三七花总皂苷在制备防治急性脑梗塞的药物中的用途

1.本发明涉及三七花总皂苷在制备防治急性脑梗塞的药物中的用途。


背景技术：

2.中国专利cn101199564a于2008年06月18日公开了三七花总皂苷在制备治疗高血压病药物中的应用。经体外实验和体内动物实验结果表明，三七花总皂苷能明显降低自发性高血压大鼠的血压，改善et－1诱导的血管平滑肌细胞增殖的细胞活力，增加血管平滑肌细胞的凋亡率，增加血管平滑肌细胞内no含量，促进inos表达，降低血管平滑肌细胞内ca2+浓度，抑制血管平滑肌细胞原癌基因c－mycmrna的表达等。
3.中国专利cn103893230a于2014年07月02日公开了三七花总皂苷在制备促进血管新生药物中的应用。经实验结果表明，三七花总皂苷对vri诱导的血管损伤在前期有保护效果，在后期血管发育过程中具有促血管新生起到恢复的效果；对人脐静脉内皮细胞有增殖的作用；且，比三七(根)总皂苷有着更为显著的促血管新生和保护血管的效果。
4.脑梗塞是各种原因导致的脑血管堵塞，进而诱发神经功能障碍。急性脑梗塞具有发病突然、高致残率、预后差的特点，如无法及时而有效地控制病情，可严重影响患者的健康。目前治疗急性脑梗塞的措施包括溶栓、抗凝、抗血小板、降脂稳斑等，但仍然具有较高的致死率、致残率，而中医中药具有一定的优势。
5.中医学并无脑梗塞这一病名，其属于“中风”“卒中”等范畴，该病病因复杂，多由年老正衰、肝肾不足、阳亢化风、气血乱逆等形成脑脉闭阻。其病机为阴阳气血失调，心、肝、肾、脾等脏平素气血亏虚，加之忧思恼怒，或房室劳累、外邪侵袭、饮酒饱食等诱因，内生风、痰、湿、火，致阴亏于下，肝阳暴张，气血逆乱，阳化风动，横窜经隧，夹痰夹火，蒙蔽清窍，气血运行受阻，肌肤筋脉失于儒养，形成上实下虚，阴阳不维系之证。常涉及心、肝、肾、脾、经络、血脉，气虚是本病之本，血瘀乃本病发生发展的核心，该症发病早期主要病机为脾肾不足、气虚火旺、气血逆乱，多有风、火、痰，导致气滞、风痰、血瘀，气虚血滞贯之始终，因而患者以气虚血瘀证多见。课题组前期研究表明，三七花及其成分三七花总皂苷具有降压、改善血液流变学、抑制平滑肌增值，同时能改善高血压病患者血t-pa、pai、vwf作用，但三七花及其总皂苷在治疗脑梗塞的作用未见报道。
6.现代医学治疗脑梗塞在死亡率、致残率居高不下，费用高，不良反应较多，而中医中药治疗脑梗塞有一定优势，因此积极运用中医药防治脑梗塞的有效办法，具有重要理论与现实意义。


技术实现要素：

7.针对现有技术的上述不足，根据本发明的实施例，希望提出三七花总皂苷新的医药用途，提出其在制备防治急性脑梗塞的药物中的用途。
8.本发明中，三七花总皂苷是从中药三七花中提取的活性部位，其提取方法和中国专利cn101199564a或中国专利cn103893230a记载的相同，或采取本领域常见的其他方法提
取，或按照发明随后实施例中记载的方法制备提取。
9.随后的实施例和试验例将证明，三七花总皂苷剂量0.1g/kg治疗14天后，与对照组相比本次研究也发现，三七花总皂苷能显著改善急性脑梗塞患者nihss评分、全血粘度、红细胞变形指数、全血低切黏度，改善患者凝血功能，而对血小板无明显影响，能降低患者et、txb2、vwf水平而提高患者no、pgf1α水平，因此，三七花总皂苷对急性脑梗塞疗效明确，与其改善内皮功能、改善血流变和凝血功能密切相关。
具体实施方式
10.下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。这些实施例应理解为仅用于说明本发明而不用于限制本发明的保护范围。在阅读了本发明记载的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等效变化和修改同样落入本发明权利要求所限定的范围。
11.实施例(制备三七花总皂苷)
12.称三七花蕾，投入提取罐中，向其中加入14倍量70％乙醇，用锅炉蒸汽加热回流提取2小时，第一次提取结束，倾出提取液，提取液颜色为酱红褐色。该提取液用多效浓缩器减压浓缩，温度：60℃，真空度：-0.08mpa，得到的流浸膏用真空干燥烘箱减压干燥，干燥温度：60℃，真空度：-0.1mpa，干燥时间：5h。得到一次提取干燥物，干燥固体露置空气中易吸湿。
13.向药材中加入14倍量70％乙醇，用锅炉蒸汽加热回流提取2小时，第二次提取结束，倾出提取液，提取液颜色比第一次提取液颜色变浅：呈红褐色。该提取液用多效浓缩器减压浓缩，温度：60℃，真空度：-0.08mpa，得到的流浸膏用真空干燥烘箱减压干燥，干燥温度：60℃，真空度：-0.1mpa，干燥时间：7h。得到二次提取干燥物，干燥固体露置空气中易吸湿。
14.向药材中加入14倍量70％乙醇，用锅炉蒸汽加热回流提取2小时，第三次提取结束，倾出提取液，提取液颜色比第二次提取液颜色明显变浅：呈暗黄色，提取液量为2100l。该提取液用多效浓缩器减压浓缩，温度：60℃，真空度：-0.08mpa，得到的流浸膏用真空干燥烘箱减压干燥，干燥温度：60℃，真空度：-0.1mpa，干燥时间：5h。得到第三次提取干燥物重，干燥固体露置空气中易吸湿。
15.将上述总干燥物倾入沉降罐中，向其中加入饮用水，稍加热，搅拌使固体全部溶散成均一土青色混悬液，倾入沉降罐中，室温搅拌均匀后，室温(28℃)静止、沉降22小时，观察沉降液：室温沉降液底部有少量青褐色沉淀，溶液为土青色不透明混悬液，减压抽滤，由于溶液中悬浮的粘性物质，导致过滤困难，继续室温静止沉降24小时，减压抽滤，仍很难抽滤，慢慢抽滤结束，得到深红褐色半透明滤液，黑色粘稠饼弃去。
16.将上述水沉滤液慢慢加入已处理好待吸附的树脂柱中，调节流速为1bv/h进行吸附，当水沉滤液全部进入树脂柱中时，向层析柱中加入4倍量柱容的水，流速仍然保持1bv/h，一小时后，调节流速为3bv/h，冲洗层析柱，洗除糖份，在用水冲洗层析柱洗除糖份的过程中，可定时对流出液取样，用molish法检测糖份初始有紫环产生，当4倍量柱容的水洗涤将近结束时用molish法检测糖份，紫环消失，界面有浅绿色环，说明糖份已被从树脂柱上洗除，水洗糖份结束。
17.当水全部进入层析柱中时，将3倍量柱容的70％乙醇(1050l)倾入层析柱中，同时
调节流速为1bv/h，进行洗脱，从调整流速开始计算前1小时收集的流出液颜色淡黄色，为柱床中水溶液，弃去。之后收集的流出液颜色渐变深，此时有效成分被从层析柱中洗出，收集该部分流出液，随着收集时间延长，流出液颜色变化过程为：淡黄色(初始收集)—红棕色—金红色—浅黄色(收集终点)。在整个洗脱过程中，在层析柱中可以看到色带的移动，但色带不明显。
18.当70％乙醇全部进入层析柱中时，将3倍量柱容的95％乙醇(1050l)倾入层析柱中，流速保持不变，仍为1bv/h，从95％乙醇倾入层析柱中开始计时1小时收集的流出液与前面70％乙醇洗脱收集液合并，待浓缩。继续以不变的流速用95％乙醇冲洗再生树脂，随着95％再生时间的延长，流出液颜色变化为浅青色，再生后树脂颜色变为暗白色。
19.当95％乙醇全部进入层析柱中时，向层析柱中加入4倍量柱容饮用水，前一小时保持流速不变为bv/h继续进行再生，然后将流速调整为2bv/h进行冲洗，直至流出液中检测乙醇浓度为0％。说明层析柱水平衡结束，待用。
20.上述收集的70％乙醇洗脱液利用旋蒸减压浓缩，浓缩条件：水浴温度：60℃，真空度：-0.08mpa，初始浓缩易浓缩，随着浓缩液中乙醇的减少，浓缩液中产生大量的气泡，不易浓缩。浓缩结束得到相应的流浸膏，将流浸膏置于真空干燥箱中干燥，干燥条件：干燥温度：60℃，真空度：-0.1mpa，干燥时间：4h。得到洗脱干燥物，即三七花总皂苷产品，产品颜色：浅黄色。
21.试验例
22.一、试验方法
23.1.1诊断标准
24.西医诊断标准参照《中国急性缺血性脑卒中诊治指南2018》中急性脑梗塞诊断标准，中医辨证标准参照《中药新药临床研究指导原则》中“中风病”辨证标准。
25.1.2纳入、排除、剔除标准
26.1.2.1纳入标准：符合《中国急性缺血性脑卒中诊治指南2018》的标准，经头颅ct或mri确认；患者病程1-14天；依从性较好，可接受中医治疗。
27.1.2.2排除标准：合并心、肝、肾及其他重要脏器功能不全，其他脑血管疾病，恶性肿瘤，以及其他严重的内外科疾病；过敏体质；精神及智能疾患或不合作；同期参与其他临床试验。
28.1.2.3剔除标准：中途退出研究或失访者；未按既定方案治疗者；资料不全，影响结果判断者；治疗期间发生严重不良事件、并发症，难以继续治疗者。
29.1.3一般资料：选取2019年6月-2021年4月在上海中医药大学附属龙华医院脑病科科、急诊科门诊或病房住院的脑梗死患者，共计112例，将患者分为治疗组和对照组，每组各56例。
30.1.4治疗方法
31.对照组患者给予西医常规综合治疗，包括阿司匹林抗血小板聚集、他汀降脂稳斑，改善微循环等，所有患者均未采用溶栓药物。对照组在常规治疗的基础上，加用三七花苷，三七花总皂苷剂量0.1g/kg，两组均持续干预14天。
32.1.5观察项目及方法。
33.1.5.1神经功能缺损评分：患者治疗前、治疗2周后分别进行nihss评分，比较两组
患者治疗前后的nihss评分，评分0～45分，评分与患者神经功能缺损程度越重呈正相关性。
34.1.5.2血液流变学:治疗前后抽取患者空腹肘静脉血5ml，置入无菌抗凝管中，应用sa-6000型全自动血液流变测试检测血液流变学指标，包括血浆黏度、红细胞压积、全血低切黏度、全血高切黏度、操作步骤严格按照相关说明书要求进行。
35.1.5.3出凝血功能、血小板:空腹状态下静脉采血3ml，枸橼酸钠抗凝。离心后使用全自动血凝仪检测aptt、fib、pt水平。使用迈瑞bc-5390全自动血细胞分析仪检测血小板(plt)。
36.1.5.4血浆内皮素(et)、no、血栓素b2(txb2)、前列腺素f1α(pgf1α)、vwf水平:分别于治疗前后抽取患者的肘静脉血5ml，采用elisa法检测患者的血浆et、no、txb2、pgf1α、vwf水平水平，操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。
37.1.6统计学方法：本次研究采用spss 24.0统计学软件分析所有数据，计量资料以(x
±
s)表示，符合正态分布者采用t检验，不符合正态分布者采用秩和检验；非等级计数资料比较采用χ2检验，以p《0.05为差异具有统计学意义。
38.二、试验结果
39.1、两组治疗前后nihss评分：
40.治疗前，两组nihss评分比较无显著差异(p》0.05)，治疗2周后，益气逐淤通络方治疗组和对照组nihss评分均显著低于治疗前，差异具有统计学意义(p《0.01),治疗组nihss评分低于对照组，差异具有统计学意义(p《0.05),具体结果见表1。
41.表1.两组患者nihss评分比较
42.组别例数治疗时点nhiss评分对照组56治疗前13.90
±
3.72
ꢀꢀ
治疗后6.44
±
2.06**治疗组56治疗前14.12
±
3.98
ꢀꢀ
治疗后4.38
±
1.04**
#
43.注:与本组治疗前比较，*p＜0.05，**p＜0.01；与对照组治疗后比较，
#
p＜0.05，
##
p＜0.01。
44.2、血液流变学：
45.治疗前，两组患者的全血粘度、血浆黏度、红细胞变形指数、全血低切黏度、全血高切黏度比较，差异均无统计学意义(p》0.05)。
46.治疗后，治疗组和对照组患者的全血粘度、血浆黏度、红细胞变形指数、全血低切黏度均明显降低(p《0.01，p《0.05)，而全血高切黏度无明显降低(p》0.05)，治疗组患者的全血粘度、红细胞变形指数、全血低切黏度低于对照组(p《0.01，p《0.05)，而血浆黏度、全血高切黏度无明显差异(p》0.05)，详见表2。
47.表2.两组患者血液流变学指标比较
[0048][0049]
注:与本组治疗前比较，*p＜0.05，**p＜0.01；与对照组治疗后比较，
#
p＜0.05，
##
p＜0.01。
[0050]
3、凝血功能及血小板检查：
[0051]
治疗前，两组患者的aptt、pt、fg、plt比较，差异均无统计学意义(p》0.05)。
[0052]
治疗后，治疗组和对照组患者的aptt、pt显著延长，fg水平均明显降低(p《0.01，p《0.05)，而plt无明显变化(p》0.05)。治疗组患者的aptt、pt延长优于对照组，fg水平低于对照组(p《0.01，p《0.05)，详见表3。
[0053]
表3.两组患者凝血时间、血小板比较
[0054]
组别例数治疗时点apttptfgplt对照组56治疗前11.74
±
3.567.19
±
2.433.86
±
0.56125.43
±
22.67
ꢀꢀ
治疗后16.31
±
5.89**10.24
±
4.84**2.69
±
0.44*118.33
±
21.48治疗组56治疗前12.34
±
5.567.33
±
2.623.95
±
0.52123.77
±
24.29
ꢀꢀ
治疗后20.95
±
5.87**
##
13.94
±
5.26**
##
2.37
±
0.33*
#
113.88
±
20.32
[0055]
注:与本组治疗前比较，*p＜0.05，**p＜0.01；与对照组治疗后比较，
#
p＜0.05，
##
p＜0.01。
[0056]
4、et、no、txb2、pgf1α、vwf:
[0057]
治疗前，两组患者的血浆et、no、txb2、pgf1α、vwf水平比较，差异均无统计学意义(p》0.05)。
[0058]
治疗后，两组患者的et、txb2、vwf水平均显著降低(p《0.01)，no、pgf1α水平升高(p＜0.01)；且治疗组患者的txb2、et水平低于对照组(p《0.01，p《0.05)，pgf1α水平高于对照组(p＜0.01)。见表4。
[0059]
表4.两组患者pgf1α、txb2、et、vwf比较
[0060][0061]
注:与本组治疗前比较，*p＜0.05，**p＜0.01；与对照组治疗后比较，
#
p＜0.05，
##
p＜0.01。
[0062]
综上，试验结果显示，三七花总皂苷剂量0.1g/kg，治疗14天后，与对照组相比本次研究也发现，三七花总皂苷能显著改善急性脑梗塞患者nihss评分、全血粘度、红细胞变形
指数、全血低切黏度，改善患者凝血功能，而对血小板无明显影响，能降低患者et、txb2、vwf水平而提高患者no、pgf1α水平，因此，三七花总皂苷对急性脑梗塞疗效明确，与其改善内皮功能、改善血流变和凝血功能密切相关。