SOS1抑制剂的制作方法

sos1抑制剂
技术领域
1.本发明涉及抑制无七之子同源物1(son of sevenless homolog 1，sos1)的gtp介导的核苷酸交换的化合物。具体地说，本发明涉及化合物、包括所述化合物的药物组合物及其使用方法。


背景技术：

2.ras家族包括v-ki-ras2 kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物(kras)、神经母细胞瘤ras病毒癌基因同源物(nras)和哈维鼠肉瘤病毒癌基因(hras)，并在包含癌症的正常和改变状态下严格调节细胞分裂、生长和功能(参见例如simanshu等人，《细胞(cell)》，2017年，170(1)：第17-33页；matikas等人，《血液学和肿瘤学评论(crit rev oncol-hemol)》，2017年，110：第1-12页)。ras蛋白被包含受体酪氨酸激酶(rtk)的上游信号激活，并将信号转导到几个下游信号通路，例如丝裂原活化蛋白激酶(mapk)/细胞外信号调节激酶(erk)通路。由于ras基因或ras通路中其它基因的突变或改变，在癌症中经常观察到ras信号的过度激活。研究抑制ras和ras信号传导的策略，预计将有助于治疗癌症和ras调节的疾病状态。
3.ras蛋白是鸟苷三磷酸酶(gtp酶)，在非活性鸟苷二磷酸(gdp)结合态和活性鸟苷三磷酸(gtp)结合态之间循环。无七之子同源物1(sos1)是一种鸟嘌呤核苷酸交换因子(gef)，介导gdp与gtp的交换，由此激活ras蛋白。ras蛋白通过其内在的gtp酶活性将gtp水解为gdp，gtp酶活性被gtp酶激活蛋白(gap)大大增强。这种通过gap和gef的调节是在正常条件下严格调节激活和失活的机制。在癌症中经常观察到所有三种ras蛋白中几个残基的突变，这些突变导致ras主要保持激活状态(sanchez-vega等人，《细胞(cell)》，2018年，173：第321-337页；li等人，《自然评论-癌症(nature reviews cancer)》，2018年，18：第767-777页)。密码子12和13处的突变是最常见的ras残基突变，通过阻断gap蛋白和ras的相互作用阻止gap刺激的gtp水解。然而，最近的生化分析表明，这些突变蛋白仍然需要核苷酸循环来激活，这是基于其内在gtp酶活性和/或对外在gtp酶的部分敏感性。因此，突变ras蛋白对诸如sos1或shp2之类的上游因子的抑制很敏感，这是ras激活所需的另一种上游信号分子(hillig，2019；patricelli，2016；lito，2016；nichols，2018)。
4.已在哺乳动物细胞中确定的三个主要ras-gef家族是sos、ras-grf和ras-grp(rojas，2011)。ras-grf和ras-grp分别在中枢神经系统细胞和造血细胞中表达，而sos家族广泛表达，并负责rtk信号转导。sos家族包括sos1和sos2，这些蛋白具有大致70％的序列一致性。由于sos2的快速降解，sos1似乎比sos2更为活跃。小鼠sos2基因敲除是可行的，而sos1基因敲除是胚胎致死的。使用他莫昔芬诱导的sos1基因敲除小鼠模型来研究sos1和sos2在成年小鼠中的作用，并证明sos1基因敲除是可行的，但sos1/2双基因敲除是不可行的(baltanas，2013)，这表明功能冗余，选择性抑制sos1可能有足够的治疗指标来治疗sos1-ras激活的疾病。
5.sos蛋白通过与生长因子受体结合蛋白2(grb2)的相互作用而被补充到磷酸化rtk。向质膜的补充使sos与ras非常接近，并支持sos介导的ras激活。sos蛋白通过促进核苷
酸交换的结合位点以及通过结合gtp结合的ras家族蛋白并增加sos功能的变构位点与ras结合(freedman等人，《美国国家科学院院刊(proc.natl.acad.sci.usa)》，2006年，103(45)：第16692-97页)。与变构位点的结合解除了ras底物结合位点的空间闭塞，因此是核苷酸交换所必需的。由于关键结构域在激活状态下的相互作用增强，在与变构位点相互作用后，活性构象在催化位点的保留保持在隔离状态。在努南综合征和几种癌症中发现sos1突变，包含肺腺癌、胚胎性横纹肌肉瘤、塞尔托利氏细胞睾丸肿瘤和皮肤颗粒细胞瘤(参见denayer,e.等人，《基因染色体与癌症(genes-chromes-cancer)》，2010年，49(3)：第242-52页)。
6.gtp酶激活蛋白(gap)是刺激ras家族成员低内在gtp酶活性的蛋白，因此将活性gtp结合的ras蛋白转化为非活性的gdp结合的ras蛋白(例如，参见simanshu,d.k.，《细胞(cell)》，2017年，《人类疾病中的ras蛋白及其调节因子(ras proteins and their regulators in human disease)》)。虽然在癌症中会发生gef sos1的激活性改变，但gap神经纤维蛋白1(nf-1)或神经纤维蛋白2(nf-2)中的失活突变和功能丧失性改变也会发生，从而导致sos1活性不受抑制，并且通过ras蛋白的通路下游的活性升高。
7.因此，阻断sos1和ras家族成员之间相互作用的本发明化合物阻止kras再循环成活性gtp结合形式，因此可为多种癌症，尤其是ras家族成员相关癌症提供治疗益处。本发明化合物作为sos1-kras相互作用的抑制剂提供了潜在的治疗益处，该抑制剂可用于通过阻断细胞中的sos1-kras相互作用来负调节kras的活性，以治疗各种形式的癌症，包含ras相关癌症、sos1相关癌症和nf1/nf2相关癌症。


技术实现要素：

8.需要开发新的sos1抑制剂，该抑制剂能够阻断sos1和ras家族成员之间的相互作用，阻止kras再循环成活性gtp结合形式，因此可为多种癌症提供治疗益处，特别包含ras相关癌症、sos1相关癌症和nf1/nf2相关癌症。
9.在本发明的一个方面，提供了由式(i)表示的化合物：
[0010][0011]
或其药学上可接受的盐，其中：
[0012]
r1是氢、羟基、c1-c6烷基、烷氧基、-n(r6)2、-nr6c(o)r6、-c(o)n(r6)2、-so2烷基、-so2nr6烷基、环烷基、-q-杂环基、芳基或杂芳基，其中所述环烷基、所述杂环基、所述芳基和
所述杂芳基各自任选地被一个或多个r2或l-r2取代；
[0013]
每个q独立地是键、o或nr6；
[0014]
x是n或cr7；
[0015]
每个r2独立地是c1-c3烷基、氧代(即，c＝o)、羟基、卤素、氰基、羟烷基、卤代烷基、烷氧基、-c(o)n(r6)2、-n(r6)2、-so2烷基、-nr6c(o)c1-c3烷基、-c(o)环烷基、-c(o)c1-c3烷基、-c(o)杂环基、芳基、杂芳基或杂环基，其中所述环烷基、所述杂环基、所述芳基、所述杂芳基或所述杂环基各自任选地被一个或多个r
11
取代；
[0016]
r3是氢、c1-c6烷基、烷氧基、-n(r
10
)2、-l-n(r
10
)2、环烷基、卤代烷基或杂环基，其中所述c1-c6烷基、所述环烷基和所述杂环基各自任选地被一个或多个r9取代；
[0017]
y是键或亚杂芳基；
[0018]
r4是芳基或杂芳基，各自任选地被一个或多个r5取代；
[0019]
每个r5独立地是羟基、卤素、氰基、羟烷基、烷氧基、c1-c3烷基、卤代烷基、卤代烷基-oh、-n(r6)2、-l-n(r6)2或-so2烷基；
[0020]
l是c1-c3亚烷基；
[0021]
每个r6独立地是氢、c1-c3烷基、卤代烷基或环烷基；
[0022]
r7是氢、氰基或烷氧基；
[0023]
r8是c1-c2烷基或卤代c1-c2烷基；
[0024]
每个r9独立地是羟基、卤素、氨基、氰基、烷氧基或c1-c3烷基；
[0025]
每个r
10
独立地是氢、c1-c3烷基或环烷基；
[0026]
每个r
11
独立地是c1-c3烷基、卤素或卤代烷基；且
[0027]r12
是氢、卤素或c1-c3烷基。
[0028]
在本发明的另一方面，提供了药物组合物，其包含治疗有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的赋形剂。
[0029]
在又一方面，本发明提供了通过抑制细胞中ras家族成员和sos1之间的缔合来抑制ras家族成员活性的方法，包括通过使细胞与式(i)化合物接触来抑制。在一个实施例中，接触是在活体外进行。在一个实施例中，接触是在活体内进行。
[0030]
本文还提供了一种活体外或活体内抑制细胞增殖的方法，所述方法包括使细胞与有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物接触，如本文所定义。
[0031]
本文还提供了用于治疗有需要的个体的癌症的方法，所述方法包括：(a)确定所述癌症与ras家族成员突变相关(例如，krasg12c相关癌症)(例如，使用监管机构批准的测定法或试剂盒，例如fda批准的测定法或试剂盒确定)；以及(b)向患者施用治疗有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物。
[0032]
本文还提供了用于治疗有需要的个体的癌症的方法，所述方法包括：(a)确定所述癌症与sos1突变相关(例如，sos1相关癌症)(例如，使用监管机构批准的测定法或试剂盒，例如fda批准的测定法或试剂盒确定)；以及(b)向患者施用治疗有效量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物。
[0033]
本文还提供了用于治疗有需要的个体的癌症的方法，所述方法包括：(a)确定所述癌症与nf-1或nf-2功能丧失性突变相关(例如，nf1/nf2相关癌症)(例如，使用监管机构批准的测定法或试剂盒，例如fda批准的测定法或试剂盒确定)；以及(b)向患者施用治疗有效
量的式(i)化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物。
[0034]
本文还提供了如本文所定义的式(i)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物在制造用于抑制sos1活性的药剂中的用途。
[0035]
本文还提供了如本文所定义的式(i)化合物或其药学上可接受的盐或溶剂合物在制造用于治疗sos1相关疾病或病症的药剂中的用途。
具体实施方式
[0036]
本发明涉及sos1抑制剂。具体地说，本发明涉及抑制sos1活性的化合物、包括治疗有效量的所述化合物的药物组合物及其使用方法。
[0037]
定义
[0038]
除非另外定义，否则本文所使用的所有技术和科学术语皆具有与本发明所属领域的技术人员通常所理解的含义相同的含义。本文中所提及的所有专利、专利申请和公开在与本公开一致的范围内通过引用并入。除非另有明确定义，否则术语和范围有其一般定义。
[0039]
为简单起见，化学部分通篇主要被定义且称为单价化学部分(例如烷基、芳基等)。然而，此类术语也可用于在本领域技术人员清楚的适当结构情况下传达相应的多价部分。例如，虽然“烷基”部分通常指一价基团(例如，ch
3-ch
2-)，但在某些情况下，二价连接部分可以是“烷基”，在这种情况下，本领域技术人员将理解烷基为二价基团(例如，-ch
2-ch
2-)，相当于术语“亚烷基”。(类似地，在需要二价部分并且二价部分被声明为“芳基”的情况下，本领域技术人员将理解术语“芳基”是指相应的二价部分，即亚芳基。)所有原子都被理解为具有正常的键形成价数(即，碳为4价，氮为3价，氧为2价，硫为2、4或6价，具体取决于s的氧化态)。
[0040]
如本文所使用的“kras g12c”是指在氨基酸位置12处含有半胱氨酸取代甘氨酸的氨基酸取代的哺乳动物kras蛋白的突变形式。针对人类kras的氨基酸密码子和残基位置的分配是基于由uniprotkb/swiss-prot p01116识别的氨基酸序列：变异p.gly12cys。
[0041]
如本文所使用的“kras g12d”是指在氨基酸位置12处含有天冬氨酸取代甘氨酸的氨基酸取代的哺乳动物kras蛋白的突变形式针对人类kras的氨基酸密码子和残基位置的分配是基于由uniprotkb/swiss-prot p01116识别的氨基酸序列：变异p.gly12asp。
[0042]
如本文所使用的“kras g12s”是指在氨基酸位置12处含有丝氨酸取代甘氨酸的氨基酸取代的哺乳动物kras蛋白的突变形式。针对人类kras的氨基酸密码子和残基位置的分配是基于由uniprotkb/swiss-prot p01116识别的氨基酸序列：变异p.gly12ser。
[0043]
如本文所使用的“kras g12a”是指在氨基酸位置12处含有丙氨酸取代甘氨酸的氨基酸取代的哺乳动物kras蛋白的突变形式。针对人类kras的氨基酸密码子和残基位置的分配是基于由uniprotkb/swiss-prot p01116识别的氨基酸序列：变异p.gly12ala。
[0044]
如本文所使用的“kras g13d”是指在氨基酸位置13处含有天冬氨酸取代甘氨酸的氨基酸取代的哺乳动物kras蛋白的突变形式。针对人类kras的氨基酸密码子和残基位置的分配是基于由uniprotkb/swiss-prot p01116识别的氨基酸序列：变异p.gly13asp。
[0045]
如本文所使用的“kras g13c”是指在氨基酸位置13处含有半胱氨酸取代甘氨酸的氨基酸取代的哺乳动物kras蛋白的突变形式。针对人类kras的氨基酸密码子和残基位置的分配是基于由uniprotkb/swiss-prot p01116识别的氨基酸序列：变异p.gly13cys。
[0046]
如本文所使用的“kras q61l”是指在氨基酸位置41处含有亮氨酸取代谷氨酰胺的氨基酸取代的哺乳动物kras蛋白的突变形式。针对人类kras的氨基酸密码子和残基位置的分配是基于由uniprotkb/swiss-prot p01116识别的氨基酸序列：变异p.gln61leu。
[0047]
如本文所使用的“kras a146t”是指在氨基酸位置146处含有苏氨酸取代丙氨酸的氨基酸取代的哺乳动物kras蛋白的突变形式。针对人类kras的氨基酸密码子和残基位置的分配是基于由uniprotkb/swiss-prot p01116识别的氨基酸序列：变异p.ala146thr。
[0048]
如本文所使用的“kras a146v”是指在氨基酸位置146处含有缬氨酸取代丙氨酸的氨基酸取代的哺乳动物kras蛋白的突变形式。针对人类kras的氨基酸密码子和残基位置的分配是基于由uniprotkb/swiss-prot p01116识别的氨基酸序列：变异p.ala146val。
[0049]
如本文所使用的“kras a146p”是指在氨基酸位置146处含有脯氨酸取代丙氨酸的氨基酸取代的哺乳动物kras蛋白的突变形式。针对人类kras的氨基酸密码子和残基位置的分配是基于由uniprotkb/swiss-prot p01116识别的氨基酸序列：变异p.ala146pro。
[0050]
如本文所使用的“hras g12c”是指在氨基酸位置12处含有半胱氨酸取代甘氨酸的氨基酸取代的哺乳动物hras蛋白的突变形式。针对人类hras的氨基酸密码子和残基位置的分配是基于由uniprotkb/swiss-prot p01112识别的氨基酸序列：变异p.gly12cys。
[0051]
如本文所使用的“hras g12d”是指在氨基酸位置12处含有天冬氨酸取代甘氨酸的氨基酸取代的哺乳动物hras蛋白的突变形式。针对人类hras的氨基酸密码子和残基位置的分配是基于由uniprotkb/swiss-prot p01112识别的氨基酸序列：变异p.gly12asp。
[0052]
如本文所使用的“hras g12s”是指在氨基酸位置12处含有丝氨酸取代甘氨酸的氨基酸取代的哺乳动物hras蛋白的突变形式。针对人类hras的氨基酸密码子和残基位置的分配是基于由uniprotkb/swiss-prot p01112识别的氨基酸序列：变异p.gly12ser。
[0053]
如本文所使用的“hras g12a”是指在氨基酸位置12处含有丙氨酸取代甘氨酸的氨基酸取代的哺乳动物hras蛋白的突变形式。针对人类kras的氨基酸密码子和残基位置的分配是基于由uniprotkb/swiss-prot p01112识别的氨基酸序列：变异p.gly12ala。
[0054]
如本文所使用的“hras g13d”是指在氨基酸位置13处含有天冬氨酸取代甘氨酸的氨基酸取代的哺乳动物hras蛋白的突变形式。针对人类hras的氨基酸密码子和残基位置的分配是基于由uniprotkb/swiss-prot p01112识别的氨基酸序列：变异p.gly13asp。
[0055]
如本文所使用的“hras g13c”是指在氨基酸位置13处含有半胱氨酸取代甘氨酸的氨基酸取代的哺乳动物hras蛋白的突变形式。针对人类hras的氨基酸密码子和残基位置的分配是基于由uniprotkb/swiss-prot p01112识别的氨基酸序列：变异p.gly13cys。
[0056]
如本文所使用的“hras q61l”是指在氨基酸位置41处含有亮氨酸取代谷氨酰胺的氨基酸取代的哺乳动物hras蛋白的突变形式。针对人类hras的氨基酸密码子和残基位置的分配是基于由uniprotkb/swiss-prot p01112识别的氨基酸序列：变异p.gln61leu。
[0057]
如本文所使用的“hras a146t”是指在氨基酸位置146处含有苏氨酸取代丙氨酸的氨基酸取代的哺乳动物hras蛋白的突变形式。针对人类nras的氨基酸密码子和残基位置的分配是基于由uniprotkb/swiss-prot p01112识别的氨基酸序列：变异p.ala146thr。
[0058]
如本文所使用的“hras a146v”是指在氨基酸位置146处含有缬氨酸取代丙氨酸的氨基酸取代的哺乳动物hras蛋白的突变形式。针对人类nras的氨基酸密码子和残基位置的分配是基于由uniprotkb/swiss-prot p01112识别的氨基酸序列：变异p.ala146val。
[0059]
如本文所使用的“hras a146p”是指在氨基酸位置146处含有脯氨酸取代丙氨酸的氨基酸取代的哺乳动物hras蛋白的突变形式。针对人类kras的氨基酸密码子和残基位置的分配是基于由uniprotkb/swiss-prot p01112识别的氨基酸序列：变异p.ala146pro。
[0060]
如本文所使用的“nras g12c”是指在氨基酸位置12处含有半胱氨酸取代甘氨酸的氨基酸取代的哺乳动物nras蛋白的突变形式。针对人类nras的氨基酸密码子和残基位置的分配是基于由uniprotkb/swiss-prot p01111识别的氨基酸序列：变异p.gly12cys。
[0061]
如本文所使用的“nras g12d”是指在氨基酸位置12处含有天冬氨酸取代甘氨酸的氨基酸取代的哺乳动物nras蛋白的突变形式。针对人类nras的氨基酸密码子和残基位置的分配是基于由uniprotkb/swiss-prot p01111识别的氨基酸序列：变异p.gly12asp。
[0062]
如本文所使用的“nras g12s”是指在氨基酸位置12处含有丝氨酸取代甘氨酸的氨基酸取代的哺乳动物nras蛋白的突变形式。针对人类nras的氨基酸密码子和残基位置的分配是基于由uniprotkb/swiss-prot p01111识别的氨基酸序列：变异p.gly12ser。
[0063]
如本文所使用的“nras g12a”是指在氨基酸位置12处含有丙氨酸取代甘氨酸的氨基酸取代的哺乳动物nras蛋白的突变形式。针对人类kras的氨基酸密码子和残基位置的分配是基于由uniprotkb/swiss-prot p01111识别的氨基酸序列：变异p.gly12ala。
[0064]
如本文所使用的“nras g13d”是指在氨基酸位置13处含有天冬氨酸取代甘氨酸的氨基酸取代的哺乳动物nras蛋白的突变形式。针对人类nras的氨基酸密码子和残基位置的分配是基于由uniprotkb/swiss-prot p01111识别的氨基酸序列：变异p.gly13asp。
[0065]
如本文所使用的“hnras g13c”是指在氨基酸位置13处含有半胱氨酸取代甘氨酸的氨基酸取代的哺乳动物nras蛋白的突变形式。针对人类nras的氨基酸密码子和残基位置的分配是基于由uniprotkb/swiss-prot p01111识别的氨基酸序列：变异p.gly13cys。
[0066]
如本文所使用的“hras q61l”是指在氨基酸位置41处含有亮氨酸取代谷氨酰胺的氨基酸取代的哺乳动物hras蛋白的突变形式。针对人类hras的氨基酸密码子和残基位置的分配是基于由uniprotkb/swiss-prot p01112识别的氨基酸序列：变异p.gln61leu。
[0067]
如本文所使用的“nras a146t”是指在氨基酸位置146处含有苏氨酸取代丙氨酸的氨基酸取代的哺乳动物nras蛋白的突变形式。针对人类nras的氨基酸密码子和残基位置的分配是基于由uniprotkb/swiss-prot p01111识别的氨基酸序列：变异p.ala146thr。
[0068]
如本文所使用的“nras a146v”是指在氨基酸位置146处含有缬氨酸取代丙氨酸的氨基酸取代的哺乳动物nras蛋白的突变形式。针对人类nras的氨基酸密码子和残基位置的分配是基于由uniprotkb/swiss-prot p01111识别的氨基酸序列：变异p.ala146val。
[0069]
如本文所使用的“nras a146p”是指在氨基酸位置146处含有脯氨酸取代丙氨酸的氨基酸取代的哺乳动物nras蛋白的突变形式。针对人类nras的氨基酸密码子和残基位置的分配是基于由uniprotkb/swiss-prot p01111识别的氨基酸序列：变异p.ala146pro。
[0070]
如本文所使用的“ras家族成员”或“ras家族”是指kras、hras、nras及其激活突变体，包含g12、g13、q61和a146位。
[0071]
如本文所使用的“ras家族相关疾病或病症”是指与激活ras突变相关或由激活ras突变介导或具有激活ras突变的疾病或病症，例如g12、g13、q61或a146位的突变。ras家族相关疾病或病症的非限制性实例是kras、hras或nras g12c相关癌症、kras hras或nras g12d相关癌症、kras、hras或nras g12s相关癌症、kras、hras或nras g12a相关癌症、kras、hras
或nras g13d相关癌症、kras、hras或nras g13c相关癌症、kras、hras或nras q61x相关癌症、kras、hras或nras a146t相关癌症、kras、hras或nras a146v相关癌症，或kras、hras或nras a146p相关癌症。
[0072]
如本文所使用的“sos1”是指哺乳动物无七之子同源物1(sos1)酶。
[0073]
如本文所使用的“sos1相关疾病或病症”是指与激活sos1突变相关或由激活sos1突变介导或具有激活sos1突变的疾病或病症。激活sos1突变的实例包含sos1 n233s和sos1n233y突变。
[0074]
如本文所使用的“sos1 n233s”是指在氨基酸位置233处含有丝氨酸取代谷氨酰胺的氨基酸取代的哺乳动物sos1蛋白的突变形式。针对人类sos1的氨基酸密码子和残基位置的分配是基于由uniprotkb/swiss-prot q07889识别的氨基酸序列：变异p.gln233ser。
[0075]
如本文所使用的“sos1 n233y”是指在氨基酸位置233处含有酪氨酸取代谷氨酰胺的氨基酸取代的哺乳动物sos1蛋白的突变形式。针对人类sos1的氨基酸密码子和残基位置的分配是基于由uniprotkb/swiss-prot q07889识别的氨基酸序列：变异p.gln233tyr。
[0076]
如本文所使用的“sos1抑制剂”是指由本文所述的式(i)表示的本发明化合物。这些化合物能够负抑制sos1与ras家族突变体或sos1激活突变的全部或部分相互作用，从而降低和/或调节ras家族成员-sos1复合物的核苷酸交换活性。
[0077]
如本文所使用的“nf-1/nf-2相关疾病或病症”是指与神经纤维蛋白(nf-1)基因或神经纤维蛋白2(nf-2)基因中的功能丧失性突变相关或由所述功能丧失性突变介导或具有所述功能丧失性突变的疾病或病症。
[0078]
如本文所使用的“功能丧失性突变”是指任何点突变、剪接位点突变、融合、无义突变(氨基酸突变为终止密码子)、帧内或帧移突变，包含插入和缺失，以及编码靶细胞或癌细胞中蛋白的基因的纯合缺失，这种纯合缺失会导致编码蛋白的存在、活性和/或功能的部分或完全丧失。
[0079]
术语“氨基”是指-nh2。
[0080]
术语“乙酰基”是指
“‑
c(o)ch
3”。
[0081]
如本文所采用的术语“酰基”是指烷基羰基或芳基羰基取代基，其中烷基和芳基部分如本文所定义。
[0082]
如本文所采用的术语“烷基”是指具有1到12个碳原子的直链和支链脂肪族基团。因此，“烷基”包括c1、c2、c3、c4、c5、c6、c7、c8、c9、c
10
、c
11
和c
12
基团。烷基的实例包含但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基以及己基。
[0083]
如本文所使用的术语“烯基”是指具有2到12个碳原子的含一个或多个碳-碳双键的不饱和直链或分支链脂肪族基团。因此，“烯基”包括c2、c3、c4、c5、c6、c7、c8、c9、c
10
、c
11
和c
12
基团。烯基的实例包含但不限于乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基和己烯基。
[0084]
如本文所使用的术语“炔基”是指具有2到12个碳原子的含一个或多个碳-碳三键的不饱和直链或分支链脂肪族基团。因此，“炔基”包括c2、c3、c4、c5、c6、c7、c8、c9、c
10
、c
11
和c
12
基团。炔基的实例包含但不限于乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基和己炔基。
[0085]“亚烷基”、“亚烯基”或“亚炔基”是上文定义的位于两个其它化学基团之间且用于连接这两个其它化学基团的烷基、烯基或炔基。亚烷基的实例包含但不限于亚甲基、亚乙基、亚丙基和亚丁基。示例性亚烯基包含但不限于亚乙烯基、亚丙烯基和亚丁烯基。示例性
亚炔基包含但不限于亚乙炔基、亚丙炔基和亚丁炔基。
[0086]
术语“烷氧基”是指-oc1-c6烷基。
[0087]
如本文所采用的术语“环烷基”是具有3到12个碳的饱和和部分不饱和的环烃基。因此，“环烷基”包含c3、c4、c5、c6、c7、c8、c9、c
10
、c
11
和c
12
环烃基。环烷基的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环庚基和环辛基。
[0088]
术语“杂烷基”是指上文定义的烷基，其中链中的一个或多个碳原子独立地被o、s或nr
x
取代，其中r
x
是氢或c1-c3烷基。杂烷基的实例包含甲氧基甲基、甲氧基乙基和甲氧基丙基。
[0089]“芳基”是包括一到三个芳香环的c
6-c
14
芳香族部分。因此，“芳基”包含c6、c
10
、c
13
和c
14
环烃基。示例性芳基是c
6-c
10
芳基。特定芳基包含但不限于苯基、萘基、蒽基和芴基。“芳基”还包含稠合多环(例如，双环)环系统，其中一个或多个稠合环为非芳香环，前提是至少一个环为芳香环，例如茚基。
[0090]“芳烷基”或“芳基烷基”包括与烷基共价连接的芳基，其中所述部分经由所述烷基部分连接到另一基团。示例性芳烷基是-(c1-c6)烷基(c6-c10)芳基，包含但不限于苯甲基、苯乙基和萘甲基。
[0091]“杂环基”或“杂环”基团是具有3到12个原子(3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个或12个原子)或具有3到12个原子(3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个或13个原子)(例如4到8个原子)的单环或双环(稠合、螺环或桥联)环结构，其中一个或多个环原子独立地是-c(o)-、n、nr4、o、s或s(o)2,其余环原子是季碳或羰基碳。杂环基的实例包含但不限于环氧基、环氧乙烷基、氧杂环丁烷基、氮杂环丁烷基、氮丙啶基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢苯硫基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、咪唑烷基、噻唑烷基、噻烷基、二噻烷基、三噻烷基、氮杂噻吩基、氧杂噻吩基、二氧戊环基、噁唑啶基、噁唑啶酮基、十氢喹啉基、哌啶酮基、4-哌啶酮基、硫代吗啉基、二甲基-吗啉基和吗啉基。
[0092]
如本文所使用的“杂环基”是指经由键与另一基团共价连接的杂环基。
[0093]
如本文所使用的术语“杂芳基”是指以下基团：具有5到14个环原子，优选地5个、6个、10个、13个或14个环原子；具有6个、10个或14个呈环状阵列的共用π电子，可包含1个、2个或3个环；并且除碳原子外，还具有1到3个杂原子，它们各自独立地是n、o或s。“杂芳基”还包含稠合多环(例如，双环、三环)环系统，其中一个或多个稠合环是非芳香环(无论连接哪个环)，前提是至少一个环为芳香环，并且至少一个环含有n、o或s环原子。
[0094]
杂芳基的实例包含吖啶基、吖辛因基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并[d]噁唑-2(3h)-酮、2h-苯并[b][1,4]噁嗪-3(4h)-酮、苯并硫代呋喃基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并四唑基、苯并异噁唑基、苯并异噻唑基、苯并咪唑啉基、咔唑基、4ah-咔唑基、咔啉基、苯并二氢吡喃基、苯并吡喃基、噌啉基、呋喃基、呋吖基、咪唑啉基、咪唑基、1h-吲唑基、吲哚烯基、吲哚啉基、吲哚嗪基、吲哚基、3h-吲哚基、异苯并呋喃基、异苯并二氢吡喃基、异吲唑基、异吲哚啉基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异噁唑基、萘啶基、八氢异喹啉基、噁二唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、噁唑啶基、噁唑基、噁唑啶基、嘧啶基、啡啶基、啡啉基、啡嗪基、啡噻嗪基、啡噁噻基、啡噁嗪基、酞嗪基、胡椒基、喋啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑啶基、吡唑啉基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并噁唑基、吡啶并咪唑基、吡啶并噻唑基、吡啶基、吡啶基、嘧啶基、吡咯啉基、
pediatrics)》，第15版philadelphia:w.b.saunders company，1996年；rudolph am等人《鲁道夫儿科学(rudolph's pediatrics)》，第21版纽约：麦格劳-希尔(new york:mcgraw-hill)，2002年；和avery md，first lr.《儿科医学(pediatric medicine)》，第2版baltimore:williams&wilkins；1994年。
[0103]
如本文所使用的化合物的“有效量”是足以负调节或抑制sos1酶活性的量。
[0104]
如本文所使用的化合物的“治疗有效量”是足以改善或以某一方式减轻症状或停止或逆转病情进展或负调节或抑制sos1活性的量。所述量可以以单一剂量形式施用或可以根据方案施用，由此其为有效的。
[0105]
如本文所使用的“治疗”是指改善或以其它方式有益地改变患者的病情、病症或疾病的症状或病理的任何方式。
[0106]
如本文所使用的“通过施用特定化合物或药物组合物改善特定病症的症状”是指可归因于施用该组合物或与施用该组合物相关的任何减轻，无论是永久的还是暂时的、持续的还是短暂的减轻。
[0107]
化合物
[0108]
在本发明的一个方面，提供了由式(i)表示的化合物：
[0109][0110]
或其药学上可接受的盐，
[0111]
其中：
[0112]
r1是氢、羟基、c1-c6烷基、烷氧基、-n(r6)2、-nr6c(o)r6、-c(o)n(r6)2、-so2烷基、-so2nr6烷基、环烷基、-q-杂环基、芳基或杂芳基，其中所述环烷基、所述杂环基、所述芳基和所述杂芳基各自任选地被一个或多个r2或l-r2取代；
[0113]
每个q独立地是键、o或nr6；
[0114]
x是n或cr7；
[0115]
每个r2独立地是c1-c3烷基、氧代(即，c＝o)、羟基、卤素、氰基、羟烷基、卤代烷基、烷氧基、-c(o)n(r6)2、-n(r6)2、-so2烷基、-nr6c(o)c1-c3烷基、-c(o)环烷基、-c(o)c1-c3烷基、-c(o)杂环基、芳基、杂芳基或杂环基，其中所述环烷基、所述杂环基、所述芳基、所述杂芳基或所述杂环基各自任选地被一个或多个r
11
取代；
[0116]
r3是氢、c1-c6烷基、烷氧基、-n(r
10
)2、-l-n(r
10
)2、环烷基、卤代烷基或杂环基，其中所述c1-c6烷基、所述环烷基和所述杂环基各自任选地被一个或多个r9取代；
[0117]
y是键或亚杂芳基；
[0118]
r4是芳基或杂芳基，各自任选地被一个或多个r5取代；
[0119]
每个r5独立地是羟基、卤素、氰基、羟烷基、烷氧基、c1-c3烷基、卤代烷基、卤代烷基-oh、-n(r6)2、-l-n(r6)2或-so2烷基；
[0120]
l是c1-c3亚烷基；
[0121]
每个r6独立地是氢、c1-c3烷基、卤代烷基或环烷基；
[0122]
r7是氢、氰基或烷氧基；
[0123]
r8是c1-c2烷基或卤代c1-c2烷基；
[0124]
每个r9独立地是羟基、卤素、氨基、氰基、烷氧基或c1-c3烷基；
[0125]
每个r
10
独立地是氢、c1-c3烷基或环烷基；
[0126]
每个r
11
独立地是c1-c3烷基、卤素或卤代烷基；且
[0127]r12
是氢、卤素或c1-c3烷基。
[0128]
在式(i)化合物的一个实施方案中，x是n。在其中x是n的某些实施方案中，r1是烷氧基。在一个实施方案中，所述烷氧基是甲氧基。
[0129]
在式(i)化合物的一个实施方案中，x是n。在其中x是n的某些实施方案中，r1是任选地被一个或多个r2取代的-q-杂环基。在某些实施方案中，r1是-q-杂环基，并且其中q是键，所述杂环基是任选地被一个或多个r2取代的吗啉基、哌嗪基或哌嗪酮。在某些实施方案中，所述杂环基是吗啉基或哌嗪基，y是键，r4是任选地被一个或多个r5取代的芳基。在一个实施方案中，所述杂环基是吗啉基、哌嗪基或哌嗪酮，y是亚杂芳基，r4是任选地被一个或多个r5取代的芳基。
[0130]
在本发明的某些实施方案中，r1是-q-杂环基，并且其中所述杂环基是桥联吗啉基、桥联哌嗪基或桥联哌嗪酮。
[0131]
在本发明的某些实施方案中，r1是-q-杂环基，并且其中所述杂环基是含有两个或更多个环的螺环系统。在这些实施方案中的某些实施方案中，所述螺环系统包括各自含有杂原子的两个环。在这些实施方案中的某些其它实施方案中，所述螺环系统含有不具有杂原子的环(即，一个环具有杂原子，一个环不具有杂原子)。
[0132]
在本发明的某些实施方案中，r1是杂芳基，其中所述杂环基任选地被一个或多个r2或l-r2取代。在这些实施方案中的某些实施方案中，所述杂芳基是双环或三环系统，其除了一个或多个芳香环之外还包括非芳香环，例如双环或三环系统，如5,6,7,8-四氢-[1,2,4]三唑并吡嗪基、5,6,7,8-四氢咪唑并吡嗪基、2,4,5,6-四氢吡咯并吡唑基、1,2,3,4-四氢苯并[4,5]咪唑并吡嗪基或4,5,6,7-四氢吡唑并吡嗪基。
[0133]
在式(i)化合物的一个实施方案中，x是cr7。在一个实施方案中，当x是cr7时，r7是氰基。
[0134]
在式(i)化合物的一个实施方案中，x是cr7。在一个实施方案中，当x是cr7时，r7是氢。
[0135]
在式(i)化合物的一个实施方案中，x是cr7，r7是氢，r1是氢。在另一实施方案中，r1是羟基。在某些实施方案中，r1是-n(r6)2。在一个实施方案中，其中r1是-n(r6)2，并且每个r6是c1-c3烷基。在一个实施方案中，每个c1-c3烷基是甲基。在其它实施方案中，r1是-nr6c(o)r6。在一个实施方案中，每个c1-c3烷基是甲基。在一个实施方案中，所述nr6中的r6是氢，并
且所述c(o)r6中的r6是c1-c3烷基。
[0136]
在另一实施方案中，当x是cr7并且r7是氢时，r1是-c(o)n(r6)2。在一个实施方案中，每个c1-c3烷基是甲基。在一个实施方案中，每个c1-c3烷基是氢。在某些实施方案中，r1是-so2烷基或-so2nr6烷基。在一个实施方案中，r1是-so2nr6烷基，并且r6是氢。在其它实施方案中，r1是任选地被一个或多个r2取代的环烷基。在一个实施方案中，所述环烷基是环丁基、环戊基或环己基，各自任选地被一个或多个r2取代。在一个实施方案中，所述环丁基、环戊基或所述环己基被一个r2取代，其中r2是c1-c3烷基、烷氧基、羟基或-n(r6)2。在一个实施方案中，r2是-n(r6)2，并且每个r6是c1-c3烷基。在一个实施方案中，每个c1-c3烷基是甲基。
[0137]
在另一实施方案中，当x是cr7并且r7是氢时，r1是任选地被一个或多个r2取代的-q-杂环基。在一个实施方案中，q是键，并且所述杂环基是吗啉基、哌啶基、哌嗪基、n-甲基哌嗪基、哌嗪酮、1-甲基-哌嗪-2-酮、二氮杂环庚烷基、6,6-二氟-1,4-二氮杂环庚烷-1-基或4-甲基硫代吗啉1,1-二氧化物。在另一实施方案中，q是键，并且所述杂环基是吡咯烷基或四氢吡喃基，各自任选地被一个或多个r2取代。在一个实施方案中，所述吡咯烷基或所述四氢吡喃基被一个r2取代，其中r2是c1-c3烷基、烷氧基、羟基或-n(r6)2。
[0138]
在另一实施方案中，当x是cr7并且r7是氢时，r1是-q-杂环基，q是键，并且所述杂环基是被一个r2取代的哌嗪基，其中r2是任选地被一个或多个r
11
取代的杂芳基。在一个实施方案中，所述杂芳基是被两个r
11
取代的吡唑基，其中每个r
11
是c1-c3烷基。
[0139]
在另一实施方案中，当x是cr7并且r7是氢时，r1是-q-杂环基，q是键，并且所述杂环基是被一个r2取代的哌嗪基，其中r2是-c(o)环烷基或-c(o)杂环基，其中所述-c(o)环烷基或-c(o)杂环基的环烷基杂环基部分各自任选地被一个或多个r
11
取代。在一个实施方案中，r2是-c(o)环烷基，并且所述环烷基是被一个r
11
取代的环丙基，其中r
11
是c1-c3烷基或卤代烷基。在一个实施方案中，r2是-c(o)杂环基，其中所述杂环基是氧杂环丁烷基、四氢呋喃基或四氢吡喃基。
[0140]
在一个实施方案中，q是键，并且所述杂环基是双环杂环基。在某些实施方案中，所述双环杂环基是二氮杂双环[3.2.0]庚-2-基、(1r,5r)-2,6-二氮杂双环[3.2.0]庚-2-基、二氮杂双环[3.2.0]庚-6-基、(1r,5r)-2,6-二氮杂双环[3.2.0]庚-6-基、6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4h)-基、5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8h)-基、1,3-二甲基-5,6-二氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7(8h)-基或(r)-2-甲基六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-6(2h)-酮。
[0141]
在又一实施例中，q是o，并且所述杂环基是氮杂环丁烷基、四氢呋喃基、吡咯烷基或哌啶基。
[0142]
在另一实施方案中，当x是cr7并且r7是氢时，r1是任选地被一个或多个r2取代的芳基。在一个实施方案中，所述芳基是任选地被一个或多个r2取代的苯基。在某些实施方案中，所述苯基被一个r2取代，其中r2是c1-c3烷基、烷氧基、羟基或-n(r6)2。在一个实施方案中，r2是-n(r6)2，并且每个r6是c1-c3烷基。在一个实施方案中，每个c1-c3烷基是甲基。在其它实施方案中，r1是任选地被一个或多个r2取代的杂芳基。在一个实施方案中，所述杂芳基是任选地被一个或多个r2取代的吡唑基。在一个实施方案中，所述吡唑基被一个r2取代，其中r2是c1-c3烷基、烷氧基、羟基或-n(r6)2。在一个实施方案中，r2是-n(r6)2，并且每个r6是c1-c3烷基。在一个实施方案中，每个c1-c3烷基是甲基。
[0143]
在式(i)化合物的一个实施方案中，x是cr7，并且r7是烷氧基。在一个实施方案中，
所述烷氧基是甲氧基。在其中x是cr7并且r7是烷氧基的某些实施方案中，r1是烷氧基。在一个实施方案中，所述r7烷氧基是甲氧基，并且所述r1烷氧基是甲氧基。
[0144]
在其中x是n或cr7的式(i)化合物的某些实施方案中，y是亚杂芳基。在一个实施方案中，所述亚杂芳基是亚噻吩基。
[0145]
在其中x是n或cr7的式(i)化合物的某些实施方案中，y是键。
[0146]
在式(i)化合物的某些实施方案中，r4是芳基或杂芳基，各自任选地被一个或多个r5取代。在一个实施方案中，r4是任选地被一个或多个r5取代的芳基。在一个实施方案中，所述芳基是任选地被一个或多个r5取代的苯基。在某些实施方案中，所述苯基被一个r5取代，其中r5是c1-c4烷基、卤代烷基或-l-n(r6)2。
[0147]
在一个实施方案中，r5是-l-n(r6)2，其中l是亚甲基，并且一个r6是氢，第二个r6是c1-c3烷基。在一个实施方案中，所述c1-c3烷基是甲基。在另一实施方案中，r5是-l-n(r6)2，其中l是亚甲基，并且每个r6是c1-c3烷基。在一个实施方案中，每个所述c1-c3烷基是甲基。
[0148]
在其中r4是芳基的某些实施方案中，r4是被两个r5取代的苯基，其中一个r5是c1-c4烷基，并且第二个r5是卤代烷基。在一个实施方案中，所述c1-c4烷基是甲基，并且所述卤代烷基是三氟甲基。在某些实施方案中，r4是被两个r5取代的苯基，其中一个r5是c1-c4烷基，并且第二个r5是-l-n(r6)2。在一个实施方案中，l是亚甲基，并且每个r6是c1-c3烷基。
[0149]
在式(i)化合物的一个实施方案中，r3是氢。
[0150]
在式(i)化合物的某些实施方案中，r3是任选地被一个或多个r9取代的c1-c6烷基。在一个实施方案中，所述c1-c6烷基是甲基、乙基或异丙基。
[0151]
在式(i)化合物的某些实施方案中，r3是烷氧基。在一个实施方案中，所述烷氧基是甲氧基。
[0152]
在式(i)化合物的某些实施方案中，r3是卤代烷基。在一个实施方案中，所述卤代烷基是三氟甲基。
[0153]
在式(i)化合物的某些实施方案中，r3是任选地被一个或多个r9取代的环烷基。在一个实施方案中，所述环烷基是环丙基。在一个实施方案中，所述环烷基被一个r9取代，其中所述一个r9是卤素、氨基、羟基或烷氧基。
[0154]
在式(i)化合物的某些实施方案中，r3是-n(r
10
)2。在一个实施方案中，每个r
10
是c1-c3烷基。在某些实施方案中，每个c1-c3烷基是甲基。
[0155]
在式(i)化合物的某些实施方案中，r3是-l-n(r
10
)2。在一个实施方案中，每个r
10
是c1-c3烷基。在某些实施方案中，每个c1-c3烷基是甲基。
[0156]
在式(i)化合物的某些实施方案中，r3是杂环基、芳基或杂芳基，其中所述杂环基、所述芳基和所述杂芳基各自任选地被一个或多个r9取代。
[0157]
在式(i)化合物的某些实施方案中，r8是c1-c2烷基。在一个实施方案中，所述c1-c2烷基是甲基。
[0158]
在式(i)化合物的某些实施方案中，r8是卤代c1-c2烷基。在一个实施方案中，所述卤代c1-c2烷基是氟甲基、二氟甲基或三氟甲基。
[0159]
在一个实施方案中，所述式(i)化合物是：
[0160]
[0161]
[0162]
[0163]
[0164]
[0165]
[0166]
[0167]
[0168]
[0169]
[0170]
[0171]
[0172]
[0173]
[0174]
[0175]
[0176]
[0177][0178][0179]
和上述化合物的药学上可接受的盐。
[0180]
式(i)化合物可配制成药物组合物。
[0181]
药物组合物
[0182]
在另一方面中，本发明提供包括根据本发明的sos1抑制剂的药物组合物和药学上可接受的载剂、赋形剂或稀释剂。本发明的化合物可以通过本领域众所周知的任何方法配制，并且可以被制备成通过任何途径施用，包括但不限于肠胃外、口服、舌下、经皮、局部、鼻内、气管内或直肠内施用。在某些实施方案中，本发明的化合物是在医院环境中通过静脉内施用。在某些其它实施方案中，可优选地通过口服途径施用。
[0183]
载剂特征将取决于施用途径。如本文所使用，术语“药学上可接受的”是指一种无毒材料，该材料与生物系统如细胞、细胞培养物、组织或生物体相容，并且不会干扰一种或多种活性成分的生物活性的有效性。因此，根据本发明的组合物除含有抑制剂外，还可以含有稀释剂、填充剂、盐、缓冲剂、稳定剂、增溶剂以及本领域众所周知的其它材料。药学上可接受的配制物的制备描述于例如《雷氏药学大全(remington's pharmaceutical sciences)》，第18版，编者a.gennaro，宾夕法尼亚州伊斯顿的马克出版公司(mack publishing co.，easton,pa.)，1990年中。
[0184]
如本文所使用的术语“药学上可接受的盐”是指保留上文识别的化合物所期望的生物活性并展现最少或不展现非期望的毒理作用的盐。所述盐的实例包括但不限于用无机酸(例如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、硝酸等)形成的酸加成盐以及用有机酸(例如乙酸、草酸、酒石酸、琥珀酸、苹果酸、抗坏血酸、苯甲酸、单宁酸、双羟萘酸、海藻酸、聚谷氨酸、萘磺酸、萘二磺酸和聚半乳糖醛酸)形成的盐。化合物也可以以所属领域的技术人员已知的药学上可接受的季盐形式施用，所述药学上可接受的季盐特定地包括式
‑‑
nr+z-季铵盐，其中r为氢、烷基或苄基，并且z为抗衡离子，包括氯离子、溴离子、碘离子、
‑‑
o-烷基、甲苯磺酸根、甲基磺酸根、磺酸根、磷酸根或羧酸根(例如苯甲酸根、琥珀酸根、乙酸根、羟乙酸根、马来酸根、苹果酸根、柠檬酸根、酒石酸根、抗坏血酸根、苯甲酸根、肉桂酸根、扁桃酸根、苯甲酸根和二苯基乙酸根)。
[0185]
活性化合物以足以向患者递送治疗有效量而不会在所治疗的患者中造成严重毒性作用的量包括于药学上可接受的载剂或稀释剂中。对于所有上述条件，活性化合物的剂量范围为以受体的体重计，约0.01到300mg/kg，优选地每天0.1到100mg/kg，更一般地每天0.5到约25mg/kg。合适载剂中的典型局部剂量范围将为0.01-3％wt/wt。药学上可接受的衍生物的有效剂量范围可以基于待递送的母化合物的重量来计算。如果衍生物本身展现活性，则可以如上文，使用衍生物的重量或通过所属领域的技术人员已知的其它手段估计有效剂量。
[0186]
包括本发明化合物的药物组合物可用于本文描述的方法。
[0187]
使用方法
[0188]
在又一方面，本发明提供了用于抑制细胞中sos1活性的方法，包括在活体外将需要抑制sos1活性的细胞与有效量的式(i)化合物、其药学上可接受的盐或含有该化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物接触。
[0189]
本文所提供的组合物和方法被认为特别适用于抑制细胞中的sos1活性。在一个实施方案中，在活体内将需要抑制sos1活性的细胞与治疗有效量的式(i)化合物接触以负调节sos1活性。在其它实施方案中，可以使用含有式(i)化合物的治疗有效量的药物学上可接受的盐或药物组合物。在一个实施方案中，所述细胞含有ras家族成员中的激活突变，如kras、hra或nras。在一个实施方案中，所述细胞具有异常sos1活性。在一个实施方案中，所
述异常sos1活性是sos1激活突变的结果。在一个实施方案中，所述sos1激活突变是n233s或n233y突变。在一个实施方案中，所述细胞具有异常nf-1或nf-2活性。在一个实施方案中，所述异常nf-1或nf-2活性是nf-1或nf-2激活突变的结果。
[0190]
通过负调节所述sos1活性，所述方法设计成阻断sos1与ras家族成员之间的相互作用，增加ras蛋白的gtp负载，由此减少或抑制gtp核苷酸交换，并将ras家族成员锁定在gdp结合的非活性形式，从而抑制下游ras介导的信号。可根据特定治疗方案以单剂量或多剂量接触细胞，由此实现sos1的期望负调节。
[0191]
在另一方面，提供了治疗癌症的方法，其包括向患有癌症的患者施用治疗有效量的式(i)化合物、其药学上可接受的盐或包括所述化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。在一个实施方案中，所述癌症是ras家族相关癌症。在一个实施方案中，所述癌症是sos-1-相关癌症。在一个实施方案中，所述癌症是nf-1/nf-2相关癌症。
[0192]
本文所提供的组合物和方法可用于治疗广泛多种的癌症，包含肿瘤，例如前列腺肿瘤、乳腺肿瘤、脑肿瘤、皮肤肿瘤、宫颈癌、睾丸癌等。更具体地说，可以通过本发明的组合物和方法治疗的癌症包含但不限于肿瘤类型，例如星形细胞、乳腺、子宫颈、结肠直肠、子宫内膜、食道、胃、头颈、肝细胞、喉、肺、口腔、卵巢、前列腺和甲状腺癌瘤和肉瘤。更具体地说，这些化合物可以用于治疗：心脏：肉瘤(血管肉瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、脂肪肉瘤)、粘液瘤、横纹肌瘤、纤维瘤、脂肪瘤和畸胎瘤；肺：支气管肺癌(鳞状细胞、未分化小细胞、未分化大细胞、腺癌)、肺泡(细支气管)癌、支气管腺瘤、肉瘤、淋巴瘤、软骨瘤性错构瘤、间皮瘤；胃肠：食道(鳞状细胞癌、腺癌、平滑肌肉瘤、淋巴瘤)、胃(癌瘤、淋巴瘤、平滑肌肉瘤)、胰腺(导管腺癌、胰岛素瘤、胰高血糖素瘤、胃泌素瘤、类癌瘤、血管活性肠肽瘤)、小肠(腺癌、淋巴瘤、类癌瘤、卡波西肉瘤(kaposi's sarcoma)、平滑肌瘤、血管瘤、脂肪瘤、神经纤维瘤、纤维瘤)、大肠(腺癌、管状腺瘤、绒毛状腺瘤、错构瘤、平滑肌瘤)；泌尿生殖道：肾(腺癌、威尔姆氏肿瘤(wilm's tumor)(肾胚细胞瘤)、淋巴瘤、白血病)、膀胱和尿道(鳞状细胞癌、移行细胞癌、腺癌)、前列腺(腺癌、肉瘤)、睾丸(精原细胞瘤、畸胎瘤、胚胎癌、畸胎癌、绒膜癌、肉瘤、间质细胞癌、纤维瘤、纤维腺瘤、腺瘤样肿瘤、脂肪瘤)；肝：肝癌(肝细胞癌)、胆管癌、肝母细胞瘤、血管肉瘤、肝细胞腺瘤、血管瘤；胆道：胆囊癌、壶腹癌、胆管癌；骨：骨原性肉瘤(骨肉瘤)、纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、软骨肉瘤、尤文氏肉瘤(ewing's sarcoma)、恶性淋巴瘤(网状细胞肉瘤)、多发性骨髓瘤、恶性巨细胞瘤脊索瘤、骨软骨纤维瘤(骨软骨外生骨疣)、良性软骨瘤、成软骨细胞瘤、软骨粘液样纤维瘤、骨样骨瘤和巨细胞瘤；神经系统：颅骨(骨瘤、血管瘤、肉芽肿、黄瘤、畸形性骨炎)、脑膜(脑膜瘤、脑膜肉瘤、神经胶质瘤病)、脑(星形细胞瘤、髓母细胞瘤、胶质瘤、室管膜瘤、胚细胞瘤(松果体瘤)、多形性胶质母细胞瘤、少突神经胶质瘤、神经鞘瘤、视网膜母细胞瘤、先天性肿瘤)、脊髓神经纤维瘤、脑膜瘤、胶质瘤、肉瘤)；妇科：子宫(子宫内膜癌)、子宫颈(宫颈癌、肿瘤前宫颈非典型增生)、卵巢(卵巢癌(浆液性囊腺癌、粘液性囊腺癌、未分类癌)、粒层-卵泡膜细胞瘤、支持间质细胞瘤(sertoli-leydig cell tumor)、无性细胞瘤、恶性畸胎瘤)、外阴(鳞状细胞癌、上皮内癌、腺癌、纤维肉瘤、黑色素瘤)、阴道(透明细胞癌、鳞状细胞癌、葡萄样肉瘤(胚胎横纹肌肉瘤))、输卵管(癌瘤)；血液科：血液(骨髓白血病(急性和慢性)、急性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、骨髓增生性疾病、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征)、霍奇金氏病(hodgkin's disease)、非霍奇金氏淋巴瘤(non-hodgkin'slymphoma)(恶性淋巴瘤)；皮
肤：恶性黑色素瘤、基底细胞癌、鳞状细胞癌、卡波西肉瘤、痣发育不良性痣、脂肪瘤、血管瘤、皮肤纤维瘤、瘢痕瘤、牛皮癣；以及肾上腺：神经母细胞瘤。在某些实施方案中，所述癌症是弥漫性大b细胞淋巴瘤(dlbcl)。
[0193]
在一个实施方案中，所述癌症是ras家族相关癌症，例如kras、nras或hras相关癌症。在某些实施方案中，所述ras家族相关癌症是非小细胞肺癌或胰腺癌。在一个实施方案中，所述癌症是sos1相关癌症。在某些实施方案中，所述sos1相关癌症是肺腺癌、胚胎性横纹肌肉瘤、塞尔托利氏细胞睾丸肿瘤和皮肤颗粒细胞瘤。在一个实施方案中，所述癌症是nf-1相关癌症。
[0194]
施用给患者的浓度和途径将根据要治疗的癌症而变化。所述化合物、其药学上可接受的盐以及包含此类化合物和盐的药物组合物也可以作为手术前或手术后的佐剂与其它抗肿瘤化合物，例如化学疗法共同施用，或与其它治疗方法如放射或手术干预结合使用。
[0195]
通用反应方案、中间产物和实施例
[0196]
通用反应方案
[0197]
本发明化合物可在本文所述的合成方法和反应方案中使用市售试剂和中间产物制备，或者可使用本领域技术人员熟知的其它试剂和常规方法制备。
[0198]
举例来说，用于制备本发明的化合物和式(i)化合物的中间产物可以根据通用反应方案i-vi制备：
[0199]
通用反应方案i
[0200][0201]
对于通用反应方案i，化合物5是式(i)的实例。在这个通用反应方案i中，1与例如中间产物2的胺反应，此反应可以例如是亲核取代或金属催化反应，用于产生化合物3。然后，化合物3可在存在合适的碱例如碳酸钠的情况下与例如硼酸衍生物y-r
3 4的偶联配偶体进行金属催化反应，形成标题化合物5。
[0202]
通用反应方案ii
[0203][0204]
对于通用反应方案ii，化合物5是式(i)的实例。在这个通用反应方案ii中，6与例如中间产物2的胺反应，此反应可以例如是亲核取代或金属催化反应，用于产生化合物7。然后，化合物7可在存在合适的碱例如碳酸钠的情况下与例如硼酸衍生物y-r
1 8的偶联配偶体进行金属催化反应，形成标题化合物5。
[0205]
通用反应方案iii
[0206][0207]
对于通用反应方案iii，化合物5是式(i)的实例。在这个通用反应方案iii中，化合物7可在存在合适的碱例如碳酸铯的情况下与例如醇或胺h-r
1 9的偶联配偶体进行金属催化反应或亲核取代，形成标题化合物5。
[0208]
通用反应方案iv
[0209][0210]
对于通用反应方案iv，化合物5是式(i)的实例。在这个通用反应方案iv中，化合物10与例如中间产物2的胺反应，此反应可以例如是亲核取代或金属催化反应，用于产生化合物5。
[0211]
通用反应方案v
[0212][0213]
对于通用反应方案v，化合物5是式(i)的实例。在这个通用反应方案v中，11与例如中间产物2的胺反应，此反应可以例如是亲核取代或金属催化反应，用于产生化合物12。然后，化合物12可在存在合适的碱例如碳酸钠的情况下与例如硼酸衍生物y-r
3 4的偶联配偶体进行金属催化反应，形成化合物7。然后，化合物7可在存在合适的碱例如碳酸钠的情况下与例如硼酸衍生物y-r
1 8的偶联配偶体进行金属催化反应，形成标题化合物5。
[0214]
通用反应方案vi
[0215][0216]
对于通用反应方案vi，化合物5是式(i)的实例。在这个通用反应方案vi中，化合物13可在存在合适的碱或偶联配偶体例如碳酸铯或偶氮二甲酸二乙酯的情况下与例如醇、卤化物、甲苯磺酸盐或甲磺酸盐x-r
1 14的偶联配偶体进行取代反应，形成标题化合物5。
[0217]
以下中间产物可用于制备本发明化合物。
[0218]
中间产物a
[0219][0220]
步骤a：在25℃下向1-(2-溴苯基)-n-甲基甲胺(6.50g，32.5mmol，1eq.)在thf(70.0ml)中的混合物中逐滴添加boc2o(7.80g，35.7mmol，8.21ml，1.10eq.)，并在25℃下将混合物搅拌1小时。将反应混合物直接真空浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝20/1到10/1)纯化，得到呈无色油状的(2-溴苯甲基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(7.50g，25.0mmol，76.9％产率)。
[0221]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.55(br d,j＝8.0hz,1h),7.34-7.28(m,1h),7.22-7.08(m,2h),4.61-4.42(m,2h),2.94-2.78(m,3h),1.60-1.33(m,9h)。
[0222]
步骤b：将(2-溴苯甲基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(7.00g，23.3mmol，1.00eq.)、双(频哪醇)二硼(8.88g，35.0mmol，1.50eq.)、pd(dppf)cl2(1.71g，2.33mmol，0.10eq.)和乙酸钾(5.72g，58.3mmol，2.50eq.)在二噁烷(80.0ml)中的混合物脱气并用氮气吹扫3次，然后在氮气气氛下在110℃下将混合物搅拌12小时。在减压下浓缩反应混合物，得到残余物，并通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝1/0到10/1)纯化残余物，得到呈无色油状的甲基(2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊-2-基)苯甲基)氨基甲酸叔丁酯(8.00g，23.0mmol，98.8％产率)。
[0223]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.82(br d,j＝7.2hz,1h),7.48-7.37(m,1h),7.27-7.21(m,2h),4.85-4.63(m,2h),2.92-2.73(m 3h),1.54-1.41(m,9h),1.35(s,12h)。
[0224]
中间产物b
(1-氨基乙基)噻吩-3-基)苯甲基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(1.20g，粗品)。
[0232]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.36-7.28(m,3h),7.26-7.22(m,1h),7.01(s,1h),6.91(br s,1h),4.49(br d,j＝19.2hz,2h),4.40(q,j＝6.4hz,1h),2.72(br d,j＝19.2hz,3h),1.53(d,j＝6.4hz,3h),1.51-1.40(m,9h)。
[0233]
中间产物c和d
[0234][0235]
步骤a：向4-溴噻吩-2-甲醛(20.0g，104mmol，1.00eq.)和(r)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(12.1g，99.5mmol，0.95eq.)在thf(200ml)中的溶液中添加乙醇钛(iv)(47.8g，209mmol，43.4ml，2.00eq.)。在25℃下将反应混合物搅拌1小时。然后，将混合物倒入水(20.0ml)中并搅拌5分钟，得到悬浮液。过滤悬浮液并将滤液真空浓缩，得到呈黄色油状的(r,e)-n-((4-溴噻吩-2-基)亚甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(20.0g，粗品)。lcms[m+1]:295.8。
[0236]
步骤b：在0℃下向(r,e)-n-((4-溴噻吩-2-基)亚甲基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(600mg，2.04mmol，1.00eq.)在thf(200ml)中的溶液中逐滴添加甲基溴化镁(3.00m，2.04ml，3.00eq.)。然后，在25℃下将反应混合物搅拌1小时。向反应混合物添加饱和氯化铵水溶液(3.00ml)并搅拌5分钟。用乙酸乙酯(3.00ml
×
2)萃取水相，合并的有机相用盐水(3.00ml
×
2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到残余物。残余物通过制备型tlc(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化，得到呈黄色油状的(r)-n-((s)-1-(4-溴噻吩-2-基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(第一次洗脱，中间产物c)(120mg，19.0％产率)和呈黄色油状的(r)-n-((r)-1-(4-溴噻吩-2-基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(第二次洗脱，中间产物d)(150mg，483μmol，23.7％产率)。
[0237]
中间产物c：1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.15(d,j＝1.6hz,1h),6.97(s,1h),4.81-4.75(m,1h),3.51(br d,j＝3.2hz,1h),1.59(d,j＝6.8hz,3h),1.24(s,9h)。
[0238]
中间产物d：1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.14(d,j＝1.6hz,1h),6.89(s,1h),4.81-4.74(m,1h),3.39(br d,j＝5.6hz,1h),1.65(d,j＝6.8hz,3h),1.25(s,9h)。
[0239]
中间产物e
[0240][0241]
步骤a：在氮气气氛下向(r)-n-((r)-1-(4-溴噻吩-2-基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(150mg，483μmol，1.00eq.)和甲基(2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊-2-基)苯甲基)氨基甲酸叔丁酯(168mg，483μmol，1.00eq.)在二噁烷(1.00ml)和水(0.20ml)中的溶液中添加pd(pph3)4(55.9mg，48.3μmol，0.10eq)和碳酸铯(473mg，1.45mmol，3.00eq.)。在氮气气氛下在110℃下将反应混合物搅拌2小时，然后搅拌到25℃并真空浓缩，得到残余
物。残余物通过制备型tlc(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化，得到呈白色固体状的(2-(5-((r)-1-(((r)-叔丁基亚磺酰基)氨基)乙基)噻吩-3-基)苯甲基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(120mg，266μmol，55.1％产率)。lcms[m+1]＝451.1。
[0242]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.37-7.29(m,3h),7.25(s,1h),7.06(s,1h),6.95(br s,1h),4.88-4.81(m,1h),4.48(br d,j＝16.0hz,2h),3.44(br d,j＝6.0hz,1h),2.73(br d,j＝12.8hz,3h),1.71(d,j＝6.4hz,3h),1.27(s,9h),1.25(s,9h)。
[0243]
步骤b：向(2-(5-((r)-1-(((r)-叔丁基亚磺酰基)氨基)乙基)噻吩-3-基)苯甲基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(120mg，266μmol，1.00eq.)在thf(1.00ml)和水(0.20ml)中的溶液中添加碘(20.3mg，79.9μmol，16.1μl，0.30eq.)，并在50℃下将反应混合物搅拌1小时。然后将反应混合物冷却到25℃，倒入饱和亚硫酸钠水溶液(2.00ml)中并搅拌5分钟。用乙酸乙酯(3.00ml
×
3)萃取水相，合并的有机相用盐水(3.00ml
×
3)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到残余物。残余物通过制备型hplc(柱：phenomenex gemini-nx c1875
×
30mm
×
3um；流动相：[水(0.1％tfa)-acn]；b％：28％-38％)纯化，得到呈白色油状的(r)-(2-(5-(1-氨基乙基)噻吩-3-基)苯甲基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(40.0mg，113μmol，42.3％产率，97.5％纯度)。
[0244]1h nmr(400mhz,cd3od)δ7.41-7.23(m,6h),4.84-4.79(m,1h),4.48(s,2h),2.73(s,3h),1.76(d,j＝6.8hz,3h),1.51-1.36(m,9h)。
[0245]
中间产物f
[0246][0247]
步骤a：在氮气气氛下向(r)-n-((s)-1-(4-溴噻吩-2-基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(100mg，322μmol，1.00eq.)和甲基(2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊-2-基)苯甲基)氨基甲酸叔丁酯(112mg，322μmol，1.00eq.)在二噁烷(1.00ml)和水(0.20ml)中的溶液中添加pd(pph3)4(37.2mg，32.2μmol，0.10eq.)和碳酸铯(315mg，967u mmol，3.00eq.)。在110℃下将反应混合物搅拌2小时，然后冷却到25℃并真空浓缩，得到残余物。残余物通过制备型tlc(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化，得到呈黄色油状的(2-(5-((s)-1-(((r)-叔丁基亚磺酰基)氨基)乙基)噻吩-3-基)苯甲基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，266μmol，68.9％产率)。lcms[m+1]＝451.1。
[0248]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.37-7.28(m,3h),7.26-7.22(m,1h),7.07(d,j＝1.2hz,1h),7.03(br s,1h),4.90-4.83(m,1h),4.55-4.41(m,2h),3.71-3.55(m,1h),2.80-2.65(m,3h),1.64(d,j＝6.8hz,3h),1.52-1.41(m,9h),1.26(s,9h)。
[0249]
步骤b：向(2-(5-((s)-1-(((r)-叔丁基亚磺酰基)氨基)乙基)噻吩-3-基)苯甲基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，266μmol，1.00eq.)在thf(1.00ml)和水(0.20ml)中的溶液中添加碘(16.9mg，66.6μmol，13.4μl，0.30eq.)。在50℃下将反应混合物搅拌1小时，然后冷却到25℃，倒入饱和水溶液亚硫酸钠(2.00ml)溶液中并搅拌5分钟。用乙酸乙酯(3.00ml
×
3)萃取水相，合并的有机相用盐水(3.00ml
×
3)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到残余物。残余物通过制备型hplc(柱：phenomenex luna c18 150
×
25mm
×
10um；流动相：[水(0.1％tfa)-acn]；b％：24％-54％)纯化，得到呈白色油状的(s)-(2-(5-(1-氨基乙基)噻吩-3-基)苯甲基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(45.0mg，97.7μmol，44.0％产率，tfa盐)。lcms[m+1]＝347.2。
[0250]1h nmr(400mhz,cd3od)δ7.40(d,j＝1.2hz,1h),7.38-7.22(m,5h),4.82-4.80(br s,1h),4.48(s,2h),2.73(s,3h),1.75(d,j＝6.8hz,3h),1.50-1.35(m,9h)。
[0251]
中间产物g
[0252][0253]
步骤a：向2-甲基-3-(三氟甲基)苯甲醛(300mg，1.59mmol，1.00eq.)和2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(213mg，1.75mmol，1.10eq.)在thf(5.00ml)中的溶液中添加乙醇钛(iv)(727mg，3.19mmol，661μl，2.00eq)。在25℃下将反应混合物搅拌12小时。将反应混合物倒入水(2.00ml)中并搅拌5分钟，得到悬浮液。过滤悬浮液并加以真空浓缩，得到呈白色固体状的2-甲基-n-(2-甲基-3-(三氟甲基)亚苄基)丙烷-2-亚磺酰胺(360mg，1.24mmol，77.5％产率)。
[0254]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝8.98(s,1h),8.13(d,j＝7.6hz,1h),7.78(d,j＝7.6hz,1h),7.40(t,j＝7.6hz,1h),2.70(d,j＝0.8hz,3h),1.29(s,9h)。
[0255]
步骤b：在氮气气氛下在0℃下向2-甲基-n-(2-甲基-3-(三氟甲基)亚苄基)丙烷-2-亚磺酰胺(185mg，635μmol，1.00eq.)在thf(5.00ml)中的溶液中逐滴添加甲基溴化镁(227mg，3.00m，635μl，3.00eq.)。在25℃下将反应混合物搅拌3小时，然后缓慢地用饱和氯化铵溶液(10.0ml)处理。分离有机层和水相，并用乙酸乙酯(5.00ml
×
3)萃取水相。合并的有机层用盐水(10.0ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝10 1到1/1)纯化，得到呈黄色固体状的2-甲基-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)丙烷-2-亚磺酰胺(150mg，488.0μmol，76.8％产率)。
[0256]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.65-7.54(m,4h),7.35-7.28(m,2h),5.00-4.87(m,2h),2.49(s,6h),1.54-1.50(m,6h),1.26-1.24(m,9h),1.22(s,9h)。
[0257]
c：在25℃下将2-甲基-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)丙烷-2-亚磺酰胺(150mg，488.0μmol，1.00eq.)在hcl(在二噁烷中为4.0m，1.00ml)中的溶液搅拌1小时。过滤反应混合物并将滤饼真空浓缩，得到呈红色固体状的1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-胺(45.0mg，38.5％产率)。lcms[m+1]＝204.3。
[0258]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝7.78-7.65(m,2h),7.56-7.48(m,1h),4.93-4.89(m,1h),2.52(d,j＝0.8hz,3h),1.63(d,j＝6.8hz,3h)。
[0259]
中间产物h
[0260][0261]
步骤a：向1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-酮(8.00g，39.6mmol，1.00eq.)和(s)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(5.28g，43.5mmol，1.10eq.)在thf(80.0ml)中的溶液中添加乙醇钛(iv)(18.1g，79.1mmol，16.4ml，2.00eq.)。在70℃下将反应混合物搅拌2小时。在25℃冷却反应混合物，将其倒入冰水(w/w＝1/1)(80.0ml)中并搅拌15分钟，得到悬浮液。过滤悬浮液，滤液用乙酸乙酯(50.0ml
×
3)萃取。合并的有机相用盐水(30.0ml
×
3)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝20/1到3/1)纯化，得到呈黄色油状的(s)-2-甲基-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)亚乙基)丙烷-2-亚磺酰胺(8.00g，26.2mmol，66.2％产率)。lcms[m+1]:306.2。
[0262]1h nmr(400mhz,cd3od)δ7.74(br t,j＝7.2hz,2h),7.57-7.51(m,1h),7.46(br t,j＝7.6hz,2h),7.43-7.30(m,1h),2.72(s,3h),2.54(j＝6.8hz,3h),2.48(s,3h),2.40(br d,j＝16.0hz,3h),1.31(s,9h),1.24(br d,j＝12.4hz,9h)。
[0263]
步骤b：在-78℃下向s)-2-甲基-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)亚乙基)丙烷-2-亚磺酰胺(8.00g，26.2mmol，1.00eq.)在thf(80.0ml)中的溶液中逐滴添加三仲丁基硼氢化锂(7.47g，39.3mmol，8.59ml，1.50eq.)。在-78℃下将反应混合物搅拌2小时。在0℃下向反应混合物(10.0ml)逐滴添加水，并将所得混合物搅拌5分钟。用乙酸乙酯(30.0ml
×
3)萃取水相。合并的有机相用盐水(30.0ml
×
2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝20/1到3/1)纯化，得到呈黄色油状的(s)-2-甲基-n-((r)-1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)丙烷-2-亚磺酰胺(3.50g，11.4mmol，43.5％产率)。lcms[m+1]:308.0。
[0264]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝7.70(d,j＝8.0hz,1h),7.57(d,j＝7.6hz,1h),7.39-7.33(m,1h),4.94-4.88(m,1h),2.48(d,j＝1.2hz,3h),1.54(d,j＝6.4hz,3h),1.20(s,9h)。
[0265]
步骤c：在25℃下将s)-2-甲基-n-((r)-1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)丙烷-2-亚磺酰胺(1.30g，4.23mmol，1.00eq.)在hcl(在二噁烷中为4m，15.0ml)中的溶液搅拌30分钟。过滤反应混合物，并将滤饼真空干燥，得到呈白色固体状的(r)-1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-胺(700mg，2.89mmol，68.4％产率，99.1％纯度，盐酸盐)。lcms[m+h]:204.0。
[0266]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝7.73(t,j＝7.6hz,2h),7.54-7.49(m,1h),4.92-4.88(m,1h),2.52(d,j＝0.8hz,3h),1.62(d,j＝6.8hz,3h)。
[0267]
中间产物i
[0268][0269]
步骤a：向1-(5-溴噻吩-2-基)乙烷-1-酮(11.0g，53.6mmol，1.00eq.)在thf(120ml)中的溶液中添加2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(8.45g，69.7mmol，1.30eq.)和乙醇钛(iv)(24.5g，107mmol，22.3ml，2.00eq.)，在氮气气氛下在75℃下将反应混合物搅拌12小时。将反应混合物冷却到25℃并真空浓缩，得到残余物，用水(200ml)和乙酸乙酯(200ml)稀释残余物，过滤，并用乙酸乙酯(100ml
×
3)萃取滤液。合并的有机层用盐水(300ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到呈黄色固体状的n-(1-(5-溴噻吩-2-基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(16.0g，粗品)。lcms[m+1]:308.0。
[0270]
步骤b：在0℃下向n-(1-(5-溴噻吩-2-基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(16.0g，51.9mmol，1.00eq.)在thf(150ml)中的溶液中添加硼氢化钠(3.93g，104mmol，2.00eq.)，在20℃下将反应混合物搅拌1小时。向反应混合物逐滴添加饱和碳酸氢钠水溶液(20.0ml)，然后用水(200ml)稀释混合物并用乙酸乙酯(100ml
×
3)萃取。合并的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝30/1到2/1)纯化，得到呈黄色油状的n-(1-(5-溴噻吩-2-基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(12.0g，38.7mmol，74.5％产率)。lcms[m+1]:309.9。
[0271]
中间产物j
[0272][0273]
步骤a：向1-(5-溴噻吩-2-基)乙烷-1-酮(10.0g，48.8mmol，1.00eq.)和(r)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(7.68g，63.4mmol，1.30eq.)在thf(120ml)中的溶液中添加乙醇钛(iv)(22.3g，97.5mmol，20.2ml，2.00eq.)，在氮气气氛下在70℃下将反应混合物搅拌12小时。将反应混合物冷却到25℃，用水(200ml)和乙酸乙酯(100ml)稀释，得到悬浮液，过滤悬浮液，并用乙酸乙酯(100ml
×
3)萃取滤液。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到呈棕色油状的(r,e)-n-(1-(5-溴噻吩-2-基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(13.0g，粗品)。lcms[m+1]:308.2。
[0274]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.23(d,j＝4.0hz,1h),7.04(d,j＝4.0hz,1h),2.67(s,3h),1.28(s,9h)。
[0275]
步骤b：在0℃下向(r,e)-n-(1-(5-溴噻吩-2-基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(13.0g，42.2mmol，1.00eq.)在thf(150ml)中的溶液中添加硼氢化钠(4.79g，127mmol，3.00eq.)。在氮气气氛下在20℃下将反应混合物搅拌2小时。向混合物逐滴添加饱和碳酸氢钠水溶液(20.0ml)并用水(200ml)稀释，所得水溶液用乙酸乙酯(100ml
×
3)萃取，合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝30/1到2/1)纯化，得到呈褐色固体状的(r)-n-((r)-1-(5-溴噻吩-2-基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(6.00g，17.4mmol，41.3％产率，90.0％纯度)。lcms[m+1]:309.9。
[0276]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝6.90(d,j＝3.6hz,1h),6.80(d,j＝3.6hz,1h),4.84-4.66(m,1h),3.50(d,j＝2.8hz,1h),1.57(d,j＝6.4hz,3h),1.23(s,9h)。
[0277]
步骤c：在氮气气氛下向(r)-n-((r)-1-(5-溴噻吩-2-基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(2.00g，6.45mmol，1.00eq.)和甲基(2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊-2-基)苯甲基)氨基甲酸叔丁酯(2.69g，7.74mmol，1.20eq.)在二噁烷(20.0ml)和水(2.00ml)中的溶液中添加碳酸铯(6.30g，19.3mmol，3.00eq.)和pd(pph3)4(745mg，645μmol，0.10eq.)。在氮气气氛下在110℃下将反应混合物搅拌2小时。然后将反应混合物冷却到25℃，用水(100ml)稀释，并用乙酸乙酯(50.0ml
×
3)萃取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝20/1到1/1)纯化，得到呈黄色油状的(2-(5-((r)-1-(((r)-叔丁基亚磺酰基)氨基)乙基)噻吩-2-基)苯甲基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(2.60g，5.19mmol，80.6％产率，90.0％纯度)。lcms[m+1]:451.4。
[0278]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.40-7.32(m,2h),7.31-7.27(m,1h),7.26-7.22(m,1h),7.01(s,1h),6.83(s,1h),4.95-4.79(m,1h),4.67-4.44(m,2h),3.56(d,j＝3.2hz,1h),2.93-2.56(m,3h),1.64(d,j＝6.4hz,3h),1.56-1.36(m,9h),1.26(s,9h)。
[0279]
步骤d：向(2-(5-((r)-1-(((r)-叔丁基亚磺酰基)氨基)乙基)噻吩-2-基)苯甲基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(2.60g，5.77mmol，1.00eq.)在thf(20.0ml)和水(4.00ml)中的溶液中添加碘(439mg，1.73mmol，349μl，0.30eq.)，在50℃下将反应混合物搅拌2小时。将反应混合物冷却到25℃，用饱和碳酸氢钠(50.0ml)稀释并用乙酸乙酯(20.0ml
×
3)萃取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝10/1到0/1)纯化，得到呈黄色油状的(r)-(r)-(2-(5-(1-氨基乙基)噻吩-2-基)苯甲基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(1.50g，3.68mmol，63.8％产率，85.0％纯度)。lcms[2m+1]:693.3。
[0280]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.39-7.31(m,2h),7.30-7.20(m,2h),7.01(d,j＝2.8hz,1h),6.81(d,j＝3.2hz,1h),4.61-4.48(m,3h),4.04(s,2h),2.73(s,3h),1.64(d,j＝6.4hz,3h),1.57-1.33(m,9h)。
[0281]
中间产物k
[0282][0283]
步骤：向n-(1-(5-溴噻吩-2-基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(0.50g，1.61mmol，1.00eq.)和n,n-二甲基-1-(2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊-2-基)苯基)甲胺(505mg，1.93mmol，1.20eq.)在二噁烷(5.00ml)和水(0.50ml)中的溶液中添加碳酸铯(1.58g，4.83mmol，3.00eq.)和pd(pph3)4(186mg，161μmol，0.10eq.)，然后脱气并用氮气吹扫3次。在氮气气氛下在110℃下将反应混合物搅拌2小时。在完成后，将反应混合物冷却到25℃，用水(50.0ml)稀释并用乙酸乙酯(20.0ml
×
3)萃取。合并的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝20/1到0/1)纯化，得到呈棕色油状的n-(1-(5-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(450mg，1.15mmol，71.3％产率，93.0％纯度)。lcms[m+1]:365.2。
[0284]
步骤b：向n-(1-(5-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(410mg，1.12mmol，1.00eq.)在thf(4.00ml)中的溶液中添加盐酸(3.00m，375μl，1.00eq.)，在20℃下将反应混合物搅拌2小时。在完成后，反应混合物用饱和碳酸氢钠(50.0ml)稀释并用乙酸乙酯(20.0ml
×
3)萃取。合并的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝10/1到二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化，得到呈黄色油状的1-(5-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙胺(200mg，691μmol，61.5％产率，90.0％纯度)。
[0285]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝7.48-7.42(m,1h),7.41-7.36(m,1h),7.34-7.28(m,2h),7.13(d,j＝3.6hz,1h),6.96-6.92(m,1h),4.29-4.21(m,1h),3.39(s,2h),2.14(s,6h),1.38(d,j＝6.4hz,3h)。
[0286]
中间产物l
[0287][0288]
步骤a：向6-氯呋喃[3,4-c]吡啶-1(3h)-酮(1.50g，8.85mmol，1.00eq.)在四氯化碳(10.0ml)中的溶液中添加aibn(145mg，884μmol，0.10eq.)和nbs(1.42g，7.96mmol，0.9eq.)。在80℃下将反应混合物搅拌12小时。过滤反应物并真空浓缩滤液，得到残余物。残
余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝50/1到10/1)纯化，得到呈黄色油状的3-溴-6-氯呋喃[3,4-c]吡啶-1(3h)-酮(1.20g，4.83mmol，54.6％产率)。lcms[m+3]:249.8。
[0289]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝8.84-8.80(m,1h),7.84(s,1h),7.47(s,1h)。
[0290]
步骤b：在0℃下向3-溴-6-氯呋喃[3,4-c]吡啶-1(3h)-酮(1.20g，4.83mmol，1.00eq.)在乙醇(20.0ml)中的溶液中添加水合肼(370mg，7.24mmol，359μl，1.50eq.)。在80℃下将反应混合物搅拌30分钟。将反应物冷却到25℃，倒入冰水(1.00ml)中，得到悬浮液。过滤悬浮液，收集滤饼并加以真空干燥，得到呈黄色固体状的7-氯吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-醇(800mg，4.41mmol，91.2％产率)。lcms[m+1]
+
:182.0。
[0291]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝13.08(br s,1h),9.20(s,1h),8.53(s,1h),8.10(s,1h)。
[0292]
步骤c：在25℃下向7-氯吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-醇(78.0mg，430μmol，1.00eq.)在乙腈(2.00ml)中的溶液中添加氧氯化磷(v)(231mg，1.50mmol，139μl，3.50eq.)。在80℃下将反应混合物搅拌2小时。在25℃下冷却反应物，倒入饱和碳酸氢钠水溶液(2.00ml)中并在0℃下搅拌5分钟。用乙酸乙酯(3.00ml
×
3)萃取水相。合并的有机相用盐水(2.00ml
×
3)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到呈红色固体状的1,7-二氯吡啶并[3,4-d]哒嗪(65.0mg，粗品)。lcms[m+1]:199.8。
[0293]
中间产物m
[0294][0295]
步骤a：在0℃下在1.5小时内向甲基3,4-二甲氧基苯甲酸甲酯(10.0g，51.0mmol，1.00eq.)在乙酸(50.0ml)中的混合物中添加溴(8.96g，56.1mmol，2.89ml，1.10eq.)在乙酸(50.0ml)中的溶液。然后，将混合物缓慢升至室温并搅拌45分钟。在完成后，通过倒入水(700ml)中使反应物淬灭并搅拌30分钟，然后停止搅拌并在静置1小时后过滤混合物。收集到的固体用水(100ml)洗涤并用亚硫酸钠水溶液(100ml)洗涤。将固体部分地干燥，溶解在热甲醇(300ml)中，并冷却所得溶液。冷却的甲醇溶液用水(200ml)处理，得到悬浮液，过滤悬浮液，收集滤饼并加以真空干燥，得到呈白色粉末状的2-溴-4,5-二甲氧基苯甲酸甲酯(9.00g，32.7mmol，64.2％产率)。lcms[m+1]:275.3。
[0296]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝7.36(s,1h),7.24(s,1h),3.84(s,3h),3.82(s,3h),3.79(s,3h)。
[0297]
步骤b：将2-溴-4,5-二甲氧基-苯甲酸甲酯(6.00g，21.8mmol，1.00eq.)、1-(乙烯氧基)丁烷(10.9g，109mmol，14.0ml，5.00eq.)、pd(oac)2(490mg，2.18mmol，0.10eq.)、三苯膦(1.14g，4.36mmol，0.20eq.)和三乙胺(2.65g，26.2mmol，3.64ml，1.20eq.)在乙腈(60.0ml)中的混合物脱气，并用氮气吹扫3次，然后在氮气气氛下在100℃下将反应混合物搅拌16小时。然后将混合物冷却到25℃，过滤，并在减压下浓缩滤液，得到呈黄色油状的2-(1-丁氧基乙烯基)-4,5-二甲氧基苯甲酸甲酯(6.00g，粗品)，直接用于下一步骤。
[0298]
步骤c：在20℃下将2-(1-丁氧基乙烯基)-4,5-二甲氧基苯甲酸甲酯(6.00g，20.4mmol，1.00eq.)在盐酸(占水的10％，61.2g，168mmol，60.0ml，8.23eq.)和thf(60.0ml)中的混合物搅拌1小时。反应混合物用水(100ml)稀释并用乙酸乙酯(50.0ml
×
3)萃取。用饱和碳酸氢钠水溶液将合并的有机层调至ph＝7，然后有机层用盐水(100ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物在20℃下用石油醚/乙酸乙酯＝5/1(50.0ml)研磨20分钟，得到悬浮液，过滤悬浮液，收集滤饼并加以真空干燥，得到呈白色固体状的2-乙酰基-4,5-二甲氧基苯甲酸甲酯(3.00g，12.6mmol，61.8％产率)。
[0299]
1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝7.26(s,1h),7.17(s,1h),3.86(s,3h),3.84(s,3h),3.77(s,3h),2.46(s,3h)。
[0300]
步骤d：在室温下向2-乙酰基-4,5-二甲氧基苯甲酸甲酯(3.00g，12.6mmol，1.00eq.)在乙醇(30.0ml)中的溶液中添加水合肼(2.22g，37.8mmol，2.16ml，3.00eq.)，然后在95℃下将反应混合物搅拌30分钟。反应混合物用水(100ml)稀释并用乙酸乙酯萃取数次。合并的有机层用盐水(100ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物在20℃下用乙酸乙酯(50.0ml)研磨20分钟，得到悬浮液，过滤悬浮液，收集滤饼并加以真空干燥，得到呈灰白色固体状的6,7-二甲氧基-4-甲基酞嗪-1(2h)-酮(2.00g，9.08mmol，72.1％产率)。lcms[m+1]:221.4。
[0301]
1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝12.25(s,1h),7.58(s,1h),7.21(s,1h),3.96(s,3h),3.92(s,3h),2.48(s,3h)。
[0302]
步骤e：在120℃下将6,7-二甲氧基-4-甲基酞嗪-1(2h)-酮(1.30g，5.90mmol，1.00eq.)在氧氯化磷(v)(13.0ml)中的混合物搅拌12小时。在减压下浓缩反应混合物，得到呈黄色固体状的1-氯-6,7-二甲氧基-4-甲基酞嗪(1.20g，粗品)。lcms[m+1]:239.0。
[0303]
1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝7.80(s,1h),7.64(s,1h),4.13(s,3h),4.12(s,3h),3.08(s,3h)。
[0304]
中间产物n
[0305][0306]
步骤a：向1-(3-(二氟甲基)-2-甲基苯基)乙烷-1-酮(0.37g，1.99mmol，1.00eq.)
在四氢呋喃(10.0ml)中的溶液中添加乙醇钛(iv)(2.27g，9.95mmol，2.06ml，5.00eq.)和(r)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(724mg，5.97mmol，3.00eq.)。在75℃下将混合物搅拌16小时。通过在25℃下添加20.0ml的饱和水溶液碳酸氢钠使反应混合物淬灭。过滤混合物，并用45.0ml(15.0ml
×
3)乙酸乙酯萃取滤液。合并的有机层用20.0ml(20.0ml
×
1)盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过快速硅胶色谱(0～12％的乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到呈无色油状的(r,e)-n-(1-(3-(二氟甲基)-2-甲基苯基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(0.36g，1.19mmol，59.8％产率，95.0％纯度)。
[0307]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝7.55-7.62(m,1h),7.16-7.51(m,2h),6.79-7.13(m,1h),2.48-2.73(m,3h),2.27-2.47(m,3h),1.19-1.30(m,9h)。
[0308]
步骤b：向(r,e)-n-(1-(3-(二氟甲基)-2-甲基苯基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(340mg，1.18mmol，1.00eq.)在四氢呋喃(5.00ml)中的溶液中添加硼氢化钠(89.5mg，2.37mmol，2.00eq.)。在0℃下将混合物搅拌1小时。通过在25℃下添加10.0ml水，使反应混合物淬灭，然后用30.0ml(10.0ml
×
3)乙酸乙酯萃取。合并的有机层用盐水(10.0ml
×
1)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过快速硅胶色谱(0-13％的乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到呈黄色油状的(r)-n-((r)-1-(3-(二氟甲基)-2-甲基苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(190mg，643μmol，54.4％产率，98.0％纯度)。lcms[m+1]
+
＝290.1。
[0309]
步骤c：在25℃下将(r)-n-((r)-1-(3-(二氟甲基)-2-甲基苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(140mg，484μmol，1.00eq.)在盐酸二噁烷(4.00m，7.00ml，57.9eq)中的混合物搅拌1小时。在减压下浓缩反应混合物，得到呈白色固体状的粗产物(r)-1-(3-(二氟甲基)-2-甲基苯基)乙烷-1-胺(110mg，475μmol，98.2％产率，80.0％纯度)，其不经进一步纯化即可使用。lcms[m+1]
+
＝186.0。
[0310]
中间产物o
[0311][0312]
步骤a：向3-溴-2-甲基苯甲酸(100g，465mmol，1.00eq.)和n,o-二甲基羟胺盐酸盐(68.6g，512mmol，1.10eq.，hcl)在dmf(1000ml)中的溶液中添加1-[双(二甲氨基)亚甲基]-1h-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化六氟磷酸盐(195g，512mmol，1.10eq.)和n,n-二异丙基乙胺(180g，1.40mol，243ml，3.00eq.)。在25℃下将混合物搅拌2小时，然后倒入水(1000ml)中并搅拌15分钟。水相用乙酸乙酯(1000ml
×
3)萃取。合并的有机相用盐水(1000ml
×
5)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到呈黄色油状的3 3-溴-n-甲氧基-n,2-二甲基苯甲酰胺(120g，粗品)。lcms[m+1]
+
:258.0。
[0313]
步骤b：在0℃下向33-溴-n-甲氧基-n,2-二甲基苯甲酰胺(120g，465mmol，1.00eq.)在thf(100ml)中的溶液中添加甲基溴化镁(3.0m，180ml，1.16eq.)。在0-40℃之间将混合物搅拌3小时，然后将混合物冷却到0℃，逐滴添加盐酸(6.0n)(450ml)，并在40-45℃之间搅拌2小时。然后，将混合物冷却到25℃，并倒入饱和氯化铵溶液(9000ml)中。水相用乙酸乙酯(1500ml
×
3)萃取。合并的有机相用盐水(1000ml
×
3)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到呈黄色油状的1-(3-溴-2-甲基苯基)乙烷-1-酮(90.0g，422mmol，90.9％产率)。
[0314]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝7.70(dd,j＝1.2,8.0hz,1h),7.62(dd,j＝0.8,7.6hz,1h),7.19(t,j＝8.0hz,1h),2.56(s,3h),2.46(s,3h)。
[0315]
步骤c：向1-(3-溴-2-甲基苯基)乙烷-1-酮(88.0g，413mmol，1.00eq.)和(s)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(60.1g，496mmol，1.20eq.)在thf(100ml)中的溶液中添加乙醇钛(iv)(471g，2.07mol，428ml，5.00eq.)和二乙二醇二甲醚(55.4g，413mmol，59.1ml，1.00eq.)。在80℃下将混合物搅拌2小时，然后倒入水(300ml)中并搅拌15分钟。然后过滤混合物并真空浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝100/1到40/1)纯化，得到呈黄色油状的(s)-n-(1-(3-溴-2-甲基苯基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(110g，348mmol，84.2％产率)。
[0316]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝7.63(br t,j＝6.8hz,2h),7.28(br d,j＝7.6hz,1h),7.17(t,j＝8.0hz,2h),7.14-7.02(m,1h),2.67(s,3h),2.50(br d,j＝4.8hz,3h),2.42(s,3h),2.31(br d,j＝17.2hz,3h),1.31-1.26(m,9h),1.24-1.16(m,9h)。
[0317]
步骤d：在-78℃下向(s)-n-(1-(3-溴-2-甲基苯基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(109g，345mmol，1.00eq.)在thf(1100ml)中的溶液中添加三仲丁基硼氢化锂(1.0m，689ml，2.00eq.)。在-78℃下将混合物搅拌2小时，然后倒入氯化铵的饱和水溶液(1000ml)中并在25℃下搅拌60分钟。水相用乙酸乙酯(1000ml
×
3)萃取。合并的有机相用盐水(500ml
×
3)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝100/1到2/1)纯化，得到残余物。残余物进一步用石油醚洗涤，得到呈白色固体状的(s)-n-((r)-1-(3-溴-2-甲基苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(70.0g，220mmol，63.8％产率)。lcms[m+1]
+
:318.1。
[0318]
步骤e：在0℃下将(s)-n-((r)-1-(3-溴-2-甲基苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(71.0g，223mmol，1.00eq.)在hcl/二噁烷溶液(300ml)和meoh(300ml)中的溶液搅拌30分钟。真空浓缩混合物，得到呈白色固体状的(r)-1-(3-溴-2-甲基苯基)乙烷-1-胺(55.0g，粗品，hcl)。lcms[m+1]
+
:214.1。
[0319]
步骤f：向(r)-1-(3-溴-2-甲基苯基)乙烷-1-胺(55.0g，220mmol，1.00eq.，hcl)和boc2o(48.4g，222mmol，50.9ml，1.01eq.)在二氯甲烷(500ml)中的溶液中添加n,n-二异丙基乙胺(56.7g，439mmol，76.5ml，2.00eq.)。在0-25℃之间将混合物搅拌30分钟，然后真空浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝1/0到100/1)纯化，得到残余物。残余物进一步用石油醚洗涤，得到呈白色固体状的(r)-(1-(3-溴-2-甲基苯基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(51.0g，162mmol，73.9％产率)。lcms[m-55]
+
:258.0。
[0320]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝7.43(d,j＝8.0hz,1h),7.32(d,j＝8.0hz,1h),7.10-7.03(m,1h),4.93(br d,j＝6.4hz,2h),2.45(s,3h),1.41(br s,9h),1.33(d,j＝6.8hz,
3h)。
[0321]
步骤g：向(r)-(1-(3-溴-2-甲基苯基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(51.0g，162mmol，1.00eq.)在dmf(540ml)中的溶液中添加氰化锌(22.9g，195mmol，12.4ml，1.20eq.)和pd(pph3)4(18.8g，16.2mmol，0.10eq.)。在110℃下将混合物搅拌3小时，然后冷却到25℃并倒入水(500ml)中。水相用乙酸乙酯(100ml
×
3)萃取。合并的有机相用盐水(1000ml
×
3)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝100/1到5/1)纯化，得到呈白色固体状的(r)-(1-(3-氰基-2-甲基苯基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(37.0g，142.1mmol，87.6％产率)。lcms[m-55]
+
:205.0。
[0322]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝7.63(d,j＝7.6hz,1h),7.54(d,j＝7.2hz,1h),7.39-7.30(m,1h),4.93(br d,j＝6.8hz,1h),2.58(s,3h),1.40(br s,9h),1.34(d,j＝7.2hz,3h)。
[0323]
步骤h：向(r)-(1-(3-氰基-2-甲基苯基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(49.0g，188mmol，1.00eq.)在二氯甲烷(400ml)中的溶液中添加tfa(133ml)。在0℃下将混合物搅拌30分钟，然后倒入饱和碳酸氢钠溶液(200ml)中，再搅拌30分钟。水相用乙酸乙酯(1000ml
×
3)萃取。合并的有机相用盐水(200ml
×
3)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到呈黄色油状的(r)-3-(1-氨基乙基)-2-甲基苄腈(26.0g，162mmol，86.2％产率)。lcms[m-16]
+
:144.1。
[0324]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝8.36(br s,2h),7.86(d,j＝8.0hz,1h),7.80(dd,j＝0.8,7.6hz,1h),7.51(t,j＝8.0hz,1h),4.68(q,j＝6.8hz,1h),2.55(s,3h),1.48(d,j＝6.8hz,3h)。
[0325]
sfc条件：柱：chiralpak ic-3 50
×
4.6mmi.d.，3μm流动相：co2为a相，meoh(0.05％dea)为b相；梯度洗脱：meoh(0.05％dea)在co2中为5％到40％；流速：3ml/min；检测器：pda；柱温：35℃；背压：100bar。
[0326]
中间产物p
[0327][0328]
向(r)-3-(1-氨基乙基)-2-甲基苄腈(16.0g，99.9mmol，1.00eq.)和1,7-二氯-4-甲基吡啶并[3,4-d]哒嗪(21.4g，99.9mmol，1.00eq.)在dmso(130ml)中的溶液中添加氟化铯(22.8g，150mmol，5.52ml，1.50eq.)，并在130℃下将混合物搅拌2小时。然后将混合物冷却到25℃，用水(200ml)稀释，并用乙酸乙酯(200ml
×
3)萃取。合并的有机相用盐水(100ml
×
3)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过制备型hplc[柱：kromasil eternity xt 250
×
80mm
×
10um；流动相：a相：水(0.1％tfa)，b相：乙腈；b％：25％-55％]纯化。合并到合并的部分，并使用碳酸氢钠水溶液将ph调整到ph＝8。悬浮液用乙酸乙酯(1000ml
×
3)萃取，合并的有机相用盐水(100ml
×
3)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到呈黄色固体状的(r)-3-(1-((7-氯-4-甲基吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-基)氨基)
乙基)-2-甲基苄腈(14.5g，42.9mmol，43.0％产率)。
[0329]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝9.19(d,j＝0.4hz,1h),7.74(s,1h),7.63(d,j＝8.0hz,1h),7.50(dd,j＝1.2,7.6hz,1h),7.23(t,j＝7.6hz,1h),5.72(quin,j＝6.8hz,1h),5.40(br d,j＝6.0hz,1h),2.86(s,3h),2.69(s,3h),1.63(s,3h)。
[0330]
中间产物q
[0331][0332]
向(r)-3-(1-氨基乙基)-2-甲基苄腈(5.32g，19.4mmol，1.00eq.，tfa)和6-溴-4-氯-1-甲基酞嗪(5.00g，19.4mmol，1.00eq.)在dmso(30.0ml)中的溶液中添加氟化铯(5.90g，38.8mmol，1.43ml，2.00eq.)和n,n-二异丙基乙胺(5.02g，38.8mmol，6.76ml，2.00eq.)，并在130℃下将混合物搅拌2小时。然后将混合物冷却到25℃，用水(10.0ml)稀释，并用乙酸乙酯(100ml
×
3)萃取水相。合并的有机相用盐水(100ml
×
3)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝20/1到2/1)纯化，得到呈黄色固体状的(r)-3-(1-((7-溴-4-甲基酞嗪-1-基)氨基)乙基)-2-甲基苄腈(5.20g，13.6mmol，70.2％产率)。lcms[m+1]
+
:381.1。
[0333]
中间产物r
[0334][0335]
步骤a：将(r)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(5.12g，42.2mmol，1.00eq.)、1-(3-溴-2-甲基苯基)乙烷-1-酮(9.00g，42.2mmol，1.00eq.)、异丙醇钛(iv)(60.0g，211mmol，62.3ml，5.00eq.)在thf(90.0ml)中的混合物脱气并用氮气吹扫3次，并在80℃下搅拌12小时。将混合物冷却到25℃，通过添加水(100ml)淬灭，过滤，并将滤液在乙酸乙酯(300ml)和水(300ml)之间分配。有机相用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝1/0到5/1)纯化，得到呈黄色固体状的(r)-n-(1-(3-溴-2-甲基苯基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(7.23g，22.8mmol，54.1％产率)。lcms[m+3]
+
:318.0。
[0336]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝7.67-7.58(m,2h),7.28(br d,j＝7.6hz,1h),7.17(t,j
＝8.0hz,2h),7.14-7.01(m,1h),2.67(s,3h),2.50(br d,j＝4.0hz,3h),2.42(s,3h),2.31(br d,j＝17.2hz,3h),1.28(s,9h),1.21(br d,j＝11.2hz,9h)。e/z异构体的比率约为1/1)。
[0337]
步骤b：在0℃下向(r)-n-(1-(3-溴-2-甲基苯基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(400mg，1.26mmol，1.00eq.)在thf(5.00ml)中的溶液中逐份添加硼氢化钠(239mg，6.32mmol，5.00eq.)，然后在25℃下将反应物搅拌1小时。将反应混合物倒入水(30.0ml)中并搅拌5分钟。所得水相用乙酸乙酯(150ml
×
3)萃取，合并的有机相用盐水(150ml
×
3)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝10/1到1/1)纯化，得到呈棕色油状的(r)-n-((r)-1-(3-溴-2-甲基苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(200mg，628μmol，49.7％产率)。
[0338]
步骤c：在20℃下向(r)-n-((r)-1-(3-溴-2-甲基苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(250mg，786μmol，1.00eq.)、甲烷亚磺酸钠(176mg，1.73mmol，2.20eq.)、碳酸钾(326mg，2.36mmol，3.00eq.)和l-脯氨酸(18.1mg，157μmol，0.20eq.)在二甲亚砜(3.00ml)中的混合物中添加碘化铜(i)(15.0mg，78.6μmol，0.10eq.)，并在氮气气氛下在130℃下将混合物搅拌3小时。向混合物中添加水(15.0ml)，并用乙酸乙酯(20.0ml
×
3)萃取混合物。合并的有机相用盐水(30.0ml
×
3)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过制备型tlc(硅胶板，石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化，得到呈黄色油状的(r)-2-甲基-n-((r)-1-(2-甲基-3-(甲磺酰基)苯基)乙基)丙烷-2-亚磺酰胺(120mg，378μmol，48.1％产率)。lcms[m+1]
+
:318.1。
[0339]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝7.85(dd,j＝8.0,1.2hz,1h),7.78(d,j＝7.6hz,1h),7.46(t,j＝8.0hz,1h),5.42-5.50(m,1h),4.71-4.80(m,1h),3.22(s,3h),2.65(s,3h),1.46(d,j＝6.8hz,3h),1.09(s,9h)。
[0340]
步骤d：在20℃下将(r)-2-甲基-n-((r)-1-(2-甲基-3-(甲磺酰基)苯基)乙基)丙烷-2-亚磺酰胺(120mg，378μmol，1.00eq.)在盐酸(在二噁烷中为4.0m，2.00ml，21.2eq.)中的混合物搅拌1小时。在减压下浓缩混合物，得到呈白色固体状的(r)-1-(2-甲基-3-(甲磺酰基)苯基)乙烷-1-胺(91.0mg，粗品，hcl)。
[0341]
中间产物s
[0342][0343]
步骤a：向甲胺(100g，1.48mol，3.01eq.hcl盐)在thf(1.00l)中的溶液中添加n,n-二异丙基乙胺(237g，1.84mol，3.73eq.)、2-溴-6-氟苯甲醛(100g，493mmol，1.00eq.)、乙酸(9.00g，150mmol，0.30eq.)和氰基硼氢化钠(62.0g，987mmol，2.00eq.)。在25℃下将反应混合物搅拌3小时，然后用水(500ml)稀释并用乙酸乙酯(1.00l
×
2)萃取。合并的有机相用盐水(500ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到呈灰白色固体状的1-(2-溴-6-氟苯
基)-n-甲基甲胺(120g，484mmol，88％纯度)，其直接用于下一步骤。lcms[m+1]
+
:218.0。
[0344]
步骤b：向1-(2-溴-6-氟苯基)-n-甲基甲胺(120g，484mmol，88％纯度，1.00eq.)在thf(1.00l)中的溶液中添加二碳酸二叔丁酯(211g，968mmol，2.00eq.)，并在25℃下将混合物搅拌2小时。然后真空浓缩混合物，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝1/0到100/1)纯化，得到呈棕色油状的n-[(2-溴-6-氟基-苯基)甲基]-n-甲基-氨基甲酸叔丁酯(70.0g，220mmol)。lcms[m-55]+:261.9
[0345]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝7.49(d,j＝7.6hz,1h),7.33-7.26(m,2h),4.57(s,2h),2.64(s,3h),1.38(s,9h)。
[0346]
步骤c：向(2-溴-6-氟苯甲基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(60.0g，189mmol，1.00eq.)和4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧硼杂环烷)(60.0g，236mmol，1.25eq.)在二噁烷(600ml)中的溶液中添加pd(dppf)cl2·
ch2cl2(15.0g，18.4mmol，0.10eq.)和乙酸钾(72.0g，734mmol，3.89eq.)。用氮气将反应混合物脱气(3次)，并在氮气气氛下在100℃下搅拌12小时。将混合物冷却到25℃并真空浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝1/0到100/1)纯化，得到呈黄色油状的(2-氟-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊-2-基)苯甲基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(80.0g，160mmol，73％纯度)。lcms[m-55]
+
:266.1。
[0347]
步骤d：在氮气气氛下向(2-氟-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊-2-基)苯甲基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(80.0g，160mmol，73％纯度，1.00eq.)和(r)-n-[(1r)-1-(5-溴-2-噻吩基)乙基]-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰胺(56.0g，180mmol，1.13eq.)在二噁烷(500ml)和水(100ml)中的溶液中添加碳酸铯(150g，460mmol，2.88eq.)和pd(pph3)4(20.0g，17.3mmol，0.10eq.)，并在氮气气氛下在100℃下将混合物搅拌3小时。混合物用水(500ml)稀释，用乙酸乙酯(1.00l
×
2)萃取，有机相用盐水(200ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝0/1到5/1)纯化，得到呈黄色油状的(2-(5-((r)-1-(((r)-叔丁基亚磺酰基)氨基)乙基)噻吩-2-基)-6-氟苯甲基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(84.0g，152mmol，85％纯度)。lcms[m-100]
+
:369.1。
[0348]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝7.44-7.36(m,1h),7.27-7.17(m,2h),7.08(br d,j＝2.8hz,1h),6.96(d,j＝3.6hz,1h),5.88(br d,j＝6.8hz,1h),4.65(quin,j＝6.4hz,1h),4.56(s,2h),2.48(s,3h),1.55(br d,j＝6.8hz,3h),1.33(br s,9h),1.13(s,9h)。
[0349]
步骤e：向(2-(5-((r)-1-(((r)-叔丁基亚磺酰基)氨基)乙基)噻吩-2-基)-6-氟苯甲基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(80.0g，145mmol，85％纯度，1.00eq.)在thf(240ml)和水(48.0ml)中的溶液中添加碘(6.80g，26.8mmol，0.19eq.)。将反应物加热到50℃2小时，然后用水(500ml)稀释并用乙酸乙酯(500ml
×
2)萃取。有机相用盐水(200ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，二氯甲烷/甲醇＝300/1到10/1)纯化，得到呈黄色油状的(r)-(2-(5-(1-氨基乙基)噻吩-2-基)-6-氟苯甲基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(40.0g，110mmol)。lcms[m-16]
+
:348.1。
[0350]
中间产物t
[0351][0352]
步骤a：在20℃下向1-(苯甲氧基)-3-溴-5-(三氟甲基)苯(3.00g，9.06mmol，1.00eq.)和pd(dppf)cl2(663mg，906μmol，0.10eq.)在二噁烷(50.0ml)中的混合物中添加三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡(5.00g，13.8mmol，4.67ml，1.53eq.)，并在氮气气氛下在80℃下将混合物搅拌12小时。然后向此混合物添加饱和氟化钾溶液(100ml)，并在20℃下将溶液搅拌1小时。混合物用乙酸乙酯(100ml
×
3)萃取，合并的有机相用盐水(100ml
×
3)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到呈黄色油状的粗品1-(苯甲氧基)-3-(1-乙氧基乙烯基)-5-(三氟甲基)苯(2.90g，粗品)。此粗油不经进一步纯化即用于下一步骤中。
[0353]
步骤b：向1-(苯甲氧基)-3-(1-乙氧基乙烯基)-5-(三氟甲基)苯(2.90g，9.00mmol，粗品，1.00eq.)在四氢呋喃(30.0ml)中的溶液中添加盐酸(在thf中为3.0m，10.0ml，3.33eq.)，并在20℃下将溶液搅拌1小时。然后，混合物用水(60.0ml)稀释，用乙酸乙酯(20.0ml
×
3)萃取，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝50/1到10/1)纯化，得到呈黄色油状的1-(3-(苯甲氧基)-5-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-酮(2.60g，8.84mmol，98.2％产率)。
[0354]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.79(s,1h),7.74(s,1h),7.45-7.39(m,6h),5.16(s,2h),2.63(s,3h)。
[0355]
步骤c：在氮气气氛下向1-(3-(苯甲氧基)-5-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-酮(2.60g，8.84mmol，1.00eq.)和(r)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.39g，11.5mmol，1.30eq.)在四氢呋喃(40.0ml)中的溶液中添加乙醇钛(iv)(5.02g，17.7mmol，5.22ml，2.00eq.)，并在70℃下将溶液搅拌12小时。然后，在减压下浓缩混合物，并通过柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝20/1到10/1)纯化残余物，得到呈黄色油状的(r)-n-(1-(3-(苯甲氧基)-5-(三氟甲基)苯基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(2.20g，5.03mmol，57.0％产率)。
[0356]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.45(d,j＝10.0hz,2h),7.24-7.13(m,6h),4.94(s,2h),2.56(s,3h),1.10(s,9h)。
[0357]
步骤d：在0℃下向(r)-n-(1-(3-(苯甲氧基)-5-(三氟甲基)苯基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(2.20g，5.54mmol，1.00eq.)在四氢呋喃(30.0ml)中的混合物中添加硼氢化钠(270mg，7.14mmol，1.29eq.)，并在20℃下将混合物搅拌3小时。向混合物中添加饱和氯化铵水溶液(80.0ml)，并在20℃下将所得混合物搅拌30分钟。然后，混合物用乙酸乙酯(80.0ml
×
3)萃取，合并的有机相用盐水(80.0ml
×
3)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过硅胶柱色谱(石油醚/乙酸乙酯＝50/1到3/1)纯化，得到呈黄色油状的(r)-n-((r)-1-(3-(苯甲氧基)-5-(三氟甲基)苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.20g，3.00mmol，54.3％产率)。
[0358]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.53-7.32(m,5h),7.23-7.12(m,3h),5.12(s,2h),
4.62-4.53(m,1h),3.43(d,j＝2.8hz,1h),1.53(d,j＝6.4hz,3h),1.25(s,9h)。
[0359]
步骤e：向(r)-n-((r)-1-(3-(苯甲氧基)-5-(三氟甲基)苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.20g，3.00mmol，1.00eq.)的溶液中添加盐酸(在二噁烷中为4.0m，751μl，1.00eq.)，并在20℃下将溶液搅拌20分钟。在减压下浓缩混合物以除去，得到呈白色固体状的(r)-1-(3-(苯甲氧基)-5-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-胺(1.20g，粗品，hcl)，其不经进一步纯化即可使用。
[0360]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝8.82(s,2h),7.44-7.31(m,8h),5.09(s,2h),4.42(s,1h),1.43(s,3h)。
[0361]
中间产物u
[0362][0363]
步骤a：向3-乙酰基-5-氟苯甲腈(2.00g，12.3mmol，1.00eq.)在四氢呋喃(20.0ml)中的溶液中添加乙醇钛(5.59g，24.5mmol，5.08ml，2.00eq.)和(r)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.93g，15.9mmol，1.30eq.)。将混合物脱气并用氮气吹扫3次，然后在氮气气氛下在70℃下搅拌12小时。混合物用水(20.0ml)稀释并过滤。滤液用乙酸乙酯(30.0ml
×
3)萃取，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝50/1到1/1)纯化，得到呈黄色油状的(r,e)-n-(1-(3-氰基-5-氟苯基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.01g，3.68mmol，30.0％产率，97.5％纯度)。lcms[m+1]
+
:267.1。
[0364]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.93(s,1h),7.82-7.79(m,1h),7.45-7.52(m,1h),2.79(s,3h),1.35(s,9h)。
[0365]
步骤b：在0℃下向(r,e)-n-(1-(3-氰基-5-氟苯基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(900mg，3.38mmol，1.00eq.)在四氢呋喃(10.0ml)中的溶液中添加硼氢化钠(383mg，10.1mmol，3.00eq.)。然后，将混合物升温到20℃并搅拌2小时。混合物在25℃下用饱和氯化铵水溶液(20.0ml)淬灭，用乙酸乙酯(20.0ml
×
3)萃取，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝20/1到0/1)纯化，得到呈黄色油状的(r)-n-((r)-1-(3-氰基-5-氟苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(711mg，2.52mmol，74.5％产率，95.3％纯度)。lcms[m+1]
+
:269.1。
[0366]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.46(t,j＝1.2hz,1h),7.46-7.33(m,1h),7.31-7.29(m,1h),4.60-4.55(m,1h),3.47(d,j＝3.6hz,1h),1.54(d,j＝6.8hz,3h),1.25(s,9h)。
[0367]
步骤c：向(r)-n-((r)-1-(3-氰基-5-氟苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(711mg，2.65mmol，1.00eq.)在二噁烷(3.00ml)中的溶液中添加乙酸乙酯中的盐酸(4.0m，
9.94ml，15.0eq.)。在20℃下将混合物搅拌2小时。混合物用饱和碳酸氢钠溶液(10.0ml)中和，用乙酸乙酯(10.0ml
×
3)萃取，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到呈黄色油状的(r)-3-(1-氨基乙基)-5-氟苯甲腈(330mg，粗品)。
[0368]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝7.72-7.71(m,1h),7.67-7.66(m,1h),7.65-7.62(m,1h),4.59(q,j＝6.8hz,1h),1.65(d,j＝6.8hz,3h)。
[0369]
中间产物v
[0370][0371]
步骤a：向1-溴-2-甲基-3-(三氟甲基)苯(10.0g，41.8mmol，1.00eq.)添加冰冷浓硫酸(100ml)，然后在0℃下缓慢地添加硝酸钾(12.7g，125mmol，3.00eq.)，在100℃下将混合物搅拌1小时。然后将混合物冷却到25℃，倒入冰水(500ml)中，并用乙酸乙酯(300ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(400ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝1/0到1/1)纯化，得到呈白色油状的1-溴-2-甲基-5-硝基-3-(三氟甲基)苯(5.20g，16.9mmol，40.4％产率)。
[0372]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝8.72(d,j＝2.0hz,1h),8.40(d,j＝2.4hz,1h),2.58-2.62(m,3h)。
[0373]
步骤b：将1-溴-2-甲基-5-硝基-3-(三氟甲基)苯(5.20g，18.3mmol，1.00eq.)、三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡(8.60g，23.8mmol，8.03ml，1.30eq.)和pd(pph3)2cl2(385mg，549μmol，0.03eq.)在二噁烷(60.0ml)中的混合物脱气并用氮气吹扫3次，然后在氮气气氛下在80℃下将混合物搅拌10小时。反应混合物用饱和氟化钾溶液(300ml)淬灭并在25℃下搅拌2小时。然后，悬浮液用乙酸乙酯(180ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(200ml
×
3)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到呈黑色油状的1-(1-乙氧基乙烯基)-2-甲基-5-硝基-3-(三氟甲基)苯(6.00g，粗品)。
[0374]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝8.47(d,j＝2.0hz,1h),8.32(d,j＝2.0hz,1h),4.58(d,j＝2.8hz,1h),4.32(d,j＝2.4hz,1h),4.00-3.95(m,2h),2.56(d,j＝1.2hz,3h),1.37(t,j＝7.0hz,3h)。
[0375]
步骤c：在氮气气氛下在20℃下将1-(1-乙氧基乙烯基)-2-甲基-5-硝基-3-(三氟甲基)苯(6.00g，21.8mmol，1.00eq.)和盐酸(3.0m，20.7ml，2.85eq.)在thf(80.0ml)中的混合物搅拌1小时。通过添加水(100ml)使反应混合物淬灭，然后用乙酸乙酯(60.0ml
×
3)萃
取。合并的有机层用盐水(70.0ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝1/0到10/1)纯化，得到呈黄色油状的1-(2-甲基-5-硝基-3-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-酮(4.10g，16.5mmol，76.0％产率)。
[0376]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝8.67(s,1h),8.57(s,1h),2.66(s,3h),2.60(s,3h)。
[0377]
步骤d：向1-(2-甲基-5-硝基-3-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-酮(2.00g，8.09mmol，1.00eq.)和(r)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.27g，10.5mmol，1.30eq.)在thf(20.0ml)中的溶液中添加ti(oet)4(3.69g，16.1mmol，3.36ml，2.00eq.)，在氮气气氛下在70℃下将混合物搅拌12小时。反应混合物用水(70.0ml)和乙酸乙酯(60.0ml)稀释，过滤，并用乙酸乙酯(50.0ml
×
3)萃取滤液。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝1/0到5/1)纯化，得到呈黄色油状的(r,e)-2-甲基-n-(1-(2-甲基-5-硝基-3-(三氟甲基)苯基)亚乙基)丙烷-2-亚磺酰胺(2.00g，5.71mmol，70.5％产率)。
[0378]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝8.43(s,1h),8.30(s,1h),2.75(s,3h),2.58(s,3h),1.30(m,9h)。
[0379]
步骤e：在0℃下向(r,e)-2-甲基-n-(1-(2-甲基-5-硝基-3-(三氟甲基)苯基)亚乙基)丙烷-2-亚磺酰胺(2.00g，5.71mmol，1.00eq.)在thf(23.0ml)中的溶液中添加硼氢化钠(647mg，17.1mmol，3.00eq.)。然后在20℃下将混合物搅拌2小时，并添加饱和碳酸氢钠，然后用水(100ml)稀释。混合物用乙酸乙酯(60.0ml
×
3)萃取，合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝1/0到0/1)纯化，得到呈黑棕色油状的(r)-2-甲基-n-((r)-1-(2-甲基-5-硝基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)丙烷-2-亚磺酰胺(700mg，1.75mmol，30.6％产率)。lcms[m+1]
+
:353.0。
[0380]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝8.67(d,j＝2.4hz,1h),8.31(d,j＝2.0hz,1h),6.09(d,j＝7.2hz,1h),4.83-4.79(m,1h),2.54(s,3h),1.43(d,j＝6.8hz,1h),1.11(m,9h)。
[0381]
步骤f：将(r)-2-甲基-n-((r)-1-(2-甲基-5-硝基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)丙烷-2-亚磺酰胺(700mg，1.99mmol，1.00eq.)和碘(151mg，595μmol，120μl，0.30eq.)在四氢呋喃(8.00ml)和水(2.00ml)中的混合物脱气并用氮气吹扫3次，然后在氮气气氛下在50℃下将混合物搅拌2小时。反应物用饱和碳酸氢钠(50.0ml)淬灭，然后用乙酸乙酯(30.0ml
×
3)萃取。合并的有机相用盐水(20.0ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝10/1到0/1)纯化，得到呈黄色固体状的(r)-1-(2-甲基-5-硝基-3-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-胺(250mg，1.01mmol，50.7％产率)。
[0382]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝8.76(d,j＝2.4hz,1h),8.30(d,j＝2.4hz,1h),4.54-4.49(m,1h),2.57(s,3h),1.46(d,j＝6.4hz,1h)。
[0383]
中间产物w
[0384][0385]
步骤a：向1-(3-氯-2-甲基苯基)乙烷-1-酮(1.50g，8.90mmol，1.00eq.)在四氢呋喃(30.0ml)中的溶液中添加乙醇钛(6.09g，26.7mmol，5.53ml，3.00eq.)和(r)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.40g，11.6mmol，1.30eq.)。在70℃下将混合物搅拌10小时。反应混合物在20℃下通过碳酸氢钠(50.0ml)淬灭，然后搅拌10分钟。过滤固体，并用乙酸乙酯(20.0ml
×
3)萃取滤液。合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到呈黄色油状的(r,e)-n-(1-(3-氯-2-甲基苯基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(2.40g，粗品)。lcms[m+1]
+
:272.0。
[0386]
步骤b：在-40℃下向(r,e)-n-(1-(3-氯-2-甲基苯基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(2.30g，8.46mmol，1.00eq.)在四氢呋喃(30.0ml)中的溶液中添加硼氢化钠(850mg，22.5mmol，2.66eq.)，在-40℃下将混合物搅拌2小时。反应混合物在20℃下用饱和氯化铵溶液(50.0ml)淬灭，然后搅拌10分钟。滤出固体，并用乙酸乙酯(20.0ml
×
3)萃取滤液。合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝1/0到1/1)纯化，得到呈无色油状的(r)-n-((r)-1-(3-氯-2-甲基苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.50g，5.48mmol，64.7％产率)。lcms[m+1]
+
:274.1。
[0387]
步骤c：在0℃下向(r)-n-((r)-1-(3-氯-2-甲基苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.10g，4.02mmol，1.00eq.)在乙酸乙酯(20.0ml)中的溶液中添加乙酸乙酯中的盐酸盐(4.0m，30.0ml)，在20℃下将混合物搅拌2小时。在减压下浓缩反应混合物，得到呈白色固体状的(r)-1-(3-氯-2-甲基苯基)乙烷-1-胺(700mg，粗品)。lcms[m+1]
+
:170.1。
[0388]
中间产物x
[0389][0390]
步骤a：向1-(3-甲基-5-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-酮(500mg，2.47mmol，1.00eq.)
和(r)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(689mg，5.69mmol，2.30eq.)在thf(7.00ml)中的溶液中添加ti(oet)4(1.30g，5.69mmol，1.18ml，2.30eq.)，在氮气气氛下在70℃下将混合物搅拌12小时。反应混合物用水(30.0ml)和乙酸乙酯(20.0ml)稀释，过滤并用乙酸乙酯(3
×
20.0ml)萃取滤液。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝10/1)纯化，得到呈黄色油状的(r,e)-2-甲基-n-(1-(3-甲基-5-(三氟甲基)苯基)亚乙基)丙烷-2-亚磺酰胺(750mg，2.46mmol，99.3％产率)。lcms[m+1]
+
:306.1。
[0391]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝7.99(s,1h),7.95(s,1h),7.75(s,1h),5.75(s,1h),2.76(s,3h),2.46(s,3h),1.22(s,9h)。
[0392]
步骤b：在-40℃下向(r,e)-2-甲基-n-(1-(3-甲基-5-(三氟甲基)苯基)亚乙基)丙烷-2-亚磺酰胺(650mg，2.13mmol，1.00eq.)在thf(15.0ml)中的溶液中添加硼氢化钠(253mg，6.69mmol，3.14eq.)。在-40℃下将混合物搅拌2小时。向混合物添加饱和碳酸氢钠溶液，并用水(50.0ml)稀释。混合物用乙酸乙酯(3
×
50.0ml)萃取，合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝5/1到2/1)纯化，得到呈淡黄色固体状的(r)-2-甲基-n-((r)-1-(3-甲基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)丙烷-2-亚磺酰胺(320mg，1.04mmol，48.9％产率)。lcms[m+1]
+
:308.1。
[0393]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝7.52(s,1h),7.50(s,1h),7.39(s,1h),4.56-4.51(m,1h),2.44(s,1h),1.54-1.53(d,3h),1.25(s,9h)。
[0394]
步骤c：(r)-2-甲基-n-((r)-1-(3-甲基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)丙烷-2-亚磺酰胺(305mg，992μmol，1.00eq.)在盐酸(在乙酸乙酯中为4.0m，10.0ml)中的溶液，在25℃下将所得混合物搅拌1小时。在减压下浓缩，得到呈淡黄色固体状的(r)-1-(3-甲基-5-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-胺(200mg，粗品)。粗品不经进一步纯化直接用于下一步骤中。lcms[m+1]
+
:204.0。
[0395]
中间产物y
[0396][0397]
步骤a：向1-(4-氨基-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)乙烷-1-酮(35.6g，175mmol，1.00eq.)和(r)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(25.4g，209mmol，1.20eq.)在thf(350ml)中的溶液中添加异丙醇钛(iv)(149g，524mmol，155ml，3.00eq.)和1,2-二甲氧基乙烷(15.7g，
175mmol，18.1ml，1.00eq.)。在80℃下将反应混合物搅拌12小时，之后添加水(50.0ml)，得到悬浮液。过滤悬浮液并在减压下浓缩滤液，得到残余物，残余物通过硅胶色谱(石油醚/乙酸乙酯＝10/1到1/1)纯化，得到呈棕色油状的(r)-n-(1-(4-氨基-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(44.0g，143mmol，82.0％产率)。
[0398]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.45(d,j＝2.0hz,1h),6.97(d,j＝2.0hz,1h),4.56(br s,2h),2.82(s,3h),1.33(s,9h)。
[0399]
步骤b：在0℃下向(r)-n-(1-(4-氨基-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(44.0g，143mmol，1.00eq.)在thf(400ml)中的溶液中逐份添加硼氢化钠(16.3g，430mmol，3.00eq.)，然后在0℃下将反应物搅拌1小时。将混合物缓慢倒入水(200ml)中并搅拌5分钟，然后用乙酸乙酯(300ml
×
3)萃取。合并的有机相用盐水(200ml
×
3)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝10/1到1/1)纯化，得到呈棕色油状的(r)-n-((r)-1-(4-氨基-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(24.0g，76.2mmol，53.2％产率，98.2％纯度)。
[0400]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝6.63(d,j＝2.0hz,1h),6.56(d,j＝2.0hz,1h),5.06(d,j＝6.0hz,1h),4.69(s,2h),4.46-4.39(m,1h),1.45(d,j＝6.8hz,3h),1.27(s,9h)。
[0401]
步骤c：在25℃下将(r)-n-((r)-1-(4-氨基-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(23.5g，76.0mmol，1.00eq)在hcl/二噁烷(200ml)中的溶液搅拌2小时。过滤混合物，并用乙酸乙酯(100ml)洗涤滤饼，然后收集滤饼并加以真空干燥，得到呈白色固体状的(r)-2-(1-氨基乙基)-6-(三氟甲基)吡啶-4-胺(盐酸盐)。
[0402]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝8.43(br s,3h),6.93(br d,j＝2.0hz,2h),6.74(d,j＝1.6hz,1h),4.34-4.27(m,1h),1.45(d,j＝6.8hz,3h)。
[0403]
中间产物z
[0404][0405]
步骤a：向1-(2-甲基吡啶-3-基)乙烷-1-酮(800mg，5.92mmol，1.00eq.)和(s)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(933mg，7.69mmol，1.30eq.)在四氢呋喃(8.00ml)中的溶液中添加乙醇钛(iv)(2.70g，11.8mmol，2.45ml，2.00eq.)和1,2-二甲氧基乙烷(533mg，5.92mmol，615μl，1.00eq.)，并在70℃下将混合物搅拌16小时。冷却到25℃后，在减压下浓缩混合物，并通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝5/1到1/1)来纯化，得到呈黄色油状的(s)-2-甲基-n-(1-(2-甲基吡啶-3-基)亚乙基)丙烷-2-亚磺酰胺(1.25g，5.24mmol，88.6％产率)。lcms[m+1]
+
:239.2。
[0406]
步骤b：在30分钟内在-78℃下向(s)-2-甲基-n-(1-(2-甲基吡啶-3-基)亚乙基)丙
烷-2-亚磺酰胺(1.25g，5.24mmol，1.00eq.)在四氢呋喃(7.00ml)中的溶液中逐滴添加三仲丁基硼氢化锂(在thf中为1.0m，7.87ml，1.50eq.)，然后在-78℃下再搅拌1小时。然后反应混合物在0℃下通过添加饱和氯化铵溶液(在水中，30.0ml)淬灭，并在25℃下再搅拌1小时。然后，溶液用乙酸乙酯(50.0ml
×
3)萃取，合并的有机层用盐水(30.0ml
×
2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝5/1到0/1)纯化两次，得到呈白色固体状的(s)-2-甲基-n-((r)-1-(2-甲基吡啶-3-基)乙基)丙烷-2-亚磺酰胺(600mg，2.50mmol，47.6％产率)。lcms[m+1]
+
:432.3。
[0407]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝8.36(dd,j＝1.2,3.6hz,1h),7.64(dd,j＝1.6,8.0hz,1h),7.12(dd,j＝4.8,7.6hz,1h),4.81-4.70(m,1h),2.58(s,3h),1.47(d,j＝6.8hz,3h),1.14(s,9h)。
[0408]
sfc条件：柱：chiralpak ad-3 50
×
4.6mmi.d.，3um流动相：a相：co2，及b相：meoh(0.05％二乙胺)；梯度洗脱：meoh(0.05％二乙胺)在co2中为5％到40％；流速：3ml/min；检测器：pda；柱温：35℃；背压：100bar。
[0409]
步骤c：在氮气气氛下在0℃下将(s)-2-甲基-n-((r)-1-(2-甲基吡啶-3-基)乙基)丙烷-2-亚磺酰胺(600mg，2.50mmol，1.00eq.)在hcl
·
二噁烷(3.00ml)中的混合物搅拌30分钟。此后，形成白色沉淀，并过滤悬浮液。收集滤饼并加以真空干燥，残余物进一步通过制备型hplc[柱：waters xbridge 150
×
25mm
×
5um；流动相：a相：水(0.05％氢氧化铵v/v)，b相：mecn；b％：3％-33％]纯化，得到呈无色油状的(r)-1-(2-甲基吡啶-3-基)乙烷-1-胺(370mg，2.23mmol，89.2％产率，82％纯度)。lcms[m-16]
+
:120.3。
[0410]
中间产物aa
[0411][0412]
步骤a：向1-溴-3-(二氟甲基)-2-氟苯(市售，4.50g，20.0mmol，1.00eq.)在1,4-二噁烷(50.0ml)中的溶液中添加pdcl2(pph3)2(1.40g，2.00mmol，0.10eq.)和三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡(21.7g，60.0mmol，20.3ml，3.00eq.)，将混合物脱气并用氮气吹扫(3次)，然后在氮气气氛下在100℃下搅拌3小时。将混合物冷却到室温，在减压下浓缩，并向残余物添加氟化钾水溶液(2.0m，100ml)。混合物用乙酸乙酯(100ml
×
3)萃取，用无水硫酸钠干燥并过滤。在减压下浓缩滤液，得到呈棕色油状的1-(二氟甲基)-3-(1-乙氧基乙烯基)-2-氟苯(7.50g，粗品)，其不经进一步纯化即可使用。
[0413]
步骤b：向1-(二氟甲基)-3-(1-乙氧基乙烯基)-2-氟苯(7.50g，34.7mmol，
1.00eq.)在四氢呋喃(50.0ml)中的溶液中添加盐酸水溶液(30.0ml，10％纯度)，并在25℃下将混合物搅拌1小时。此后，用碳酸氢钠水溶液将混合物的ph调整到约6-8的ph值，并用乙酸乙酯(100ml
×
3)萃取混合物。合并的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝1/0到5/1)纯化，得到呈无色油状的1-(3-(二氟甲基)-2-氟苯基)乙烷-1-酮(6.01g，31.3mmol，90.2％产率，98.0％纯度)。lcms[m+1]
+
:189.1。
[0414]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝8.02-7.97(m,1h),7.80-7.76(m,1h),7.34(t,j＝8.0hz,1h),6.94(t,j＝14.8hz,1h),2.66(d,j＝5.2hz,3h)。
[0415]
步骤c：将(s)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(2.32g，19.1mmol，1.20eq.)、1-(3-(二氟甲基)-2-氟苯基)乙烷-1-酮(3.00g，16.0mmol，1.00eq.)和乙醇钛(iv)(7.27g，31.9mmol，6.60ml，2.00eq.)在2-甲基四氢呋喃(30.0ml)中的混合物脱气并用氮气吹扫(3次)，然后在氮气气氛下在75℃下搅拌4小时。然后冷却反应混合物，用水(50.0ml)稀释，用乙酸乙酯(50.0ml
×
3)萃取，合并的有机层用盐水(100ml
×
2)洗涤，用无水硫酸钠干燥并过滤。在减压下浓缩滤液，并通过柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝20/1到1/1)纯化残余物，得到(s)-n-(1-(3-(二氟甲基)-2-氟苯基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.80g，6.18mmol，38.8％产率)。lcms[m+1]
+
:292.2.
[0416]
步骤d：在氮气气氛下在-78℃下向(s)-n-(1-(3-(二氟甲基)-2-氟苯基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.80g，6.18mmol，1.00eq.)在2-甲基四氢呋喃(30.0ml)中的混合物中添加三仲丁基硼氢化锂(3.52g，18.5mmol，4.10ml，3.00eq.)，然后在氮气气氛下在-78℃下将混合物搅拌3小时。此后，添加额外的三仲丁基硼氢化锂(1.76g，9.30mmol，2.00ml，1.50eq.)，将溶液脱气并用氮气吹扫(3次)，并在氮气气氛下在-78℃下搅拌9小时。将混合物冷却到室温，用水(30.0ml)稀释，并用乙酸乙酯(30.0ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(30.0ml
×
2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝20/1到1/1)纯化，得到呈无色油状的(s)-n-((r)-1-(3-(二氟甲基)-2-氟苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.30g，4.34mmol，70.3％产率，98％纯度)。lcms[m+1]
+
:294.2。
[0417]
步骤e：向(s)-n-((r)-1-(3-(二氟甲基)-2-氟苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.29g，4.43mmol，1.00eq.)的溶液中添加盐酸(在1,4-二噁烷中为4.00m，15.0ml，14.0eq.)，并在25℃下将混合物搅拌30分钟。然后，混合物用水(30.0ml)稀释，用乙酸乙酯(30.0ml
×
3)萃取，合并的有机层用盐水(30.0ml
×
2)洗涤，用无水硫酸钠干燥并过滤。在减压下浓缩滤液，得到呈黄色油状的(r)-1-(3-(二氟甲基)-2-氟苯基)乙烷-1-胺(480mg，2.13mmol，48.0％产率，hcl盐)，其不经进一步纯化即可使用。
[0418]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.52-7.47(m,2h),7.24-7.19(m,1h),6.88(t,j＝14.8hz,1h),4.85-4.92(m,1h),1.57(d,j＝6.8hz,3h)。
[0419]
步骤f：将(r)-1-(3-(二氟甲基)-2-氟苯基)乙烷-1-胺(300mg，1.59mmol，1.00eq.)、1,7-二氯-4-甲基吡啶并[3,4-d]哒嗪(339mg，1.59mmol，1.00eq.)和氟化钾(461mg，7.93mmol，186μl，5.00eq.)在二甲亚砜(6.00ml)中的混合物脱气并用氮气吹扫(3次)，在氮气气氛下在130℃下将混合物搅拌12小时。然后将混合物冷却到25℃，用水(30.0ml)稀释，并用乙酸乙酯(30.0ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(30.0ml
×
3)洗涤，用
硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝10/1到1/1)和制备型hplc[柱：phenomenex luna c18 150
×
25mm
×
10um；流动相：a相：水(0.225％甲酸)，b相：乙腈；b％：20％-50％]纯化，得到呈黄色固体状的(r)-7-氯-n-(1-(3-(二氟甲基)-2-氟苯基)乙基)-4-甲基吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-胺(250mg，629μmol，39.7％产率，92.3％纯度)。lcms[m+1]
+
:367.2。
[0420]
中间产物ab
[0421][0422]
步骤a：向3-溴-5-氟-2-甲基苯甲酸(4.00g，17.2mmol，1.00eq.)和n,o-二甲基羟胺(1.84g，18.9mmol，1.10eq.，hcl盐)在dmf(50.0ml)中的溶液中添加n,n-二异丙基乙胺(6.66g，51.5mmol，8.97ml，3.00eq.)和hatu(7.83g，20.6mmol，1.20eq.)，并在20℃下将反应混合物搅拌2小时。反应混合物用乙酸乙酯(50.0ml)稀释，用盐水(30.0ml
×
3)洗涤，并收集合并的有机相，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝5/1到2/1)纯化，得到呈白色固体状的3-溴-5-氟-n-甲氧基-n,2-二甲基苯甲酰胺(4.70g，17.0mmol，99.2％产率)。
[0423]
步骤b：在0℃下向3-溴-5-氟-n-甲氧基-n,2-二甲基-苯甲酰胺(4.70g，17.0mmol，1.00eq.)在thf(100ml)中的溶液中逐滴添加甲基溴化镁(3.0m，34.1ml，6.00eq.)。在逐滴添加完成之后，将反应混合物升温到45℃并搅拌5小时。然后将混合物冷却到25℃，用水(20.0ml)淬灭，并用乙酸乙酯(50.0ml
×
3)萃取。合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝5/1)纯化，得到呈淡黄色固体状的1-(3-溴-5-氟-2-甲基苯基)乙烷-1-酮(3.80g，16.5mmol，96.6％产率)。
[0424]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.43(dd,j＝2.8,7.6hz,1h),7.19(dd,j＝2.8,8.4hz,1h),2.55(s,3h),2.45(d,j＝0.4hz,3h)。
[0425]
步骤c：向1-(3-溴-5-氟-2-甲基苯基)乙烷-1-酮(3.80g，16.5mmol，1.00eq.)和(s)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(2.79g，23.0mmol，1.40eq.)在thf(60.0ml)中的溶液中添加乙醇钛(iv)(7.50g，32.9mmol，6.82ml，2.00eq.)和1,2-二甲氧基乙烷(1.48g，16.5mmol，1.71ml，1.00eq.)，并在70℃下将混合物搅拌12小时。然后将反应混合物冷却到25℃，用乙酸乙酯(100ml)和水(10.0ml)稀释，得到悬浮液。过滤悬浮液，并在减压下浓缩滤液以除去所有挥发物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝30/1到20/1)纯化，得到呈黄色
油状的(s)-n-(1-(3-溴-5-氟-2-甲基苯基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(4.70g，14.1mmol，85.5％产率)。lcms[m+3]
+
:336.0。
[0426]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.35(br dd,j＝2.4,7.6hz,1h),6.92(dd,j＝2.4,8.4hz,1h),2.66(s,3h),2.37(s,3h),1.30(s,9h)。
[0427]
步骤d：在-78℃下向(s)-n-(1-(3-溴-5-氟-2-甲基苯基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(5.50g，16.5mmol，1.00eq.)在thf(80.0ml)中的溶液中逐滴添加三仲丁基硼氢化锂(1.0m，24.7ml，1.50eq.)，将反应混合物升温到0℃并搅拌2小时。然后，混合物用氯化铵水溶液(30.0ml)稀释，所得溶液用乙酸乙酯(50.0ml
×
2)萃取。合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物用石油醚(20.0ml)研磨，过滤，并将滤饼真空干燥，得到呈白色固体状的(s)-n-((r)-1-(3-溴-5-氟-2-甲基苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(3.20g，9.52mmol，57.8％产率)。
[0428]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.24(dd,j＝2.4,7.6hz,1h),7.10(dd,j＝2.8,10.0hz,1h),4.90-4.82(m,1h),3.30(br d,j＝2.8hz,1h),2.42(s,3h),1.48(d,j＝6.8hz,3h),1.23(s,9h)。
[0429]
步骤e：向(s)-n-((r)-1-(3-溴-5-氟-2-甲基苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.60g，4.76mmol，1.00eq.)在thf(20.0ml)和水(5.00ml)中的溶液中添加碘(362mg，1.43mmol，288μl，0.30eq.)，并在50℃下将混合物搅拌2小时。然后，将混合物冷却到25℃，并用碳酸氢钠水溶液将ph调整到ph＝7。所得溶液用dcm(20.0ml
×
3)萃取，合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到呈淡黄色油状的(r)-1-(3-溴-5-氟-2-甲基苯基)乙烷-1-胺(1.20g，粗品)。此粗油不经进一步纯化即可使用。
[0430]
步骤f：向(r)-1-(3-溴-5-氟-2-甲基苯基)乙烷-1-胺(1.20g，5.17mmol，1.00eq.)在thf(20.0ml)中的溶液中添加二碳酸二叔丁酯(1.35g，6.20mmol，1.43ml，1.20eq.)，并在20℃下将混合物搅拌3小时。然后在减压下浓缩混合物，残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝150/1到70/1)纯化，得到呈白色固体状的(r)-(1-(3-溴-5-氟-2-甲基苯基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.45g，4.36mmol，84.4％产率)。
[0431]
步骤g：将(r)-(1-(3-溴-5-氟-2-甲基苯基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.35g，4.06mmol，1.00eq.)、氰化锌(954mg，8.13mmol，516μl，2.00eq.)、dppf(451mg，813μmol，0.20eq.)、锌粉(26.6mg，406μmol，0.10eq.)和pd2(dba)3(372mg，406μmol，0.10eq.)在二甲基乙酰胺(20.0ml)中的混合物脱气并用氮气吹扫(3次)，在氮气气氛下在120℃下将混合物搅拌6小时。然后，混合物用乙酸乙酯(60.0ml)稀释，过滤，滤液用盐水(30.0ml
×
3)洗涤，用硫酸钠干燥并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝100/1到30/1)纯化，得到呈淡黄色固体状的(r)-(1-(3-氰基-5-氟-2-甲基苯基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.10g，3.95mmol，97.3％产率)。
[0432]
步骤h：向(r)-(1-(3-氰基-5-氟-2-甲基苯基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.10g，3.95mmol，1.00eq.)在dcm(5.00ml)中的溶液中添加tfa(1.88g，16.5mmol，1.22ml，4.18eq.)，并在20℃下将混合物搅拌1小时。然后在减压下浓缩混合物，并用饱和碳酸氢钠水溶液将残余物调整到ph＝7。所得溶液用dcm(50.0ml)萃取，有机相用硫酸钠干燥并真空浓缩，得到呈棕色油状的(r)-3-(1-氨基乙基)-5-氟-2-甲基苄腈(0.80g，粗品)，其不经进一步纯化即可使用。
[0433]
中间产物ac
[0434][0435]
步骤a：在氮气气氛下向2-溴-4-氟-6-(三氟甲基)苯胺(2.00g，7.75mmol，1.00eq.)和三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡(2.80g，7.75mmol，2.62ml，1.00eq.)在二噁烷(20.0ml)中的溶液中添加pdcl2(pph3)2(544mg，775μmol，0.10eq.)，并在80℃下将混合物搅拌12小时。然后将反应混合物冷却到25℃，用氟化钾水溶液(100ml)稀释，然后用乙酸乙酯(100ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(100ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到呈黄色油状的化合物2-(1-乙氧基乙烯基)-4-氟-6-(三氟甲基)苯胺(4.00g，粗品)。向2-(1-乙氧基乙烯基)-4-氟-6-(三氟甲基)苯胺(4.00g，粗品)在四氢呋喃(50.0ml)中的溶液中逐滴添加盐酸水溶液(4.00m，20.0ml，1.33eq.)。然后在25℃下将混合物搅拌1小时，用水(100ml)稀释并用乙酸乙酯(300ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(200ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(石油醚/乙酸乙酯＝30/1到3/1)纯化，得到呈黄色固体状的化合物1-(2-氨基-5-氟-3-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-酮(5.60g，25.3mmol，42.0％产率，99.9％纯度)。
[0436]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝7.99(d,j＝9.2hz,1h),7.65-7.61(m,1h),7.33(s,2h),2.59(s,3h)。
[0437]
步骤b：向1-(2-氨基-5-氟-3-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-酮(5.60g，25.3mmol，1.00eq.)在盐酸(50.0ml)和水(100ml)中的溶液中逐份添加亚硝酸钠(2.27g，32.9mmol，1.30eq.)，然后在0℃下向混合物添加碘化钾(8.41g，50.6mmol，2.00eq.)。在添加结束之后，在25℃下将反应混合物搅拌12小时，然后用水(100ml)稀释，并用乙酸乙酯(200ml
×
3)萃取。合并的有机层用亚硫酸钠(200ml
×
3)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(石油醚/乙酸乙酯＝50/1到10/1)纯化，得到呈黄色固体状的化合物1-(5-氟-2-碘-3-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-酮(5.60g，10.3mmol，40.8％产率，61.2％纯度)。
[0438]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝7.83-7.76(m,1h),7.74-7.71(m,1h),2.56(s,3h)。
[0439]
步骤c：在氮气气氛下向甲基硼酸(1.62g，27.1mmol，2.50eq.)和1-(5-氟-2-碘-3-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-酮(3.60g，10.8mmol，1.00eq.)在二噁烷(20.0ml)中的溶液中添加pd(dppf)cl2(400mg，542μmol，0.05eq.)和碳酸钾(7.49g，54.2mmol，5.00eq.)，并在90℃下将混合物搅拌12小时。然后将混合物冷却到25℃，用水(50.0ml)稀释并用乙酸乙酯(100ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(100ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。
残余物通过柱色谱(石油醚/乙酸乙酯＝50/1到10/1)纯化，得到呈黄色油状的化合物1-(5-氟-2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-酮(1.70g，7.72mmol，71.2％产率)。
[0440]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.47(dd,j＝2.8,8.8hz,1h),7.36-7.30(m,1h),2.58(s,3h),2.47(s,3h)。
[0441]
步骤d：向1-(5-氟-2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-酮(2.20g，9.99mmol，1.00eq.)和(r)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(2.42g，20.0mmol，2.00eq.)在四氢呋喃(15.0ml)中的溶液中添加异丙醇钛(iv)(5.68g，20.0mmol，5.90ml，2.00eq.)和1-甲氧基-2-(2-甲氧基乙氧基)乙烷(4.12g，30.7mmol，4.40ml，3.08eq)，并在75℃下将混合物搅拌12小时。然后将混合物冷却到25℃，用水(50.0ml)稀释，得到悬浮液。过滤所得悬浮液，并用乙酸乙酯(100ml
×
3)稀释滤液。合并的有机层用盐水(50.0ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(石油醚/乙酸乙酯＝10/1到3/1)纯化，得到呈黄色油状的化合物(r)-n-(1-(5-氟-2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.50g，4.64mmol，46.4％产率)。
[0442]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.39(dd,j＝2.2,8.8hz,1h),7.10(dd,j＝2.4,8.4hz,1h),2.68(s,3h),2.41(s,3h),1.30(s,9h)。
[0443]
步骤e：在0℃下向(r)-n-(1-(5-氟-2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.90g，5.88mmol，1.00eq.)在四氢呋喃(20.0ml)中的溶液中逐份添加硼氢化钠(667mg，17.6mmol，3.00eq.)。在0℃下将反应混合物搅拌2小时，然后用饱和氯化铵水溶液(50.0ml)缓慢稀释并搅拌30分钟。所得混合物用乙酸乙酯(100ml
×
3)萃取，合并的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(石油醚/乙酸乙酯＝10/1到3/1)纯化，得到呈黄色油状的(r)-n-((r)-1-(5-氟-2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.30g，4.00mmol，68.0％产率)。
[0444]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.40-7.28(m,2h),4.95-4.84(m,1h),3.40-3.32(m,1h),2.43(s,3h),1.49(d,j＝6.4hz,3h),1.23(s,9h)。
[0445]
步骤f：向(r)-n-((r)-1-(5-氟-2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.30g，4.00mmol，1.00eq.)在二氯甲烷(5.00ml)中的溶液中添加盐酸(在1,4-二噁烷中为4.00m，5.00ml，5.0eq.)，并在25℃下将混合物搅拌1小时。然后在减压下浓缩混合物，得到呈黄色油状的化合物(r)-1-(5-氟-2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-胺(700mg，2.81mmol，70.4％产率，88.9％纯度，hcl盐)，其不经进一步纯化即可直接使用。
[0446]
中间产物ad
[0447][0448]
步骤a：向3-溴-2,5-二氟苯甲醛(4.00g，18.1mmol，1.00eq.)和(r)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(3.07g，25.3mmol，1.40eq.)在thf(50.0ml)中的溶液中添加乙醇钛(iv)(8.26g，36.2mmol，7.51ml，2.00eq.)和1,2-二甲氧基乙烷(1.63g，18.1mmol，1.88ml，1.00eq.)，并在70℃下将混合物搅拌12小时。然后将混合物冷却到25℃，用乙酸乙酯(50.0ml)和水(5.00ml)缓慢稀释，得到悬浮液。过滤悬浮液，并在减压下浓缩滤液，然后通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝20/1到10/1)纯化，得到呈白色固体状的(s)-n-(3-溴-2,5-二氟亚苄基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(5.70g，17.6mmol，97.1％产率)。
[0449]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝8.81(d,j＝2.4hz,1h),7.74(dd,j＝6.0,8.4hz,1h),7.44(dd,j＝5.2,8.8hz,1h),1.28(s,9h)。
[0450]
步骤b：在-60℃下向(s)-n-(3-溴-2,5-二氟亚苄基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(5.50g，17.0mmol，1.00eq.)在dcm(60.0ml)中的溶液中逐滴添加甲基溴化镁(3.0m，17.0ml，3.00eq.)，然后将混合物升温到0℃并搅拌1小时。混合物用氯化铵水溶液(50.0ml)稀释，所得水溶液用乙酸乙酯(50.0ml
×
3)萃取。合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝5/1到2/1)纯化，得到呈白色固体状的(s)-n-((r)-1-(3-溴-2,5-二氟苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(3.50g，10.3mmol，60.6％产率)。
[0451]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.31-7.26(m,1h),7.16(dd,j＝6.4,8.8hz,1h),4.89-4.78(m,1h),3.35(br d,j＝4.0hz,1h),1.56(d,j＝6.8hz,3h),1.23(s,9h)。
[0452]
步骤c：向(s)-n-((r)-1-(3-溴-2,5-二氟苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.50g，4.41mmol，1.00eq.)在thf(20.0ml)和水(5.00ml)中的溶液中添加碘(336mg，1.32mmol，266μl，0.30eq.)，并在50℃下将混合物搅拌2小时。然后将混合物冷却到25℃，并用碳酸氢钠水溶液将ph调整到ph＝7。所得水溶液用dcm(20.0ml
×
3)萃取，合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到呈淡黄色油状的(r)-1-(3-溴-2,5-二氟苯基)乙烷-1-胺(1.20g，粗品)。此粗油不经进一步纯化即可直接使用。
[0453]
步骤d：向(r)-1-(3-溴-2,5-二氟苯基)乙烷-1-胺(1.20g，5.08mmol，1.00eq.)在
thf(20.0ml)中的溶液中添加二碳酸二叔丁酯(1.22g，5.59mmol，1.28ml，1.10eq.)，并在20℃下将混合物搅拌2小时。在减压下浓缩反应混合物，并通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝150/1到80/1)纯化，得到呈白色固体状的(r)-(1-(3-溴-2,5-二氟苯基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.30g，3.87mmol，76.1％产率)。
[0454]
步骤e：将(r)-(1-(3-溴-2,5-二氟苯基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.20g，3.57mmol，1.00eq.)、氰化锌(838mg，7.14mmol，453μl，2.00eq.)、锌(23.3mg，357μmol，0.10eq.)、dppf(396mg，714μmol，0.20eq.)和pd2(dba)3(327mg，357μmol，0.10eq.)在二甲基乙酰胺(20.0ml)中的混合物脱气并用氮气吹扫(3次)，并在氮气气氛下在115℃下将混合物搅拌3小时。然后将混合物冷却到25℃，用乙酸乙酯(100ml)稀释，有机相用盐水(50.0ml
×
3)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝100/1到30/1)纯化，得到呈淡黄色固体状的(r)-(1-(3-氰基-2,5-二氟苯基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(0.90g，3.19mmol，89.3％产率)。
[0455]
步骤f：向(r)-(1-(3-氰基-2,5-二氟苯基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(0.90g，3.19mmol，1.00eq.)在dcm(10.0ml)中的溶液中添加tfa(4.62g，40.5mmol，3.00ml，12.7eq.)，并在20℃下将反应混合物搅拌1小时。然后在减压下浓缩反应混合物，并用水(10.0ml)稀释残余物。用碳酸氢钠水溶液将溶液的ph调整到ph＝7，所得水溶液用dcm(20.0ml
×
2)萃取。合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到呈淡黄色油状的(r)-3-(1-氨基乙基)-2,5-二氟苄腈(700mg，粗品)。此化合物不经进一步纯化即直接使用。
[0456]
中间产物ae
[0457][0458]
步骤a：向1-溴-3-氟-2-(三氟甲基)苯(39.0g，160mmol，1.00eq.)在二甲亚砜(200ml)中的溶液中添加氰化锌(11.5g，176mmol，7.56ml，1.10eq.)，并在80℃下将反应混合物搅拌16小时。然后将混合物冷却到25℃，用乙酸乙酯(1.00l)稀释，并将有机相分离，用水(500ml
×
3)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过硅胶色谱(石油醚/乙酸乙酯＝1/0到2/1)纯化，得到呈白色固体状的3-溴-2-(三氟甲基)苯甲腈(29.0g，116mmol，72.3％产率)。
[0459]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝8.20(d,j＝8.0hz,1h),8.10(d,j＝7.6hz,1h),7.75
(t,j＝8.0hz,1h)。
[0460]
步骤b：在氮气气氛下向3-溴-2-(三氟甲基)苯甲腈(29.0g，116mmol，1.00eq.)和三丁基(1-乙氧基乙烯基)tin(50.3g，139mmol，47.0ml，1.20eq.)在甲苯(250ml)中的溶液中添加pd(pph3)4(6.70g，5.80mmol，0.05eq.)，并在100℃下将混合物搅拌16小时。将反应混合物冷却到25℃，用水(500ml)和乙酸乙酯(200ml)稀释，最后添加氟化钾(50.0g)固体。在25℃下将混合物搅拌30分钟，然后将有机层分离，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝20/1到5/1)纯化，得到粗产物。粗产物用石油醚(50.0ml)研磨，过滤，并在减压下浓缩滤液，得到呈淡黄色油状的3-(1-乙氧基乙烯基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(8.00g，33.2mmol，23.0％产率)。
[0461]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.82(d,j＝7.2hz,1h),7.70(d,j＝7.2hz,1h),7.65-7.59(t,j＝7.6hz,1h),4.37(d,j＝2.8hz,1h),4.25(d,j＝2.8hz,1h),3.90(q,j＝7.2hz,2h),1.36(t,j＝6.8hz,3h)。
[0462]
步骤c：向3-(1-乙氧基乙烯基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(7.00g，29.0mmol，1.00eq.)在四氢呋喃(10.0ml)中的溶液中添加盐酸(2.00m，29.0ml，2.00eq.)，并在20℃下将反应混合物搅拌2小时。然后用碳酸氢钠水溶液将混合物的ph调整到ph＝8，并且进一步用水(100ml)稀释。所得溶液用乙酸乙酯(50.0ml
×
3)萃取，合并的有机相用盐水(100ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝20/1到5/1)纯化，得到呈无色油状的3-乙酰基-2-(三氟甲基)苯甲腈(5.30g，24.8mmol，85.6％产率)。
[0463]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝8.25(dd,j＝0.8,7.6hz,1h),8.07-7.94(m,2h),2.60(s,3h)。
[0464]
步骤d：向3-乙酰基-2-(三氟甲基)苯甲腈(1.00g，4.69mmol，1.00eq.)和(r)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(625mg，5.16mmol，1.10eq.)在四氢呋喃(2.00ml)中的溶液中添加1,2-二甲氧基乙烷(423mg，4.69mmol，488μl，1.00eq.)和乙醇钛(iv)(3.21g，14.1mmol，2.92ml，3.00eq.)，并在80℃下将反应混合物搅拌16小时。在减压下浓缩混合物，残余物用乙酸乙酯(100ml)稀释并倒入硅藻土(20.0g)和饱和碳酸氢钠(10.0g)在水(100ml)中的混合物中。搅拌混合物，然后过滤，将滤饼与乙酸乙酯(30.0ml)一起搅拌并过滤，此过程重复三次，直到产物滤饼被洗掉。分离合并的滤液，并用乙酸乙酯(100ml)萃取水相。合并的有机层用盐水(50.0ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过快速硅胶色谱(乙酸乙酯/石油醚，0-30％)纯化，得到呈淡黄色油状的(r)-n-(1-(3-氰基-2-(三氟甲基)苯基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(950mg，2.99mmol，63.7％产率，99.5％纯度)。lcms[m+1]
+
:317.1。
[0465]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.92-7.80(m,1h),7.77-7.65(m,1h),7.61-7.37(m,1h),2.74-2.38(m,3h),1.29-1.24(m,9h)。
[0466]
步骤e：在氮气气氛下在0℃下向(r)-n-(1-(3-氰基-2-(三氟甲基)苯基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.70g，5.37mmol，1.00eq.)在四氢呋喃(20.0ml)中的溶液中逐份添加硼氢化钠(610mg，16.0mmol，3.00eq.)。在添加之后，在此温度下将混合物搅拌30分钟，然后升温到25℃，再搅拌3小时。然后在氮气气氛下用饱和氯化铵水溶液(100ml)逐滴稀释混合物，同时在25℃下搅拌，然后用乙酸乙酯(150ml
×
2)萃取。合并的有机层用无水硫酸钠
干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝5/1到1/1)纯化，得到呈白色固体状的(r)-n-(1-(3-氰基-2-(三氟甲基)苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.50g，4.71mmol，87.7％产率，非对映异构体的混合物)。lcms[m+1]
+
:319.1。
[0467]
步骤f：在5℃下将(r)-n-(1-(3-氰基-2-(三氟甲基)苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.4g，4.40mmol，1.00eq.)在hcl
·
二噁烷(10.0ml)中的混合物搅拌30分钟此后，形成白色沉淀，并过滤悬浮液。收集滤饼并加以真空干燥，得到呈白色固体状的3-(1-氨基乙基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(850mg，3.39mmol，77.1％产率，hcl盐)。lcms[m+1]
+
:215.1。
[0468]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝8.84(s,3h),8.38(br d,j＝8.0hz,1h),8.19(d,j＝7.6hz,1h),8.12-7.95(m,1h),4.64(br d,j＝6.0hz,1h),1.56(d,j＝6.4hz,3h)。
[0469]
步骤g：将3-(1-氨基乙基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(300mg，1.40mmol，1.00eq.，hcl盐)、1,7-二氯-4-甲基吡啶并[3,4-d]哒嗪(300mg，1.40mmol，1.00eq.)、二异丙基乙胺(499mg，3.86mmol，673μl，2.76eq.)和氟化铯(400mg，2.63mmol，97.0μl，1.88eq.)在二甲亚砜(1.50ml)中的混合物脱气并用氮气吹扫(3次)，然后在氮气气氛下在130℃下将混合物搅拌1小时。然后将混合物冷却到25℃并添加乙酸乙酯(60.0ml)，有机溶液用盐水(30.0ml
×
2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝5/1到1/1)纯化，得到呈白色固体状的3-(1-((7-氯-4-甲基吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-基)氨基)乙基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(160mg，408μmol，29.2％产率)。lcms[m+1]
+
:392.1。
[0470]
3-(1-((7-氯-4-甲基吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-基)氨基)乙基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(160mg)进一步使用sfc[柱：daicel chiralpak ad(250mm
×
30mm，10um)；流动相：a相：meoh中的(0.1％nh4oh)，b相：co2；b％：20％-20％]纯化，得到第一洗脱异构体，为呈白色固体状的(r)-3-(1-((7-氯-4-甲基吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-基)氨基)乙基)-2-(三氟甲基)苯甲腈(62.0mg，158μmol，39.0％产率)。lcms[m+1]
+
:392.1。
[0471]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝9.24(d,j＝0.8hz,1h),8.46(d,j＝0.8hz,1h),8.05(d,j＝8.4hz,1h),7.80(d,j＝7.2hz,1h),7.71-7.57(m,1h),5.74(q,j＝6.8hz,1h),2.74(s,3h),1.68(d,j＝6.8hz,3h)。
[0472]
中间产物af
[0473][0474]
步骤a：在氮气气氛下向4-氟-3-硝基-5-(三氟甲基)苯甲酸(2.00g，7.90mmol，1.00eq.)在四氢呋喃(15.0ml)中的溶液中添加钯/碳(7.90mmol，10％纯度，1.00eq.)，并在
氢气气氛(15psi)下在25℃下将混合物搅拌2小时。然后过滤并在减压下浓缩混合物，得到呈白色固体状的化合物3-氨基-4-氟-5-(三氟甲基)苯甲酸(1.60g，7.17mmol，90.8％产率)。
[0475]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝7.68-7.64(m,1h),7.32-7.29(m,1h),5.95-5.89(m,2h)。
[0476]
步骤b：向3-氨基-4-氟-5-(三氟甲基)苯甲酸(1.50g，6.72mmol，1.00eq.)和n,o-二甲基羟胺(830mg，13.45mmol，2.00eq.)在n,n-二甲基甲酰胺(10.0ml)中的溶液中添加hatu(5.11g，13.5mmol，2.00eq.)和n,n-二异丙基乙胺(2.61g，20.2mmol，3.50ml，3.00eq.)，并在25℃下将混合物搅拌12小时。混合物用水(50.0ml)稀释，然后用乙酸乙酯(50.0ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(50.0ml
×
3)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝10/1到3/1)纯化，得到呈黄色油状的化合物3-氨基-4-氟-n-甲氧基-n-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺(1.50g，5.64mmol，83.9％产率)。
[0477]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.38-7.34(m,2h),3.57(s,3h),3.36(s,3h)
[0478]
步骤c：向3-氨基-4-氟-n-甲氧基-n-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺(1.50g，5.64mmol，1.00eq.)在二氯甲烷(10.0ml)中的溶液中添加二碳酸二叔丁酯(3.69g，16.9mmol，3.88ml，3.00eq.)和4-二甲氨基吡啶(688mg，5.64mmol，1.00eq.)，并在25℃下将混合物搅拌12小时。反应混合物用水(50.0ml)稀释，然后用乙酸乙酯(50.0ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(50.0ml
×
3)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝10/1到3/1)纯化，得到呈黄色油状的化合物(叔丁氧基羰基)(2-氟-5-(甲氧基(甲基)氨基甲酰基)-3-(三氟甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(2.00g，4.29mmol，76.1％产率)。
[0479]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝8.05-8.01(m,1h),7.87-7.84(m,1h),3.55(s,3h),3.39(s,3h),1.42(s,18h)。
[0480]
步骤d：在0℃下向(叔丁氧基羰基)(2-氟-5-(甲氧基(甲基)氨基甲酰基)-3-(三氟甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(1.80g，3.86mmol，1.00eq.)在四氢呋喃(20.0ml)中的溶液中添加甲基溴化镁溶液(3.00m，3.86ml，3.00eq.)，并在0℃下将混合物搅拌12小时。然后，用水(100ml)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(100ml
×
3)萃取溶液。合并的有机层用盐水(100ml
×
3)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝10/1到3/1)纯化，得到呈黄色油状的化合物(5-乙酰基-2-氟-3-(三氟甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(1.10g，3.42mmol，88.7％产率)。
[0481]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝8.98(d,j＝6.4hz,1h),7.90-7.87(m,1h),6.86(s,1h),2.65(s,3h),1.56(s,9h)。
[0482]
步骤e：向(5-乙酰基-2-氟-3-(三氟甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(1.10g，2.61mmol，1.00eq.)和(r)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(950mg，7.83mmol，3.00eq.)在四氢呋喃(10.0ml)中的溶液中添加异丙醇钛(iv)(1.48g，5.22mmol，1.54ml，2.00eq.)和1-甲氧基-2-(2-甲氧基乙氧基)乙烷(1.87g，13.97mmol，2.00ml，5.35eq.)，并在70℃下将混合物搅拌12小时。然后，混合物用水(50.0ml)稀释并用乙酸乙酯(50.0ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(50.0ml
×
3)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(石油
醚/乙酸乙酯＝10/1到3/1)纯化，得到呈黄色油状的化合物(r)-(5-(1-((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)乙基)-2-氟-3-(三氟甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(1.00g，2.36mmol，90.1％产率)。
[0483]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝8.86(d,j＝6.4hz,1h),7.82(d,j＝6.0hz,1h),6.85(s,1h),2.79(s,3h),1.54(s,9h),1.33(s,9h)。
[0484]
步骤f：在0℃下向(r)-(5-(1-((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)乙基)-2-氟-3-(三氟甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(1.00g，2.36mmol，1.00eq.)在四氢呋喃(10.0ml)中的溶液中添加硼氢化钠(268mg，7.07mmol，3.00eq.)，并在0℃下将混合物搅拌2小时。然后，混合物用水(50.0ml)稀释并用乙酸乙酯(50.0ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(50.0ml
×
3)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝10/1到3/1)纯化，得到呈白色固体状的化合物(5-((r)-1-(((r)-叔丁基亚磺酰基)氨基)乙基)-2-氟-3-(三氟甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(620mg，1.45mmol，61.7％产率)。
[0485]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝8.34(d,j＝6.4hz,1h),7.23-7.20(m,1h),6.80(s,1h),4.56-5.53(m,1h),1.54-1.52(m,12h),1.24(s,9h)。
[0486]
步骤g：向(5-((r)-1-(((r)-叔丁基亚磺酰基)氨基)乙基)-2-氟-3-(三氟甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(620mg，1.45mmol，1.00eq.)在二氯甲烷(5.00ml)中的溶液中添加盐酸盐(在1,4-二噁烷中为4.00m，5.00ml，13.76eq.)，并在25℃下将混合物搅拌1小时。然后在减压下浓缩混合物，得到呈黄色油状的化合物(r)-5-(1-氨基乙基)-2-氟-3-(三氟甲基)苯胺(280mg，1.24mmol，85.5％产率，98.6％纯度，hcl盐)。此化合物不经进一步纯化即直接使用。
[0487]
中间产物ag
[0488][0489]
步骤a：在-78℃下在10分钟内向4,6-二氯吡啶甲酸甲酯(4.50g，21.8mmol，1.00eq.)在二氯甲烷(40.0ml)中的溶液中逐滴添加dibal-h(1.0m，65.5ml，3.00eq.)，并在-78℃下将反应混合物搅拌2小时。然后在氮气气氛下在0℃下用水(2.50ml)逐滴稀释混合物，然后添加氢氧化钠水溶液(2.50ml，w/w＝15％)和水(6.26ml)。然后在0℃下将混合物搅拌30分钟，得到悬浮液，过滤悬浮液并在减压下浓缩滤液。残余物通过柱色谱(sio2，石油
醚/乙酸乙酯＝30/1到10/1)纯化，得到呈黄色油状的(4,6-二氯吡啶-2-基)甲醇(2.40g，13.5mmol，61.7％产率)
[0490]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝7.65(s,1h),7.52(s,1h),5.69(t,j＝6.0hz,1h),4.53(d,j＝6.0hz,2h)。
[0491]
步骤b：在0℃下向(4,6-二氯吡啶-2-基)甲醇(2.40g，13.5mmol，1.00eq.)在二氯甲烷(20.0ml)中的溶液中逐份添加戴斯-马丁高碘烷(11.4g，27.0mmol，8.35ml，2.00eq.)，并在20℃下将混合物搅拌2小时。然后，将混合物倒入水(10.0ml)中并搅拌15分钟，然后缓慢添加饱和硫代硫酸钠水溶液(20.0ml)，再将混合物搅拌15分钟。过滤悬浮液，分离各层，并用dcm(20.0ml
×
2)萃取水相。合并的有机层用盐水(20ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝50/1到10/1)纯化，得到呈红色油状的4,6-二氯吡啶甲醛(1.60g，9.09mmol，67.4％产率)
[0492]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝9.87(s,1h),8.14(d,j＝1.6hz,1h),8.01(d,j＝1.6hz,1h)。
[0493]
步骤c：在-20℃下向4,6-二氯吡啶甲醛(1.10g，6.25mmol，1.00eq.)在二氯甲烷(10.0ml)中的溶液中逐滴添加三氟化二乙氨基硫(2.01g，12.5mmol，1.65ml，2.00eq.)，并在25℃下将混合物搅拌1小时。然后在25℃下将混合物缓慢倒入饱和碳酸氢钠水溶液(10.0ml)中，所得溶液用乙酸乙酯(10.0ml
×
3)萃取。合并的有机相用盐水(5.00ml
×
3)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝100/1到20/1)纯化，得到呈黄色油状的2,4-二氯-6-(二氟甲基)吡啶(1.00g，5.05mmol，80.8％产率)。
[0494]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝7.75(s,1h),7.74(s,1h),6.82-6.55(m,1h)。
[0495]
步骤d：在氮气气氛下向三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡(2.01g，5.56mmol，1.88ml，1.00eq.)和2,4-二氯-6-(二氟甲基)吡啶(1.10g，5.56mmol，1.00eq.)在二噁烷(10.0ml)中的溶液中添加pd(pph3)2cl2(390mg，556μmol，0.10eq)，并在110℃下将混合物搅拌12小时。将反应混合物冷却到25℃，并缓慢倒入饱和氟化钾水溶液(20.0ml)中。所得水溶液用乙酸乙酯(50.0ml
×
3)萃取，合并的有机层用盐水(30.0ml
×
2)洗涤，用无水钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝100/1到20/1)纯化，得到呈黄色油状的4-氯-2-(二氟甲基)-6-(1-乙氧基乙烯基)吡啶(1.20g，5.14mmol，92.5％产率)，其直接用于下一步骤中。
[0496]
在20℃下向4-氯-2-(二氟甲基)-6-(1-乙氧基乙烯基)吡啶(1.00g，4.28mmol，1.00eq)在二噁烷(5.00ml)中的溶液中添加盐酸水溶液(2.00m，4.28ml，2.00eq)，并在20℃下将混合物搅拌1小时。然后通过添加饱和碳酸氢钠(15.0ml)将混合物的ph调整到ph＝8，并用乙酸乙酯(30.0ml
×
2)萃取。合并的有机相用盐水(10.0ml
×
2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝50/1到10/1)纯化，得到呈白色固体状的1-(4-氯-6-(二氟甲基)吡啶-2-基)乙烷-1-酮(800mg，3.89mmol，90.9％产率)。
[0497]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝8.10-8.16(m,1h),7.95(d,j＝1.6hz,1h),6.67-6.95(m,1h),2.69(s,3h)。
[0498]
步骤e：在氮气气氛下向1-(4-氯-6-(二氟甲基)吡啶-2-基)乙烷-1-酮(0.85g，
4.13mmol，1.00eq.)和氨基甲酸叔丁酯(1.45g，12.4mmol，3.00eq.)在二噁烷(6.00ml)中的溶液中添加碳酸铯(2.69g，8.27mmol，2.00eq.)、xphos(394mg，827μmol，0.20eq.)和乙酸钯(92.8mg，413μmol，0.10eq.)，并在90℃下将混合物搅拌2小时。然后将混合物冷却到25℃并在减压下浓缩，残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝100/1到10/1)纯化，得到呈白色固体状的(2-乙酰基-6-(二氟甲基)吡啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1.00g，3.49mmol，84.5％产率)。lcms[m+1]
+
:287.1。
[0499]
步骤f：向(2-乙酰基-6-(二氟甲基)吡啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1.00g，3.49mmol，1.00eq.)和(s)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(508mg，4.19mmol，1.20eq.)在thf(10.0ml)中的溶液中添加乙醇钛(iv)(7.97g，34.9mmol，7.24ml，10.0eq.)，并在75℃下将混合物搅拌12小时。然后将混合物冷却到25℃并倒入水(5.00ml)中，然后过滤悬浮液，并在减压下浓缩滤液。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝50/1到5/1)纯化，得到呈黄色固体状的(s)-(2-(1-((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)乙基)-6-(二氟甲基)吡啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1.00g，2.57mmol，73.5％产率)。
[0500]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝8.30(s,1h),7.94(d,j＝1.6hz,1h),6.52-6.82(m,1h),2.81(s,3h),1.54(s,9h),1.35(s,9h)。
[0501]
步骤g：在0℃下向(s)-(2-(1-((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)乙基)-6-(二氟甲基)吡啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1.00g，2.57mmol，1.00eq.)在thf(10.0ml)中的溶液中逐滴添加三仲丁基硼氢化锂(1.0m，976mg，5.14mmol，1.12ml，2.00eq.)，并在0-20℃下将混合物搅拌1小时。将混合物倒入饱和氯化铵水溶液(15.0ml)中并搅拌10分钟，然后用乙酸乙酯(15.0ml
×
3)萃取。合并的有机相用盐水(15.0ml
×
3)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩滤液。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝100/1到5/1)纯化，得到呈白色固体状的(2-((r)-1-(((s)-叔丁基亚磺酰基)氨基)乙基)-6-(二氟甲基)吡啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(550mg，1.26mmol，49.0％产率，89.5％纯度)。
[0502]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝7.70(s,1h),7.61(d,j＝2.0hz,1h),6.41-6.77(m,1h),4.55(q,j＝6.8hz,1h),1.58(d,j＝6.8hz,3h),1.53(s,9h),1.23(s,9h)。
[0503]
sfc：柱：chiralcel od-3 50
×
4.6mmi.d.，3um流动相：co2为a相，meoh(0.05％dea)为b相；梯度洗脱：meoh(0.05％dea)在co2中从5％到40％；流速：3ml/min；检测器：pda；柱温：35℃；背压：100bar。
[0504]
步骤h：在0-20℃下将(2-((r)-1-(((s)-叔丁基亚磺酰基)氨基)乙基)-6-(二氟甲基)吡啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(450mg，1.15mmol，1.00eq.)在盐酸/二噁烷(2.00ml)中的溶液搅拌1小时。然后在减压下浓缩混合物，得到呈白色固体状的(r)-2-(1-氨基乙基)-6-(二氟甲基)吡啶-4-胺和(2-((r)-1-(((s)-叔丁基亚磺酰基)氨基)乙基)-6-(二氟甲基)吡啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯的混合物，其不经纯化直接用于下一步骤。lcms[m+1]
+
:288.2。
[0505]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝7.74(s,1h),7.65(d,j＝1.6hz,1h),6.82-6.51(m,1h),4.60-4.45(m,2h),1.61(d,j＝6.8hz,3h),1.54(s,9h)。
[0506]
中间产物ah
[0507][0508]
步骤a：在氮气气氛下向1-(2-氟-3-甲基苯基)乙烷-1-酮(1.00g，6.57mmol，1.00eq.)和(s)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.04g，8.54mmol，1.30eq.)在四氢呋喃(20.0ml)中的溶液中添加四异丙醇钛(3.73g，13.1mmol，3.88ml，2.00eq.)，并在氮气气氛下在70℃下将混合物搅拌12小时。将反应混合物冷却到25℃并倒入水(40.0ml)中，搅拌10分钟后得到悬浮液，过滤悬浮液，所得水溶液用乙酸乙酯(40.0ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(30.0ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝50/1到2/1)纯化，得到呈黄色固体状的(s)-n-(1-(2-氟-3-甲基苯基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.50g，5.87mmol，89.4％产率)。lcms[m+1]
+
:256.2。
[0509]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝7.46(br t,j＝6.8hz,1h),7.30-7.24(m,1h),7.09-7.04(m,1h),2.76(br d,j＝2.8hz,3h),2.31(d,j＝2.4hz,3h),1.31(s,9h)。
[0510]
步骤b：在氮气气氛下在-78℃下向(s)-n-(1-(2-氟-3-甲基苯基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.50g，5.87mmol，1.00eq.)在四氢呋喃(20.0ml)中的溶液中添加三仲丁基硼氢化锂(1.0m，11.7mmol，11.8ml，2.00eq.)，并在-78℃下将混合物搅拌2小时。将反应混合物缓慢倒入水(10.0ml)中并搅拌10分钟，所得混合溶液用乙酸乙酯(10.0ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(10.0ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝50/1到1/1)纯化，得到呈黄色油状的(s)-n-(1-(2-氟-3-甲基苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(900mg，3.50mmol，59.5％产率)。lcms[m+1]
+
:258.4。
[0511]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝7.16(t,j＝7.6hz,1h),7.13-7.08(m,1h),7.04-6.99(m,1h),4.85(q,j＝6.8hz,1h),2.28(d,j＝2.0hz,3h),1.58(d,j＝6.8hz,3h),1.20(s,9h)。
[0512]
步骤c：在氮气气氛下向(s)-n-(1-(2-氟-3-甲基苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(900mg，3.50mmol，1.00eq.)在二氯甲烷(5.00ml)中的溶液中添加hcl(在1,4-二噁烷中为4.00m，5.00ml，5.72eq.)，并在20℃下将混合物搅拌1小时。浓缩混合物，得到呈黄色固体状的1-(2-氟-3-甲基苯基)乙烷-1-胺(390mg，粗品，盐酸盐)，其不经进一步纯化即直接使用。
[0513]
在氮气气氛下在130℃下将1-(2-氟-3-甲基苯基)乙烷-1-胺(300mg，1.96mmol，
1.00eq.，盐酸盐)、1,7-二氯-4-甲基吡啶并[3,4-d]哒嗪(419mg，1.96mmol，1.00eq.)、n,n-二异丙基乙胺(506mg，3.92mmol，2.00eq.)和氟化钾(341mg，5.87mmol，0.14ml，3.00eq.)在二甲亚砜(5.00ml)中的溶液搅拌1小时。然后将混合物冷却到25℃，倒入水(20.0ml)中，并用乙酸乙酯(20.0ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(20.0ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过制备型hplc[柱：welch xtimate c18 150 25mm
×
5um；流动相：a相：水(0.05％hcl)，b相：乙腈；b％：14％-44％]纯化。得到呈黄色固体状的7-氯-n-(1-(2-氟-3-甲基苯基)乙基)-4-甲基吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-胺(100mg，0.30mmol，23.2％产率)。lcms[m+1]
+
:331.2。
[0514]
外消旋7-氯-n-(1-(2-氟-3-甲基苯基)乙基)-4-甲基吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-胺(200mg，0.60mmol，1.00eq.)通过sfc(柱：daicel chiralpak ig(250mm
×
30mm，10um)；流动相：a相：meoh中的0.1％nh4oh，b相：co2；b％：30％-30％]纯化，得到呈黄色固体状的(r)-7-氯-n-(1-(2-氟-3-甲基苯基)乙基)-4-甲基吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-胺)作为第一洗脱异构体(80.0mg，0.24mmol，40.0％产率。
[0515]
以下实施例旨在进一步说明本发明的某些实施方案，而不旨在限制本发明的范围。
[0516]
实施例1-1
[0517]
6,7-二甲氧基-n-(1-(4-(2-((甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)酞嗪-1-胺
[0518][0519]
步骤a：将1-氯-6,7-二甲氧基酞嗪(120mg，534μmol，1.00eq.)、(2-(5-(1-氨基乙基)噻吩-3-基)苯甲基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(130mg，374μmol，0.70eq.)、brettphos pd g3(48.4mg，53.4μmol，0.10eq.)和叔丁醇钾(150mg，1.34mmol，2.50eq.)在甲苯(3.00ml)中的混合物脱气并用氮气吹扫3次，然后在氮气气氛下在100℃下将反应混合物搅拌1小时。将反应混合物冷却到25℃并过滤，在减压下浓缩滤液，得到残余物。残余物通过制备型tlc(sio2，二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化，得到呈褐色固体状的(2-(5-(1-((6,7-二甲氧基酞嗪-1-基)氨基)乙基)噻吩-3-基)苯甲基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(70.0mg，24.5％产率)。lcms[m+1]:535.5。
[0520]
步骤b：向(2-(5-(1-((6,7-二甲氧基酞嗪-1-基)氨基)乙基)噻吩-3-基)苯甲基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(60.0mg，112μmol，1.00eq.)在乙腈(1.00ml)中的溶液中添加hcl
(在二噁烷中为4.0m，0.20ml)。在25℃下将反应混合物搅拌10分钟，然后过滤并在25℃下在减压下浓缩混合物，得到残余物。将残余物溶解于甲醇(2.00ml)中，并用固体碳酸氢钠(约30.0mg)调整到ph＝7，得到悬浮液。过滤悬浮液，并通过制备型hplc(柱：waters xbridge 150
×
25mm
×
5um；流动相：[水(10mm nh4hco3)-acn]；b％：19％-49％，9min)纯化并冻干滤液，得到呈白色固体状的6,7-二甲氧基-n-(1-(4-(2-((甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)酞嗪-1-胺(16.6mg，33.8％产率，99.6％纯度)。lcms[m+1]:435.1。
[0521]1h nmr(400mhz,cd3od)δ8.73(d,j＝2.4hz,1h),7.75(s,1h),7.51-7.46(m,1h),7.43-7.37(m,3h),7.35(d,j＝5.2hz,1h),7.19(d,j＝1.2hz,1h),7.16(s,1h),5.93-5.81(m,1h),4.10(s,2h),4.05(s,3h),4.00(s,3h),2.45(s,3h),1.83(d,j＝6.8hz,3h)。
[0522]
实施例1-2
[0523]
(r)-7-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)-n-(1-(4-(2-((甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)酞嗪-1-胺
[0524]
步骤a：向7-溴酞嗪-1-醇(950mg，4.22mmol，1.00eq.)在乙腈(19.0ml)中的溶液中添加氧氯化磷(v)(2.27g，14.8mmol，1.37ml，3.50eq.)，在80℃下将反应混合物搅拌2小时。将反应混合物冷却到25℃并真空浓缩，以除去溶剂。剩余的残余物用冷却到0℃的dcm(50.0ml)稀释，并用饱和碳酸氢钠水溶液(30.0ml)将有机层调整到ph＝7。将有机相分离，用盐水(30.0ml
×
2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到呈褐色固体状的7-溴-1-氯酞嗪(900mg，3.70mmol，87.6％产率)。lcms[m+3]:244.8。
[0525]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.44(d,j＝0.8hz,1h),8.52-8.49(m,1h),8.10(dd,j＝2.0,8.8hz,1h),7.90(d,j＝8.4hz,1h)。
[0526]
步骤b：向7-溴-1-氯酞嗪(100mg，411μmol，1.00eq.)在dmso(2.00ml)中的溶液中添加(r)-(2-(5-(1-氨基乙基)噻吩-3-基)苯甲基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(129mg，370μmol，0.90eq.)、氟化钾(71.6mg，1.23mmol，28.8μl，3.00eq.)和二异丙基乙胺(106mg，821μmol，143μl，2.00eq.)。在氮气气氛下在130℃下将反应混合物搅拌4小时。此后，将反应混合物冷却到25℃。向反应混合物添加乙酸乙酯(10.0ml)和水(8.00ml)，并将各层分离，然后用乙酸乙酯(10.0ml
×
2)萃取水相。合并的有机层用盐水(10.0ml
×
2)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过制备型tlc(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化，得到呈黄色固体状的(r)-(2-(5-(1-((7-溴酞嗪-1-基)氨基)乙基)噻吩-3-基)苯甲基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(80.0mg，35.2％产率)。lcms[m+1]:553.0。
基)苯甲基)氨基甲酸叔丁酯(37.0mg，52.9μmol，1.00eq.)在乙腈(1.00ml)中的混合物中逐滴添加hcl(在二噁烷中为4.00m，0.50ml)，在0℃下将反应混合物搅拌30分钟。向混合物添加甲醇(2.00ml)，并用固体碳酸氢钠(约30.0mg)调整到ph＝7，得到悬浮液，过滤悬浮液，真空浓缩滤液，得到残余物。残余物通过制备型hplc(柱：waters xbridge 150
×
25mm
×
5um；流动相：[a：水(10mm nh4hco
3-b：acn]；b％：22％-52％]纯化，得到呈白色固体状的(r)-n-(1-(4-(2-((甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)-7-吗啉代酞嗪-1-胺(18.3mg，38.5μmol，72.7％产率，96.6％纯度)。lcms[m+1]:460.2。
[0536]1h nmr(400mhz,cd3od)δ8.66(s,1h),7.82(dd,j＝1.2,8.8hz,1h),7.65-7.60(m,1h),7.55(d,j＝2.0hz,1h),7.46-7.41(m,1h),7.36-7.30(m,3h),7.18(d,j＝5.2hz,2h),5.94(q,j＝6.8hz,1h),3.93-3.87(m,4h),3.81(s,2h),3.49-3.43(m,4h),2.28(s,3h),1.84(d,j＝6.8hz,3h)。
[0537]
实施例1-4
[0538]
(r)-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)-7-吗啉代酞嗪-1-胺
[0539][0540]
步骤a：向7-溴-1-氯酞嗪(244mg，1.00mmol，1.00eq.)和(r)-1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-胺(242mg，1.00mmol，1.00eq.，盐酸盐)在dmso(3.00ml)中的溶液中添加氟化钾(175mg，3.00mmol，70.4μl，3.00eq.)和diea(259mg，2.00mmol，349μl，2.00eq.)，在氮气气氛下在130℃下将反应混合物搅拌12小时。将反应混合物冷却到25℃并用乙酸乙酯(20.0ml)稀释，有机层用盐水(20.0ml
×
2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到残余物。残余物通过硅胶色谱(石油醚/乙酸乙酯＝10/1到1/1)纯化，得到呈褐色固体状的(r)-7-溴-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)酞嗪-1-胺(280mg，683μmol，68.2％产率)。lcms[m+1]:409.9。
[0541]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.92(s,1h),7.94(s,1h),7.91(dd,j＝1.6,8.4hz,1h),7.71(d,j＝8.4hz,1h),7.68(d,j＝7.6hz,1h),7.58(d,j＝8.0hz,1h),7.32-7.28(m,1h),6.02-5.94(m,1h),5.14(br d,j＝6.4hz,1h),2.58(s,3h),1.70(d,j＝6.8hz,3h)。
[0542]
步骤b：在氮气气氛下向(r)-7-溴-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)酞嗪-1-胺(30.0mg，73.1μmol,1.00eq.)和吗啉(12.7mg，146μmol,12.9μl,2.00eq.)在二噁烷(1.00ml)中的溶液中添加pd2(dba)3(6.70mg，7.31μmol，0.10eq.)、ruphos(6.82mg，14.6μmol，0.20eq)和碳酸铯(47.7mg，146μmol,2.00eq.)。在氮气气氛下在110℃下将反应混合物搅拌1小时。将反应混合物冷却到25℃，过滤并真空浓缩，得到残余物。残余物通过制备型
tlc(二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化，得到粗产物，粗产物通过制备型hplc(柱：waters xbridge c18150
×
50mm
×
10um；流动相：[a：水(10mm nh4hco3)，b：acn]；b％：40％-70％)纯化，得到呈白色固体状的(r)-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)-7-吗啉代酞嗪-1-胺(11.0mg，26.2μmol，35.8％产率，99.2％纯度)。lcms[m+1]:417.1。
[0543]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝8.56(s,1h),7.79-7.75(m,1h),7.72(d,j＝8.0hz,1h),7.62-7.57(m,2h),7.49(d,j＝7.2hz,1h),7.25(t,j＝7.6hz,1h),5.77(q,j＝6.8hz,1h),3.94-3.84(m,4h),3.51-3.42(m,4h),2.61(s,3h),1.64(d,j＝7.2hz,3h)。
[0544]
遵循通用反应方案iii的教示内容和为制备实施例1-1-1-4所述的过程，制备了表1中所示的以下式(i)化合物、实施例1-5到1-50：
[0545]
表1
[0546]
[0547]
[0548]
[0549]
[0550]
[0551]
[0552]
[0553]
[0554]
[0555]
[0556][0557]
实施例2-1
[0558]
(r)-n-(1-(4-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)-7-吗啉代酞嗪-1-胺
[0559][0560]
在15℃下向(r)-n-(1-(4-(2-((甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)-7-吗啉代酞嗪-1-胺(15.0mg，32.6μmol，1.00eq.)在二甲基甲酰胺(0.50ml)中的溶液中添加氢氧化钾(2.75mg，49.0μmol，1.50eq.)，并在15℃下将反应混合物搅拌1小时。向反应混合物逐滴添加4-甲基苯磺酸甲酯(7.90mg，42.4μmol，1.3eq.)在二甲基甲酰胺(0.20ml)中的溶液。在逐滴添加结束之后，将反应混合物加热到50℃并搅拌2小时。然后将反应混合物冷却到25℃，并向混合物添加乙酸乙酯(3.00ml)和水(3.00ml)。将各层分离，并将有机相合并，用水(3.00ml)洗涤两次并用无水硫酸钠干燥，得到残余物。残余物通过制备型hplc(柱：waters xbridge 150
×
25mm
×
5um；流动相：[水(0.05％氢氧化氨v/v)-acn]；b％：32％-62％，10min)纯化，得到呈灰白色固体状的(r)-n-(1-(4-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)-7-吗啉代酞嗪-1-胺(1.61mg，3.39μmol，10.4％产率，99.7％纯度)。lcms[m+1]:474.3。
[0561]1h nmr(400mhz,cd3od)δ8.65(s,1h),7.81(d,j＝8.8hz,1h),7.61(dd,j＝2.4,9.2hz,1h),7.54(d,j＝2.4hz,1h),7.48-7.41(m,1h),7.37-7.29(m,3h),7.21(d,j＝1.2hz,1h),7.18-7.12(m,1h),5.91(q,j＝6.8hz,1h),3.90-3.85(m,4h),3.60(s,2h),3.48-3.42(m,4h),2.17(s,6h),1.82(d,j＝6.8hz,3h)。
[0562]
实施例2-2
[0563]
n-((r)-1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)-7-(((s)-吡咯烷-3-基)氧基)酞嗪-1-胺
[0564][0565]
步骤a：在氮气气氛下在0℃下向(r)-7-溴-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)酞嗪-1-胺(80.0mg，195μmol，1.00eq.)在甲苯(2.00ml)中的溶液中添加氢化钠(15.6mg，390μmol，60.0％纯度，2.00eq.)。然后向反应混合物添加(s)-3-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(110mg，585μmol，3.00eq.)、pd2(dba)3(17.9mg，19.5μmol，0.10eq.)和tol-binap(132mg，195μmol，1.00eq.)，并在1小时内将混合物加热到100℃。将反应混合物冷却到25℃，倒入水(20.0ml)中并用乙酸乙酯(20.0ml
×
3)萃取。将合并的有机相真空浓缩，得到残余物。残余物通过反相hplc[水(0.1％tfa)-acn]纯化，得到呈黄色固体状的(s)-3-((4-(((r)-1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)酞嗪-6-基)氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(35.0mg，44.0μmol，23.0％产率，65.0％纯度)lcms[m+1]:517.0。
[0566]
步骤b：在氮气气氛下在0℃下向(s)-3-((4-(((r)-1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)酞嗪-6-基)氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(35.0mg，44.0μmol，1.00eq.)在乙腈(1.00ml)中的溶液中逐滴添加hcl(在二噁烷中为4.00m，11.0μl，1.00eq.)。在0℃下将反应混合物搅拌30分钟，然后真空浓缩，得到残余物。残余物通过反相制备型hplc(柱：phenomenex gemini-nx c18 75
×
30mm
×
3um；流动相：[水(0.1％tfa)-acn]；b％：25％-35％)纯化，得到呈黄色固体状的n-((r)-1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)-7-(((s)-吡咯烷-3-基)氧基)酞嗪-1-胺(8.01mg，18.2μmol，41.0％产率，95％纯度)。lcms[m+1]:417.1。
[0567]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝9.15(s,1h),8.28-8.21(m,2h),7.80-7.72(m,2h),7.59(d,j＝7.6hz,1h),7.37-7.27(t,j＝7.6hz,1h),5.67-5.57(m,2h),3.80-3.67(m,2h),3.64-3.47(m,2h),2.63(s,3h),2.55-2.46(m,2h),1.73(d,j＝6.8hz,3h)。
[0568]
遵循通用反应方案iii的教示内容和为制备实施例2-2所述的过程，制备了表2中所示的以下式(i)化合物、实施例2-3到2-12：
[0569]
表2
[0570]
[0571][0572][0573]
实施例3-1
[0574]
(r)-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)-7-(哌嗪-1-基)吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-胺
[0575][0576]
步骤a：在氮气气氛下向1,7-二氯吡啶并[3,4-d]哒嗪(40.0mg，200μmol，1.00eq.)和(r)-1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-胺(40.6mg，200μmol，1.00eq.)在dmso(1.00ml)中的溶液中添加二异丙基乙胺(77.5mg，600μmol，105μl，3.00eq.)和氟化钾(34.8mg，600μmol，14.05μl，3.00eq.)。在氮气气氛下在130℃下将反应混合物搅拌1小时，然后冷却到25℃，倒入水(3.00ml)中并搅拌5分钟。水相用乙酸乙酯(5.00ml
×
3)萃取，合并的有机相用盐水(3.00ml
×
2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到残余物。残余物通过制备型tlc(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化，得到呈黄色固体状的(r)-7-氯-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-胺(30.0mg，81.8μmol，40.9％产率)。lcms[m+1]:367.2。
[0577]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝9.14(s,1h),8.95(s,1h),8.49(s,1h),7.69(d,j＝7.6hz,1h),7.51(d,j＝7.6hz,1h),7.26(t,j＝8.0hz,1h),5.76(q,j＝6.8hz,1h),2.63(s,3h),1.64(d,j＝6.8hz,3h)。
[0578]
步骤b：在氮气气氛下向(r)-7-氯-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-胺(18.0mg，49.1μmol，1.00eq.)和哌嗪-1-羧酸叔丁酯(13.7mg，73.6μmol，1.50eq.)在二噁烷(0.50ml)中的溶液中添加叔丁醇钾(1.00m，98.2μl，2.00eq.)和ruphos-pd-g3(4.10mg，4.91μmol，0.10eq.)。在100℃下将反应混合物搅拌1小时，然后冷却到25℃并真空浓缩，得到残余物。残余物通过制备型tlc(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化，得到呈黄色固体状的(r)-4-(1-((1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)吡啶并[3,4-d]哒嗪-7-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(18.0mg，粗品)。lcms[m+1]:517.3。
[0579]
步骤c：向(r)-4-(1-((1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)吡啶并[3,4-d]哒嗪-7-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(11.0mg，21.3μmol，1.00eq.)在乙腈(1.00ml)中的溶液中添加在二噁烷中的hcl(3m，0.50ml)。在0℃下将反应混合物搅拌1小时，然后真空浓缩，得到残余物。残余物通过制备型hplc(柱：phenomenex luna c18 150
×
25mm
×
10um；流动相：[水(0.1％tfa)-acn]；b％：10％-40％)纯化，得到呈白色固体状的(r)-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)-7-(哌嗪-1-基)吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-胺(4.50mg，8.48μmol，39.8％产率，三氟乙酸盐)。lcms[m+1]＝417.1。
[0580]
1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝9.18(s,1h),9.05(s,1h),7.76(s,1h),7.71(d,j＝8.0hz,1h),7.56(d,j＝7.2hz,1h),7.36-7.27(m,1h),5.58(q,j＝6.8hz,1h),4.30-4.21(m,4h),3.50-3.38(m,4h),2.61(s,3h),1.69(d,j＝6.8hz,3h)。
[0581]
sfc：chiralpak oj-3(50
×
4.6mm i.d.，3um)；流动相：co2为a相，meoh(0.05％dea)为b相；梯度洗脱：50％meoh(0.05％dea)在co2中从5％到40％。流速：3ml/min；检测器：
pda；柱温：35℃；背压：100bar。
[0582]
遵循通用反应方案iii的教示内容和为制备实施例3-1所述的过程，制备了表3中所示的以下式(i)化合物、实施例3-2-3-6：
[0583]
表3
[0584]
[0585][0586]
实施例4-1
[0587]
(r)-6,7-二甲氧基-4-甲基-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)酞嗪-1-胺
[0588][0589]
将1-氯-6,7-二甲氧基-4-甲基酞嗪(100mg，419μmol，1.00eq.)、(r)-1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-胺(85.1mg，419μmol，1.00eq.)、brettphos pd g3(38.0mg，41.9μmol，0.10eq.)和叔丁醇钾(1.00m，1.26ml，3.00eq.)在甲苯(2.00ml)中的混合物脱气并用氮气吹扫3次。在氮气气氛下在100℃下将反应混合物搅拌1小时，然后冷却到25℃，过滤并在减压下浓缩滤液，得到残余物。残余物通过制备型hplc(柱：waters xbridge beh c18100
×
25mm
×
5um；流动相：[水(10mm nh4hco3)-acn]；b％：35％-65％)纯化，得到呈白色固体状的(r)-6,7-二甲氧基-4-甲基-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)酞嗪-1-胺(8.24mg，20.3μmol，4.84％产率，99.8％纯度)。lcms[m+1]:406.2。
[0590]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝7.83(s,1h),7.76(d,j＝7.6hz,1h),7.51(d,j＝8.0hz,1h),7.39(d,j＝6.8hz,1h),7.33-7.27(m,1h),7.22(s,1h),5.73-5.64(m,1h),4.01(s,3h),3.95(s,3h),2.58(s,6h),1.55(d,j＝7.2hz,3h)。
[0591]
遵循通用反应方案iv的教示内容和为制备实施例4-1所述的过程，制备了表4中所示的以下式(i)化合物、实施例4-2-4-4：
[0592]
表4
[0593]
[0594][0595]
实施例5-1
[0596]
(r)-n-(1-(5-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)-4-异丙基-6,7-二甲氧基酞嗪-1-胺
[0597][0598]
步骤a：在130℃下将(r)-1-(5-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙烷-1-胺(200mg，768μmol，0.90eq.)、1,4-二氯-6,7-二甲氧基-酞嗪(221mg，853μmol，1.00eq.)、n,n-二异丙基乙胺(331mg，2.56mmol，446μl，3.00eq.)和氟化钾(149mg，2.56mmol，60.0μl，3.00eq.)在dmso(3.00ml)中的混合物搅拌12小时。然后将反应混合物冷却到25℃，然后添加乙酸乙酯(5.00ml)和水(8.00ml)并分离各层。水相用乙酸乙酯(10.0ml
×
2)萃取，合并的有机层用盐水(10.0ml
×
2)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过制备型tlc(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化，得到呈黄色固体状的(r)-4-氯-n-(1-(5-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)-6,7-二甲氧基酞嗪-1-胺(100mg，24.3％产率)。lcms[m+1]:483.0。
[0599]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.53-7.49(m,1h),7.44(s,1h),7.44-7.40(m,1h),7.34-7.29(m,2h),7.13-7.05(m,2h),6.99(s,1h),6.06-5.96(m,1h),4.09(s,3h),4.07(s,
3h),3.60(s,2h),2.27(s,6h),1.84(d,j＝6.4hz,3h)。
[0600]
步骤b：在0℃下向(r)-4-氯-n-(1-(5-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)-6,7-二甲氧基酞嗪-1-胺(40.0mg，82.8μmol，1.00eq.)和乙酰丙酮铁(iii)(80.0mg，226μmol，2.74eq.)在thf(1.00ml)和1-甲基-2-吡咯烷酮(0.01ml)中的溶液中逐滴添加氯化异丙基镁(在thf中为3.00m，600μl，21.7eq.)。在添加之后，在25℃下将混合物反应物搅拌10分钟。反应混合物通过添加饱和氯化铵溶液(5.00ml)淬灭，并用乙酸乙酯(1.00ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(2.00ml
×
2)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过制备型hplc(柱：phenomenex luna c18 150
×
25mm
×
10um；流动相：[水(0.1％tfa)-acn]；b％：16％-46％)纯化并冻干，得到呈灰白色固体状的(r)-n-(1-(5-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)-4-异丙基-6,7-二甲氧基酞嗪-1-胺(10.3mg，20.4％产率，99.0％纯度，三氟乙酸盐)。lcms[m+1]:491.3。
[0601]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝8.11(s,1h),7.68(s,1h),7.66-7.63(m,1h),7.56-7.47(m,3h),7.26-7.21(m,1h),7.04(d,j＝3.6hz,1h),5.73-5.60(m,1h),4.52(s,2h),4.12(s,3h),4.11(s,3h),3.97-3.88(m,1h),2.73(s,6h),1.91(d,j＝6.8hz,3h),1.53-1.42(m,6h)。
[0602]
sfc条件：柱：chiralcel od-3 50
×
4.6mm i.d.，3um；流动相：co2为a相，meoh(0.05％dea)为b相；梯度洗脱：meoh(0.05％dea)在co2中从5％到40％；流速：3ml/min；检测器：pda；柱温：35℃；背压：100bar。
[0603]
遵循通用反应方案i的教示内容和为制备实施例5-1所述的过程，制备了表5中所示的以下式(i)化合物、实施例5-2-5-3：
[0604]
表5
[0605][0606]
实施例5-4
[0607]
(r)-n-(1-(5-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)-6,7-二甲氧基-4-(三氟甲基)酞嗪-1-胺
[0608][0609]
步骤a：在氮气气氛下在-78℃下向2-溴-4,5-二甲氧基苯甲酸(0.30g，1.15mmol，1.00eq.)在四氢呋喃(20.0ml)中的溶液中添加n-buli(1.60m，1.72ml，2.40eq.)。在-78℃搅拌1小时之后下，在相同温度下逐滴添加2,2,2-三氟乙酸乙酯(163mg，1.15mmol，159μl，1.00eq.)。在-78℃下将混合物搅拌1小时，升温到20℃，并在20℃下搅拌3小时。将反应混合物倒入冰水(20.0ml)中并用乙酸乙酯(20.0ml
×
3)萃取。合并的有机相用盐水(20.0ml
×
3)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝5/1到0/1)纯化，得到呈黄色油状的4,5-二甲氧基-2-(2,2,2-三氟乙酰基)苯甲酸(0.10g，30.9％产率)。lcms[m+1]
+
＝279.0。
[0610]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.30(s,1h),7.11(s,1h),4.03(s,3h),3.98(s,3h)。
[0611]
步骤b：在20℃下向4,5-二甲氧基-2-(2,2,2-三氟乙酰基)苯甲酸(0.10g，359μmol，1.00eq.)在乙醇(10.0ml)中的悬浮液中添加nh2nh2·
h2o(180mg，3.59mmol，175μl，10.0eq.)。在100℃下将混合物搅拌3小时。完成之后，在减压下浓缩反应物，得到呈黄色固体状的6,7-二甲氧基-4-(三氟甲基)酞嗪-1(2h)-酮(80.0mg，粗品)。lcms[m+1]
+
＝316.1。
[0612]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝7.70(s,1h),7.15(s,1h),3.98(s,3h),3.96(s,3h)。
[0613]
步骤c：在25℃下向6,7-二甲氧基-4-(三氟甲基)酞嗪-1(2h)-酮(300mg，1.09mmol，1.00eq.)在pocl3(4.95g，32.3mmol，3.00ml，29.5eq.)中的溶液中添加n,n-二异丙基乙胺(707mg，5.47mmol，953μl，5.00eq.)。在100℃下将混合物搅拌30分钟。在减压下浓缩反应混合物，得到残余物。然后用乙酸乙酯(10.0ml)稀释并倒入冰水(10.0ml)中，用乙酸乙酯(10.0ml
×
3)萃取。合并的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝10/1到1/1)纯化，得到呈黄色固体状的1-氯-6,7-二甲氧基-4-(三氟甲基)酞嗪(50.2mg，171μmol，15.7％产率)。lcms[m+1]
+
＝293.0。
[0614]1h nmr(500mhz,cdcl3)δ＝7.60(s,1h),7.44(d,j＝1.0hz,1h),4.15(s,3h),4.12(s,3h)。
[0615]
步骤d：向(r)-1-(5-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙烷-1-胺(50.0mg，
168μmol，1.00eq.，hcl)和1-氯-6,7-二甲氧基-4-(三氟甲基)酞嗪(49.3mg，168μmol，1.00eq.)在dmso(1.00ml)中的溶液中添加n,n-二异丙基乙胺(87.1mg，674μmol，117μl，4.00eq.)和氟化钾(2.94mg，50.5μmol，1.18μl，0.30eq.)。完成之后，过滤反应混合物，并通过制备型hplc(柱：agela durashell c18 150
×
25mm
×
5um；流动相：a相：[水(0.05％nh3h2o+10mm nh4hco3)]，b相：乙腈；b％：60％-90％)纯化残余物，得到呈白色固体状的(r)-n-(1-(5-(2-((二甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)-6,7-二甲氧基-4-(三氟甲基)酞嗪-1-胺(4.51mg，8.72μmol，5.18％产率，99.9％纯度)。lcms[m+1]
+
＝517.1.
[0616]1h nmr(500mhz,cdcl3)δ＝7.51-7.46(m,1h),7.43(dd,j＝1.5,7.0hz,1h),7.36(d,j＝1.5hz,1h),7.35-7.28(m,2h),7.13(s,2h),6.99(br s,1h),6.20-6.13(m,1h),5.39(br s,1h),4.08(s,3h),4.07(s,3h),3.53(br s,2h),2.25(br s,6h),1.87(d,j＝6.5hz,3h).
[0617]
实施例6-1
[0618]
(r)-4-甲基-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)酞嗪-1-胺
[0619]
步骤a：将5-溴-2-碘苯甲酸甲酯(5.00g，14.7mmol，1.00eq.)、三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡烷(5.60g，15.4mmol，5.20ml，1.05eq.)和pd(pph3)2cl2(309mg，440μmol，0.03eq.)在二噁烷(50.0ml)中的混合物脱气并用氮气吹扫3次，然后在氮气气氛下在80℃下将反应混合物搅拌10小时。将反应混合物冷却到25℃，通过添加水(50.0ml)淬灭，然后用乙酸乙酯(50.0ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(20.0ml
×
3)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到呈黄色油状的5-溴-2-(1-乙氧基乙烯基)苯甲酸甲酯(6.00g，粗品)，其直接用于下一步骤中。
[0620]
步骤b：向5-溴-2-(1-乙氧基乙烯基)苯甲酸甲酯(6.00g，粗品)在thf(50.0ml)中的溶液中添加盐酸水溶液(10％，25.0ml)。在20℃下将反应混合物搅拌1小时。向反应混合物添加水(50.0ml)，水层用乙酸乙酯(100ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(30.0ml
×
2)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝1/0到50/1)纯化，得到呈黄色油状的2-乙酰基-5-溴苯甲酸甲酯(2.50g，67.0％产率)。
[0621]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.97(d,j＝2.0hz,1h),7.70(dd,j＝2.0,8.2hz,1h),7.32(d,j＝8.4hz,1h),3.91(s,3h),2.53(s,3h)。
[0622]
步骤c：向2-乙酰基-5-溴苯甲酸甲酯(1.50g，5.83mmol，1.00eq.)在乙醇(30.0ml)中的溶液中添加水合肼(876mg，17.5mmol，851μl，3.00eq.)。在95℃下将反应混合物搅拌30分钟。然后将反应混合物冷却到25℃，并在减压下浓缩，得到残余物。残余物用乙醇研磨10分钟，得到悬浮液，过滤悬浮液，收集滤饼并加以真空干燥，得到呈白色固体状的7-溴-4-甲基酞嗪-1(2h)-酮(0.70g，2.93mmol，50.2％产率)。lcms[m+1]
+
:239.0。
[0623]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝12.57(br s,1h),8.32(d,j＝2.0hz,1h),8.11(dd,j＝2.0,8.4hz,1h),7.88(d,j＝8.4hz,1h),2.50(s,3h)。
[0624]
步骤d：将7-溴-4-甲基-酞嗪-1-醇(1.00g，4.18mmol，1.00eq)、1-甲基哌嗪(628mg，6.27mmol，696μl，1.50eq)、ruphos(195mg，418μmol，0.10eq)、pd2(dba)3(192mg，209μmol，0.05eq)和t-buok(在thf中为1m，8.37ml，2.00eq)在二噁烷(10.0ml)中的混合物脱气并用n2吹扫3次，然后在n2气氛下在110℃下将混合物搅拌1.5小时。反应混合物通过添加水(20ml)淬灭，然后用etoac(10ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(5ml
×
2)洗涤，用na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。粗产物用etoac(3ml)研磨10min，得到呈黄色固体状的4-甲基-7-(4-甲基哌嗪-1-基)酞嗪-1(2h)-酮(800mg，3.10mmol，74.0％产率)。lcms[m+1]
+
:259.1。
[0625]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝12.13(s,1h),7.74(d,j＝8.8hz,1h),7.56(dd,j＝2.8,9.0hz,1h),7.50(d,j＝2.6hz,1h),3.40-3.34(m,4h),2.49-2.45(m,4h),2.43(s,3h),2.23(s,3h)。
[0626]
步骤e：加入4-甲基-7-(4-甲基哌嗪-1-基)酞嗪-1(2h)-酮(100mg，387μmol，1.00eq)在氧氯化磷(1.61g，10.5mmol，976μl，27.1eq.)中的溶液。在110℃下将混合物搅拌16小时。然后将反应混合物冷却到25℃，并真空浓缩，得到残余物。将残余物溶解于水(10.0ml)中，并用饱和硫酸钠调整到ph＝9，并用乙酸乙酯(5.00ml
×
2)萃取。有机层用无水硫酸钠干燥并真空浓缩，得到呈棕色固体状的4-氯-1-甲基-6-(4-甲基哌嗪-1-基)酞嗪(70.0mg，粗品)，其不经纯化即可直接使用。lcms[m+1]
+
:277.1。
[0627]
步骤f：向-氯-1-甲基-6-(4-甲基哌嗪-1-基)酞嗪(60.0mg，217μmol，1.00eq.)和(r)-1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-胺(48.5mg，238μmol，1.10eq.)在二甲亚砜(3.00ml)中的溶液中添加氟化铯(98.8mg，650μmol，24.0μl，3.00eq.)和n,n-二异丙基乙胺(140mg，1.08mmol，189μl，5.00eq.)。然后在120℃下将混合物搅拌16小时。然后将反应混合物倒入水(1.50ml)中，并通过制备型hplc(柱：boston green ods 150
×
30mm
×
5um；流动相：[水(0.1％tfa)-acn]；b％：25％-45％，10min)纯化。产物进一步通过制备型hplc(柱：agela durashell c18 150
×
25mm
×
5um；流动相：[水(0.05％nh3h2o+10mm nh4hco3)-acn]；b％：38％-68％，10min)纯化，得到呈白色固体状的(r)-4-甲基-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)酞嗪-1-胺(17.0mg，3.83μmol，17.6％产率，99.9％纯度)。lcms[m+1]
+
:444.1。
[0628]1h nmr(500mhz,cd3od)δ＝7.91(d,j＝9.50hz,1h),7.70(d,j＝8.50hz,1h),7.55-7.63(m,2h),7.48(d,j＝8.00hz,1h),7.23(t,j＝7.50hz,1h),5.75-5.70(m,1h),3.55(br s,4h),2.68(br t,j＝5.00hz,4h),2.59-2.63(m,6h),2.40(s,3h),1.63(d,j＝7.00hz,3h)。
[0629]
实施例6-2
[0630]
(r)-4-甲基-n-(1-(5-(2-((甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)-7-吗啉代吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-胺
[0631]
步骤a：向5-溴-2-氯异烟酸(12.0g，50.6mmol，1.00eq)在meoh(100ml)中的溶液中逐滴添加socl2(7.25g，60.9mmol，4.42ml，1.20eq)，然后将混合物加热到75℃并搅拌8小时。然后在减压下浓缩反应混合物，得到残余物。残余物用etoac(100ml)稀释，用饱和nahco3(100ml)洗涤，用na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到呈黄色油状的5-溴-2-氯异烟酸甲酯(12.0g，粗品)。lcms[m+1]
+
:252.0。
[0632]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝8.78(s,1h),7.89(s,1h),3.91(s,3h)。
[0633]
步骤b：将5-溴-2-氯异烟酸甲酯(11.0g，43.92mmol，1.00eq)、三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡烷(16.7g，46.1mmol，15.6ml，1.05eq)和pd(pph3)2cl2(1.23g，1.76mmol，0.04eq)在二噁烷(110ml)中的溶液脱气并用n2吹扫3次，然后在n2气氛下在80℃下加热混合物16小时。然后，通过添加水(400ml)使反应混合物淬灭，接着用etoac(150ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(200ml)洗涤，用na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到呈黄色油状的2-氯-5-(1-乙氧基乙烯基)异烟酸甲酯(10.6g，粗品)。
[0634]
步骤c：向2-氯-5-(1-乙氧基乙烯基)异烟酸甲酯(10.6g，43.9mmol，1.00eq)在thf(100ml)中的溶液中逐滴添加hcl(102g，280mmol，100ml，在水中为10％纯度，6.38eq)，并在20℃下将混合物搅拌16小时。然后，反应混合物通过在0℃下添加nahco3(300ml)淬灭，接着用etoac(100ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(100ml)洗涤，用na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝1/0到3/1)纯化，得到呈白色固体状的5-乙酰基-2-氯异烟酸甲酯(4.50g，21.1mmol，48.0％产率)。
[0635]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝8.98(s,1h),7.85(s,1h),3.84(s,3h),2.61(s,3h)。
[0636]
步骤d：向5-乙酰基-2-氯异烟酸甲酯(1.00g，4.68mmol，1.00eq)在etoh(15.0ml)中的溶液中添加水合肼(703mg，14.0mmol，683μl，3.00eq)，在95℃下将混合物搅拌30分钟。
然后过滤反应混合物，并在减压下浓缩滤饼，得到残余物，获得呈白色固体状的7-氯-4-甲基吡啶并[3,4-d]哒嗪-1(2h)-酮(0.85g，粗品)。lcms[m+1]
+
:196.1。
[0637]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝9.20(s,1h),8.10(s,1h),2.58(s,3h)。
[0638]
步骤e：将7-氯-4-甲基吡啶并[3,4-d]哒嗪-1(2h)-酮(750mg，3.83mmol，1.00eq)、吗啉(668mg，7.67mmol，675μl，2.00eq)在二噁烷(10.0ml)、tbuok(在thf中为1.00m，11.5ml，3.00eq)、ruphos(179mg，383μmol，0.10eq)、pd2(dba)3(176mg，192μmol，0.05eq)中的溶液脱气并用氮气吹扫3次，并在氮气气氛下在110℃下将混合物搅拌3小时。过滤反应混合物，并在减压下浓缩滤液，得到残余物。残余物通过制备型hplc(柱：phenomenex luna c18(250*70mm，15um)；流动相：[水(0.05％hcl)-acn]；b％：10％-40％)纯化，得到呈白色固体状的4-甲基-7-吗啉代吡啶并[3,4-d]哒嗪-1(2h)-酮(500mg，2.03mmol，49.2％产率)。lcms[m+1]
+
:247.0。
[0639]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝12.26(s,1h),8.89(s,1h),7.23(s,1h),3.75-3.70(m,4h),3.68-3.63(m,4h),2.46(s,3h)。
[0640]
步骤f：在110℃下将-甲基-7-吗啉代吡啶并[3,4-d]哒嗪-1(2h)-酮(500mg，2.03mmol，1.00eq)在pocl3(6.23g，40.6mmol，3.77ml，20.0eq)中的溶液搅拌3小时。然后在减压下浓缩反应混合物，除去pocl3。残余物用h2o(100ml)稀释，然后使用nahco3固体调整到ph＝8，然后用乙酸乙酯(50.0ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(50.0ml)洗涤，用na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到呈黄色固体状的4-(1-氯-4-甲基吡啶并[3,4-d]哒嗪-7-基)吗啉(500mg，粗品)。lcms[m+1]
+
:264.9。
[0641]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝9.13(s,1h),6.89(s,1h),3.92-3.86(m,4h),3.81-3.75(m,4h),2.91(s,3h)。
[0642]
步骤g：在手套箱中向4-(1-氯-4-甲基吡啶并[3,4-d]哒嗪-7-基)吗啉(50.0mg，189μmol，1.00eq.)和(r)-(2-(5-(1-氨基乙基)噻吩-2-基)苯甲基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(65.5mg，189μmol，1.00eq.)在二甲亚砜(2.00ml)中的混合物中添加氟化铯(57.4mg，378μmol，13.9μl，2.00eq.)和n,n-二异丙基乙胺(48.8mg，378μmol，65.8μl，2.00eq.)。在130℃下将混合物搅拌3小时，然后冷却到室温，向反应混合物添加水(30.0ml)并用乙酸乙酯(3
×
20ml)萃取。合并的有机层用盐水(20.0ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过制备型hplc(柱：agela durashell c18 150
×
25mm
×
5um；使用水(0.04％nh4oh+10mm nh4hco3)和乙腈作为洗脱剂，流动相a：水(0.04％nh3h2o+10mm nh4hco3)-acn，流动相b：乙腈；梯度：24％-54％b)来纯化，得到呈黄色固体状的(r)-甲基(2-(5-(1-((4-甲基-7-吗啉代吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-基)氨基)乙基)噻吩-2-基)苯甲基)氨基甲酸叔丁酯(20.0mg，34.8μmol，18.4％产率)。lcms[m+1]
+
:575.4。
[0643]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝9.25(s,1h),7.42(s,1h),7.17-7.37(m,5h),7.10(d,j＝3.6hz,1h),6.86(br s,1h),5.59-5.68(m,1h),4.46-4.52(m,2h),3.92(br s,4h),3.76-3.84(m,4h),2.84(s,3h),2.70(s,3h),1.80(d,j＝7.2hz,3h),1.45(br s,9h)。
[0644]
步骤h：向(r)-甲基(2-(5-(1-((4-甲基-7-吗啉代吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-基)氨基)乙基)噻吩-2-基)苯甲基)氨基甲酸叔丁酯(20.0mg，34.8μmol，1.00eq.)在二氯甲烷(1.00ml)中的混合物中添加三氟乙酸(0.20ml)。完成之后，浓缩混合物，并通过制备型hplc(柱：agela durashell c18 150
×
25mm
×
5um；使用水(0.04％nh3h2o+10mm nh4hco3)和乙腈
作为洗脱剂，流动相a：水(0.04％nh4oh+10mm nh4hco3)，流动相b：乙腈；梯度：35％-65％b)来纯化残余物，得到呈白色固体状的(r)-4-甲基-n-(1-(5-(2-((甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)-7-吗啉代吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-胺(4mg，8.43μmol，24.2％产率)。lcms[m+1]
+
:475.3。
[0645]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝9.04(s,1h),7.43(br d,j＝6.4hz,1h),7.25-7.36(m,4h),7.08(d,j＝2.8hz,1h),6.92(d,j＝3.2hz,1h),5.83(br d,j＝6.8hz,1h),3.80-3.86(m,6h),3.70-3.77(m,4h),2.69(s,3h),2.28(s,3h),1.79(d,j＝6.8hz,3h)。
[0646]
遵循通用反应方案ii和iv的教示内容和为制备实施例6-1、6-2、10-1和10-2所述的过程，制备了表6中所示的以下式(i)化合物、实施例6-3到6-19：
[0647]
表6
[0648]
[0649]
[0650]
[0651]
[0652][0653]
实施例7-1
[0654]
4-甲基-n-((r)-1-(5-(2-((甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)-7-(((s)-四氢呋喃-3-基)氧基)酞嗪-1-胺
[0655]
[0656][0657]
步骤a：在氮气气氛下在0℃下向1-(4-(苯甲氧基)-2-羟苯基)乙烷-1-酮(5.00g，20.6mmol，1.00eq)和吡啶(4.90g，61.9mmol，5.00ml，3.00eq)在dcm(100ml)中的混合物中缓慢地逐滴添加三氟甲基磺酰基三氟甲磺酸酯(11.7g，41.3mmol，6.81ml，2.00eq)。然后在20℃下将反应混合物搅拌16小时。将反应混合物倒入水(100ml)中并搅拌5分钟。水相用dcm(50.0ml
×
3)萃取。合并的有机相用盐水(50.0ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到残余物。残余物通过硅胶色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝10/1到3/1)纯化，得到呈黄色固体状的2-乙酰基-5-(苯甲氧基)苯基三氟甲磺酸酯(7.40g，17.8mmol，86.2％产率，90％纯度)。lcms[m+1]
+
:374.8。
[0658]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.85(d,j＝8.8hz,1h),7.44-7.36(m,5h),7.03(dd,j＝2.4,8.8hz,1h),6.90(d,j＝2.4hz,1h),5.14(s,2h),2.60(s,3h)。
[0659]
步骤b：在氮气气氛下在20℃下向2-乙酰基-5-(苯甲氧基)苯基三氟甲磺酸酯(13.0g，34.7mmol，1.00eq)和1,1-双(二苯膦基)二茂铁(1.93g，3.47mmol，0.10eq)在dmf(100ml)和甲醇(10.0ml)中的混合物一次性添加三乙胺(17.6g，174mmol，24.2ml，5.00eq)和乙酸钯(ii)(780mg，3.47mmol，0.10eq)。将反应混合物加热到80℃，并在一氧化碳的气氛(50psi)下搅拌16小时。然后将混合物冷却到15℃，并在40℃下在减压下浓缩，得到残余物。将残余物倒入水(100ml)中并搅拌5分钟。水相用乙酸乙酯(50.0ml
×
3)萃取。合并的有机相用盐水(50.0ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过硅胶色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝5/1到4/1)纯化，得到呈黄色固体状的2-乙酰基-5-(苯甲氧基)苯甲酸甲酯(5.60g，16.9mmol，48.8％产率，86％纯度)。lcms[m+1]
+
:285.0。
[0660]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.58(d,j＝8.8hz,1h),7.44-7.35(m,5h),7.26(d,j＝2.8hz,1h),7.08(dd,j＝2.4,8.4hz,1h),5.14(s,2h),3.91(s,3h),2.53(s,3h)。
[0661]
步骤c：在25℃下向2-乙酰基-5-(苯甲氧基)苯甲酸甲酯(4.60g，16.2mmol，1.00eq)在乙醇(50.0ml)中的溶液中缓慢地逐滴添加水合肼(2.48g，48.5mmol，2.41ml，98％纯度，3.00eq)，然后在95℃下将反应混合物搅拌30分钟。将反应混合物冷却到15℃，倒入冰水(w/w＝1/1)(100ml)中并搅拌5分钟，得到悬浮液。过滤所得悬浮液，收集滤饼并加以减压干燥，得到呈黄色固体状的7-(苯甲氧基)-4-甲基酞嗪-1(2h)-酮(4.00g，粗品)。lcms
(((s)-四氢呋喃-3-基)氧基)酞嗪-1-胺(2.20mg，4.64μmol，26.6％产率)。lcms[m+1]
+
:475.2。
[0667]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝8.02(d,j＝8.8hz,1h),7.70(d,j＝2.4hz,1h),7.39-7.52(m,2h),7.25-7.38(m,3h),7.09(d,j＝2.8hz,1h),6.92(d,j＝3.2hz,1h),5.90(q,j＝6.8hz,1h),5.30(br s,1h),3.88-4.09(m,4h),3.81(s,2h),2.72(s,3h),2.29-2.44(m,1h),2.26(s,3h),2.18(br dd,j＝5.6,12.0hz,1h),1.81(d,j＝7.2hz,3h)。
[0668]
遵循通用反应方案vi的教示内容和为制备实施例7-1所述的过程，制备了表7中所示的以下式(i)化合物、实施例7-2到7-7。
[0669]
表7
[0670]
[0671][0672]
遵循通用反应方案iv的教示内容和为制备实施例8-3(下文)所述的过程，可以制备以下式(i)化合物、实施例8-1，并且制备了表8中所示的实施例8-2：
[0673]
实施例8-1
[0674]
(r)-4,7-二甲基-n-(1-(5-(2-((甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)酞嗪-1-胺
[0675][0676]
表8
[0677][0678]
实施例8-3
[0679][0680]
(r)-7-甲氧基-4-甲基-n-(1-(5-(2-((甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)酞嗪-1-胺
[0681][0682]
步骤a：向2-溴-5-甲氧基苯甲酸甲酯(3.00g，12.2mmol，1.00eq.)和三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡烷(4.64g，12.9mmol，4.34ml，1.05eq)在二噁烷(30.0ml)中的溶液中添加pd(pph3)2cl2(258mg，367μmol，0.03eq.)。然后在氮气气氛下在80℃下将混合物搅拌18小时。然后，将反应混合物倒入水(30.0ml)中并用乙酸乙酯(30.0ml
×
2)萃取。有机层用盐水(30.0ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。混合物不经进一步纯化直接使用，得到呈棕色油状的2-(1-乙氧基乙烯基)-5-甲氧基苯甲酸甲酯(2.80g，11.9mmol，96.8％产率，假设100％纯度)。lcms[m+1]
+
:237.1。
[0683]
步骤b：在20℃下将2-(1-乙氧基乙烯基)-5-甲氧基苯甲酸(2.50g，10.6mmol，1.00eq.)和10％氯化氢水溶液(386mg，10.6mmol，378μl，1.00eq.)在thf(20.0ml)中的混合物搅拌1小时。然后将反应混合物倒入水(20.0ml)中，并用乙酸乙酯(25.0ml
×
3)萃取。有机层用盐水(50.0ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩，得到残余物。残余物通过快速硅胶色谱(0～20％乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到呈黄色油状的2-乙酰基-5-甲氧基苯甲酸甲酯(1.40g，5.72mmol，54.1％产率，85.1％纯度)。lcms[m+1]
+
:209.0。
[0684]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝2.51(s,3h)3.86(d,j＝10.0hz,6h)7.06-7.15(m,2h)7.70-7.79(m,1h)。
[0685]
步骤c：向2-乙酰基-5-甲氧基苯甲酸甲酯(1.30g，6.24mmol，1.00eq.)在乙醇(15.0ml)中的溶液中添加水合肼(938mg，18.7mmol，910μl，98％纯度，3.00eq.)。然后在氮气气氛下在80℃下将混合物搅拌1小时。然后将反应混合物倒入水(20.0ml)中，并用乙酸乙酯(30.0ml
×
2)萃取。有机层用盐水(30.0ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥，并真空浓缩，得到残余物。粗产物不经纯化即用于下一步骤，得到呈白色固体状的7-甲氧基-4-甲基酞嗪-1(2h)-酮(1.10g，5.74mmol，91.9％产率，99.3％纯度)。lcms[m+1]
+
:191.0。
[0686]
步骤d：在115℃下将7-甲氧基-4-甲基酞嗪-1(2h)-酮(0.90g，4.73mmol，1.00eq.)和氧氯化磷(15.2g，99.4mmol，9.23ml，21.0eq.)的混合物搅拌18小时。然后将混合物倒入水(25.0ml)中。添加饱和碳酸钠溶液，直到ph＝9。混合物用乙酸乙酯(2
×
25.0ml)萃取。合并的有机相用盐水(饱和，20.0ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，并在减压下蒸发溶剂。残余物通过制备型tlc(sio2，二氯甲烷:甲醇＝10:1)的柱色谱纯化，得到呈白色固体状的4-氯-6-甲氧基-1-甲基酞嗪(240mg，1.14mmol，24.0％产率，98.8％纯度)。lcms[m+1]
+
:209.0。
[0687]
步骤e：在130℃下将(r)-(2-(5-(1-氨基乙基)噻吩-2-基)苯甲基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(49.3mg，142μmol，0.99eq.)、4-氯-6-甲氧基-1-甲基酞嗪(30.0mg，144μmol，1.00eq.)和氟化铯(66.0mg，435μmol，16.0μl，3.02eq.)在二甲亚砜(1.00ml)中的混合物搅拌18小时。然后将混合物冷却到25℃，用乙酸乙酯(5.00ml)稀释，用盐水(3.00
×
5ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，并在减压下蒸发溶剂，得到残余物。残余物通过制备型hplc(柱：boston green ods 150
×
30mm
×
5um；流动相：a相：[水(0.1％tfa)]，b相：乙腈；b％：38％-68％)纯化，得到呈白色固体状的(r)-(2-(5-(1-((7-甲氧基-4-甲基酞嗪-1-基)氨基)乙基)噻吩-2-基)苯甲基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(10.0mg，18.7μmol，13.0％产率，96.8％纯度)。lcms[m+1]
+
:519.2。
[0688]
步骤f：向(r)-(2-(5-(1-((7-甲氧基-4-甲基酞嗪-1-基)氨基)乙基)噻吩-2-基)苯甲基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(8.00mg，15.4μmol，1.00eq.)和2,6-二甲基吡啶(16.5mg，154μmol，18.0μl，10.0eq.)在二氯甲烷(2.00ml)中的混合物中添加tmsotf(24.0mg，108μmol，19.5μl，7.00eq.)，然后在氮气气氛下在20℃下将它搅拌2小时。向混合物中添加n,n-二异丙基乙胺(0.10ml)，并在减压下浓缩混合物，得到残余物。残余物通过制备型hplc(柱：agela durashell c18 150
×
25mm
×
5um；流动相：a相：[水(0.05％nh3h2o+10mm nh4hco3)]，b相：乙腈；b％：38％-68％)纯化，得到呈白色固体状的(r)-7-甲氧基-4-甲基-n-(1-(5-(2-((甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)酞嗪-1-胺(3.00mg，7.10μmol，46.0％产率，99.0％纯度)。lcms[m+1]
+
:419.2。
[0689]1h nmr(500mhz,cd3od)δ＝8.01(d,j＝9.0hz,1h),7.73(d,j＝2.5hz,1h),7.49(dd,j＝9.0,2.5hz,1h),7.44(d,j＝6.5hz,1h),7.33-7.37(m,2h),7.26-7.34(m,1h),7.10(d,j＝3.0hz,1h),6.93(d,j＝3.5hz,1h),5.85-5.96(m,1h),4.02(s,3h),3.86(s,2h),2.73(s,3h),2.29(s,3h),1.82(d,j＝7.0hz,3h)。
[0690]
实施例9-1
[0691]
(r)-4-甲氧基-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)-7-(哌嗪-1-基)酞嗪-1-胺
[0692][0693][0694]
步骤a：在25℃下向6-溴-2,3-二氢酞嗪-1,4-二酮(3.00g，12.4mmol，1.00eq.)在氧氯化磷(40.0ml)中的溶液中逐滴添加n,n-二异丙基乙胺(4.02g，31.1mmol，5.42ml，2.50eq.)。然后在120℃下将反应物搅拌12小时。将混合物冷却到25℃并真空浓缩，除去大部分氧氯化磷并得到残余物。将残余物倒入冰水(100ml)中，所得水溶液用饱和碳酸氢钠水溶液调整到ph＝7，然后用二氯甲烷(50.0ml
×
2)萃取。合并的有机相用盐水(30.0ml
×
2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到呈黄色固体状的6-溴-1,4-二氯酞嗪(1.20g，4.32mmol，粗品)，无需进一步纯化。lcms[m+3]
+
:279.0。
[0695]
步骤b：在氮气气氛下向6-溴-1,4-二氯酞嗪(500mg，1.80mmol，1.00eq.)和(r)-1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-胺(365mg，1.80mmol，1.00eq.)在dmso(10.0ml)中的混合物中添加氟化钾(313mg，5.40mmol，126μl，3.00eq.)、n,n-二异丙基乙胺(465mg，3.60mmol，627μl，2.00eq.)。然后在130℃下将反应混合物搅拌3小时。此后，将反应物冷却到25℃，用乙酸乙酯(20.0ml)稀释，用盐水(5.00ml
×
2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到残余物。残余物通过制备型tlc(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)纯化，得到呈白色固体状的(r)-7-溴-4-氯-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)酞嗪-1-胺(360mg，769μmol，42.7％产率)。lcms[m+3]
+
:446.1。
[0696]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝8.15-8.01(m,2h),7.99-7.79(m,1h),7.63(d,j＝8.0hz,1h),7.56-7.50(m,1h),7.23(s,1h),5.91-5.77(m,1h),5.45(br d,j＝6.4hz,1h),2.55(s,3h),1.65(d,j＝6.8hz,3h)。
[0697]
步骤c：在氮气下向(r)-7-溴-4-氯-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)酞嗪-1-胺(330mg，742μmol，1.00eq.)在甲醇(5.00ml)中的混合物中添加甲醇钠(200mg，3.71mmol，5.00eq.)。在微波反应器中，在110℃下将反应混合物搅拌2小时。然后将反应混合物冷却到25℃，并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝50/1到1/1)纯化，得到呈白色固体状的(r)-7-溴-4-甲氧基-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)酞嗪-1-胺(281mg，638μmol，86.0％产率)。
[0698]
步骤d：在氮气气氛下在20℃下向(r)-7-溴-4-甲氧基-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲
基)苯基)乙基)酞嗪-1-胺(240mg，545μmol，4.00eq.)和哌嗪-1-羧酸叔丁酯(25.4mg，136μmol，1.00eq.)在二噁烷(5.00ml)中的溶液中一次性添加ruphos pd g3(5.70mg，6.81μmol，0.05eq.)和碳酸铯(178mg，545μmol，4.00eq.)。在110℃下将混合物搅拌3小时。lcms显示反应完成。通过硅藻土垫过滤悬浮液，并用乙酸乙酯(30.0ml)洗涤滤饼。浓缩合并的滤液，得到残余物。残余物通过制备型hplc(柱：phenomenex synergi c18 150
×
30mm
×
4um，流动相a：水(0.1％tfa)，流动相b：乙腈；梯度：49％～69％b)纯化，得到呈白色固体状的(r)-4-(1-甲氧基-4-((1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)酞嗪-6-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(70.0mg，128μmol，94.1％产率)。lcms[m+1]
+
:546.3。
[0699]
步骤e：向(r)-4-(1-甲氧基-4-((1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)酞嗪-6-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(50.0mg，91.6μmol，1.00eq.)在二氯甲烷(1.00ml)中的混合物中添加三氟乙酸(0.20ml)。在20℃下将混合物搅拌1小时。lcms显示反应完成。在减压下浓缩混合物，得到残余物。残余物通过制备型hplc(柱：phenomenex synergi c18 100
×
21.2mm
×
4um，使用tfa水和乙腈作为洗脱剂，流动相a：水(0.1％tfa)，流动相b：乙腈；梯度：14％～44％b)纯化，得到呈白色固体状的(r)-4-甲氧基-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)-7-(哌嗪-1-基)酞嗪-1-胺(35.0mg，78.6μmol，85.7％产率)。lcms[m+1]
+
:446.2。
[0700]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝8.18(d,j＝9.2hz,1h),8.06(d,j＝2.8hz,1h),7.82(dd,j＝2.4,9.2hz,1h),7.64-7.77(m,2h),7.36-7.46(m,1h),5.42(q,j＝6.4hz,1h),4.07(s,3h),3.75-3.86(m,4h),3.38-3.47(m,4h),2.51(s,3h),1.80(d,j＝6.8hz,3h)。
[0701]
遵循通用反应方案iii的教示内容和为制备实施例9-1所述的过程，制备了表9中所示的以下式(i)化合物、实施例9-2：
[0702]
表9
[0703][0704]
实施例10-1
[0705]
(r)-4-甲基-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)-7-(哌啶-4-基)酞嗪-1-胺
[0706][0707]
步骤a：在n2气氛下在20℃下将7-溴-4-甲基酞嗪-1(2h)-酮(4g，16.73mmol，1.00eq)在pocl3(75.54g，492.66mmol，45.78ml，29.44eq)中的混合物搅拌，然后加热到100℃并搅拌5小时。将混合物冷却到20℃并在减压下浓缩。将残余物缓慢倒入水中，并用饱和nahco3中和，直到ph＝8。然后，向混合物添加乙酸乙酯(100ml)并在25℃下搅拌30分钟。过滤混合物并收集滤饼。残余物使用硅胶柱(0-55％石油醚/etoac)纯化，得到呈黄色固体状的6-溴-4-氯-1-甲基酞嗪(2.2g，8.54mmol，51.06％产率)。
[0708]1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ8.41(d,j＝1.5hz,1h),8.29-8.34(m,1h),8.24-8.28(m,1h),2.89-2.93(m,3h)。
[0709]
步骤b：在n2气氛下在20℃下向6-溴-4-氯-1-甲基酞嗪(0.6g，2.32mmol，1.00eq)和(r)-1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-胺(472mg，2.32mmol，1.00eq)在dmso(4ml)中的混合物中一次性添加n,n-二异丙基乙胺(602mg，2.33mmol，810μl，2.00eq)和csf(706mg，4.66mmol，2.00eq)。在130℃下将混合物搅拌3小时。此后，将反应物冷却到室温，向反应混合物添加水(50ml)，并用乙酸乙酯(3
×
30ml)萃取。合并的有机层用盐水(饱和，20ml)洗涤，用na2so4干燥，过滤并浓缩，得到残余物。残余物使用制备型tlc板纯化，用50％etoac/石油醚洗脱，得到呈黄色油状的(r)-7-溴-4-甲基-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)酞嗪-1-胺(0.6g，1414μmol，60.70％产率)。
[0710]
注意：反应需要在n2气氛下在手套箱中进行，以避免潮湿。包含溶剂(dmso)在内的所有试剂需要干燥。
[0711]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.97(s,1h),7.87-7.93(m,1h),7.79-7.85(m,1h),7.66(d,j＝7.6hz,1h),7.54(d,j＝7.6hz,1h),7.26-7.29(m,1h),5.88(quint,j＝6.4hz,1h),
5.12(br s,1h),2.78(s,3h),2.57(s,3h),1.66(d,j＝6.8hz,3h)。
[0712]
步骤c：在氮气气氛下在20℃下向(r)-7-溴-4-甲基-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)酞嗪-1-胺(35.0mg，82.5μmol，1.00eq.)和4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2h)-羧酸叔丁酯(38.3mg，124μmol，1.50eq.)在四氢呋喃(3.00ml)和水(0.60ml)中的混合物中一次性添加碳酸钠(26.2mg，247μmol，3.00eq.)和pd(dppf)cl2(6.04mg，8.25μmol，0.10eq.)。在80℃下将混合物搅拌2小时，然后冷却到室温，并将混合物用乙酸乙酯(30.0ml)稀释，用水(10.0ml
×
3)洗涤。合并的有机层用盐水(20.0ml)洗涤，用硫酸钠干燥并过滤。浓缩滤液，得到呈黄色油状的粗产物。此黄色油通过制备型tlc(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝2/1)纯化，得到呈黄色油状的(r)-4-(1-甲基-4-((1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)酞嗪-6-基)-3,6-二氢吡啶-1(2h)-羧酸叔丁酯(32.0mg，60.8μmol，73.7％产率)。lcms[m+1]
+
:527.3。
[0713]
步骤d：在氮气气氛下向(r)-4-(1-甲基-4-((1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)酞嗪-6-基)-3,6-二氢吡啶-1(2h)-羧酸叔丁酯(14.0mg，26.6μmol，1.00eq.)在甲醇(3.00ml)中的溶液中添加pd/c(3.62mg，3.41μmol，10％纯度，0.13eq.)。将悬浮液真空脱气，并用氢气吹扫数次。在氢气(15.0psi)下在25℃下将混合物搅拌2小时，然后通过硅藻土垫过滤，并用乙酸乙酯(30.0ml)洗涤滤饼。浓缩合并的滤液，得到呈黄色油状的(r)-4-(1-甲基-4-((1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)酞嗪-6-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(14.0mg，26.5μmol，99.6％产率)。粗产物不经进一步纯化即可直接用于下一步骤中。lcms[m+1]
+
:529.3。
[0714]
步骤e：在20℃下将(r)-4-(1-甲基-4-((1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)酞嗪-6-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(14mg，26.5μmol，1.00eq.)在二氯甲烷(2.00ml)和三氟乙酸(0.40ml)中的混合物搅拌2小时，然后浓缩，得到残余物。残余物通过制备型hplc(柱：phenomenex synergi c18 150
×
30mm
×
4um，使用tfa水和乙腈作为洗脱剂；流动相a：水(0.1％tfa)，流动相b：乙腈；梯度：20％-50％b)纯化，得到呈黄色固体状的(r)-4-甲基-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)-7-(哌啶-4-基)酞嗪-1-胺(9.00mg，21.0μmol，79.3％产率)。lcms[m+1]
+
:429.1。
[0715]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝8.67(s,1h),8.37(d,j＝8.8hz,1h),8.12(d,j＝8.4hz,1h),7.73(d,j＝8.4hz,1h),7.55(d,j＝8.0hz,1h),7.29(t,j＝7.6hz,1h),5.57(q,j＝6.8hz,1h),3.61(br d,j＝12.8hz,2h),3.20-3.30(m,3h),2.87(s,3h),2.63(s,3h),2.21-2.32(m,2h),2.05-2.20(m,2h),1.71(d,j＝6.8hz,3h)。
[0716]
实施例10-2
[0717]
(r)-n-(1-(5-(2-((甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)-7-n-吗啉代-4-(三氟甲基)酞嗪-1-胺
[0718]
[0719][0720]
步骤a：向4-溴邻苯二甲酸二甲酯(2.00g，7.32mmol，1.00eq.)在1,2-二甲氧基乙烷(25.0ml)中的溶液中添加csf(223mg，1.46mmol，54.0μl，0.20eq.)和tmscf3(1.25g，8.79mmol，1.20eq.)。在0-25℃之间将混合物搅拌1小时。然后在乙酸乙酯(1.00ml)和水(15.0ml)之间分配混合物。将有机相分离，用盐水(15.0ml
×
3)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到呈无色油状的6-溴-3-甲氧基-3-(三氟甲基)异苯并呋喃-1(3h)-酮和5-溴-3-甲氧基-3-(三氟甲基)异苯并呋喃-1(3h)-酮(2.20g，粗品)的混合物。
[0721]
步骤b：向6-溴-3-甲氧基-3-(三氟甲基)异苯并呋喃-1(3h)-酮和5-溴-3-甲氧基-3-(三氟甲基)异苯并呋喃-1(3h)-酮(2.20g，7.07mmol，1.00eq.)在thf(25.0ml)中的溶液中添加水合肼(708mg，14.6mmol，688μl，2.00eq.)。在75℃下将混合物搅拌18小时，然后在减压下浓缩以除去溶剂。残余物通过快速硅胶色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝10/1到8/1)纯化，得到呈白色固体状的7-溴-4-(三氟甲基)酞嗪-1(2h)-酮(680mg，2.32mmol，32.8％产率)。
[0722]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝8.54(d,j＝1.71hz,1h),8.15(dd,j＝8.68,2.08hz,1h),7.91(dd,j＝8.80,1.47hz,1h)。
[0723]
步骤c：在20℃下向7-溴-4-(三氟甲基)酞嗪-1(2h)-酮(200mg，683μmol，1.00eq.)在pocl3(3.30g，21.5mmol，2.00ml，31.5eq.)中的溶液中添加吡啶(108mg，1.37mmol，110μl，2.00eq.)。在105℃下将混合物搅拌1.5小时，然后在减压下浓缩，得到呈白色固体状的6-溴-4-氯-1-(三氟甲基)酞嗪(210mg，粗品)。
[0724]
步骤d：向6-溴-4-氯-1-(三氟甲基)酞嗪(135mg，433μmol，1.50eq.)在dmso(2.00ml)中的溶液中添加n,n-二异丙基乙胺(112mg，866μmol，151μl，3.00eq.)、kf(1.68mg，28.8μmol，6.76μl，0.10eq.)和(r)-(2-(5-(1-氨基乙基)噻吩-2-基)苯甲基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(0.10g，289μmol，100eq.)。在微波中在130℃下将混合物搅拌45分钟。混合物用水(2.00ml)稀释并用乙酸乙酯(2.00ml
×
3)萃取。合并的有机层用水(2.00ml
×
2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过纯化制备型tlc(sio2，石油醚:乙酸乙酯＝5:1)，得到呈黄色油状的(r)-(2-(5-(1-((7-溴-4-(三氟甲基)酞嗪-1-基)氨基)乙基)噻吩-2-基)苯甲基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(46.0mg，74.0μmol，25.6％产率)。
[0725]
步骤e：将(r)-(2-(5-(1-((7-溴-4-(三氟甲基)酞嗪-1-基)氨基)乙基)噻吩-2-基)苯甲基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(0.046g，74.0μmol，1.00eq.)、吗啉(7.74mg，88.8μmol，7.82μl，1.20eq.)、cs2co3(72.3mg，222μmol，3.00eq.)、pd2(dba)3(6.78mg，7.40μmol，0.100eq.)和ruphos(6.91mg，14.8μmol，0.20eq.)在二噁烷(0.10ml)中的混合物脱气并用氮气吹扫3次，然后在氮气气氛下在110℃下将混合物搅拌1小时。此后，混合物用水(2.00ml)稀释并用乙酸乙酯(2.00ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(2.00ml
×
2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过制备型tlc(sio2，石油醚:乙酸乙酯＝3:1)纯化，得到呈黄色油状的(r)-甲基(2-(5-(1-((7-吗啉代-4-(三氟甲基)酞嗪-1-基)氨基)乙基)噻吩-2-基)苯甲基)氨基甲酸叔丁酯(43.0mg，68.5μmol，92.6％产率)。
[0726]
步骤f：向(r)-甲基(2-(5-(1-((7-吗啉代-4-(三氟甲基)酞嗪-1-基)氨基)乙基)噻吩-2-基)苯甲基)氨基甲酸叔丁酯(50.0mg，79.7μmol，1.00eq.)在二氯甲烷(1.00ml)中的溶液中添加三氟乙酸(770mg，6.75mmol，0.50ml，84.8eq.)。在25℃下将混合物搅拌20分钟，然后过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过制备型hplc(柱：phenomenex synergi c18100
×
21.2mm
×
4um；流动相：a相：[水(0.1％tfa)]，b相：acn；b％：17％-47％)纯化，得到呈白色固体状的(r)-n-(1-(5-(2-((甲氨基)甲基)苯基)噻吩-2-基)乙基)-7-吗啉代-4-(三氟甲基)酞嗪-1-胺(17.5mg，33.1μmol，41.6％产率)。
[0727]1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ8.87(s,2h),8.50(s,1h),7.89-7.39(m,6h),7.19(s,1h),7.08(s,1h),6.07-5.96(m,1h),4.23(s,2h),3.80(s,4h),3.46(s,4h),2.56(s,3h),1.80(d,j＝6.9hz,3h)。
[0728]
遵循通用反应方案iii的教示内容和为制备实施例10-1和10-2所述的过程，制备了表10中所示的以下式(i)化合物、实施例10-3到10-87。
[0729]
表10
[0730]
[0731]
[0732]
[0733]
[0734]
[0735]
[0736]
[0737]
[0738]
[0739]
[0740]
[0741]
[0742]
[0743]
[0744]
[0745]
[0746]
[0747]
[0748]
[0749]
[0750]
[0751]
[0752]
[0753][0754]
实施例11-1
[0755]
(r)-(4-(1-甲基-4-((1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)酞嗪-6-基)哌嗪-1-基)(氧杂环丁-3-基)甲酮
[0756]
[0757]
向(r)-4-甲基-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)-7-(哌嗪-1-基)酞嗪-1-胺(20.0mg，46.6μmol，1.00eq.)和氧杂环丁烷-3-甲酸(5.70mg，55.9μmol，1.20eq.)在dmf(0.50ml)中的溶液中添加hatu(21.3mg，55.9μmol,1.20eq.)以及n,n-二异丙基乙胺(18.1mg，140μmol，24.3μl，3.00eq.)。在25℃下将混合物搅拌1小时，然后通过制备型hplc(waters xbridge150
×
25mm
×
5um；流动相：流动相a：[水(10mm nh4hco3)，流动相b：乙腈]；b％：27％-57％)纯化，得到呈灰白色固体状的(r)-(4-(1-甲基-4-((1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)酞嗪-6-基)哌嗪-1-基)(氧杂环丁-3-基)甲酮(9.00mg，17.4μmol，37.4％产率，99.4％纯度)。lcms[m+1]
+
:514.3。
[0758]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝8.02(d,j＝9.2hz,1h),7.73-7.63(m,3h),7.50(d,j＝7.6hz,1h),7.25(t,j＝8.0hz,1h),5.63(q,j＝7.2hz,1h),4.89(br s,4h),4.33-4.22(m,1h),3.89-3.78(m,2h),3.69-3.58(m,4h),3.55-3.47(m,2h),2.67(s,3h),2.61(s,3h),1.64(d,j＝6.8hz,3h)。
[0759]
遵循通用反应方案iii的教示内容和为制备实施例11-1所述的过程，制备了表11中所示的以下式(i)化合物、实施例11-2到11-6。
[0760]
表11
[0761]
[0762][0763]
实施例12-1
[0764]
(r)-4-甲基-7-(4-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)哌嗪-1-基)-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-胺
[0765][0766]
步骤a：在25℃下向7-氯-4-甲基吡啶并[3,4-d]哒嗪-1(2h)-酮(5.00g，25.6mmol，1.00eq.)在pocl3(137g，893mmol，83.0ml，34.9eq.)中的溶液逐滴添加n,n-二异丙基乙胺(9.91g，76.7mmol，13.4ml，3eq.)，然后在110℃下将反应物搅拌2h。此后，将混合物冷却到25℃并真空浓缩，得到残余物，残余物在0℃下用乙酸乙酯(300ml)稀释，并通过缓慢添加碳酸氢钠饱和水溶液调整到ph＝7。合并的有机相用盐水(200ml x 2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到呈粉红色固体状的1,7-二氯-4-甲基吡啶并[3,4-d]哒嗪(4.10g，19.2mmol，74.9％产率)。
[0767]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝9.65(s,1h),8.22(s,1h),3.02(s,3h)。
[0768]
步骤b：向1,7-二氯-4-甲基吡啶并[3,4-d]哒嗪(300mg，1.40mmol，1.00eq.)和
(r)-1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-胺(285mg，1.40mmol，1.00eq.)在dmso(5.00ml)中的溶液中添加氟化钾(244mg，4.20mmol，98.5μl，3.00eq.)和n,n-二异丙基乙胺(543mg，4.20mmol，732μl，3.00eq.)。在130℃下将混合物搅拌12小时，然后冷却到室温并添加水(20.0ml)。混合物用乙酸乙酯(10.0ml
×
3)萃取，合并的有机层用盐水(5.00ml
×
2)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝1/0到5/1)纯化，得到呈黄色固体状的(r)-7-氯-4-甲基-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-胺(320mg，840μmol，60.0％产率)。lcms[m+1]
+
:381.0。
[0769]
步骤c：将(r)-7-氯-4-甲基-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-胺(40.0mg，105μmol，1.00eq.)、1-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)哌嗪(58.9mg，210μmol，2.00eq.，tfa盐)、碳酸铯(171mg，525μmol，5.00eq.)、ruphos pd g3(8.79mg，10.5μmol，0.10eq.)在二噁烷(1.00ml)中的混合物脱气并用氮气吹扫3次，然后在氮气气氛下在80℃下将混合物搅拌10小时。通过在20℃下添加水(15.0ml)，使反应混合物淬灭，然后用乙酸乙酯(5.00ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(5.00ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过制备型hplc(柱：phenomenex gemini-nx c1875
×
30mm
×
3um；流动相：a相：水(0.04％hcl)，b相：乙腈；梯度：b％：30％-60％)纯化，得到呈淡黄色固体状的(r)-4-甲基-7-(4-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)哌嗪-1-基)-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-胺(9.51mg，15.1％产率，hcl盐)。lcms[m+1]
+
:511.1。
[0770]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝9.00(s,1h),7.72(d,j＝7.6hz,1h),7.57(d,j＝6.4hz,1h),7.52(d,j＝7.6hz,1h),7.48(s,1h),7.36(s,1h),7.35-7.29(m,1h),7.25(s,1h),5.63(quin,j＝6.8hz,1h),3.88-3.83(m,4h),3.75(s,2h),3.78-3.72(m,1h),3.04-2.98(m,4h),2.56(s,6h),1.55(d,j＝6.8hz,3h)。
[0771]
实施例12-2
[0772]
7-(6-氧杂-3-氮杂双环[3.1.1]庚-3-基)-4-甲基-n-((r)-1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-胺
[0773][0774]
在氮气气氛下向(r)-7-氯-4-甲基-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-胺(50.0mg，131μmol，1.00eq.)和6-氧杂-3-氮杂双环[3.1.1]庚烷(35.6mg，263μmol，2.00eq.，hcl)在二噁烷(2.00ml)中的溶液中添加碳酸铯(171mg，525μmol，4.00eq.)、ruphos(6.10mg，13.1μmol，0.10eq.)和pd2(dba)3(6.00mg，6.60μmol，0.05eq.)。在110℃下将混合物搅拌2小时，然后冷却到25℃，过滤，滤液用水(10.0ml)淬灭，然后用乙酸乙酯(30.0ml)萃取。合并的有机层用盐水(10.0ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过制备型hplc(柱：waters xbridge beh c18100
×
25mm
×
5um；流动相：a相：水(10mm nh4hco3)，b相：乙腈；梯度：b％：30％-60％)纯化，得到
呈黄色固体状的7-(6-氧杂-3-氮杂双环[3.1.1]庚-3-基)-4-甲基-n-((r)-1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-胺(8.64mg，18.9μmol，14.4％产率)。lcms[m+1]
+
:444.1。
[0775]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝9.03(s,1h),7.74(d,j＝7.6hz,1h),7.57(s,1h),7.52(d,j＝8.0hz,1h),7.31(t,j＝8.0hz,1h),7.27(s,1h),5.66(t,j＝7.2hz,1h),4.80(d,j＝6.4hz,2h),3.91-3.90(m,2h),3.75-3.68(m,2h),3.23-3.16(m,1h),2.57(s,6h),1.95(d,j＝9.2hz,1h),1.55(d,j＝7.2hz,3h)。
[0776]
sfc条件：chiralcel od-3 3μm，0.46cm id
×
5cm l；流动相：sfc co2为a，meoh(0.05％异丙胺)为b；梯度：b在a中在3分钟内从10％到40％；流速：4.0ml/min；柱温：35℃；波长：220nm；系统背压：100bar。
[0777]
遵循通用反应方案iii的教示内容和为制备实施例12-1和12-2所述的过程，制备了表12中所示的以下式(i)化合物、实施例12-3-12-134。
[0778]
表12
[0779]
[0780]
[0781]
[0782]
[0783]
[0784]
[0785]
[0786]
[0787]
[0788]
[0789]
[0790]
[0791]
[0792]
[0793]
[0794]
[0795]
[0796]
[0797]
[0798]
[0799]
[0800]
[0801]
[0802]
[0803]
[0804]
[0805]
[0806]
[0807]
[0808]
[0809]
[0810]
[0811]
[0812]
[0813][0814]
实施例13-1
[0815]
4-甲基-n-((r)-1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)-7-(((s)-四氢呋喃-3-基)氧基)酞嗪-1-胺
[0816][0817]
在氮气气氛下在0℃下向(r)-7-溴-4-甲基-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)酞嗪-1-胺(70.0mg，164μmol，1.00eq.)在甲苯(1.00ml)中的溶液中添加氢化钠(13.2mg，329μmol，在矿物油中占60.0％，2.00eq.)，然后向混合物添加(s)-四氢呋喃-3-醇(43.6mg，494μmol,3.00eq.)、pd2(dba)3(15.1mg，16.5μmol，0.10eq.)和tol-binap(22.4mg，33.0μmol，0.20eq.)。将反应混合物升温到100℃，并在氮气气氛下搅拌1小时。此后，将混合物冷却到25℃，缓慢地用饱和氯化铵水溶液(30.0ml)淬灭，然后用乙酸乙酯(20.0ml
×
3)萃取。合并的有机相用盐水(30.0ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到残余物。残余物通过制备型hplc(柱：phenomenex luna c18 80
×
40mm
×
3μm；流动相：a相：具有0.04％hcl的水，b相：乙腈；b％梯度：30％-52％)纯化，得到呈白色固体状的4-甲基-n-((r)-1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)-7-(((s)-四氢呋喃-3-基)氧基)酞嗪-1-胺(6.31mg，14.0μmol，8.5％产率，hcl盐)。lcms[m+1]
+
:432.1
[0818]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝15.31(s,1h),8.91(s,1h),8.90-8.34(m,2h),7.82-7.77(m,2h),7.56(d,j＝8.0hz,1h),7.35(t,j＝8.0hz,1h),5.56(s,1h),5.52-5.47(m,1h),4.05-4.03(m,1h),3.93-3.84(m,3h),2.79(s,3h),2.58(s,3h),2.45-2.43(m,1h),2.08-2.06(m,1h),1.63(d,j＝7.2hz,3h)。
[0819]
sfc条件：chiralcel od-3 3μm，0.46cm id
×
5cm l；流动相：meoh(0.05％异丙胺)；梯度：b在a中在3分钟内从10％到40％；流速：4.0ml/min；柱温：35℃；波长：220nm
[0820]
实施例13-2
[0821]
(r)-4-甲基-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)-7-(氧杂环丁-3-基氧基)酞嗪-1-胺
[0822][0823]
将(r)-7-溴-4-甲基-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)酞嗪-1-胺(100mg，236μmol，1.00eq.)、氧杂环丁-3-醇(26.2mg，354μmol，1.50eq.)、叔丁醇钠(68.0mg，707μmol，3.00eq.)和[2-(2-氨基苯基)苯基]-甲基磺酰氧基-钯；二叔丁基-[2-(2,4,6-三异丙基苯基)苯基]磷烷(18.7mg，23.6μmol，0.10eq.)在二噁烷(2.00ml)中的混合物脱气并用氮气吹扫3次，然后在氮气气氛下在100℃下将混合物搅拌1小时。过滤混合物并真空浓缩，得到残余物。残余物通过制备型tlc(sio2，二氯甲烷/甲醇＝20/1)纯化，然后通过制备型hplc(柱：phenomenex luna c18 150
×
25mm
×
10um；流动相：a相：水(0.225％tfa)，b相：乙腈；b相梯度：17％-47％)纯化，得到呈灰白色固体状的(r)-4-甲基-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)-7-(氧杂环丁-3-基氧基)酞嗪-1-胺(5.20mg，12.4μmol，5.25％产率，99.4％纯度)。lcms[m+1]
+
:418.0。
[0824]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝8.19(d,j＝8.8hz,1h),7.78-7.73(m,1h),7.71(d,j＝8.0hz,1h),7.61-7.56(m,1h),7.52(d,j＝7.6hz,1h),7.26(t,j＝8.0hz,1h),5.69-5.59(m,2h),5.21-5.12(m,2h),4.81-4.75(m,2h),2.75(s,3h),2.63(s,3h),1.67(d,j＝7.2hz,3h)。
[0825]
遵循通用反应方案iii的教示内容和为制备实施例13-1和13-2所述的过程，制备了表13中所示的以下式(i)化合物、实施例13-3。
[0826]
表13
[0827][0828]
实施例14-1
[0829][0830]
步骤a：向6 6-溴-4-氯-1-甲基酞嗪(500mg，1.94mmol，1.00eq.)在氯仿(8.00ml)中的溶液中添加nbs(380mg，2.14mmol，1.10eq.)和aibn(48.0mg，0.29mmol，0.15eq.)，并在90℃下将反应混合物搅拌3小时。然后将反应混合物冷却到25℃，用水(20.0ml)淬灭并用乙酸乙酯(30.0ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(25.0ml
×
2)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝10/1到1/1)纯化，得到呈黄色固体状的6-溴-1-(溴甲基)-4-氯酞嗪(180mg，535μmol，27.6％产率)。lcms[m+3]
+
:336.6。
[0831]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝8.52-8.50(m,1h),8.41(dd,j＝1.2,3.6hz,2h),5.42(s,1h),5.31(s,1h)。
[0832]
步骤b：向二甲胺(48.2mg，1.07mmol，0.05ml，2.00eq.，hcl盐)在四氢呋喃(10.0ml)中的溶液中添加n,n-二异丙基乙胺(207mg，1.61mmol，0.28ml，3.00eq.)，然后向反应混合物添加6-溴-1-(溴甲基)-4-氯酞嗪(180mg，0.54mmol，1.00eq.)，并在25℃下将混合物搅拌12小时。混合物用水(30.0ml)稀释并用乙酸乙酯(30.0ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(30.0ml
×
2)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过制备型tlc(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝1/1，rf＝0.4)纯化，得到呈黄色固体状的1-(6-溴-4-氯酞嗪-1-基)-n,n-二甲基甲胺(80.0mg，266μmol，49.7％产率)。lcms[m+3]
+
:301.9
[0833]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝8.51(d,j＝8.8hz,1h),8.44(d,j＝1.6hz,1h),8.30(dd,j＝2.0,8.8hz,1h),4.02(s,2h),2.22(s,6h)。
[0834]
步骤c：向1-(6-溴-4-氯酞嗪-1-基)-n,n-二甲基甲胺(120mg，0.40mmol，1.00eq.)和(r)-1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-胺(89.2mg，0.44mmol，1.10eq.)在二甲亚砜(3.00ml)中的溶液中添加氟化钾(69.6mg，1.20mmol，0.03ml，3.00eq.)，然后在130℃下将反应物搅拌2小时。将反应物冷却到25℃，用水(20.0ml)淬灭并用乙酸乙酯(20.0ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(20.0ml
×
2)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过制备型tlc(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝1/1，rf＝0.2)纯化，得到呈黄色油状的(r)-7-溴-4-((二甲氨基)甲基)-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)酞嗪-1-胺(90.0mg，192μmol，48.2％产率)。lcms[m+1]
+
:467.0。
[0835]
步骤d：向(r)-7-溴-4-((二甲氨基)甲基)-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)酞嗪-1-胺(60.0mg，0.13mmol，1.00eq.)、吗啉(28.0mg，0.32mmol，0.03ml，2.50eq.)、碳
酸铯(125mg，0.39mmol，3.00eq.)和ruphos(12.0mg，0.03mmol，0.20eq.)在二噁烷(8.00ml)中的溶液中添加pd2(dba)3(11.8mg，0.02mmol，0.10eq.)，然后脱气并用氮气吹扫3次，在氮气气氛下在100℃下将反应混合物搅拌2小时。将反应物冷却到25℃，用水(20.0ml)稀释并用乙酸乙酯(30.0ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(25.0ml
×
2)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过制备型tlc(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化，得到呈黄色固体状的(r)-4-((二甲氨基)甲基)-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)-7-吗啉代酞嗪-1-胺(5.75mg，12.1μmol，9.45％产率，99.9％纯度)。lcms[m+1]
+
:474.3。
[0836]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝8.09(d,j＝8.8hz,1h),7.76(d,j＝8.0hz,1h),7.62(s,1h),7.58(dd,j＝2.0,8.8hz,1h),7.52(br d,j＝7.2hz,2h),7.32(t,j＝7.6hz,1h),5.77-5.67(m,1h),3.86-3.80(m,4h),3.45-3.40(m,4h),3.31(br s,2h),2.58(s,3h),2.16(br s,6h),1.56(d,j＝7.2hz,3h)。
[0837]
sfc条件：chiralcel od-3 50
×
4.6mmi.d.，3um；流动相：co2为a相，meoh(0.05％dea)为b相；梯度洗脱：meoh(0.05％dea)在co2中从5％到40％；流速：3ml/min；检测器：pda；柱温：35℃；背压：100bar。
[0838]
实施例14-2
[0839][0840]
步骤a：在氮气气氛下在25℃下向6-溴-1-(溴甲基)-4-氯酞嗪(150mg，446μmol，1.00eq.)在二甲基甲酰胺(15.0ml)中的混合物中添加邻苯二甲酰亚胺钾(116mg，624μmol，1.40eq.)。在85℃下将混合物搅拌2小时，然后冷却到25℃。然后，混合物用水(50.0ml)稀释并用乙酸乙酯(50.0ml
×
3)萃取。合并的有机相用盐水(100ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝5/1)纯化，得到呈黄色固体状的2-((6-溴-4-氯酞嗪-1-基)甲基)异吲哚啉-1,3-二酮(150mg，373μmol，83.6％产率)。lcms[m+1]
+
:404.0。
[0841]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝8.55(m,2h),8.40(m,1h),7.95(m,2h),7.90(m,2h),5.60(s,2h)。
[0842]
步骤b：向2-((6-溴-4-氯酞嗪-1-基)甲基)异吲哚啉-1,3-二酮(130mg，323μmol，1.00eq.)和(r)-1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-胺(65.6mg，323μmol，1.00eq.)在二甲亚砜(7.00ml)中的溶液添加n,n-二异丙基乙胺(125mg，969μmol，169μl，3.00eq.)和氟化钾(56.3mg，969μmol，22.7μl，3.00eq.)，并在密封管中在130℃下搅拌12小时。将反应物冷却到25℃，用水(50.0ml)稀释并用乙酸乙酯(50.0ml
×
3)萃取。合并的有机相用盐水(100ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，
石油醚/乙酸乙酯＝5/1)纯化，得到呈黄色固体状的(r)-2-((6-溴-4-((1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)酞嗪-1-基)甲基)异吲哚啉-1,3-二酮(130mg，228μmol，70.7％产率)。lcms[m+1]
+
:472.2。
[0843]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝8.91(s,1h),8.20-8.07(m,2h),7.97-7.80(m,5h),7.74(d,j＝8.0hz,1h),7.51(d,j＝8.0hz,1h),7.31(t,j＝8.0hz,1h),5.72-5.60(m,1h),5.25(s,2h),2.44(s,3h),1.50(d,j＝7.2hz,3h)。
[0844]
步骤c：在氮气气氛下在25℃下向(r)-2-((6-溴-4-((1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)酞嗪-1-基)甲基)异吲哚啉-1,3-二酮(100mg，176μmol，1.00eq.)和吗啉(61.2mg，703μmol，61.8μl，4.00eq.)在甲基苯(10.0ml)中的溶液中添加binap(21.9mg，35.1μmol，0.20eq)、碳酸铯(172mg，527μmol，3.00eq.)和pd2(dba)3(16.1mg，17.6μmol，0.10eq.)。在100℃下将混合物搅拌1小时。反应完成，并冷却到25℃。反应混合物用水(50.0ml)淬灭并用乙酸乙酯(50.0ml
×
3)萃取。合并的有机相用盐水(100ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化，得到呈黄色固体状的(r)-2-((4-((1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-6-吗啉代酞嗪-1-基)甲基)异吲哚啉-1,3-二酮(65.0mg，113μmol，64.3％产率)。lcms[m+1]
+
:576.3。
[0845]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝8.03(br d,j＝10.0hz,1h),7.94-7.85(m,4h),7.74(br d,j＝7.2hz,1h),7.65(br s,2h),7.51(br d,j＝8.0hz,1h),7.43(br d,j＝7.2hz,1h),7.31(br t,j＝6.8hz,1h),5.72-5.67(m,1h),5.18(s,2h),3.83(m,4h),3.45(m,4h),2.44(s,3h),1.51(d,j＝7.2hz,3h)。
[0846]
步骤d：在氮气气氛下在25℃下向(r)-2-((4-((1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-6-吗啉代酞嗪-1-基)甲基)异吲哚啉-1,3-二酮(60.0mg，104μmol，1.00eq.)在乙醇(6.00ml)中的溶液中添加水合肼(47.0mg，938μmol，45.6μl，9.00eq.)。在25℃下将混合物搅拌1小时，然后用水(10.0ml)淬灭并用乙酸乙酯(10.0ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(30.0ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。粗产物通过反相hplc(水(0.04％hcl)/ch3cn)纯化，得到呈黄色固体状的(r)-4-(氨基甲基)-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)-7-吗啉代酞嗪-1-胺(5.81mg，13.0μmol，12.5％产率，盐酸盐)。lcms[m+1]
+
:446.1。
[0847]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝8.62(br s,3h),8.12(br s,2h),7.79(br d,j＝7.6hz,2h),7.61(br d,j＝8.0hz,1h),7.38(br t,j＝8.0hz,1h),5.66(br d,j＝6.4hz,1h),4.56(br s,2h),3.81(br t,j＝4.8hz,4h),3.62(br s,4h),2.53(m,3h),1.70(br d,j＝5.6hz,3h)。
[0848]
实施例14-3
[0849]
3-((r)-1-((7-((1r,4r)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚-5-基)-4-((甲氨基)甲基)吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-基)氨基)乙基)-2-甲基苄腈
[0850][0851]
步骤a：向(r)-3-(1-((7-氯-4-甲基吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-基)氨基)乙基)-2-甲基苄腈(30.0mg，88.8μmol，1.00eq.)在二噁烷(1.00ml)中的溶液中添加二氧化硒(19.7mg，178μmol，19.3μl，2.00eq.)，并在100℃下将混合物搅拌1小时。然后在减压下浓缩混合物，残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝20/1到5/1)纯化，得到呈黄色固体状的(r)-3-(1-((7-氯-4-甲酰吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-基)氨基)乙基)-2-甲基苄腈(16.0mg，45.5μmol，51.2％产率)。
[0852]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝10.06(s,1h),9.99(s,1h),9.09(br d,j＝6.8hz,1h),8.76(s,1h),7.78(br d,j＝8.0hz,1h),7.66(br d,j＝7.6hz,1h),7.36(br t,j＝8.0hz,1h),5.81(br d,j＝6.4hz,1h),2.69(s,3h),1.63(br d,j＝6.8hz,3h)。
[0853]
步骤b：向(r)-3-(1-((7-氯-4-甲酰吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-基)氨基)乙基)-2-甲基苄腈(106mg，301μmol，1.00eq.)和甲胺四氢呋喃溶液(2.0m，360μl，2.39eq.)在thf(3.00ml)中的溶液中添加乙酸(1.81mg，30.1μmol，1.72μl，0.10eq.)，并在50℃下将混合物搅拌30分钟。此后添加三乙酰氧基硼氢化钠(192mg，904μmol，3.00eq.)，并在之后不久将混合物倒入水(5.00ml)中。水相用乙酸乙酯(10.0ml
×
3)萃取，合并的有机相用盐水(10.0ml
×
2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到呈黄色固体状的(r)-3-(1-((7-氯-4-((甲氨基)甲基)吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-基)氨基)乙基)-2-甲基苄腈(65.0mg，177μmol，58.8％产率)。lcms[m+1]
+
:367.2。
[0854]
步骤c：向(r)-3-(1-((7-氯-4-((甲氨基)甲基)吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-基)氨基)乙基)-2-甲基苄腈(34.0mg，92.7μmol，1.00eq.)和(boc)2o(22.3mg，102μmol，23.4μl，1.10eq.)在dcm(0.50ml)中的溶液中添加dmap(1.13mg，9.27μmol，0.10eq.)，并在25℃下将混合物搅拌1小时。然后在减压下浓缩混合物，残余物通过制备型tlc(sio2，石油醚/乙酸乙
酯＝2:1)纯化，得到呈黄色固体状的(r)-((7-氯-1-((1-(3-氰基-2-甲基苯基)乙基)氨基)吡啶并[3,4-d]哒嗪-4-基)甲基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(35.0mg，75.0μmol，80.9％产率)。
[0855]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝9.43(br s,1h),8.50(s,1h),7.72(d,j＝7.2hz,1h),7.52(dd,j＝1.2,7.6hz,1h),7.29-7.24(m,1h),5.68-5.62(m,1h),2.78-2.75(m,5h),1.63(d,j＝7.2hz,3h),1.49-1.41(m,9h),1.22(s,3h)。
[0856]
步骤d：向(r)-((7-氯-1-((1-(3-氰基-2-甲基苯基)乙基)氨基)吡啶并[3,4-d]哒嗪-4-基)甲基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(30.0mg，64.3μmol，1.00eq.)和((1r,4r)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷(7.01mg，51.7μmol，0.8eq.，hcl)在dmso(0.10ml)中的溶液中添加氟化铯(19.5mg，128μmol，4.74μl，2.00eq.)和n,n-二异丙基乙胺(16.6mg，128μmol，22.4μl，2.00eq.)，并在130℃下将混合物搅拌1小时。然后将溶液冷却到25℃，倒入水(10.0ml)中，并用乙酸乙酯(10.0ml
×
3)萃取水相。合并的有机相用盐水(10.0ml
×
3)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到呈黄色固体状的((7-((1r,4r)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚-5-基)-1-(((r)-1-(3-氰基-2-甲基苯基)乙基)氨基)吡啶并[3,4-d]哒嗪-4-基)甲基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(30.0mg，粗品)。lcms[m+1]
+
:530.2。
[0857]
步骤e：向((7-((1r,4r)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚-5-基)-1-(((r)-1-(3-氰基-2-甲基苯基)乙基)氨基)吡啶并[3,4-d]哒嗪-4-基)甲基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(18.0mg，34.0μmol，1.00eq.)在乙腈(1.50ml)中的溶液中添加盐酸/二噁烷(0.50ml)，并在0℃下将混合物搅拌30分钟。然后将混合物倒入水(5.00ml)中，并用乙酸乙酯(5.00ml
×
3)萃取水相。合并的有机相用盐水(5.00ml
×
3)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过制备型hplc[柱：3_phenomenex luna c18 75
×
30mm
×
3um；流动相：a相：水(0.05％hcl)，b相：乙腈；b％：7％-27％]纯化，得到呈黄色固体状的3-((r)-1-((7-((1r,4r)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚-5-基)-4-((甲氨基)甲基)吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-基)氨基)乙基)-2-甲基苄腈(7.00mg，14.9μmol，43.8％产率，99.1％纯度，盐酸盐)。lcms[m+1]
+
:430.3。
[0858]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝9.09(s,1h),7.83(br d,j＝7.6hz,1h),7.71(d,j＝7.6hz,1h),7.63-7.40(m,2h),5.56(q,j＝6.4hz,1h),5.41(br s,1h),4.83(s,3h),3.96(d,j＝6.8hz,1h),3.84(br s,1h),3.69(br d,j＝9.6hz,1h),3.49(br d,j＝3.2hz,1h),2.93(s,3h),2.64(s,3h),2.09(br s,2h),1.84(d,j＝6.8hz,3h)。
[0859]
实施例14-4
[0860]
3-((r)-1-((7-((1r,4r)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚-5-基)-4-((二甲氨基)甲基)吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-基)氨基)乙基)-2-甲基苄腈
[0861][0862]
向3-((r)-1-((7-((1r,4r)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚-5-基)-4-((甲氨基)
甲基)吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-基)氨基)乙基)-2-甲基苄腈(12.0mg，27.9μmol，1.00eq.)和多聚甲醛(1.68mg)在甲醇(1.00ml)中的溶液中添加乙酸(168μg，2.79μmol，0.16μl，0.10eq.)和氰基硼氢化钠(3.51mg，55.9μmol，2.00eq.)，并在25℃下将混合物搅拌1小时。然后将混合物倒入水(5.00ml)中，并用乙酸乙酯(5.00ml
×
3)萃取水相。合并的有机相用盐水(5.00ml
×
3)洗涤，用无水钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过制备型hplc[柱：3_phenomenex luna c18 75
×
30mm
×
3um；流动相：a相：水(0.05％hcl)，b相：乙腈；b％：9％-29％]纯化，得到呈黄色固体状的3-((r)-1-((7-((1r,4r)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚-5-基)-4-((二甲氨基)甲基)吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-基)氨基)乙基)-2-甲基苄腈(5.20mg，11.4μmol，40.8％产率，97.2％纯度，盐酸盐)。lcms[m+1]
+
:444.3。
[0863]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝9.11(s,1h),7.83(br d,j＝7.6hz,1h),7.71(d,j＝7.6hz,1h),7.58-7.29(m,2h),5.56(q,j＝6.4hz,1h),5.42(br s,1h),5.04-4.93(m,2h),4.83-4.81(m,1h),3.95(br d,j＝7.6hz,1h),3.82(br s,1h),3.67(br s,1h),3.48(br s,1h),3.11(s,6h),2.64(s,3h),2.08(br s,2h),1.84(br d,j＝6.8hz,3h)。
[0864]
遵循通用反应方案iii的教示内容和为制备实施例14-3-14-4所述的过程，制备了表14中所示的以下式(i)化合物、实施例14-5到14-6。
[0865]
表14
[0866][0867]
实施例15-1
[0868]
n-((r)-1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)乙基)-4-甲基-7-(((s)-四氢呋喃-3-基)氧基)酞嗪-1-胺
(三氟甲基)苯基)乙基)-4-甲基-7-(((s)-四氢呋喃-3-基)氧基)酞嗪-1-胺(7.00mg，16.2μmol，41.6％产率)。lcms[m+1]
+
:433.2。
[0874]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝8.00(d,j＝8.8hz,1h),7.77(d,j＝2.4hz,1h),7.49(dd,j＝2.4,9.2hz,1h),6.98(br d,j＝2.4hz,2h),6.76(s,1h),5.42(q,j＝6.8hz,1h),5.34(br dd,j＝4.4,6.0hz,1h),4.13-3.90(m,4h),2.67(s,3h),2.46-2.32(m,1h),2.26-2.15(m,1h),1.64(d,j＝7.2hz,3h)。
[0875]
实施例15-2
[0876][0877]
步骤a：在密封试管中，在氮气气氛下在130℃下将(r)-1-(2-甲基-5-硝基-3-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-胺(250mg，1.01mmol，1.00eq.)和6-溴-4-氯-1-甲基酞嗪(259mg，1.01mmol，1.00eq.)在二甲亚砜(3.00ml)、n,n-二异丙基乙胺(390mg，3.02mmol，526μl，3.00eq.)和氟化钾(175mg，3.02mmol，70.7μl，3.00eq.)中的溶液搅拌12小时。将反应物冷却到25℃，用水(50.0ml)淬灭反应物，然后用乙酸乙酯(30.0ml
×
3)萃取。合并的有机相用盐水(20.0ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过制备型tlc(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝0/1)纯化，得到呈黄色固体状的(r)-7-溴-4-甲基-n-(1-(2-甲基-5-硝基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)酞嗪-1-胺(200mg，426μmol，42.3％产率)。lcms[m+1]
+
:469.0。
[0878]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝8.81(s,1h),8.80(s,1h),8.25(s,1h),8.07-8.04(m,1h),7.96-7.92(m,2h),5.68-5.64(m,1h),2.74(s,3h),2.60(s,3h),1.58(d,j＝6.8hz,3h)。
[0879]
步骤b：在氮气气氛下向吗啉(44.5mg，511μmol，45.0μl，3.00eq.)、(r)-7-溴-4-甲基-n-(1-(2-甲基-5-硝基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)酞嗪-1-胺(80.0mg，170μmol，1.00eq.)和碳酸铯(166mg，511μmol，3.00eq.)在二噁烷(2.00ml)中的溶液中添加ruphos(15.9mg，34.1μmol，0.20eq.)和pd2(dba)3(15.6mg，17.0μmol，0.10eq.)。在110℃下将混合物搅拌1小时，然后冷却到25℃，用水(40.0ml)淬灭，然后用乙酸乙酯(20.0ml
×
3)萃取。合并的有机相用盐水(40.0ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过制备型tlc(sio2，二氯甲烷:甲醇＝10/1)纯化，得到呈黄色固体状的(r)-4-甲基-n-(1-(2-甲基-5-硝基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)-7-吗啉代酞嗪-1-胺(50.0mg，105μmol，61.6％产率)。
[0880]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝8.57(d,j＝2.4hz,1h),8.24(d,j＝2.4hz,1h),7.82(d,j＝8.8hz,1h),7.62-7.58(m,2h),5.67-5.64(m,1h),3.85-3.82(m,4h),3.44-3.43(m,4h),2.74(s,3h),2.51(s,3h),1.59(d,j＝7.2hz,3h)。
[0881]
步骤c：在氮气气氛下在90℃下向(r)-4-甲基-n-(1-(2-甲基-5-硝基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)-7-吗啉代酞嗪-1-胺(45.0mg，94.6μmol，1.00eq.)和氯化铵(50.6mg，946μmol，10.0eq.)在乙醇(1.20ml)和水(0.40ml)中的溶液中添加铁粉(52.8mg，946.4μmol，10.0eq.)。在90℃下将反应混合物搅拌1小时，然后冷却到25℃。过滤混合物并在减压下浓缩，得到残余物，残余物通过制备型hplc[柱：phenomenex luna c18 80
×
40mm
×
3um；流动相：a相：水(0.04％hcl)，b相：乙腈；b％：12％-38％]纯化，得到呈白色固体状的(r)-n-(1-(5-氨基-2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)-4-甲基-7-吗啉代酞嗪-1-胺(20.0mg，44.8μmol，47.3％产率，盐酸盐)。lcms[m+1]
+
:446.1。
[0882]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝14.85(s,1h),8.62(s,1h),8.16(d,j＝9.2hz,1h),7.93(s,1h),7.77-7.74(m,1h),7.23-7.22(m,1h),7.08(s,1h),5.37-5.34(m,1h),3.83-3.81(m,4h),3.70-3.68(m,4h),2.73(s,3h),2.43(s,3h),1.59(d,j＝6.8hz,3h)。
[0883]
sfc条件：chiralcel od-3 3μm，0.46cm id
×
5cm l；流动相：sfc co2为a，meoh(0.05％异丙胺)为b；梯度：b在a中在3分钟内从10％到40％；流速：4.0ml/min；柱温：35℃；波长：220nm；系统背压：100bar。
[0884]
遵循通用反应方案vi的教示内容和为制备实施例15-1-15-2所述的过程，制备了表15中所示的以下式(i)化合物、实施例15-3。
[0885]
表15
[0886][0887]
实施例16-1
[0888]
(r)-n-(1-(4-氨基-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)乙基)-4-甲基-7-吗啉代酞嗪-1-胺
[0889]
步骤a：向(r)-2-(1-氨基乙基)-6-(三氟甲基)吡啶-4-胺(6.00g，24.8mmol，1.00eq.，盐酸盐)、6-溴-4-氯-1-甲基酞嗪(7.03g，27.3mmol，1.10eq.)和n,n-二异丙基乙胺(12.8g，99.3mmol，17.3ml，4.00eq.)在dmso(1.00ml)中的溶液中添加氟化铯(5.66g，37.3mmol，1.37ml，1.50eq.)，并在氮气气氛下在130℃下将混合物搅拌2小时。然后将混合物冷却到25℃，用乙酸乙酯(300ml)稀释，用盐水(200ml
×
2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物，残余物通过硅胶色谱(石油醚/乙酸乙酯＝10/1到二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化，得到呈褐色固体状的(r)-n-(1-(4-氨基-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)乙基)-7-溴-4-甲基酞嗪-1-胺(9.00g，21.1mmol，85.0％产率)。
[0890]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝8.11(d,j＝2.0hz,1h),7.89(dd,j＝1.6,8.8hz,1h),7.78(d,j＝8.8hz,1h),6.94(d,j＝1.6hz,1h),6.87(br s,1h),6.80(d,j＝2.0hz,1h),5.58-5.49(m,1h),4.89(br s,2h),2.77(s,3h),1.68(d,j＝6.4hz,3h)。
[0891]
步骤b：向(r)-n-(1-(4-氨基-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)乙基)-7-溴-4-甲基酞嗪-1-胺(10.0g，23.5mmol，1.00eq.)和dmap(287mg，2.35mmol，0.10eq.)在thf(100ml)中的溶液中添加二碳酸二叔丁酯(10.5g，48.1mmol，11.1ml，2.05eq.)，在40℃下将反应混合物搅拌30分钟，然后在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过硅胶色谱(石油醚/乙酸乙酯＝10/1到1/1)纯化，得到呈褐色固体状的(r)-(2-(1-((7-溴-4-甲基酞嗪-1-基)氨基)乙基)-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸叔丁酯(7.45g，11.9mmol，50.7％产率)。lcms[m+3]
+
:628.0。
[0892]
步骤c：在氮气下向吗啉(4.09g，46.9mmol，4.13ml，4.00eq.)和(r)-(2-(1-((7-溴-4-甲基酞嗪-1-基)氨基)乙基)-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸叔丁酯(7.35g，11.7mmol，1.00eq.)在二噁烷(100ml)中的溶液中添加pd2(dba)3(1.07g，1.17mmol，0.10eq.)、ruphos(1.09g，2.35mmol，0.20eq.)和碳酸铯(11.5g，35.2mmol，3.00eq.)，并在105℃下将反应混合物搅拌1小时。将反应混合物冷却到25℃，过滤，并用甲醇洗涤滤饼(200ml)。在减压下浓缩滤液，得到残余物，残余物通过硅胶色谱(石油醚/乙酸乙酯＝10/1到dcm/甲醇＝10/1)纯化，得到呈褐色固体状的(r)-(2-(1-((4-甲基-7-吗啉代酞嗪-1-基)氨基)乙基)-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(4.75g，8.92mmol，76.0％产率)。lcms[m+1]
+
:433.3。
[0893]
步骤d：在0℃下向(r)-(2-(1-((4-甲基-7-吗啉代酞嗪-1-基)氨基)乙基)-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(4.75g，8.92mmol，1.00eq.)在乙腈(20.0ml)中的溶液
中添加hcl/二噁烷(20.0ml)，在0-25℃下将反应物搅拌3小时。此后，通过逐份添加固体碳酸氢钠将混合物的ph调整到ph＝7。在减压下浓缩所得混合物，得到残余物，其用水(200ml)研磨，然后过滤。用水(30.0ml
×
3)洗涤滤饼，加以收集并进一步用乙腈(100ml)研磨。过滤所得悬浮液，收集滤饼并加以真空干燥，得到呈灰白色固体状的产物(r)-n-(1-(4-氨基-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)乙基)-4-甲基-7-吗啉代酞嗪-1-胺(3.64g，7.99mmol，89.6％产率，94.9％纯度)。lcms[m+1]
+
:433.1。
[0894]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝7.84(d,j＝9.2hz,1h),7.64(d,j＝2.0hz,1h),7.59(dd,j＝2.0,8.8hz,1h),7.28(d,j＝6.8hz,1h),6.73(d,j＝2.0hz,1h),6.65(d,j＝1.6hz,1h),6.40(s,2h),5.32-5.23(m,1h),3.82(t,j＝4.8hz,4h),3.44-3.39(m,4h),2.56(s,3h),1.57(d,j＝7.2hz,3h)。
[0895]
实施例16-2
[0896][0897]
步骤a：向1,7-二氯-4-甲基吡啶并[3,4-d]哒嗪(4.87g，22.8mmol，1.10eq.)和(r)-2-(1-氨基乙基)-6-(三氟甲基)吡啶-4-胺(5.00g，20.7mmol，1.00eq.，盐酸盐)在dmso(40.0ml)中的溶液中添加氟化铯(9.43g，62.1mmol，2.29ml，3.00eq.)和n,n-二异丙基乙胺(8.02g，62.1mmol，10.8ml，3.00eq.)，并在130℃下将混合物搅拌2小时。此后，将混合物倒入水(50.0ml)中，并用乙酸乙酯(150ml
×
3)萃取。合并的有机相用盐水(150ml
×
3)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物用石油醚:乙酸乙酯＝1:1洗涤，得到呈灰色固体状的(r)-n-(1-(4-氨基-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)乙基)-7-氯-4-甲基吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-胺(5.00g，13.1mmol，63.1％产率)。lcms[m+1]
+
:383.2。
[0898]
步骤b：向(r)-n-(1-(4-氨基-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)乙基)-7-氯-4-甲基吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-胺(115mg，300μmol，1.00eq.)和(1r,4r)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷(61.1mg，451μmol，1.50eq.，盐酸盐)在dmso(0.20ml)中的溶液中添加n,n-二异丙基乙胺(77.7mg，601μmol，105μl，2.00eq.)和氟化铯(274mg，1.80mmol，66.5μl，6.00eq.)，并在130℃下将混合物搅拌2小时。混合物用水(10.0ml)稀释并用乙酸乙酯(10.0ml
×
3)萃取，合并的有机层用盐水(20.0ml
×
3)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过制备型hplc[柱：3_phenomenex luna c18 75
×
30mm
×
3μm；流动相：a相：水(0.05％hcl)，b相：乙
腈；b％：14％-34％]纯化，得到呈黄色固体状的n-((r)-1-(4-氨基-6-(三氟甲基)吡啶-2-基)乙基)-7-((1r,4r)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚-5-基)-4-甲基吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-胺(93.9mg，211μmol，70.2％产率)。lcms[m+1]
+
:446.2。
[0899]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝15.19-14.58(m,1h),9.29(s,1h),8.92-8.62(m,1h),8.12-7.37(m,1h),6.83(d,j＝2.0hz,1h),6.71(br s,1h),5.41-5.18(m,1h),5.15-5.03(m,1h),4.94-4.76(m,1h),4.02-3.81(m,2h),3.80-3.65(m,3h),2.05(br d,j＝4.8hz,2h),1.65(br d,j＝6.4hz,3h)。
[0900]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝9.29(s,1h),7.80-7.22(m,1h),7.12(d,j＝2.0hz,1h),7.05(br s,1h),5.53(br s,1h),5.21(q,j＝6.4hz,1h),5.17-4.97(m,1h),4.11-3.83(m,2h),3.82-3.55(m,2h),2.85(s,3h),2.24-2.05(m,2h),1.80(br d,j＝6.8hz,3h)。
[0901]
遵循通用反应方案iii的教示内容和为制备实施例16-1-16-2所述的过程，制备了表16中所示的以下式(i)化合物、实施例16-3-16-14。
[0902]
表16
[0903]
[0904]
[0905]
[0906][0907]
实施例17-1
[0908]
(r)-2-甲氧基-3-(1-((4-甲基-7-吗啉代吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-基)氨基)乙基)苯甲腈
[0909][0910]
步骤a：向1-(3-溴-2-甲氧苯基)乙烷-1-酮(1.00g，4.37mmol，1.00eq.)和(s)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(688mg，5.68mmol，1.30eq.)在thf(15.0ml)中的溶液中添加丁醇钛(iv)(1.99g，8.73mmol，1.81ml，2.00eq.)和1,2-二甲氧基乙烷(393mg，4.37mmol，454μl，1.00eq.)，并在70℃下将混合物搅拌12小时。然后用乙酸乙酯(50.0ml)和水(5.00ml)稀释
混合物，并过滤。在减压下浓缩滤液，残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝20/1到10/1)纯化，得到呈黄色油状的(s,e)-n-(1-(3-溴-2-甲氧苯基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.25g，3.76mmol，86.2％产率)。
[0911]
步骤b：在-60℃下向(s,e)-n-(1-(3-溴-2-甲氧苯基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.25g，3.76mmol，1.00eq.)在thf(15.0ml)中的溶液中逐滴添加三仲丁基硼氢化锂(在thf中为1.0m，5.64ml，1.50eq.)。在添加完成之后，将混合物升温到30℃并搅拌30分钟，然后用水(5.00ml)稀释并用乙酸乙酯(30.0ml
×
2)萃取。合并的有机相在减压下浓缩，残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝5/1到3/1)纯化，得到呈黄色油状的(s)-n-((r)-1-(3-溴-2-甲氧苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(900mg，2.69mmol，71.6％产率)。
[0912]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.52-7.44(m,1h),7.34-7.29(m,1h),7.01(t,j＝7.6hz,1h),5.05-4.95(m,1h),3.92(s,3h),1.50(d,j＝6.8hz,3h),1.21(s,9h)。
[0913]
步骤c：向(s)-n-((r)-1-(3-溴-2-甲氧苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(900mg，2.69mmol，1.00eq.)在thf(12.0ml)和h2o(3.00ml)中的溶液中添加碘(205mg，808μmol，163μl，0.30eq.)，并在50℃下将混合物搅拌1小时。然后混合物用乙酸乙酯(30.0ml)稀释，用亚硫酸钠水溶液(20.0ml)洗涤，并且进一步用盐水(20.0ml)洗涤。将有机相干燥并在减压下浓缩，然后通过柱色谱(sio2，二氯甲烷/甲醇＝1/0到40/1)纯化，得到呈黄色油状的(r)-1-(3-溴-2-甲氧苯基)乙烷-1-胺(500mg，2.17mmol，80.7％产率)。
[0914]
步骤d：向1,7-二氯-4-甲基吡啶并[3,4-d]哒嗪(300mg，1.40mmol，1.00eq.)在dmso(5.00ml)中的溶液中添加氟化铯(319mg，2.10mmol，77.5μl，1.50eq.)和(r)-1-(3-溴-2-甲氧苯基)乙烷-1-胺(322mg，1.40mmol，1.00eq.)，并在130℃下将混合物搅拌30分钟。然后混合物用乙酸乙酯(50.0ml)稀释并用盐水(30.0ml
×
3)洗涤。将分离的有机相干燥并在减压下浓缩，并通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝5/1到4/1)纯化残余物，得到呈黄色固体状的(r)-n-(1-(3-溴-2-甲氧苯基)乙基)-7-氯-4-甲基吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-胺(250mg，613μmol，43.8％产率)。
[0915]
步骤e：向(r)-n-(1-(3-溴-2-甲氧苯基)乙基)-7-氯-4-甲基吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-胺(200mg，491μmol，1.00eq.)在dmso(0.80ml)中的溶液中添加氟化铯(112mg，736μmol，27.1μl，1.50eq.)和吗啉(192mg，2.21mmol，194μl，4.50eq.)。在130℃下将混合物搅拌30分钟，然后用水(20.0ml)稀释并过滤。将沉淀物真空干燥，得到呈黄色固体状的(r)-n-(1-(3-溴-2-甲氧苯基)乙基)-4-甲基-7-吗啉代吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-胺(200mg，436μmol，89.0％产率)。lcms[m+1]
+
:460.1。
[0916]
步骤f：将(r)-n-(1-(3-溴-2-甲氧苯基)乙基)-4-甲基-7-吗啉代吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-胺(180mg，393μmol，1.00eq.)、氰化锌(92.2mg，785μmol，49.9μl，2.00eq.)、dppf(43.5mg，78.5μmol，0.20eq.)、锌粉(2.57mg，39.3μmol，0.10eq.)和pd2(dba)3(36.0mg，39.3μmol，0.10eq.)在n,n-二甲基乙酰胺(4.00ml)中的混合物脱气并用氮气吹扫(3次)，并在氮气气氛下在120℃下将混合物搅拌6小时。反应混合物用乙酸乙酯(100ml)稀释并过滤。滤液用盐水(50.0ml
×
3)洗涤，干燥并在减压下浓缩。残余物通过制备型hplc[柱：phenomenex luna c18 150
×
25mm
×
10um；流动相：a相：水(0.225％甲酸)，b相：乙腈；b％：11％-41％]纯化，得到呈黄色固体状的(r)-2-甲氧基-3-(1-((4-甲基-7-吗啉代吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-基)氨基)乙基)苯甲腈(93.0mg，226μmol，57.5％产率，98.2％纯度)。lcms[m+1]
+
:405.2。
[0917]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝9.11(s,1h),8.49(s,1h),7.70-7.64(m,1h),7.54-7.49(m,1h),7.43(s,1h),7.15(t,j＝7.6hz,1h),5.66-5.55(m,1h),4.20(s,3h),3.85(s,8h),2.69(s,3h),1.62(d,j＝6.8hz,3h)。
[0918]
实施例17-2
[0919]
3-((r)-1-((7-((s)-六氢吡嗪[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1h)-基)-4-甲基吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-基)氨基)乙基)-2-甲氧基苯甲腈
[0920][0921]
步骤a：向(r)-1-(3-溴-2-甲氧苯基)乙烷-1-胺(1.20g，5.22mmol，1.00eq.)在thf(20.0ml)中的溶液中添加boc2o(1.48g，6.78mmol，1.56ml，1.30eq.)，在25℃下将混合物搅拌2小时。在减压下浓缩反应混合物，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝200/1到30/1)纯化，得到呈淡黄色油状的(r)-(1-(3-溴-2-甲氧苯基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.50g，4.54mmol，87.1％产率)。
[0922]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.45(dd,j＝1.6,8.0hz,1h),7.22(d,j＝6.8hz,1h),6.98(t,j＝7.6hz,1h),5.10-4.90(m,2h),3.95(s,3h),1.46-1.35(m,12h)。
[0923]
步骤b：将(r)-(1-(3-溴-2-甲氧苯基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.30g，3.94mmol，1.00eq.)、氰化锌(925mg，7.87mmol，500μl，2.00eq.)、锌粉(25.7mg，394μmol，0.10eq.)、dppf(437mg，787μmol，0.20eq.)和pd2(dba)3(361mg，394μmol，0.10eq.)在n,n-二甲基乙酰胺(15.0ml)中的混合物脱气并用氮气吹扫(3次)，并在氮气气氛下在130℃下将混合物搅拌5小时。然后，混合物用乙酸乙酯(100ml)稀释，过滤，滤液用盐水(50.0ml
×
3)洗涤，干燥并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝50/1到20/1)纯化，得到呈黄色油状的(r)-(1-(3-氰基-2-甲氧苯基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(0.90g，3.26mmol，82.7％产率)。
[0924]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.50(d,j＝8.0hz,2h),7.14(t,j＝7.6hz,1h),5.09-4.91(m,2h),4.15(s,3h),1.54-1.32(m,12h)。
[0925]
步骤c：向(r)-(1-(3-氰基-2-甲氧苯基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(0.90g，3.26mmol，1.00eq.)在dcm(2.00ml)中的溶液中添加tfa(6.93g，60.8mmol，4.50ml，18.7eq.)，并在20℃下将混合物搅拌30分钟。然后在减压下浓缩混合物，并用饱和碳酸氢钠水溶液将ph调整
到ph＝7。所得混合物用二氯甲烷/甲醇(50.0ml)的10:1溶液萃取，并干燥和浓缩有机相，得到呈棕色油状的(r)-3-(1-氨基乙基)-2-甲氧基苯甲腈(600mg，粗品)。
[0926]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.66(dd,j＝1.2,7.6hz,1h),7.53(dd,j＝1.2,7.6hz,1h),7.17(t,j＝8.0hz,1h),4.52(q,j＝6.8hz,1h),4.13(s,3h),1.46(d,j＝6.4hz,3h)。
[0927]
步骤d：向1,7-二氯-4-甲基吡啶并[3,4-d]哒嗪(300mg，1.40mmol，1.00eq.)在dmso(5.00ml)中的溶液中添加氟化铯(319mg，2.10mmol，77.5μl，1.50eq.)和(r)-3-(1-氨基乙基)-2-甲氧基苯甲腈(247mg，1.40mmol，1.00eq.)，并在130℃下将混合物搅拌30分钟。反应混合物用乙酸乙酯(50.0ml)稀释，用盐水(20.0ml
×
3)洗涤，将分离的有机相干燥并在减压下浓缩。残余物通过制备型hplc[柱：phenomenex luna c18 150
×
40mm
×
15um；流动相：a相：水(0.1％tfa)，b相：乙腈；b％：14％-44％]纯化，得到呈黄色固体状的(r)-3-(1-((7-氯-4-甲基吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-基)氨基)乙基)-2-甲氧基苯甲腈(200mg，565μmol，40.3％产率)。lcms[m+1]
+
:354.1。
[0928]
步骤e：在氮气气氛下在130℃下将(r)-3-(1-((7-氯-4-甲基吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-基)氨基)乙基)-2-甲氧基苯甲腈(30.0mg，84.8μmol，1.00eq.)、(s)-八氢吡嗪[2,1-c][1,4]噁嗪(27.4mg，127μmol，1.50eq.，二盐酸盐)、n,n-二异丙基乙胺(32.9mg，254μmol，44.3μl，3.00eq.)和氟化铯(19.3mg，127μmol，4.69μl，1.50eq.)在dmso(0.40ml)中的混合物搅拌2小时。然后混合物用乙酸乙酯(30.0ml)稀释，用盐水(10.0ml
×
3)洗涤，将分离的有机相干燥并在减压下浓缩。残余物通过制备型hplc[柱：3_phenomenex luna c18 75
×
30mm
×
3um；流动相：a相：水(0.05％hcl)，b相：乙腈；b％：10％-30％]纯化，得到呈黄色固体状的3-((r)-1-((7-((s)-六氢吡嗪[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1h)-基)-4-甲基吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-基)氨基)乙基)-2-甲氧基苯甲腈(13.9mg，27.8μmol，32.8％产率，99.3％纯度，hcl盐)。lcms[m+1]
+
:460.2。
[0929]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝9.35(s,1h),7.91(s,1h),7.79(br d,j＝7.6hz,1h),7.65-7.53(m,1h),7.21(t,j＝8.0hz,1h),5.66-5.54(m,1h),5.25-5.05(m,2h),4.29-4.14(m,5h),4.08-3.97(m,1h),3.86-3.62(m,4h),3.58(br d,j＝11.2hz,1h),3.52-3.35(m,3h),2.86(s,3h),1.71(d,j＝6.8hz,3h)。
[0930]
遵循通用反应方案iii的教示内容和为制备实施例17-1-17-2所述的过程，制备了表17中所示的以下式(i)化合物、实施例17-3-17-4。
[0931]
表17
[0932][0933]
实施例18-1
[0934]
(r)-6-氟-4-甲基-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)-7-(哌嗪-1-基)酞嗪-1-胺
[0935]
步骤a：在氮气气氛下向5-溴-4-氟-2-碘苯甲酸甲酯(1.50g，4.18mmol，1.00eq.)和三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡(1.52g，4.22mmol，1.42ml，1.01eq.)在二噁烷(20.0ml)中的溶液中添加pd(pph3)2cl2(60.0mg，0.08mmol，0.02eq.)。在氮气气氛下在80℃下将反应混合物搅拌12小时。将反应混合物冷却到25℃，通过添加饱和氟化钾水溶液(100ml)淬灭，并用乙酸乙酯(200ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(200ml
×
3)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到呈棕色油状的化合物5-溴-2-(1-乙氧基乙烯基)-4-氟苯甲酸甲酯(2.00g，粗品)，其直接用于下一步骤中。
[0936]
向5-溴-2-(1-乙氧基乙烯基)-4-氟苯甲酸甲酯(2.00g，粗品)在thf(50.0ml)中的溶液中添加盐酸水溶液(4.00m，10.0ml，6.06eq)。在25℃下将混合物搅拌2小时，然后用水(50.0ml)稀释并用乙酸乙酯(50.0ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(20.0ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(石油醚/乙酸乙酯＝10/1到
1/1)纯化，得到呈黄色油状的化合物2-乙酰基-5-溴-4-氟苯甲酸甲酯(700mg，2.54mmol，38.6％产率)。
[0937]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝8.14(d,j＝6.4hz,1h),7.12(d,j＝8.0hz,1h),3.91(s,3h),2.52(s,3h)。
[0938]
步骤b：向2-乙酰基-5-溴-4-氟苯甲酸甲酯(700mg，2.54mmol，1.00eq.)在乙醇(10.0ml)中的溶液中逐滴添加水合肼(130mg，2.54mmol，98％纯度，1.00eq.)。在95℃下将反应混合物搅拌30分钟，然后冷却到25℃并在减压下浓缩，得到呈白色固体状的7-溴-6-氟-4-甲基酞嗪-1-醇(460mg，1.79mmol，70.3％产率)。
[0939]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝12.62(s,1h),8.46(d,j＝7.2hz,1h),7.94(d,j＝9.6hz,1h),2.48(s,3h)。
[0940]
步骤c：7-溴-6-氟-4-甲基酞嗪-1-醇(250mg，0.97mmol,1.00eq.)在磷(v)氯氧化磷(9.52g,62.1mmol,5.77ml,63.8eq.)中的混合物.)在110℃搅拌2小时。将反应混合物冷却到25℃，并在减压下浓缩，得到残余物。残余物用乙酸乙酯(30.0ml)稀释，并通过缓慢添加饱和碳酸氢钠(水溶液)将ph调整到ph＝7。有机相用盐水(20.0ml
×
2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。粗产物通过制备型tlc(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)纯化，得到呈黄色固体状的6-溴-4-氯-7-氟-1-甲基酞嗪(170mg，617μmol，63.5％产率)。lcms[m+3]
+
:276.7。
[0941]
步骤d：向6-溴-4-氯-7-氟-1-甲基酞嗪(170mg，0.62mmol，1.00eq.)和(r)-1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-胺(126mg，0.62mmol，1.00eq.)在dmso(5.00ml)中的溶液中添加氟化钾(180mg，3.09mmol，5.00eq.)。在130℃下将混合物搅拌12小时，然后冷却到25℃，通过添加水(10.0ml)淬灭，并用乙酸乙酯(20.0ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(20.0ml
×
3)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过制备型tlc(二氯甲烷/甲醇＝20/1)纯化，得到呈黄色油状的化合物(r)-7-溴-6-氟-4-甲基-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)酞嗪-1-胺(80.0mg，0.18mmol，29.3％产率)。lcms[m+3]
+
:444.0。
[0942]
步骤e：在氮气气氛下向(r)-7-溴-6-氟-4-甲基-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)酞嗪-1-胺(80.0mg，0.18mmol，1.00eq.)和哌嗪(32.0mg，0.36mmol，2.00eq.)在二噁烷(3.00ml)中的溶液中添加pd2(dba)3(16.0mg，0.02mmol，0.10eq.)、ruphos(16.0mg，0.04mmol，0.20eq.)和碳酸铯(300mg，0.90mmol，5.00eq.)。在氮气气氛下在100℃下将反应混合物搅拌12小时，然后冷却到25℃，通过添加水(10.0ml)淬灭，并用乙酸乙酯(20.0ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(20.0ml
×
3)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过制备型tlc(二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化，然后通过制备型hplc[柱：phenomenex luna c18 150
×
25mm
×
10um；流动相：a相：水(0.225％甲酸)，b相：乙腈；b％：3％-33％]纯化，得到呈黄色固体状的(r)-6-氟-4-甲基-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)-7-(哌嗪-1-基)酞嗪-1-胺(8.97mg，0.02mmol，9.15％产率，91.1％纯度，甲酸盐)。lcms[m+1]
+
:448.2。
[0943]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝8.30(s,1h),7.86(d,j＝8.4hz,1h),7.76(d,j＝7.6hz,1h),7.68(d,j＝14.0hz,1h),7.61(d,j＝6.8hz,1h),7.52(d,j＝7.6hz,1h),7.30(t,j＝7.6hz,1h),5.70-5.65(m,1h),3.21(s,4h),3.00(s,4h),2.57(s,3h),2.52(s,3h),
1.55(d,j＝7.2hz,3h)。
[0944]
sfc条件：柱：chiralcel od-3 50
×
4.6mm i.d.，3um；流动相：a相：co2，b相：meoh(0.05％二乙胺)；梯度洗脱：meoh(0.05％二乙胺)在co2中从5％到40％；流速：3ml/min；检测器：pda；柱温：35℃；背压：100bar。
[0945]
实施例18-2
[0946]
(r)-6-氟-4-甲基-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)-7-吗啉代酞嗪-1-胺
[0947][0948]
在氮气气氛下向(r)-7-溴-6-氟-4-甲基-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)酞嗪-1-胺(60.0mg，136μmol，1.00eq.)在二噁烷(3.00ml)中的溶液中添加吗啉(23.6mg，271μmol，23.9μl，2.00eq.)、ruphos(12.7mg，27.1μmol，0.20eq.)、pd2(dba)3(12.4mg，13.6μmol，0.10eq.)和碳酸铯(88.4mg，271μmol，2.00eq.)，并将混合物在110℃下保持2小时。将反应混合物冷却到25℃，倒入水(10.0ml)中，并用乙酸乙酯(10.0ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(10.0ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过制备型tlc(硅胶板，石油醚/乙酸乙酯＝2/1)纯化，并且进一步通过制备型hplc[柱：phenomenex luna c18 150
×
25mm
×
10um；流动相：a相：水(0.225％甲酸)，b相：乙腈，b％：20％-50％]纯化，得到呈灰白色固体状的(r)-6-氟-4-甲基-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)-7-吗啉代酞嗪-1-胺(4.92mg，10.7μmol，7.89％产率，97.6％纯度，甲酸盐)。lcms[m+1]
+
:449.0。
[0949]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝8.27(s,1h),7.87(d,j＝8.4hz,1h),7.76(d,j＝7.6hz,1h),7.71(d,j＝14.0hz,1h),7.59(d,j＝7.2hz,1h),7.52(d,j＝7.6hz,1h),7.32(t,j＝8.0hz,1h),5.76-5.61(m,1h),3.86-3.81(m,4h),3.27-3.23(m,4h),2.58(s,3h),2.54(s,3h),1.56(d,j＝6.8hz,3h)。
[0950]
sfc条件：chiralcel od-3 50
×
4.6mmi.d.，3um；流动相：a相：co2，及b相：meoh(0.05％二乙胺)；梯度洗脱：meoh(0.05％二乙胺)在co2中从5％到40％；流速：3ml/min；检测器：pda；柱温：35℃；背压：100bar。
[0951]
遵循通用反应方案iii的教示内容和为制备实施例18-1-18-2所述的过程，制备了表18中所示的以下式(i)化合物、实施例18-3-18-5。
[0952]
表18
[0953][0954][0955]
实施例19-1
[0956]
(r)-3-(1-((7-(3-(二甲氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-4-甲基-6-(三氟甲基)酞嗪-1-基)氨基)乙基)-2-甲基苄腈
[0957][0958]
步骤a：向2-氨基-4-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(3.00g，13.7mmol，1.00eq.)在n,n-二甲基甲酰胺(50.0ml)中的溶液中添加n-溴代丁二酰亚胺(2.68g，15.1mmol，1.10eq.)，并在氮气气氛下在20℃下将混合物搅拌12小时。将反应混合物倒入水(50.0ml)中，然后用乙酸乙酯(50.0ml
×
3)萃取，合并的有机层用盐水(40.0ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝50/1到10/1)纯化，得到呈黄色固体的2-氨基-5-溴-4-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(3.30g，11.1mmol，80.9％产率)。
[0959]1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝8.06(s,1h),6.93(s,1h),5.86(s,2h),3.84(s,3h)。
[0960]
步骤b：在0℃下向2-氨基-5-溴-4-(三氟甲基)苯甲酸酯(3.30g，11.1mmol，1.00eq.)在盐酸(4.00m，100ml，36.1eq.)中的溶液中添加亚硝酸钠(917mg，13.3mmol，1.20eq.)，并在氮气气氛下在0℃下将混合物搅拌1小时。然后在0℃下向反应混合物逐份添加碘化钾(3.68g，22.1mmol，2.00eq.)，将混合物缓慢加热到90℃并在氮气气氛下搅拌11小时。将混合物冷却到25℃，用乙酸乙酯(100ml
×
3)萃取，合并的有机层用盐水(50.0ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝100/1到20/1)纯化，得到呈黄色固体状的5-溴-2-碘-4-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(4.10g，10.0mmol，90.5％产率)。
[0961]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝8.16(s,1h),8.01(s,1h),3.90(s,3h)。
[0962]
步骤c：向5-溴-2-碘-4-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(3.60g，8.80mmol，1.00eq.)和1-(乙烯氧基)丁烷(1.06g，10.6mmol，1.36ml，1.20eq.)在n,n-二甲基甲酰胺(10.0ml)中的溶液中添加dppf(244mg，440μmol，0.05eq.)、n,n-二乙基乙胺(2.67g，26.4mmol，3.68ml，3.00eq.)和乙酸钯(ii)(59.3mg，264μmol，0.03eq.)，并在氮气气氛下在70℃下将混合物搅拌12小时。然后将混合物冷却到25℃，用四氢呋喃(17.8g，247mmol，20.0ml，14.9eq.)稀释，然后用盐酸(4.00m，20.0ml，4.82eq.)稀释，并在20℃下将混合物搅拌1小时。将混合物倒入水(30.0ml)中，用乙酸乙酯(30.0ml
×
3)萃取，合并的有机层用盐水(30.0ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝50/1到10/1)纯化，得到呈黄色固体状的2-乙酰基-5-溴-4-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(250mg，769μmol，8.74％产率)。
[0963]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝8.08(s,1h),7.68(s,1h),3.87(s,3h),2.49(s,3h)。
[0964]
步骤d：向2-乙酰基-5-溴-4-(三氟甲基)苯甲酸甲酯(250mg，769μmol，1.00eq.)在乙醇(5.00ml)中的溶液中添加水合肼(46.2mg，923μmol，44.8μl，98％，1.20eq.)，并在氮气气氛下在95℃下将混合物搅拌030分钟。将混合物冷却到25℃，并在减压下浓缩，得到呈黄色固体状的7-溴-4-甲基-6-(三氟甲基)酞嗪-1-醇(170mg，粗品)，其不经进一步纯化即可使用。lcms[m+3]
+
:309.1。
[0965]
步骤e：在氮气气氛下在110℃下将7-溴-4-甲基-6-(三氟甲基)酞嗪-1-醇(50.0mg，162.8μmol，1.00eq.)在pocl3(4.95g，32.3mmol，3.00ml，198eq.)中的溶液搅拌1小时。将混合物冷却到25℃，用乙酸乙酯(50.0ml)稀释，然后通过添加饱和碳酸氢钠(水溶液，50.0ml)淬灭。溶液用乙酸乙酯(50.0ml
×
3)萃取，合并的有机层用盐水(40.0ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过制备型tlc(硅胶板，石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化，得到呈棕色油状的6-溴-4-氯-1-甲基-7-(三氟甲基)酞嗪(20.0mg，61.4μmol，37.7％产率)。lcms[m+3]
+
:326.7。
[0966]
步骤f：向-溴-4-氯-1-甲基-7-(三氟甲基)酞嗪(120mg，369μmol，1.00eq.)和(r)-3-(1-氨基乙基)-2-甲基苄腈(59.0mg，369μmol，1.00eq.)在二甲亚砜(3.00ml)中的溶液中添加氟化钾(107mg，1.84mmol，43.2μl，5.00eq.)，并在氮气气氛下在130℃下将反应物搅拌12小时。将反应混合物冷却到25℃，倒入水(10.0ml)中，并用乙酸乙酯(10.0ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(10.0ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过制备型tlc(硅胶板，二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化，得到呈淡黄色固体状的(r)-3-(1-((7-溴-4-甲基-6-(三氟甲基)酞嗪-1-基)氨基)乙基)-2-甲基苄腈(110mg，244μmol，66.4％产率)。lcms[m+3]
+
:451.2。
[0967]
步骤g：向r)-3-(1-((7-溴-4-甲基-6-(三氟甲基)酞嗪-1-基)氨基)乙基)-2-甲基苄腈(30.0mg，0.07mmol，1.00eq.)和n,n,3-三甲基氮杂环丁胺-3-胺(20.0mg，0.13mmol，2.00eq.，hcl盐)在二噁烷(2.00ml)中的溶液中添加pd2(dba)3(6.00mg，0.10eq.)、ruphos(6.00mg，0.20eq.)和碳酸铯(108mg，0.33mmol，5.00eq.)，并在氮气气氛下在100℃下搅拌12小时。将反应混合物冷却到25℃，通过添加水(20.0ml)淬灭，并用乙酸乙酯(20.0ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(20.0ml
×
3)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过制备型hplc[柱：waters xbridge 150
×
25mm
×
10um；流动相：a相：水(10mm nh4hco3)，b相：乙腈；b％：38％-68％]纯化，得到呈黄色固体状的(r)-3-(1-((7-(3-(二甲氨基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-4-甲基-6-(三氟甲基)酞嗪-1-基)氨基)乙基)-2-甲基苄腈(3.28mg，9.91％产率，97.4％纯度)。lcms[m+1]
+
:483.4。
[0968]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝8.06(s,1h),7.74(d,j＝8.0hz,1h),7.60(d,j＝7.2hz,1h),7.51(d,j＝6.8hz,1h),7.30(t,j＝7.6hz,1h),7.24(s,1h),5.58-5.53(m,1h),4.00-3.95(m,2h),3.90-3.86(m,2h),2.66(s,3h),2.55(s,3h),2.16(s,6h),1.56(d,j＝7.2hz,3h),1.33(s,3h)。
[0969]
sfc条件：柱：chiralpak as-3 50
×
4.6mm i.d，3um；流动相：a相：co2，及b相：meoh(0.05％二乙胺)；梯度洗脱：meoh(0.05％二乙胺)在co2中从5％到40％；流速：3ml/min；检测器：pda；柱温：35℃；背压：100bar。
[0970]
实施例19-2
[0971]
(r)-2-甲基-3-(1-((4-甲基-7-吗啉代-6-(三氟甲基)酞嗪-1-基)氨基)乙基)苯甲腈
[0972][0973]
在氮气气氛下向(r)-3-(1-((7-溴-4-甲基-6-(三氟甲基)酞嗪-1-基)氨基)乙基)-2-甲基苄腈(40.0mg，89.0μmol，1.00eq.)和吗啉(22.0mg，178μmol，22.2μl，2.00eq.)在二噁烷(3.00ml)中的溶液中添加碳酸铯(58.0mg，178μmol，2.00eq.)、pd2(dba)3(8.15mg，8.90μmol，0.10eq.)和ruphos(8.31mg，17.8μmol，0.20eq.)，并在105℃下将反应混合物搅拌12小时。然后将混合物冷却到25℃，倒入水(30.0ml)中，并用乙酸乙酯(30.0ml
×
3)萃取。合并的有机层用水(20.0ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过制备型hplc[柱：waters xbridge 150
×
25mm 10um；流动相：a相：水10mm nh4hco3)，b相：乙腈；b％：37％-67％]纯化，得到呈白色固体状的(r)-2-甲基-3-(1-((4-甲基-7-吗啉代-6-(三氟甲基)酞嗪-1-基)氨基)乙基)苯甲腈(2.57mg，5.33μmol，5.99％产率，94.5％纯度)。lcms[m+1]
+
:456.3。
[0974]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝8.58(s,1h),8.22(s,1h),7.83(d,j＝6.4hz,1h),7.75(d,j＝7.6hz,1h),7.62(d,j＝7.2hz,1h),7.33(t,j＝7.2hz,1h),5.63-5.54(m,1h),3.83-3.78(m,4h),3.10-3.05(m,4h),2.68(s,3h),2.66(s,3h),1.58(d,j＝7.2hz,3h)。
[0975]
sfc条件：柱：chiralpak as-3 50
×
4.6mm i.d.，3um；流动相：a相：co2，及b相：meoh(0.05％二乙胺)；梯度洗脱：meoh(0.05％二乙胺)在co2中从5％到40％；流速：3ml/min；检测器：pda；柱温：35℃；背压：100bar。
[0976]
遵循通用反应方案iv的教示内容和为制备实施例19-1-19-2所述的过程，制备了表19中所示的以下式(i)化合物、实施例19-3。
[0977]
表19
[0978][0979]
实施例20-1
[0980]
1-(3-((r)-1-((7-((1r,4r)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚-5-基)-4-甲基吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-基)氨基)乙基)-2-氟苯基)-1，1-二氟-2-甲基丙-2-醇
[0981][0982]
步骤a：向1-溴-2-氟-3-碘苯(4.00g，13.3mmol，1.00eq.)和2-溴-2,2-二氟乙酸乙酯(3.80g，18.6mmol，2.40ml，1.40eq.)在二甲亚砜(50.0ml)中的溶液中添加铜(2.53g，39.9mmol，3.00eq.)，并在70℃下将混合物搅拌12小时。将反应混合物冷却到25℃，通过添加水(100ml)淬灭，并用乙酸乙酯(200ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(100ml
×
3)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝10/1到5/1)纯化，得到呈黄色油状的2-(3-溴-2-氟苯基)-2,2-二氟乙酸乙酯(2.00g，6.73mmol，50.6％产率)。
[0983]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.72-7.69(m,1h),7.61-7.57(m,1h),7.15(t,j＝8.0hz,1h),4.39-4.34(m,2h),1.35-1.32(m,3h)。
[0984]
步骤b：向2-(3-溴-2-氟苯基)-2,2-二氟乙酸乙酯(2.00g,6.73mmol,1.00eq.)的四氢呋喃(30.0ml)溶液中加入甲基溴化镁溶液(3.00m,6.75ml,3.00eq.)在0℃下，混合物在0℃下搅拌2小时。然后将混合物升温到25℃，用水(10.0ml)稀释并用乙酸乙酯(20.0ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(20.0ml
×
3)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝10/1到3/1)纯化，得到呈黄色油状的1-(3-溴-2-氟苯基)-1,1-二氟-2-甲基丙-2-醇(1.70g，6.01mmol，89.2％产率)。
[0985]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.67-7.65(m,1h),7.43-7.39(m,1h),7.12-7.09(m,1h),1.35(d,j＝0.8hz,6h)。
[0986]
步骤c：向1-(3-溴-2-氟苯基)-1,1-二氟-2-甲基丙-2-醇(1.50g，5.30mmol，1.00eq.)和三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡(3.83g，10.6mmol，3.58ml，2.00eq.)在1,4-二噁烷(15.0ml)中的溶液中添加pdcl2(pph3)2(380mg，0.53mmol，0.10eq.)，并在氮气气氛下在80℃下将混合物搅拌12小时。然后将反应混合物冷却到25℃，用饱和氟化钾溶液(100ml)稀释，并用乙酸乙酯(200ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(200ml
×
3)洗涤，用硫酸钠干燥，
过滤并在减压下浓缩，得到呈黑色油状的1-(3-(1-乙氧基乙烯基)-2-氟苯基)-1,1-二氟-2-甲基丙-2-醇(2.00g，粗品)。向1-(3-(1-乙氧基乙烯基)-2-氟苯基)-1,1-二氟-2-甲基丙-2-醇(2.00g，7.29mmol，1.00eq.)在四氢呋喃(20.0ml)中的溶液添加盐酸盐(4.00m，10.0ml)，并在25℃下将混合物搅拌1小时。通过添加水(100ml)，使反应混合物淬灭，并用乙酸乙酯(200ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(200ml
×
3)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝10/1到1/1)纯化，得到呈黄色油状的1-(3-(1,1-二氟-2-羟基-2-甲基丙基)-2-氟苯基)乙烷-1-酮(1.50g，6.09mmol，83.5％产率)。
[0987]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.97-7.91(m,1h),7.66-7.61(m,1h),7.31-7.27(m,1h),2.66(d,j＝4.0hz,3h),1.37(d,j＝1.2hz,6h)。
[0988]
步骤d：向1-(3-(1,1-二氟-2-羟基-2-甲基丙基)-2-氟苯基)乙烷-1-酮(1.50g，6.09mmol，1.00eq.)和(r)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(2.22g，18.3mmol，3.00eq.)在四氢呋喃(10.0ml)中的溶液中添加异丙醇钛(iv)(3.46g，12.2mmol，3.60ml，2.00eq.)和1-甲氧基-2-(2-甲氧基乙氧基)乙烷(1.63g，12.2mmol，1.74ml，2.00eq.)，并在氮气气氛下在70℃下将混合物搅拌6小时。然后将混合物冷却到25℃，用水(50.0ml)稀释，并用乙酸乙酯(50.0ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(50.0ml
×
3)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝10/1到1/1)纯化，得到呈黄色油状的(r)-n-(1-(3-(1,1-二氟-2-羟基-2-甲基丙基)-2-氟苯基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.50g，4.29mmol，70.1％产率)。
[0989]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.73-7.68(m,1h),7.60-7.52(m,1h),7.26-7.22(m,1h),1.37-1.35(m,3h),1.32(s,6h),1.24(s,9h)
[0990]
步骤e：在0℃下向(r)-n-(1-(3-(1,1-二氟-2-羟基-2-甲基丙基)-2-氟苯基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.50g，4.29mmol，1.00eq.)在四氢呋喃(10.0ml)中的溶液中缓慢添加钠硼烃(488mg，12.9mmol，3.00eq.)，并在0℃下将混合物搅拌12小时。然后，混合物用水(50.0ml)稀释并用乙酸乙酯(100ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(50.0ml
×
3)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝10/1到1/1)纯化，得到呈黄色油状的(r)-n-(1-(3-(1,1-二氟-2-羟基-2-甲基丙基)-2-氟苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺)(1.30g，3.70mmol，86.2％产率)。
[0991]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.45-7.27(m,2h),7.16-7.10(m,1h),4.60-4.55(m,1h),3.66-3.58(m,1h),1.30-1.26(m,3h),1.16(s,6h),1.14-1.10(m,9h)。
[0992]
步骤f：向(r)-n-(1-(3-(1,1-二氟-2-羟基-2-甲基丙基)-2-氟苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(600mg，1.71mmol，1.00eq.)在二氯甲烷(5.00ml)中的溶液中添加盐酸盐(4.00m，5.00ml)，并在25℃下将混合物搅拌30分钟。然后在减压下浓缩混合物，得到呈黄色油状的1-(3-(1-氨基乙基)-2-氟苯基)-1,1-二氟-2-甲基丙-2-醇(400mg，1.41mmol，82.3％产率，盐酸盐)。
[0993]
步骤g：向1-(3-(1-氨基乙基)-2-氟苯基)-1,1-二氟-2-甲基丙-2-醇(200mg，0.81mmol，1.00eq.)和1,7-二氯-4-甲基吡啶并[3,4-d]哒嗪(175mg，0.81mmol，1.00eq.)在二甲亚砜(2.00ml)中的溶液中添加氟化钾(235mg，4.04mmol，5.00eq.)，并在130℃下将混合物搅拌12小时。然后，将混合物冷却到25℃，用水(10.0ml)稀释，并用乙酸乙酯(10.0ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(10.0ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过制备型hplc[柱：welch xtimate c18 150
×
25mm
×
5um；流动相：a相：水(0.05％hcl)，b相：乙腈；b％：14％-44％]纯化，得到呈黄色固体状的1-(3-(1-((7-氯-4-甲基吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-基)氨基)乙基)-2-氟苯基)-1,1-二氟-2-甲基丙-2-醇(140mg，321μmol，39.7％产率，97.5％纯度)。lcms[m+1]
+
:425.0。
[0994]
步骤h：经由sfc纯化[柱：regis(s,s)whelk-o1(250mm
×
25mm，10um)；流动相：a相：在ipa中的0.1％nh4oh，b相：co2；b％：55％-55％]将固体的1-[3-[1-[(7-氯-4-甲基-吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-基)氨基]乙基]-2-氟-苯基]-1,1-二氟-2-甲基-丙-2-醇(140mg，330μmol，1.00eq.)分离成两个对映异构体，得到呈黄色固体状的(r)-1-(3-(1-((7-氯-4-甲基吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-基)氨基)乙基)-2-氟苯基)-1,1-二氟-2-甲基丙-2-醇(第一洗脱异构体，70.0mg，0.16mmol，50.0％产率)。
[0995]
sfc特征：柱：(s,s)whelk-o1 50
×
4.6mm i.d.，1.8um流动相：a相：co2，b相：ipa(0.05％二乙胺)；梯度洗脱：在co2中的40％ipa(0.05％二乙胺)；流速：3ml/min；检测器：pda；柱温：35℃；背压：100bar。
[0996]
步骤i：向(r)-1-(3-(1-((7-氯-4-甲基吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-基)氨基)乙基)-2-氟苯基)-1,1-二氟-2-甲基丙-2-醇(20.0mg，0.05mmol，1.00eq.)和(1r,4r)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷(12.8mg，0.09mmol，2.00eq.，盐酸盐)在1,4-二噁烷(1.50ml)中的溶液中添加pd2(dba)3(4.31mg，4.71μmol，0.10eq.)、ruphos(4.39mg，9.42μmol，0.20eq.)和碳酸铯(76.8mg，0.24mmol，5.00eq.)，并在氮气气氛下在100℃下将混合物搅拌12小时。将混合物冷却到25℃，用水(10.0ml)稀释，并用乙酸乙酯(20.0ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(20.0ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过制备型hplc[柱：waters xbridge150
×
25mm 10um；流动相：a相：水(10mm nh4hco3)，b相：乙腈；b％：20％-50％]纯化，得到呈黄色固体状的1-(3-((r)-1-((7-((1r,4r)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚-5-基)-4-甲基吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-基)氨基)乙基)-2-氟苯基)-1,1-二氟-2-甲基丙-2-醇(11.4mg，0.02mmol，48.6％产率，97.6％纯度)。lcms[m+1]
+
:488.3。
[0997]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝8.97(s,1h),7.51-7.46(m,1h),7.36(d,j＝8.0hz,1h),7.30-7.26(m,1h),7.20-7.14(m,2h),5.72-5.63(m,1h),5.34(s,1h),5.08(s,1h),4.78(s,1h),3.88(d,j＝8.0hz,1h),3.72(d,j＝8.0hz,1h),3.62(d,j＝12.0hz,1h),3.40(d,j＝8.0hz,1h),2.55(s,3h),2.02-1.93(m,2h),1.58(d,j＝4.0hz,3h),1.22(d,j＝4.0hz,6h)。
[0998]
sfc条件：柱：chiralpak as-3 50
×
4.6mmi.d.，3um；流动相：a相：co2，及b相：meoh(0.05％二乙胺)；梯度洗脱：meoh(0.05％二乙胺)在co2中从5％到40％；流速：3ml/min；检测器：pda；柱温：35℃；背压：100bar。
[0999]
遵循通用反应方案iii的教示内容和为制备实施例20-1所述的过程，制备了表20中所示的以下式(i)化合物、实施例20-2-20-3。
[1000]
表20
[1001][1002]
实施例21-1
[1003]
(r)-3-(1-((4-甲基-7-吗啉代吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-基)氨基)乙基)-5-(三氟甲基)苯酚
[1004][1005]
步骤a：在氮气气氛下向(r)-1-(3-(苯甲氧基)-5-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-胺(120mg，359μmol，0.95eq.，hcl)和4-(1-氯-4-甲基吡啶并[3,4-d]哒嗪-7-基)吗啉(100mg，378μmol，1.00eq.)在二甲亚砜(3.00ml)中的溶液中添加氟化钾(87.8mg，1.51mmol，35.4μl，4.00eq.)，并在130℃下将溶液搅拌12小时。反应混合物用水(15.0ml)稀释，用乙酸乙酯{2](10.0ml
×
3)萃取，用盐水(5.00ml
×
3)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过制备型tlc(二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化，得到呈黄色固体状的(r)-n-(1-(3-(苯甲氧基)-5-(三氟甲基)苯基)乙基)-4-甲基-7-吗啉代吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-胺(65.0mg，121μmol，32.1％产率，97.8％纯度)。lcms[m+1]
+
:524.3。
[1006]
将(r)-n-(1-(3-(苯甲氧基)-5-(三氟甲基)苯基)乙基)-4-甲基-7-吗啉代吡啶并
[3,4-d]哒嗪-1-胺(65.0mg，124μmol，1.00eq.)、pd/c(20.0mg，10％纯度)和氢氧化钯(20.0mg)在氢气气氛(15psi)下在25℃下在甲醇(5.00ml)中的溶液在20℃下保持30分钟。过滤并在减压下浓缩溶液，得到残余物。残余物通过制备型hplc[(phenomenex luna c18150
×
25mm
×
10um；流动相：a相：水(0.225％甲酸)，b相：mecn；b％：12％-42％)]纯化，得到呈黄色固体状的(r)-3-(1-((4-甲基-7-吗啉代吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-基)氨基)乙基)-5-(三氟甲基)苯酚(12.2mg，25.2μmol，20.3％产率，99.4％纯度，甲酸盐)。lcms[m+1]
+
:434.2。
[1007]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝10.06-9.94(m,1h),9.02(s,1h),8.13(s,1h),7.46(d,j＝0.8hz,1h),7.40(s,1h),7.16(s,1h),7.06(s,1h),6.85(s,1h),5.39(m,1h),3.78-3.77(m,4h),3.70-3.69(m,4h),2.58(s,3h),1.56(d,j＝6.8hz,3h)。
[1008]
sfc条件：“柱：chiralcel od-3 50
×
4.6mmi.d.，3um；流动相：co2为a相，甲醇(0.05％dea)为b相；梯度洗脱：甲醇(0.05％dea)在co2中从5％到40％；流速：3ml/min；检测器：pda；柱温：35℃；背压：100bar”。
[1009]
实施例21-2
[1010][1011]
步骤a：向6-溴-4-氯-1-甲基酞嗪(279mg，1.09mmol，1.20eq.)和(r)-1-(3-(苯甲氧基)-5-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-胺(300mg，0.90mmol，1.00eq.，hcl)在二甲亚砜(5.00ml)中的溶液中添加氟化钾(263mg，4.52mmol，106μl，5.00eq.)，并在130℃下将混合物搅拌12小时。混合物用水(20.0ml)稀释并用乙酸乙酯(20.0ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(20.0ml
×
2)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过制备型tlc(硅胶板，石油醚:乙酸乙酯＝1:1，rf＝0.2)纯化，得到呈黄色固体状的(r)-n-(1-(3-(苯甲氧基)-5-(三氟甲基)苯基)乙基)-7-溴-4-甲基酞嗪-1-胺(300mg，581μmol，64.3％产率)。lcms[m+1]
+
:516.0。
[1012]
步骤b：向(r)-n-(1-(3-(苯甲氧基)-5-(三氟甲基)苯基)乙基)-7-溴-4-甲基酞嗪-1-胺(150mg，0.29mmol，1.00eq.)、吗啉(50.6mg，0.58mmol，51.1μl，2.00eq.)、ruphos(13.6mg，0.03mmol，0.10eq.)和碳酸铯(284mg，872μmol，3.00eq.)在二噁烷(10.0ml)中的溶液中添加pd2(dba)3(26.6mg，0.03mmol，0.10eq.)，然后在氮气气氛下在100℃下将反应物搅拌12小时。用水(15.0ml)淬灭反应物，并用乙酸乙酯(15.0ml
×
3)萃取混合物。合并的有
机层用盐水(15.0ml
×
2)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过制备型tlc(硅胶板，二氯甲烷:甲醇＝10:1，rf＝0.3)纯化，得到呈黄色油状的(r)-n-(1-(3-(苯甲氧基)-5-(三氟甲基)苯基)乙基)-4-甲基-7-吗啉代酞嗪-1-胺(120mg，230μmol，79.1％产率)。lcms[m+1]
+
:523.3。
[1013]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝7.98(d,j＝9.2hz,1h),7.83(d,j＝8.8hz,1h),7.70(dd,j＝2.8,9.2hz,1h),7.61-7.57(m,2h),7.35-7.29(m,5h),7.17-7.13(m,2h),5.50(t,j＝6.8hz,1h),5.14(s,2h),3.85(m,4h),3.44-3.39(m,4h),2.55(s,3h),1.59(d,j＝6.8hz,3h)。
[1014]
步骤c：向(r)-n-(1-(3-(苯甲氧基)-5-(三氟甲基)苯基)乙基)-4-甲基-7-吗啉代酞嗪-1-胺(120mg，0.03mmol，1.00eq.)在甲醇(10.0ml)中的溶液中添加pd/c(80.0mg，0.03mmol，10％纯度，1.00eq.)和氢氧化钯(80.0mg，0.03mmol，1.00eq.)，然后在氢气气氛(15psi)下在40℃下将反应物搅拌1小时。过滤并在减压下浓缩反应物，得到残余物。残余物通过制备型hplc[(柱：waters xbridge 150
×
25mm 10um；流动相：a相：水(10mm nh4hco3)，b相：mecn；b％：28％-58％)]纯化，得到呈黄色固体状的(r)-3-(1-((4-甲基-7-吗啉代酞嗪-1-基)氨基)乙基)-5-(三氟甲基)苯酚(34.0mg，78.6μmol，34.2％产率)。lcms[m+1]
+
:433.3.
[1015]1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝9.95(s,1h),7.78-7.76(m,1h),7.60-7.58(m,2h),7.29(d,j＝7.2hz,1h),7.18(s,1h),7.09(s,1h),6.84(s,1h),5.48-5.41(m,1h),3.84-3.82(m,4h),3.43-3.40(m,4h),2.55(s,3h),1.57(d,j＝7.2hz,3h).
[1016]
sfc条件：chiralcel od-3 50
×
4.6mmi.d.，3um；流动相：co2为a相，meoh(0.05％dea)为b相；梯度洗脱：meoh(0.05％dea)在co2中从5％到40％；流速：3ml/min；检测器：pda；柱温：35℃；背压：100bar。
[1017]
实施例21-3
[1018]
(r)-3-甲基-5-(1-((4-甲基-7-吗啉代吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-基)氨基)乙基)苯甲腈
[1019][1020]
步骤a：将3-乙酰基-5-甲基苄腈(0.50g，3.14mmol，1.00eq.)、(r)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(495mg，4.08mmol，1.30eq.)和乙醇钛(1.43g，6.28mmol，1.30ml，2.00eq.)在四氢呋喃(5.00ml)中的混合物脱气并用氮气吹扫3次，然后在氮气气氛下在70℃下将混合物搅拌12小时。然后通过在25℃下添加水(10.0ml)使反应混合物淬灭，并用乙酸乙酯(20.0ml
×
3)萃取，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝10/1到1/1)纯化，得到呈黄色油状的(r,e)-n-(1-(3-氰基-5-甲基苯基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(730mg，2.78mmol，88.6％产率)。lcms[m+1]
+
:263.0。
[1021]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝8.10(s,1h),8.01(s,1h),7.86(d,j＝0.4hz,1h),2.73(s,3h),2.42(s,3h),1.23(s,9h)。
[1022]
步骤b：在0℃下向(r,e)-n-(1-(3-氰基-5-甲基苯基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(0.30g，1.14mmol，1.00eq.)在四氢呋喃(3.00ml)中的溶液添加硼氢化钠(130mg，3.43mmol，3.00eq.)。在20℃下将混合物搅拌2小时。混合物用氯化铵溶液(10.0ml)淬灭，并在减压下浓缩，得到残余物。残余物用乙酸乙酯(60.0ml)稀释，有机层用盐水(20.0ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过制备型tlc(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化，得到呈黄色油状的(r)-n-(1-(3-氰基-5-甲基苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(280mg，1.06mmol，92.6％产率)。lcms[m+1]
+
:265.1。
[1023]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝7.67(s,1h),7.56-7.52(m,2h),5.76(d,j＝7.6hz,1h),4.45-4.35(m,1h),2.35(s,3h),1.38(d,j＝7.2hz,3h),1.12(s,9h)。
[1024]
步骤c：在25℃下将(r)-n-(1-(3-氰基-5-甲基苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(250mg，946μmol，1.00eq.)在盐酸/乙酸乙酯(4.0m，2.60ml，11.0eq.)中的混合物搅拌1小时。反应混合物用饱和碳酸氢钠溶液(5.00ml)淬灭，并用乙酸乙酯(10.0ml
×
3)萃取，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到呈黄色油状的3-(1-氨基乙基)-5-甲基苄腈(130mg，811μmol，85.8％产率)。
[1025]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝7.62(s,1h),7.53(s,1h),7.48(d,j＝0.4hz,1h),4.01(q,j＝6.8hz,1h),2.34(s,3h),1.24(d,j＝6.8hz,3h)。
[1026]
步骤d：将3-(1-氨基乙基)-5-甲基苄腈(100mg，624μmol，1.00eq.)、4-(1-氯-4-甲基吡啶并[3,4-d]哒嗪-7-基)吗啉(165mg，624μmol，1.00eq.)和氟化钾(109mg，1.87mmol，3.00eq.)在二甲亚砜(0.20ml)中的混合物脱气并用氮气吹扫3次，然后在氮气气氛下在130℃下将混合物搅拌12小时。反应混合物在25℃下通过水(10.0ml)淬灭，并用乙酸乙酯(10.0ml
×
3)萃取，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过制备型hplc[柱：waters xbridge 150
×
25mm 10um；流动相：a相：水(10mm nh4hco3)，b相：mecn；b％：24％-54％]纯化，得到呈黄色固体状的3-甲基-5-(1-((4-甲基-7-吗啉代吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-基)氨基)乙基)苯甲腈(80.0mg，206μmol，32.9％产率，99.9％纯度)。用sfc[柱：daicel chiralpak ad(250mm
×
30mm，10um)；流动相：a相：在meoh中的0.1％nh4oh，b相：co2；b％：25％]分离对映异构体。
[1027]
实施例21-3，(r)-3-甲基-5-(1-((4-甲基-7-吗啉代吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-基)氨基)乙基)苯甲腈(第一洗脱异构体)：
[1028]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝8.97(s,1h),7.56(s,2h),7.34(s,1h),7.27(s,1h),5.37(q,j＝6.8hz,1h),3.85-3.80(m,4h),3.76-3.72(m,4h),2.62(s,3h),2.33(s,3h),1.63(d,j＝6.8hz,3h)
[1029]
lcms[m+1]
+
:389.2。
[1030]
sfc条件：“柱：chiralpak ad-3 50
×
4.6mm i.d.，3um；流动相：co2为a相，meoh(0.05％dea)为b相；梯度洗脱：meoh(0.05％dea)在co2中从5％到40％；流速：3ml/min；检测
器：pda；柱温：35℃；背压：100bar”[1031]
实施例21-4
[1032]
(r)-3-甲基-5-(1-((4-甲基-7-吗啉代酞嗪-1-基)氨基)乙基)苯甲腈
[1033][1034]
步骤a：将3-(1-氨基乙基)-5-甲基苄腈(100mg，624μmol，1.00eq.)、6-溴-4-氯-1-甲基酞嗪(161mg，624μmol，1.00eq.)和氟化铯(284mg，1.87mmol，69.0μl，3.00eq.)在二甲亚砜(0.20ml)中的混合物脱气并用氮气吹扫3次，然后在氮气气氛下在130℃下将混合物搅拌1小时。通过在25℃下添加水(10.0ml)使反应混合物淬灭，用乙酸乙酯(10.0ml
×
3)萃取，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过制备型tlc(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝1:1)纯化，得到呈黄色油状的3-(1-((7-溴-4-甲基酞嗪-1-基)氨基)乙基)-5-甲基苄腈(50.0mg，131μmol，21.0％产率)。lcms[m+1]
+
:382.9。
[1035]
将3-(1-((7-溴-4-甲基酞嗪-1-基)氨基)乙基)-5-甲基苄腈(40.0mg，105μmol，1.00eq.)、吗啉(36.6mg，420μmol，36.9μl，4.00eq.)、碳酸铯(103mg，315μmol，3.00eq.)和ruphos pd g3(87.8mg，105μmol，1.00eq.)在二噁烷(1.00ml)中的混合物脱气并用氮气吹扫3次，然后在氮气气氛下在80℃下将混合物搅拌2小时。通过在25℃下添加水(10.0ml)使反应混合物淬灭，用乙酸乙酯(10.0ml
×
3)萃取，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过制备型hplc[柱：waters xbridge 150
×
25mm 10um；流动相：a相：水(10mm nh4hco3，b相：mecn；b％：25％-55％]纯化，得到呈白色固体状的3-甲基-5-(1-((4-甲基-7-吗啉代酞嗪-1-基)氨基)乙基)苯甲腈(20.0mg，51.5μmol，49.0％产率，99.7％纯度)。使用sfc(柱：daicel chiralpak ad(250mm
×
30mm，10um)；流动相：a相：在meoh中的nh4oh，b相：co2；b％：30％]获得纯(r)-对映异构体，得到呈黄色固体的(r)-3-甲基-5-(1-((4-甲基-7-吗啉代酞嗪-1-基)氨基)乙基)苯甲腈(4.51mg)。lcms[m+1]
+
:388.2。
[1036]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝7.88(d,j＝9.2hz,1h),7.59-7.52(m,4h),7.32(s,1h),5.41(q,j＝6.8hz,1h),3.91-3.84(m,4h),3.46-3.40(m,4h),2.61(s,3h),2.32(s,3h),1.64(d,j＝7.2hz,3h)。
[1037]
sfc条件：柱：chiralpak ad-3 50
×
4.6mmi.d.，3um；流动相：co2为a相，meoh(0.05％dea)为b相；梯度洗脱：meoh(0.05％dea)在co2中从5％到40％；流速：3ml/min；检测器：pda；柱温：35℃；背压：100bar。
[1038]
实施例21-5和实施例21-6
[1039]
7-((r)-4-(二甲氨基)-3,3-二氟哌啶-1-基)-4-甲基-n-((r)-1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)酞嗪-1-胺
[1040]
7-((s)-4-(二甲氨基)-3,3-二氟哌啶-1-基)-4-甲基-n-((r)-1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)酞嗪-1-胺
[1041][1042]
步骤a：向4-氨基-3,3-二氟哌啶-1-羧酸叔丁酯(300mg，1.27mmol，1.00eq.)在甲醇(10.0ml)中的溶液中添加多聚甲醛(1.00g，1.27mmol，1.00eq.)和乙酸(7.63mg，127μmol，7.26μl，0.10eq.)，在50℃下将反应物搅拌30分钟，然后向反应物一次性添加氰基硼氢化钠(479mg，7.62mmol，6.00eq.)在50℃下将反应混合物搅拌16小时，然后在减压下浓缩，得到残余物。残余物用水(50.0ml)稀释，并用乙酸乙酯(30.0ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(50.0ml
×
3)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝5/1到3/1)纯化，得到呈白色固体状的化合物4-(二甲氨基)-3,3-二氟哌啶-1-羧酸叔丁酯(320mg，1.21mmol，95.4％产率)。lcms[m+1]
+
:265.1。
[1043]
步骤b：向4-(二甲氨基)-3,3-二氟哌啶-1-羧酸叔丁酯(320mg，1.21mmol，1.00eq.)在乙腈(1.00ml)中的溶液中添加在二噁烷中的hcl(4.00m，5.33ml，17.6eq.)。在0℃下将反应混合物搅拌30分钟，然后在减压下浓缩，得到呈白色固体状的化合物3,3-二氟-n,n-二甲基哌啶-4-胺(190mg，1.16mmol，95.6％产率)，其直接用于下一步骤中。
[1044]
步骤c：将(r)-7-溴-4-甲基-n-(1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)酞嗪-1-胺(220mg，519μmol，1.00eq.)、3,3-3,3-二氟-n,n-二甲基哌啶-4-胺(128mg，778μmol，1.50eq.)、叔丁醇钠(199mg，2.07mmol，4.00eq.)和ruphos pd g3(43.4mg，51.9μmol，0.10eq.)在二噁烷(5.00ml)中的混合物脱气并用氮气吹扫3次，然后在氮气气氛下在110℃下将反应混合物搅拌16小时。将反应混合物冷却到25℃，用水(30.0ml)稀释，并用乙酸乙酯(30.0ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(40.0ml
×
3)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残余物。残余物首先通过制备型tlc(二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化，得到白色固体。lcms[m+1]+:508.3。
[1045]
化合物进一步纯化，并使用sfc(柱：daicel chiralcel od-h(250mm
×
30mm，5μm)；流动相：a相：在h2o中的0.1％nh3，b相：meoh；b％：20％)分离非对映异构体，得到分离的异构体7-((r)-4-(二甲氨基)-3,3-二氟哌啶-1-基)-4-甲基-n-((r)-1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)酞嗪-1-胺和7-((s)-4-(二甲氨基)-3,3-二氟哌啶-1-基)-4-甲基-n-((r)-1-(2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)酞嗪-1-胺。
[1046]
实施例21-5(第一洗脱异构体)的谱数据：
[1047]
lcms[m+1]
+
:508.2
[1048]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝8.24(d,j＝9.2hz,1h),8.00(d,j＝2.0hz,1h),7.88(dd,j＝2.4,9.2hz,1h),7.78-7.72(m,1h),7.55(br d,j＝7.6hz,1h),7.34-7.25(m,1h),
5.62-5.51(m,1h),5.01-4.95(m,1h),4.77-4.64(m,1h),4.38-4.20(m,1h),3.78-3.63(m,1h),3.44(br t,j＝12.0hz,1h),3.10(s,6h),2.80(s,3h),2.65(s,3h),2.62-2.53(m,1h),2.27-2.13(m,1h),1.71(d,j＝6.8hz,3h)。
[1049]
实施例21-6(第二洗脱异构体)的谱数据：
[1050]
lcms[m+1]
+
:508.2
[1051]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝8.24(d,j＝9.2hz,1h),8.01(d,j＝2.0hz,1h),7.87(dd,j＝2.4,9.2hz,1h),7.77(d,j＝7.6hz,1h),7.55(d,j＝8.0hz,1h),7.35-7.24(m,1h),5.62-5.52(m,1h),5.01-4.95(m,1h),4.76-4.66(m,1h),4.38-4.20(m,1h),3.81-3.62(m,1h),3.44(br t,j＝12.4hz,1h),3.15(s,6h),2.80(s,3h),2.65(s,3h),2.61-2.52(m,1h),2.28-2.13(m,1h),1.72(d,j＝6.8hz,3h)。
[1052]
实施例21-7
[1053][1054]
步骤a：将1-(3-碘苯基)乙烷-1-酮(4.60g，18.7mmol，1.00eq.)、2-溴-2,2-二氟乙酸乙酯(4.17g，20.6mmol，2.64ml，1.10eq.)和铜粉(3.56g，56.1mmol，398μl，3.00eq.)在dmso(50.0ml)中的混合物脱气并用氮气吹扫3次，并在氮气气氛下在60℃下将混合物搅拌12小时。混合物用乙酸乙酯(100ml)稀释，过滤，滤液用盐水(50.0ml
×
3)洗涤，干燥并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝80/1到30/1)纯化，得到呈无色油状的2-(3-乙酰基苯基)-2,2-二氟乙酸乙酯(3.80g，15.7mmol，83.9％产率)。
[1055]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝8.20(s,1h),8.10(d,j＝7.6hz,1h),7.84-7.80(m,1h),7.59(t,j＝7.2hz,1h),4.37-4.29(m,2h),2.65(s,3h),1.32(t,j＝7.2hz,3h)。
[1056]
步骤b：向2-(3-乙酰基苯基)-2,2-二氟乙酸乙酯(2.00g，8.26mmol，1.00eq.)和(r)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.30g，10.8mmol，1.30eq.)在thf(40.0ml)中的溶液中添加丁醇钛(iv)(3.77g，16.5mmol，3.42ml，2.00eq.)和1,2-二甲氧基乙烷(744mg，8.26mmol，858μl，1.00eq.)，并在70℃下将混合物搅拌12小时。反应混合物用乙酸乙酯(100ml)和水(5.00ml)稀释，过滤并在减压下浓缩滤液。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝10/1到5/1)纯化，得到呈黄色油状的(r)-2-(3-(1-((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)乙基)苯基)-2,2-二氟乙酸乙酯(2.40g，6.95mmol，84.2％产率)。
[1057]
步骤c：在0℃下向(r)-2-(3-(1-((叔丁基亚磺酰基)亚氨基)乙基)苯基)-2,2-二氟乙酸乙酯(2.20g，6.37mmol，1.00eq.)在甲醇(20.0ml)中的溶液中添加硼氢化钠(964mg，25.5mmol，4.00eq.)，并在28℃下将混合物搅拌1小时。混合物用水(20.0ml)稀释并用乙酸乙酯(50.0ml
×
3)萃取，并将合并的有机相干燥并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(sio2，
石油醚/乙酸乙酯＝2/1到1/1)纯化，得到呈黄色油状的(r)-n-((r)-1-(3-(1,1-二氟-2-羟乙基)苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(0.90g，2.95mmol，46.3％产率)和呈黄色油状的(r)-n-((s)-1-(3-(1,1-二氟-2-羟乙基)苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(0.90g，2.95mmol，46.3％产率)。lcms[m+1]
+
:306.1。
[1058]
步骤d：向(r)-n-((r)-1-(3-(1,1-二氟-2-羟乙基)苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(0.90g，2.95mmol，1.00eq.)在thf(8.00ml)和水(2.00ml)中的溶液中添加碘(224mg，884μmol，178μl，0.30eq.)，并在50℃下将混合物搅拌1小时。然后用饱和亚硫酸钠水溶液(10.0ml)和碳酸氢钠水溶液(10.0ml)稀释反应混合物，所得混合物用二氯甲烷/甲醇(10:1，10.0ml
×
3)萃取。将合并的有机相干燥并在减压下浓缩，得到呈黄色油状的(r)-2-(3-(1-氨基乙基)苯基)-2,2-二氟乙烷-1-醇(450mg，粗品)。
[1059]
步骤e：将4-(1-氯-4-甲基吡啶并[3,4-d]哒嗪-7-基)吗啉(200mg，756μmol，1.00eq.)、(r)-2-(3-(1-氨基乙基)苯基)-2,2-二氟乙烷-1-醇(152mg，756μmol，1.00eq.)、brettphos pd g3(68.5mg，75.6μmol，0.10eq.)和叔丁醇钠(218mg，2.27mmol，3.00eq.)在二噁烷(3.00ml)中的混合物脱气并用氮气吹扫3次，然后在氮气气氛下在100℃下将混合物搅拌1小时。过滤并在减压下浓缩反应混合物。残余物通过制备型hplc[柱：phenomenex luna c18150
×
25mm
×
10um；流动相：a相：水(0.225％甲酸，b相：乙腈；b％：9％-39％)纯化，得到呈黄色固体状的(r)-2,2-二氟-2-(3-(1-((4-甲基-7-吗啉代吡啶并[3,4-d]哒嗪-1-基)氨基)乙基)苯基)乙烷-1-醇(73.0mg，170μmol，22.5％产率，99.9％纯度)。lcms[m+1]
+
:430.1。
[1060]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝9.11(s,1h),8.48(s,1h),7.62(s,1h),7.56(br d,j＝6.4hz,1h),7.46-7.35(m,3h),5.44-5.34(m,1h),3.95-3.81(m,10h),2.71(s,3h),1.69(d,j＝6.8hz,3h)。
[1061]
实施例21-8
[1062][1063]
步骤a：在0℃下向(r)-n-(1-(5-氨基-2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)-4-甲基-7-吗啉代酞嗪-1-胺(100mg，224μmol，1.00eq.)和四氟硼酸(253mg，1.15mmol，179μl，40.0％纯度，5.13eq.)在水(3.00ml)中的混合物中逐滴添加在水(0.60ml)中的亚硝酸钠(20.1mg，292μmol，1.30eq.)，在0℃下将混合物搅拌30分钟。过滤反应混合物，在减压下浓
缩滤饼，得到呈黄色固体状的(r)-4-甲基-3-(1-((4-甲基-7-吗啉代酞嗪-1-基)氨基)乙基)-5-(三氟甲基)苯重氮四氟硼酸盐(100mg，粗品)。lcms[m-28]
+
:429.0。
[1064]
步骤b：将(r)-4-甲基-3-(1-((4-甲基-7-吗啉代酞嗪-1-基)氨基)乙基)-5-(三氟甲基)苯重氮四氟硼酸盐(100mg，184μmol，1.00eq.)在甲苯(1.00ml)中的溶液加热到110℃，在110℃下将混合物搅拌3小时。在减压下浓缩反应混合物，得到残余物。残余物通过制备型hplc[柱：phenomenex luna c18 80
×
40mm
×
3um；流动相：a相：水(0.04％hcl)，b相：乙腈；b％：28％-52％]纯化，得到呈黄色固体状的(r)-n-(1-(5-氟-2-甲基-3-(三氟甲基)苯基)乙基)-4-甲基-7-吗啉代酞嗪-1-胺(13.1mg，28.9μmol，15.8％产率，99.3％纯度，盐酸盐)。lcms[m+1]
+
:449.1。
[1065]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝14.75(br s,1h),8.58-8.41(m,1h),8.22-8.15(m,1h),7.81(s,1h),7.79-7.74(m,1h),7.62-7.56(m,1h),7.48-7.43(m,1h),5.50-5.37(m,1h),3.85-3.80(m,4h),3.72-3.65(m,4h),2.73(s,3h),2.54(s,3h),1.64-1.58(m,3h)。
[1066]
sfc条件：chiralcel od-3 3μm，0.46cm id
×
5cm l；流动相：sfc co2为a，meoh(0.05％异丙胺)为b；梯度洗脱：b在a中在3分钟内从10％到40％；流速：4.0ml/min；柱温：35℃；背压：100bar。
[1067]
实施例21-9
[1068]
3-((r)-1-((5-氟-7-((r)-六氢-2h,6h-吡嗪[1,2-c][1,3]噁嗪-2-基)-4-甲基酞嗪-1-基)氨基)乙基)-2-甲基苄腈
[1069][1070]
步骤a：在0℃下向2-氨基-5-溴-3-氟苯甲酸(2.00g，8.55mmol，1.00eq.)在盐酸(4.0m，21.4ml，10.0eq.)和水(10.0ml)中的溶液中添加亚硝酸钠(708mg，10.3mmol，1.20eq.)，然后在相同温度下将混合物搅拌30分钟。此后，逐滴添加碘化钾(2.13g，12.8mmol，1.50eq.)的溶液，然后将混合物加热到90℃并搅拌30分钟。冷却混合物，并用碳酸钾将ph调整到ph＝9，然后过滤。用hcl(在水中为4.0m)将滤液调整到ph＝4，过滤，并将沉淀物真空干燥，得到呈黄色固体状的5-溴-3-氟-2-碘苯甲酸(2.40g，6.96mmol，81.4％产率)。
[1071]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝14.06-13.55(m,1h),7.79-7.72(m,1h),7.69-7.64(m,1h)。
[1072]
步骤b：在0℃下向5-溴-3-氟-2-碘苯甲酸(2.40g，6.96mmol，1.00eq.)在甲苯
(24.0ml)和甲醇(8.00ml)中的溶液中逐滴添加三甲基硅烷基重氮甲烷(2.0m，6.96ml，2.00eq.)，并在20℃下将混合物搅拌30分钟。在减压下浓缩反应混合物，残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝1/0到10/1)纯化，得到呈黄色固体状的5-溴-3-氟-2-碘苯甲酸甲酯(2.47g，6.88mmol，98.9％产率)。
[1073]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.76-7.69(m,1h),7.40-7.33(m,1h),3.96(s,3h)。
[1074]
步骤c：将5-溴-3-氟-2-碘苯甲酸甲酯(2.47g，6.88mmol，1.00eq.)、三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡(2.73g，7.57mmol，2.55ml，1.10eq.)和pd(pph3)2cl2(483mg，688μmol，0.10eq.)在二噁烷(30.0ml)中的混合物脱气并用氮气吹扫(3次)，然后在氮气气氛下在80℃下将混合物搅拌12小时。然后将混合物倒入氟化钾(在水中，50.0ml)的饱和溶液中，并搅拌30分钟。水相用乙酸乙酯(100ml
×
3)萃取，合并的有机相用盐水(50.0ml
×
3)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝100/1到20/1)纯化，得到呈黄色油状的5-溴-2-(1-乙氧基乙烯基)-3-氟苯甲酸甲酯(1.80g，5.94mmol，86.3％产率)。
[1075]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.69-7.65(m,1h),7.44-7.37(m,1h),4.50(d,j＝2.4hz,1h),4.38-4.34(m,1h),3.90-3.85(m,5h),1.32(t,j＝6.8hz,3h)。
[1076]
步骤d：向5-溴-2-(1-乙氧基乙烯基)-3-氟苯甲酸甲酯(1.80g，5.94mmol，1.00eq.)在thf(20.0ml)中的溶液中添加盐酸(2.0m，8.91ml，3.00eq.)，并在20℃下将混合物搅拌1小时。然后用饱和碳酸氢钠水溶液将混合物的ph调整到ph＝7，并用乙酸乙酯(30.0ml
×
2)萃取溶液。合并的有机相用无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝50/1到30/1)纯化，得到呈黄色油状的2-乙酰基-5-溴-3-氟苯甲酸甲酯(1.40g，5.09mmol，85.7％产率)。
[1077]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.91(s,1h),7.54-7.41(m,1h),3.91(s,3h),2.59(s,3h)。
[1078]
步骤e：向2-乙酰基-5-溴-3-氟苯甲酸甲酯(1.20g，4.36mmol，1.00eq.)在乙醇(10.0ml)中的溶液中添加水合肼(334mg，6.54mmol，325μl，98％纯度，1.50eq.)，并在60℃下将混合物搅拌1小时。然后将混合物冷却到20℃，过滤，并将沉淀物真空干燥，得到呈白色固体状的7-溴-5-氟-4-甲基酞嗪-1-醇(580mg，2.26mmol，51.7％产率)。
[1079]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝12.7(br s,1h),8.17(d,j＝1.6hz,1h),8.15-8.08(m,1h),2.56(d,j＝6.8hz,3h)。
[1080]
步骤f：向7-溴-5-氟-4-甲基酞嗪-1-醇(300mg，1.17mmol，1.00eq.)在氧氯化磷(6.00ml)中的溶液中添加n,n-二异丙基乙胺(453mg，3.50mmol，10.0μl，3.00eq.)，并在110℃下将混合物搅拌2小时。然后，混合物用碳酸氢钠水溶液淬灭，并用乙酸乙酯(10.0ml
×
3)萃取。合并的有机相用无水硫酸钠干燥，在减压下浓缩，残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝5/1)纯化，得到呈橙色固体状的7-溴-1-氯-5-氟-4-甲基酞嗪(150mg，544μmol，46.7％产率)。lcms[m+1]
+
:276.8。
[1081]
步骤g：向7-溴-1-氯-5-氟-4-甲基酞嗪(150mg，544μmol，1.00eq.)在dmso(1.00ml)中的溶液中添加氟化铯(124mg，817μmol，30.1μl，1.50eq.)和(r)-3-(1-氨基乙基)-2-甲基苄腈(87.2mg，544μmol，1.00eq.)，并在130℃下将混合物搅拌30分钟。然后将混合物冷却到25℃，用乙酸乙酯(20.0ml)稀释，用盐水(10.0ml
×
3)洗涤，并将分离的有机相
干燥并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(sio2，石油醚/乙酸乙酯＝5/1到2/1)纯化，得到呈黄色固体状的(r)-3-(1-((7-溴-5-氟-4-甲基酞嗪-1-基)氨基)乙基)-2-甲基苄腈(160mg，401μmol，73.6％产率)。lcms[m+1]
+
:399.1。
[1082]
步骤h：将(r)-3-(1-((7-溴-5-氟-4-甲基酞嗪-1-基)氨基)乙基)-2-甲基苄腈(15.0mg，37.6μmol，1.00eq.)、(r)-六氢-2h,6h-吡嗪[1,2-c][1,3]噁嗪(10.5mg，48.8μmol，1.30eq.，2hcl)、碳酸铯(61.2mg，188μmol，5.00eq.)、ruphos(3.51mg，7.51μmol，0.20eq.)和pd2(dba)3(3.44mg，3.76μmol，0.10eq.)在二噁烷(1.00ml)中的混合物脱气并用氮气吹扫(3次)，然后在氮气气氛下在105℃下将混合物搅拌2小时。将混合物冷却到25℃，过滤并在减压下浓缩。然后，残余物通过制备型hplc[柱：phenomenex luna c18 150
×
25mm
×
10um；流动相：a相：水(0.225％甲酸)，b相：乙腈；b％：2％-32％]纯化，得到呈灰白色固体状的3-((r)-1-((5-氟-7-((r)-六氢-2h,6h-吡嗪[1,2-c][1,3]噁嗪-2-基)-4-甲基酞嗪-1-基)氨基)乙基)-2-甲基苄腈(7.70mg，15.2μmol，40.5％产率，99.9％纯度，甲酸盐)。lcms[m+1]
+
:461.2。
[1083]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝8.52(br s,1h),7.70(d,j＝7.6hz,1h),7.50(d,j＝7.2hz,1h),7.41(d,j＝2.0hz,1h),7.39-7.33(m,1h),7.25(t,j＝8.0hz,1h),5.59-5.51(m,1h),4.11(br d,j＝13.2hz,1h),3.96(br d,j＝12.4hz,1h),3.92-3.84(m,2h),3.77-3.68(m,1h),3.39-3.33(m,1h),3.21-3.11(m,1h),2.97(br d,j＝11.6hz,1h),2.80(br d,j＝11.6hz,1h),2.75-2.63(m,7h),2.51-2.35(m,3h),1.62(d,j＝7.2hz,3h)。
[1084]
实施例21-10
[1085]
(r)-3-(1-((5-氟-7-(3-羟基-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-4-甲基酞嗪-1-基)氨基)乙基)-2-甲基苄腈
[1086][1087]
将(r)-3-(1-((7-溴-5-氟-4-甲基酞嗪-1-基)氨基)乙基)-2-甲基苄腈(60.0mg，150μmol，1.00eq.)、3-甲基氮杂环丁烷-3-醇(27.9mg，225μmol，1.50eq.，hcl)、碳酸铯(245mg，751μmol，5.00eq.)、ruphos(14.0mg，30.1μmol，0.20eq.)和pd2(dba)3(13.8mg，15.0μmol，0.10eq.)在二噁烷(1.00ml)中的混合物脱气并用氮气吹扫(3次)，并在氮气气氛下在100℃下将混合物搅拌2小时。过滤并在减压下浓缩n混合物，残余物通过制备型hplc[柱：phenomenex luna c18 150
×
25mm
×
10um；流动相：a相：水(0.225％甲酸，b相：乙腈；b％：10％-40％]纯化，得到呈黄色固体状的(r)-3-(1-((5-氟-7-(3-羟基-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-4-甲基酞嗪-1-基)氨基)乙基)-2-甲基苄腈(39.0mg，86.0μmol，57.3％产率，99.6％纯度，甲酸盐)。lcms[m+1]
+
:406.1。
[1088]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝8.51(s,1h),7.70(d,j＝7.6hz,1h),7.55-7.47(m,1h),7.27(t,j＝8.0hz,1h),7.07(d,j＝2.0hz,1h),6.87-6.77(m,1h),5.54-5.37(m,1h),4.14-4.07(m,2h),4.07-4.00(m,2h),2.79-2.65(m,6h),1.68-1.55(m,6h)。
[1089]
实施例21-11
[1090][1091]
步骤a：在氮气气氛下在80℃下将3-溴-4-氟-5-(三氟甲基)苯胺(4.00g，15.5mmol，1.00eq.)、三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡(5.60g，15.5mmol，5.23ml，1.00eq.)和pdcl2(pph)3(326mg，0.47mmol，0.03eq.)在1,4-二噁烷(10.0ml)中的溶液搅拌10小时。将r混合物冷却到25℃，倒入饱和氟化钾水溶液(200ml)中并搅拌30分钟，得到悬浮液，过滤悬浮液，然后用乙酸乙酯(200ml
×
3)萃取滤液。合并的有机层用盐水(200ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到粗产物3-(1-乙氧基乙烯基)-4-氟-5-(三氟甲基)苯胺(6.00g，24.1mmol，1.00eq.，粗品)，其不经进一步纯化即可用于下一步骤中。
[1092]
步骤b：在氮气气氛下向3-(1-乙氧基乙烯基)-4-氟-5-(三氟甲基)苯胺(6.00g，24.1mmol，1.00eq.，粗品)在四氢呋喃(20.0ml)中的溶液中添加盐酸(3.00m，8.03ml，1.00eq.)，并在20℃下将混合物搅拌1小时。将混合物倒入水(40.0ml)中，然后用乙酸乙酯(40.0ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(40.0ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝50/1到3/1)纯化，得到呈黄色固体状的1-(5-氨基-2-氟-3-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-酮(2.00g，9.04mmol)。
[1093]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝7.18(dd,j＝3.0,5.6hz,1h),7.08(dd,j＝3.2,5.6hz,1h),5.67(s,2h),2.54(d,j＝4.4hz,3h)。
[1094]
步骤c：向1-(5-氨基-2-氟-3-(三氟甲基)苯基)乙烷-1-酮(2.00g，9.04mmol，1.00eq.)和(r)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.42g，11.8mmol，1.30eq.)在四氢呋喃(20.0ml)中的溶液中添加异丙醇钛(iv)(5.14g，18.1mmol，5.34ml，2.00eq.)和1-甲氧基-2-(2-甲氧基乙氧基)乙烷(4.69g，34.9mmol，5.00ml，3.86eq.)，并在氮气气氛下在70℃下将混合物搅拌12小时。然后在减压下浓缩混合物，残余物通过柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝30/1到1/1)纯化，得到呈黄色油状的(r)-n-(1-(5-氨基-2-氟-3-(三氟甲基)苯基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(500mg，1.54mmol，17.1％产率)。
[1095]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝7.07(br s,1h),6.95(br s,1h),3.83(br s,2h),2.74(br d,j＝2.4hz,3h),1.31(s,9h)。
[1096]
步骤d：在氮气气氛下在0℃下向(r)-n-(1-(5-氨基-2-氟-3-(三氟甲基)苯基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.10g，3.39mmol，1.00eq.)在四氢呋喃(15.0ml)中的溶液中逐份添加硼氢化钠(385mg，10.2mmol，3.00eq.)。在0℃下将混合物搅拌1小时，然后缓慢
地用饱和氯化铵水溶液(40.0ml)稀释，所得混合溶液用乙酸乙酯(30.0ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(30.0ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过柱色谱(硅胶，石油醚/乙酸乙酯＝30/1到1/1)纯化，得到呈黄色油状的(r)-n-(1-(5-氨基-2-氟-3-(三氟甲基)苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(600mg，1.84mmol，54.2％产率)。lcms[m+1]
+
:327.0。
[1097]1h nmr(400mhz,cdcl3)δ＝6.97-6.83(m,1h),6.82-6.76(m,1h),4.83-4.69(m,1h),3.71-3.44(m,2h),1.59-1.50(m,3h),1.25-1.19(m,9h)。(非对映异构体的比率约为2:1)。
[1098]
步骤e：向(r)-n-(1-(5-氨基-2-氟-3-(三氟甲基)苯基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(600mg，1.84mmol，1.00eq.)在二氯甲烷(5.00ml)中的溶液中逐滴添加hcl(在二噁烷中为4.00m，5.00ml，10.9eq.)，然后在20℃下将反应混合物搅拌1小时。在减压下浓缩反应混合物，并通过缓慢添加饱和碳酸氢钠水溶液将残余物的ph调整到ph＝8。水溶液用dcm:甲醇(10:1，20.0ml
×
5)萃取，合并的有机相用盐水(10.0ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到呈黄色固体状的3-(1-氨基乙基)-4-氟-5-(三氟甲基)苯胺(350mg，1.58mmol，85.7％产率)，其不经进一步纯化即可直接使用。
[1099]
步骤f：在氮气气氛下在130℃下将3-(1-氨基乙基)-4-氟-5-(三氟甲基)苯胺(140mg，630μmol，1.00eq.)、6-溴-4-氯-1-甲基酞嗪(162mg，0.63mmol，1.00eq.)和氟化钾(183mg，3.15mmol，73.8μl，5.00eq.)在dmso(3.00ml)中的溶液搅拌1小时。将混合物倒入水(20.0ml)中，所得水溶液用乙酸乙酯(20.0ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(20.0ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过制备型hplc[柱：welch xtimate c18150
×
25mm
×
5um；流动相：a相：水(0.05％hcl)b相：乙腈；b％：14％-44％]纯化，得到呈白色固体状的n-(1-(5-氨基-2-氟-3-(三氟甲基)苯基)乙基)-7-溴-4-甲基酞嗪-1-胺(10.0mg，18.1μmol，2.86％产率，80.0％纯度)。lcms[m+1]
+
:443.1。
[1100]
然后，外消旋n-(1-(5-氨基-2-氟-3-(三氟甲基)苯基)乙基)-7-溴-4-甲基酞嗪-1-胺(100mg，226μmol，1.00eq.)通过sfc[柱：daicel chiralpak as(250mm
×
30mm，10um)；流动相：a相：在meoh中的(0.1％nh4oh)，b相：co2；b％：25％-25％]纯化，得到呈白色固体状的(r)-n-(1-(5-氨基-2-氟-3-(三氟甲基)苯基)乙基)-7-溴-4-甲基酞嗪-1-胺作为第一洗脱异构体(20.0mg，45.1μmol，20.0％产率)。
[1101]
步骤g：在20℃下将(r)-n-(1-(5-氨基-2-氟-3-(三氟甲基)苯基)乙基)-7-溴-4-甲基酞嗪-1-胺(20.0mg，45.1μmol，1.00eq.)、二碳酸二叔丁酯(11.8mg，54.2μmol，12.4μl，1.20eq.)和n,n-二甲基吡啶-4-胺(5.51mg，45.1μmol，1.00eq.)在二氯甲烷(1.00ml)中的溶液搅拌1小时。将混合物倒入水(20.0ml)中，然后用乙酸乙酯(20.0ml
×
3)萃取，合并的有机层用盐水(20.0ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过制备型tlc(硅胶，二氯甲烷/甲醇＝20/1)纯化，得到呈灰色固体状的(r)-(3-(1-((7-溴-4-甲基酞嗪-1-基)氨基)乙基)-4-氟-5-(三氟甲基)苯基)(第三丁氧基羰基)氨基甲酸叔丁酯(15.0mg，23.3μmol，51.7％产率)。lcms[m+3]
+
:644.9。
[1102]
步骤h：在氮气气氛下在100℃下将(r)-(3-(1-((7-溴-4-甲基酞嗪-1-基)氨基)乙基)-4-氟-5-(三氟甲基)苯基)(第三丁氧基羰基)氨基甲酸叔丁酯(15.0mg，23.3μmol，1.00eq.)、3-甲基氮杂环丁烷-3-醇(7.46mg，46.6μmol，2.00eq.，hcl盐)、ruphos(2.18mg，
4.66μmol，0.20eq.)、pd2(dba)3(2.13mg，2.33μmol，0.10eq.)和碳酸铯(38.0mg，0.12mmol，5.00eq.)在1,4-二噁烷(2.00ml)中的溶液搅拌12小时。将混合物冷却到25℃，倒入水(10.0ml)中，所得水溶液用乙酸乙酯(10.0ml
×
3)萃取。合并的有机层用盐水(10.0ml)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。残余物通过制备型tlc(二氧化硅，二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化，得到呈白色固体状的(r)-(4-氟-3-(1-((7-(3-羟基-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-4-甲基酞嗪-1-基)氨基)乙基)-5-(三氟甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(10.0mg，15.3μmol，66.0％产率)。lcms[m+1]
+
:550.1。
[1103]
在20℃下向(r)-(4-氟-3-(1-((7-(3-羟基-3-甲基氮杂环丁烷-1-基)-4-甲基酞嗪-1-基)氨基)乙基)-5-(三氟甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(10.0mg，15.4μmol，1.00eq.)在二氯甲烷(1.00ml)中的溶液中逐滴添加tfa(308mg，2.70mmol，0.20ml，175eq.)，并在20℃下将反应混合物搅拌1小时。然后在减压下浓缩混合物，残余物通过制备型hplc[柱：3_phenomenex luna c18 75
×
30mm
×
3um；流动相：a相：水(10mm nh4hco3)，b相：乙腈；b％：20％-50％]纯化，得到呈灰白色固体状的(r)-1-(4-((1-(5-氨基-2-氟-3-(三氟甲基)苯基)乙基)氨基)-1-甲基酞嗪-6-基)-3-甲基氮杂环丁烷-3-醇(1.12mg，2.41μmol，15.6％产率，96.6％纯度)。lcms[m+1]
+
:450.4。
[1104]1h nmr(400mhz,cd3od)δ＝7.80(d,j＝8.8hz,1h),7.10(d,j＝2.0hz,1h),6.97(dd,j＝8.8,2.0hz,1h),6.83-6.80(m,1h),6.67-6.64(m,1h),5.51-5.45(m,1h),3.99-3.95(m,2h),3.89-3.84(m,2h),2.51(s,3h),1.55(d,j＝7.2hz,3h),1.51(s,3h)。
[1105]
sfc：柱：chiralcel od-3 50
×
4.6mm i.d.，3um；流动相：co2为a相，meoh(0.05％二乙胺)为b相；梯度洗脱：meoh(0.05％二乙胺)在co2中从5％到40％；流速：3ml/min；检测器：pda；柱温：35℃；背压：100bar。
[1106]
实施例a
[1107]
此实施例示出了本发明的示例性化合物与sos1结合并防止标记的示踪配体占据sos1结合位点。
[1108]
式(i)化合物与sos1结合的能力使用htrf置换测定法测量。重组人类sos1多肽(对应于氨基酸564-1049，与n端strepii-tev、c端his标签一起表达于大肠杆菌中，mw＝60.59kda)在缓冲液(25mm hepes ph 7.5，25mm nacl，1mm dtt，0.01％brij 35，0.02％bsa，0.1％dmso)中用示例性式(i)化合物(在dmso储备溶液中)培养。在室温下培养15分钟后，将由定制的cy5标记示踪剂和mab anti-6his tb穴状化合物金(cisbio 61hi2tla)在缓冲液中组成的溶液添加到含有sos1多肽和示例性式(i)化合物的溶液中。在室温下培养1小时后，根据制造商的说明，使用envision平板读取器(perkin elmer)测量htrf信号。激发范围为245-395nm，发射1在(657.5-672.5)nm处检测到，发射2在(606.5-623.5)nm处检测到。使用以下公式计算htrf比：[发射1/2]*10000。
[1109]
背景信号从未添加蛋白质的孔中计算。背景消减信号转换成相对于dmso对照组的结合百分比。使用graphpad prism 4软件分析数据，设置为：“s形剂量反应(可变斜率)”；4个具有希尔斜率的参数(约束：底部＝等于0的常数；顶部＝必须小于120)。
[1110]
结果在表21中示出。略语表：n.d.＝未确定。
[1111]
表21
[1112]
示例性式(i)化合物对标记示踪剂与sos1结合的抑制
[1113]
实施例编号ic
50
(nm)实施例编号ic
50
(nm)1-1611-211.81-2351-221.71-32.31-232.41-42.12-1n.d.1-52.52-2131-66.82-3101-72.12-447.61-81.63-15.21-92.33-23.61-102.33-32.31-11》100003-41291-126643-541-13313-61331-14254-16.51-152.74-26.31-161.64-34.51-176.24-42.51-180.735-17.21-192.65-25.91-20145
ꢀꢀ
[1114]
实施例b
[1115]
此实施例示出了本发明的示例性化合物与sos1结合并防止标记的示踪配体占据sos1结合位点。
[1116]
式(i)化合物与sos1结合的能力使用htrf置换测定法测量。重组人类sos1多肽(对应于氨基酸560-1049，与n端his-tev-avitag-sos1(mw＝59.4kda)和镧系元素标记的链霉亲和素(cisbio)一起表达于大肠杆菌中)在缓冲液(25mm hepes ph 7.5，25mm nacl，1mm dtt，0.01％brij 35，0.02％bsa，0.1％dmso)中用示例性式(i)化合物(在dmso储备溶液中)培养。在室温下培养10-15分钟后，将由定制的cy5标记示踪剂和mab anti-6his tb穴状化合物金(cisbio 61hi2tla)在缓冲液中组成的溶液添加到含有sos1多肽和示例性式(i)化合物的溶液中。在室温下培养1小时后，根据制造商的说明，使用clairostar平板读取器(bmg labtech)测量htrf信号。使用激发滤光片ex-tr，发射1在650-610nm处检测到，发射2在620-610nm处检测到。使用以下公式计算htrf比：[发射1/2]*10000。
[1117]
背景信号从含有10μm抑制剂的井中计算，已知在该浓度下抑制率为100％。背景消减信号转换成相对于dmso对照组的结合百分比。使用xlfit软件(idbs)分析数据，使用莫里森方程进行竞争结合，并生成式(i)化合物的ki。
[1118]
结果在表22中示出
[1119]
表22
[1120]
示例性式(i)化合物对标记示踪剂与sos1结合的抑制
[1121]
[1122]
[1123]
[1124]
[1125][1126]
如表22中所示，本发明的示例性化合物有效抑制sos1标记的示踪剂与sos1蛋白的结合。
[1127]
实施例c
[1128]
此实施例示出本发明的示例性化合物与sos1结合并抑制sos1介导的mantgdp(预加载到人类kras)与重组人类kras内的gtp的核苷酸交换。
[1129]
示例性式(i)化合物与sos1结合并抑制mantgdp与重组人类kras内的gtp的核苷酸交换的能力使用荧光测定法测量。重组人类sos1多肽(对应于氨基酸564-1049，与c端strepii标签一起表达于大肠杆菌中，mw＝60.59kda)在缓冲液(40mm hepes 7.4，10mm mgcl2，1mm dtt，0.002％triton x100，0.1％dmso)中用示例性式(i)化合物(在dmso储备溶液中)在室温下培养15分钟。预负载的mantgdp重组人类kras多肽(对应于氨基酸2-169，与n端tev可裂解his标签一起表达于大肠杆菌中，mw 21.4kda)和gtp的混合物在缓冲液(40mm hepes 7.4，10mm mgcl2，1mm dtt 0.002％，triton x100，0.1％dmso)中在室温下培养5分钟，然后添加到sos1/化合物混合物中。根据制造商的说明，使用clariostar平板读取器(激发370
±
15nm，发射450
±
20nm)在室温下监测反应进程60分钟。使用clariostar软件计算进度曲线线性部分的斜率。典型的分析间隔是8-30分钟。背景信号从未添加蛋白质的孔中计算。背景消减信号转换成相对于dmso对照组的活性百分比。使用graphpad prism4软件分析数据，设置为：“s形剂量反应(可变斜率)”；4个具有希尔斜率的参数(约束：底部＝等于0的常数；顶部＝必须小于120)。
[1130]
示例性式(i)化合物的荧光读数ic
50
在表23中示出。
[1131]
表23
[1132]
实施例编号ic
50
(nm)1-1351-2201-471-59
1-6121-781-881-971-109
[1133]
如表23中所示，本发明的示例性化合物能够通过阻断mant-gdp交换有效地抑制sos1介导的gtp核苷酸交换。
[1134]
实施例d
[1135]
此实施例示出本发明的示例性化合物阻止由sos1介导的kras介导的gtp核苷酸交换以抑制kras活性，从而抑制下游效应子perk的生成。
[1136]
将mkn1细胞(15,000/w)或h358(30,000/w)接种在黑色透明平底96孔细胞培养板(康宁，#3904)中，并在37℃下培养过夜。测定第1天，向细胞投加起始浓度为10μm的式(i)化合物，并连续稀释3倍，共9个浓度。将细胞与溶解在dmso中的化合物一起在37℃下培养约0.5-1小时。通过向通风柜中的所有孔中添加50μl 4％甲醛立即固定细胞，并在室温下将平板培养20分钟。将甲醛从板中弃去，并添加150μl冰冷的甲醇，以在-20℃下使细胞渗透10分钟。通过用纸巾轻拍板，弃去每个板中的甲醇和板中残留的所有液体。然后在室温下使用0.05％tween在摇床上用150μl的odyssey封闭缓冲液(li-cor biosciences#927-50010)封闭细胞1小时。弃去封闭缓冲液，并添加50μl在odyssey封闭缓冲液中稀释的一级抗体perk(赛信通技术公司(cell signaling technology)#9101l；兔，1:500)和gapdh(密理博#mab34；小鼠，1:5000)。在摇床上将板在4℃下培养过夜。
[1137]
测定第2天，去除一级抗体溶液。用150μl 1x pbst(pbs+0.1％tween 20)将每个板洗涤3次，并在室温下用50μl二级抗体(抗兔(li-cor biosciences#926-32211)和抗小鼠(li-cor biosciences#68070)在含tween的odyssey封闭缓冲液中以1:800的稀释度在摇床上培养2小时(避光)。去除二级抗体溶液，用pbst将每个板洗涤3次。弃去所有残留的液体，并且根据制造商的说明，使用licor odyssey机器，将焦距设置为3mm，并使用800nm和700nm滤光片，对板进行成像。每个孔的gapdh归一化扫描值除以媒介孔的平均值，得到perk抑制的百分比。然后用graph pad prism软件计算ic
50
值。
[1138]
结果在表24中示出。略语表：n.d.＝未确定。
[1139]
表24
[1140]
[1141]
[1142]
[1143]
[1144][1145]
表24中的结果示出了本发明的化合物能够有效地抑制kras介导的激活和perk的形成，从而阻断细胞内kras介导的信号传导。
[1146]
实施例e
[1147]
此实施例示出本发明的示例性化合物在sos1 n233y突变细胞系中阻止由sos1介导的kras介导的gtp核苷酸交换以抑制kras活性，从而抑制下游效应子perk的生成。
[1148]
在研究中使用了三种含有sos1 n233y激活突变的细胞系：lxf289(dsmz，德国莱布
尼兹研究所)；rl95-2(atcc crl-1671)；以及oci aml-5(dsmz，德国莱布尼兹研究所)。将sos1 n233y突变细胞(15,000/w)接种在黑色透明平底96孔细胞培养板(康宁，#3904)中，并在37℃下培养过夜。测定第1天，向细胞投加起始浓度为10μm的式(i)化合物，并连续稀释3倍，共9个浓度。将细胞与溶解在dmso中的化合物一起在37℃下培养1小时。通过向通风柜中的所有孔中添加50μl 4％甲醛立即固定细胞，并在室温下将平板培养20分钟。将甲醛从板中弃去，并添加150μl冰冷的甲醇，以在-20℃下使细胞渗透10分钟。通过用纸巾轻拍板，弃去每个板中的甲醇和板中残留的所有液体。然后在室温下使用0.05％tween在摇床上用150μl的odyssey封闭缓冲液(li-cor biosciences#927-50010)封闭细胞1小时。弃去封闭缓冲液，并添加50μl在odyssey封闭缓冲液中稀释的一级抗体perk(赛信通技术公司(cell signaling technology)#9101l；兔，1:500)和gapdh(密理博#mab34；小鼠，1:5000)。在摇床上将板在4℃下培养过夜。
[1149]
测定第2天，去除一级抗体溶液。用150μl 1x pbst(pbs+0.1％tween 20)将每个板洗涤3次，并在室温下用50μl二级抗体(抗兔(li-cor biosciences#926-32211)和抗小鼠(li-cor biosciences#68070)在含tween的odyssey封闭缓冲液中以1:800的稀释度在摇床上培养2小时(避光)。去除二级抗体溶液，用pbst将每个板洗涤3次。弃去所有残留的液体，并且根据制造商的说明，使用licor odyssey机器，将焦距设置为3mm，并使用800nm和700nm滤光片，对板进行成像。每个孔的gapdh归一化扫描值除以媒介孔的平均值，得到perk抑制的百分比。然后用graph pad prism软件计算ic
50
值。
[1150]
结果在表25中示出。
[1151]
表25
[1152]
细胞系实施例编号ic
50
(nm)lxf2896-10294 6-1141rl95-26-10214 6-1120oci aml-56-10333 6-1132
[1153]
表25中的结果示出了本发明的化合物能够在含有sos1激活突变的细胞中有效地抑制kras介导的激活和perk的形成，从而阻断由sos1活性增加驱动的细胞内kras介导的信号传导。
[1154]
实施例f
[1155]
此实施例示出本发明的示例性化合物阻止nf-1突变细胞系中由sos1介导的kras介导的gtp核苷酸交换增加以抑制kras活性，从而抑制下游效应子perk的生成。
[1156]
在这些研究中使用了两种nf-1基因中含有激活突变的细胞系：kasuma-1(atcc crl-2724)；以及nci-h1435(atcc crl-5870)。将nf-1突变细胞(15,000/w)接种在黑色透明平底96孔细胞培养板(康宁，#3904)中，并在37℃下培养过夜。测定第1天，向细胞投加起始浓度为10μm的式(i)化合物，并连续稀释3倍，共9个浓度。将细胞与溶解在dmso中的化合物一起在37℃下培养1小时。通过向通风柜中的所有孔中添加50μl 4％甲醛立即固定细胞，并在室温下将平板培养20分钟。将甲醛从板中弃去，并添加150μl冰冷的甲醇，以在-20℃下使
细胞渗透10分钟。通过用纸巾轻拍板，弃去每个板中的甲醇和板中残留的所有液体。然后在室温下使用0.05％tween在摇床上用150μl的odyssey封闭缓冲液(li-cor biosciences#927-50010)封闭细胞1小时。弃去封闭缓冲液，并添加50μl在odyssey封闭缓冲液中稀释的一级抗体perk(赛信通技术公司(cell signaling technology)#9101l；兔，1:500)和gapdh(密理博#mab34；小鼠，1:5000)。在摇床上将板在4℃下培养过夜。
[1157]
测定第2天，去除一级抗体溶液。用150μl 1x pbst(pbs+0.1％tween 20)将每个板洗涤3次，并在室温下用50μl二级抗体(抗兔(li-cor biosciences#926-32211)和抗小鼠(li-cor biosciences#68070)在含tween的odyssey封闭缓冲液中以1:800的稀释度在摇床上培养2小时(避光)。去除二级抗体溶液，用pbst将每个板洗涤3次。弃去所有残留的液体，并且根据制造商的说明，使用licor odyssey机器，将焦距设置为3mm，并使用800nm和700nm滤光片，对板进行成像。每个孔的gapdh归一化扫描值除以媒介孔的平均值，得到perk抑制的百分比。然后用graph pad prism软件计算ic
50
值。
[1158]
结果在表26中示出。
[1159]
表26
[1160]
细胞系实施例编号ic
50
(nm)kasumi6-10902 6-1197h14356-325 6-451 6-59 6-629 6-952 6-10542 6-1165 6-1263 7-355 7-483 10-433 10-675 10-787 10-894 10-9152 10-1015 10-1163 11-16 11-217 11-362 11-419
[1161]
表26中的结果示出了本发明的化合物能够在含有nf-1激活突变的细胞中有效地
抑制kras介导的激活和perk的形成，从而阻断由nf-1驱动的sos1活性增加驱动的细胞内kras介导的信号传导。
[1162]
虽然已经结合本发明的特定实施方案描述了本发明，但应理解，其能够进一步修改，并且本技术意图涵盖本发明的任何改变、使用或调适，一般来说，遵循本发明的原理并且包括与本公开的所述偏离，如在本发明所涉及的领域内的已知或惯用实践内并且如可以应用于上文所阐述的基本特点并且如下在所附权利要求书的范围内。