由甾醇调节元件结合蛋白(srebp)介导。
[0181]
实施方案i-70.根据实施方案i-1所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体，其用于治疗有需要的受试者的病症。
[0182]
实施方案i-71.根据实施方案i-1所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体，其用于治疗有需要的受试者的非酒精性脂肪性肝炎(nash)。
[0183]
实施方案i-72.根据实施方案i-1所述的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同位素或异构体，其用于治疗有需要的受试者的过度增殖性病症。
[0184]
实施例
[0185]
以下实施例仅为示范性的且不打算以任何方式限制本发明的任何实施方案。
[0186]
在一些情况下，生物学实施例1-6将化合物1与其单碳同系物化合物2进行比较，以表明化合物结构的小变化可能导致体外和体内生物活性的出乎预料的变化。
[0187][0188]
合成实施例1：化合物1的合成
[0189][0190]
根据上面的方案合成化合物1。
[0191]
步骤1-化合物i-3的合成：用氮气吹扫在48ml玻璃密封管中的化合物i-1(500mg，2.083mmol)、化合物i-2(401.00mg，1.88mmol)和碳酸钾(877.30mg，6.249mmol)在水(1.5ml)和1,4-二噁烷(5.0ml)中的搅拌的溶液20分钟。在添加钯四(palladium tetrakis)(240.307mg,0.208mmol)后，将反应混合物用氮气吹扫20分钟，并将反应物质加热至80℃保持16小时。通过tlc(tlc硅胶板，uv以可视化现场)和lcms，监测反应进程。在反应完成后，将混合物冷却至25℃-30℃并通过硅藻土床过滤并用乙酸乙酯(30ml)洗涤。减压浓缩合并的有机层，得到粗品(800mg)。使用15-20％乙酸乙酯的石油醚溶液作为洗脱剂，将粗化合物(800mg)通过230-400硅胶(柱色谱法)纯化。收集合适的级分并减压浓缩，得到产物i-3(440mg，65％产率)，为灰白色固体。tlc系统：30％乙酸乙酯在石油醚中(rf值＝0.50)。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ8.17(d,j＝2.00hz,1h),7.96(dd,j＝1.60,8.00hz,1h),7.60(d,j＝8.00hz,1h),7.42(d,j＝1.60hz,1h),7.38(d,j＝1.60hz,1h),3.97(s,3h)。
[0192]
步骤2-化合物i-4的合成：向化合物i-3(440mg，1.337mmol)在thf:meoh:h2o中的搅拌溶液中在0-5℃下加入lioh水合物(140.5mg，3.343mmol)并将反应物质在室温搅拌2h。通过tlc(tlc硅胶板，uv以可视化现场)和lcms，监测反应进程。在反应完成后，将反应混合物中的溶剂完全蒸发，加入水，将混合物用1n hcl酸化并用乙酸乙酯(30ml)萃取。减压浓缩合并的有机层，得到产物i-4(380mg,65％产率)，为灰白色固体。tlc系统：mdc中10％meoh(rf值＝0.20)。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ13.49(s,1h),8.04(s,1h),7.93-7.92(m,2h),7.82(d,j＝8.0hz,1h),7.61(s,1h)；lcms:89.66％(m/z＝316.8[m+h])。
[0193]
步骤3-化合物i-6的合成：向化合物i-4(360mg，1.139mmol)在thf中的搅拌溶液中在0-5℃下加入hatu(657.8mg,1.708mmol)，然后加入dipea(440.8mg,3.417mmol)。然后将反应混合物在0-5℃搅拌30分钟，然后加入哌啶-4-醇(172.6mg,1.708mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16小时，并通过tlc(tlc硅胶板，uv以可视化现场)和lcms监测反应的进展。完成后，用冰水淬灭反应并用乙酸乙酯(100ml)萃取。将有机层用水和盐水洗涤，减压浓缩，得到粗物质(600mg)。使用55-60％乙酸乙酯的石油醚溶液作为洗脱剂，将粗化合物(600mg)通过230-400硅胶(柱色谱法)纯化。收集合适的级分并减压浓缩，得到产物i-6(390mg，56％产率)，为灰白色固体。tlc系统：石油醚中70％etoac(rf值＝0.3)。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ7.54-7.52(m,2h),7.33-7.26(m,3h),5.94(s,1h),5.30(br s,1h),4.00-4.01(m,1h),3.69-3.66(m,2h),3.29(m,2h),2.05-1.85(m,2h),1.60-1.50(m,2h)。lcms:83.24％(m/z＝400.17[m+h])。
[0194]
步骤4-化合物i-7的合成：用氮气吹扫在48ml密封玻璃管中的化合物i-6(390mg，0.9789mmol)、双(频哪醇合)二硼(bispinacolato diboron)(371.87mg，1.469mmol)和醋酸钾(289.14mg，2.9367)在1,4-二噁烷(8ml)中的搅拌溶液10分钟。在添加pdcl2(dppf)dcm加合物(79.87mg,0.0979mmol)后，将反应混合物用氮气吹扫20分钟，并将反应物质在80℃加热16小时。通过tlc(tlc硅胶板，uv以可视化现场)和lcms，监测反应进程。在反应完成后，将混合物冷却至25℃-30℃并通过硅藻土床过滤并用乙酸乙酯(2x 30ml)洗涤。将合并的有机层直接减压浓缩，得到粗品(800mg)。将粗化合物(800mg)与甲醇共蒸馏三次(每次10ml)，并将材料与石油醚中的5％乙酸乙酯一起搅拌，然后倾析并完全蒸发以获得所需的硼酸盐(320mg,42％产率)。将其用于下一步而无需进一步纯化。tlc系统：dcm中10％meoh(rf值＝0.3)。lcms：80.54％(m/z＝448.1[m+h])和(m/z＝366.1[m+h]，硼酸质量)。
[0195]
步骤5-化合物1的合成：用氮气吹扫在48ml密封玻璃管中的化合物i-7(300mg，0.6696mmol)、化合物i-8(172.0mg，0.8035mmol)和碳酸钾(278.30mg，2.0088mmol)在水(0.9ml)和1,4-二噁烷(3.0ml)中的搅拌溶液10分钟。在添加钯四(77.35mg，0.066mmol)，将反应混合物再次用氮气吹扫30分钟，并将混合物在80℃加热16小时。通过tlc(tlc硅胶板，uv以可视化现场)和lcms，监测反应进程。在反应完成后，将混合物冷却至25℃-30℃并通过硅藻土床过滤并用乙酸乙酯(40ml)洗涤。减压浓缩合并的有机层，得到粗材料(400mg)。然后通过制备型hplc纯化粗化合物。将收集的级分减压浓缩，得到化合物1(70mg，25.5％)，为灰白色固体。tlc系统：dcm中10％meoh(rf值＝0.3)。1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ8.54-8.52(m,1h),8.33(d,j＝1.60hz,1h),8.02(d,j＝1.60hz,1h),7.99(d,j＝0.80hz,1h),7.84(dd,j＝8.00hz,1h),7.62-7.60(m,2h),7.45(dd,j＝1.60,8.00hz,1h),5.28(s,1h),4.81(d,j＝3.60hz,1h),3.99(br s,1h),3.78-3.73(m,1h),3.51(d,j＝4.00hz,1h),3.30-3.15(br s,2h),1.85-1.70(m,2h),1.48(s,6h),1.45-1.30(m,2h)。lcms:97.32％(m/z＝457.00[m+h])。
[0196]
合成实施例2：化合物1的规模化合成
[0197][0198]
替代地根据上面的方案合成化合物1。
[0199]
步骤1：2-(4-溴吡啶-2-基)丙-2-醇(i-8)的合成：向化合物i-9(200g，0.9258摩尔)在四氢呋喃(3000ml)中的搅拌溶液中，在-70
±
10℃和氮气氛下加入甲基溴化镁溶液(3.0m乙醚溶液)(1543ml，4.628摩尔)。将反应物料保持在-65
±
5℃下3，然后用饱和氯化铵溶液(2000ml)淬灭(在-65
±
5℃开始淬灭并缓慢升高温度至25
±
5℃)。分离有机层，水层用乙酸乙酯(2000ml)再萃取。将合并的有机层用水(2000ml)洗涤，干燥并在40
±
5℃减压(真空100-300毫巴)下浓缩，得到粗化合物2-(4-溴吡啶-2-基)丙-2-醇(化合物i-9)，为棕色液体(197g，粗品)，其在步骤4中使用而无需进一步柱纯化。
[0200]
步骤2：4-(4-溴噻吩-2-基)-3-氯苯甲酸酯(i-3)的合成：向化合物i-1(400g,1.6533摩尔)在四氢呋喃(3200ml)中的搅拌溶液中，在25
±
5℃和氮气气氛下加入化合物i-2(319g 1.4878)和碳酸钠水溶液(注：将350.18g碳酸钠溶解于3200ml水中并用氮气吹扫30分钟)。再次将反应物料用氮气吹扫60分钟，然后将四(三苯基膦)钯(0)(76.38g，0.0661摩尔)加入反应中。将反应物质加热至65
±
5℃保持20小时，然后冷却至25
±
5℃并分离有机层。将水层用乙酸乙酯(2000ml x 2)萃取，合并的有机层用水(2000ml x 2)洗涤并在40
±
5℃下减压(真空100-300毫巴)浓缩，得到粗产物。粗产物通过硅胶柱色谱法(硅胶60-120目，使用石油醚中的0-2％乙酸乙酯作为洗脱剂)纯化。收集适当的级分并在减压(真空100-300毫巴)下在40
±
5℃下浓缩，得到4-(4-溴噻吩-2-基)-3-氯苯甲酸甲酯(化合物i-3)，其为灰白色固体(265.0g，53.7％产率)。
[0201]
步骤3：3-氯-4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)噻吩-2-基)苯甲酸甲酯(i-10)的合成：向化合物i-3(250g，0.754摩尔)在四氢呋喃(2500ml)中的搅拌溶液，在25
±
5℃，在氮气气氛下加入双(频哪醇)二硼(230g，0.905摩尔)和乙酸钾(223g，2.272摩尔)。将反应物质在25
±
5℃下进一步用氮气吹扫20-30分钟并加入[1,1'-双(二苯基膦基)
二茂铁]二氯钯(ii)(27.7g 0.0378摩尔)。将反应物质加热至65
±
5℃持续27小时，然后冷却至25
±
5℃，通过硅藻土床过滤并用乙酸乙酯(1000ml)洗涤。合并的有机层在减压(真空100-300毫巴下于40
±
5℃浓缩，得到粗产物。加入石油醚(1500ml)，并且在搅拌30分钟后，从固体中倾析并在减压下(真空100-300毫巴)在40
±
5℃下完全蒸发，得到粗的3-氯-4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)噻吩-2-基)苯甲酸甲酯(化合物i-10)，为棕色胶状物质(285g，粗品)，其用于下一步而无需进一步纯化，视为100％收率。
[0202]
步骤4：3-氯-4-(4-(2-(2-羟基丙-2-基)吡啶-4-基)噻吩-2-基)苯甲酸甲酯(i-11)的合成：向化合物i-8(156.0g，0.7219摩尔)在四氢呋喃(1248ml)中的搅拌溶液中，在25
±
5℃和氮气气氛下加入化合物i-10(281.7g,0.7439)和碳酸钠水溶液(注：将153.0g碳酸钠溶解到1248ml水中并用氮气吹扫60分钟)。将反应物料用氮气再吹扫60分钟，然后将四(三苯基膦)钯(0)(33.39g，0.0289摩尔)加入反应中。将反应物质加热至65℃保持3小时，冷却至25
±
5℃并分离有机层。将水层用乙酸乙酯(780ml x 2)萃取，合并的有机层用水(780ml x 2)洗涤并在40
±
5℃下减压(真空100-300毫巴)浓缩，得到粗产物。将粗产物通过硅胶柱色谱法(硅胶100-200目，使用10-30％乙酸乙酯的石油醚溶液作为洗脱剂)纯化，得到3-氯-4-(4-(2-(2-羟基丙-2-基)吡啶-4-基)噻吩-2-基)苯甲酸甲酯(化合物i-11)，为灰白色固体(180.0g，64.2％产率)。
[0203]
步骤5：3-氯-4-(4-(2-(2-羟基丙-2-基)吡啶-4-基)噻吩-2-基)苯甲酸(化合物i-12)的合成：在25
±
5℃下，向化合物7(180g,0.4645摩尔)在四氢呋喃(1800ml)中的搅拌混合物，加入甲醇(1080ml)。将反应物料冷却至5℃并在5
±
5℃缓慢加入氢氧化锂一水合物溶液(48.8g氢氧化锂一水合物溶解于720ml水中)。将反应物料升温至25℃，持续1小时，然后在40
±
5℃和减压(真空100-300毫巴)下蒸馏出有机溶剂。将残余物在25
±
5℃下溶解在水(1800ml)中并用乙酸乙酯(1500ml x 3)洗涤。使用饱和柠檬酸溶液(～60ml)将水层ph调节至～5。将所得浆料在25
±
5℃搅拌1小时并过滤；用水(1000ml)洗涤。湿固体在50
±
5℃和减压(真空10-30毫巴下进一步干燥，得到3-氯-4-(4-(2-(2-羟基丙-2-基)吡啶-4-基)噻吩-2-基)苯甲酸(化合物i-12)，为灰白色固体(150.0g，86.4％产率)。
[0204]
步骤6：(3-氯-4-(4-(2-(2-羟基丙-2-基)吡啶-4-基)噻吩-2-基)苯基)(4-羟基哌啶-1-基)甲酮(化合物1)的合成：向化合物i-12(150g，0.401摩尔)在乙腈(1500ml)中的搅拌溶液中，在25
±
5℃下加入n-(3-二甲基氨基丙基)-n'-乙基碳二亚胺盐酸盐(115.4g,0.602摩尔)和4-二甲氨基吡啶(73.5g,0.602摩尔)。在搅拌10-15分钟后，加入化合物i-5(40.52g,0.401摩尔)并将反应混合物在25
±
5℃保持27小时。然后将反应用水(1500ml)淬灭，并在减压(真空100-300毫巴)下在45
±
5℃下蒸馏出乙腈。然后将产物用乙酸乙酯(1500ml)萃取，用水(1500ml x 5)洗涤并在45
±
5℃减压(真空100-300毫巴)下浓缩，得到粗产物。该物质通过硅胶柱色谱法(硅胶100-200目，使用0-5％甲醇的二氯甲烷溶液作为洗脱剂)纯化。收集适当的级分并在减压(真空100-300毫巴)下在40
±
5℃下浓缩，得到(3-氯-4-(4-(2-(2-羟丙-2-基)吡啶-4-)基)噻吩-2-基)苯基)(4-羟基哌啶-1-基)甲酮(化合物1)，为灰白色固体(92.0g，50.2％产率)。表征与实施例1中相应步骤的表征相匹配。
[0205]
生物学实施例1：报告基因筛选测定
[0206]
化合物1对转录活性srebp的影响使用sre-萤光素酶报告基因构建体评估。化合物1在稳定地表达lss-萤光素酶转基因的hepg2中的ec50为150nm。
[0207]
24小时后，用不同浓度的洛伐他汀(10μm、5μm和1μm)处理培养基细胞。24小时后，将处理板用铝箔覆盖并在-80℃冷冻过夜。解冻所述板到室温并进行荧光素酶测定。将细胞接种在10％fcs dmem培养基中的96孔板中并温育24小时。然后，将它们切换到具有化合物1或dmso对照的0％fcs培养基，保持24小时，此时测定它们的lss_报告基因的活性。
[0208]
用于执行荧光素酶测定的试剂在-20℃下储存。向一管冻干测定底物中添加1ml底物溶剂并充分混合。用铝箔覆盖重构后的底物管以使其避光。将测定缓冲液解冻至室温。向20ml测定缓冲液中添加200μl的重构100x底物并充分混合。重构底物以及测定溶液(缓冲液+底物)在整个程序中通过用铝箔覆盖来避光。
[0209]
使用多通道移液器，将100μl测定溶液(缓冲液+底物)直接添加到板1的每个样品孔中，将其温育30分钟(板用铝箔覆盖)。温育30分钟后，读取板的总发光。每个孔在板光度计中读取2秒。(来自珀金埃尔默公司(perkin elmer)的酶标仪envision酶标仪)。在板读取器上读数之前，采取预防措施将板准确地温育30分钟。
[0210]
材料：srebpv1报告子细胞系：hepg2-#32251。生产培养基：mem(康宁公司(corning)10-010)、10％fbs、1％glutamax(英杰公司(invitrogen)目录#35050061)、μg/ml嘌呤霉素(英杰公司目录#a1113803)和1％青霉素-链霉素(pen-strep)。处理培养基：无酚mem(英杰公司目录#51200-038)和1％glutamax(英杰公司目录#35050061)。荧光素酶测定：lightswitch荧光素酶测定试剂盒(目录#32032)。ldh测定：pierce ldh细胞毒性测定试剂盒(目录#sd249616)。
[0211]
生物学实施例2：基因表达测试
[0212]
评估了化合物1对hepg2细胞的基因表达的影响。
[0213]
将hepg2细胞(p2)接种在24孔板(80,000个细胞/孔)中用于rna提取，并接种在96孔板(10,000个细胞/孔)中用于cell titer glow(ctg)。所用介质是dmem并含有10％fbs。化合物1在500nm处评估48小时。评估了每个实验组的两个生物学复制品的rna，并且对每个实验组3个生物学复制品用ctg进行分析。
[0214]
对于基因分析，用rneasy试剂盒收集rna，并使用20-100ng用随机引物合成cdna。对下列基因的1pg到100ng cdna执行定量pcr：acaca、acly、fasn、lss、pnpla3。使用比较处理过的细胞与作为基线的假拟或载体处理过的细胞的ct方法确定基因表达水平。结果呈现于下表1中。
[0215]
表1：用500nm的化合物1处理48小时的hepg3细胞中srebp靶基因的q-pcr分析
[0216][0217]
生物学实施例3：额外的基因表达测试
[0218]
根据生物学实施例2中描述的程序，还将对以下其他基因进行定量pcr：hmgcr、mvd、mvk、acss1、acss2、acacb、elovl6、scd、srebf1、srebf2、scap、actb18s。
[0219]
生物学实施例4：化合物1的体外adme特性的评价
[0220]
评价了化合物1的体外adme特性。结果呈现于下表2中。
[0221]
表2：体外adme特性
[0222][0223]
动力学溶解度程序：在dmso中制备10mm化合物1储备溶液，然后将4μl储备液添加到含有396μl ph 7.4缓冲液的深孔板中。将样品板在室温下在热混合器上以800rpm涡旋24小时。在温育过程中，板密封良好。样品中的dmso含量为1.0％。最终温育中化合物1的浓度为100μm。在温育期结束时，将样品板以4000rpm离心10分钟，并针对校准曲线(cc)在lc-uv中进行分析。
[0224]
半衰期人类微粒体：评估化合物1在人类肝微粒体中的稳定性。在dmso中制备10mm被评估化合物1的储备溶液，并用水:乙腈(1:1)稀释至1mm的浓度。通过用水:乙腈(1:1)进一步稀释来制备100μm的工作浓度。为了制备预温育混合物，将2.5μl的稀释化合物1与75μl的3.33mg/ml人类肝微粒体和85μl的100mm磷酸钾缓冲液组合，并将此混合物在37℃下预温育10分钟。为了制备不含辅因子的60分钟混合物，将32.5μl的预温育混合物与17.5μl的100mm磷酸钾缓冲液组合，并在37℃下温育60分钟。为了制备具有辅因子(nadph)的0分钟样品，将16.25μl的预温育混合物与200μl含有内标物的乙腈和8.75μl的辅因子(nadph)组合。为了制备温育混合物，将62μl的辅因子(2.85mm)与剩余的温育混合物组合，并在37℃下温育60分钟。为了制备要评估的样品混合物，将25μl的温育混合物与200μl含有内标物的乙腈组合并以1200rpm涡旋5分钟，然后以4000rpm离心10分钟。用水将上清液稀释2倍，并注射到lc-ms/ms上。样品混合物通过lc-ms/ms使用作为水性流动相的10mm醋酸铵和0.1％fa以及作为有机流动相的甲醇来评估。
[0225]
半衰期大鼠和小鼠微粒体：按照与上述人类肝微粒体类似的程序在大鼠和小鼠肝微粒体中评价化合物1。
[0226]
log d程序：通过辛醇/水性缓冲液分配来评估所选化合物1的log d。将500μl有机相(1-辛醇)添加到2ml深孔板的每个孔中，随后添加500μl缓冲液和15μl测试化合物的dmso(0.15mm)溶液。将板涡旋10秒并在室温下在板振荡器上以200rpm温育1小时。温育后，让样品平衡20分钟，并且然后以4000rpm离心30分钟，以实现完全相分离。通过hplc-uv分析测试化合物在缓冲液和辛醇相中的分布。log d＝log(辛醇面积/缓冲液面积)。
[0227]
生物实施例5：对化合物1的体内药代动力学性质的评估
[0228]
在雄性c57 bl/6小鼠中评估了通过静脉内和口服施用的化合物1的体内药代动力学特性。在雄性c57 bl/6小鼠中评估了通过静脉内和口服施用的化合物2的体内药代动力学特性以进行比较。
[0229]
动物被关在具有干净寝具的笼子里。提供经认证的啮齿动物饮食。水可随意获得。将动物房的环境控制设置为保持22℃到25℃的温度、40-70％rh的湿度和12小时光照/12小时黑暗循环。选择由主治兽医认证的正常健康动物，并在开始研究前至少三天适应环境。
[0230]
抽血程序：使用气体麻醉对小鼠进行麻醉。通过在眶后神经丛中引导的毛细血管收集血液样品。在每个时间点，收集来自各组的3只小鼠的血样。将血样收集在预先标记的
试管中。从每只小鼠中采集0.2至0.3ml的血液。在每个时间点采集血样后，在离心前将样品储存在冰上。在15分钟内将血样离心以分离血浆。在4℃下以1540rcf(5000rpm)离心10分钟。将血浆分离并转移到预先标记的微量离心管中，并在-80
±
10℃下迅速冷冻，直到进行生物分析。样品通过测试项目、组、动物编号和采集时间点进行识别。
[0231]
为了评估静脉内递送的药代动力学特性，通过尾静脉给九只雄性c57 bl/6小鼠施用2.00mg化合物1/kg动物体重。在0.083、0.25、0.5、1、2、4、8和24小时通过从小鼠取得血液样品来评估化合物1在动物血浆中的浓度。图1中提供了血浆浓度对时间的曲线图。表3中提供了2.00mg化合物1/kg动物体重的静脉内递送的药代动力学参数的汇总。类似地施用化合物2用于比较。表3中提供了血浆浓度对时间的曲线图。图3中提供了2.00mg化合物2/kg动物体重的静脉内递送的药代动力学参数的汇总。
[0232]
表3：体内药代动力学特性(静脉内)
[0233] 化合物1化合物2剂量(mg/kg)2.002.43c0(ng/ml)4632.112672.26t1/2(h)6.503.67auc
0-last
(ng
·
h/ml)23838.922810.32auc
0-inf
(ng
·
h/ml)25708.442823.89auc
extra
(％)7.270.48cl(ml/min/kg)1.3014.34vd(l/kg)0.734.55vss(l/kg)0.702.32mrt
0-last
(h)7.072.56
[0234]
为了评估口服递送的药代动力学特性，九只雄性c57 bl/6小鼠经口施用10mg化合物1/kg动物体重。在0.25、0.5、1、2、4、6、8和24小时通过取血液样品来评估化合物1在动物血浆中的浓度。图2中提供了血浆浓度对时间的曲线图。表4中提供了10mg化合物1/kg动物体重的口服递送的药代动力学参数的汇总。类似地施用化合物2用于比较。表4中提供了血浆浓度对时间的曲线图。图4中提供了10mg化合物2/kg动物体重的口服递送的药代动力学参数的汇总。
[0235]
表4：体内药代动力学特性(口服)
[0236]
[0237][0238]
生物学实施例6：使用c33a子宫内膜细胞系评价化合物1的体内药理学
[0239]
动物被关在具有干净寝具的笼子里。可随意获得经认证的啮齿动物饮食和水。将动物房的环境控制设置为保持22℃到25℃的温度、40-70％rh的湿度和12小时光照/12小时黑暗循环。选择由主治兽医认证的正常健康动物，并在开始研究前至少三天适应环境。
[0240]
balb/c裸鼠(6-8周龄)饲养在单独通风的笼子中，每个笼子中最多5只动物。床上材料(玉米芯)每周更换两次。
[0241]
将c33a肿瘤细胞在eagle最低必要培养基中在37℃下在空气中5％co2的气氛中培养，该培养基补充有10％热灭活胎牛血清、100u/ml青霉素和100μg/ml链霉素。肿瘤细胞每周常规传代培养2-3次。在指数生长期收获细胞并计数肿瘤接种。
[0242]
每只balb/c裸鼠在右侧皮下接种在用于肿瘤发育的0.1ml pbs中的c33a肿瘤细胞(1e6)。
[0243]
每周两次测量肿瘤体积，最多20天，使用卡尺在两个维度上测量，体积以mm3表示，使用公式v＝0.5a x b2，其中a和b分别是肿瘤的长径和短径。图5中提供了显示化合物1与载体相比对肿瘤体积的影响的图。
[0244]
生物学实施例7：使用a2780卵巢癌细胞系评价化合物1的体内药理学
[0245]
雌性小鼠(mus musculus品系foxn1
nu/nu
，6-8周大，18-22g)由上海灵畅生物科技有限公司提供。将小鼠关在恒定的温度(20-26℃)和湿度(40-70％)的单独通风笼中，每个笼子里3只动物。在整个研究期间，动物可以免费获得无菌饮用水和辐照灭菌的干颗粒食品(江苏省协同医药生物工程有限责任公司，目录号1010019)。用耳朵编码标记动物(每组10只动物)。
[0246]
细胞培养：a2780肿瘤细胞在补充有10％热灭活胎牛血清、100u/ml青霉素和100μg/ml链霉素的emem(eagle最低必需培养基)中于37℃和5％co2空气中培养。每周对肿瘤细胞进行常规传代培养二至三次。收获在指数生长期生长的细胞并计数肿瘤接种。存活率大于90％的细胞用于肿瘤接种。在培养期间每周进行一次支原体检测，并进行str检测以验证细胞系。
[0247]
肿瘤接种和测量：每只小鼠在右侧皮下接种1x106个a2780肿瘤细胞(活细胞)/动物，该肿瘤细胞在体积为0.1ml pbs中，含/不含50％(corning,cat#:354234)以帮助肿瘤发展。使用26号针头进行注射。肿瘤可触及后，每周两次测量肿瘤体积，使用卡尺在两个维度上测量，体积以mm3表示，使用公式：v＝0.5a x b2，其中a和b分别是肿瘤的长径和短径。每周两次测量肿瘤体积，直到肿瘤体积达到终点体积(2000mm3)，并且人道地对动物实施安乐死，或对动物给药21天，并对动物实施安乐死并收集样品用于生物分析。图6中
提供了显示化合物1与载体相比对肿瘤体积的影响的图。
[0248]
生物学实施例8：评估化合物1对癌细胞生长抑制的影响
[0249]
评估所选化合物在各种癌细胞系中抑制细胞生长的能力。用剂量范围为10um到1pm的化合物处理细胞，以生成细胞系生长抑制的ic
50
曲线。表5所示的细胞系在生长培养基中经过72小时的处理后在10um或更低浓度下生长减少了至少50％。表6所示的细胞系在ic
50
大于10um的情况下生长减少了至少50％。
[0250]
在dmso中制备六份10倍化合物稀释液(例如10mm、1mm、100um、10um、1um和0.1um)。针对每种浓度获取单个数据点。dmso的最终浓度为0.1％。处理持续时间为72小时。在蛋白质染色测定中使用磺酰罗丹明b测量生长抑制。通过评估以下参数来确定药剂的活性：ic
50
、gi
50
、ic
10
、tgi、lc
50
、ic
90
和gi
90
(可以计算出这些值)。
[0251]
表5：ic50《10um的应答细胞系
[0252]
[0253]
[0254][0255]
表6：ic50》10um或未确定的无应答细胞系
[0256]
[0257]
[0258]