技术特征：
1.一种间充质干细胞提取物的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：s1：从脐血中分离脐带间充质干细胞；s2：对分离后的脐带间充质干细胞进行传代培养，取传代培养的p5～p25代人脐带间充质干细胞，利用细胞生长液培养至细胞80％融合时，弃掉培养液；s3：先用磷酸盐缓冲液对培养后的细胞进行洗涤，然后加入无血清培养液继续培养70～75h，随后分离无血清培养液与细胞；s4：将细胞用消化液消化后，再超声破碎，然后离心并收集上清液；s5：将s3所得的无血清培养液与s4中的上清液混合，过滤，收集滤液并浓缩，得间充质干细胞提取物。2.根据权利要求1所述的间充质干细胞提取物的提取方法，其特征在于，脐带间充质干细胞的分离包括以下步骤：ss1：取脐血，按1:3～5的体积比与pbs缓冲液混合，然后滴入与脐血等体积的淋巴细胞分离液，于600～750g下离心10～20min；ss2：抽取白膜层细胞，先用pbs缓冲液洗涤，再用基础培养液重悬；ss3：将非特异性促贴壁蛋白及特异性促贴壁蛋白涂抹于培养皿底部，然后将重悬后的白膜层细胞接种到培养皿中，并于37℃以及低氧条件下培养；ss4：待原代细胞融合率达到60％时进行传代培养；ss5：继续在37℃以及低氧条件下对传代的脐血间充质干细胞进行培养，待细胞融合率达到80％后进行传代；ss6：收集脐血间充质干细胞，即得。3.根据权利要求2所述的间充质干细胞提取物的提取方法，其特征在于，所述基础培养基包括以下体积浓度的组分：mcdb 131 50～80ml/l，人血清蛋白60～90μl/l，乳铁传递蛋白200～300μl/l，地塞米松10～15μl/l，纳他霉素20～30u/l和青霉素90～120u/l。4.根据权利要求2所述的间充质干细胞提取物的提取方法，其特征在于：所述非特异性促贴壁蛋白为纤连蛋白；所述特异性促贴壁蛋白为cd90单克隆抗体。5.根据权利要求2所述的间充质干细胞提取物的提取方法，其特征在于：所述低氧条件为氧气15％，二氧化碳5％和氮气80％。6.根据权利要求1所述的间充质干细胞提取物的提取方法，其特征在于，所述细胞生长液包括以下体积百分比的组分：复方氨基酸溶液15％，维生素溶液5％，人血白蛋白溶液10％，水解蛋白溶液10％，微量元素溶液2％和电解质溶液58％。7.根据权利要求1所述的充质干细胞提取物的提取方法，其特征在于：所述无血清培养液由基础培养液和添加剂组成；所述基础培养液为dmem/f12，所述添加剂包括l
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谷氨酰胺、l
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抗坏血酸、亚硒酸钠、纤连蛋白、氢化可的松、人胰岛素、bfgf、辅酶a和丙酮酸钠。8.根据权利要求7所述的充质干细胞提取物的提取方法，其特征在于：所述基础培养液中l
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谷氨酰胺的浓度为1～3mm，l
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抗坏血酸的浓度为10～30mg/l，亚硒酸钠的浓度为15～17μg/l，纤连蛋白的浓度为40～50mg/l，氢化可的松的浓度为8～12mg/l，人胰岛素的浓度为10～15mg/l，bfgf的浓度为15～20μg/l，辅酶a的浓度为90～100mg/l，丙酮酸钠的浓度为
1～5mm。9.采用权利要求1～8任一项所述的提取方法提取得到的间充质干细胞提取物。10.如权利要求9所述的间充质干细胞提取物在制备美容制剂上的应用。
技术总结
本发明公开了一种间充质干细胞提取物及其提取方法和应用，提取方法是先从脐血中分离脐带间充质干细胞，然后传代培养并用细胞生长液培养至细胞80％融合，然后用磷酸盐缓冲液后继续在无血清培养液中继续培养70～75h，随后分离无血清培养液与细胞，将细胞破碎后离心，收集上清液并将其与分离后的无血清培养液混合，即得间充质干细胞提取物。本发明利用高浓度的间充质干细胞分泌的多种细胞因子，为间充质干细胞应用提供高效、快捷、方便的途径。方便的途径。
技术研发人员：张若冰 谢惠明 张茜玥 谢家琪 张杰 韩飞 徐根艳 方民 刁萍萍
受保护的技术使用者：张若冰
技术研发日：2021.04.29
技术公布日：2021/10/18