1.一种干细胞滤液及干细胞因子混合液的制备方法,其特征在于:干细胞滤液及干细胞因子混合液的制备方法步骤如下:
步骤1:采用的人脐带来源供体无病原体(病毒、支原体、衣原体等)感染;
步骤2:采用无血清、无动物源成分的基础培养基和添加因子进行脐带间充质干细胞的种子细胞及产品细胞制备;
步骤3:采用p4-p6代种子细胞,在培养箱进行间充质干细胞扩增培养,待融合度达到100%时抽出含有细胞因子的培养液;
步骤4:把步骤3的培养液置于离心机中离心,把上清部分转移到新的无菌离心管中,放到温度为4℃冰箱保存;
步骤5:在步骤3已取出上清液的培养瓶/皿中加入适量生理盐水,在培养箱中继续培养细胞24h;
步骤6:通过步骤5的处理,细胞全部悬浮起来。把悬浮起来的细胞以及生理盐水抽到离心管中;
步骤7:把步骤6中装有细胞悬液的离心管放入液氮中冷冻,然后溶解;
步骤8:把步骤7中离心管中的细胞悬液充分吹打,尽量使粘附在细胞膜上的细胞器脱落;
步骤9:再重复一次步骤7、步骤8的操作;
步骤10:把步骤9中装有破碎细胞的混合液置于离心机中离心;
步骤11:把步骤10中离心管中的上清液取出,加入到步骤3中的培养液当中;
步骤12:把步骤11中的混合液充分混合后,按每份5ml的体积分装到可密封的无菌容器当中;
步骤13:将步骤12中装有混合液的容器密封后,冻于-20℃以下的冰箱中;
步骤14:将步骤13中的产品溶解后,用于无针水光导入。
2.根据权利要求1所述的一种干细胞滤液及干细胞因子混合液的制备方法,其特征在于:使用的混合液为干细胞因子和以及产生干细胞因子的细胞滤液混合物。
3.根据权利要求1所述的一种干细胞滤液及干细胞因子混合液的制备方法,其特征在于:所述步骤3和所述步骤5中培养箱的培养条件均为温度37℃,co2浓度为5%。
4.根据权利要求1所述的一种干细胞滤液及干细胞因子混合液的制备方法,其特征在于:所述步骤7中得到装有细胞悬液的离心管的冻存温度为-196℃,溶化温度为25℃。
5.根据权利要求1所述的一种干细胞滤液及干细胞因子混合液的制备方法,其特征在于:所述步骤4和所述步骤10中离心机转速均为2000rpm,时间为10min。