含有环丙基骨架的甲基转移酶抑制剂在治疗黄病毒属病毒感染药物中的应用

1.本发明涉及医药技术领域，具体而言，涉及含有环丙基骨架的甲基转移酶抑制剂在治疗黄病毒属病毒感染药物中的应用。


背景技术：

2.黄病毒科黄病毒属病毒为一类主要依靠蚊、蜱等媒介传播的虫媒病毒，包括登革热病毒1
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4(denv 1
‑
4)、寨卡病毒(zikv)、黄热病毒(yfv)、西尼罗病毒(wnv)、日本脑炎病毒(jev)以及蜱传脑炎病毒(tbev)等70余种。这类病毒可引起包括发烧、肝炎和出血热等在内的多种疾病，严重威胁人类健康，甚至导致死亡。据世界卫生组织(who)报道，全球每年约有5000万至1亿denv感染病例，导致约 2.2万人死亡。目前，临床上尚没有可用于治疗黄病毒感染的药物。
3.甲基转移酶广泛存在于原核生物到真核生物体内，通过催化对dna、rna以及蛋白质的甲基化反应，在许多重要的生理过程中发挥着重要作用，如基因的表达和关闭、dna损伤的修复、体内生理过程中间产物的合成与降解等。近年来，甲基转移酶抑制剂已成为抗肿瘤领域的研发热点，相关研究进展可参见chem.rev.2018, 118,989
‑
1068。其中，ezh2(组蛋白赖氨酸n
‑
甲基转移酶)抑制剂epz
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6438 (tazemetostat,sam竞争性抑制剂)于2020年初上市用于治疗不能手术切除的转移性或晚期上皮样肉瘤；epz5676(pinometostat)处于ii期临床研究阶段用于治疗急性髓性白血病；gsk3326595处于i期临床研究阶段用于骨髓发育异常综合征以及急性髓性白血病；ory
‑
1001处于i期临床研究阶段用于治疗复发或难治性急性白血病等。此外，更多结构类型的化合物已被报道在细胞或动物水平表现出了优秀的抗肿瘤活性，市售可得的mtase抑制剂有60多种。
4.但是目前尚未有将甲基转移酶用于治疗黄病毒属病毒感染疾病的报道。


技术实现要素：

5.本发明的目的提供一类含有环丙基骨架的甲基转移酶抑制剂在治疗黄病毒属病毒感染药物中的应用。
6.为实现上述目的，本发明所采取的技术方案是：
7.本发明提供了一类含有环丙基骨架的甲基转移酶抑制剂在治疗黄病毒属病毒感染药物中的应用，所述含有环丙基骨架的化合物具备如下任一种结构：
[0008][0009]
作为本发明的一些实施方案，所述黄病毒属病毒包括寨卡病毒、抗登革热病毒，西尼罗病毒、日本脑炎病毒(jev)和蜱传脑炎病毒(tbev)。
[0010]
作为本发明的一些实施方案，所述含有环丙基骨架的化合物作为唯一活性成分在制备治疗黄病毒属病毒感染药物中的应用。
[0011]
作为本发明的一些实施方案，所述含有环丙基骨架的化合物与其他药物共同作为活性成分在制备治疗黄病毒属病毒感染药物中的应用。
[0012]
基于其对黄病毒属病毒治疗的有效性，其可以和另一种或多种其它活性成分联合用于治疗、预防、抑制或者改善疾病或者病状，其中药物的联合使用比任何一种药物的单独使用更为安全或者更为有效。
[0013]
作为本发明的一些实施方案，所述含有环丙基骨架的化合物包括其以及其可药用的盐和酯、溶剂合物、异构体、多晶型物、同位素标记的化合物、代谢物或前药。
[0014]
作为本发明的一些实施方案，所述可药用的盐包括无机酸盐和有机酸盐。
[0015]
所述无机酸包括例盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、磷酸或硝酸。
[0016]
所述有机酸包括甲酸、乙酸、乙酰乙酸、丙酮酸三氟乙酸、丙酸、丁酸、己酸、庚酸、十一酸、月桂酸、苯甲酸、水杨酸、2
‑
(4
‑
羟基苯甲酰基)
‑
苯甲酸、樟脑酸、肉桂酸、环戊烷丙酸、二葡萄糖酸、3
‑
羟基
‑2‑
萘甲酸、烟酸、巴莫酸、果胶酯酸、3
‑ꢀ
苯基丙酸、苦味酸、特戊酸、2
‑
羟基乙磺酸、衣康酸、胺基磺酸、三氟甲磺酸、十二烷基硫酸、乙磺酸、苯磺酸、对
‑
甲苯磺酸、甲磺酸、2
‑
萘磺酸、萘二磺酸、樟脑磺酸、柠檬酸、酒石酸、硬脂酸、乳酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、己二酸、海藻酸、马来酸、富马酸、d
‑
葡萄糖酸、扁桃酸、抗坏血酸、葡庚糖酸、甘油磷酸、天冬胺酸、磺基水杨酸。
[0017]
优选的，所述可药用的盐为盐酸。
[0018]
优选的，具体为如下结构：
[0019][0020]
作为本发明的一些实施方案，所述治疗黄病毒属病毒感染药物含有至少一种药学上可接受的载体或赋形剂。其剂型为片剂、胶囊、颗粒剂、散剂、混悬剂、乳剂、粉剂、口服液、凝胶剂、糖浆剂、丸剂、酊剂、酒剂、煎膏剂、锭剂、合剂、栓剂、注射剂、吸入剂或喷雾剂。
[0021]
如本文所用，“药学上可接受的载体或赋形剂”包括：稀释剂、填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、粒化剂、包衣剂、润湿剂、溶剂、共溶剂、助悬剂、乳化剂、增甜剂、调味剂、掩味剂、着色剂、防结块剂、保湿剂、螯合剂、增塑剂、增粘剂、抗氧化剂、防腐剂、稳定剂、表面活性剂和缓冲剂，本领域技术人员将理解，某些药学上可接受的赋形剂可以以多于一种功能和以替代性功能来使用，取决于所述赋形剂在制剂中存在多少和在制剂中存在何种其它成分。
[0022]
例如：当用于口服时，可以制成口服制剂，如片剂、胶囊剂、颗粒剂和丸剂等，包含填充剂(例如糖类衍生物如乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和山梨糖醇；淀粉衍生物如玉米淀粉、土豆淀粉、糊精和羧甲基淀粉；纤维素衍生物如结晶纤维素、羟丙基纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠；阿拉伯胶；右旋糖酐；硅酸盐衍生物如偏硅酸镁铝；磷酸盐衍生物如磷酸钙；碳酸盐衍生物如碳酸钙；硫酸盐衍生物如硫酸钙等)、粘合剂(例如明胶、聚乙烯吡咯烃酮和聚乙二醇)、崩解剂(例如纤维素衍生物如羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烃酮)、润滑剂(例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、鲸蜡、硼酸、苯甲酸钠、亮氨酸)、稳定剂(对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯等)、矫味剂(例如常用的甜味剂、酸味剂和香料等)。当用于肠胃外时，可以制成注射剂，包括注射用无菌粉末与注射用溶剂，所用载体或赋形剂包含无菌水、林格氏液和等渗氯化钠溶液，也可根据药物的性质加入适宜的附加剂例如抗氧化剂、缓冲剂和抑菌剂。当用于直肠给药时，所述药物可以制成栓剂等。用于经肺给药时，所述药物可以制成吸入剂或喷雾剂等。
[0023]
有许多本领域技术人员可用的资源，这些资源描述了药学上可接受的赋形剂且其可用于选择合适的药学上可接受的赋形剂，例如《雷明登药学大全》、《中国药学年鉴》、《药剂学》等书籍。
[0024]
本发明的有益效果：
[0025]
本发明经过实验验证，含环丙基骨架的甲基转移酶抑制剂具备明显的体外黄病毒属病毒(寨卡病毒和登革热病毒)活性，可用于制备治疗黄病毒属药物使用，为抗黄病毒属病毒感染的药物的开发提供一种新方法。
具体实施方式
[0026]
以下结合具体实施例阐述本发明，这些实施例不旨在限制本发明的范围，而是为本领域技术人员了解和实施本发明应用提供指导。
[0027]
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0028]
本实施例所用的含环丙基骨架化合物gsk
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lsd1
·
2hcl,ory
‑
1001
·
2hcl, ddp
‑
38003
·
2hcl,og
‑
l002均可通过市售获得，本研究所述化合物购自 medchemexpress，结构如表1：
[0029]
表1含环丙基骨架的甲基转移酶抑制剂的结构
[0030][0031]
实施例1含有环丙基骨架的甲基转移酶抑制剂的体外抗寨卡病毒活性(vero细胞)
[0032]
以非人灵长类动物来源的vero细胞作为敏感细胞，利用2016年从我国口岸输入性病例中分离的zikv sz
‑
wiv01(genbank登录号：ku963796)作为感染毒株。首先将上述细胞接种96孔板，24h后铺满70～80％；进一步将受试化合物利用含有2％fbs 的dmem培养液进行倍比稀释，接种到96孔板中细胞上，阴性对照孔加入等体积含有2％fbs的dmem培养液；将96孔板置于37℃二氧化碳培养箱培养3
‑
7天(具体时间依细胞系不同)，利用luminescent cell viability assay(promega)测定细胞活性，根据测定结果计算药物的tc0，tc50以及tc90。在此基础上进行化合物抗病毒活性评价：首先将细胞接种96孔板，24h后铺满70～80％；以化合物的最大无毒浓度(tc0)为稀释起点，利用含有2％fbs的dmem培养液对受试化合物进行倍比稀释；进一步利用100倍半数组织感染剂量的病毒(100tcid50)感染化合物组及阴性对照组细胞，与此同时将不同浓度的化合物加入受试孔，细胞对照孔不加病毒及化合物；将96孔板置于37℃二氧化碳培养箱培养3
‑
7天，利用 luminescent cell viability assay测定细胞活性，根据测定结果，利用origin软件对量效关系进行拟合，计算各化合物的ic50，结果见表1。
[0033]
表1含有环丙基骨架的甲基转移酶抑制剂对寨卡的体外活性
[0034][0035]
实施例2.含有环丙基骨架的甲基转移酶抑制剂的体外抗寨卡病毒活性(bhk细胞)
[0036]
以bhk细胞作为敏感细胞，利用2016年从我国口岸输入性病例中分离的zikvsz
‑
wiv01(genbank登录号：ku963796)作为感染毒株。首先将上述细胞接种96孔板，24h后铺满70～80％；进一步将受试化合物利用含有2％fbs的dmem培养液进行倍比稀释，接种到96孔板中细胞上，阴性对照孔加入等体积含有2％fbs的dmem培养液；将96孔板置于37℃二氧化碳培养箱培养3
‑
7天(具体时间依细胞系不同)，利用luminescent cell viability assay(promega)测定细胞活性，根据测定结果计算药物的tc0，tc50以及tc90。在此基础上进行化合物抗病毒活性评价：首先将细胞接种96孔板，24h后铺满70～80％；以化合物的最大无毒浓度(tc0)为稀释起点，利用含有2％fbs的dmem培养液对受试化合物进行倍比稀释；进一步利用100 倍半数组织感染剂量的病毒(100tcid50)感染化合物组及阴性对照组细胞，与此同时将不同浓度的化合物加入受试孔，细胞对照孔不加病毒及化合物；将96孔板置于 37℃二氧化碳培养箱培养3
‑
7天，利用luminescent cell viability assay 测定细胞活性，根据测定结果，利用origin软件对量效关系进行拟合，计算各化合物的ic50，具体见表2。
[0037]
表2含有环丙基骨架的甲基转移酶抑制剂对寨卡的体外活性
[0038][0039]
实施例3ddp
‑
38003
·
2hcl的体外抗登革热病毒活性
[0040]
以bhk细胞作为敏感细胞，利用登革ii型病毒国际参考株(denv
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ngc；genbank 登录号：af038403.1)作为感染毒株。首先将上述细胞接种96孔板，24h后铺满70～80％；进一步将受试化合物利用含有2％fbs的dmem培养液进行倍比稀释，接种到96孔板中细胞上，阴性对照孔加入等体积含有2％fbs的dmem培养液；将96孔板置于37℃二氧化碳培养箱培养3
‑
7天(具体时间依细胞系不同)，利用celltiter
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glo luminescentcell viability assay(promega)测定细胞活性，根据测定结果计算药物的tc0，tc50 以及tc90。在此基础上进行化合物ddp
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38003
·
2hcl的抗病毒活性评价：首先将细胞接种96孔板，24h后铺满70～80％；以化合物的最大无毒浓度(tc0)为稀释起点，利用含有2％fbs的dmem培养液对受试化合物进行倍比稀释；进一步利用100倍半数组织感染剂量的病毒(100tcid50)感染化合物组及阴性对照组细胞，与此同时将不同浓度的化合物加入受试孔，细胞对照孔不加病毒及化合物；
将96孔板置于37℃二氧化碳培养箱培养3
‑
7天，利用celltiter
‑
glo luminescent cell viability assay测定细胞活性，根据测定结果，利用origin软件对量效关系进行拟合，计算各化合物的ic50。
[0041]
研究发现，ddp
‑
38003
·
2hcl对登革热病毒的活性(ic50＝5.23
±
1.21μm)稍弱于对照药nitd008的活性(ic50＝0.65
±
0.12μm)。
[0042]
实施例4注射剂
[0043]
取ddp
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38003
·
2hcl化合物150g加水溶解，另氯化钠、对羟基苯甲酸乙酯加热水溶解，混匀，调ph值5
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7。注射用水稀释至1000ml,用中空纤维膜滤过，灌装，灭菌，即得。
[0044]
本发明对含有环丙基骨架的甲基转移酶抑制剂开发了新的医疗用途，开拓了该类化合物在制备治疗黄病毒属病毒感染的药物中的新的应用领域，其对寨卡和登革热等病毒具备较强的抑制作用，为临床治疗黄病毒属病毒感染所致的疾病提供了一种可选方案。该类化合物可采用现代制药工艺做成适用于临床使用的制剂形态，提高治疗的准确性和病人的顺应性。
[0045]
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明实施例技术方案的精神和范围。